വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന
ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലെ (എൻ‌എസി) ഡോപാമിനോസെപ്റ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് മാറ്റം ഒരു അഡാപ്റ്റീവ് ന്യൂറോണൽ പ്രതികരണമായി hyp ഹിക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് ദീർഘകാലം നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന ആസക്തി സ്വഭാവങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഉയർന്ന അളവിലുള്ള ഡോപാമൈൻ D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്ററുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ഇടത്തരം വലിപ്പത്തിലുള്ള സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളുടെ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഉപജനസംഖ്യകളാണ് NAcc പ്രധാനമായും ഉൾക്കൊള്ളുന്നത്. നിലവിലെ പഠനത്തിൽ, എൻ‌എ‌സി‌സിയിലെ വ്യത്യസ്തമായ D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ഇടത്തരം വലിപ്പത്തിലുള്ള സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളിൽ വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം ഞങ്ങൾ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത വിശകലനം ചെയ്തു. ഈ പഠനങ്ങൾ D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്റർ പ്രൊമോട്ടറുടെ (Drd1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP) നിയന്ത്രണത്തിൽ EGFP പ്രകടിപ്പിച്ച ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികളെ ഉപയോഗിച്ചു. കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയുടെ 28 ദിവസത്തിനും പിൻവലിക്കലിന്റെ 2 ദിവസത്തിനും ശേഷം, Drd1-EGFP-, Drd2-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത വർദ്ധിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, മയക്കുമരുന്ന് പിൻവലിക്കലിനുശേഷം Drd1-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ 30 ദിവസങ്ങളിൽ മാത്രമാണ് നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത വർദ്ധിക്കുന്നത്. മയക്കുമരുന്ന് പിൻവലിക്കലിന്റെ 1 ദിവസത്തിനുശേഷം Drd2-EGFP-, Drd2-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിലും വർദ്ധിച്ച osFosB എക്സ്പ്രഷൻ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, പക്ഷേ മയക്കുമരുന്ന് പിൻവലിക്കലിന്റെ 1 ദിവസത്തിനുശേഷം Drd30-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ മാത്രം. വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയ്ക്കുശേഷം വർദ്ധിച്ച നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത D1- റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ന്യൂറോണുകളിൽ മാത്രമേ സ്ഥിരതയുള്ളൂവെന്നും oXFosB എക്സ്പ്രഷൻ D1 ലെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ രൂപവത്കരണവും കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ പരിപാലനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്നും D2 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ന്യൂറോണുകൾ NAcc- ൽ.
വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയയിലെ ന്യൂറോണുകൾ ചേർന്നതാണ് മെസോലിംബിക് ഡോപാമെർജിക് പാത്ത്വേ, ഇത് ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പെൻസ് (എൻ‌എസിസി), ഓൾഫാക്ടറി ട്യൂബർ സർക്കിൾ, പ്രീഫ്രോണ്ടൽ കോർട്ടെക്സ്, അമിഗഡാല (1എന്നാൽ, സന്ധാൻഷ്യ നിഗ്രയിലെ നിഗ്റാ സ്റ്റെററ്റൽ ദപോമൈനർജെറിക് ന്യൂറോണുകൾ (പാര്സ് കോംപാക്ടാ) ഡോർസോൾ സ്ട്രെയ്ലത്തിന് ഒരു ആഴ്ന്നിറഞ്ഞ പ്രൊജക്ഷൻ നൽകുന്നു (2). സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റുകൾ NAcc- ലെ ഡോപാമൈനിന്റെ സിനാപ്റ്റിക് സാന്ദ്രത ഉയർത്തുന്നു: കൊക്കെയ്ൻ, സിനാപ്റ്റിക് പിളർപ്പിൽ നിന്ന് ഡോപാമൈൻ എടുക്കുന്നത് തടയുന്നതിലൂടെ, നാഡി ടെർമിനലുകളിൽ നിന്ന് ഡോപാമൈൻ റിലീസ് പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ ആംഫെറ്റാമൈൻ.3-5). സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റുകളുടെ ആവർത്തിച്ചുള്ള, ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ ഈ മരുന്നുകളുടെ രൂക്ഷമായ ഉത്തേജക ഫലങ്ങളോട് വർദ്ധിച്ച പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് (സെൻസിറ്റൈസേഷൻ) കാരണമാകുന്നു (6-8). മയക്കുമരുന്ന് ഉത്തേജിത പെരുമാറ്റത്തിന് അടിത്തറയുള്ള അനുഭവം-ആധിക്യം കൊണ്ടുള്ള പ്ലാസ്റ്റിറ്റിയിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നതിന് പ്രധാനമാണ്.
