Optogenetik weist eng Roll fir Accumbale mëttelméisseg Neuronen aus, déi Dopamin D2 Rezeptoren bei der Kokain-induzéierter Verhalenssensibilisatioun (2014) expriméieren,

Géi op:

mythologesch

Laang dauerhaft, Drogen-induzéiert Adaptatiounen am Nucleus accumbens (NAc) goufen proposéiert fir zu Drogen-mediéierten Suchtverhalen bäizedroen. Hei hu mir eng optogenetesch Approche benotzt fir d'Roll vun NAc medium spiny Neuronen (MSNs) ze iwwerpréiwen, déi Dopamin D2 Rezeptoren (D2Rs) an der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung ausdrécken. Adeno-assoziéiert virale Vektoren, déi Kanalrhodopsin-2 (ChR2) kodéieren, goufen an den NAc vun D2R-Cre transgenen Mais geliwwert. Dëst huet eis erlaabt selektiv D2R-MSNs an NAc ze fotostimuléieren. D2R-MSNs bilden lokal hemmungskreesser, well d'Fotostimulatioun vun D2R-MSN inhibitoresch postsynaptesch Stréimunge (IPSCs) an Nopesch MSNs evokéiert huet. Fotostimulatioun vun NAc D2R-MSN an vivo beaflosst weder d'Initiatioun nach den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung. Wéi och ëmmer, d'Fotostimulatioun während der Drogenentzuchsperiod huet d'Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung ofgeschwächt. Dës Resultater weisen datt D2R-MSNs vun NAc eng Schlësselroll spillen an der Réckzuch-induzéierter Plastizitéit a kënnen zum Réckwee bäidroen no der Stéierung vum Drogenmëssbrauch.

Schlësselwieder: Optogenetik, mëttel spiny Neuronen, Dopamin D2 Rezeptoren, Kokain, Drogenofhängeger

Aféierung

Dopamin (DA) Signaliséierung ass verbonne mat Belounungserwaardung an Zilgeriicht Verhalen (Wise, 2004; Goto a Grace, 2005; Berridge, 2007). Eng vun de bekannte Pathologien vun dopaminergesche Stéierungen ass Drogenofhängeger (Robinson a Berridge, 1993, 2003). No widderholl Belaaschtung vu Suchtfaktoren, adaptiv Verännerungen op de molekulare a celluläre Niveau am DA mesolimbesche Wee; dës kënnen zu Drogenofhängeger Ofhängegkeet féieren, wat eng chronesch, relapsing Stéierung ass, an där compulsive Drogen-Sich an Drogen-huelen Behuelen bestoe trotz hire schlëmmen negativ Konsequenzen (Thomas et al., 2008; Baik, 2013). Charakteriséierung vun de Modifikatiounen, déi am mesolimbesche dopaminergesche System stattfannen, ass also de Schlëssel fir d'Drogenofhängegkeet ze verstoen.

Dopamin D1 Rezeptoren (D1R) an D2 Rezeptoren (D2R) ginn héich ausgedréckt an de mëttlere Spiny Neuronen (MSNs) vum Striatum. Et gouf virgeschloen datt laang dauerhaft Drogen-induzéiert Adaptatiounen am ventralen Striatum, besser bekannt als den Nucleus accumbens (NAc), zu der Entwécklung vun der Sucht bäidroe wéi och Drogen-Sich a Réckwee Verhalen (Lobo an Nestler, 2011;; Smith et al., 2013). Dopaminergesch Zellkierper aus dem ventralen Tegmentalgebitt innervéieren meeschtens den NAc. Iwwer 95% vun den Zellen am NAc sinn MSNs, déi excitatoresch Input vu véier grousse Gehirregiounen kréien: de prefrontale Cortex, de ventralen Subiculum vum Hippocampus, de basolateralen Amygdala, an den Thalamus (Sesack a Grace, 2010; Lüscher a Malenka, 2011). MSNs bannent der NAc kënnen an zwou grouss Ënnerpopulatiounen opgedeelt ginn: Direkte Wee MSNs déi D1Rs ausdrécken an direkt op Midbrain DA Beräicher projizéieren, an indirekt Wee MSNs déi D2Rs ausdrécken a projizéieren op de ventralen Pallidum (Kreitzer a Malenka, 2008; Sesack a Grace, 2010; Lüscher a Malenka, 2011;; Smith et al., 2013). Well MSN GABAergesch sinn, wäert d'Aktivatioun vun MSNs Neuronen hir Downstream Ziler hemmen, déi och GABAergesch sinn (Chevalier an Deniau, 1990). Dofir wäert d'Aktivatioun vun D1R-MSNs Midbrain DA Neuronen begeeschteren, déi dann zu der Reguléierung vu belounungsrelatéierte Verhalen bäidroen (Lüscher a Malenka, 2011; Bocklisch et al. 2013).

Rezent Studien mat genetesch manipuléierte Mais, déi Cre recombinase op eng Zell-Typ spezifesch Manéier ausdrécken, hu verschidde Rollen fir D1R-MSNs an D2R-MSNs a Kokain Suchtverhalen opgedeckt. Esou Mais erméiglechen genetesch Zilsetzung vu spezifesche Toxine, optogenetesch Sonden oder DREADD (Designer Rezeptoren exklusiv vun engem Designer Medikament aktivéiert) fir selektiv D1R-MSN oder D2R-MSN ze manipuléieren. Dës Approche huet zu engem Konsens iwwer d'Roll vun MSNs an Suchtverhalen gefouert: D1R-MSNs förderen anscheinend Suchtverhalen, wärend keng spezifesch Roll (oder eng inhibitoresch Roll) an der Entwécklung vun Drogen-induzéierter Suchtverhalen fir D2R-MSNs proposéiert gouf. (Hikida et al. 2010; Lobo et al., 2010; Ferguson et al. 2011; Bock et al., 2013). Kokain Belaaschtung induzéiert anscheinend synaptesch Modifikatioun an Ännerungen am Genausdrock a béid MSN Populatiounen (Lobo et al., 2010; Lobo und Nestler, 2011; Grueter et al., 2013). Och wann et schéngt datt D1R-MSNs an D2R-MSNs opposéierend Rollen am Kokain-mediéierten Suchtverhalen spillen, ass déi präzis Roll vun D2R-MSNs net kloer.

Virdru gouf et gewisen datt D2R Knockout (KO) Mais normal Kokain-mediéiert Verhalenssensibiliséierung a Kokain-Sich Verhalen weisen, mat nëmmen e liicht Ofsenkung vun der Sensibilitéit verursaacht duerch d'Feele vu D2R (Baik et al., 1995; Chausmer et al. 2002; Sim et al., 2013). Wéi och ëmmer, Belaaschtung fir Stress während Drogenentzéiung ënnerdréckt Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung souwéi Kokain-Sich a Réckwee Verhalen an D2R KO Mais (Sim et al., 2013). Spezifesch Knock-Down vun D2R am NAc beaflosst keng basal Lokomotoraktivitéit, nach Kokain-induzéiert Verhalenssensibiliséierung, awer bitt d'Fäegkeet vum Stress fir den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalensensibiliséierung ze hemmen (Sim et al., 2013). Dës Erkenntnisser proposéiere staark datt d'Blockade vum D2R am NAc keng Kokain-mediéiert Verhalenssensibiliséierung verhënnert. Éischter, et schéngt, datt D2R am NAc eng ënnerscheed Roll spillt bei der Reguléierung vun de Stress-ausgeléiste synaptesche Modifikatioune beim Réckzuch, déi zu enger Erhéijung vum Kokain-Sich a Réckwee Verhalen féieren (Sim et al., 2013).

Hei hu mir Optogenetik benotzt fir d'Roll vun NAc D2R-MSNs an der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung weider ze evaluéieren. Mat Gehireschnäppchen, fanne mir datt d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs lokal hemmungskreesser bannent NAc aktivéiert mat Nopesch MSNs. Fotostimulatioun vun NAc D2R-MSNs an vivo beaflosst weder d'Initiatioun nach den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung. Wéi och ëmmer, repetitive Aktivatioun vun NAc D2R-MSNs während der Drogenentzéiungsperiod attenuéiert Kokain-induzéiert Suchtverhalen. Eis Resultater weisen datt D2R-MSNs vun NAc eng Schlësselroll bei der Réckzuch-induzéierter Plastizitéit spillen a kënnen zum Réckwee bäidroen no der Stéierung vum Drogenmëssbrauch.

Material a Methoden

Méis

D2-Cre BAC transgenic Mais op engem C57Bl /6 Hannergrond sech aus MMRRC (Mutant Mouse Regional Ressource Zentren, B6.FVB (Cg) -Tg (Drd2-cre) ER44Gsat /Mmucd kritt. A Verhalensexperimenter goufen d'Littermates, déi den D2-Cre Transgen feelen, als Kontrolle fir d'D2-Cre Mais benotzt. Mais goufen an enger spezifescher Pathogen-gratis Barrière Ariichtung ënner konstante Bedéngungen vun Temperatur a Fiichtegkeet erhalen, an op engem 12-h Liicht, 12-h donkel Zäitplang. Déier Betreiung an Ëmgank goufen am Aklang mat Standarden vun der Institutional Animal Care an Notzung Comitée vun Korea University a KIST guttgeheescht gesuergt.

