DeltaFosB Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനത്തെ പരോക്ഷമായി നിയന്ത്രിക്കുന്നു (2010)

ബ്രെയിൻ റെസ്. 2010 മെയ് 6; 1329: 10 - 20.

ഓൺലൈനിൽ പ്രസിദ്ധീകരിച്ചു 2010 മാർച്ച് 11. doi:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

ജോൺ എഫ്. എൻ‌റൈറ്റ്, III,1 മേഗൻ വാൾഡ്,1 മാഡിസൺ പാഡോക്ക്,1 എലിസബത്ത് ഹോഫ്മാൻ,1 റാഫേൽ അരേ,2 സ്കോട്ട് എഡ്വേർഡ്സ്,2 സേഡ് സ്പെൻസർ,2 എറിക് ജെ. നെസ്റ്റ്ലർ,3 ഒപ്പം കോളിൻ എ. മക്ലംഗ്2, *

സ്രഷ്ടാവ് വിവരം ► പകർപ്പവകാശ, ലൈസൻസ് വിവരം ►

ഈ ലേഖനത്തിന്റെ അവസാന എഡിറ്റുചെയ്‌ത പതിപ്പ് ഇവിടെ ലഭ്യമാണ് ബ്രെയിൻ റിസ

PMC ലെ മറ്റു ലേഖനങ്ങൾ കാണുക ഉദ്ധരിക്കുക പ്രസിദ്ധീകരിച്ച ലേഖനം.

പോവുക:

വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന

ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളിലേക്ക് വിട്ടുമാറാത്ത എക്സ്പോഷർ മൂലമുണ്ടാകുന്ന ചില പ്രധാന ബയോകെമിക്കൽ, സ്ട്രക്ചറൽ, ബിഹേവിയറൽ മാറ്റങ്ങൾ വളരെ സ്ഥിരതയുള്ള ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ os ഫോസ്ബി മധ്യസ്ഥമാക്കിയതായി തോന്നുന്നു. മുമ്പത്തെ സൃഷ്ടി ക്സനുമ്ക്സ ആഴ്ച Δഫൊസ്ബ് എലികളുടെ ൽ ഒവെരെക്സപ്രെഷിഒന് ഭൂരിഭാഗം പിന്നീട് Δഫൊസ്ബ് ആവിഷ്കാര ക്സനുമ്ക്സ ആഴ്ച താഴെ ദൊവ്ംരെഗുലതെദ് ചെയ്യുന്നു സ്ത്രിഅതുമ് നിരവധി ജീനുകൾ പദപ്രയോഗം വർദ്ധനവ്, നയിക്കുന്നു തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. CREB എന്ന ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകത്തെ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്ന എലികളിലും ഈ ജീനുകളിൽ വലിയൊരു ഭാഗം നിയന്ത്രിക്കപ്പെട്ടു എന്നതാണ് ശ്രദ്ധേയം. എന്നിരുന്നാലും, ഹ്രസ്വകാല ΔFosB ഈ ജീനുകളെ CREB വഴി നിയന്ത്രിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് ഈ പഠനത്തിൽ നിന്ന് വ്യക്തമല്ല. 2 ആഴ്ചയിലെ osFosB അമിതപ്രയോഗം സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ CREB എക്സ്പ്രഷൻ വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഇവിടെ കാണാം, ഇത് 8 ആഴ്ചകൾക്കുള്ളിൽ അലിഞ്ഞുപോകുന്നു. ഈ മസ്തിഷ്ക മേഖലയിലെ ചില ടാർഗെറ്റ് ജീൻ പ്രമോട്ടർമാരുമായി വർദ്ധിച്ച CREB ബൈൻഡിംഗുമായി ആദ്യകാല ഇൻഡക്ഷൻ ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. അതിശയകരമെന്നു പറയട്ടെ, മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടുകളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി CREB ടാർഗെറ്റുചെയ്‌തതായി സംശയിക്കപ്പെടുന്ന ഒരു ജീൻ, cholecystokinin (Cck), സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ CREB നിയന്ത്രിച്ചിട്ടില്ല. ന്റെ നിയന്ത്രണത്തെക്കുറിച്ച് കൂടുതൽ അന്വേഷിക്കാൻ Cck osFosB അമിതപ്രയോഗത്തെ തുടർന്ന്, ഹ്രസ്വകാല osFosB അമിതപ്രയോഗം രണ്ടും വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ സ്ഥിരീകരിച്ചു Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനവും ജീൻ എക്സ്പ്രഷനും. ലെ പുട്ടേറ്റീവ് CREB ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റിൽ (CRE) ഇത് ബൈൻഡിംഗ് പ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ. എന്നിരുന്നാലും, സാധാരണ ബേസൽ എക്സ്പ്രഷന് CRE സൈറ്റ് ആവശ്യമാണ് Cck, ΔFosB ഇൻഡക്ഷന് ഇത് ആവശ്യമില്ല Cck. ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, ഹ്രസ്വകാല os ഫോസ് ഇൻഡക്ഷൻ ചില ജീൻ പ്രമോട്ടർമാരിൽ CREB പ്രകടനവും പ്രവർത്തനവും വർദ്ധിപ്പിക്കുമെങ്കിലും, ഈ സാഹചര്യങ്ങളിൽ ജീനുകളെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഒരേയൊരു സംവിധാനം ഇതായിരിക്കില്ല.

അടയാളവാക്കുകൾ: ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസ്, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ, ആസക്തി

പോവുക:

ആമുഖം

ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളുടെ വിട്ടുമാറാത്ത എക്സ്പോഷർ പല മസ്തിഷ്ക പ്രദേശങ്ങളിലും ജൈവ രാസ, ഘടനാപരമായ മാറ്റങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുന്നു. ഈ മാറ്റങ്ങളിൽ മെസോലിംബിക് സിസ്റ്റത്തിലെ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രൊഫൈലുകളിൽ മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തുമെന്ന് കരുതപ്പെടുന്നു. മിഡ്‌ബ്രെയിനിലെ വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയ (വിടിഎ) മുതൽ ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലെ (എൻ‌എസി) (വെൻട്രൽ സ്ട്രിയാറ്റം) ഇടത്തരം സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളിലേക്കും മറ്റ് നിരവധി മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിലേക്കും പ്രൊജക്റ്റ് ചെയ്യുന്ന ഡോപാമെർജിക് ന്യൂറോണുകൾ ഈ സിസ്റ്റത്തിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. രണ്ട് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ, സി‌എ‌എം‌പി പ്രതികരണ മൂലക ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ (സി‌ആർ‌ഇബി), ഫോസ്ബി (ഒരു ഫോസ് ഫാമിലി പ്രോട്ടീൻ) എന്നിവ ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളുടെ വിട്ടുമാറാത്ത എക്സ്പോഷറിനൊപ്പം കാണപ്പെടുന്ന ബയോകെമിക്കൽ, സ്ട്രക്ചറൽ, ബിഹേവിയറൽ മാറ്റങ്ങൾ എന്നിവയ്ക്ക് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കാൻ നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട് ( പുനരവലോകനം ചെയ്തത് നെസ്റ്റ്ലർ, 2005).

CREB / ATF കുടുംബത്തിലെ അംഗമായ സർവ്വവ്യാപിയായി പ്രകടിപ്പിച്ച ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകമാണ് CREB. നിരവധി ജീനുകളുടെ പ്രൊമോട്ടർ‌മാരിൽ‌ കാണപ്പെടുന്ന ഒരു CRE സീക്വൻസിന്റെ (സമവായം: TGACGTCA) വ്യതിയാനങ്ങളുമായി CREB ഹോമോഡിമറുകൾ‌ ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. സി‌ആർ‌ഇബിയുടെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ (പ്രധാനമായും സെറൈൻ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സിൽ, മറ്റ് സൈറ്റുകൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ടെങ്കിലും) ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ താഴ്‌വര ഉൾപ്പെടെ നിരവധി സിഗ്നലിംഗ് കാസ്കേഡുകൾ വഴി ഉത്തേജിപ്പിക്കാം (കോൾ മറ്റുള്ളവരും., 1995). സെറീൻ 133 ലെ ഫോസ്ഫോറിലേഷനുശേഷം, CREB കോ-ആക്റ്റിവേറ്റർ CREB ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ (CBP) അല്ലെങ്കിൽ അനുബന്ധ പ്രോട്ടീനുകളെ റിക്രൂട്ട് ചെയ്യുന്നു. ജോഹന്നസെൻ മറ്റുള്ളവരും, 2004). ദുരുപയോഗത്തിന്റെ ഓപ്പിയറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റ് മരുന്നുകളിലേക്കുള്ള വിട്ടുമാറാത്ത എക്സ്പോഷർ ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലെ CREB പ്രവർത്തനത്തിൽ ക്ഷണികമായ വർദ്ധനവിന് കാരണമാകുന്നു (ബരോട്ട് et al., 2002; ഷാ-ലച്ച്മാൻ et al., 2002, 2003), ഈ മരുന്നുകളുടെ പ്രതിഫലദായകമായ സ്വഭാവസവിശേഷതകൾ കുറയ്ക്കുന്നതിനും മയക്കുമരുന്ന് പിൻവലിക്കലിന്റെ നെഗറ്റീവ് വൈകാരികാവസ്ഥയ്ക്ക് കാരണമാകുന്നതിനും ഒരു അഡാപ്റ്റേഷൻ ചിന്ത (നെസ്റ്റ്ലർ, 2005).

Lദുരുപയോഗത്തിന്റെ മയക്കുമരുന്നിനോടുള്ള ഒടുവിലത്തെ പൊരുത്തപ്പെടുത്തലുകൾ ഫോസ്ബിയുടെ വളരെ സ്ഥിരതയുള്ള സ്പ്ലൈസ് വേരിയന്റായ os ഫോസ്ബി മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുമെന്ന് കരുതുന്നു. (നെസ്റ്റ്ലർ et al., 1999; മക്ക്ലുങ്ങ് et al., 2004; നെസ്റ്റ്ലർ, 2008). ഫോസ് കുടുംബാംഗങ്ങൾ ജൂൺ കുടുംബത്തിലെ അംഗങ്ങളുമായി ഡൈമൈസ് ചെയ്ത് ഒരു ആക്റ്റിവേറ്റർ പ്രോട്ടീൻ 1 (AP-1) സമുച്ചയം രൂപപ്പെടുത്തുന്നു. ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിന് AP-1 ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ കോംപ്ലക്സുകൾ AP-1 പ്രതികരണ ഘടകത്തിന്റെ (സമവായം: TGACTCA) വ്യത്യാസങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (അവലോകനം ചെയ്തത് ചിനെനോവും കെർപോളയും, 2001). ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളുടെ തീവ്രമായ എക്സ്പോഷർ ഫോസ്-കുടുംബാംഗങ്ങളുടെ ഹ്രസ്വകാല പ്രേരണയിലേക്ക് (മണിക്കൂറിൽ) നയിക്കുന്നു (അതോടൊപ്പം വർദ്ധിച്ച CREB പ്രവർത്തനവും), ആവർത്തിച്ചുള്ള മയക്കുമരുന്ന് എക്സ്പോഷർ വളരെ സ്ഥിരതയുള്ള osFosB (മറ്റുള്ളവരും പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു., XX; പെറൊറ്റി et al., 2008), ഇതിന്റെ പദപ്രയോഗം ആഴ്ചകളോളം നിലനിൽക്കുന്നു.

മുതിർന്നവർക്കുള്ള സ്‌ട്രാറ്റാറ്റത്തിലെ os ഫോസ്ബി അല്ലെങ്കിൽ സി‌ആർ‌ബി എന്നിവ ബൈ-ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികൾ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്നു എഈ ട്രാൻസ്ജെനിക് മൃഗങ്ങളിലെ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ മാറ്റങ്ങളുടെ വിശകലനം ഹ്രസ്വകാല (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ആഴ്ചകൾ) os ഫോസ്ബിയുടെ അമിതപ്രയോഗം, മയക്കുമരുന്ന് റിവാർഡ് കുറയുന്നതുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മാറ്റങ്ങൾ എന്നിവ നിയന്ത്രിച്ച നിരവധി ജീനുകളെ തിരിച്ചറിഞ്ഞു. ഹ്രസ്വകാല ΔFosB യുമായുള്ള ജീൻ എക്സ്പ്രഷനിലും പെരുമാറ്റ പ്രതികരണത്തിലും വന്ന മാറ്റങ്ങൾ 2 അല്ലെങ്കിൽ 2 ആഴ്ചകളിൽ CREB- നെ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്ന മൃഗങ്ങളിൽ കാണുന്നതിനോട് വളരെ സാമ്യമുള്ളതാണ് (മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003). വിപരീതമായി, osFosB- യുടെ ദീർഘകാല അമിതപ്രയോഗം (8 ആഴ്ചകൾ) സമാന ജീനുകളിൽ പലതിന്റെയും ആവിഷ്കാരം കുറയുകയും മയക്കുമരുന്ന് പ്രതിഫലം വർദ്ധിക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു (കേൽസ് മറ്റ് പേരുകൾ, 1999; മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003).

ഈ പഠനങ്ങളിൽ തിരിച്ചറിഞ്ഞ ഒരു ജീൻ ആണ് cholecystokinin (Cck), സ്ട്രിയാറ്റം ഉൾപ്പെടെ നിരവധി മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിൽ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്ന ന്യൂറോപെപ്റ്റൈഡ് (ഹോക്ഫെൽറ്റ് മറ്റുള്ളവരും, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്). സിപികെക്ക് ഡോപാമിനേർജിക് ട്രാൻസ്മിഷൻ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യാൻ കഴിയും (Vaccarino, 1992), മയക്കുമരുന്ന് പ്രതിഫലത്തിലും ശക്തിപ്പെടുത്തലിലും ഏർപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (ജോസെലിൻ മറ്റുള്ളവരും, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്; ജോസെലിൻ മറ്റുള്ളവരും., 1997; ഹാമിൽട്ടൺ, മറ്റുള്ളവർ, 2000; ബെയ്ൻ‌ഫെൽഡ് മറ്റുള്ളവരും, 2002; റോട്ട്‌സിംഗർ മറ്റുള്ളവരും, 2002), കൂടാതെ ക്രോണിക് കൊക്കെയ്ൻ (ഡിംഗ് ആൻഡ് മൊച്ചെട്ടി, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്). കൂടാതെ Cck CREB, AP-1 സമുച്ചയങ്ങളോട് പ്രൊമോട്ടർ പ്രതികരിക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (ഹോണും ഡിക്സണും, 1990; ഡീവാൽ, മറ്റുള്ളവർ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്; ഹാൻസെൻ, ചൊവ്വ). പല ജീനുകളും (ഉൾപ്പെടെ) Cck) CREB, ഹ്രസ്വകാല ΔFosB എക്സ്പ്രഷൻ എന്നിവ CREB ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളെ അറിയുകയോ സംശയിക്കുകയോ ചെയ്തതിനുശേഷം വർദ്ധിച്ച ആവിഷ്കാരം കാണിക്കുന്നു (മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003), ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്സ്പ്രഷൻ ഈ ജീനുകളെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിലേക്ക് നയിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ആഗ്രഹിച്ചു (ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ച് Cck) CREB നിയന്ത്രണത്തിലൂടെ അല്ലെങ്കിൽ ജീൻ നിയന്ത്രണത്തിന്റെ കൂടുതൽ സങ്കീർണ്ണമായ സംവിധാനങ്ങളിലൂടെ.

