Effet vun der ΔFosB-Oerexpression op opioid an Cannabinoid-Rezeptor-vermittelter Signaliséierung am Nukleus accumbens (2011)

Neuropharmakologie. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Source

Departement fir Pharmakologie an Toxikologie an Institut fir Drogen- an Alkoholstudien, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

mythologesch

De stabilen Transkriptiounsfaktor ΔFosB gëtt an der nucleus accumbens (NAc) induzéiert duerch chronesch Belaaschtung vu verschiddenen Drogen vu Mëssbrauch, an transgenen Ausdrock vun ΔFosB am Striatum verbessert déi belountend Eegeschafte vu Morphin a Kokaine. Wéi och ëmmer, déi mechanistesch Basis fir dës Observatiounen ass onkomplett verstanen. Mir hunn e bitransgenesche Mausmodell mat induzéierbaren Ausdrock vun ΔFosB benotzt Dopamin D (1) Rezeptor / Dynorphin-enthale striatal Neuronen fir den Effekt vum ΔFosB Ausdrock op Opioid a Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung am NAc ze bestëmmen. Resultater hu gewisen datt mu opioid-mediéiert G-Protein Aktivitéit an Hemmung vun Adenylyl Cyclase an der NAc vu Mais verbessert goufen, déi ΔFosB ausgedréckt hunn. Ähnlech war kappa opioid Hemmung vun Adenylyl Cyclase an den ΔFosB ausdréckleche Mais verbessert.. Am Géigesaz, huet cannabinoid Rezeptor-mediéiert Signalisatioun net tëscht de Mais iwwerexpressiv ΔFosB a Kontroll Mais. These Befunde suggeréieren datt Opioid a Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung differentiell moduléiert sinn duerch Ausdrock vun ΔFosB, a weisen datt ΔFosB Ausdrock e puer vu sengen Effekter iwwer verbessert Mu a kappa Opioid Rezeptor Signaliséierung am NAc produzéiere kéint.

Schlësselwieder: G-Protein, Adenylyl Cyclase, striatum

1. Aféierung

Opioid Rezeptoren a Cannabinoid CB1 Rezeptoren (CB1R) sinn déi neurobiologesch Ziler fir zwou wäit benotzt Drogenklassen, déi Morphin, Heroin a Rezept Opioiden, a Marihuana (Δ9-tetrahydrocannabinol (THC)), resp. Déi akut Effekter vun Opioiden a Cannabinoiden ginn duerch G-Protein-gekoppelte Rezeptoren mediéiert, déi primär G aktivéiereni / o Proteinen a produzéiere Stroum Effektorreaktiounen wéi d'Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). De Motor, Gedächtneschëmmerung a psychoaktiv Effekter vun Δ9-THC gi vu CB produzéiert1R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), déi wäit am Gehir verdeelt ginn, mat héijen Niveauen an de Basal Ganglia, Hippocampus a Cerebellum (Herkenham, et al., 1991). Déi analgetesch a belountend Effekter vu meescht klinesch relevant a mëssbraucht opioid Medikamenter ginn haaptsächlech vu mu opioid Rezeptoren (MOR) meditéiert.Matthes, et al., 1996), déi am limbesche System a Gehirstem beräichert sinn (Mansour, et al., 1994). De mesolimbesche System, besteet aus dopaminergesche Projektiounen aus dem ventrale tegmental Gebitt (VTA) bis nucleus accumbens (NAc), spillt eng wichteg Roll an de belountende Effekter vun Opioiden a Cannabinoiden (Bozarth a Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), souwéi aner Drogen vu Mëssbrauch (Koob an Volkow, 2010). Ausserdeem sinn endogene Opioid- a Cannabinoid Systemer an de belountende Effekter vu multiple Klassen vu psychoaktiven Drogen involvéiert (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Also ass et wichteg, Mechanismen z'erklären, duerch déi Opioid a CB1R Signaler gi geregelt am NAc.

Eng zentral Fro am Drogemëssbrauchfeld war Proteine ​​z'identifizéieren déi den Iwwergang vun akuter bis laangfristeg Effekter vu psychoaktiven Drogen meditéieren. Den AP-1 Transkriptiounsfaktor ΔFosB ass besonnesch interessant well et e stabile gekierzt Spritvariante Produkt vum fosb Genen, déi sech bei der widderhuelter Belaaschtung fir Drogen vu Mëssbrauch oder natierleche Belounungen accumuléiertMcClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Mir hu fonnt datt ΔFosB am Gehir induzéiert gëtt no widderholl Expositioun fir Morphin, Δ9-THC, Kokain oder Ethanol, mat all Medikament produzéiert en eenzegaartegt regionalt Muster vun osFosB Ausdrock (Perrotti, et al., 2008). Eng konsequent Sich iwwer Medikamenter war datt ΔFosB héich am Striatum induzéiert war, wou all véier Medikamenter ΔFosB am NAc Kär induzéiert an all ausser Δ9-THC bedeitend Ausdrock an der NAc Shell a caudate-putamen.