ഡോപാമൈനു പുറമേ, സൈക്കോസ്തിമുലന്റുകളോടുള്ള പ്രതികരണമായി ബിഹേവിയറൽ സെൻസിറ്റൈസേഷന്റെ വികാസത്തിന് ഗ്ലൂട്ടാമേറ്റ് ആവശ്യമാണ് (9, 10). വെൻട്രൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിലെ ഇടത്തരം വലിപ്പത്തിലുള്ള സ്പൈനി ന്യൂറോണുകൾ (എംഎസ്എൻ) പ്രീഫ്രോണ്ടൽ കോർട്ടക്സിൽ നിന്ന് ആവേശകരമായ ഗ്ലൂട്ടാമറ്റെർജിക് പ്രൊജക്ഷനുകൾ സ്വീകരിക്കുന്നു, ഇത് ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ തലയിലേക്ക് സിനാപ്സ് ചെയ്യുന്നു. നട്ടെല്ല് കഴുത്തിലേക്ക് സിനാപ്സ് ചെയ്യുന്ന ഡോപാമിനേർജിക് ആക്സോണുകളുടെ പ്രധാന ലക്ഷ്യം എം‌എസ്‌എൻ‌മാരാണ് (1, 11, 12). അതിനാൽ, എം‌എസ്‌എൻ‌സിലെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകൾ സെല്ലുലാർ കമ്പാർട്ടുമെന്റിനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു, അവിടെ ഡോപാമിനർ‌ജിക്, ഗ്ലൂട്ടാമറ്റർ‌ജിക് ട്രാൻസ്മിഷൻ എന്നിവ തുടക്കത്തിൽ സംയോജിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.
ഡോപാമൈൻ രണ്ട് പ്രധാന റിസപ്റ്റർ ഉപകുടുംബങ്ങളിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്നു, D1 ഉപകുടുംബം (D1, D5 ഉപതരം), D2 ഉപകുടുംബം (D2, D3, D4 ഉപതരം) (13). ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ, സ്ട്രാറ്ററ്റോണിഗ്രൽ എം‌എസ്‌എനുകളിൽ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് റിസപ്റ്ററുകൾ (പി, ഡൈനോർഫിൻ എന്നിവയോടൊപ്പം) അടങ്ങിയിരിക്കുന്നതായി ശരീരഘടന പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, അതേസമയം സ്ട്രൈറ്റോപാലിഡൽ എം‌എസ്‌എൻ‌മാർ പ്രധാനമായും ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് റിസപ്റ്ററുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു (എൻ‌കെഫാലിനൊപ്പം) (14-17). എൻ‌എ‌സി‌സിയിൽ നിന്നുള്ള പ്രൊജക്ഷനുകൾ ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റമിനേക്കാൾ സങ്കീർണ്ണമാണ്, എൻ‌എ‌സിയുടെ ഷെല്ലും പ്രധാന ഭാഗങ്ങളും വെൻട്രൽ പല്ലിഡത്തിന്റെ പ്രത്യേക ഉപപ്രദേശങ്ങളിലേക്കും വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയയിലേക്കും സബ്സ്റ്റാന്റിയ നിഗ്രയിലേക്കും പ്രൊജക്റ്റുചെയ്യുന്നു.18). വെൻട്രൽ പല്ലിഡത്തിലേക്കുള്ള പ്രൊജക്ഷനുകളിൽ D2 റിസപ്റ്ററുകളും എൻ‌കെഫാലിനും വളരെ പ്രകടമാണെങ്കിലും, D1 റിസപ്റ്ററുകളും P എന്ന പദാർത്ഥവും വെൻട്രൽ പല്ലിഡം, വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയ എന്നിവയിലേക്കുള്ള പ്രൊജക്ഷനുകളിൽ തുല്യമായി വിതരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു.19). D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്ററുകൾക്കായി തിരഞ്ഞെടുത്ത അഗോണിസ്റ്റുകളുടെയും എതിരാളികളുടെയും പഠനങ്ങൾ, സൈക്കോസ്തിമുലന്റ്-ആശ്രിത പെരുമാറ്റ മാറ്റങ്ങൾക്ക് D1, D2 റിസപ്റ്ററുകൾ ആവശ്യമാണെന്ന് തെളിയിച്ചു.20-25). എന്നിരുന്നാലും, ഈ റിസപ്റ്ററുകളുടെ വേഷങ്ങൾ വ്യത്യസ്തമായി ദൃശ്യമാകുന്നു. ഉദാഹരണത്തിന്, D1 റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഉത്തേജനം കൊക്കെയ്ൻ പ്രൈമിംഗ് കുത്തിവയ്പ്പുകളും കൊക്കെയ്നുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പാരിസ്ഥിതിക സൂചകങ്ങളും ഉപയോഗിച്ച് കൊക്കെയ്ൻ തേടുന്നു, അതേസമയം D2 റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഉത്തേജനം കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് പുന in സ്ഥാപനത്തിന് സഹായിക്കുന്നു (26-28).