Virusvektor Virbereedung

pAAV-EF1a-DIO-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE gouf generéis vum Karl Deisseroth (Stanford Univ.) geliwwert. Fir Virbereedung vun AAV, goufen HEK293T Zellen an DMEM Medien mat Antibiotiken an FBS ugebaut. Den Dag virun transfection, véier Placke iwwer 90% Zesummefloss vun 10-cm Platen sech op fënnef 15-cm Platen plated a fir 18-22 h oder bis 60 bis 70% Zesummefloss incubated. HEK293T Zellen sech mat pAAV-DIO-ChR2-EYFP transfected, pAAV-DJ an pHelper benotzt JetPEI transfection reagent (QBiogene). D'DNA /DMEM /PEI Cocktail war vortexed an incubated bei Raumtemperatur fir 20 min. No der Inkubatioun gouf d'Transfektionsmëschung op all 15 cm Teller bäigefüügt. Transfected Zellen sech 48 h no transfection recoltéiert an incubated mat 0.5% Natrium deoxycholate (Sigma; D6750) an 50 Unitéiten /ml vun benzonase nuclease (Sigma; E1014) bei 37 ° C fir 1 h. No der Entfernung vun zellulären Debris duerch Zentrifugéierung bei 3000 × g fir 15 min, gouf de Supernatant duerch en 0.45 mm PVDF-Filter (Millipore) gefiltert. D'Preinung vun AAV- DJ Partikel gouf mat HiTrap Heparin Affinitéitskolonnen (GE Healthcare) gemaach. Fir d'Konzentratioun vun AAV goufen Amicon ultra-15 Zentrifugalfilter Eenheeten mat engem 100,000 Molekulargewiicht Cutoff benotzt. Konzentréiert Virus aliquotéiert a gefruer fir Stockage bei -80 ° C. Déi lescht viral Konzentratioune waren 3 ~ 6 × 1012 Viruspartikelen pro ml fir all AAV.

Stereotaxesch Injektioun an optesch Faserplazéierung

D'Déiere goufen duerch ip Injektiounen vun 1.6 μl Zoletil an 0.05 μl Xylazine (Rompun, Bayer) pro Gramm Kierpergewiicht an e stereotaxesche Apparat gesat (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Fir d'Injektioun vu Virussen gouf eng 31-Meter Sprëtznadel benotzt fir bilateral 2 μl Virus an NAc an engem Winkel vun 0 ° (AP +1.7; ML ± 1.3; DV -4.5) mat enger Rate vun 0.1 ul / min ze infuséieren. D'Nadel gouf fir 10 min no der Injektioun op der Plaz gelooss ier se lues a lues zréckgezunn ass. D'Glasfaser-Kanule fir d'Implantatioun bestoung aus engem Zirkonium-Hülse (1.25 mm Duerchmiesser a 4.5 mm laang) a flaach Tipp vun enger optescher Faser (200 µm Duerchmiesser). D'Implantatioun vun der Glasfaser-Kanule an NAc fir d'Beliichtung vun D2-MSNs gouf direkt no der Injektioun vu Viren ausgefouert. D'Koordinate fir d'Implantatioun vun der Glasfaser-Kanule waren e Wénkel vun 0 ° (AP +1.7; ML ± 1.35; DV -4.2) fir NAc ze zielen. Fir d'optesch Faser ze verankeren, goufen zwee Schrauwen an de Schädel op der hënneschter Säit vun der Implantatiounsplaz vun der Glasfaser-Kanule verankert. Fir d'Glasfaser-Kanule op de Schädel ze fixéieren, gouf C&B Superbond (Sun Medical) op d'Uewerfläch vum Schädel ëm d'Basis vun der Kanule applizéiert. Wann d'C&B Superbond gehärt huet, gouf d'Kanule aus dem Halter entlooss an Zännzement (Poly-F, Dentsply) gouf ronderëm d'Kanule a Schrauwen applizéiert. Fir de Schnëtt ronderëm d'Kanuléierungsplaz zouzemaachen, gouf Vetbond Tissueklebstoff (3 M, 7003449) benotzt. No der Implantatioun goufen d'Mais subkutan Injektioun vun Antibiotike (Enrofloxacin, 5 mg / kg, q 12 h) an Analgesie (Carprofen, 5 mg / kg, q 24 h) fir 3 Deeg hannereneen gegeben.

In vivo Fotostimulatioun

En 200 µm Patchschnouer gouf mam externen Deel vun der chronesch implantéierbarer optescher Faser mat Hëllef vun enger Hülse verbonnen. Optesch Faseren goufen duerch en FC / PC Adapter op eng blo Laserdiode (473 nm, MBL-III 473-150 mW) befestegt, a Liichtimpulse goufen duerch e Stimulator (BNC 575) generéiert. Fir Fotostimulatioun vu ChR2-ausdréckende Neuronen, war d'Stimulatiounsparadigma 20 Hz Frequenz, 5 ms Pulsdauer an 2-5 mW Liichtkraaft. D'Liichtkraaft aus dem Patchkabel gouf mat engem Stroummeter (PM100D) mat engem S121C Liichtsensor gemooss.

Behuelen Analyse

Verhalensexperimenter goufen mat männlechen D2-Cre Mais am Alter vun 11-13 Wochen ausgefouert, mat Ausnam vu Mais, déi elektrophysiologesch Analyse ënnerworf goufen, déi 5-6 Wochen al waren. Age-matched D2-Cre a Cre negativ Kontroll Mais goufen mam Virus injizéiert an individuell gehal an erlaabt an de Käfeg ze accliméieren bis zum Verhalenstest. Fir all Manipulatioun goufen d'Mais 60 min virum Ufank vum Experiment an den experimentellen Raum transferéiert fir d'Gewunnecht z'erméiglechen a Stress ze reduzéieren (Hellegkeet vum experimentellen Raum war 70 Lux). All experimentell Apparat gouf mat 70% Ethanol tëscht Experimenter gebotzt fir potenziell Gerochstécker ze läschen.

Kokain Sensibiliséierung

Fir d'Initiatioun vun der Kokain Sensibiliséierung, goufen d'Mais fir 3 Deeg hannereneen op Salzinjektiounen (ip) gewinnt an duerno mat Salzlinn oder Kokain (15 mg kg) injizéiert.-1, ip) fir 5 Deeg hannereneen. Mais goufen intraperitoneal (ip) injizéiert mat entweder Kokainhydrochlorid (Johnson Mattney, Edinburgh, UK) opgeléist a Salzlinn (0.9% NaCl) oder Salzlinn mat enger 30 G Nadel. Direkt no all Injektioun goufen d'Mais fir horizontal Lokomotoraktivitéit an enger oppener Feldkammer fir 30 min getest. Fir d'Messung vum Effekt vun der Fotostimulatioun op d'Initiatioun an d'Ausdrock vun der Sensibiliséierung (Figur (Figur​​​5), 5), goufen d'Mais blo Liichtbeleuchtung bilateral duerch duebel Glasfaser-Patchschnouer op den NAc fir véier 3-min Perioden während 30 min Sessiounen an Heemkäfeg gegeben. Patchschnouer aus der Glasfaser-Kanule, déi um Maus Schädel läit, gouf geläscht a Mais goufen op d'mannst 10 min Rescht gegeben. D'Mais goufen dann entweder mat Kokain oder Salins (coc 1d-coc 5d) injizéiert. No der Initiatioun vun der Sensibiliséierung gouf Kokain fir 14 Deeg zréckgezunn ouni Salinsinjektioun. Wärend dëser Réckzuchszäit gouf keng Fotostimulatioun applizéiert. Den Ausdrock vun der Verhale Sensibiliséierung fir Kokain gouf dunn duerch Injektioun vun enger Erausfuerderungsdosis vum Medikament (10 mg kg) bestëmmt-1, ip) no der Fotostimulatioun vum NAc wéi an der Figur illustréiert Figur 5A.5A. Fir den Effekt vun der Fotostimulatioun während der Kokain-Entzugszäit ze moossen (Figur (Figure 6), 6), goufen d'Mais dem selwechte Protokoll fir Sensibiliséierung ënnerworf wéi uewen beschriwwen (fir Figur Figure5) 5) ausser Fotostimulatioun gouf uginn. No der Initiatioun vun der Kokain-Sensibiliséierung gouf d'Fotostimulatioun op den NAc all Dag fir 1 h während der Gesamtenzugzäit vu 14 Deeg applizéiert. No 14 Deeg vum Réckzuch goufen all Gruppe vu Mais mat der Erausfuerderungsdosis Kokain injizéiert (10 mg kg)-1).