Pharmakologesch Studien hu gewisen datt Co-Administratioun vun der Dopamin D1 Rezeptor (D1R) Antagonist SCH 23390 blockéiert ΔFosB Induktioun am NAc a caudat-putamen no intermittéierend Kokain oder Morphinverwaltung, suggeréiert d'potentiell Wichtegkeet vun D1R-Ausdréck Neuronen (Muller a Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Den Effekt vun ΔFosB Induktioun op Medikament-mediéiert Behuelen gouf mat bitransgenem Musse ënnersicht, déi ΔFosB an spezifeschen neuronale Populatiounen vum NAc an dorsal Striatum ausdrécken (Chen, et al., 1998). Mais déi ΔFosB an Dynorphin / D ausdrécken1R Positiv Neuronen am NAc an dorsal Streatum (Linn 11A) weisen verännerte Äntwerte op Drogen vu Mëssbrauch, besonnesch verbessert Empfindlechkeet op déi belountend Effekter vu Kokain oder Morphin (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Dës Verännerunge koumen an der Verontreiung vu Verännerunge vun den Niveaue vu MOR oder verschidde G-Proteinunits. Wéi och ëmmer, goufen dynorphin mRNA Niveauen am NAc vun ΔFosB ausdréckleche Musse reduzéiert (Zachariou, et al., 2006), suggeréiert datt een Zil vun ΔFosB e Gen ass dat en endogene Opioid Peptid kodéiert. ΔFosB Induktioun kann och Verhalensverännerunge produzéieren andeems d'Receptor Signaliséierung am NAc reguléiert, awer dës Méiglechkeet ass net ënnersicht ginn. Dofir hunn déi heiteg Etuden de bitransgenesche Mausmodell benotzt fir ze bestëmmen ob Iwwerausdrock vun ΔFosB an Dynorphin / D1R enthale striatal Neuronen verännert MOR-mediéiert G-Protein Aktivitéit an MOR- a KOR-mediéiert Adenylyl Cyclaseinhibitioun am NAc. Den Effekt vun ΔFosB op CB1R-mediéiert G-Protein Aktivitéit gouf och bewäert, well Δ9-THC Administratioun induzéiert ΔFosB am NAc (Perrotti, et al., 2008) an den Endocannabinoid System ass bekannt fir Gehir Belounungskreesser ze reguléieren (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), awer den Effekt vun ΔFosB op den Endocannabinoid System ass net ënnersicht.

2. Material a Methoden

2.1. Reagens

[35S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [α-32P] ATP (800 Ci / mmol) an [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) goufen aus PerkinElmer (Shelton, CT) kaaft. ATP, GTP, PIB, cAMP, Boverie Serum Albumin, Kreatinphosphokinase, Papaverin, Imidazol a WIN-55212-2, goufe vum Sigma Aldrich (St. Louis, MO) kaaft. GTPγS gouf vun der Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL) kaaft. DAMGO gouf vum Drug Supply Programm vum Nationalen Institut fir Drogenmëssbrauch (Rockville, MD) geliwwert. Econo-1 Scintillatiounsfluid gouf vum Fisher Scientific (Norcross, GA) kritt. Ecolite Scintillatiounsflëssegkeet gouf vun der ICN kritt (Costa Mesa, CA). All aner Chemikalien goufen aus dem Sigma Aldrich oder dem Fisher Scientific kritt.

2.2. Mais

Männlech bitransgenic Mais aus NSE-tTA (Linn A) × TetOp-ΔFosB (Linn 11) ofgeleet goufen generéiert wéi am Kelz et al beschriwwen. (Kelz, et al., 1999). Bitransgenic Mais goufen ugesinn an op Doxycycline opgeworf (100 µg am Drénkwaasser) fir den transgene Ausdrock ze verdrängen. Op 8 Wochen Alter gouf d'Doxysyklin aus dem Waasser fir d'Halschent vun de Mais ewechgelooss fir transgene Expression z'erméiglechen, wärend déi verbleiwend Mais op Doxycyclin gehale goufen fir den Transgene z'ënnerhalen. Hirne goufe 8 Woche méi spéit gesammelt, d'Zäit zu där transkriptiounseffekter vun ΔFosB maximal sinn (McClung an Nestler, 2003). Eng zweet transgen Mausleitung gouf benotzt, an där Δc-Jun, en dominanten negativen Antagonist vum c-Jun, an D ausgedréckt ass1R / Dynorphin an D2R / enkephalin Zellen vum Striatum, Hippocampus a parietal Cortex (Peakman, et al., 2003). C-Jun a verbonne Jun Familljeproteine ​​dimerize mat Fos Famillproteine ​​a binden op den AP-1 Site vun Zilgenen fir d'Transkriptioun ze reguléieren. Wéi och ëmmer, Ofkierzung vum N-Uschloss vum c-Jun (Δc-Jun) mécht dat komplex transkriptiouns inaktiv a fäeg d'DNA Bindung vun aktive AP-1 Komplexen ze blockéieren. Männlech bitransgenic Mais aus NSE-tTA (Linn A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (Linn E) generéiert goufen wéi am Peakman et al beschriwwen. (Peakman, et al., 2003). Bitransgenic Mais goufen ugesinn an op Doxycycline opgeworf (100 µg am Drénkwaasser) fir den transgene Ausdrock ze verdrängen. Pups goufen op 3 Wochen gespent, genotypéiert, a Gruppen getrennt, mat der Halschent op doxycycline-enthale Waasser an der Halschent op regulärem Drénkwaasser behalen fir FLAG-Δc-Jun Ausdrock ze induzéieren. Hirne goufe 6 Woche méi spéit gesammelt, déi Zäit wou maximal Niveauen vun der FLAG-Δc-Jun gemooss goufen (Peakman, et al., 2003). All Déierprozedure goufen am Aklang mat den National Instituter fir d'Gesondheetsguide fir d'Betreiung an d'Benotzung vun Laboratoire Déieren gehaal.

2.3. Membran Virbereedung

Gehir ware bei -80 ° C bis den Dag vun der Assay gelagert. Virum Analyse gouf all Gehir thaw, an den NAc ass op Äis dissected. All Probe gouf an 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl homogeniséiert2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (Membranpuffer) mat 20 Strokes aus engem Glas Homogenisator bei 4 ° C. Den Homogenat gouf beim 48,000 × centrifugéiert g bei 4 ° C fir 10 min, resuspendéiert an Membranpuffer, centrifugéiert erëm bei 48,000 × g bei 4 ° C fir 10 min a resuspendéiert an 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (Assaybuffer). Proteinniveauen goufe mat der Method vum Bradford (Bradford, 1976) mat Hëllef vu Rëndfleesch Albumin (BSA) als Standard.