പോവുക:

ഫലം

Os ഫോസ് അമിതപ്രയോഗം CREB ലെവലുകൾ ക്ഷണികമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു

ΔFosB അമിതപ്രയോഗം എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ CREB പ്രോട്ടീൻ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുമോ എന്ന് അന്വേഷിക്കാൻ ഞങ്ങൾ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് ഉപയോഗിച്ചു. ഈ പഠനത്തിനായി, എൻ‌എസ്‌ഇ-ടി‌ടി‌എ ട്രാൻ‌സ്‌ജെനും ടെറ്റോപ്പ്- os ഫോസ്ബി ട്രാൻ‌സ്‌ജെനും വഹിക്കുന്ന ബൈ-ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികളെ (ലൈൻ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്എ) ഞങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചു. ഡോക്സിസൈക്ലിന്റെ അഭാവത്തിൽ, ഈ എലികൾ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡൈനോർഫിൻ പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ osFosB എക്സ്പ്രഷന്റെ ശക്തമായ വർദ്ധനവ് കാണിക്കുന്നു (കേൽസ് മറ്റ് പേരുകൾ, 1999). Ose ഫോസ്ബി അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്ന ഈ രീതി വിപുലമായി രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ പ്രദേശ-നിർദ്ദിഷ്ട അമിതപ്രയോഗത്തിന് ഇത് അനുവദിക്കുന്നു, ഇത് വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ബാധിച്ച മൃഗങ്ങളിൽ കാണുന്ന os ഫോസ്ബി ഇൻഡക്ഷന് സമാന്തരമാണ് (മറ്റുള്ളവരും പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു., XX; കേൽസ് മറ്റ് പേരുകൾ, 1999). നാം (Δഫൊസ്ബ്, ച്രെബ് പ്രോട്ടീൻ അളവ് ഒവെരെക്സപ്രെഷിന്ഗ് ക്സനുമ്ക്സഅ എലികളുടെ കാര്യമായി ആവിഷ്കാര ക്സനുമ്ക്സ ആഴ്ച ശേഷം ഉപ്രെഗുലതെദ് ചെയ്തു ആവിഷ്കാര ക്സനുമ്ക്സ ആഴ്ച ശേഷം ഈ നിലകൾ രേഖയെ മടങ്ങി കണ്ടെത്തിചിത്രം 1A, n = 8). ഹ്രസ്വകാല ΔFosB അമിതപ്രയോഗം ഉപയോഗിച്ച് CREB ലെവലിൽ വരുത്തിയ മാറ്റങ്ങൾ മറ്റൊരു സിസ്റ്റത്തിൽ ആവർത്തിക്കാനാകുമോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ, പിസി 12 സെല്ലുകളിൽ osFosB അമിതമായി അമർത്തി, നിയന്ത്രണങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ CREB ലെവലുകൾ ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചുവെന്ന് കണ്ടെത്തി (p <0.05)ചിത്രം 1B, n = 4). ഹ്രസ്വകാല os ഫോസ് എക്സ്പ്രഷൻ CREB പ്രോട്ടീൻ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നു.

ചിത്രം 1

ചിത്രം 1

REFosB അമിതപ്രയോഗത്തിലൂടെ CREB ലെവലുകൾ വർദ്ധിക്കുന്നു. ൽ നിന്നുള്ള ലൈസേറ്റുകളുടെ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് വിശകലനം (എ) 11A അല്ലെങ്കിൽ 2 ആഴ്‌ചകൾക്കുള്ള 8A എലികളിൽ നിന്നുള്ള മൗസ് സ്‌ട്രിയാറ്റ അല്ലെങ്കിൽ (B) PC12 സെല്ലുകൾ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ്സിംഗ് osFosB. ഡാറ്റ A താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഓഫ് ഡോക്സിൽ ശതമാനം മാറ്റം കാണിക്കുന്നു പങ്ക് € |

ഹ്രസ്വകാല ΔFosB അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് സ്‌ട്രൈറ്റത്തിലെ നിർദ്ദിഷ്ട ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ പ്രൊമോട്ടർമാരുമായി osFosB, CREB എന്നിവ ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

ടാർഗെറ്റ് ചെയ്ത ജീൻ പ്രൊമോട്ടർമാരിൽ osFosB അല്ലെങ്കിൽ CREB ബൈൻഡിംഗ് സംഭവിച്ചിട്ടുണ്ടോ എന്നും ഹ്രസ്വകാല osFosB അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് ഈ ബൈൻഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിച്ചിട്ടുണ്ടോ എന്നും നിർണ്ണയിക്കാൻ ഞങ്ങൾ സ്ട്രാറ്റിയൽ ടിഷ്യുവിന്റെ ChIP (ക്രോമാറ്റിൻ ഇമ്മ്യൂണോപ്രസിപ്പിറ്റേഷൻ) പരിശോധനകൾ ഉപയോഗിച്ചു. ബൈൻഡിംഗ് ഞങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തു ബി.ഡി.എൻ.എഫ് ഒപ്പം Cck പ്രമോട്ടർ‌മാർ‌, ഹ്രസ്വകാല osFosB അമിതപ്രയോഗം, CREB അമിതപ്രയോഗം അല്ലെങ്കിൽ വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സ എന്നിവയെത്തുടർന്ന് രണ്ട് ജീനുകളും വളരെ നിയന്ത്രിതമാണ്.മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003). എന്നതിലെ ബൈൻഡിംഗും ഞങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തു CDK5 പ്രൊമോട്ടർ, കാരണം ഇത് osFosB- ന്റെ അറിയപ്പെടുന്ന നേരിട്ടുള്ള ടാർഗെറ്റാണ് (ചെൻ et al., 2000; ബിബ്.ബി.ഏറ്റ്, 9,; കുമാർ et al., 2005). അവസാനമായി, ഞങ്ങൾ ബൈൻഡിംഗ് അളന്നു പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രമോട്ടർ‌, മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ‌ വ്യത്യസ്‌ത സാഹചര്യങ്ങളിൽ‌ osFosB, CREB എന്നിവയുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാമെന്ന് കണ്ടെത്തിയതിനാൽ‌ (ആൻഡേഴ്സൺ മറ്റുള്ളവരും, 2001; സക്കറിയൗ, മറ്റ് എട്ട്., 2006).

CREB അല്ലെങ്കിൽ osFosB തിരിച്ചറിയുന്ന ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് 11A എലികളിൽ നിന്ന് അമിതമായി എക്സ്പ്രസ്സിംഗ് ΔFosB- ൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രിയാറ്റയിൽ ചിപ്പ് വിശകലനം നടത്തി. സാധാരണ സാഹചര്യങ്ങളിൽ, osFosB ഇതുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി CDK5 ഒപ്പം പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രമോട്ടർ‌മാർ‌, കണ്ടെത്താനാകുന്ന ബൈൻ‌ഡിംഗ് ഇല്ലെങ്കിലും ബി.ഡി.എൻ.എഫ് or Cck പ്രൊമോട്ടർമാർ (പട്ടിക 1). കൂടാതെ, osFosB അമിതപ്രയോഗം atFosB- ന്റെ ബൈൻഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിച്ചു CDK5 പ്രൊമോട്ടർ‌, പക്ഷേ പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രൊമോട്ടർ. അടുത്തതായി ഞങ്ങൾ ഈ പ്രൊമോട്ടർമാരിൽ CREB ബൈൻഡിംഗ് അളക്കുകയും CREB എന്നതുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു CDK5, BDNF ഒപ്പം പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രമോട്ടർ‌മാർ‌, പക്ഷേ Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, സാധാരണ സ്‌ട്രിയാറ്റത്തിൽ‌, കൂടാതെ 2 ആഴ്‌ചകളിലെ osFosB അമിതപ്രയോഗം CREB ബൈൻഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു ബി.ഡി.എൻ.എഫ് ഒപ്പം പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രമോട്ടർ‌മാർ‌, പക്ഷേ CDK5 പ്രൊമോട്ടർ. ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, resultsFosB, CREB എന്നിവ ചില ജീൻ പ്രമോട്ടർമാരുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു പ്രോഡിനോർഫിൻ ഒപ്പം CDK5എന്നിരുന്നാലും, CREB ബൈൻഡിംഗ് മറ്റ് പ്രമോട്ടർമാർക്ക് മാത്രമുള്ളതാണ് ബി.ഡി.എൻ.എഫ്. കൂടാതെ, osFosB അമിതപ്രയോഗം ചില പ്രൊമോട്ടർമാരിൽ osFosB ബൈൻഡിംഗിൽ വർദ്ധനവിന് കാരണമാകുന്നു, പ്രതീക്ഷിച്ചതുപോലെ, മാത്രമല്ല നിർദ്ദിഷ്ട പ്രമോട്ടർമാരുമായി CREB ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതും, ഈ സമയത്ത് നിരീക്ഷിച്ച osFosB- മെഡിറ്റേറ്റഡ് CREB ഇൻഡക്ഷനുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.

പട്ടിക 1

പട്ടിക 1

എലികളെ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്ന various ഫോസ്ബിയിലെ വിവിധ പ്രൊമോട്ടർമാരുമായി പുട്ടേറ്റീവ് റെഗുലേറ്ററി പ്രോട്ടീനുകളെ രണ്ടാഴ്ചത്തേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുക.

ദീർഘകാലത്തെ ഫോസ് അമിതപ്രയോഗം വഴി ജീൻ എക്സ്പ്രഷനിലെ മാറ്റങ്ങൾ ക്രോമാറ്റിൻ പരിഷ്കരണങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്ന് മുമ്പത്തെ പ്രവൃത്തികൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, പ്രത്യേകിച്ചും, നിർദ്ദിഷ്ട ജീൻ പ്രമോട്ടർമാരിൽ ഹിസ്റ്റോൺ എച്ച്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്‌സിന്റെ അസറ്റിലൈസേഷൻ (കുമാർ et al., 2005). ഹ്രസ്വകാല ΔFosB അമിതപ്രയോഗത്തിൽ ജീൻ എക്സ്പ്രഷനിൽ വരുത്തിയ മാറ്റങ്ങൾക്ക് ഇത് കാരണമാകുമോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ, ഞങ്ങൾ അസറ്റിലേറ്റഡ് ഹിസ്റ്റോൺ H3 (ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണലായി സജീവമായ ക്രോമാറ്റിനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഒരു ഹിസ്റ്റോൺ പരിഷ്ക്കരണം) അല്ലെങ്കിൽ മെത്തിലൈലേറ്റഡ് ഹിസ്റ്റോൺ H3 (ലിസ്എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് നിഷ്‌ക്രിയ ക്രോമാറ്റിൻ). 9 ആഴ്ചകളായി osFosB യുടെ അമിതപ്രയോഗം പഠിച്ച ഏതെങ്കിലും ജീൻ പ്രൊമോട്ടർമാരിൽ അസറ്റിലേറ്റഡ് H2 ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിൽ മാറ്റമൊന്നും വരുത്തിയില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (പട്ടിക 1). മെത്തിലൈലേറ്റഡ് ഹിസ്റ്റോൺ H3 ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിൽ ഗണ്യമായ കുറവ് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രൊമോട്ടർ‌, പക്ഷേ അതിൽ‌ ബന്ധമില്ല Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, ഒപ്പം ബൈൻ‌ഡിംഗിൽ‌ മാറ്റമില്ല CDK5 ഒപ്പം ബി.ഡി.എൻ.എഫ് പ്രൊമോട്ടർമാർ, ഇത് ΔFosB, ഹ്രസ്വകാല, ജീൻ പദപ്രയോഗത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഒരു പൊതു സംവിധാനമല്ലെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. വർദ്ധനവിന് കാരണമായേക്കാവുന്ന ഞങ്ങളുടെ ChIP പരിശോധനകളിൽ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയില്ലെന്നതിൽ ഞങ്ങൾ ആശ്ചര്യപ്പെടുകയും താൽപ്പര്യപ്പെടുകയും ചെയ്തു Cck ΔFosB എക്സ്പ്രഷനിലെ 11A ആഴ്ചകൾക്കുശേഷം 2A എലികളിൽ mRNA എക്സ്പ്രഷൻ, ഈ സംവിധാനം കൂടുതൽ അന്വേഷിക്കാൻ തീരുമാനിച്ചു.

ഹ്രസ്വകാല osFosB വർദ്ധിക്കുന്നു Cck ഒന്നിലധികം സിസ്റ്റങ്ങളിൽ എക്സ്പ്രഷൻ

സ്ട്രിറ്റുവിൽ ട്രിയോണികൻ 11A മൗസിന്റെ ഉയർന്ന സൂക്ഷ്മ പ്രതീതി ΔFosB Cck 2 ആഴ്‌ചത്തെ അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് എക്‌സ്‌പ്രഷൻ ലെവലുകൾ വർദ്ധിക്കുകയും പിന്നീട് osFosB എക്‌സ്‌പ്രഷന്റെ ദൈർഘ്യമേറിയ ക്രമേണ കുറയുകയും ചെയ്യുന്നു (ചിത്രം 2A, n = 3). ഈ ഫലത്തെ ഞങ്ങൾ മൂല്യനിർണ്ണയം ചെയ്തു Cck 2- ഉം 8- ലും മൃഗങ്ങളുടെ പ്രത്യേക വിഭാഗത്തിൽ യഥാസമയം പിസിആർ ഉപയോഗിക്കുകയും, രണ്ട് സമയ പോയിൻറുകൾ സൂക്ഷ്മ പരിശോധനയ്ക്ക് സമാനമായിരിക്കുകയും ചെയ്യും (ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നില്ല).

ചിത്രം 2

ചിത്രം 2

ΔFosB- യുടെ ഹ്രസ്വകാല അധികാരം വർദ്ധിക്കുന്നു Cck ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ. (A) Cck 11, 1, 2, അല്ലെങ്കിൽ 4 ആഴ്ചകൾക്കുള്ള 8A എലികളിലെ ഫോസ്ബി അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ mRNA എക്സ്പ്രഷൻ. സ്ട്രൈറ്റൽ സാമ്പിളുകളിൽ മൈക്രോഅറേ വിശകലനം നടത്തി Cck ലെവലുകൾ പങ്ക് € |

നിയന്ത്രിക്കുന്നതിന് ΔFosB ന്റെ കഴിവ് കൂടുതൽ അന്വേഷിക്കാൻ Cck എക്സ്പ്രഷൻ, a ഉപയോഗിച്ച് തൽക്ഷണം കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുന്ന PC12 സെല്ലുകൾ ഞങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചു Cck- ലൂസിഫേറ്റർ റിപ്പോർട്ടർ പ്ലാസ്മിഡും ΔFosB എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മോഡും അല്ലെങ്കിൽ തുല്യമായ പിസിഡിഎൻഎയും. ΔFosB അധികൃതരുടെ രണ്ട് (n = 5-9), മൂന്ന് (n = 11- 13) ദിവസം ദിവസങ്ങൾക്കുള്ളിൽ Cck- ലൂസിഫേറ്റർ എക്സ്പ്രെഷൻ. കൂടാതെ, മൂന്ന് ദിവസത്തെ ΔFosB അമിതപ്രയോഗം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു Cckരണ്ട് ദിവസത്തെ അമിതപ്രയോഗവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ -ലൂസിഫറസ് ഇൻഡക്ഷൻ (ചിത്രം 2B). ΔFosB യുടെ അമിതപ്രയോഗം ഒരു പ്രൊമോട്ടർ‌ലെസ് ലൂസിഫറസ് കൺ‌സ്‌ട്രക്റ്റിന്റെ ആവിഷ്കാരത്തെ പ്രേരിപ്പിച്ചില്ല (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല). ചികിത്സാ സാഹചര്യങ്ങളിൽ കുറവുണ്ടായില്ല Cck- ല്യൂസിഫേറ്റസ് പ്രവർത്തനം പ്രകടമാണ്. ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്സ്പ്രഷൻ പ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി ഈ ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, കൂടാതെ ദീർഘകാല ΔFosB അമിതപ്രയോഗം അടിച്ചമർത്തുന്ന മെക്കാനിസത്തിന് ഉത്തരം നൽകുന്നില്ല Cck എക്സ്പ്രഷൻ.