Figure 1 

Selektiv Fotostimulatioun vu mëttleren spiny Neuronen am Nucleus accumbens. (A) Selektiv Ausdrock vu ChR2 an NAc D2R Neuronen duerch Liwwerung vun AAV-DIO-ChR2-EYFP virale Vektoren. Skala Baren: Hannergrond Figur, 1 mm: Insert, 200 µm. (B) Konfokal Biller ...
Figure 2 

Photostimulatioun vun D2RCre-MSNs fiert lokal inhibitoresch Kreesleef. (A) Konfokalt Bild vun engem Live NAc Slice, weist e Faarf-gefëllten Neuron deen ChR2 net ausdréckt an eng Nopeschzell (Pfeilkop) déi ChR2 ausgedréckt huet a ka fotostimuléiert ginn. (B) IPSC ...
Figure 3 

Eegeschafte vun NAc Zellen. (A) Zwee-Photon Fluoreszenz Bild vun Neuronen gefëllt mat Alexa 594. (A1) weist en Neuron aus der ChR2 + / AP Grupp, iwwerdeems (A3) weist en Neuron aus der ChR2-/IPSC Grupp. (A2) an (A4) sinn héich-Vergréisserung Biller vun der ...
Figure 4 

Effekter vun in-vivo optogenetesch Aktivatioun vun D2-MSNs am NAc op Basal Lokomotoraktivitéit. (A) Sagittal Vue vun D2 Cre Mais injizéiert am NAc mat AAV-DIO-ChR2-EYFP gefollegt vu bilateraler Implantatioun vun der Glasfaserkanül. 473 nm blo Luucht Stimulatioun ...
Figure 5 

Effekter vun der Aktivatioun vun D2-MSN während Sensibiliséierung fir Kokain. (A) Experimentell Schema fir Foto-Stimulatioun vun D2-MSNs während Initiatioun an Ausdrock vun Sensibiliséierung fir Kokain. Blo-Liicht Beliichtung (2 ~ 5 mW, 5 ms, 20 Hz) gouf fir véier geliwwert ...
Figure 6 

Effekter vun der Aktivatioun vun D2-MSN während dem Réckzuch zu widderholl Kokain Belaaschtung. (A) Experimentell Schema fir Foto-Stimulatioun vun D2-MSNs beim Réckzuch zu Kokain. Blo-Liicht Beliichtung (2~5 mW, 5 ms, 20 Hz) gouf fir aacht 3-min Perioden geliwwert ...

Immunofluoreszenz a konfokaler Lasermikroskopie

Fir Immunofluoreszenz goufen d'Mais mat Zoletil (Virbac, 1.6 μl / g, intraperitoneal) an 0.05 μl / g Rompun (Bayer) anästhetiséiert a perfuséiert mat filtersteriliséierter 0.1 M PBS gefollegt vun der Fixatioun mat 4% Paraformaldehyd / PBS. D'Gehir gouf duerno geläscht a post-fixéiert fir 4 h mat äiskale Fixativ wéi uewen. D'Gehirer goufen dunn an 30% Saccharose / 0.1 M PBS fir 2 Deeg dehydréiert. Gehirer goufen duerno gefruer an 40-µm-décke konsekutiv Coronal Sektioune goufen op engem Kryostat virbereet (Leica CM 1900, Däitschland). Sektiounen (40 μm) goufen fir 1 h an 0.1 M PBS mat 5% normal Geess serum an 0.2% Triton X-100 blockéiert a mat Kanéngchen polyclonal anti-D2R (1:500, Millipore, AB5084P) iwwer Nuecht bei 4 ° C incubated. No wäschen mat PBS mat 0.2% Triton X-100, Echantillon waren um RT fir 1 h mat Alexa Fluor 568 Geess Anti-Kanéngchen IgG (1:500; Molecular Probes, Eugene, ODER, USA) an 0.2 μl /ml 4 incubated, 6-Diamidino-2-Phenyl-Indol HCl (DAPI; Sigma, St. Louis, MO, USA) an PBS mat 1% normal Geess serum an 0.2% Triton X-100. Als negativ Kontroll goufen Echantillon mat DAPI an der sekundärer antibody nëmmen incubated. Sektiounen goufen op engem C1 Plang Apo × 40/1.4 Waasserkonfokale Laser Scannen System (LSM 700, Zeiss, Berlin, Däitschland) iwwerpréift.

Elektrophysiologie a Fotostimulatioun an Nucleus accumbens Scheiwen

Mais goufen fir Experimenter 4 Wochen no Virusinjektioun benotzt, fir optimal Ausdrock vu ChR2-EYFP z'erreechen. D'Mais goufen dunn anästhetiséiert an entkapéiert fir d'Virbereedung vun akuten Gehireschnäppchen. D'Gehir gouf séier ewechgeholl an direkt an äiskale Schneidléisung gesat mat (an mM) 250 Sucrose, 26 NaHCO3, 10 D-Glukose, 3 Myo-inositol, 2.5 KCl, 2 Na-pyruvat, 1.25 NaH2PO4, 0.5 Ascorbinsäure, 1 Kynureninsäure a 7 MgCl2 déi mat 95% O gebubbelt gouf2/5% CO2 (pH = 7.4). Coronal Gehir Scheiwen (250 µm déck) déi den NAc enthale goufen mat engem Vibratom (Leica VT 1200 S) virbereet a goufen duerno a gasséierte kënschtleche cerebrospinal Flëssegkeet (ACSF) inkubéiert mat (an mM): 11 D-Glukose, 125 NaCl, 25 NaHCO31.25 NaH2PO4, 2.5 KCl, 1.25 MgCl2 an 2.5 CaCl2 bei 34°C fir 1 h virun der Opnam. Scheiwen goufen dunn an eng Ënnerdaachopnamkammer transferéiert an där O2-saturated ACSF Léisung war kontinuéierlech superfused. Zellen an NAc a VTA goufen visualiséiert mat engem 2-Photonmikroskop (Olympus FV1000 MPE, Tokyo, Japan) mat enger 25X Waasserimmersiounsobjektiv an Infrarout DIC Optik ausgestatt. Ganzzelle Patch Clamp Opzeechnunge goufen aus NAc Zellen mat engem Multiclamp 700B Verstärker an Digidata 1440A Digitalisator (Molecular Devices, LLC) kritt. D'Date goufen mat pCLAMP 10.2 Software gepréift a weider analyséiert mat Clampfit 10.2 Software (Molecular Devices, LLC). Patchelektroden mat Resistenz tëscht 3-5 MΩ goufen mat enger interner Léisung gefüllt mat (an mM): 130 K-Gluconat, 2 NaCl, 2 MgCl2, 20 HEPES, 4 Na2ATP, 0.4 Na3GTP, 0.5 EGTA an 10 Na2- Phosphokreatin, mat pH ugepasst op 7.3 mat 1 N KOH. Bicuculline (10 µM) gouf op d'Gehireschnëss applizéiert fir GABA Rezeptoren an engem Ënnerdeel vun Experimenter ze blockéieren.

NAc Zellen, déi ChR2-EYFP ausdrécken, goufen duerch eng LED-Liichtquell (460 ± 27 nm, UHP-Mic-LED-460, Prizmatix) fotostimuléiert. Blo Liicht vun der LED gouf weider gefiltert an ofgeschwächt duerch e Filterwürfel, deen mat engem Excitatiounsfilter (470-495 nm) ausgestatt ass; Liichtblitzen (10 ms Dauer, 0.0366–0.354 mW/mm2) goufen iwwer d'25X Objektivobjektiv bei Frequenzen vu 5-40 Hz an d'Gehireschnëtz geliwwert. An engem Ënnergrupp vun Experimenter, photocurrents sech an ChR2-ausdrécken Zellen an Äntwert op 2 s Dauer Liichtjoer Blëtz gemooss.

Statistesch Analyse

Date sinn als heescht ± Sem presentéiert a sech mat der zwee-tailed Student d'analyséiert t-Test, oder mat zwee-Wee Analyse vun Varianz gefollegt vun Bonferroni d' hoc testen. A P-Wäert vun <0.05 war statistesch bedeitendst considéréiert.

Resultater

Selektiv Fotostimulatioun vu mëttleren spiny Neuronen am Nucleus accumbens

Fir d'Roll vun NAc D2R-MSNs a Kokain-mediéierte Suchtverhalen ze bestëmmen, hu mir eng optogenetesch Approche benotzt fir NAc D2R Neuronen ze stimuléieren. Fir selektiv d'Aktivitéit vun D2R-MSNs am NAc duerch Liicht ze kontrolléieren, viral Vektoren, déi AAV-DIO-ChR2-EYFP kodéieren, goufen stereotaxesch an d'NAc vun D2R-Cre BAC transgenen Mais injizéiert. 4 Wochen no viraler Injektioun gouf robust Ausdrock vu ChR2-EYFP an der NAc observéiert (Figure) (Figure1A) .1A). D'Spezifizitéit vum ChR2 Ausdrock an D2R-MSNs gouf duerch Immunofluoreszenz konfokal Analyse bestätegt: Ausdrock vum YFP-tagged ChR2 gouf mat D2R an NAc co-lokaliséiert (Figure). (Figure1B), 1B), ze weisen datt ChR2 an D2R-ausdréckende Neuronen an NAc ausgedréckt gouf.