2.4. Agonist-stimuléiert [35S] GTPγS Bindung

Membranen goufe vir 10 Minutte bei 30 ° C mat Adenosin Deaminase (3 mU / ml) an Assaypuffer inkuberéiert. Membranen (5 – 10 µg Protein) goufen dunn fir 2 Stonnen bei 30 ° C an assaybuffer mat 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPγS, 30 µM ​​PIB an Adenosindeaminase (3 mU / ml) mat an ouni passenden Konzentratioune vun DAMGO oder WIN55,212-2. Nonspezifesch Bindung gouf mat 20 µM ​​GTPyS gemooss. D’Inkubatioun gouf duerch Filtratioun duerch GF / B Glasfaserfilters ofgeschloss, gefollegt vu 3 wäscht mat 3 ml Äis kal 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Gebonnen Radioaktivitéit gouf festgeluecht mat flësseger Scintillatiounsspektrofotometrie no enger Nuecht Extraktioun vun de Filteren an Econo-1 Scintillatiounsfluid.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membranen (5 – 25 µg Protein) goufe mat Adenosindeaminase preincubéiert wéi hei uewen beschriwwen, dann fir 15 min bei 30 ° C an der Präsenz oder Fehlen vun 1μM forskolin incubéiert, mat oder ouni DAMGO, U50,488H oder WIN55,212-XNUMffer enthalen 2 µM ​​ATP, [α-32P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM ​​Zyklesch AMP, 50 µM ​​GTP, 0.2 mM Papaverin, 5 mM Phococreatine, 20 Eenheeten / ml Kreatinphosphokinase an adenosNX Deam / ml) an engem endgülteg Volumen vum 3 µl. Ënner dëse Bedéngungen, insgesamt [α-32P] cAMP erëmfonnt war allgemeng manner wéi 1% vum Gesamtbetrag vun der Zugabe [α-32P] ATP an all Probe. D'Reaktioun gouf ofgeschloss andeems se kachen fir 3 min an [32P] Zyklesch AMP war mat der Duebelkolonn (Dowex an Alumina) Method vun Salomon isoléiert (Salomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) gouf zu all Röhre virun der Kolonnechromatographie als intern Norm bäigefüügt. Radioaktivitéit gouf festgeluecht mat Flëssegssintillatiounspektrofotometrie (45% Effizienz fir 3H) nodeems 4.5 ml vum Eluat an 14.5 ml vun der Ecolite Scintillatiounsflëssegkeet opgeléist goufen.

2.6. Datenanalyse

Wann net anescht uginn, ginn Daten als mëttel Wäerter ± SE vun 4 – 8 getrennten Experimenter gemellt, all vun deenen an Dräikierper duerchgefouert goufen. Net-stimuléiert [35S] GTPyS-Bindung gëtt als agonist-stimuléiert Bindung minus Basal-Bindung berechent. Net forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit gëtt definéiert als forskolin-stimuléiert Aktivitéit - Basal Aktivitéit (pmol / mg / min). Procent Inhibitioun vun forskolin-stimuléiert adenylyl Cyclase Aktivitéit gëtt definéiert als (net forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Verontreiung vun Agonist - net forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Präsenz vun Agonist / net forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Verontreiung vum Agonist) × 100. All curve-fit a statistesch Analysë goufen mat Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ausgefouert. Konzentratioun-Effekt Kéiren goufen duerch iterativ net-linear Regressioun analyséiert fir EC ze kréien50 an Emax Wäerter. Statistesch Bedeitung vun den Konzentratioun-Effekt Donnéeën gouf duerch zweestänneg Varianzanalyse (ANOVA) bestëmmt, mat Agonist Dosis a Genen Induktioun (op oder aus) als Haaptfaktoren. Statistesch Bedeitung vun curve-fit Wäerter (Emax oder EC50) gouf vum net gepaarten zweestännege Studententest bestëmmt, mat der Welchs Korrektur oder der Quadratwurzeltransformatioun vun den Donnéeën, wou et néideg ass fir ongläich Varianten ze korrigéieren (duerch F-Test festgestallt)50 Wäerter.

3. Resultater

3.1. Effekt vun ΔFosB Ausdrock op Opioid a Cannabinoid Rezeptor-mediéiert G-Protein Aktivatioun

Fir erauszefannen ob MOR- oder CB1R-mediéiert G-Protein Aktivatioun gouf duerch induzéierbar transgenen Ausdrock vun ΔFosB am NAc verännert, agonist-stimuléiert [35S] GTPyS-Bindung gouf an isoléiert Membranen ënnersicht, virbereet aus dëser Regioun vu bitransgenen Musse bedingt ausdrécklech (ΔFosB op) oder net ausdrécken (ΔFosB aus) den ΔFosB Transgen. De MOR-selektiv enkephalin Analog DAMGO gouf benotzt fir MOR z'aktivéieren an d'Cannabinoid Aminoalkylindol WIN55,212-2 gouf benotzt fir CB ze aktivéieren1R. Dës Liganden goufe virdru gewisen als voll Agonisten am MOR an CB1R, respektiv (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Et war net machbar fir KOR-mediéiert G-Protein Aktivitéit z'ënnersichen, well d'Signal ze niddreg an Nagerhirn ass (Childers, et al., 1998). D'Resultater weisen Konzentratiouns-ofhängeg Stimulatioun vu G-Protein Aktivitéit vu béiden DAMGO a WIN55,122-2 an NAc vun ΔFosB aus an ΔFosB op Mais (Figure 1). Fir DAMGO-stimuléiert Aktivitéit (Figure 1A), Zwee-Wee ANOVA vun den Konzentratiounseffektdaten huet bedeitend Haapteffekter vum ΔFosB Status (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) an der DAMGO Konzentratioun (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) ouni bedeitend Interaktioun (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Netlinear Regressiounsanalyse vun de Konzentratiounseffektkurven huet e wesentlech méi groussen DAMGO E verrodenmax de Wäert an ΔFosB op de Mais (Emax = 73 ± 5.2% Stimulatioun) relativ zu ΔFosB aus de Mais (Emax = 56 ± 4.1% Stimulatioun; p <0.05 anescht wéi ΔFosB op Mais duerch den T-Test vum Student). DAMGO EC50 Wäerter waren net anescht tëscht ΔFosB op an ΔFosB aus de Mais (302 ± 72 nM versus 212 ± 56 nM, respektiv, p = 0.346).