Os ഫോസ്ബി അമിതപ്രയോഗം ഒരു പുട്ടേറ്റീവ് CREB ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റിൽ ബൈൻഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ

ഞങ്ങളുടെ വിശകലനങ്ങൾ അത് കണ്ടെത്തി Cck ഹ്രസ്വകാല ΔFosB എക്സ്പ്രഷനുകൾക്ക് ശേഷം എക്സ്പ്രഷൻ വർദ്ധിപ്പിക്കും, എന്നിരുന്നാലും, ഞങ്ങളുടെ ChIP Assays ക്രെബിനോ ΔFOSB Cck പ്രൊമോട്ടർ. പ്രോട്ടീൻ ബൈൻഡില് എന്തെങ്കിലും മാറ്റമുണ്ടോയെന്ന് തീരുമാനിക്കുക Cck osFosB അമിതപ്രയോഗത്തെ പിന്തുടരുന്ന പ്രമോട്ടർ‌, ഞങ്ങൾ‌ക്കുള്ളിൽ‌ നിലവിലുള്ള പു‌റ്റേറ്റീവ് സി‌ആർ‌ഇ പോലുള്ള സൈറ്റ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ഒരു അന്വേഷണം ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ ഇലക്ട്രോഫോറെറ്റിക് മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് അസ്സെയ്സ് (ഇഎം‌എസ്‌എ) ഉപയോഗിച്ചു. Cck പ്രൊമോട്ടർ. 11A മൈനുകൾ മുന്തിയ എക്സ്പ്രസ് ΔFOSB യുടെ സ്ട്രോതയിൽ നിന്ന് ആണവ പദാർത്ഥങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച്, ഞങ്ങൾ ക്രോമസോം ക്രെഡിറ്റ് സൈറ്റിന് Cck പ്രൊമോട്ടർചിത്രം 3 A, സി, n = 4). രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, 11A എലികൾ 8 ആഴ്ചകളായി osFosB അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്നു, ഇത് കുറയുന്നു Cck എക്സ്പ്രഷൻ, ഈ സൈറ്റിൽ വർദ്ധിച്ച ബൈൻഡിംഗും കാണിച്ചു (ചിത്രം 3B, സി, n = 4). ഒരു താരതമ്യമെന്ന നിലയിൽ, 2 ആഴ്ചകളായി osFosB അമിതമായി എക്‌സ്‌പ്രസ് ചെയ്യുന്ന എലികളിലെ ഒരു സമവായ CRE സൈറ്റിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു, ഒപ്പം സ്‌ട്രാറ്റിയൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റുകളിൽ ശക്തമായ CRE ബൈൻഡിംഗ് കണ്ടെത്തി, എന്നാൽ osFosB ഇൻഡക്ഷനെ തുടർന്ന് ബൈൻഡിംഗിൽ വർദ്ധനവുണ്ടായില്ല.ചിത്രം 3F, n = 4). അതിനാൽ, ഈ സമയത്ത്‌ കാണപ്പെടുന്ന മൊത്തം സി‌ആർ‌ഇബി ലെവലിൽ‌ ഒരു ഫോസ്-ഇൻ‌ഡ്യൂസ്ഡ് വർദ്ധനവുണ്ടായിട്ടും, ഈ ഫലങ്ങൾ‌ ഞങ്ങളുടെ ചിപ്പ് പരിശോധനകൾ‌ക്ക് അനുസൃതമാണ്, ഇത് ഫോസ്ബി അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് പ്രൊമോട്ടർ‌മാരിൽ വർദ്ധിച്ച സി‌ആർ‌ഇബി ബൈൻ‌ഡിംഗ് ചില ജീനുകൾ‌ക്ക് മാത്രമുള്ളതാണെന്നും ഇത് ആഗോള പ്രതിഭാസമല്ല . ക്രെഡിബിന് ബന്ധിതമാണോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ Cck ഞങ്ങളുടെ EMSA വിശകലനത്തിലെ പ്രൊമോട്ടർ‌, ഞങ്ങൾ‌ ഒരു CREB നിർ‌ദ്ദിഷ്‌ട ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ച് സൂപ്പർ‌ഷിഫ്റ്റ് പരിശോധനകൾ‌ നടത്തി. ഞങ്ങളുടെ ChIP പരിശോധനകളുമായുള്ള കരാറിൽ, CREB യുമായി ഒരു ബന്ധവും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയില്ല Cck ഇ എം എസ് എ നിശ്ചയ കാലഘട്ടത്തിൽ CRE CRE CREATE സൈറ്റ് ഉൾപ്പെടുത്തി അന്വേഷണം നടത്തുക, ക്രെബിറ്റ്,ചിത്രം 3D, E, n = 4). ഡിഎൻ‌എ ബൈൻഡിംഗ് പ്രവർത്തനം Cck ΔFosB തടയുന്നതിനുള്ള നിരവധി മുൻ‌ പഠനങ്ങളിൽ‌ കാണിച്ചിരിക്കുന്ന വ്യവസ്ഥകൾ‌ പ്രകാരം osFosB (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല) എന്ന ആന്റിബോഡിയെ പ്രൊമോട്ടർ‌ ബാധിച്ചിട്ടില്ല, എ‌പി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സൈറ്റുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് തടയുന്നു (ഹോപ്പ് എറ്റ്., എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്എ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ബി; ചെൻ et al., 1995, ഹൂറോയും മറ്റ് ആളുകളും). 11 ആഴ്ചത്തെ osFosB എക്സ്പ്രഷനെത്തുടർന്ന് 8A മൃഗങ്ങളുടെ സ്ട്രിയാറ്റയെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾ ChIP പരിശോധനകൾ നടത്തി, എന്നിട്ടും CREB അല്ലെങ്കിൽ osFosB- യുമായി ബന്ധമില്ല. Cck പ്രൊമോട്ടർ (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല). അതിനാൽ, osFosB എക്സ്പ്രഷൻ പ്രോട്ടീൻ ബൈൻഡിംഗിൽ വർദ്ധനവിന് കാരണമാകുന്നു Cck 2, 8 ആഴ്ച എക്സ്പ്രഷന് ശേഷമുള്ള പ്രൊമോട്ടർ; എന്നിരുന്നാലും, ഈ ഘടകങ്ങളുടെ ഐഡന്റിറ്റി അജ്ഞാതമായി തുടരുന്നു.

ചിത്രം 3

ചിത്രം 3

പ്രോട്ടീൻ ബൈൻഡിംഗ് Cck പ്രൊമോട്ടർ. (എ, ബി) ഉപയോഗിച്ച് ഇലക്ട്രോഫോറെറ്റിക് മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് അസ്സേ Cck മൃഗങ്ങളുടെ മൃഗങ്ങളിൽ നിന്നും സ്ട്രോറ്റൽ ടിഷ്യൂ ആയി CRE CRE-like സൈറ്റ് 2 ആഴ്ച (A) അല്ലെങ്കിൽ 8 ആഴ്ച (B) മൃഗങ്ങളുടെ vere ഫോറസ് ΔFosB. (എ) ൽ, ലേബൽ ചെയ്യാത്ത അധിക എതിരാളിയുമായുള്ള മത്സരം പങ്ക് € |

ലെ പുട്ടേറ്റീവ് CRE സൈറ്റ് Cck പ്രമോട്ടർ പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനങ്ങൾക്ക് ഉത്തരവാദിത്തമില്ല

ന്റെ ഒരു ഭാഗം ഉപയോഗിച്ച് പ്രോട്ടീൻ ബൈൻഡിംഗിൽ വർദ്ധനവ് കണ്ടെത്തിയതിനാൽ Cck പ്രോട്ടോടർ, ഏത് ഡിസ്ട്രിക്ട് ക്രേ സൈറ്റാണ് അടങ്ങുന്നത്, ΔFosB overexpression നെ പിന്തുടർന്ന്, ഈ സൈറ്റിന് ആവശ്യമായിരുന്നോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ആഗ്രഹിക്കുന്നു. Cck ΔFosB overexpression എന്നതിന് താഴെ പ്രയോഗിക്കുന്നു. ഈ സാധ്യത പരിശോധിക്കുന്നതിന്, ഞങ്ങൾ പിസിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സെല്ലുകൾ a ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്തു Cckക്രെബ് പോലെയുള്ള സൈറ്റിന്റെയോ അല്ലെങ്കിൽ ക്രെബിനുമായുള്ള എന്തെങ്കിലും ഇടപെടൽ ഇല്ലാതാക്കുന്ന സൈറ്റിലെ മ്യൂട്ടേഷൻ അടങ്ങുന്നതോ ആയ ലൂസിഫറാസ് പ്ലാസ്മിഡ്. രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, സി‌ആർ‌ഇ പോലുള്ള സൈറ്റിന്റെ മ്യൂട്ടേഷൻ ബേസൽ കുറഞ്ഞു Cck 32% പ്രമോട്ടർ പ്രവർത്തനം (ചിത്രം 4A, n = 9), എന്നാൽ അത് ബാധിച്ചില്ല Cck osFosB overexpression പ്രമോട്ടറുടെ ഇൻഡക്ഷൻ (ചിത്രം 4B, n = 11-13). എന്നിരുന്നാലും ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു Cck പ്രമോട്ടർ‌ക്ക് പൂർണ്ണ ബേസൽ‌ പ്രവർ‌ത്തനത്തിനായി കേടുകൂടാതെ CRE പോലുള്ള സൈറ്റ് ആവശ്യമാണ്, osFosB അമിതപ്രയോഗം വഴി വർദ്ധിപ്പിച്ച പ്രൊമോട്ടർ‌ പ്രവർ‌ത്തനത്തിന് CRE പോലുള്ള സീക്വൻ‌സ് ആവശ്യമില്ല.

ചിത്രം 4

ചിത്രം 4

ദി Cckസമാനമായ CRE സൈറ്റ് ആവശ്യമില്ല Cck ഇൻഡക്ഷൻ byFosB. (A) Cckകൈമാറ്റം ചെയ്തതിന് ശേഷം 2 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം -ലൂസിഫെറസ് പ്രവർത്തനം സാധാരണ അളന്നു Cck-ലൂസിഫറസ് അല്ലെങ്കിൽ CRE പോലുള്ള സൈറ്റ് പരിവർത്തനം ചെയ്ത ഒന്ന്. * പി <0.05 (B) Cck-ലൂസിഫറസ് പങ്ക് € |

cFos ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ

മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ അത് കണ്ടെത്തി cFos ഹ്രസ്വകാല os ഫോസ് എക്സ്പ്രഷനോടൊപ്പം mRNA വർദ്ധിക്കുന്നു, എന്നിരുന്നാലും, നീണ്ട ΔFosB എക്സ്പ്രഷനുശേഷം, സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ cFos നെ പ്രേരിപ്പിക്കാനുള്ള കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയുടെ കഴിവ് കുറയുന്നു (മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003; റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2008). അതിനാൽ, വർദ്ധനവിന് cFos സംഭാവന നൽകിയേക്കാം Cck ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്‌സ്‌പ്രഷനെ തുടർന്നുള്ള എക്‌സ്‌പ്രഷൻ. CFos- നായി നിർദ്ദിഷ്ട ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ ChIP പരിശോധനകൾ നടത്തി Cck ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്‌സ്‌പ്രഷനുമായും അല്ലാതെയും പ്രൊമോട്ടർ. CFos എന്നതുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, osFosB അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് ഈ ബൈൻഡിംഗ് ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചിട്ടില്ല (ചിത്രം 5, n = 5). ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് cFos ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിനാൽ Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, ഇത് പൊതുവായ നിയന്ത്രണത്തിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം Cck എക്സ്പ്രഷൻ, പക്ഷേ ഇത് നിയന്ത്രണത്തിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കില്ല Cck osFosB പ്രമോട്ടർ‌.

ചിത്രം 5

ചിത്രം 5

cFos ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ. ΔFosB അമിതമായി എക്സ്പ്രസ്സിംഗ് എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ടിഷ്യു ഉപയോഗിച്ച് ഡോക്സിലോ അല്ലെങ്കിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ആഴ്ച്ചകൾ ഡോക്സ് നീക്കം ചെയ്തതിനുശേഷമോ സി‌എഫോസിനായി ഒരു പ്രത്യേക ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ചാണ് ക്രോമാറ്റിൻ ഇമ്മ്യൂണോപ്രസിപ്പിറ്റേഷൻ പരിശോധനകൾ നടത്തിയത്. തത്സമയ പിസിആർ വിശകലനം ആയിരുന്നു പങ്ക് € |

പോവുക:

DISCUSSION

StudyFosB സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ജീൻ എക്സ്പ്രഷനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്ന മുൻ കണ്ടെത്തലുകളെ ഈ പഠനം സ്ഥിരീകരിക്കുകയും വികസിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ ഹ്രസ്വകാല എക്സ്പ്രഷനുശേഷം ഒന്നിലധികം സംവിധാനങ്ങളിലൂടെയാണ് ഇത് ചെയ്യുന്നതെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. 2 ആഴ്‌ചത്തെ അമിതപ്രയോഗത്തിന് ശേഷം, expressionFosB ചില ജീനുകളിലെ പ്രൊമോട്ടർമാരുമായി നേരിട്ട് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി ഞങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, ഇത് ആവിഷ്കാരത്തിലെ മാറ്റങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കുന്നു (അതായത് CDK5). കൂടാതെ, ഇത് CREB പ്രോട്ടീൻ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കും, ഇത് സംസ്ക്കരിച്ച സെല്ലുകളിലും സ്ട്രിയാറ്റത്തിലും നിരീക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് മറ്റ് ജീൻ പ്രൊമോട്ടർമാരിൽ (അതായത് ഡൈനാർഫിൻ ഒപ്പം ബി.ഡി.എൻ.എഫ്). മുമ്പത്തെ ഒരു പഠനത്തിൽ, സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ΔFosB യുടെ ഹ്രസ്വകാല അമിതപ്രയോഗം CREB അമിതമായി സമ്മർദ്ദം ചെലുത്തുമ്പോൾ കണ്ടെത്തുന്ന അതേ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ മാറ്റങ്ങളിലേയ്ക്ക് നയിക്കുന്നുവെന്നും കൊക്കെയ്ൻ മുൻഗണനയുടെ അളവുകളിൽ സമാനമായ പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കുന്നുവെന്നും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി.മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003). അതിനാൽ, osFosB എന്നത് CREB യുടെ ഒരു പ്രേരണയിലേക്കും ചില ജീൻ പ്രൊമോട്ടർ‌മാരുമായി CREB ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിലേക്കും നയിക്കുന്നുവെന്ന ഇപ്പോഴത്തെ കണ്ടെത്തൽ, ഈ രണ്ട് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളാൽ ഇത്രയധികം ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ മാറ്റങ്ങൾ പങ്കിട്ടതിന്റെ കാരണം വിശദീകരിക്കാൻ സഹായിക്കുന്നു.

ദുരുപയോഗത്തിന്റെ മരുന്നുകൾ സെറീൻ 133- ഫോസ്ഫോറിലേറ്റഡ് CREB ലെവലിൽ മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തുന്നുവെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുള്ളതിനാൽ CRFOSB CFosB ന്റെ ഇൻഡക്ഷൻ രസകരമാണ്.മാറ്റ്സൺ മറ്റുള്ളവരും., 30) കൂടാതെ CRE- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ വർദ്ധിപ്പിക്കുക (ബരോട്ട് et al., 2002; ഷാ-ലച്ച്മാൻ et al., 2002, 2003), CREB യുടെ മൊത്തത്തിലുള്ള ലെവലിൽ മാറ്റം വരുത്താതെ. CREB ലെവലിൽ മാറ്റങ്ങൾ ക്ഷണികമാകാൻ സാധ്യതയുണ്ട്, അതിനാൽ മറ്റ് പഠനങ്ങളിൽ ഇത് എളുപ്പത്തിൽ നഷ്‌ടപ്പെടും. പ്രത്യേക പരീക്ഷണങ്ങളിൽ CREB mRNA- ൽ കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് വർദ്ധനവ് ഞങ്ങളുടെ കൈകളിൽ കണ്ടു, എന്നിരുന്നാലും, ഈ പ്രഭാവം വളരെ വേരിയബിൾ ആണ് (പ്രസിദ്ധീകരിക്കാത്ത നിരീക്ഷണം). ഹ്രസ്വകാല ΔFosB അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് 11A ട്രാൻസ്‌ജെനിക് എലികളും പിസി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സെല്ലുകളും CREB ഇൻഡക്ഷൻ കാണിക്കുന്നതിനാൽ, ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് CREB യഥാർത്ഥത്തിൽ ΔFosB (അല്ലെങ്കിൽ osFosB- ന്റെ ഒരു ടാർഗെറ്റ്) ആണ്, ഇത് ജീനിൽ മയക്കുമരുന്ന് പ്രേരിത മാറ്റങ്ങൾ വിശദീകരിക്കുന്നതിനുള്ള മറ്റൊരു സംവിധാനം നൽകുന്നു. പദപ്രയോഗം.