സൈക്കോസ്തിമുലന്റ് ആസക്തിയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പെരുമാറ്റ വൈകല്യങ്ങൾ വളരെക്കാലം നിലനിൽക്കുന്നു. അതിനാൽ ഡോപ്പാമിനും ഗ്ലൂട്ടാമേറ്റും നിയന്ത്രിക്കുന്ന ന്യൂറോണൽ സർക്യൂട്ടുകളിൽ തന്മാത്രാ ഘടനാപരമായ നിലയിലെ ദീർഘകാലത്തെ മയക്കുമരുന്ന് ഉത്തേജിത മാറ്റങ്ങൾ തിരിച്ചറിയാൻ ഗണ്യമായ താൽപര്യം ഉണ്ടായിട്ടുണ്ട് (29-32). ശ്രദ്ധേയമായി, കൊക്കെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ആംഫെറ്റാമൈൻ എന്നിവ ദീർഘകാലത്തേക്ക് എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നത് എൻ‌എൻ‌സിയിലെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് ബ്രാഞ്ച് പോയിന്റുകളുടെയും എം‌എസ്‌എൻ‌മാരുടെ മുള്ളുകളുടെയും എണ്ണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തി (33-35). ഈ മയക്കുമരുന്ന് മാറ്റങ്ങൾ അവസാന മയക്കുമരുന്ന് എക്സ്പോഷർ കഴിഞ്ഞ് ≈1-3.5 മാസങ്ങൾ വരെ നിലനിൽക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (30, 35) കൂടാതെ സൈക്കോസ്റ്റിമുലന്റ് എക്‌സ്‌പോഷറുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സിനാപ്റ്റിക് പ്ലാസ്റ്റിറ്റിയിൽ ദീർഘകാലം മാറ്റങ്ങൾ വരുത്താൻ നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.
ഇപ്പോഴത്തെ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്ററുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന സഞ്ചിത MSN- കളുടെ ഉപജനസംഖ്യയിൽ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് ഘടനാപരമായ മാറ്റങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക എന്നതായിരുന്നു. ഈ പഠനങ്ങളിൽ, D1 (Drd1-EGFP) അല്ലെങ്കിൽ D2 (Drd2-EGFP) ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ പ്രൊമോട്ടർ (DGNUMX) ന്റെ നിയന്ത്രണത്തിലാണ് EGFP പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ബാക്ടീരിയൽ കൃത്രിമ ക്രോമസോം (BAC) ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികൾ ഞങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചിരിക്കുന്നത്.36). ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, തുടക്കത്തിൽ വർദ്ധിച്ച നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത D1 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ MSN കളിലും D2 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ MSN- കളിലും ആണെങ്കിലും, മാറ്റം വരുത്തിയ നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത D1 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ന്യൂറോണുകളിൽ മാത്രമേ സ്ഥിരതയുള്ളൂ. മാത്രമല്ല, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ ΔFosB ന്റെ ആവിഷ്കാരത്തിലും സമാനമായ മാറ്റങ്ങൾ ഞങ്ങൾ കാണുന്നു, ഇത് D1 ലെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ രൂപവത്കരണത്തിലും / അല്ലെങ്കിൽ പരിപാലനത്തിലും NAcc ലെ D2 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ന്യൂറോണുകളിലും osFosB ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കാമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
ഫലം
Drd1-EGFP, Drd2-EGFP BAC ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികളിലെ MSN- കളുടെ വിശകലനം.