Figure 1 

Effekt vun ΔFosB Ausdrock op agonist-stimuléiert [35S] GTPγS bindend am NAc. Membranen aus ΔFosB-ausdrécklech (ΔFosB op) oder Kontroll (ΔFosB aus) Mais goufen analyséiert wéi beschriwwen a Methoden mat ënnerschiddleche Konzentratioune ...

Am Géigesaz zu de Resultater mat dem MOR Agonist DAMGO, goufe keng ΔFosB status-ofhängeg Differenzen an der G-Protein Aktivatioun mam Cannabinoid Agonist WIN55,212-2 observéiert (Figure 1B). Zwee-Wee ANOVA vun de WIN55,212-2 Konzentratiounseffektdaten huet e wesentlechen Haapteffekt vun der WIN55,212-2 Konzentratioun verroden (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), awer net vum ΔFosB Status (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) an et war keng Interaktioun (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Ähnlech war et keen Effekt vum ΔFosB Status op WIN55,212-2 Emax Wäerter (103 ± 6% versus 108 ± 8% Stimulatioun an ΔFosB op an aus de Mais, respektiv, p = 0.813 vum Student's T-Test) oder EC50 Wäerter (103 ± 20 nM versus 170 ± 23 nM an ΔFosB op an aus de Mais, respektiv, p = 0.123).

Baséierend op der Form vun den Kéieren an de Fakt datt eis fréier Studien biphasesch WIN55,212-2 Konzentratioun-Effektkurven am Gehir hunn gewisen.Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), goufen d'WIN55,212-2 Kéieren och mat engem zwee-Site Modell analyséiert. Analyse vun den Duerchschnëttsdaten huet eng liicht Verbesserung vun der Guttheet vum Fit mat Hëllef vun der Zwee-Site Modell gewisen (R2 = 0.933 an 0.914, Zomm vun de Quadrater = 3644 an 5463 an ΔFosB op an aus de respektiven Mais, respektiv) am Verglach zum eenzegen Site Modell (R2 = 0.891 an 0.879, Zomm vun de Quadrater = 6561 an 6628 an ΔFosB op an of, respektiv). Wéi och ëmmer, goufen et keng bedeitend Differenzen tëscht ΔFosB op a vun de Mais an entweder der E fonntmax oder EC50 Wäerter vun de Säite vu héijer oder gerénger Potenz (Zousaz Table 1), och wann et en Trend zu enger niddereger EC war50 wert op der Héicht vu Potenzplaz bei Mais mat ΔFosB op (EC)50héich = 28.0 ± 10.6 nM) am Verglach mat deene mat ΔFosB aus (EC50héich = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Ausserdeem war et keen Effekt vun ΔFosB Status op Basal [35S] GTPyS-Bindung an NAc Membranen (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg an ΔFosB op an aus de Mais, respektiv, p = 0.188). Dës Donnéeën weisen datt induzéierbar transgen Ausdrock vun ΔFosB an der NAc vu Mais erhéijen MOR-mediéiert G-Protein Aktivéierung ouni wesentlech Afloss op CB1R-mediéiert oder basal G-Protein Aktivitéit.

3.2. Effekt vun ΔFosB op Opioid a Cannabinoid Rezeptor-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase

Fir den Effekt vum induzéierbare transgenen Ausdrock vun ΔFosB op Modulatioun vun der downstream effektor Aktivitéit vu MOR a CB ze bewäerten1R, Inhibitioun vun 1 µM ​​forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit gouf an NAc Membranen iwwerpréift. Zousätzlech zu MOR- a CB1R-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit, Auswierkunge vun der KOR Aktivitéit goufen och mat der KOR-selektiv voller Agonist U50,488 ënnersicht (Zhu, et al., 1997), well virdru Resultater hunn gewisen datt dynorphin mRNA en Zil vun ΔFosB am bitransgenesche Modell war (Zachariou, et al., 2006). D'Resultater weisen datt DAMGO, U50,488 a WIN55,212-2 all produzéiert Konzentratiouns-ofhängeg Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit a béid ΔFosB of an ΔFosB op Mais (Figure 2). Zwee-Manéier ANOVA vun DAMGO Konzentratioun-Effekt Daten (Figure 2A) huet bedeitend Haapteffekter vum ΔFosB Status (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) an der DAMGO Konzentratioun (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), awer keng bedeitend Interaktioun (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Netlinear Regressiounsanalyse vun DAMGO Konzentratiounseffektkurven huet e wesentlech méi nidderegen DAMGO EC opgedeckt50 Wäert an ΔFosB op Mais (101 ± 11 nM) am Verglach zu ΔFosB aus Mais (510 ± 182 nM, p <0.05 vum T-Test vum Student). Wéi och ëmmer, et war kee groussen Ënnerscheed am DAMGO Emax Wäerter (20.9 ± 1.26% versus 19.8 ± 1.27% Inhibitioun an ΔFosB op an aus de Mais, respektiv, p = 0.534).

Figure 2 

Effekt vun ΔFosB Ausdrock op Hemmung vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Membranen aus ΔFosB-ausdrécklech (ΔFosB an) oder Kontroll (ΔFosB aus) Mais goufen analyséiert wéi an de Methoden an der Präsenz vun 1 uM beschriwwen ...

KOR-mediéiert Adenylyl-Cyclase-Hemmung ënnerscheet sech och als Funktioun vum induzéierbare transgenen Ausdrock vun ΔFosB (Figure 2B). Zwee-Wee ANOVA vun U50,488 Konzentratiounseffektdaten huet bedeitend Haaptauswierkunge vun ΔFosB Status (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) an U50,488 Konzentratioun (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , ouni bedeitend Interaktioun (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Netlinear Regressiounsanalyse vu Konzentratiounseffektkurven huet e gréisseren U50,488 E verrodenmax Wäert an ΔFosB op Mais (18.3 ± 1.14% Hemmung) am Verglach zu ΔFosB vu Mais (12.5 ± 2.03% Hemmung; p <0.05 anescht wéi ΔFosB op mam Studententest), ouni wesentlechen Ënnerscheed zu U50,488 EC50 Wäerter (310 ± 172 nM versus 225 ± 48 nM an ΔFosB op an aus de Mais, respektiv, p = 0.324).