അതിശയകരമെന്നു പറയട്ടെ, CREB അല്ലെങ്കിൽ osFosB ഇവയുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി Cck പ്രമോട്ടർ ആണെങ്കിലും Cck ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്‌സ്‌പ്രഷനെ തുടർന്ന് എക്‌സ്‌പ്രഷൻ വ്യക്തമായി നിയന്ത്രിച്ചിരിക്കുന്നു. വി‌ടി‌എയിലും എൻ‌എ‌സിയിലും പ്രകടമാകുന്ന ധാരാളം ന്യൂറോപെപ്റ്റൈഡാണ് സിക്ക് (ഹോക്ഫെൽറ്റ് മറ്റുള്ളവരും, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്) കൂടാതെ ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളോടുള്ള പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങളിൽ ഏർപ്പെട്ടിരിക്കാം (ജോസെലിൻ മറ്റുള്ളവരും, 1996; ജോസെലിൻ മറ്റുള്ളവരും., 1997; ഹാമിൽട്ടൺ, മറ്റുള്ളവർ, 2000; ബെയ്ൻ‌ഫെൽഡ് മറ്റുള്ളവരും, 2002; റോട്ട്‌സിംഗർ മറ്റുള്ളവരും, 2002). സെൽ‌ കൾ‌ച്ചർ‌ അസ്സയങ്ങളിൽ‌, Cck പ്രൊമോട്ടർ‌ വിപുലമായ സ്വഭാവ സവിശേഷതകളുള്ളതും CREB, AP-1 കുടുംബാംഗങ്ങളോട് പ്രതികരിക്കുന്നതായി കാണിക്കുന്നു (അവലോകനം ചെയ്തത് ഹാൻസെൻ, ചൊവ്വ). ഹോൺ, ഡിക്സൺ (1990) AP-1 സമുച്ചയങ്ങളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് കാണിച്ചു Cck CRE പോലുള്ള സൈറ്റ് vitro ലെ, പിന്നീട് എസ്‌കെ-എൻ-എംസി ന്യൂറോബ്ലാസ്റ്റോമ സെല്ലുകൾ ഉപയോഗിച്ച്, സി‌ആർ‌ഇ പോലുള്ള സൈറ്റിന്റെ മ്യൂട്ടേഷൻ അമിതമായി സമ്മർദ്ദം ചെലുത്തിയ cFos / cJun (റൂർക്കെ മറ്റുള്ളവരും., 1999). തീർച്ചയായും, നാം വർദ്ധിച്ചതായി കാണുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം (ചിത്രം 2) കൂടാതെ CRE പോലുള്ള മൂലകത്തിലോ ചുറ്റുവട്ടമോ ബന്ധിപ്പിക്കുക (ചിത്രം 3) മറ്റൊരു AP-1 കുടുംബാംഗമായ ΔFosB- ന്റെ അമിതപ്രയോഗത്തിൽ, എന്നാൽ toFosB യുമായി നേരിട്ട് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയില്ല Cck പ്രൊമോട്ടർ ഇൻ വിവോ or vitro ലെ, അതിരുകടന്നാൽ പോലും.

നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ CREB- ന് ഒരു പങ്ക് ധാരാളം പ്രവർത്തനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം. ദി Cck CRE പോലുള്ള സൈറ്റ് കശേരുക്കളിൽ സംരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു (ഹാൻസെൻ, ചൊവ്വ) കൂടാതെ, ചില സെൽ‌ കൾ‌ച്ചർ‌ പരിശോധനകളിൽ‌, CREB, AP-1 കോംപ്ലക്സുകൾ‌ ഈ സൈറ്റുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും അവയ്‌ക്ക് അത്യാവശ്യവുമാണ് Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം (ഹോണും ഡിക്സണും, 1990; ഡീവാൽ, മറ്റുള്ളവർ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്; ഹാൻസെൻ, ചൊവ്വ). കൂടാതെ, അറിയപ്പെടുന്ന നിരവധി ആക്റ്റിവേറ്ററുകൾ Cck എക്സ്പ്രഷൻ (bFGF, PACAP, പെപ്റ്റോണുകൾ, ഡിപോലറൈസേഷൻ എന്നിവ ഉൾപ്പെടെ) CREB വഴി പ്രവർത്തിക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (ഹാൻസെൻ, മറ്റുള്ളവർ, 1999; ഡീവാൾ, et al, 2000; ബെർണാഡ്, മറ്റുള്ളവർ, 2001; ജെവ്രി, മറ്റുള്ളവർ, 2002; ഹാൻസെൻ, മറ്റുള്ളവർ, 2004). ഞങ്ങളുടെ Cck-ലൂസിഫറസ് റിപ്പോർട്ടർ ജീൻ ഡാറ്റ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ സി‌ആർ‌ഇ പോലുള്ള സൈറ്റിന് ഒരു പ്രധാന പങ്ക് പിന്തുണയ്ക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം, കാരണം ഈ സൈറ്റിന്റെ മ്യൂട്ടേഷൻ ബേസൽ കുറയ്ക്കുന്നു Cck പ്രമോട്ടർ പ്രവർത്തനം കൂടാതെ Cckഈ സൈറ്റ് പരിവർത്തനം ചെയ്യുമ്പോൾ (പ്രസിദ്ധീകരിക്കാത്ത നിരീക്ഷണം) CREB- യുടെ ഘടനാപരമായി സജീവമായ VP16-CREB നിർമ്മിച്ച -ലൂസിഫറസ് എക്‌സ്‌പ്രഷൻ നഷ്‌ടപ്പെടും. അതിനാൽ, CREB എന്നതുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി തോന്നുന്നില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ അത്ഭുതപ്പെട്ടു Cck CREB ലെവലുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുമ്പോൾ ബേസ്‌ലൈനിലോ ഹ്രസ്വകാല osFosB അമിതപ്രയോഗത്തിലോ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റുകളിലെ പ്രൊമോട്ടർ. CREB യുടെ അളവ് ഇത് വാദിക്കുന്നു per se ഈ സൈറ്റിലെ ബൈൻഡിംഗിന്റെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള ഏക ഘടകം ഇവയല്ല, മറ്റുള്ളവരുടെ ജോലി ഇതിനെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു (ചാ-മോൾസ്റ്റാഡ്, മറ്റുള്ളവർ, 2004). മറ്റ്, മുമ്പ് തിരിച്ചറിഞ്ഞ CREB ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ പ്രൊമോട്ടർമാർ മുതൽ ബി.ഡി.എൻ.എഫ് ഒപ്പം പ്രോഡിനോർഫിൻ, CREB ബന്ധിപ്പിച്ചിട്ടുണ്ടോ, CREB ഇതുമായി ബന്ധപ്പെടുന്നില്ലെന്ന് കണ്ടെത്തുന്നതിൽ ഞങ്ങൾക്ക് വിശ്വാസമുണ്ട് Cck സ്ട്രൈറ്റൽ ന്യൂക്ലിയർ എക്സ്ട്രാക്റ്റുകളിലെ പ്രൊമോട്ടർ. കൂടാതെ, ന്റെ ഇൻഡക്ഷൻ CckosFosB- ന്റെ ലൂസിഫറസ് പ്രവർത്തനം കേടുകൂടാത്ത CRE പോലുള്ള സൈറ്റിനെ ആശ്രയിച്ചിരുന്നില്ല, ഇത് osFosB നിയന്ത്രിക്കുന്നില്ലെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു Cck CREB- യുമായി നേരിട്ട് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് നിയന്ത്രിക്കുന്നതിലൂടെ Cck പ്രൊമോട്ടർ.

CREB യുമായി ഇടപഴകുന്നത് കണ്ടെത്താനുള്ള ഞങ്ങളുടെ കഴിവില്ലായ്മ Cck പ്രമോട്ടർ‌ പിന്തുണയ്‌ക്കുന്നു റെന്റാൽ തുടങ്ങിയവർ. (2009), വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ എക്‌സ്‌പോഷറിന് ശേഷം ഫോസ്ഫോറിലേറ്റഡ് CREB (pCREB), ΔFosB ബൈൻഡിംഗ് എന്നിവ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ആഗോളമായി കാണുന്നതിന് ഒരു ചിപ്പ്-ചിപ്പ് സമീപനം ഉപയോഗിച്ചു. ഈ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ, ഡി‌എൻ‌എ-പ്രോട്ടീൻ കോംപ്ലക്സുകൾ osFosB അല്ലെങ്കിൽ pCREB ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് പ്രതിരോധശേഷി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ലേബലിംഗിന് ശേഷം കൃത്യമായ ഡി‌എൻ‌എ ഒരു പ്രൊമോട്ടർ മൈക്രോഅറേയിലേക്ക് ഹൈബ്രിഡ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. മുമ്പ് സ്വഭാവ സവിശേഷതകളുള്ള നിരവധി CREB ടാർഗെറ്റ് ജീനുകൾ ഈ സമീപനത്തിലൂടെ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട് (ഉദാ. BDNF, പ്രോഡിനോർഫിൻ), Cck തിരിച്ചറിഞ്ഞില്ല. ഇതിനുപുറമെ, CREB യെ ഒരു സമവായ CRE സൈറ്റിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് സംസ്ക്കരിച്ച സെൽ ലൈനുകൾക്കിടയിൽ വളരെ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (ചാ-മോൾസ്റ്റാഡ്, മറ്റുള്ളവർ, 2004). CREB ഇടപെടലുകൾ കണ്ടെത്തിയ മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളെല്ലാം Cck പ്രൊമോട്ടർ‌ നടത്തിയത് സെൽ‌ കൾ‌ച്ചറിലാണ് (ഞങ്ങളുടെ ഇ‌എം‌എസ്‌എ, ചിപ്പ് സാമ്പിളുകൾ‌ ലഭിച്ച തലച്ചോറിലല്ല) പ്രോട്ടീൻ-ഡി‌എൻ‌എ ഇടപെടലുകളെക്കുറിച്ച് അന്വേഷിക്കാൻ ജെൽ ഷിഫ്റ്റ് പരിശോധനകൾ ഉപയോഗിച്ചു. ഒരു ഡി‌എൻ‌എ സീക്വൻസുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു ഘടകത്തിന്റെ സാധ്യത ഒരു ഇ‌എം‌എസ്‌എയ്‌ക്ക് വിലയിരുത്താൻ‌ കഴിയുമെങ്കിലും, ചിപ്പ് പരിശോധനകൾ‌ ഈ ഇടപെടലുകളെക്കുറിച്ച് ഒരു പുതിയ രൂപം നൽകുന്നു ഇൻ വിവോ. കൂടാതെ, ഒന്നുകിൽ ഇൻഡക്ഷൻ പ്രകടമാക്കുന്ന ഡാറ്റയുടെ ഭൂരിഭാഗവും Cck പ്രമോട്ടർ‌ പ്രവർ‌ത്തനം അല്ലെങ്കിൽ‌ CREB ബൈൻ‌ഡിംഗ് Cck പെപ്‌റ്റോണുകൾ പോലുള്ള ഘടകങ്ങൾ ഉത്തേജിപ്പിച്ച സെല്ലുകളിൽ നിന്നാണ് പ്രൊമോട്ടർ ലഭിച്ചത് (ബെർണാഡ് മുതലായവ., 2001), ഡിപോലറൈസേഷൻ (ഹാൻസെൻ, മറ്റുള്ളവർ, 2004), അല്ലെങ്കിൽ cAMP, ERK എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ സിഗ്നലിംഗ് കാസ്കേഡുകളുടെ വിവിധതരം ആക്റ്റിവേറ്ററുകൾ (ഹാൻസെൻ മറ്റുള്ളവരും., 1999). ഞങ്ങളുടെ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ, ഉപയോഗിച്ച ഒരേയൊരു “ഉത്തേജനം” ΔFosB യുടെ അമിതപ്രയോഗം മാത്രമാണ്, ഇത് പ്രേരിപ്പിക്കാൻ പര്യാപ്തമാണ് Cck പദപ്രയോഗം. ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് CREB- യുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാനും (നിയന്ത്രിക്കാനും സാധ്യതയുണ്ട്) Cck പ്രമോട്ടർ സെൽ തരത്തെയും പ്രത്യേക സിഗ്നലിംഗ് പാതകളുടെ സജീവമാക്കലിനെയും ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. കൂടാതെ, ദി Cck CRE- പോലുള്ള പ്രൊമോട്ടർ ഘടകം (കുറഞ്ഞത് ഇൻ‌ഡ്യൂസ് ചെയ്യാത്ത പി‌സി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സെല്ലുകളിലും മ mouse സ് സ്ട്രിയാറ്റത്തിലും) CREB അല്ലെങ്കിൽ osFosB യുടെ നേരിട്ടുള്ള ലക്ഷ്യമല്ല. എന്നതിന്റെ നിയന്ത്രണം FosB CREB യുടെ എക്സ്പ്രഷൻ സെൽ തരത്തിനും ഉത്തേജന തരത്തിനും പ്രത്യേകമാണ്. ആൻഡേഴ്സൺ നടത്തിയ പഠനം Et al. CREB ആന്റിസെൻസ് ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ മ mouse സ് സ്ട്രിയാറ്റത്തിലേക്ക് കുത്തിവയ്ക്കുന്നത് ഭാഗികമായി തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതായി കണ്ടെത്തി FosB കൊക്കെയ്ൻ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ പിന്തുടരുന്നു (ആൻഡേഴ്സൺ മറ്റുള്ളവരും, 2001). എന്നിരുന്നാലും, എൽ-ഡോപ്പയെ പ്രേരിപ്പിക്കാനുള്ള കഴിവ് അവർ കണ്ടെത്തി FosB CREB ആന്റിസെൻസ് ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ സാന്നിധ്യം 6-OHDA-lesioned striatum ലെ പ്രകടനത്തെ സ്വാധീനിച്ചിട്ടില്ല.

CREB, osFosB എന്നിവ പരോക്ഷമായി നിയന്ത്രിക്കുന്നതായി തോന്നുന്നതിനാൽ Cck പ്രമോട്ടർ‌, ക്രോമാറ്റിൻ‌ ഘടനയിലെ മാറ്റങ്ങൾ‌ ΔFosB (സാങ്കോവ മറ്റുള്ളവരും, 2004; കുമാർ et al., 2005; റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2008), ക്രോമാറ്റിൻ ഘടനയിൽ മാറ്റം വരുത്തി osFosB പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം പരോക്ഷമായി മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യാമെന്ന് ഞങ്ങൾ ന്യായീകരിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ആഴ്ചകളിലെ എലികളെ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്നതിൽ, ഹിസ്റ്റോൺ എച്ച്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് അസറ്റിലേഷനിൽ ഒരു മാറ്റവും ഉണ്ടായിട്ടില്ല Cck പ്രൊമോട്ടർപട്ടിക 1). ന്റെ ChIP- ചിപ്പ് ഡാറ്റ ഇതിനെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു റെന്റാൽ തുടങ്ങിയവർ. (2009), അസറ്റിലേറ്റഡ് എച്ച്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ബൈൻഡിംഗിൽ മാറ്റമൊന്നും റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടില്ല Cck വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ എക്സ്പോഷർ ചെയ്ത എലികളിലെ പ്രൊമോട്ടർ. മുതൽ Cck സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ പ്രൊമോട്ടർ‌ സജീവമാണ്, അടിച്ചമർത്തുന്ന മെത്തിലൈലേറ്റഡ് ഹിസ്റ്റോൺ H3 ബൈൻഡിംഗ് പ്രതീക്ഷിക്കുകയോ നിരീക്ഷിക്കുകയോ ചെയ്തില്ല. രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, അസറ്റിലേറ്റഡ് എച്ച്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ബൈൻഡിംഗിലെ os ഫോസ് അമിതപ്രയോഗം കാരണം ഞങ്ങൾ ഒരു മാറ്റവും കണ്ടില്ല. ബി.ഡി.എൻ.എഫ് പ്രൊമോട്ടർ‌ (വർദ്ധിച്ച CREB ബൈൻ‌ഡിംഗ് കാണിച്ചു) അല്ലെങ്കിൽ‌ CDK5 ഒപ്പം പ്രോഡിനോർഫിൻ പ്രമോട്ടർ‌മാർ‌ (ഇത് വർദ്ധിച്ച osFosB ബൈൻഡിംഗ് കാണിച്ചു). പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനത്തിലെ മാറ്റങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട നിരവധി ഹിസ്റ്റോൺ പരിഷ്കാരങ്ങൾ ഉള്ളതിനാൽ (അവലോകനം ചെയ്തത് റാൻ‌ഡോയും ചാങ്ങും, 2009), ഈ ജീനുകളുടെ ഇൻഡക്ഷനുമായി ബന്ധപ്പെടുത്തുന്ന മറ്റ് ക്രോമാറ്റിൻ പരിഷ്കാരങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം. ഏതെങ്കിലും ഒരൊറ്റ ക്രോമാറ്റിൻ പരിഷ്ക്കരണം, പ്രമോട്ടർ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ തോത് പലപ്പോഴും പ്രവചിക്കാറുണ്ടെങ്കിലും, ഒരു പ്രത്യേക ജീൻ സജീവമാകുമ്പോൾ മാറില്ല. ഭാവിയിലെ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ, ചുറ്റുമുള്ള ക്രോമാറ്റിൻ ഘടനയിലെ മറ്റ് സാധ്യതകൾ നോക്കുന്നത് രസകരമായിരിക്കും Cck osFosB അമിതപ്രയോഗത്തെ പിന്തുടരുന്ന പ്രൊമോട്ടർ. രസകരമായി, വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ (സാധ്യതയുണ്ട് വഴി ΔFosB ഇൻഡക്ഷൻ) ന്യൂറോണൽ ഫിസിയോളജി, ഇആർ‌കെ സിഗ്നലിംഗ്, കൊക്കെയ്നുമായുള്ള പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങൾ എന്നിവയിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നതായി കാണപ്പെടുന്ന സിർ‌ട്ടിൻ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്, ക്ലാസ് III ഹിസ്റ്റോൺ ഡീസെറ്റിലെയ്‌സുകൾ എന്നിവയുടെ പ്രകടനത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2009). ഒരു ഹിസ്റ്റോൺ ഡീസെറ്റൈലസിന്റെ ഇൻഡക്ഷന് ധാരാളം ജീനുകളുടെ ആവിഷ്കാരത്തെ ഒരേസമയം നിയന്ത്രിക്കാനുള്ള കഴിവുണ്ട് വഴി ക്രോമറ്റിൻ ഘടനയിൽ ആഗോള മാറ്റങ്ങൾ.