Och wann esou eng Approche an anere Studien benotzt gouf (zB Lobo et al., 2010), wäerten d'Detailer vu Virusinjektiounsprozeduren vun engem Labo zu engem aneren variéieren, sou datt et wichteg ass optogenetesch Kontroll ënner eise spezifesche experimentellen Konditiounen ze dokumentéieren. Mir hunn de funktionnelle Ausdrock vu ChR2 bewäert andeems mir ganz Zell Patch Clamp Opzeechnunge vun MSNs an NAc Scheiwen maachen. MSNs goufen identifizéiert duerch: (1) e relativ hyperpolariséierte Reschtmembranpotenzial (RMP), typesch méi negativ wéi -80 mV; (2) e reegelméissege Muster vum AP-Feier an Äntwert op applizéiert Stroumimpulsen; (3) laang Latenz fir d'Feier vum éischten AP während engem aktuellen Impuls; (4) Fehlen vun enger Spannung "Sag" wärend der Hyperpolariséierung verursaacht duerch en hyperpolariséierungsaktivéierte Kationstroum (Ih); an (5) relativ kleng Gréisst vun hiren Zellkierper (Chang a Kitai, 1985; O'Donnell a Grace, 1993; Le Moine und Bloch, 1996;; Taverna et al., 2008). Blo Liicht (470 nm) gouf iwwer dat ganzt Gesiichtsfeld (0.78 mm) applizéiert2) wärend d'Spannungsspannung vun den MSNs bei engem Haltpotenzial vun -69 mV. E puer MSNs hunn ChR2 ausgedréckt, evident als YFP Fluoreszenz an hirer Somata (Pfeile a Figuren 1C1,C3). Esou Neuronen hunn substantiell Fotostroumen ausgestallt, mat méi hell Liichtreizungen, déi méi grouss Fotostroumen ausléisen (Figure (Figure1D) .1D). D'Relatioun tëscht Peak Photocurrent Amplitude a Liichtintensitéit (Figur (Figur 1E) 1E) hat eng hallef maximal Liichtempfindlechkeet vun 0.054 ± 0.0023 mW/mm2 an eng maximal Peak Amplitude vun 1.16 ± 0.16 nA (duerchschnëttlech ± sem, n = 4).

Ënner Stroumklemmbedéngungen, MSNs ausdrécken ChR2 gebrannt APs zouverlässeg an Äntwert op Zich vu Liichtimpulsen (10 ms Dauer; Figure) Figur1F).1F). Ënner dëse Konditiounen, Liichtintensitéiten méi wéi 0.1 mW / mm2 ware genuch fir APs z'erwächen (Figur (Figur 1G, 1G, n = 5). APs goufen zouverlässeg bei Fotostimulatiounsfrequenzen bis zu 20 Hz opgeruff, wärend bei 40 Hz d'Liichtinduzéiert Äntwerten zesummegefaasst fir eng nohalteg Depolariséierung ze verursaachen déi manner effektiv war fir APs z'evokéieren (Figuren) 1F,G).

Photostimulatioun vun D2R-MSNs fiert lokal inhibitoresch Kreesleef

Fir d'Konsequenze vun der D2R-MSN Aktivitéit op lokalen Circuiten am NAc z'ënnersichen, hu mir presynaptesch MSN fotostimuléiert, déi ChR2 ausdréckt, wärend postsynaptesch Äntwerten an ChR2-negativ MSNs gemooss ginn (Figure (Figure2A) .2A). Den Neuron an der Figur gewisen Figure2A2A dréckt net ChR2 aus, wéi uginn duerch d'Feele vun der EYFP-Fluoreszenz wéi och d'Feele vu Kuerzlatenz-Fotostroum wéi déi an der Figur gewisen. Figur 1D.1D. Wéi och ëmmer, wann déi postsynaptesch MSNs als Potenzial vun -69 mV gehale goufen, hunn 10 ms Dauer Liichtblitzen no bausse Stréimunge no enger latency vun 9.0 ± 0.42 ms (Figure) (Figure 2B, 2B, n = 15). Fir d'Natur vun dësen Äntwerten ze bestëmmen, gouf de postsynaptesche Membranpotenzial tëscht -99 mV bis -39 mV variéiert, während e Liichtblitz applizéiert gouf (Figure (Figure2C) .2C). Liicht-induzéiert Äntwerte variéiere mam Membranpotenzial (Figur (Figure 2D, 2D, n = 6) an ëmgedréit hir Polaritéit bei -81 ± 3.4 mV. Gitt datt d'Gläichgewiichtspotenzial fir Chloridionen -80 mV ënner eisen ionesche Bedéngungen ass, kënnen d'Liicht-induzéiert Baussestroum wéinst Chloridflux vermëttelt duerch postsynaptesche GABA sinn.A Rezeptoren. Fir dës Méiglechkeet ze testen, de GABAA Rezeptor Antagonist Bicuculline (10 μM) gouf zu der externer Léisung bäigefüügt. Dëst Medikament blockéiert komplett Liichtinduzéiert Äntwerten (Figur (Figure2B), 2B), bestätegt datt d'Liicht-induzéiert Äntwerte GABAergesch inhibitoresch postsynaptesch Stréim (IPSCs) waren.

Baséierend op hir Äntwerten op Photostimulatioun, kënnen d'MSNs, déi mir opgeholl hunn, an eng vun 4 Gruppen klasséiert ginn: (1) Zellen, déi e genuch Betrag vu ChR2 ausdrécken fir APs als Äntwert op Fotostimulatioun (ChR2+/AP) ze brennen, déi uewen beschriwwe goufen; (2) Zellen, déi eng kleng Quantitéit vu ChR2 ausdrécken, déi eng Ënnerschwelldepolariséierung an der Äntwert op d'Liicht (ChR2 + / Nee AP) ausgezeechent hunn; (3) roueg Zellen déi keen Ausdrock vu ChR2 haten, awer liichtinduzéiert IPSCs aus presynaptesche MSNs kruten, déi ChR2 ausdrécken (ChR2- / IPSC); an (4) ChR2-negativ Zellen déi keng IPSCs an Äntwert op Fotostimulatioun vun anere MSNs (ChR2- / No IPSC) weisen. De relativen Undeel vun Zellen an all eenzel vun dëse Kategorien ass an der Figur gewisen Bild 2E2E (n = 53). Am Allgemengen, bal d'Halschent vun den Zellen (45.3%) ausgedréckt ChR2 (Zomm vun Gruppen (1) an (2)). Keen vun den MSNs, déi mir opgeholl hunn, huet souwuel Fotostroum wéi och IPSCs als Äntwert op Fotostimulatioun ausgestallt; dëst weist datt D2R-positiv MSNs net aner Membere vun dëser selweschter Zellpopulatioun innervéieren an der NAc.

Dës Klassifikatioun vun Äntwerten op d'Liicht weist datt d'Fotostimulatioun vu ChR2 + / Nee AP Zellen (Grupp 2) an ChR2- / Nee IPSC Zellen (Grupp 4) keng elektresch Signaler generéieren déi zu Circuitaktivitéit bäidroe kënnen. Also, fir d'Effekter vun der Fotostimulatioun op Circuitfunktioun ze definéieren, hu mir am Detail d'Eegeschafte vun ChR2 + / AP MSNs (Grupp 1) charakteriséiert, déi APs generéieren wann den NAc fotostimuléiert ass, an ChR2 - / IPSC Zellen (Grupp 3), déi sinn postsynaptesch fir d'ChR2+/AP MSNs well se Liichtinduzéiert IPSCs kréien. ChR2 + / AP an ChR2- / IPSC Zellen an NAc goufen allebéid als spiny Neuronen identifizéiert (Figure (Figure3A) .3A). Et waren keng signifikant Differenzen an de morphologeschen oder elektrophysiologeschen Eegeschafte vun Neuronen an dësen zwou Gruppen. Zum Beispill waren d'Somata vun den Neuronen an deenen zwou Gruppen ähnlech a Gréisst (Figur (Figure3B) .3B). Zousätzlech, hir RMPs (-83.0 ± 1.7 vs. -85.0 ± 1.8 mV; mengen ± sem; n = 10, Figur Figur 3C) 3C) an Inputresistenz (113 ± 15 vs. 133 ± 13 MΩ, n = 6, Figur Figur 3D) 3D) waren och net anescht (p > 0.05 zwee-tailed Student d' t-test) wärend hir AP Feiermuster als Äntwert op aktuell Impulser (Figuren 3E, F) waren och ähnlech (p > 0.05 zwee-tailed Student d' t-test, n = 6). Zesummegefaasst, Fotostimulatioun vun D2R-MSNs an NAc aktivéiert lokal hemmungskreesser mat postsynaptesche Neuronen, déi ganz ähnlech mat den D2R-MSNs sinn, awer net D2R ausdrécken.