Am Géigesaz zu Effekter mat MOR a KOR observéiert gouf et kee bedeitende Effekt vun induzéierbar transgener ΔFosB Ausdrock op Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase vum Cannabinoid Agonist WIN55212-2 (Figure 2C). Zwee-Wee ANOVA vu WIN55,212-2 Konzentratiounseffektdaten huet e wesentlechen Effekt vun der Drogekonzentratioun (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), awer net vum ΔFosB Status (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) nach war et eng bedeitend Interaktioun (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Ausserdeem war et keen Effekt vum ΔFosB Status op basaler oder forskolin-stimuléierter Adenylyl-Cyclase Aktivitéit am Fehlen vun engem Agonist. Basal Adenylyl Cyclase Aktivitéit war 491 ± 35 pmol / mg / min an ΔFosB op Mais am Verglach zu 546 ± 44 an ΔFosB aus Mais (p = 0.346 vum Student's T-Test). Och d'Adenylyl Cyclase Aktivitéit an der Präsenz vun 1 µM forskolin war 2244 ± 163 pmol / mg / min an ΔFosB op Mais versus 2372 ± 138 pmol / mg / min an ΔFosB aus Mais (p = 0.555).

3.3. Effekt vun ΔcJun op opioid a cannabinoid Rezeptor-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase

Well induzéierbar transgenen Ausdrock vun ΔFosB verstäerkte hemmende Signaltransduktioun vu MOR a KOR zu Adenylyl Cyclase an der NAc, war et interesséiert fir ze bestëmmen ob en dominanten negativen Inhibitor vun ΔFosB-mediéierten Transkriptioun opioid Rezeptor Signalisatioun op eng Géigendeel Manéier moduléiert. Fir dës Fro unzegoen, gouf d'Inhibitioun vun forskolin-stimuléiert adenylyl Cyclase Aktivitéit duerch DAMGO an U50,488 a Membranen ënnersicht, déi aus dem NAc aus bitransgenic Musse virbereet ginn, bedingend ausdrécklech ΔcJun. D'Resultater weisen kee bedeitende Effekt vun ΔcJun Ausdrock op Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit vu MOR oder KOR (Figure 3). Zwee-Wee ANOVA vun DAMGO Konzentratiounseffektkurven huet e wesentlechen Haapteffekt vun der DAMGO Konzentratioun gewisen (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), awer net vum ΔcJun Status (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Ähnlech war et kee groussen Ënnerscheed am Emax oder EC50 Wäerter tëscht Méis mat ΔcJun op (Emax = 23.6 ± 2.6%; EC50 = 304 ± 43 nM) oder ΔcJun auszeschalten (Emax = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC50 = 611 ± 176 nm, p = 0.129). Ähnlech Resultater goufe mat U50,488 gesinn, sou datt Zwee-Wee ANOVA vun de Konzentratiounseffektkurven e wesentlechen Effekt vun der Konzentratioun huet (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), awer net vum ΔcJun Status (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Och waren et keng signifikant Ënnerscheeder am Emax oder EC50 Wäerter tëscht Méis mat ΔcJun op (Emax = 14.8 ± 2.9%; EC50 = 211 ± 81 nM) oder aus (Emax = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Figure 3 

Effekt vun ΔcJun Ausdrock op Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Membranen aus ΔcJun-ausdrécklech (ΔcJun op) oder Kontroll (ΔcJun aus) Mais goufen an der Präsenz vun DAMGO (A), U50,488H (B) oder WIN55,212-2 incubéiert ...

Den ΔcJun Ausdrock huet och net eng wesentlech Auswierkung op Hemmung vun Adenylyl Cyclase am NAc vum Cannabinoid Agonist. Zwee-Wee ANOVA vun de WIN55,212-2 Konzentratiounseffektkurven huet e wesentlechen Haapteffekt vun der WIN55,212-2 Konzentratioun (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), awer net vum Genotyp (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Och waren et keng signifikant Differenzen am WIN55,212-2 Emax Wäerter (13.0 ± 2.3% an 13.6 ± 0.9% Hemmung an ΔcJun op versus Offmais, respektiv, p = 0.821) an oder EC50 Wäerter (208 ± 120 nM an 417 ± 130 nM an ΔcJun op versus Offmais, respektiv, p = 0.270). Also, obwuel et e klengen Trend war fir erofgaang Potenz vu WIN55,212-2 bei Mais ausdrécken ΔcJun, huet d'Transgen net vill Cannabinoid Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase geännert. Ausserdeem war et keen Effekt vun ΔcJun Status op Basal oder forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit. Basal Adenylyl Cyclase Aktivitéit war 1095 ± 71 pmol / mg / min an 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) a Mais mat ΔcJun op oder aus, respektiv. Adenylyl Cyclase Aktivitéit stimuléiert vum 1 µM ​​forskolin war 4185 ± 293 pmol / mg / min versus 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) a Mais mat ΔcJun op oder aus, respektiv.

3.4. Diskussioun

D'Resultater vun dëser Studie hunn verstäerkte MOR-mediéiert G-Protein Aktivéierung an Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase an der NAc vu Mais mat induzéierbare transgenen Ausdrock vun ΔFosB an Dynorphin / D1R enthale Neuronen. KOR-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit gouf och am NAc vun ΔFosB ausdréckleche Mais verbessert, wat suggeréiert datt ΔFosB den endogene Opioid System am NAc regléiert. Den DAMGO Emax Wäert war méi fir MÉI-stimuléiert [35S] GTPγS verbindlech, a seng EC50 Wäert war niddereg fir Adenylyl Cyclase Inhibitioun, an ΔFosB iwwerausdréckende Mais am Verglach zu Kontrollmais. Dës Befindunge suggeréieren d'Méiglechkeet vu Rezeptorreserv fir effektor Modulatioun awer net G-Protein Aktivéierung ënner den iwwerpréiften Assaybedingungen. D'Erfindung datt maximal Hemmung vun Adenylyl Cyclase vum KOR Agonist beaflosst war vun ΔFosB Ausdrock proposéiert niddereg Rezeptorreserv fir d'KOR-mediéiert Äntwert, konsequent mat den nidderegen Niveaue vu KOR Bindungsplazen am Maus Gehir (Unterwald, et al., 1991). Am Géigesaz, CB1R-mediéiert G-Protein Aktivitéit an Hemmung vun Adenylyl Cyclase goufen net beaflosst vun ΔFosB Ausdrock, suggeréiert datt d'Opioid an d'Canabinoid Systemer an hirer Äntwert op ΔFosB an dësen NAc Neuronen ënnerscheeden.