ഉൾപ്പെടാൻ സാധ്യതയുള്ള ഒരു സ്ഥാനാർത്ഥി Cck ΔFosB നെ പിന്തുടരുന്ന നിയന്ത്രണം AP-1 കുടുംബാംഗങ്ങളുടെ cFos ആയിരുന്നു. CFos ന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നത് CREB ആണ് (ഷെങ് മറ്റുള്ളവരും, 1990; മറ്റ് പേരുകൾ, XIX), cFos overexpression (അതിന്റെ ബന്ധിത പങ്കാളിയായ cJun ന്റെ അമിതപ്രയോഗവുമായി യോജിക്കുന്നു) വർദ്ധിക്കുന്നു Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം (റൂർക്കെ മറ്റുള്ളവരും., 1999). അതിനാൽ, ഹ്രസ്വകാല osFosB അമിതപ്രയോഗം മൂലം CREB ലെവലുകൾ വർദ്ധിക്കുന്നത് cFos ലെവലുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഇതുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമാകുകയും ചെയ്യും Cck CRE പോലുള്ള സൈറ്റ്. cfos രണ്ടാഴ്ചത്തെ ΔFosB അമിതപ്രയോഗത്തെത്തുടർന്ന് mRNA എലികളിൽ പ്രചോദിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു (മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003) കൂടാതെ വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ദീർഘകാല osFosB അമിതപ്രയോഗത്തിന് വിധേയമായ എലികളുടെ കുറവ് (റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2008). CFos നേരിട്ട് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി ഇവിടെ കാണാം Cck പ്രാകൃതമായ ടിഷ്യു പ്രമോട്ടർമാർ, ΔFosB അമിതഭാരം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നില്ല. ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് cFos ന് നിയന്ത്രണം ഏർപ്പെടുത്താമെന്നാണ് Cck പൊതുവായി പറഞ്ഞാൽ, cFos ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിലെ മാറ്റം aFosB നിയന്ത്രിക്കുന്ന സംവിധാനമായിരിക്കില്ല Cck പദപ്രയോഗം. എന്നിരുന്നാലും, ഫോസ്ബി ഒന്നുകിൽ സിഫോസിലെ വിവർത്തനാനന്തര മാറ്റങ്ങൾ (ഉദാ. മാറ്റം വരുത്തിയ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ) അല്ലെങ്കിൽ ഒരു ബന്ധിത പങ്കാളിയുടെ (സിജുൻ പോലുള്ളവ) അല്ലെങ്കിൽ കോ-ആക്റ്റിവേറ്റർ പ്രോട്ടീന്റെ പ്രകടനത്തെ പ്രേരിപ്പിച്ചേക്കാം. എന്നിരുന്നാലും, കേടുപാടുതീരാത്ത CRE പോലുള്ള സൈറ്റ് (മുമ്പ് AP-1 കോംപ്ലക്സുകൾക്കുള്ള ഒരു ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റാണെന്ന് ഇത് തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, കാണുക ഹോണും ഡിക്സണും, 1990) വർദ്ധിച്ചതിന് ആവശ്യമില്ല Cck osFosB അമിതപ്രയോഗം (ഞങ്ങളുടെ റിപ്പോർട്ടർ ജീൻ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ വിലയിരുത്തിയതുപോലെ) കാണുന്ന പ്രമോട്ടർ പ്രവർത്തനം, മറ്റ് ട്രാൻസ്-ആക്ടിംഗ് ഘടകങ്ങളും ΔFosB നിയന്ത്രിക്കുന്നു എന്നതിന്റെ കാരണമായി ഇത് നിലകൊള്ളുന്നു.

ദി Cck ഞങ്ങളുടെ luciferase reporter gene പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്രമോട്ടർ ശൃംഖല ഒരു കരുത്തുറ്റ Sp1 ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റും ഒരു ഇ-ബോക്സും ഉൾക്കൊള്ളുന്നു (ഹാൻസെൻ അവലോകനം ചെയ്തത്, 2002). പ്രത്യേകിച്ചും, ഇ-ബോക്സ് സീക്വൻസുകൾ നിരവധി ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളെ ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (അവലോകനം ചെയ്തത് ഫോറസ്റ്റ് ആൻഡ് മക്നമാര, 2004). PC12 സെല്ലുകൾ ഉപയോഗിച്ച്, ഇ-ബോക്സിന്റെ മ്യൂട്ടേഷൻ കുറയുന്നതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടു Cck പ്രൊമോട്ടർ പ്രവർത്തനം, എന്നാൽ ΔFosB (ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നില്ല) ക്ക് പ്രൊമോട്ടറുടെ പ്രതികരണത്തെ മാറ്റാൻ കഴിയില്ല. രസകരമെന്നു പറയട്ടെ, a Cckസി‌ആർ‌ഇ സൈറ്റിലെയും ഇ-ബോക്സിലെയും മ്യൂട്ടേഷനുകൾ‌ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ലൂസിഫറസ് റിപ്പോർ‌ട്ടറിന് കണ്ടെത്താനാകുന്ന അടിസ്ഥാന പ്രവർത്തനങ്ങളൊന്നുമില്ല, മാത്രമല്ല os ഫോസ് അമിതപ്രയോഗത്തിന് (പ്രസിദ്ധീകരിക്കാത്ത നിരീക്ഷണം) പ്രതികരിക്കുന്നില്ല. OnFosB പ്രവർത്തനത്തിന്റെ മറ്റൊരു സാധ്യതയുള്ള മധ്യസ്ഥൻ Cck എടി‌എഫുകളാണ് പ്രൊമോട്ടർ‌, ഇവയുടെ ചില രൂപങ്ങൾ‌ ക്രോണിക് സൈക്കോസ്തിമുലൻറ് എക്‌സ്‌പോഷർ‌ വഴി സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ‌ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതായി അറിയപ്പെടുന്നു (ഗ്രീൻ et al., 2008). എന്നിരുന്നാലും, ഈ ATF കൾ (ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നില്ല) ΔFosB അനുവദിക്കുന്നതിനുള്ള യാതൊരു തെളിവും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയിട്ടില്ല, ATF- കൾ ക്രെഡിറ്റ് ക്രെറ്റ്-സൈറ്റ് പോലുള്ള സൈറ്റുകളിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കാൻ പ്രതീക്ഷിക്കപ്പെടുകയില്ല Cck പ്രൊമോട്ടർ.

ഈ പഠനത്തിന്റെ ഒരു മുന്നറിയിപ്പ്, osFosB- നെ അമിതമായി എക്സ്പ്രസ് ചെയ്യുന്നതിന് ഞങ്ങൾ ഒരു ബൈ-ട്രാൻസ്ജെനിക് സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതിനാൽ ഈ മാതൃകയും വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്നിന്റെ ഭരണവും തമ്മിലുള്ള സമാനതകൾ വരയ്ക്കുന്നതിൽ ഒരാൾ യാഥാസ്ഥിതികനായിരിക്കണം. എന്നിരുന്നാലും, ΔFosB ന്റെ പ്രത്യേക പ്രഭാവങ്ങൾ കാണിക്കുന്നതിനുള്ള പ്രത്യേക അവസരം XXLA ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികൾക്കും ഉണ്ട്, കാരണം മസ്തിഷ്കപ്രവാഹം ഈ തലച്ചോറിലെ പരിമിതമാണ് (ചെൻ et al., 1998), കൊക്കെയ്നിന്റെ ഭരണം മറ്റ് പല മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിലും മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തുകയും അത് സ്ട്രൈറ്റത്തെ പരോക്ഷമായി ബാധിക്കുകയും ചെയ്യും. കൂടാതെ, ധാരാളം പഠനങ്ങൾ 11A എലികളിൽ സമാന സ്വഭാവവും തന്മാത്രവുമായ സൂക്ഷ്മചരിത്രങ്ങൾ രേഖപ്പെടുത്തപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.കേൽസ് മറ്റ് പേരുകൾ, 1999; മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003; റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2009). കൂടാതെ, ബിബ്ബ് മറ്റുള്ളവരും. (2001) സമാന അളവിലുള്ള സ്‌ട്രാറ്റിയൽ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തു Cdk5 കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സിച്ച, ട്രാൻസ്ജെനിക് അല്ലാത്ത ലിറ്റർമേറ്റുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ mRNA, പ്രോട്ടീൻ ഇൻഡക്ഷൻ എന്നിവയും അതുപോലെ തന്നെ CDK11 ടാർഗെറ്റുകളായ p5, DARPP-35 എന്നിവയിലെ സമാന മാറ്റങ്ങളും.

ഉപസംഹാരമായി, ഹ്രസ്വകാല osFosB എക്സ്പ്രഷൻ ഒന്നിലധികം സംവിധാനങ്ങളിലൂടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ജീനുകളുടെ പ്രേരണയിലേക്ക് നയിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. നേരിട്ടുള്ള പ്രൊമോട്ടർ ബൈൻഡിംഗ്, സി‌ആർ‌ഇബി പ്രോട്ടീന്റെയും ആക്റ്റിവിറ്റിയുടെയും ഇൻഡക്ഷൻ, ക്രോമാറ്റിൻ പരിഷ്ക്കരണം, കൂടാതെ ഇനിയും നിർണ്ണയിക്കപ്പെടേണ്ട വഴികൾ.

പോവുക:

പരീക്ഷണാത്മക നടപടിക്രമങ്ങൾ

മൃഗങ്ങൾ

ഈ പഠനത്തിൽ പുരുഷ ബൈ-ട്രാൻസ്ജെനിക് എക്സ്നുംക്സ മൃഗങ്ങളെ (എൻ‌എസ്‌ഇ-ടിടിഎ x ടെറ്റോപ്പ്- os ഫോസ്ബി) ഉപയോഗിച്ചു, കേൽസ് മറ്റ് പേരുകൾ, 1999. ΔFosB ത്തെ ഉയർന്ന അളവിൽ, ഡോക്സിസൈക്ലൈനിൽ ഡോസ്സൈസ്കിൻ നിന്ന് എലിയെ നീക്കം ചെയ്യപ്പെട്ടു. എല്ലാ എലികളെയും ഒരു 3: 6 ലൈറ്റ് / ഡാർക്ക് സൈക്കിൾ, 12 am ന് ലൈറ്റുകൾ ഓണാക്കുക, 12 pm ന് ലൈറ്റുകൾ ഓഫ് ചെയ്യുക, ad lib ഭക്ഷണത്തിലേക്കും വെള്ളത്തിലേക്കും പ്രവേശനം. എല്ലാ മൗസ് പരീക്ഷണങ്ങളും ഡാളസിലെ ടെക്സാസ് യൂണിവേഴ്സിറ്റി സൗത്ത് വെസ്റ്റേൺ മെഡിക്കൽ സെന്ററിന്റെ മൃഗസംരക്ഷണ, ഉപയോഗ സമിതി അംഗീകരിച്ച പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ പാലിക്കുന്നതായിരുന്നു.

റിപ്പോർട്ടർ, എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡുകൾ

വൈൽഡ് ടൈപ്പ് (WT) Cck പി‌ജി‌എൽ‌എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ലൂക്ക് വെക്ടറിലേക്ക് (പ്രോമെഗ) ഏകദേശം എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ബിപി പി‌സി‌ആർ ശകലം ഉൾപ്പെടുത്തിക്കൊണ്ട് പ്രൊമോട്ടർ-ലൂസിഫറസ് റിപ്പോർട്ടർ തയ്യാറാക്കി. ഈ ശകലം മ mouse സ് ജീനോമിക് ഡി‌എൻ‌എയിൽ നിന്നാണ് ലഭിച്ചത് (പ്രൈമറുകൾ: എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് 'ടാറ്റ്സിടിസിടിടിസിജിജിഎസിഎക്സ്എക്സ്എൻ‌എൻ‌എം‌എക്സ് അപ്‌സ്ട്രീം, എക്സ്‌എൻ‌എം‌എക്സ്' പ്രമോട്ടർ‌ ശകലത്തെ പി‌ജി‌എൽ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്-ലൂക്കിന്റെ കെ‌പി‌എൻ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് / എക്സ്ഹോക്സ്‌എൻ‌എം‌എക്സ് നിയന്ത്രണ എൻ‌സൈം സൈറ്റുകളിലേക്ക് ക്ലോൺ ചെയ്തു.

ക്രെഡിറ്റ് പോയിന്റ് മ്യൂറ്റേഷനെ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിന് Cck പ്രൊമോട്ടർ‌, മുമ്പ്‌ റിപ്പോർ‌ട്ടുചെയ്‌ത സി‌ആർ‌ഇ പോലുള്ള സൈറ്റിനെതിരെയുള്ള ഒരു മ്യൂട്ടജെനിക് പ്രൈമർ . ഇത് റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത CRE പോലുള്ള സൈറ്റിനെ (ACTGCGTCAGC) ACTGAGCTCC ആക്കി മാറ്റുന്നു. എല്ലാ റിപ്പോർട്ടർ പ്ലാസ്മിഡുകളും ഡി‌എൻ‌എ സീക്വൻസിംഗിലൂടെ സ്ഥിരീകരിച്ചു. ΔFosB എക്സ്പ്രഷൻ പ്ലാസ്മിഡിൽ പി‌സി‌ഡി‌എൻ‌എ 5 ന്റെ ഒന്നിലധികം ക്ലോണിംഗ് സൈറ്റിലേക്ക് തിരുകിയ ഒരു മുഴുനീള os ഫോസ്ബി സീക്വൻസ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് മുമ്പ് വിവരിച്ചിട്ടുണ്ട് (ഉല്ലാസറും നെസ്റ്റ്ലറും, 2007).

സെൽ‌ കൾ‌ച്ചറും ഡി‌എൻ‌എ കൈമാറ്റവും

ഡൽ‌ബെക്കോയുടെ പരിഷ്‌ക്കരിച്ച ഈഗിളിന്റെ മീഡിയം എഫ് -12 ൽ എലി ഫിയോക്രോമോസൈറ്റോമ (പിസി 12) സെല്ലുകൾ പരിപാലിക്കപ്പെട്ടു, ഇത് 10% കുതിര സെറം, 5% ഗര്ഭപിണ്ഡത്തിന്റെ ബോവിൻ സെറം, 1 ° C ന് 37% പെൻസിലിൻ / സ്ട്രെപ്റ്റോമൈസിൻ, 5% CO2. 360 μL ലെ ബിടിഎക്സ് 350 ഇലക്ട്രോപോറേറ്റർ (0 വി, 850 ഓംസ്, 800 μF) ഉപയോഗിച്ച് സെല്ലുകൾ ഇലക്ട്രോപൊറേഷൻ വഴി കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ടു. മൊത്തം ഡിഎൻ‌എ സാധാരണ നിലയിലാക്കാൻ ശൂന്യമായ വെക്റ്റർ പ്ലാസ്മിഡ് (പിസിഡി‌എൻ‌എ) ഉപയോഗിച്ചു. കൈമാറ്റം ചെയ്ത ശേഷം, സെല്ലുകൾ 4 മില്ലീമീറ്റർ കൊളാജൻ-പൊതിഞ്ഞ വിഭവങ്ങളിൽ സൂചിപ്പിച്ച സമയത്തേക്ക് വളർത്തി.

ലൂസിഫറസ് പരിശോധനകൾ

കൈമാറ്റം കഴിഞ്ഞ് രണ്ടോ മൂന്നോ ദിവസത്തിനുശേഷം, ഡൽ‌ബെക്കോയുടെ ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫർ‌ഡ് സലൈനിൽ സെല്ലുകൾ 3 തവണ കഴുകി, ലൈസഡ് ചെയ്തു (25 എംഎം ഗ്ലൈസിൽഗ്ലൈസിൻ ഉപയോഗിച്ച്, 15 എംഎം എം‌ജി‌എസ്ഒ4, 4 mM EGTA, 1% ട്രൈറ്റൺ X-100, pH 7.8, 1 mM DTT), ശേഖരിച്ച് കേന്ദ്രീകൃതമാക്കൽ വഴി മായ്‌ച്ചു. 30 lL ലൈസേറ്റ് 140 μL ലൂസിഫറസ് അസ്സേ ബഫറുമായി (25 mM ഗ്ലൈസിൽഗ്ലൈസിൻ, 15 mM MgSO4, 4 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 1 mM പൊട്ടാസ്യം ഫോസ്ഫേറ്റ്, 1 mM coenzyme A, pH 7.8). ഒരു ഫ്ലക്സ്- 800 മൈക്രോപ്ലറ്റ് ഫ്ലൂറസസെൻസ് റീഡർ ഉപയോഗിച്ച് ലുമിൻസൻസ് പ്രവർത്തനം അളക്കുകയായിരുന്നു. ഒരു BioRad പ്രോട്ടീൻ എക്കെയുടെ നിർണ്ണയിച്ചിരിക്കുന്ന പ്രോട്ടീൻ ഉള്ളടക്കത്തിൽ ലൂസിഫേറ്റസ് പ്രവർത്തനം സാധാരണ രീതിയിലായിരുന്നു.