Optogenetesch Stimulatioun vun NAc D2R-MSNs bei Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung

Mir iwwerpréift nächst d'Verhalenskonsequenze vun an vivo Fotostimulatioun vun NAc D2R-MSNs. Well d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs am dorsalen Striatum d'Lokomotoraktivitéit reduzéiert (Kravitz et al., 2010), hu mir ugefaang andeems d'Effekter vun der accumbens D2R-MSN Aktivatioun op basal Lokomotoraktivitéit charakteriséieren. Fir dësen Zweck goufen D2R-Cre Mais mat DIO-AAV-ChR2-EYFP Virus bilateral an den NAc (D2-Cre (+) NAc-ChR2) injizéiert. D2R-MSNs goufen dunn mat bloe Liicht (473 nm, 5 ms Pulsdauer, 20 Hz) fotostimuléiert mat der NAc iwwer eng optesch Faser geliwwert. Photostimuli goufen während véier 3-min Dauerperioden bannent der 50 min Sessioun applizéiert wann d'Mais an der Lokomotoraktivitéit Opnamkammer gehale goufen (Figure (Figure4A) .4A). Parallel, als Kontroll Net-Cre WT Littermate Mais goufen ähnlech mam Virus injizéiert a kruten ähnlech blo Luucht Beliichtung. D2-Cre (+) NAc-ChR2 Mais weisen e vergläichbaren oder liicht erhéicht Niveau vun der basaler Lokomotoraktivitéit am Verglach mat der Kontroll D2R-Cre (-) NAc-ChR2 Mais (Figuren) 4 B,C). Photostimulatioun vun D2R-MSNs an D2-Cre (+) NAc-ChR2 Mais verursaacht eng bedeitend Ofsenkung vun der Lokomotoraktivitéit déi sech erholl huet nodeems de Liichtstimulus gestoppt gouf (Figure (Figure4B) .4B). Keng esou Effekter goufen an der Kontroll D2R-Cre (-) NAc-ChR2 Mais observéiert (Figuren) 4 B,C), wat beweist datt d'Effekter vun der Fotostimulatioun duerch d'Aktivatioun vum ChR2 verursaacht goufen, anstatt méiglech net-spezifesch Effekter wéi d'Heizung vum Gehirngewebe. Dofir hunn eis Donnéeën uginn datt d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs am NAc eng Ofsenkung vun der Lokomotoraktivitéit ausgeléist huet.

Dës Resultater hunn eis Fäegkeet etabléiert fir d'Aktivitéit vun D2R-MSNs bannent NAc ze kontrolléieren an vivo. Mir hunn duerno dës Fäegkeet benotzt fir den Afloss vun der D2R-MSN Aktivitéit op Verhalenssensibiliséierung op widderholl Administratioun vu Kokain z'ënnersichen. Verhale Sensibiliséierung bezitt sech op de Prozess deen eng initial Belaaschtung vu Psychostimulanten erlaabt, wéi Kokain, fir d'Fäegkeet vun de spéideren Drogenexpositiounen ze verbesseren fir d'Lokomotoraktivitéit ze stimuléieren. Dëse Prozess kann an Initiatiouns- an Ausdrockphasen getrennt ginn: Initiatioun beschreift déi direkt neural Eventer déi Verhalenssensibiliséierung induzéieren (Vanderschuren a Kalivas, 2000; Sim et al., 2013), wärend Ausdrock bekannt ass eng laang dauerhaft Form vu Verhalensplastizitéit ze sinn, déi nom Drogenentzéiung bestoe bleift (Vanderschuren a Kalivas, 2000; Sim et al., 2013). Mir hunn dofir Kokain-induzéiert Verhalenssensibiliséierung während widderholl intraperitoneal (ip) Injektiounen vu Kokain iwwerpréift, wärend Optogenetik benotzt fir d'Aktivitéit vun D2R-MSNs an NAc während jiddereng vun dësen Phasen ze kontrolléieren.

No Gewunnecht zu Salinsinjektioun iwwer 3 Deeg, goufen d'Mais mat Kokain (15 mg / kg) op 5 opfolgend Deeg injizéiert an d'Lokomotorreaktiounen goufen fir 30 min no all Injektioun opgeholl (Figure) (Figure5A) .5A). Photostimuli goufen während 30 min Sessiounen virum Kokaininjektioun geliwwert, interspersing 3 min Perioden vun Beliichtung mat 5 min Perioden, wou d'Liicht ausgeschalt gouf (Figure) (Figure5A) .5A). Gitt datt d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs am NAc d'Basal Lokomotoraktivitéit reduzéiert (Figure) (Figure 4), 4), Fotostimuli goufen direkt virun der Verwaltung vu Kokain geliwwert fir méiglech Interferenz mat Verhalensreaktiounen op Kokaininjektioun ze vermeiden.

Béid Kontroll D2-Cre (-) NAc-ChR2 Mais an D2-Cre (+) NAc-ChR2 Mais hunn eng markant Erhéijung vun der Lokomotoraktivitéit als Äntwert op déi widderholl Kokaininjektiounen gewisen (Figure) (Figure5B), 5B), wat d'Initiatioun vun der Sensibiliséierung ugeet. Photostimulatioun vun D2R-MSNs an NAc schéngen net d'Initiatioun vun der Verhale Sensibiliséierung ze beaflossen, well Kokain-induzéiert Verhalens Sensibiliséierung war ähnlech an D2-Cre (+) NAc-ChR2 Mais a Kontroll D2-Cre (-) NAc-ChR2 Mais.

No der Induktioun vun der Verhalenssensibiliséierung andeems sou Injektiounen vu Kokain (15 mg / kg) fir 5 Deeg widderholl ginn, gouf d'Droge fir 14 Deeg zréckgezunn an de Grad vum Ausdrock vun der Sensibiliséierung gouf iwwerpréift andeems d'Mais mat enger méi niddereger Dosis Kokain (10 mg) erausfuerderen. /kg). Ausdrock vun der Sensibiliséierung ass eng laang dauerhaft Form vu Verhalensplastizitéit, déi nom Drogenentzug bestoe bleift (Steketee a Kalivas, 2011; Sim et al., 2013). Fir d'Roll vun D2R-MSNs am Ausdrock vun der Sensibiliséierung z'ënnersichen, gouf NAc fotostimuléiert direkt virun der Verwaltung vu Kokain (Figure) (Figur 5A) 5A) a Sensibiliséierung gouf gemooss wéi de Betrag vun der Lokomotoraktivitéit, déi duerch d'Kokaininjektioun induzéiert gouf.

A béide Kokain-virbehandelt Gruppe vu Mais-D2-Cre(-) NAc-ChR2 Mais (D2-Cre(-):: coc-coc) an D2-Cre(+) NAc-ChR2 (D2-Cre(+): : coc-coc)-robust Ausdrock vun Sensibiliséierung geschitt (Figur (Figure5C) .5C). Den Zäitverlaf vu Kokain-stimuléierte Beweegungsännerungen war och ähnlech tëscht den zwou Gruppen (Figure (Figure 5C), 5C), ouni groussen Ënnerscheed tëscht zwou Gruppen observéiert. Zesummegefaasst weisen dës zwee Fotostimulatiounsexperimenter datt d'Aktivatioun vun D2R-MSNs am NAc keng Initiatioun oder Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung beaflosst.

Fotostimulatioun vun NAc D2R-MSNs während Drogenentzéiung

Chronesche Stress während Drogenentwécklung no widderholl Kokain Belaaschtung resultéiert zu selektiven Rekrutement vun engem D2R-ofhängegen Adaptatiounsmechanismus, deen d'Stress-induzéiert Erhéijung vun der Kokain-Sich a Réckzuchsverhalen a Verbindung mat Verännerungen an der synaptescher Plastizitéit am NAc kontrolléiert (Sim et al., 2013). Dëst weist datt d'Mechanismen, déi vum Medikamententzug engagéiert sinn, ënnerscheeden vun deenen, déi an der Drogen-indictéierter Sensibiliséierung involvéiert sinn. Mir hunn duerfir iwwerpréift ob d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs am NAc während dem Kokain-Entzug den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung beaflosst.

No der Induktioun vun der Verhale Sensibiliséierung duerch widderholl Injektioun vu Kokain wéi hei uewen, goufen D2-Cre (-) an D2-Cre (+) Mais an zwou Gruppen ënnerdeelt fir déi 14 Deeg Réckzuchsperiod: eng Grupp gouf alldeeglech blo-Liicht Stimulatioun vun NAc fir 1 h (3 min × 8 Mol), während déi aner Grupp net war (Figur (Figure6A) .6A). Widderhuelt Fotostimulatioun vun D2R-MSNs an NAc während Kokain-Entzug huet net den Ausdrock vun der Sensibiliséierung bei D2-Cre (-): coc-coc Mais beaflosst (Figure) (Figure6B) .6B). Am Géigesaz, an D2-Cre(+):: coc-coc Mais, Ausdrock vun der Sensibiliséierung gouf wesentlech ofgeschwächt duerch widderholl Fotostimulatioun wärend der Drogenentzéiung (Figure) (Figure6B), 6B), obwuel d'Zäitverlaf vun der Kokain-induzéierter Stimulatioun vun der Lokomotioun net beaflosst war (Figure (Figure6C) .6C). Also, Fotostimulatioun vun D2R-MSNs vun NAc während Drogenenträg reduzéiert Ausdrock vu Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung (Kokain × Foto-Stimulatiounsinteraktioun F(1,18) = 11.08, P = 0.0037, Figur Figure6B) .6B). Dës Donnéeën weisen datt d'Aktivatioun vun D2R-NAc MSNs während der Period vum Drogenentzug beaflosst Kokain-Sich a Réckwee Verhalen.