Drd1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP BAC ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികളിലെ ഡോർസൽ, വെൻട്രൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ നിന്നുള്ള എം‌എസ്‌എൻ‌മാരുടെ പ്രൊജക്ഷൻ പാറ്റേൺ ജിഎഫ്പി എക്സ്പ്രഷന്റെ വിശകലനത്തിലൂടെ സ്വഭാവ സവിശേഷതയാണ് (36). ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിന്റെ എം‌എസ്‌എൻ‌സിലെ ജിഎഫ്പിയുടെ ഡിഫറൻഷ്യൽ എക്സ്പ്രഷൻ പൊതുവെ യഥാക്രമം എൻ‌ഡോജെനസ് ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് അല്ലെങ്കിൽ ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് റിസപ്റ്ററുകളുമായി യോജിക്കുന്നു (36). Drd1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP എലികളിലെ NAcc ലെ ജിഎഫ്പിയുടെ ഡിഫറൻഷ്യൽ എക്സ്പ്രഷൻ ഞങ്ങൾ കൂടുതൽ വിശകലനം ചെയ്തു (ചിത്രം. 1a ഒപ്പം b). NAcc ലെ ≈58% ന്യൂറോണുകൾ Drd1-EGFP എലികളിൽ GFP പ്രകടിപ്പിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും (ചിത്രം. 1a), NAcc ലെ ന്യൂറോണുകളുടെ ≈48% Drd-2-EGFP എലികളിൽ GFP പ്രകടിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. 1b). NAcc ലെ എല്ലാ ന്യൂറോണുകളുടെയും 90-95% MSN- കൾ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു (12, 37). D1 റിസപ്റ്ററുകൾ MSN കളിൽ മാത്രമേ പ്രകടിപ്പിക്കപ്പെടുന്നുള്ളൂ, കൂടാതെ D2 റിസപ്റ്ററുകൾ MSN കളിലും കോളിനെർ‌ജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളിലും പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ന്യൂറോണുകളുടെ 1-3% പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു (37). ഈ ഘടകങ്ങളെ കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, കുറഞ്ഞത്, എൻഎസിയിലെ എംഎൽഎമാരിൽ ≈10-15% D1, D2 റിസപ്റ്ററുകൾ രണ്ടും പ്രദർശിപ്പിക്കാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.
Drd1-EGFP, Drd2-EGFP എലികളിലെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ വിശകലനം.
ന്യൂറോണൽ സെൽ ബോഡികളെ കറക്കാൻ Drd1-EGFP, Drd2-EGFP എലികളിലെ ജിഎഫ്പി എക്സ്പ്രഷൻ ഉപയോഗപ്രദമായിരുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഡെൻഡ്രൈറ്റുകളിലെയും ഡെൻഡ്രൈറ്റിക് മുള്ളുകളിലെയും ജിഎഫ്പി സിഗ്നൽ ജിഎഫ്പി വിരുദ്ധ ആന്റിബോഡികളുമായി ഇമ്യൂണോസ്റ്റെയിനിംഗിന് ശേഷം വിശകലനം അനുവദിക്കാൻ കഴിയാത്തത്ര ദുർബലമായിരുന്നു. ന്യൂറോണൽ പോപ്പുലേഷനെ വേഗത്തിലും കാര്യക്ഷമമായും ലേബൽ ചെയ്യാൻ ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈകളുടെ കണികാ-മധ്യസ്ഥ ബാലിസ്റ്റിക് ഡെലിവറി അടുത്തിടെ ഉപയോഗിച്ചു (38). ഈ രീതി ഉപയോഗിച്ച് മുഴുവൻ ന്യൂറോണുകളും ലേബൽ ചെയ്യാൻ കഴിയും, കൂടാതെ ഈ രീതി ഗോൾഗി-കോക്സ് സ്റ്റെയിനിംഗുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതായി തോന്നുന്നു. NAcc ലെ ന്യൂറോണുകളുടെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മോർഫോളജി വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിന്, ഒരു ജീൻ തോക്ക് ഉപയോഗിച്ച് നിശ്ചിത സഞ്ചിത കഷ്ണങ്ങൾ ലിപ്പോഫിലിക് ഫ്ലൂറസെൻസ് ഡൈ 1,1′-diotadecyl-3,3,3 ′, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്തു. DiI-stained MSN ന്റെ ഒരു ഉദാഹരണം കാണിക്കുന്നു ചിത്രം. 1c. ഉപയോഗിച്ച സാഹചര്യങ്ങളിൽ, ലേബൽ ചെയ്ത ന്യൂറോണുകളിൽ നിന്ന് ഓവർലാപ്പുചെയ്യുന്ന ഡെൻഡ്രൈറ്റുകളില്ലാതെ ഞങ്ങൾ സാധാരണയായി നിരീക്ഷിച്ചു. ഉയർന്ന മാഗ്‌നിഫിക്കേഷനിൽ, ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള വിശദമായ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മോർഫോളജി നിരീക്ഷിക്കാനാകും (ചിത്രം. 1d).