ഇലക്ട്രോഫോറെറ്റിക് മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് അസ്സേ

ബൈ-ട്രാൻസ്ജെനിക് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എ എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രിയാറ്റത്തിന്റെ ഉഭയകക്ഷി കഷ്ണങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ന്യൂക്ലിയർ സത്തിൽ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ആഴ്ചകളായി ഡോക്സിസൈക്ലിനിൽ അല്ലെങ്കിൽ ഓഫ് പരിപാലിക്കുന്നിടത്ത്) (മക്ലംഗ്ഗും നെസ്റ്റ്ലറും, 2003) അനുസരിച്ച് തയ്യാറാക്കി ഹുവാങ്, വാൾട്ടേഴ്‌സ് (1996). 32പ്രോമെഗ ജെൽ ഷിഫ്റ്റ് അസ്സേ സിസ്റ്റം പ്രോട്ടോക്കോൾ (#E3300) ഉപയോഗിച്ച് പി-ലേബൽഡ് ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് പ്രോബുകൾ തയ്യാറാക്കുകയും റോച്ചെ ക്വിക്ക് സ്പിൻ നിരകൾ ഉപയോഗിച്ച് പ്രോബുകൾ ശുദ്ധീകരിക്കുകയും ചെയ്തു. സമവായ CRE, AP-1 പ്രോബ് സീക്വൻസുകൾ പ്രോമെഗയിൽ നിന്നും (യഥാക്രമം #E328A, E320B), Cck CRE സീക്വൻസുകൾ (Cck-CRE sense: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; Cck-CRE ആന്റിസെൻസ്: CCCAGTGCTGACGCAGTCCAGAGCTCGCTAGCTTT).

പ്രോമെഗ ജെൽ ഷിഫ്റ്റ് അസ്സേ സിസ്റ്റം നടപടിക്രമത്തിന്റെ (#E3300) പരിഷ്കാരങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ബൈൻഡിംഗ് പ്രതികരണങ്ങളും ഇലക്ട്രോഫോറെസിസും നടത്തി. ലേബൽ ചെയ്ത പേടകത്തിന്റെ 50,000 CPM, 10 strig സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ന്യൂക്ലിയർ എക്സ്ട്രാക്റ്റുമായി സംയോജിപ്പിച്ചു. റേഡിയോലേബൽഡ് പ്രോബുകൾ അവതരിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് കോൾഡ് എതിരാളി ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആന്റിബോഡികൾ ചേർത്തു. സൂപ്പർഷിഫ്റ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി, CREB ആന്റിബോഡിയുടെ 2 μg (അപ്‌സ്റ്റേറ്റ് ബയോടെക്നോളജി # 06-083) ഉപയോഗിച്ചു. പ്രതികരണങ്ങൾ 4% പോളിയക്രൈലാമൈഡ് ജെല്ലുകളിൽ ഇലക്ട്രോഫോറസ് ചെയ്തു, ഉണങ്ങിയതും ഫിലിമിന് വിധേയവുമായിരുന്നു (1 മണിക്കൂർ മുതൽ 2 ദിവസം വരെ തീവ്രമാക്കുന്ന സ്ക്രീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച്).

ഇമ്മ്യൂണോബ്ലോട്ടിംഗ്

പി‌സി 12 സെല്ലുകൾ‌ക്കായി, 35 മില്ലീമീറ്റർ‌ കൈമാറ്റം ചെയ്ത സെല്ലുകൾ‌ ഐസ് തണുപ്പിൽ‌ കഴുകി. ഡൽ‌ബെക്കോയുടെ ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫർ‌ഡ് സലൈൻ പ്രോട്ടീസ് ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന% ട്രൈറ്റൺ എക്സ് -50, 7.4% സോഡിയം ഡോഡെസിൽ സൾഫേറ്റ്). സോണിക്കേഷൻ, ക്ലിയറിംഗ്, ബ്രാഡ്‌ഫോർഡ് പ്രോട്ടീൻ പരിശോധന എന്നിവയ്ക്ക് ശേഷം ലൈസേറ്റുകൾ പൂർണ്ണമായും ഡിനാറ്റെർ ചെയ്തു, ഓരോ സാമ്പിളിലും 5 μg 5% എസ്‌ഡി‌എസ് പോളിയക്രൈലാമൈഡ് ജെല്ലുകളിൽ ഇലക്ട്രോഫോറസ് ചെയ്തു. പ്രോട്ടീനുകൾ പിവിഡിഎഫ് മെംബ്രണിലേക്ക് മാറ്റി, 1% ട്വീൻ -1 (ടിബിഎസ്-ടി പാൽ) അടങ്ങിയ ട്രിസ് ബഫർ‌ഡ് സലൂണിലെ 100% കൊഴുപ്പില്ലാത്ത ഉണങ്ങിയ പാലിൽ 0.1 മണിക്കൂർ തടഞ്ഞു, പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികൾ (CREB- അപ്സ്റ്റേറ്റ് ബയോടെക്നോളജി # 50-10, 1: 3; GAPDH- സിഗ്മ # G0.1, 20: 4 ന് ഉപയോഗിച്ചു) ടിബിഎസ്-ടി പാലിൽ ലയിപ്പിച്ചു. ടി‌ബി‌എസ്-ടിയിൽ‌ ഒന്നിലധികം കഴുകിയ ശേഷം, room ഷ്മാവിൽ ഒരു മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് ആൽക്കലൈൻ ഫോസ്ഫേറ്റസ്-കൺജഗേറ്റഡ് സെക്കൻഡറി ആന്റിബോഡികൾ (സിഗ്മ) ഉപയോഗിച്ച് ടി‌ബി‌എസ്-ടി പാലിൽ 06: 083 നേർപ്പിച്ചു. ട്രിസ് ബഫർ‌ഡ് സലൈനിൽ‌ ഒന്നിലധികം വാഷുകൾ‌ക്ക് ശേഷം, ബയോ‌റാഡ് (# 1-1,000) നിർദ്ദേശങ്ങൾ‌ അനുസരിച്ച് വർ‌ണ്ണ പ്രതികരണം നടത്തി. മെംബ്രെൻ‌സ് ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് വരണ്ടതാക്കുകയും ഫ്ലാറ്റ്ബെഡ് സ്കാനറിൽ സ്കാൻ ചെയ്യുകയും ഇമേജ് ജെ ഉപയോഗിച്ച് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി നടത്തുകയും ചെയ്തു (ചുവടെ കാണുക).

സ്‌ട്രാറ്റിയൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റിനായി, മുമ്പ് പ്രസിദ്ധീകരിച്ചതുപോലെ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് പരിശോധനകൾ നടത്തി (മറ്റുള്ളവരും പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു., XX). ശിരഛേദം ചെയ്ത എലികളിൽ നിന്ന് ടിഷ്യു നീക്കം ചെയ്യുകയും ഐസ് സ്ഥാപിക്കുകയും ബ്രെയിൻ മാട്രിക്സിൽ 1 മില്ലീമീറ്റർ കനത്തിൽ വിഭജിക്കുകയും ചെയ്തു. ടിഷ്യു പഞ്ചുകൾ എടുത്ത് -80 at C വരെ ഫ്രീസുചെയ്തു. ഫോസ്ഫേറ്റസും പ്രോട്ടീസ് ഇൻഹിബിറ്ററുകളും (റോച്ചെ, സിഗ്മ) അടങ്ങിയ പരിഷ്കരിച്ച ഡിറ്റർജന്റ് അധിഷ്ഠിത ബഫറിൽ ടിഷ്യു ഐസ് ഉപയോഗിച്ച് സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു. സോണിക്കേഷനുശേഷം, സാമ്പിളുകൾ ചുട്ടുതിളക്കുന്ന വെള്ളത്തിൽ പതിക്കുകയും 15,000 മിനിറ്റ് 15xg ൽ കേന്ദ്രീകരിക്കുകയും ചെയ്തു; സൂപ്പർനേറ്റന്റ് പിന്നീട് ശേഖരിച്ച് പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു; പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത അളവ് ബ്രാഡ്‌ഫോർഡ് അസ്സെ (ബയോ-റാഡ്) ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കി. ഒരു 10% അക്രിലാമൈഡ് / ബിസാക്രിലാമൈഡ് ജെല്ലിലാണ് സാമ്പിളുകൾ പ്രവർത്തിപ്പിച്ചത്, ഒരു പിവിഡിഎഫ് മെംബ്രണിലേക്ക് മാറ്റി, 5% പാലിൽ തടഞ്ഞു, പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികളുമായി (ആന്റി-ക്രെബ്, അപ്‌സ്റ്റേറ്റ്, ലേക്ക് പ്ലാസിഡ്, എൻ‌വൈ) ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. കെമിലുമിനെസെൻസ് സിസ്റ്റം (പിയേഴ്സ്) ഉപയോഗിച്ച് ബ്ലോട്ടുകൾ പിന്നീട് ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചു. എല്ലാ സാമ്പിളുകളും GAPDH (ഫിറ്റ്സ്ജെറാൾഡ്, കോൺകോർഡ്, എം‌എ) ലേക്ക് സാധാരണമാക്കി. ഞങ്ങൾ അസ്സെയുടെ രേഖീയ ശ്രേണിയിലാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കാനാണ് സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവുകൾ പ്രവർത്തിപ്പിച്ചത്.

ഡെൻസിറ്റോമെട്രി വിശകലനം

പി‌സി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഇമ്യൂണോബ്ലോട്ടുകൾക്കായി, റോഡ്‌ബാർഡ് കാലിബ്രേഷനോടുകൂടിയ ഇമേജ് ജെ ഉപയോഗിച്ച് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി വിശകലനം നടത്തി. ഓരോ അളവിലും നിന്ന് ശരാശരി പശ്ചാത്തല സിഗ്നൽ കുറയ്ക്കുകയും ഓരോ സാമ്പിളിനും CREB ന്റെ അനുപാതം GAPDH സിഗ്നലായി കണക്കാക്കുകയും ചെയ്തു. സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഇമ്യൂണോബ്ലോട്ടുകൾക്കും ഇ.എം.എസ്.എ വിശകലനത്തിനും, പശ്ചാത്തല കുറയ്ക്കലിനൊപ്പം സിയോൺ ഇമേജ് എക്‌സ്‌എൻ‌എം‌എക്സ്സി ഉപയോഗിച്ചു.

ക്രോമോറ്റിൻ രോഗപ്രതിരോധം (ChIP)

ന്റെ രീതികൾക്കനുസൃതമായി ChIP പരിശോധനകൾ നടത്തി സാങ്കോവ തുടങ്ങിയവർ. (2004) ഒപ്പം കുമാർ തുടങ്ങിയവർ. (2005). ചുരുക്കത്തിൽ, ഡോക്സിസൈക്ലിനിലോ അല്ലാതെയോ പരിപാലിക്കുന്ന 11 എ എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഉഭയകക്ഷി സ്ട്രൈറ്റൽ സാമ്പിളുകൾ 1% ഫോർമാൽഡിഹൈഡ് ഉപയോഗിച്ച് ക്രോസ്ലിങ്ക് ചെയ്യുകയും ഗ്ലൈസിൻ ഉപയോഗിച്ച് ക്രോസ്ലിങ്കിംഗ് ശമിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു (അന്തിമ ഏകാഗ്രത 0.125 മീറ്റർ). ഈ സാമ്പിളുകൾ ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പൻസിന്റെ തലത്തിൽ എടുത്ത കോർടെക്സ് നീക്കം ചെയ്ത തലച്ചോറിലെ മുഴുവൻ കഷ്ണങ്ങളിൽ നിന്നായിരുന്നു. സോണിക്കേഷൻ വഴി ക്രോമാറ്റിൻ ഏകദേശം 0.2 മുതൽ 1 കെബി വരെ ശകലങ്ങളായി മുറിച്ചു, പ്രോട്ടീൻ ജി മുത്തുകൾ (തെർമോ സയന്റിഫിക് # 22852) ഉപയോഗിച്ച് മായ്ച്ചു, ഇൻപുട്ട് സാമ്പിളുകൾ -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഫ്രീസുചെയ്തു. ഓരോ മഴയ്ക്കും 60 മുതൽ 100 ​​μg വരെ ക്രോമാറ്റിൻ ഉപയോഗിച്ചു. ഓരോ പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡിയുടെ 5-10 μg ഉപയോഗിച്ചു (CREB: അപ്‌സ്റ്റേറ്റ് ബയോടെക്നോളജി # 06-863, osFosB: സാന്താക്രൂസ് ബയോടെക്നോളജി # SC-48x, അസറ്റിലേറ്റഡ് H3: അപ്‌സ്റ്റേറ്റ് ബയോടെക്നോളജി # 06-599, മെത്തിലൈലേറ്റഡ് H3 (LYS9): സെൽ സിഗ്നലിംഗ് ടെക്നോളജി, cFos: സാന്താക്രൂസ് ബയോടെക്നോളജി # SC-7202x). നിർമ്മാണ നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച് ആന്റിബോഡി-ക്രോമാറ്റിൻ കോംപ്ലക്സുകൾ പ്രോട്ടീൻ ജി പ്ലസ് മുത്തുകൾ ഉപയോഗിച്ച് രോഗപ്രതിരോധ ശേഷി നൽകി (തെർമോ സയന്റിഫിക് # 22852). ഇൻ‌പുട്ടിന്റെയും കൃത്യമായ സാമ്പിളുകളുടെയും റിവേഴ്സ് ക്രോസ്ലിങ്കിംഗിനെ തുടർന്ന്, ഓരോ സാമ്പിളും ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പി‌സി‌ആർ‌ (qPCR) ന് വിധേയമാക്കി. ChIP- നായി ഈ ആന്റിബോഡികളുടെയെല്ലാം ഉപയോഗം വ്യാപകമായി സാധൂകരിക്കപ്പെട്ടു (സാങ്കോവ മറ്റുള്ളവരും, 2004; കുമാർ et al., 2005; റെൻഹൽ മറ്റുള്ളവരും., 2009).

QPCR (അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ് (എബിഐ) പ്രിസം എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്, ഫോസ്റ്റർ സിറ്റി, സി‌എ) അനുബന്ധ ഡിഎൻ‌എയുടെ അളവ് കണക്കാക്കിയാണ് താൽ‌പ്പര്യമുള്ള ഓരോ ജീൻ പ്രൊമോട്ടറിലെയും പ്രോട്ടീൻ ബൈൻഡിംഗിന്റെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കുന്നത്. എസ്‌വൈ‌ബി‌ആർ ഗ്രീന്റെ (അപ്ലൈഡ് ബയോസിസ്റ്റംസ്, സി‌എ) സാന്നിധ്യത്തിൽ ഇൻ‌പുട്ട് അല്ലെങ്കിൽ‌ ടോട്ടൽ‌ ഡി‌എൻ‌എ (നോൺ‌ഇമ്യൂണോപ്രസിസിറ്റേറ്റഡ്), ഇമ്യൂണോ പ്രെസിപിറ്റേറ്റഡ് ഡി‌എൻ‌എ എന്നിവ മൂന്നിരട്ടിയായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു. ഓരോ സാമ്പിളിൽ നിന്നും സിടി മൂല്യങ്ങൾ സീക്വൻസ് ഡിറ്റക്ടർ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ലഭിച്ചു. ടെംപ്ലേറ്റ് ഡി‌എൻ‌എയുടെ ആപേക്ഷിക അളവ് ΔΔCt രീതി ഉപയോഗിച്ച് നടപ്പാക്കി (സാങ്കോവ മറ്റുള്ളവരും, 2004). ഉപയോഗിച്ച പ്രൈമറുകൾ‌: BDNF പ്രൊമോട്ടർ‌ 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5 പ്രൊമോട്ടർ‌: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; GTGCCCCGCTCTTGTTATTA Cck പ്രൊമോട്ടർ‌: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG പ്രൊഡിനോർഫിൻ പ്രൊമോട്ടർ: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

സ്ഥിതിവിവര വിശകലനം

എല്ലാ ഡാറ്റയും മാർഗമായി അവതരിപ്പിക്കുന്നു mean ശരാശരിയിലെ സ്റ്റാൻഡേർഡ് പിശക്. സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വ്യത്യാസം നിർണ്ണയിക്കുന്നത് വിദ്യാർത്ഥിയുടെ രണ്ട് വാലുള്ള ടി-ടെസ്റ്റ് (പി <0.05) ആണ്. ഒന്നിലധികം താരതമ്യങ്ങൾ നടത്തിയപ്പോൾ, ബോൺഫെറോണി തിരുത്തൽ ഉപയോഗിച്ച് പി-മൂല്യങ്ങൾ ക്രമീകരിച്ചു.