Den Effekt vun ΔFosB op opioid Rezeptor-mediéierte Signalisatioun ass konsequent mat eisem fréiere Bericht datt ΔFosB Ausdrock am Striatum verännert akut a chronesch Effekter vu Morphin (Zachariou, et al., 2006). Eng Fonnt vun där Etude war déi Mais mat transgenen Ausdrock vun ΔFosB an Dynorphin / D1R striatal Neuronen ware méi empfindlech op Morphin an der Plazbedéngungen wéi Kontrollen. Ausserdeem gouf dësen Effekt duerch viral mediated Ausdrock vun ΔFosB duerch Site-spezifesch Injektioun an der NAc mimikéiert. Dës Observatioune sinn konsequent mat den aktuellen Resultater déi e bessere MOR Signaliséierung am NAc weisen.

Mir hunn de Genkodéierung virdru identifizéiert dynorphin als Zil vun ΔFosB, a proposéiert datt reduzéiert Dynorphin konsequent mat verstäerkte belountende Eegeschafte vu Morphin bei ΔFosB bitransgenic Mais wier. (Zachariou, et al., 2006). Déi aktuell Resultater weisen datt KOR-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase am NAc an ΔFosB ausdrécklech Mais verbessert gouf, wat eng kompenséierend Erhéijung vun der KOR Empfindlechkeet no reduzéierter Dynorphin reflektéiert. Virdrun Studien hunn ugewisen datt KOR a bestëmmte Gehirregiounen vu prodynorphin Knockout Mäusen upreguléiert gouf, dorënner NAc (Clarke, et al., 2003).

Am Géigesaz zum ΔFosB, induzéierbare transgenen Ausdrock vun ΔcJun, den dominanten negativen ofgeschniddene Mutant vum ΔFosB verbindlechen Partner cJun, huet keng adenylyl Cyclaseinhibitioun duerch MOR oder KOR Agonisten geännert. Dës Resultater hindeit datt Basalniveauen vun ΔFosB Ausdrock, déi relativ niddereg sinn, keng bedeitend Roll spillen fir d'Opioid Rezeptor Signalisatioun op dësem Niveau vun der Signaltransduktioun am NAc ze halen. D'Tatsaach datt de bedingt belountende Effekt vu Morphin ofgeholl gouf duerch ΔcJun Ausdrock an eiser fréierer Studie (Zachariou, et al., 2006) proposéiert entweder datt morphin Induktioun vun ΔFosB wärend der Konditiounsprozedur wichteg ass fir d'Verhalensreaktiounen op d'Drogen regléieren oder datt transkriptiouns Auswierkunge vun ΔFosB anescht wéi déi, déi proximal Signaliséierung vun opioid Rezeptoren beaflossen opioid Belounung. Op jiddfer Fall, d'Resultater vun der aktueller Etude weisen kloer datt, wann ΔFosB Ausdrock iwwer Basalniveauen an der striatal Dynorphin / D erhéicht gëtt1R-ausdrécklech Neuronen, et gëtt eng robust Erhéijung vun der Kupplung vu MOR a KOR zu Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase am NAc.

D'Mechanismen, duerch déi MOR- a KOR-mediéiert Signaléierung duerch ΔFosB Iwwerexpression gestäerkt ginn ass net kloer, awer mir hu virdru gewisen datt MOR Niveauen, bewäert duerch [3H] Naloxon-Bindung, sinn net anescht am NAc vun ΔFosB op versus Offmais (Zachariou, et al., 2006). Déiselwecht Studie huet festgestallt datt Gαi1 an 2 Protein Niveauen goufen net an dëser Regioun vum byFosB Ausdrock betraff. Wéi och ëmmer, Analysen vum virdrun Genausdrock Array hu gewisen datt Gαo mRNA war am NAc vun ΔFosB op Mais oppreguléiert (McClung an Nestler, 2003). Et wäert interessant sinn an zukünfteg Studien, fir den Effekt vum transgenen ΔFosB Ausdrock op G-Protein-Ënnerunit Ausdrock um Protein Niveau souwéi wéi zum Ausdrock vu ville G-Protein modulatory Proteinen ëmfaassend ze ënnersichen.

Et ass interessant datt ΔFosB Ausdrock CB net verbessert huet1R-mediéiert Signalisatioun am NAc. Et ass méiglech datt Ännerungen am CB1R Signaléierung fënnt an enger diskret Bevëlkerung vun Neuronen, déi an der ganzer NAc Virbereedung verschleidert sinn. Zum Beispill Administratioun vun Δ9- THC bedeitend induzéiert ΔFosB am Kär, awer net Réibau, vum NAc (Perrotti, et al., 2008). Echndeed, et gouf dës Erausfuerderung mat Δ gewisen9-THC no widderholl Administratioun vun Δ9-THC erhéicht Dopamin Verëffentlechung am NAc Kär, awer ofgeholl Verëffentlechung an der Schuel (Cadoni, et al., 2008). Et ass och wichteg ze beuechten datt d'11A Zeil vu bitransgenen Mais ausdrécken ΔFosB nëmmen an Dynorphin / D1R Positiivt mëttelgrousse Neuronen vum Striatum, awer CB1R ginn a béid Dynorphin / D ausgedréckt1R an Enkephalin / D2R Positiv striatal Neuronen (Hohmann an Herkenham, 2000), souwéi op Uschlëss vu kortikale Afferenter (Robbe, et al., 2001). Ausdrock vun den dominanten negativen Reguléierer vun ΔFosB-mediéierten Transkriptioun, ΔcJun, hat och keen bedeitende Effekt op Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung, obwuel ΔcJun a béid D inducibel ausgedréckt ass.1 an D2-behal Bevëlkerunge vu mëttlere Schwäin Neuronen an dëse Mais (Peakman, et al., 2003). Et ass awer méiglech datt de basale ΔFosB Ausdrock genuch niddereg ass datt ΔcJun keng Rezeptor Signaléiere géif beaflossen, sou wéi d'Resultater mat MOR a KOR proposéiert ginn. Et ass och méiglech datt CB1R Signaléierung ass bescheiden duerch basal ΔFosB Ausdrock verbessert, sou datt weider ΔFosB Ausdrock erhéicht oder seng Handlungen mat ΔcJun blockéiert huet nëmme kleng Effekter, déi de Niveau vun der statistescher Bedeitung net erreecht hunn. Indirekte Support fir dës Interpretatioun ka gesi ginn andeems de WIN55,212-2 EC vergläicht50 Wäerter tëscht Mais ausdrécken ΔcJun versus ΔFosB. D'Verhältnis vum WIN55,212-2 EC50 Wäert fir Adenylyl Cyclase Inhibitioun bei Mais mat induzéierter Ausdrock vun ΔcJun zu sengem EC50 Wäert fir G-Protein Aktivéierung bei Mais mat induzéierter Ausdrock vun ΔFosB war 4.0, wärend dee selwechte Verhältnis bei Mais ouni Induktioun vun entweder Transgene 1.2 war.