ജി‌എഫ്‌പിക്കായി ഡിഐഐ ലേബലിംഗും ഇമ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രിയും ചേർന്നാണ് ഞങ്ങൾ Drd1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികളിൽ ഉപയോഗിച്ചത്, ടിഷ്യു പെർമാബിലൈസേഷനായി കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രത സോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് ഇത് സാധ്യമാക്കി (കാണുക രീതികൾ). എം‌എസ്‌എൻ‌മാരുടെ സെൽ ബോഡികളിലെ ഡിഐഐ സ്റ്റെയിൻ, ജിഎഫ്പി എക്സ്പ്രഷൻ എന്നിവ ശ്രദ്ധാപൂർ‌വ്വം താരതമ്യപ്പെടുത്തുന്നതിലൂടെ, Drd1-EGFP () യിലെ DiI- ഉം GFP- പോസിറ്റീവ് അല്ലെങ്കിൽ DiI- പോസിറ്റീവ്, GFP- നെഗറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളും തിരിച്ചറിയാൻ കഴിയും.ചിത്രം. 2a) അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP (ചിത്രം. 2b) എലികൾ. താഴെപ്പറയുന്ന പഠനങ്ങളിൽ, ഡാൻഡിക്സ്എൻഎക്സ്-ഇ ജിഎഫ്പി അല്ലെങ്കിൽ ഡോഡ്എക്സ്എൻഎക്സ്-ഇ ജിഎഫ്പി എയ്സിൽ നിന്നുള്ള ഡിഐഐ, ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകൾ മാത്രമാണ് ഡൻഡറിക് മോർഫോളജി വിശകലനം ചെയ്തത്.
Drd1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ Drd2-EGFP എക്സ്പ്രസിംഗ് Accumbal MSNs വർദ്ധിച്ച സ്പൈൻ ഡെൻസിറ്റിയുടെ വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കൈൻ ചികിത്സ ഫലങ്ങൾ.
DrD1-EGFP അല്ലെങ്കിൽ DrD2-EGFP എലികൾ വീണ്ടും തുടർച്ചയായി കോക്കെയ്ൻ (XNUM mg / kg) അല്ലെങ്കിൽ ഉപ്പുവെള്ളം തുടർച്ചയായി നാല് ആഴ്ചയ്ക്കടുത്ത് കുത്തിവയ്ക്കുകയും ചെയ്തു (കാണുക രീതികൾ). കഴിഞ്ഞ മരുന്നു ചികിത്സയ്ക്കു ശേഷം രണ്ട് ദിവസം (2DD) അല്ലെങ്കിൽ 30 ദിവസം (30DD), മുകളിൽ വിശദീകരിച്ചതുപോലെ DiI ലേബലിംഗിനും immunohistochemistry ത്തിനും മസ്തിഷ്ക്കങ്ങൾ പ്രോസസ് ചെയ്തു. ആംഫർട്ടമിനുമായുള്ള ദീർഘചികിത്സയ്ക്ക്, നട്ടെല്ല് എന്നതിനപ്പുറം, എൻസിയിൽ എംഎസ്എൻസിന്റെ പ്രോക്സിമൽ ഡൻഡറൈസ് (ഡൈൻറൈറ്റ്)35). ഞങ്ങളുടെ വിശകലനത്തെ ടെർമിനൽ മേഖലകളുൾപ്പെടെയുള്ള വിശാലമായ dendrites (അതായത് രണ്ടാം അല്ലെങ്കിൽ മൂന്നാമൻ ഓർഡറുകൾ ഉള്ളവർക്ക്) പരിമിതപ്പെടുത്തി. 2WD- ൽ വിശകലനം ചെയ്യുമ്പോൾ, DD1-EGFP- പോസിറ്റീവ് എംഎസ്എൻസുകളിൽ (എസ്.എൻ.എൻ. സിൽൺ ഗ്രൂപ്പിന്റെ 128%) വർദ്ധനവ് വർദ്ധിച്ചുചിത്രം. 3a ഒപ്പം c) കൂടാതെ ഡോഡ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇജിഎഫ് പിപി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ കുറവും (ഉപ്പുവെള്ളം സംഘത്തിന്റെ XNUM%) (ചിത്രം. 3 b ഒപ്പം d). XXWWD ന് ശേഷം, നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത, DrD30-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിലാണ് കൈകാര്യം ചെയ്തത് (ഉപ്പുവെള്ള നിയന്ത്രണത്തിന്റെ 1%) (ചിത്രം. 3 a ഒപ്പം c) എന്നാൽ DrD2-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറണുകളിലല്ല (ചിത്രം. 3 b ഒപ്പം d).