Diskussioun

Bedeitend Beweiser weisen datt Kokain-induzéiert Verhalenssensibiliséierung mat verstäerkter dopaminergescher Iwwerdroung am mesocorticolimbesche System assoziéiert ass, deen de ventralen Tegmentalgebitt, de prefrontale Cortex an de Nucleus accumbens (NAc) enthält. Besonnesch d'Ausdrockphase vun der Verhalenssensibiliséierung ass geprägt duerch eng persistent Drogenhyperreaktiounsfäegkeet no der Stéierung vum Medikament, wat mat enger Kaskade vun Adaptatiounsmechanismen assoziéiert ass (Kalivas an Duffy, 1990;; Robinson a Berridge, 1993;; Kalivas et al., 1998) déi zu compulsive Drogenverlaangen bäidroe kënnen (Robinson a Berridge, 1993;; Kalivas et al., 1998; Steketee a Kalivas, 2011). Et gouf virgeschloen datt Kokain-induzéiert Verännerungen an der molekulare, cellulärer a Verhalensplastizitéit am NAc, a Verbindung mat DA Rezeptor Signaliséierung an MSNs, Drogen-mediéiert Suchtverhalen regelen (Lobo et al., 2010; Schmidt et Pierce, 2010; Ferguson et al. 2011;; Pascoli et al. 2011; Bocklisch et al. 2013; Grueter et al., 2013).

Rezent Studien mat genetesch manipuléierte Mais, déi bedingt Cre recombinase ausdrécken, hunn Rollen fir D1R-MSNs oder D2R-MSNs a Kokain Suchtverhalen opgedeckt. Optogenetesch Aktivatioun vun D1R-MSNs vun NAc no 6 Deeg widderholl Kokainverwaltung erhéicht d'Lokomotoraktivitéit, während d'Aktivatioun vun D2R-MSNs gemellt huet keen Effekt (Lobo et al., 2010). Dës Donnéeën suggeréieren datt d'Wiederholung vu Kokain d'Ausgab vun D1R-MSNs vum NAc verbessert. Inhibitioun vun D1R-ausdréckende MSNs mat Tetanustoxin (Hikida et al., 2010) reduzéiert Kokain-bedingt Plaz Präferenz (CPP), wärend keng Verännerungen am Kokain CPP observéiert goufen no der Ofschafung vun der synaptescher Iwwerdroung an D2R-MSNs (Hikida et al., 2010). Optogenetesch Aktivatioun vun D1R-MSNs am dorsalen Striatum induzéiert persistent Verstäerkung, wärend d'Stimulatioun vun D2 Rezeptor-ausdréckend Neuronen transiente Strof induzéiert (Kravitz et al., 2012). Eng rezent Studie huet och gemellt datt d'Inhibitioun vun D2R-MSNs iwwer eng chemikogenetesch Approche d'Motivatioun verbessert fir Kokain ze kréien, wärend optogenetesch Aktivatioun vun D2R-MSNs d'Kokain Selbstverwaltung ënnerdréckt (Bock et al., 2013). Bocklisch et al. (2013) gemellt datt D1R-MSNs vum NAc-Projet op d'VTA, speziell op GABAergesch Neuronen bannent der VTA, während D2R-MSNs net direkt op d'VTA projizéieren. Dëse Circuit bedeit datt optogenetesch Aktivatioun vun D1R-MSNs DA Neuronen desinhibéiert, wat endlech Kokain-induzéiert Suchtverhalen verbessert (Bocklisch et al., 2013).

Trotz der scheinbar einfacher Organisatioun vun dësen zwou Populatiounen vun MSNs, ass d'Tatsaach datt MSNs Multiple Inputen kréien an verschidden Ausgänge vun / op aner Gehirgebidder hunn, souwéi lokal Circuiten tëscht MSNs an aner Klassen vun Interneuronen bilden, déi resultéierend Ausgang vun D1R- MSNs an D2R-MSNs kënne komplex a verschidde molekulare, cellulär a Verhalenskonsequenze bréngen.

Virdru gouf gewisen datt D2R zu synaptesche Modifikatioune bäidréit, déi während Drogenentzug induzéiert sinn, an dës potentiéieren de Réckwee op Kokain Sich, ouni den initialen Drogenacquisitioun oder Drogensich ze beaflossen (Sim et al., 2013). Eis aktuell Donnéeën weisen datt d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs am NAc eng Ofsenkung vun der basaler Lokomotoraktivitéit opléist. Lobo et al. (2010) huet keng Verännerung vun der Lokomotioun festgestallt wann entweder MSN Ënnertyp aktivéiert gouf, awer si hunn nëmmen total Lokomotoraktivitéit iwwerpréift anstatt direkt Äntwerte vun der basaler Lokomotoraktivitéit op Fotostimulatioun z'ënnersichen. Kravitz et al. (2010) och fonnt datt optogenetesch Aktivatioun vun D2R-MSNs am dorsalen Striatum och d'Lokomotoraktivitéit reduzéiert. Also sinn eis Donnéeën déi éischt fir ze weisen datt d'Basal Lokomotoraktivitéit duerch Fotostimulatioun vun D2R-MSNs vun NAc inhibitéiert gëtt an déi éischt fir systematesch den Zäitverlaf vun der Basaler Lokomotoraktivitéit während der Fotostimulatioun vun dësen Neuronen z'ënnersichen.

An der heiteger Studie hu mir observéiert datt d'optogenetesch Aktivatioun vun D2R-MSNs an NAc net d'Initiatioun oder d'Ausdrock vun der Verhalenssensibiliséierung beaflosst. Wéi och ëmmer, d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs während der Drogenentzéiungszäit huet den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Sensibiliséierung gestuerzt. Dofir weisen eis Donnéeën datt D2R-MSNs e Signal speziell während der Réckzuchsperiod rekrutéieren, déi weidergoen fir d'Genexpressioun oder aner Forme vu Signaliséierung z'änneren an doduerch Verännerungen an der synaptescher Plastizitéit ausléisen, wat zu Ännerungen an der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung féiert. Wéi dës MSNs Zell-Typ spezifesch Adaptatioune beschäftegen, déi hir ënnerschiddlech Konsequenzen a Suchtbezunnen Verhalen produzéiere kënnen ass net bekannt. Grueter et al. (2013) huet virgeschloen datt ΔFosB an NAc differenziell synaptesch Eegeschaften a belounungsrelatéiert Verhalen op enger Zelltyp- an Ënnerregiounspezifescher Manéier moduléiert. Viru kuerzem hunn Chandra et al. (2013) gemellt datt widderholl ChR2 Aktivatioun vun D1R-MSNs awer net D2R-MSNs eng Down-Regulatioun vum Tiam1 Gen verursaacht huet, e Protein dat an der Ëmstellung vum Aktin Zytoskelett involvéiert ass, ähnlech wéi d'Effekter vum Kokain. Dofir, fir d'Mechanismen ze verstoen, déi dauerhaft Effekter vun Drogen-induzéierter Verhalen erginn, wäert et wichteg sinn d'Zell-selektiv Induktioun vu molekulare Eventer an dësen MSNs ze markéieren, déi synaptesch Adaptatioun un repetitive Drogenbelaaschtung kontrolléieren.

Am Zesummenhang mat repetitive Drogenbelaaschtung gouf de Réckzuch virgeschloen eng wichteg Roll ze spillen, well e puer Ännerungen erschéngen nëmmen e puer Wochen no der definitiver Belaaschtung fir Kokain. Dëst hindeit datt Abstinenz e wichtege Vermëttler an der Entwécklung vu Plastizitéit ass (Robinson a Berridge, 2003; Boudreau und Wolf, 2005;; Boudreau et al., 2007;; Kourrich et al., 2007). Dës Beobachtungen erhéijen d'Méiglechkeet datt de Réckzuch selwer en Ausléiser fir d'Verännerungen am NAc kann sinn, déi ënner der Kontroll vun der D2R-ofhängeger Signalisatioun sinn. Eist Resultat weist datt d'Aktivatioun vun D2R-MSNs an NAc während Drogenenträg beaflosst Kokain-induzéiert Verhalenssensibiliséierung bitt zwéngend Ënnerstëtzung fir dës Iddi.

Et gouf virdru gewisen datt widderholl Belaaschtung fir Stress während Drogenentzéiung den Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung ënnerdréckt wéi och Kokain-Sich a Réckwee Verhalen an D2R KO Mais (Sim et al., 2013). Et ass dofir interessant datt d'Fotostimulatioun vun D2R-MSNs während der Drogenentzug och d'Ausdrock vun der Sensibiliséierung attenuéiert. Stress-induzéiert synaptesch Plastizitéit bei glutamategesche Synapsen gëtt an der NAc vun D2R KO Mais geännert (Sim et al., 2013). Och wann et nach net bekannt ass ob Fotostimulatioun vun D2R MSNs oder chronesche Stress während der Réckzuchszäit ähnlech Verännerungen an der synaptescher Plastizitéit opléisst, ënnerstëtzen eis aktuell Erkenntnisser d'Hypothese datt D2R-MSNs vun NAc eng Schlësselroll bei der Réckzuch-induzéierter Plastizitéit spillen a kënnen dozou bäidroen. Réckwee nom Stopp vum Drogenmëssbrauch. Weider Untersuchung wäert erfuerderlech sinn fir déi funktionell neural Kreesleef erauszefannen, an deenen D2R MSNs beim Drogenentzéiung deelhuelen an d'Konsequenze vun der D2R-MSNs Fotostimulatioun a chronesche Stress op synaptescher Plastizitéit an dësem bestëmmte Circuit ze analyséieren an ze vergläichen.