Alternativ kënnen Cannabinoiden ΔFosB Ausdrock induzéieren ouni en direkten Effekt op CB1R Signalisatioun. An dësem Szenario kéinten d'Canabinoiden d'Responsabilitéit op d'psychoaktiv Effekter vun aneren Drogen moduléieren via ΔFosB-mediéiert transkriptiouns Reguléierung. Echn Fakt, Administratioun vun Δ9-THC produzéiert Krässensibiliséierung géint Opioiden an Amphetamin (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), konsequent mat dëser Hypothese. Ausserdeem, widderholl Administratioun vum Cannabinoid Agonist CP55,940 gouf bericht fir MOR-mediéiert G-Protein Aktivéierung an der NAc ze erhéijen, ähnlech wéi d'Mais déi induzéierbar ausdrécken ΔFosB an der aktueller Etude (Vigano, et al., 2005). Den Effekt vun ΔFosB Ausdrock op Δ9-THC-mediéiert Verhalen sinn net bewäert ginn, awer déi aktuell Resultater ausgeschloss keng Interaktioun. D'Resultater vun dëser an eiser viregter Studie (Zachariou, et al., 2006) weisen ΔFosB-induzéierter Ännerungen am MOR an KOR / Dynorphin am Striatum. Déi belountend Effekter vun Δ9-THC, gemooss duerch Plazepräferenz, ginn an MOR null Musse ofgeschaaft, wärend KOR geläscht ten9-THC Plaz Aversioun an opgedeckt Δ9-THC Plazepräferenz (Ghozland, et al., 2002). Ähnlech bedingt Plaz Aversioun op Δ9-THC fehlt am Pro-Dynorphin Ausschlag am Verglach mat Wëld-Typ Mais (Zimmer, et al., 2001). Dës Donnéeën hindeit datt Δ9-THC kéint méi belount ginn no ΔFosB Induktioun an doduercher Induktioun vu MOR Signalisatioun mat Reduktiounen am Dynorphin Ausdrock.

Zesummefaassendy, d'Resultater vun dëser Etude hunn dësen Ausdrock vun ΔFosB an D gewisen1R / Dynorphin Positiv striatal Neuronen verstäerkt MOR- a KOR-mediéiert Signaliséierung um Niveau vun G-Protein mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Dës Fonnt ass konsequent mat Studien déi eng Roll fir den endogene Opioid System als Belounung bewisen hunn (Trigo, et al., 2010), a bitt e potenzielle Mechanismus fir ΔFosB-mediéiert Effekter op d'BelounungAn. Am Géigesaz, CB1R-mediéiert Signaliséierung am NAc war net vill betraff vun der streatal ΔFosB Ausdrock ënner de Konditioune iwwerpréift, obwuel weider Studien d'Garantie hunn den Effekt vun ΔFosB Induktioun op den Endocannabinoid System ze bestëmmen.

Fuerschungsariichtungen

  • MOR Signalisatioun gëtt an de Käre accumbens vu Mais verbessert déi ΔFosB ausdrécken
  • KOR Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase gëtt och verstäerkt bei Mais ausdrécken ΔFosB
  • Ausdrock vun ΔFosB ännert keen CB1R Signaliséierung am Kär accumbens

Ergänzungsmaterial

Dankbarkeet

D'Auteuren soen dem Hengjun He, Jordan Cox an Aaron Tomarchio fir technesch Assistenz mat der [35S] GTPγS verbindlech Assays. Dës Studie gouf ënnerstëtzt vun USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) an P01 DA08227 (EJN).

Noten

Verzichterklärung vum Verlag: Dëst ass eng PDF-Datei vun engem net verworfene Manuskript deen fir d'Publikatioun akzeptéiert gouf. Als Service fir eis Cliente këmmeren mir dës fréie Versioun vum Manuskript. De Manuskript wäert d'Kopieveraarbechtung, d'Setzgarantie an d'Iwwerpréiwung vum entstinnende Beweis ënnerwerfen, ier se an der Final citat Form publizéiert gëtt. Maacht weg datt während dem Produktiounsfehler eventuell Décisiounen entdeckt kënne ginn, déi d'Inhalter beaflosse kënnen, an all gesetzlech Verännerungen, déi op d'Zäitschrëft gelidden sinn.