ഡൻഡിരിക് സ്പൈനിന്റെ മോർഫോളജി അവരുടെ നീളം, നട്ടെല്ല് തലയുടെ വീതി എന്നിവയുടെ വ്യത്യാസത്തിലാണ്. അതിനാൽ ഞങ്ങൾ ഡെൻ‌ട്രിറ്റിക് പ്രൊട്രഷനുകളെ കൊക്കെയ്നിൽ നിന്ന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ഡബ്ല്യുഡിയിൽ നാല് നട്ടെല്ല് ക്ലാസുകളായി (സ്റ്റബ്ബി, മഷ്റൂം, നേർത്ത, ഫിലോപോഡിയ) തരംതിരിച്ചു (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല). മഷ്റൂം തരത്തിന്റെ സാന്ദ്രത (2 ± 119.7%, P <0.01) നേർത്ത മുള്ളുകൾ (120.0 ± 3.4%, P <0.01) Drd1-EGFP- പോസിറ്റീവ് MSN- കളിലെ കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയിലൂടെ വർദ്ധിപ്പിച്ചു, അതേസമയം സ്റ്റബിയുടെ സാന്ദ്രത (182.4 ± 21.6%, P <0.05), മഷ്റൂം മുള്ളുകൾ (122.5 ± 5.0%, P <0.01) Drd2-EGFP- പോസിറ്റീവ് MSN- കളിൽ വർദ്ധിപ്പിച്ചു. Drd1-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിലോ Drd2-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ നേർത്ത മുള്ളുകളിലോ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ് ഉണ്ടായിട്ടില്ല.
DrD1-EGFP- നോട് ക്രോണിക് കൊക്കൈൻ ഇഞ്ചുസ് ΔFosB എക്സ്പ്രഷൻ- അല്ലെങ്കിൽ എൻസിയിലുള്ള DrD2-EGFP- പോസിറ്റീവ് എം.എസ്.എൻ.എസ്.
എഫ്സിഎസ് ബി ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളുടെ ഫോസ് കുടുംബത്തിലെ അംഗമാണ്. കൊക്കെയ്നിന്റെ നിശിതമായ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ എൻഎസിയിലെ നിരവധി ഫോസ് ഐസോഫോമുകളുടെ ദ്രുതവും ക്ഷണികവുമായ പ്രേരണയെ പ്രേരിപ്പിക്കുമ്പോൾ, കൊക്കെയ്നുമായി ആവർത്തിച്ച് എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നത് FosB യുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. കൂടാതെ, ΔFosB എക്സ്പ്രഷനിലെ വർദ്ധനവ് മരുന്നു കഴിഞ്ഞ് തുടരുന്നതിന് ആഴ്ചകൾക്കു ശേഷം മാസത്തിൽ തുടരും, കൂടാതെ മരുന്നുകൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുശേഷവും, ജനിതക എക്സ്പ്രഷനുകളുടെ ദീർഘകാല നിയന്ത്രണത്തിൽ ഉൾപ്പെടാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.29, 39, 40).
ഡോക്യുഎൻഎക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇ ജിഎഫ്പി അല്ലെങ്കിൽ ഡോക്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇജിഎഫ്പി എലികളിൽ നിന്ന് കൊക്കൈൻ തെറാപ്പിയിൽ നിന്നും എൻഎസിയിൽ ΔFosB- ന്റെ ആഗിരണം പരിശോധിക്കാൻ, FosB, GFP എക്സ്പ്രഷൻ എന്നിവ ഇരട്ട ലേബലിംഗിലൂടെ ഞങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തു (ചിത്രം. 4 ഒപ്പം പട്ടിക 1) FOSB ആൻറിബോഡി ആന്റിബോഡി എല്ലാത്തരം ഫോസ് ബിയും അംഗീകരിക്കുന്നുണ്ട്, പക്ഷേ വർദ്ധിച്ച immunostain ΔFosB പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കരുതുന്നു രീതികൾ കൂടുതൽ ചർച്ചയ്ക്ക്). ഉപ്പിട്ട ചികിത്സയിലുള്ള എലികളിൽ, DRX16-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ XXX%, കൂടാതെ DRD1-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ 15% താരതമ്യേന ദുർബല തീവ്രതയുമായി ഫോസ്ബിൽ രോഗപ്രതിരോധ പ്രവർത്തനം പ്രകടമാക്കി (ചിത്രം. 4 a ഒപ്പം b ഒപ്പം പട്ടിക 1). തുടർന്നു കൊണ്ടിരിക്കുന്ന കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സ തുടർന്നത് XHTMLXWD യും DrF2-EGFP- പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ എണ്ണത്തിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവുണ്ടാക്കി ΔFosB (ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ 1%) (ചിത്രം. 4c ഒപ്പം പട്ടിക 1). ΔFosB എക്സ്പ്രസിലുള്ള ചെറിയതും ഇപ്പോഴും ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ് ഡോഡ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇ ജിഎഫ് പിപി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ (ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ 2%) കണ്ടെത്തിചിത്രം. 4d ഒപ്പം പട്ടിക 1). നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രതയിലുണ്ടായ മാറ്റങ്ങളെപ്പോലെ, ΔFOSB ന്റെ വർദ്ധിച്ച എക്സ്പ്രഷൻ ഡോഡ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇജിഎഫ് പിപി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ (ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ 1%) എന്നാൽ ഡി.എൻ.ഡി.എക്സ്.എക്സ്.എക്സ്-ഇ ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ (ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ 46%) 2WD (ചിത്രം. 4 e ഒപ്പം f ഒപ്പം പട്ടിക 1). വർദ്ധിച്ച osFosB എക്സ്പ്രഷൻ നിരീക്ഷിക്കുന്നത് ശ്രദ്ധിക്കുക ചിത്രം. 4f DrD2-EGFP നെഗറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ ഇത് ലഭ്യമാണ്.