Eng aner méiglech Roll fir D2R-ausdréckende MSNs kéint sinn d'Ausgab vun D1R-MSNs vun NAc ze hemmen. Virdrun Fuerschung weist datt obwuel MSNs laang Axonen op Fernziler projizéieren, extensiv Iwwerlappung geschitt tëscht Axoncollateralen an den dendritesche Beem vun benachbaren spiny Projektiounsneuronen (Grofová, 1975; Preston et al., op. 1980; Wilson a Groves, 1980). Dëst kéint méiglech lokal synaptesch Konnektivitéit fir MSN bannent der NAc uginn. Intrazellulär Opzeechnunge vu Pairen vu spiny Projektiounsneuronen hunn funktionell inhibitoresch Verbindungen tëscht MSNs am Ratstriatum identifizéiert (Czubayko a Plenz, 2002; Tunstall et al. 2002; Koos et al. 2004; Gustafson et al. 2006). Et gouf och gemellt datt d'Synapsen, déi duerch widderhuelend Collateral Axonen vun MSNs am Striatum geformt ginn, net zoufälleg sinn, D2R-MSNs maachen synaptesch Verbindunge mat aneren D2R-MSNs a mat D1R-MSNs, wärend D1R-MSNs bal exklusiv synaptesch Verbindunge mat aneren bilden D1R-MSNs (Taverna et al., 2008). Och wann d'GABAergesch Interconnectioun duerch lokal widderhuelend axonal Collateralen tëscht accumbal MSNs och gemellt goufen (Taverna et al., 2004), ass et nach ëmmer net kloer ob D2R-MSNs zoufälleg lokal Mikrokreesser bilden oder si zu Mikrokreesser an NA mat preferentielle Verbindung bäidroe wéi se am Striatum maachen. Eis Donnéeën suggeréieren datt D2R-MSNs am NAc ausdréckend ChR2 synaptesch Verbindunge mat Nopesch MSNs maachen, déi D1R ausdrécken, an datt D2R-MSNs dann en inhibitoresche Kontakt op D1-MSNs ausüben fir d'D1R-mediéiert Promotioun vu Suchtverhalen ze moduléieren.

Als Conclusioun hu mir gewisen datt optogenetesch Aktivatioun vun NAc D2R-MSNs d'Entzug-induzéiert Plastizitéit verännert, déi während der Kokain Sucht geschitt. Gitt datt d'Aktivitéit vun der D2R-ofhängeger Signaliséierung während der Réckzuchsperiod e Schlësselregulator vum Ausdrock vun der Kokain-induzéierter Verhalenssensibiliséierung schéngt, proposéiere mir datt D2R-MSNs e wichtege Vermëttler vu laang dauerhafter Adaptatioun fir Drogen-Sich a Réckwee sinn. D'Identifikatioun vu molekulare Substrate vun der D2R-ofhängeger Signaliséierung, zesumme mat der Identifikatioun vum spezifesche Circuit vun NAc D2R-MSNs, déi ënner repetitive Drogenbelaaschtung beschäftegt sinn, sollten nei Ziler fir therapeutesch Interventioun am Medikament zréckzéien.

Konflikt vun der Interessenerklärung

D'Auteuren deklaréieren datt d'Fuerschung an der Verôffentlechung vu kommerziellen oder finanzielle Bezéiungen, déi als potenzielle Konflikt vun Interesse entwéckelt ginn kënne gemaach ginn.

Arbeschterlidder

Dës Aarbecht gouf ënnerstëtzt vun der National Research Foundation of Korea (NRF) Subventioun finanzéiert vum Ministère fir Wëssenschaft, ICT an Future Planning vum Brain Research Program (zu Ja-Hyun Baik; Grant No. 2013M3C7A1056101) a vum Bio a Medical Technology Entwécklungsprogramm (zu Ja-Hyun Baik; Grant Nr. 2013M3A9D5072550) an dem World Class Institute (WCI) Programm vun der National Research Foundation of Korea (NRF) finanzéiert vum Ministère fir Wëssenschaften, ICT an Zukunftsplanung (zu George J. Augustine) ; WCI 2009-003), wéi och vun engem Korea University Grant (zu Ja-Hyun Baik) an engem CRP Subventioun vun der National Research Foundation vu Singapur (zu George J. Augustine).