പോവുക:

കടപ്പാടുകൾ

സഹായകരമായ ചർച്ചകൾക്ക് ഞങ്ങൾ വിൽ റെന്തലിനും അരവിന്ദ് കുമാറിനും നന്ദി പറയുന്നു. ഈ പരീക്ഷണങ്ങൾക്ക് ധനസഹായം നൽകിയതിന് നിഡയോട് നന്ദി പറയാൻ ഞങ്ങൾ ആഗ്രഹിക്കുന്നു.

പോവുക:

അടിക്കുറിപ്പുകൾ

പ്രസാധകന്റെ നിരാകരണം: പ്രസിദ്ധീകരണത്തിനായി അംഗീകരിക്കപ്പെട്ട രേഖപ്പേരമില്ലാത്ത കൈയ്യെഴുത്തുപ്രതിയുടെ ഒരു PDF ഫയൽ ആണ് ഇത്. ഞങ്ങളുടെ കസ്റ്റമറുകൾക്കുള്ള ഒരു സേവനമെന്ന നിലയിൽ, കയ്യെഴുത്തുപ്രതിയുടെ ഈ ആദ്യകാല പതിപ്പാണ് ഞങ്ങൾ നൽകുന്നത്. ഇതിന്റെ ശരിയായ രൂപത്തിൽ പ്രസിദ്ധീകരിക്കപ്പെടുന്നതിനു മുൻപായി ഈ തെളിവുനൽകുന്നതിനുള്ള തെളിവ് കോപ്പിഡിറ്റിംഗ്, ടൈപ്പ്സെറ്റിങ്, അവലോകനത്തിനുണ്ടാകും. ഉൽപ്പാദന പ്രക്രിയയുടെ പിശകുകൾ കണ്ടേക്കാം, അത് ഉള്ളടക്കത്തെ ബാധിക്കും, ഒപ്പം ജേണലിസം ബാധകമാകുന്ന എല്ലാ നിയമപരമായ നിരാകരണങ്ങളും.

വർഗ്ഗീകരണ നിബന്ധനകൾ:

വിഭാഗം: #1 നാഡീവ്യവസ്ഥകളുടെ സെല്ലുലാർ, മോളിക്യുലർ ബയോളജി

പോവുക:

അവലംബം

  1. ആൻഡേഴ്സൺ എം, കൊൻറാഡി സി, സെൻസി എം‌എ. സി‌എ‌എം‌പി പ്രതികരണ മൂലക-ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ ഡോപാമൈൻ-ആശ്രിത ജീൻ എക്‌സ്‌പ്രഷന് ആവശ്യമുണ്ട്, പക്ഷേ ഡോപാമൈൻ-ഡിനർവേറ്റഡ് സ്ട്രിയാറ്റം അല്ല. ജെ ന്യൂറോസി. 2001; 21: 9930 - 43. [PubMed]
  2. ബാരറ്റ് എം, ഒലിവിയർ ജെഡി, പെറോട്ടി എൽ‌ഐ, ഡിലിയോൺ ആർ‌ജെ, ബെർ‌ട്ടൺ‌ ഒ, ഐഷ് എ‌ജെ, ഇം‌പേ എസ്, സ്റ്റോം ഡി‌ആർ, നെവ് ആർ‌എൽ, യിൻ ജെ‌സി, സക്കറിയോ വി, നെസ്‌ലർ ഇജെ. ന്യൂക്ലിയസിലെ അക്രംബെൻസിലെ CREB പ്രവർത്തനം വൈകാരിക ഉത്തേജനങ്ങളോടുള്ള പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങളുടെ ഗേറ്റിംഗ് നിയന്ത്രിക്കുന്നു. പ്രോക് നാറ്റ് അക്കാഡ് സയൻസ് യുഎസ് എ. എക്സ്നൂംക്സ്; [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  3. ബീൻ‌ഫെൽഡ് എം‌സി, കൊനോലി കെ‌ജെ, പിയേഴ്സ് ആർ‌സി. കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സ ന്യൂക്ലിയസിലെ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ (സിസികെ) വർദ്ധിപ്പിക്കും, സ്വതന്ത്രമായി ചലിക്കുന്ന എലികളുടെ ഉണർവ്വ്, കൊക്കെയ്നുമായി പെരുമാറ്റരീതിയിൽ സംവേദനക്ഷമതയുള്ള എലികളിൽ ഇത് വർദ്ധിക്കുന്നു. ജെ ന്യൂറോകെം. 2002; 81: 1021 - 7. [PubMed]
  4. ബെർണാഡ് സി, സട്ടർ എ, വിൻസൺ സി, റാറ്റിന au സി, ചൈവിയേൽ ജെ, കോർഡിയർ-ബുസാറ്റ് എം. പെപ്റ്റോണുകൾ സൈക്ലിക് അഡെനോസിൻ മോണോഫോസ്ഫേറ്റ് പ്രതികരണ മൂലക-ബന്ധിത ഘടകങ്ങൾ വഴി കുടൽ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു. എൻ‌ഡോക്രൈനോളജി. 2001; 142: 721 - 9. [PubMed]
  5. കൊക്കെയ്നുമായുള്ള ദീർഘചതുരം എക്സ്പോർട്ടുചെയ്യൽ ഗ്രീൻഗാർഡ് പി. ഇഫക്ടുകൾ ന്യൂറോണൽ പ്രോട്ടീൻ Cdk5 ആണ് നിയന്ത്രിക്കുന്നത്. ബിൻബി ജെ.എ, ചെൻ ജെ, ടെയ്ലർ ജെ.ആർ, സ്വെൻനിങ്സൺ പി, നിഷി എ, സ്നെഡർ ജി.എൽ, യാൻ സി, സാഗാവ സി കെ, ഒഇമീറ്റ് സിസി, നായർ എസി, നെസ്റ്റ്ലർ ഇ.ജെ. പ്രകൃതി. XXX- നം: 2001-410. [PubMed]
  6. ചാ-മോൾസ്റ്റാഡ് എച്ച്, കെല്ലർ ഡിഎം, യോക്കം ജിഎസ്, ഇമ്പി എസ്, ഗുഡ്മാൻ ആർ‌എച്ച്. CAMP- പ്രതികരണ ഘടകത്തിലേക്ക് CREB എന്ന ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകത്തിന്റെ സെൽ-തരം-നിർദ്ദിഷ്ട ബൈൻഡിംഗ്. പ്രോക് നാറ്റ് അക്കാഡ് സയൻസ് യുഎസ് എ. എക്സ്നൂംക്സ്; [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  7. ചെൻ ജെ, ന്യൂ എച്ച്ഇ, കെൽസ് എംബി, ഹിരോയി എൻ, നകബെപ്പു വൈ, ഹോപ്പ് ബിടി, നെസ്‌ലർ ഇജെ. ഇലക്ട്രോകൺ‌വാൾ‌സീവ് പിടിച്ചെടുക്കലും കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സകളും ഉപയോഗിച്ച് ഡെൽറ്റ ഫോസ്ബി, ഫോസ്ബി പോലുള്ള പ്രോട്ടീനുകളുടെ നിയന്ത്രണം. മോഡൽ ഫാർമകോൾ. 1995; 48: 880 - 9. [PubMed]
  8. ചെൻ ജെ, കെൽസ് എംബി, സെംഗ് ജി, സാകൈ എൻ, സ്റ്റെഫെൻ സി, ഷക്കറ്റ് പി.ഇ, പിസിപ്പോട്ടോ എം.ആർ., ഡൂമാൻ ആർ.എസ്., നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. തലച്ചോറിൽ ടാർഗെഗാനിക് മൃഗങ്ങൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന, ടാർഗെറ്റ് ചെയ്ത ജനിതകപ്രകടനമാണ്. മോള് ഫാര്മാക്കോള്. XXX- നം: 1998-54. [PubMed]
  9. ചെൻ ജെ, ഴാങ് വൈ, കെൽസ് എം‌ബി, സ്റ്റെഫെൻ സി, ആംഗ് ഇ‌എസ്, സെങ് എൽ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. വിട്ടുമാറാത്ത ഇലക്ട്രോകൺ‌വാൾ‌സീവ് പിടുത്തം വഴി ഹിപ്പോകാമ്പസിലെ സൈക്ലിൻ-ആശ്രിത കൈനാസ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്‌സിന്റെ ഇൻഡക്ഷൻ: osFosB യുടെ പങ്ക്. ജെ ന്യൂറോസി. 5; 2000: 20 - 8965. [PubMed]
  10. ചിനെനോവ് വൈ, കെർപോള ടി.കെ. പല തരത്തിലുള്ള ഏറ്റുമുട്ടലുകൾ: ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ റെഗുലേറ്ററി സവിശേഷതയ്ക്ക് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്ന ഫോസ്-ജുൻ ഇടപെടലുകൾ. ഓങ്കോജൻ. 2001; 20: 2438 - 52. [PubMed]
  11. കോൾ ആർ‌എൽ, കൊൻറാഡി സി, ഡഗ്ലസ് ജെ, ഹൈമാൻ എസ്ഇ. ആംഫെറ്റാമൈൻ, ഡോപാമൈൻ എന്നിവയ്ക്കുള്ള ന്യൂറോണൽ അഡാപ്റ്റേഷൻ: എലി സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ പ്രോഡിനോർഫിൻ ജീൻ നിയന്ത്രണത്തിന്റെ തന്മാത്രാ സംവിധാനങ്ങൾ. ന്യൂറോൺ. 1995; 14: 813 - 23. [PubMed]
  12. ഡീവാൽ ഡിജി, റേച ow ധരി ആർ, ഡോക്രെ ജിജെ, ഡിമാലൈൻ ആർ. എസ്ടിസി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സെല്ലുകളിൽ പി‌എ‌സി‌എപി സി‌സി‌കെ ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ നിയന്ത്രണം. ആം ജെ ഫിസിയോൾ ഗ്യാസ്ട്രോഇന്റസ്റ്റ് ലിവർ ഫിസിയോൾ. 1; 2000: G279 - 605. [PubMed]
  13. ഡിംഗ് എക്സ്ഇസഡ്, മൊച്ചെട്ടി I. എലി സ്ട്രിയാറ്റത്തിലെ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ എംആർ‌എൻ‌എ ഉള്ളടക്കത്തിന്റെ ഡോപാമിനേർജിക് നിയന്ത്രണം. ബ്രെയിൻ റെസ് മോഡൽ ബ്രെയിൻ റെസ്. 1992; 12: 77 - 83. [PubMed]
  14. ഫോറസ്റ്റ് എസ്, മക്നമറ സി. ഐഡി ഫാമിലി ഓഫ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളും വാസ്കുലർ ലെസിയോൺ രൂപീകരണവും. ആർട്ടീരിയോസ്‌ക്ലർ ത്രോംബ് വാസ്ക് ബയോൾ. 2004; 24: 2014 - 20. [PubMed]
  15. ജെവ്രി ജെ സി, കോർഡിയർ-ബുസ്സാറ്റ് എം, നെമോസ്-ഗെയ്‌ലാർഡ് ഇ, ചൈവിയാലെ ജെ‌എ, അബെല്ലോ ജെ. പ്രോട്ടീൻ ഹൈഡ്രോലൈസേറ്റുകൾ വഴി കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ ആക്റ്റിവേഷനായി ചാക്രിക എഎംപി-, കാൽസ്യം-ആശ്രിത പ്രോട്ടീൻ കൈനാസുകളുടെ സഹ-ആവശ്യകത. ജെ ബയോൺ ചെം. 2002; 277: 22407 - 13. [PubMed]
  16. ഗ്രീൻ ടി‌എ, അലിഭായ് ഐ‌എൻ‌, അന്റർ‌ബെർഗ് എസ്, നെവ് ആർ‌എൽ, ഘോസ് എസ്, ടമ്മിംഗ സി‌എ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലെ ആക്റ്റിവേറ്റിംഗ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളുടെ (എടിഎഫ്) എടിഎഫ്എക്സ്എൻഎംഎക്സ്, എടിഎഫ്എക്സ്എൻഎംഎക്സ്, എടിഎഫ്എക്സ്എൻഎംഎക്സ് എന്നിവയുടെ ഇൻഡക്ഷൻ, വൈകാരിക സ്വഭാവത്തെ നിയന്ത്രിക്കൽ. ജെ ന്യൂറോസി. 2; 3: 4 - 2008. [PubMed]
  17. ഹാമിൽട്ടൺ എം‌ഇ, റെഡോണ്ടോ ജെ‌എൽ, ഫ്രീമാൻ എ‌എസ്. അക്യൂട്ട് മയക്കുമരുന്ന് അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന് മറുപടിയായി എലി ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലെ ഡോപാമൈൻ, കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ എന്നിവയുടെ ഓവർഫ്ലോ. സിനാപ്‌സ്. 2000; 38: 238 - 42. [PubMed]
  18. ഹാൻസെൻ ടിവി, റെഹ്ഫെൽഡ് ജെ.എഫ്, നീൽസൺ എഫ്.സി. മൈറ്റോജെൻ-ആക്റ്റിവേറ്റഡ് പ്രോട്ടീൻ കൈനാസും പ്രോട്ടീൻ കൈനാസും സൈക്ലിക് അഡെനോസിൻ 3 ′, 5′-മോണോഫോസ്ഫേറ്റ് പ്രതികരണ ഘടക-ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ ഒരു സിഗ്നലിംഗ് പാത കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു. മോഡൽ എൻഡോക്രിനോൽ. 1999; 13: 466-75. [PubMed]
  19. ഹാൻസെൻ ടിവി, നീൽസൺ എഫ്.സി. ന്യൂറോണൽ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ നിയന്ത്രണം. സ്കാൻ‌ഡ് ജെ ക്ലിൻ ലാബ് ഇൻ‌വെസ്റ്റ് സപ്ലൈ. 2001; 234: 61 - 7. [PubMed]
  20. ഹാൻസെൻ ടിവി. കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ: പ്രൊമോട്ടർ ഘടകങ്ങൾ, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങൾ, സിഗ്നലിംഗ് പാതകൾ. പെപ്റ്റൈഡുകൾ. 2001; 22: 1201 - 11. [PubMed]
  21. ഹാൻസെൻ ടിവി, റെഹ്ഫെൽഡ് ജെ.എഫ്, നീൽസൺ എഫ്.സി. സി‌ആർ‌ഇബിയുടെയും കോ-ആക്റ്റിവേറ്ററായ സിബിപിയുടെയും കോർഡിനേറ്റ് ആക്റ്റിവേഷൻ വഴി കെ‌സി‌എല്ലും ഫോർ‌സ്‌കോളിനും കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ സമന്വയിപ്പിക്കുന്നു. ജെ ന്യൂറോകെം. 2004; 89: 15 - 23. [PubMed]
  22. ഹോൺ ആർ‌എസ്, ഡിക്സൺ ജെ‌ഇ. എലിയുടെ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീനിന്റെ ആവിഷ്കാരത്തിന് അത്യാവശ്യമായ ഒരു ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ എൻഹാൻസറിൽ മനുഷ്യ സി-ഫോസ് ജീനിന്റെ -296 ഘടകത്തിന് സമാനമായ ഒരു ശ്രേണി അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ജെ ബയോൺ ചെം. 1990; 265: 15455 - 63. [PubMed]
  23. ഹിരോയി എൻ, മാരെക് ജിജെ, ബ്ര rown ൺ ജെ‌ആർ, യെ എച്ച്, സൗദ ou എഫ്, വൈദ്യ വി‌എ, ഡുമാൻ ആർ‌എസ്, ഗ്രീൻ‌ബെർഗ് എം‌ഇ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. വിട്ടുമാറാത്ത ഇലക്ട്രോകൺ‌വാൾ‌സീവ് പിടിച്ചെടുക്കലുകളുടെ തന്മാത്ര, സെല്ലുലാർ, പെരുമാറ്റ പ്രവർത്തനങ്ങൾ എന്നിവയിൽ ഫോസ്ബി ജീനിന്റെ പ്രധാന പങ്ക്. ജെ ന്യൂറോസി 1998. 1998; 18: 6952 - 62. [PubMed]
  24. മെസോ-ലിംബിക് ന്യൂറോണുകളിൽ ഡോപാമൈൻ, സി‌സി‌കെ എന്നിവയുടെ സഹവർത്തിത്വത്തിനുള്ള തെളിവുകൾ ഹോക്ഫെൽറ്റ് ടി, റെഹ്ഫെൽഡ് ജെ‌എഫ്, സ്കിർബോൾ എൽ, ഐവ്‌മാർക്ക് ബി, ഗോൾഡ്‌സ്റ്റൈൻ എം, മാർ‌ക്കി കെ. പ്രകൃതി. 1980; 285: 476 - 8. [PubMed]
  25. ഹോപ്പ് ബിടി, കെൽസ് എംബി, ഡുമാൻ ആർ‌എസ്, നെസ്‌ലർ ഇജെ. വിട്ടുമാറാത്ത ഇലക്ട്രോകൺ‌വാൾ‌സീവ് പിടുത്തം (ഇസി‌എസ്) ചികിത്സ ഫലമായി തലച്ചോറിലെ എപി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് കോംപ്ലക്‌സിന്റെ പ്രകടനത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നു. ജെ ന്യൂറോസി. 1; 1994: 14 - 4318. [PubMed]
  26. ഹോപ്പ് ബി.ടി, നൈ ഹെ, കെൽസ് എംബി, സെൽ ഡി.ഡബ്ല്യു, ഇഡരോല എം.ജെ, നകബെപ് വൈ, ഡുമാൻ ആർ.എസ്.എസ്, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. ദീർഘകാല കോക്കായുടെയും മറ്റു വിട്ടുമാറാത്ത ചികിത്സകളുടെയും തലച്ചോറിലെ മാറ്റം വരുത്തിയ ഫോസ് പോലുള്ള പ്രോട്ടീനുകൾ അടങ്ങിയ ഒരു ദീർഘകാല AP-1 സങ്കീർണ്ണതയെ ഊട്ടിയുറപ്പിക്കുക. ന്യൂറോൺ. XXX- നം: 1994-13. [PubMed]
  27. ഹുവാങ് കെഎക്സ്, വാൾട്ടേഴ്‌സ് ജെ. എലി സ്ട്രിയാറ്റത്തിലെ എപി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ ഡി‌എൻ‌എ ബൈൻഡിംഗ് ആക്റ്റിവിറ്റിയുടെ ഡോപാമിനേർജിക് നിയന്ത്രണം. ന്യൂറോ സയൻസ്. 1; 1996: 75 - 757. [PubMed]
  28. ഇംപേ എസ്, മക്കാർക്കിൾ എസ്ആർ, ചാ-മോൾസ്റ്റാഡ് എച്ച്, ഡ്വെയർ ജെഎം, യോക്കം ജിഎസ്, ബോസ് ജെഎം, മക്വീനി എസ്, ഡൺ ജെജെ, മണ്ടേൽ ജി, ഗുഡ്മാൻ ആർ‌എച്ച്. CREB റെഗുലോൺ നിർവചിക്കുന്നു: ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ റെഗുലേറ്ററി പ്രദേശങ്ങളുടെ ജീനോം-വൈഡ് വിശകലനം. സെൽ. 2004; 119: 1041 - 54. [PubMed]
  29. ജോഹന്നസെൻ എം, ഡെൽ‌ഗണ്ടി എം‌പി, മോയൻസ് യു. സി‌ആർ‌ബിയെ ഓണാക്കുന്നത് എന്താണ്? സെൽ സിഗ്നൽ. 2004; 16: 1211 - 27. [PubMed]
  30. ജോസെലിൻ എസ്‌എ, വാക്കറിനോ എഫ്ജെ. എലികളിലെ കണ്ടീഷൻ ചെയ്ത പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ വികാസത്തിൽ സി‌സി‌കെ (എ), സി‌സി‌കെ (ബി) എതിരാളികളുടെ എതിർപ്പ്. ബെഹവ് ഫാർമകോൾ. 1996; 7: 505 - 512. [PubMed]
  31. ജോസെലിൻ എസ്‌എ, ഡി ക്രിസ്റ്റോഫാരോ എ, വാക്കറിനോ എഫ്ജെ. എലികളിൽ കൊക്കെയ്ൻ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്ന കണ്ടീഷൻഡ് ആക്റ്റിവിറ്റി ഏറ്റെടുക്കുന്നതിൽ സി‌സി‌കെ (എ) റിസപ്റ്റർ പങ്കാളിത്തത്തിനുള്ള തെളിവ്. ബ്രെയിൻ റെസ്. 1997; 763: 93 - 102. [PubMed]
  32. കെൽസ് എംബി, ചെൻ ജെ, കാർലെസൺ WA, ജൂനിയർ, വിസ്ലർ കെ, ഗിൽഡൻ എൽ, ബെക്മാൻ എ.എം., സ്റ്റെഫെൻ സി, ഷാങ് വൈ ജെ, മാറോട്ടി എൽ, സെൽ ഡി ഡബ്ല്യു, ടാക്കാച്ച് ടി, ബാരനൗസ്കാസ് ജി, സൂർമിയർ ഡി ജെ, നെവ് ആർ ആർ, ഡുമാൻ ആർഎസ്, പിസിപ്പോട്ടോ എംആർ , നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. തലച്ചോറിലെ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്റ്റർ ഡെൽറ്റ ഫോസ്ബിനെ വ്യാഖ്യാനിക്കുന്നത് കൊക്കെയ്നുമായി സംവേദനക്ഷമതയെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. പ്രകൃതി. XXX- നം: 1999-401. [PubMed]
  33. കുമാർ എ, ചോയി കെ‌എച്ച്, റെൻ‌താൽ ഡബ്ല്യു, സാങ്കോവ എൻ‌എം, തിയോബാൾഡ് ഡിഇ, ട്രൂംഗ് എച്ച് ടി, റുസ്സോ എസ്‌ജെ, ലാപ്ലാന്റ് ക്യു, സസാക്കി ടി‌എസ്, വിസ്‌ലർ കെ‌എൻ, നെവ് ആർ‌എൽ, സെൽഫ് ഡി‌ഡബ്ല്യു, നെസ്‌ലർ ഇജെ. സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് പ്ലാസ്റ്റിറ്റിക്ക് അടിസ്ഥാനമായ ഒരു പ്രധാന സംവിധാനമാണ് ക്രോമാറ്റിൻ പുനർ‌നിർമ്മാണം. ന്യൂറോൺ. 2005; 48: 303 - 14. [PubMed]
  34. മാറ്റ്സൺ ബിജെ, ബോസെർട്ട് ജെഎം, സിമ്മൺസ് ഡിഇ, നോസാക്കി എൻ, നാഗാർക്കർ ഡി, ക്രെറ്റർ ജെഡി, ഹോപ്പ് ബിടി. കൊക്കെയ്ൻ-സെൻസിറ്റൈസ്ഡ് എലികളുടെ ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പൻസിലെ കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് സി‌ആർ‌ഇബി ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ പ്രവർത്തനക്ഷമമാക്കുന്നത് എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ സിഗ്നലുമായി ബന്ധപ്പെട്ട കൈനേസിന്റെ സജീവമാക്കൽ വഴിയാണ്, പക്ഷേ പ്രോട്ടീൻ കൈനാസ് എ. ജെ ന്യൂറോകെം അല്ല. 2005; 95: 1481 - 94. [PubMed]
  35. മക്ലംഗ്ഗ് CA, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. ജീൻ ആവിഷ്കാരവും കോകൈൻ റിവാർഡും ക്രെബും ഡെൽറ്റാ ഫോസ്ബും നിയന്ത്രിക്കുന്നു. നാറ്റ് ന്യൂറോ സിയ. XXX- നം: 2003-6. [PubMed]
  36. മക്ലംഗ് സി.എ, യുലറി പി.ജി, പെറൊട്ടി എൽഐ, സക്കറിയാവു വി, ബെർറ്റൻ ഓ, നെസ്ലർ ഇജെ. DeltaFosB: തലച്ചോറിലെ ദീർഘകാല ആധാരത്തിനുള്ള ഒരു തന്മാത്രാ സ്വാരം. ബ്രെയിൻ റിസോൾ മോൾ ബ്രെയിൻ റിസ. XXX- നം: 2004-132. [PubMed]
  37. നെസ്‌ലർ ഇ.ജെ, കെൽസ് എം.ബി, ചെൻ ജെ.എസ്. Os ഫോസ്ബി: ദീർഘകാല ന്യൂറൽ, ബിഹേവിയറൽ പ്ലാസ്റ്റിറ്റിയുടെ തന്മാത്രാ മധ്യസ്ഥൻ. ബ്രെയിൻ റെസ്. 1999; 835: 10 - 17. [PubMed]
  38. നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. ആസക്തിക്ക് ഒരു പൊതുവായ മോളിക്യൂലാർ പാത്ത്വേ ഉണ്ടോ? നാറ്റ് ന്യൂറോ സിയ. XXX- നം: 2005-8. [PubMed]
  39. നെസ്‌ലർ ഇ.ജെ. ആസക്തിയുടെ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സംവിധാനങ്ങൾ: ഡെൽറ്റഫോസ്ബിയുടെ പങ്ക്. ഫിലോസ് ട്രാൻസ് ആർ സോക് ലോണ്ട് ബി ബയോൾ സയൻസ്. 2008; 363: 3245 - 55. [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  40. പിറോട്ടി എൽഐ, വീവർ ആർ ആർ, റോബിസൺ ബി, റെൻഘൽ ഡബ്ല്യു, എൽ ഗ്രേറ്റർ, യസ്ദാനി എസ്, എൽമോർ ആർ.ജി., നാൻ ഡി ഡി, സെലി ഡീ, മാർട്ടിൻ ബി, സിം-ശെൽലി എൽ, ബച്ചെൽ ആർ.കെ, സെൽ ഡി ഡബ്ല്യു, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. മയക്കുമരുന്ന് ദുരുപയോഗം ചെയ്തുകൊണ്ട് തലച്ചോറിലെ DeltaFosB ഉദ്ധരണിയിലെ പ്രത്യേക രീതികൾ. സമന്വയിപ്പിക്കുക. XXX- നം: 2008-62. [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  41. റാൻഡോ OJ, ചാങ് HY. ക്രോമാറ്റിൻ ഘടനയുടെ ജീനോം-വൈഡ് കാഴ്ചകൾ. ആനു റവ ബയോകെം. 2009; 78: 245 - 71. [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  42. റെന്തൽ ഡബ്ല്യു, കാർലെ ടി‌എൽ, മേസ് I, കോവിംഗ്ടൺ എച്ച്ഇ, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ഡി., ട്രൂംഗ് എച്ച് ടി, അലിഭായ് ഐ, കുമാർ എ, മോണ്ട്ഗോമറി ആർ‌എൽ, ഓൾ‌സൺ ഇ‌എൻ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. വിട്ടുമാറാത്ത ആംഫെറ്റാമൈൻ എക്‌സ്‌പോഷറിന് ശേഷം സി-ഫോസ് ജീനിന്റെ എപിജനെറ്റിക് ഡിസെൻസിറ്റൈസേഷനെ ഡെൽറ്റ ഫോസ്ബി മധ്യസ്ഥമാക്കുന്നു. ജെ ന്യൂറോസി. 3; 2008: 28 - 7344. [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  43. റിയാസ് എസ് ഡി, റിയസോ എസ്.ജെ, വിയാലു വി, ചക്രവർത്തി എസ്, കോഡഡേക്ക് ടിജെ, സ്റ്റാക്ക് എ, കബബാജ് എം, സിയേഡർ ഡി, റോബിസൺ എ ജെ, ലാപ്ലാണ്ട് ക്വി, ഡിറ്റ്സ് ഡി എം, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. കൊക്കെയ്ന്റെ ക്രോമറ്റിൻ നിയന്ത്രണം സംബന്ധിച്ച ജീനോം വിശകലനം sirtuins ന് ഒരു പങ്ക് വെളിപ്പെടുത്തുന്നു. ന്യൂറോൺ. XXX- നം: 3-2009. [PMC സ്വതന്ത്ര ലേഖനം] [PubMed]
  44. റോട്‌സിംഗർ എസ്, ബുഷ് ഡിഇ, വാക്കറിനോ എഫ്ജെ. മെസോലിംബിക് ഡോപാമൈൻ ഫംഗ്ഷന്റെ കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ മോഡുലേഷൻ: പ്രചോദിത സ്വഭാവത്തിന്റെ നിയന്ത്രണം. ഫാർമകോൾ ടോക്സികോൾ. 2002; 91: 404 - 13. [PubMed]
  45. റൂർക്കെ ഐജെ, ഹാൻസെൻ ടിവി, നെർലോവ് സി, റെഹ്ഫെൽഡ് ജെഎഫ്, നീൽസൺ എഫ്‌സി. കോളിസിസ്റ്റോക്കിനിൻ ജീൻ പ്രൊമോട്ടറിലെ ജക്സ്റ്റാപോസ്ഡ് ഇ-ബോക്സും സി‌എ‌എം‌പി / ടി‌പി‌എ പ്രതികരിക്കുന്ന ഘടകങ്ങളും തമ്മിലുള്ള നെഗറ്റീവ് സഹകരണം. ഫെബ്സ് ലെറ്റ്. 1999; 448: 15 - 8. [PubMed]
  46. ഷാ-ലച്ച്മാൻ ടിസെഡ്, ബാരറ്റ് എം, വാലസ് ടി, ഗിൽ‌ഡൻ എൽ, സക്കറിയോ വി, ഇം‌പേ എസ്, ഡുമാൻ ആർ‌എസ്, സ്റ്റോം ഡി, നെസ്‌ലർ ഇജെ. നാൽട്രെക്സോൺ-പ്രിസിപിറ്റഡ് മോർഫിൻ പിൻവലിക്കൽ സമയത്ത് CRE- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ പ്രാദേശിക, സെല്ലുലാർ മാപ്പിംഗ്. ജെ ന്യൂറോസി. 2002; 22: 3663 - 3672. [PubMed]
  47. ഷാ-ലച്ച്മാൻ ടിസെഡ്, ഇമ്പി എസ്, സ്റ്റോം ഡി, നെസ്‌ലർ ഇജെ. ആംഫെറ്റാമൈൻ മ mouse സ് തലച്ചോറിലെ CRE- മെഡിയേറ്റഡ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ നിയന്ത്രണം. സിനാപ്‌സ്. 2003; 48: 10 - 7. [PubMed]
  48. ഷെങ് എം, മക്ഫാൻഡൻ ജി, ഗ്രീൻബെർഗ് ME. മെംബ്രൻ ഡിപോലറൈസേഷനും കാൽസ്യവും ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ CREB യുടെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ വഴി സി-ഫോസ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു. ന്യൂറോൺ. 1990; 4: 571 - 82. [PubMed]
  49. സാങ്കോവ എൻ‌എം, കുമാർ എ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. നിശിതവും വിട്ടുമാറാത്തതുമായ ഇലക്ട്രോകൺ‌വാൾ‌സീവ് പിടിച്ചെടുക്കലിനുശേഷം എലി ഹിപ്പോകാമ്പസിലെ ജീൻ പ്രൊമോട്ടർ പ്രദേശങ്ങളിലെ ഹിസ്റ്റോൺ പരിഷ്കാരങ്ങൾ. ജെ ന്യൂറോസി. 2004; 24: 5603 - 10. [PubMed]
  50. ഉല്ലാരി പി.ജി, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ. Ser27 phosphorylation വഴി ഡെൽറ്റാ ഫോസ്ബിൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ നിയന്ത്രണം. Eur J Neurosci. XXX- നം: 2007-25. [PubMed]
  51. വാക്കറിനോ എഫ്ജെ. സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റ് റിവാർഡിലും അനുബന്ധ പെരുമാറ്റങ്ങളിലും ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പൻസ് ഡോപാമൈൻ-സിസികെ ഇടപെടലുകൾ. ന്യൂറോസി ബയോബെഹാവ് റവ. എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്; [PubMed]
  52. സക്കറിയോ വി, ബോലനോസ് സി‌എ, സെല്ലി ഡി‌ഇ, തിയോബാൾഡ് ഡി, കാസിഡി എം‌പി, കെൽ‌സ് എം‌ബി, ഷാ-ലച്ച്മാൻ ടി, ബെർ‌ട്ടൺ ഓ, സിം-സെല്ലി എൽ‌ജെ, ഡിലിയോൺ ആർ‌ജെ, കുമാർ എ, നെസ്‌ലർ ഇജെ. Os ഫോസ്ബി: മോർഫിൻ പ്രവർത്തനത്തിൽ ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പൻസിലെ os ഫോസ്ബിക്ക് ഒരു പ്രധാന പങ്ക്. നേച്ചർ ന്യൂറോസി. 2006; 9: 205 - 11. [PubMed]