സംവാദം
ഡോപ്പോമിനർ ന്യൂറോ ട്രാൻസ്മിഷനിൽ ദീർഘകാലാടിസ്ഥാനത്തിലുള്ള അനുകൂലനങ്ങൾ മനോരോഗപരമായ മരുന്നുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട അടിമത്വ സ്വഭാവത്തിന് അടിവരയിടുന്നുവെന്ന് വിശ്വസിക്കപ്പെടുന്നു. പ്രത്യേകിച്ചും, എൻ‌എ‌എ‌സിയിലെ എം‌എസ്‌എൻ‌മാരുടെ ഡെൻഡ്രിറ്റിക് നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രതയിലെ സൈക്കോസ്റ്റിമുലൻറ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് വർദ്ധനവ് സിനാപ്റ്റിക് കണക്റ്റിവിറ്റിയുടെ പുന organ സംഘടനയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്ന് അനുമാനിക്കപ്പെടുന്നു (30). D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 ഡോപ്പാമിൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഉയർന്ന അളവ് പ്രകടമാക്കുന്ന എംഎസ്എൻസിന്റെ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഉപപിപ്പുളുകളിൽ എൻകക്കിനെ ഉൾപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു. ഇപ്പോഴത്തെ പഠനത്തിൽ, നാചികയിൽ കൊക്കൈൻ ചികിത്സയ്ക്കിടെ നാക്യിലെ വ്യത്യസ്തമായ D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്ററിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന എംഎസ്എൻഎസിൽ ഞങ്ങൾ സ്പൈൻ സാന്ദ്രത വിശകലനം ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. D1 റിസപ്റ്ററിനുള്ള എം എസ് എസിലും D2 റിസപ്റ്ററിലും അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന എംഎസ്എൻസുകളിൽ നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത ഉണ്ടെങ്കിലും, D1- റിസപ്റ്റർ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന ന്യൂറോണുകളിൽ മാത്രം മാറ്റം വരുത്തിയ നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത സുസ്ഥിരമാണ്. കൂടാതെ, D1, D2 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ എംഎസ്എൻഎസിൽ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്റ്റർ ΔFosB ന്റെ പ്രകടനത്തിലെ സമാന തരത്തിലുള്ള പാറ്റേൺ ഞങ്ങൾ കാണുന്നു.
D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 റിസപ്റ്റർ പ്രമോട്ടർക്ക് കീഴിലുള്ള എംഎസ്എൻസിന്റെ നിർദ്ദിഷ്ട ഉപവിഭാഗങ്ങളിലുള്ള ജിഎഫ്പിയെ BAC ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് ഈ പഠനങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചത്. മാത്രമല്ല, ഡിഎഐ ഉപയോഗിച്ച് ന്യൂറോണുകളുടെ ബാലിസ്റ്റിക് ലേബലിങ്ങിൽ ജിഎഫ്പി-യ്ക്കുവേണ്ടി ഇമ്യൂണോഹിസ്റ്റോഹൈമിറ്റിയെ സംയോജിപ്പിക്കുന്ന ഡബിൾ ലേബലിംഗ് സമ്പ്രദായം ഞങ്ങൾ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു. മുൻ പഠനങ്ങൾ ഗോൾഗി-കോക്സ് സമ്പ്രദായം ഉപയോഗിച്ച് പുത്തൻ സാന്ദ്രതയിൽ മനോരോഗികളുടെ ഫലത്തെ വിശകലനം ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിക്കുകയുണ്ടായി (34), കൂടാതെ ഇവിടെ ഉപയോഗിച്ചിട്ടുള്ള DiI സമ്പ്രദായം