Referenze

  1. Baik JH (2013). Dopamin Signaliséierung a belount-verbonne Verhalen. Front. Neural Circuits 7:152 10.3389/fncir.2013.00152 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  2. Baik JH, Picetti R, Saiardi A, Thiriet G, Dierich A, Depaulis A, et al. (1995). Parkinson-ähnlech Lokomotoresch Behënnerung bei Mais déi Dopamin D2 Rezeptoren feelen. Natur 377, 424–428 10.1038/377424a0 [PubMed] [Kräiz Ref]
  3. Berridge KC (2007). D'Debatt iwwer d'Roll vun Dopamin bei der Belounung: de Fall fir Incentive Salience. Psychopharmacology (Berl) 191, 391–431 10.1007/s00213-006-0578-x [PubMed] [Kräiz Ref]
  4. Bock R, Shin JH, Kaplan AR, Dobi A, Markey E, Kramer PF, et al. (2013). Stäerkung vum accumbal indirekte Wee fördert Widderstandsfäegkeet géint compulsive Kokainverbrauch. Nat. Neurosci. 16, 632–638 10.1038/nn.3369 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  5. Bocklisch C, Pascoli V, Wong JC, House DR, Yvon C, de Roo M, et al. (2013). Kokain desinhibéiert Dopaminneuronen duerch Potenzéierung vun der GABA Iwwerdroung am ventrale tegmental Beräich. Science 341, 1521–1525 10.1126/science.1237059 [PubMed] [Kräiz Ref]
  6. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M, Wolf ME (2007). Zell Uewerfläch AMPA Rezeptoren am Ratten Nukleus accumbens erhéijen wärend Kokain Réckzuch awer internaliséieren no Kokain Erausfuerderung a Verbindung mat verännerter Aktivatioun vu mitogen-aktivéierten Proteinkinasen. J. Neurosci. 27, 10621–10635 10.1523/jneurosci.2163-07.2007 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  7. Boudreau AC, Wolf ME (2005). Verhale Sensibiliséierung fir Kokain ass mat verstäerkten AMPA Rezeptor Uewerfläch Ausdrock am Nukleus accumbens assoziéiert. J. Neurosci. 25, 9144–9151 10.1523/jneurosci.2252-05.2005 [PubMed] [Kräiz Ref]
  8. Chandra R, Lenz JD, Gancarz AM, Chaudhury D, Schroeder GL, Han MH, et al. (2013). Optogenetesch Hemmung vun D1R mat Nukleus accumbens Neuronen verännert Kokain-mediéiert Reguléierung vun Tiam1. Front. Mol. Neurosci. 6:13 10.3389/fnmol.2013.00013 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  9. Chang HT, Kitai ST (1985). Projektiounsneuronen vum Nukleus accumbens: eng intrazellulär Etikettéierungsstudie. Gehir Res. 347, 112–116 10.1016/0006-8993(85)90894-7 [PubMed] [Kräiz Ref]
  10. Chausmer AL, Elmer GI, Rubinstein M, Low MJ, Grandy DK, Katz JL (2002). Kokain-induzéiert Lokomotoraktivitéit a Kokain Diskriminatioun bei Dopamin D2 Rezeptor mutant Mais. Psychopharmacology (Berl) 163, 54–61 10.1007/s00213-002-1142-y [PubMed] [Kräiz Ref]
  11. Chevalier G., Deniau JM (1990). Disinhibition als Basisprozess am Ausdrock vun striatal Funktiounen. Trends Neurosci. 13, 277–280 10.1016/0166-2236(90)90109-n [PubMed] [Kräiz Ref]
  12. Czubayko U., Plenz D. (2002). Schnell synaptesch Iwwerdroung tëscht striatal spiny Projektiounsneuronen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 15764–15769 10.1073/pnas.242428599 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  13. Ferguson SM, Eskenazi D, Ishikawa M, Wanat MJ, Phillips PE, Dong Y, et al. (2011). Transient neuronal Inhibitioun weist opposéierend Rollen vun indirekten an direkten Weeër an der Sensibiliséierung. Nat. Neurosci. 14, 22–24 10.1038/nn.2703 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  14. Goto Y., Grace AA (2005). Dopaminergesch Modulatioun vum limbesche a kortikale Fuert vun Nukleus accumbens am Zielgeriicht Verhalen. Nat. Neurosci. 8, 805–812 10.1038/nn1471 [PubMed] [Kräiz Ref]
  15. Grofová I. (1975). D'Identifikatioun vu Striatal a Pallidal Neuronen, déi op d'substantia nigra projizéieren. Eng experimentell Studie duerch retrograd axonal Transport vu Meerrettich Peroxidase. Gehir Res. 91, 286-291 10.1016/0006-8993(75)90550-8 [PubMed] [Kräiz Ref]
  16. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC (2013). ΔFosB moduléiert differenziell Nucleus accumbens direkt an indirekt Pathway Funktioun. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110, 1923–1928 10.1073/pnas.1221742110 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  17. Gustafson N., Gireesh-Dharmaraj E., Czubayko U., Blackwell KT, Plenz D. (2006). Eng vergläichend Spannungs- a Stroumklemmanalyse vu Feedback a Feedforward synaptesch Iwwerdroung am striatal Mikrokrees in vitro. J. Neurophysiol. 95, 737–752 10.1152/jn.00802.2005 [PubMed] [Kräiz Ref]
  18. Hikida T., Kimura K., Wada N., Funabiki K., Nakanishi S. (2010). Distinct Rollen vun der synaptescher Iwwerdroung an direkten an indirekten striatal Weeër fir ze belounen an aversivt Verhalen. Neuron 66, 896–907 10.1016/j.neuron.2010.05.011 [PubMed] [Kräiz Ref]
  19. Kalivas PW, Duffy P. (1990). Effekt vun akuter an alldeeglecher Kokainbehandlung op extrazellulärer Dopamin am Nukleus accumbens. Synapse 5, 48–58 10.1002/syn.890050104 [PubMed] [Kräiz Ref]
  20. Kalivas PW, Pierce RC, Cornish J, Sorg BA (1998). Eng Roll fir Sensibiliséierung am Verlaangen a Réckwee bei Kokain Sucht. J. Psychopharmacol. 12, 49–53 10.1177/026988119801200107 [PubMed] [Kräiz Ref]
  21. Koos T., Tepper JM, Wilson CJ (2004). Verglach vun IPSCs, déi duerch spiny a séier spiking Neuronen am Neostriatum erwächt ginn. J. Neurosci. 24, 7916–7922 10.1523/jneurosci.2163-04.2004 [PubMed] [Kräiz Ref]
  22. Kourrich S, Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ (2007). Kokain Erfahrung kontrolléiert bidirektional synaptesch Plastizitéit am Nukleus accumbens. J. Neurosci. 27, 7921–7928 10.1523/jneurosci.1859-07.2007 [PubMed] [Kräiz Ref]
  23. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PR, Kay K, Thwin MT, Deisseroth K, et al. (2010). Reguléierung vum Parkinsonesche Motorverhalen duerch optogenetesch Kontroll vu Basal Ganglia Circuit. Nature 466, 622–626 10.1038/nature09159 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  24. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012). Distinct Rollen fir direkt an indirekt Wee Striatal Neuronen an der Verstäerkung. Nat. Neurosci. 15, 816–818 10.1038/nn.3100 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  25. Kreitzer AC, Malenka RC (2008). Striatal Plastizitéit a Basal Ganglia Circuit Funktioun. Nature 60, 543–554 10.1016/j.neuron.2008.11.005 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  26. Le Moine C., Bloch B. (1996). Ausdrock vum D3 Dopamin Rezeptor an peptidergesche Neuronen vum Nukleus accumbens: Verglach mat den D1 an D2 Dopamin Rezeptoren. Neuroscience 73, 131–143 10.1016/0306-4522(96)00029-2 [PubMed] [Kräiz Ref]
  27. Lobo MK, Covington HE, 3rd, Chaudhury D., Friedman AK, Sun H., Damez-Werno D., et al. (2010). Zelltyp-spezifesch Verloscht vu BDNF-Signaliséierung mimics optogenetesch Kontroll vu Kokainbelounung. Science 330, 385–390 10.1126/science.1188472 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  28. Lobo MK, Nestler EJ (2011). De striatal Balancéierungsakt an der Drogenofhängeger: ënnerschiddlech Rollen vun direkten an indirekten Wee mëttlere Spiny Neuronen. Front. Neuroanat. 5:41 10.3389/fnana.2011.00041 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  29. Lüscher C., Malenka RC (2011). Drogen-evokéiert synaptesch Plastizitéit an der Sucht: vu molekulare Verännerungen bis Circuit Remodeling. Neuron 69, 650–663 10.1016/j.neuron.2011.01.017 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  30. O'Donnell P., Grace AA (1993). Physiologesch a morphologesch Eegeschafte vun accumbens Kär a Shell Neuronen opgeholl in vitro. Synapse 13, 135–160 10.1002/syn.890130206 [PubMed] [Kräiz Ref]
  31. Pascoli V., Turiault M., Luscher C. (2011). Reversal vu Kokain-evokéiert synaptescher Potenzéierung setzt Drogen-induzéiert adaptivt Verhalen zréck. Nature 481, 71–75 10.1038/nature10709 [PubMed] [Kräiz Ref]
  32. Preston RJ, Bishop GA, Kitai ST (1980). Medium spiny Neuron Projektioun vum Ratten Neostriatum: eng intrazellulär Meerrettich Peroxidase Studie. Gehir Res. 183, 253–263 10.1016/0006-8993(80)90462-x [PubMed] [Kräiz Ref]
  33. Robinson TE, Berridge KC (1993). D'neural Basis vun Drogenverlaangen: eng Incentive-Sensibiliséierungstheorie vun der Sucht. Gehir Res. Gehir Res. Rev. 18, 247–291 10.1016/0165-0173(93)90013-p [PubMed] [Kräiz Ref]
  34. Robinson TE, Berridge KC (2003). Sucht. Annu. Rev Psychol. 54, 25–53 10.1146/annurev.psych.54.101601.145237 [PubMed] [Kräiz Ref]
  35. Schmidt HD, Pierce RC (2010). Kokain-induzéiert Neuroadaptatiounen an der Glutamatiwwerdroung: potenziell therapeutesch Ziler fir Verlaangen a Sucht. Ann. NY Acad. Sci. 1187, 35–75 10.1111/j.1749-6632.2009.05144.x [PubMed] [Kräiz Ref]
  36. Sesack SR, Grace AA (2010). Cortico-Basal Ganglia Belounungsnetz: Microcircuitry. Neuropsychopharmacology 35, 27–47 10.1038/npp.2009.93 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  37. Sim HR, Choi TY, Lee HJ, Kang EY, Yoon S, Han PL, et al. (2013). Roll vun Dopamin D2 Rezeptoren an der Plastizitéit vu Stress-induzéierter Suchtverhalen. Nat. Commun. 4:1579 10.1038/ncomms2598 [PubMed] [Kräiz Ref]
  38. Smith RJ, Lobo MK, Spencer S, Kalivas PW (2013). Kokain-induzéiert Adaptatiounen an D1 an D2 accumbens Projektiounsneuronen (eng Dichotomie net onbedéngt synonym mat direkten an indirekten Weeër). Curr. Opin. Neurobiol. 23, 546–552 10.1016/j.conb.2013.01.026 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  39. Steketee JD, Kalivas PW (2011). Drogenwënsch: Verhalens Sensibiliséierung a Réckfall op Drogen-Sich Verhalen. Pharmacol. Rev. 63, 348–365 10.1124/pr.109.001933 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  40. Taverna S., Ilijic E., Surmeier DJ (2008). Widderhuelend Kollateralverbindunge vu striatal mëttlere Spiny Neuronen ginn a Modeller vun der Parkinson Krankheet gestéiert. J. Neurosci. 28, 5504–5512 10.1523/JNEUROSCI.5493-07.2008 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  41. Taverna S, van Dongen YC, Groenewegen HJ, Pennartz CM (2004). Direkt physiologesch Beweiser fir synaptesch Konnektivitéit tëscht mëttelgrousse spiny Neuronen a Ratten Nucleus accumbens in situ. J. Neurophysiol. 91, 1111–1121 10.1152/jn.00892.2003 [PubMed] [Kräiz Ref]
  42. Thomas MJ, Kalivas PW, Shaham Y. (2008). Neuroplastizitéit am mesolimbesche Dopaminsystem a Kokain Sucht. Br. J. Pharmacol. 154, 327–342 10.1038/bjp.2008.77 [PMC gratis Artikel] [PubMed] [Kräiz Ref]
  43. Tunstall MJ, Oorschot DE, Kean A, Wickens JR (2002). Inhibitoresch Interaktiounen tëscht spiny Projektioun Neuronen am Rat Striatum. J. Neurophysiol. 88, 1263–1269 10.1152/jn.00886.2001 [PubMed] [Kräiz Ref]
  44. Vanderschuren LJ, Kalivas PW (2000). Ännerunge fir dopaminergesch a glutamatergesch Iwwerdroung an der Induktioun an Ausdrock vun der Verhalenssensibiliséierung: eng kritesch Iwwerpréiwung vu preklineschen Studien. Psychopharmacology (Berl) 151, 99–120 10.1007/s002130000493 [PubMed] [Kräiz Ref]
  45. Wilson CJ, Groves PM (1980). Fein Struktur a synaptesch Verbindung vum gemeinsame Spiny Neuron vum Rattenneostriatum: eng Studie déi intrazellulär Injektioun vu Meerrettich Peroxidase benotzt. J. Comp. Neurol. 194, 599–615 10.1002/cne.901940308 [PubMed] [Kräiz Ref]
  • Wise RA (2004). Dopamin, Léieren a Motivatioun. Nat. Rev Neurosci. 5, 483–494 10.1038/nrn1406 [PubMed] [Kräiz Ref]