Referenze

  • Bozarth MA, Wise RA. Anatomesch verschidde Opiate Rezeptor Felder Mediatioun Belounung a kierperlecht Ofhängegkeet. Wëssenschaft. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Eng séier a sensibel Method fir d'Quantifizéierung vu Mikrogramm Quantitéite Protein andeems de Prinzip vun der Protein-Dye Bindung benotzt. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Chronesch Delta9-tetrahydrocannabinol Behandlung produzéiert e Zäit-ofhängeg Verloscht vu Cannabinoid Rezeptor-aktivéiert G-Proteinen am Gehir. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid Rezeptor Agonist Effizienz fir Stimulatioun [35S] GTPyS-Bindung un Rott zerebellar Membranen korreléiert mat agonist-induzéierter Ofsenkung vun der BIP Affinitéit. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Behuelen Sensibiliséierung no widderholl Exposition op Delta 9-tetrahydrocannabinol a Krässensibiliséierung mat Morphin. Psychopharmacologie (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Verhalensensibiliséierung fir Delta 9-tetrahydrocannabinol a Cross-Sensibiliséierung mat Morphin: Differenziell Ännerungen an der akkumulaler Schuel an der Kerndopamintransmission. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgen Déieren mat induzéierbar, geziilten Genausdrock am Gehir. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Opioid Rezeptor-gekoppelten zweete Messenger. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid a Cannabinoid Rezeptor Hemmung vun Adenylyl Cyclase am Gehir. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid Rezeptor Stimulatioun vun [35S] GTPyS-Bindung am Spaweck Gehir: Mangel u Beweiser fir Kappa2-selektiv Aktivéierung vu G-Proteinen. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Regioun selektiv Upreguléierung vu Mikro-, Delta- a Kappa-Opioid Rezeptoren awer net opioid Rezeptorähnlech 1 Rezeptoren an de Gehirer vun Enkephalin an Dynorphin knockout Musten. Neurologie. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatal Zell Typ-spezifesch Iwwereraxpression vun DeltaFosB erhéijen d'Incentive fir Kokain. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endocannabinoid Signaliséierungssystem a Gehir Belounung: Schwéierpunkt op Dopamin. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motivational Effekter vu Cannabinoiden ginn duerch mu-opioid a kappa-opioid Rezeptoren mediéiert. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Charakteriséierung a Lokaliséierung vu Cannabinoid Rezeptoren am Rattenhirn: eng quantitativ in vitro autoradiographesch Studie. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Lokaliséierung vum cannabinoid CB (1) Rezeptor mRNA an neuronalen Ënnerpopulatiounen vu Ratstriatum: eng Duebel-Label an situ Hybridiséierungstudie. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. International Union of Pharmacology. XXVII. Klassifikatioun vu Cannabinoid Rezeptoren. Pharmacological Iwwerpréiwung. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blockade vun Effekter vu gefëmmtem Marihuana vum CB1-selektiven Cannabinoid Rezeptor Antagonist SR141716. Arch. Gen. Psychiatrie. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ausdréck vum Transkriptionsfaktor DeltaFosB am Gehir hunn d'Sensibilitéit géint Kokain kontrolléiert. Natur. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry vu Sucht. Neuropsychopharmacologie. 2010;35: 217-238. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Chronesch Behandlung mat Delta (9) -tetrahydrocannabinol verbessert d'lokomotoresch Äntwert op Amphetamin an Heroin. Implikatioune fir Schwachstelle fir Drogenofhängeger. Neuropharmakologie. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Bedeelegung vum Endocannabinoid System an der Drogenofhängeger. Trends Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioid Rezeptor mRNA Ausdrock an der Rat CNS: Verglach mat mu-Rezeptor Bindung. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. De Verloscht vu morphin-induzéierter Analgesie, Belounungseffekt an Ofzuchssymptomer bei Mais fehlt de µ-Opioid Rezeptor Gen. Natur. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Reglement vun der Genexpression an der Kokainbelaaschtung vum CREB a DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V., Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: en molekulare Schalter fir eng laang Adaptatioun am Gehir. Gehir Res. Mol. Gehir Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. D1 Dopamine-Rezeptor moduléiert d'DeltaFosB-Induktioun am RettungsStriatum no der intermittierender Morphinverabreichung. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Iwwerpréiwung. Transkriptional Mechanik vu Sucht: D'Roll vun DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. London. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: en molekulare Mediateur vu laangfristeg neurale a versteetleche Plastizitéit. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Pharmakologesch Studien iwwer d'Reguléierung vun chronescher FOS-bezogenen Antigen-Induktioun vum Kokain am Striatum an dem Nukleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Induzibel, Gehirregregenspezifesch Ausdrock vun engem dominante negativ Mutante vum c-Jun bei transgenen Mäusen d'Sensibilitéit fir Kokain. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Distinct Muster vun DeltaFosB Induktioun am Gehir vum Drogen vu Mëssbrauch. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokaliséierung a Mechanismus vun der Handlung vu Cannabinoid Rezeptoren an de glutamatergesche Synapses vum Mauskär accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Zyklesch Nukleotid Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid Rezeptor-stimuléiert [35S] GTPyS-Bindung a Ratthalamus a kultivéiert Zelllinien: Signaltransduktiounsmechanismen ënnergräifend Agonist Effizienz. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Den endogene Opioid System: e gemeinsamt Substrat an der Drogenofhängegkeet. Drogen Alkohol Depend. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuroanatomesch Lokaliséierung vun κ1 an κ2 opioid Rezeptoren bei Rat a Marshënn. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blockade vum Nukleus accumbens opiate Rezeptoren schwëmmt intravenös Heroin Belohnung an der Rass. Psychopharmacologie (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekulare Mechanismen involvéiert an der asymmetrescher Interaktioun tëscht Cannabinoid an Opioid Systemer. Psychopharmacologie (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Eng wichteg Roll fir DeltaFosB am Nukleus accumbens am Morphin Aktioun. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Zwee Gehireplaze fir Cannabinoid Belounung. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktivéierung vum gekloonten mënschleche Kappa Opioid Rezeptor duerch Agonisten verbessert [35S] GTPyS Bindung un Membranen: Bestëmmung vu Potenzitéiten an Efficacitéite vu Liganden. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Absence of delta -9-tetrahydrocannabinol dysphoric effects in dynorphin-deficiency mices. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Vergréisserter Mortalitéit, Hypoaktivitéit an Hypoalgesie bei Cannabinoid CB1 Rezeptor-Knockout-Mais. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [PMC gratis Artikel] [PubMed]