Detektioun vun molekulare Veränderungen am methamphetamin-aktivéierten Fos-expriméierend Neuronen aus enger eenzeger Rass dorsal Striatum duerch Fluoreszenzaktivéiert Zell Sortéierung (FACS) (2013)

Methamphetamin an aner Drogen aktivéieren e klengen Undeel vun all Neuronen am Gehir. Mir hunn virdru eng Fluoreszenz-aktivéiert Zellsortering (FACS)-baséiert Method entwéckelt fir molekulare Verännerungen ze charakteriséieren, déi selektiv an aktivéierten Neuronen induzéiert sinn, déi den neuralen Aktivitéitsmarker Fos ausdrécken. Wéi och ëmmer, dës Method erfuerdert d'Pooling vu Proben vu ville Ratten. Mir beschreiwen elo eng modifizéiert FACS-baséiert Method fir molekulare Verännerungen a Fos-ausdréckend dorsale striatal Neuronen aus enger eenzeger Rat ze charakteriséieren mat enger multiplex Pre-Amplifikatiounsstrategie.

Fos an NeuN (en neuronalen Marker) Immunhistochemie weisen datt 5-6% vun dorsalen Striatum Neuronen 90 min no akuter Methamphetamininjektiounen (5 mg / kg, ip) aktivéiert goufen, während manner wéi 0.5% vun Neuronen duerch Salzinjektiounen aktivéiert goufen.

Mir hunn FACS benotzt fir NeuN-labeléiert Neuronen a Fos-positiv a Fos-negativ Neuronen ze trennen a mRNA Ausdrock mat RT-qPCR vu sou wéineg wéi fënnef Fos-positiv Neuronen bewäert. Methamphetamin induzéiert 3-20-fache Erhéijunge vun direkt fréi Genen Arc, Homer-2, c-fos, fosB, a seng Isoformen (ΔfosB an eng nei Isoform ΔfosB-2) a Fos-positiv awer net Fos-negativ Neuronen. Direkt fréi Gen-mRNA-Induktioun war 10-fach méi niddereg oder fehlend wann se an onsortéierte Proben aus eenzel dorsal Striatum Homogenaten bewäert ginn. Eis modifizéiert Method mécht et machbar eenzegaarteg molekulare Verännerungen an Neuronen ze studéieren, aktivéiert vun Drogen oder Drogen-assoziéierten Hiweiser a komplexe Suchtmodeller.

Methamphetamin an aner Drogen aktivéieren e klengen Undeel vun all Neuronen am Gehir. Mir berichten hei eng verbessert Method fir molekulare Verännerungen ze charakteriséieren, déi selektiv an aktivéierten Neuronen induzéiert sinn, déi den neuralen Aktivitéitsmarker Fos ausdrécken. Mir hunn FACS zesumme mat geziilte PCR Pre-Amplifikatioun benotzt fir akut Methamphetamin-induzéiert Genausdrock vu sou wéineg wéi 5 Fos-ausdréckende Neuronen aus engem eenzege Rat-dorsal Striatum ze bewäerten. Methamphetamin induzéiert 3-20-fach Erhéijunge vun direkt fréi Genen (IEGs) a Fos-positiven awer net Fos-negativen Neuronen. Geziilte PCR Pre-Amplifikatioun mécht et machbar fir eenzegaarteg molekulare Verännerungen an Neuronen ze studéieren aktivéiert vun Drogen oder Drogen-assoziéierten Hiweiser a komplexe Suchtmodeller.

Verëffentlecht 2013. Dësen Artikel ass en US Regierungsaarbecht an ass am Domaine public an den USA.