ഗുണപരമായി താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്. നമ്മൾ ഡബിൾ ലേബലിംഗ് രീതി വികസിപ്പിച്ചതുകൊണ്ടാണ് ഗോൾഗി നിറമുള്ളത് ഇമ്മ്യൂണോസ്റ്റിക്ഹൈസ്ട്രിയോട് പൊരുത്തപ്പെടുന്നില്ല. പ്രതിരോധവ്യവസ്ഥകൾ സാധാരണയായി ഡിസോജന്റുകളുമായി ടിഷ്യു പെർസിബിലൈസേഷൻ ആവശ്യമാണ്, ഇത് സാധാരണയായി മെംബ്രെനിൽ നിന്ന് ലിപ്പോഫോളിക് സെയ്സുകളുടെ പരിഹാരത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു (38). എന്നിരുന്നാലും, നമ്മുടെ നിലവിലുള്ള പഠനത്തിൽ, GFP immunosting ടിഷ്യു പെർസിബിലൈസേഷനുവേണ്ടി ഉയർന്ന സോഡാറുകൾ ആവശ്യമില്ല, അതിനാൽ ലിപ്പോഫോളിക് ഡൈ ലേബലിങ്ങിനൊപ്പം ഇതുപയോഗിക്കാം. ഡൻഡറിക് സ്പൈനിന്റെ ഘടനാപരമായ മാറ്റങ്ങളുടെ പഠനത്തിനായി ഞങ്ങളുടെ ഇരട്ട-ലേബലിംഗ് രീതി സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കേണ്ടതാണ്, ഉദാഹരണമായി ബിഎസിഎസിന്റെ ട്രാൻജെജനിക് മൗസ് ലൈനുകൾ വിശകലനം ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ കോർട്ടെക്സ് ന്യൂറോണുകളുടെ പ്രത്യേക ജനസംഖ്യയിൽ36).
ഏതാണ്ട് വിവാദപരമായിരുന്നെങ്കിലും, D1 ഉം D2 റിസപ്റ്ററുകളും പ്രത്യക്ഷമായും പ്രത്യക്ഷമായും (സ്ട്രോറ്റോണിഗ്രറൽ), പരോക്ഷമായ (സ്ട്രേറ്റാപ്പലൈഡൽ) സ്ട്രൈറ്റൽ പ്രൊജക്ഷൻ ന്യൂറോണുകൾ,17, 41). DrD1-EGFP, DrD2-EGFP എലികളിൽ ജിഎഫ്പിയുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണത്തിന്റെ പ്രാധാന്യം ഈ നിഗമനവുമായി പൊരുത്തപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട് (36). കൂടാതെ, ഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ഇ ജിഎഫ്പിപി, ഡിഎച്ച്എക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ്-ഇജിഎഫ്പി എലിസിൽ നിന്നുള്ള എൻഎസിഎസിന്റെ ജിഎഫ്പി-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളുടെ എണ്ണം എത്രമാത്രം വിശകലനം ചെയ്യുന്നുവെന്ന് വ്യക്തമാക്കുന്നത്, എംഎംപ്എക്സ് എക്സ്പ്രസ് മാത്രം D1 റിസപ്റ്ററുകളുടെ അർത്ഥത്തിൽ, ≈2-50% എക്സ്പ്രസ് എക്സ്പ്ലോറർ മാത്രം, കൂടാതെ D1, D35 റിസെപ്റ്ററുകൾക്കും ≈40-2% സഹജമാണ്. കോർപ്പറേഷന്റെ ഈ മൂല്യം, mRNAs (≈10% coexpression of enkephalin and substance P) വേർതിരിക്കാനും ഉത്തേജിപ്പിക്കാനും, RT-PCR ടെക്നിക്കുകളുമായി ഒറ്റ സ്ട്രേലറ്റൽ ന്യൂറോണുകളുമായുള്ള പാച്ച്-ക്ളാമ്പ് അനാലിസിസ് കൂടിച്ചേർന്ന ഡോർസൽ സ്ട്രാറ്റാറ്റം42). D3, D4, D5 റിസപ്റ്ററുകൾ എന്നിവയെപ്പറ്റിയുള്ള ചോദ്യത്തിന് ഞങ്ങളുടെ നിലവിലെ പഠനങ്ങൾ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നില്ല, കൂടാതെ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള D1 റിസപ്റ്ററുകൾ അല്ലെങ്കിൽ DI2 റിസപ്റ്ററുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന MSN- ൽ DXNUMX റിസപ്റ്ററുകളുടെ താഴ്ന്ന നിലയിലുള്ള പ്രശ്നത്തെ അവർ അഭിമുഖീകരിക്കുന്നുമില്ല.
മുൻപ് നടന്ന പല പഠനങ്ങളും മനോരോഗ വിദഗ്ധ ഫ്യൂസ് എക്സ്പ്രഷന്റെ ന്യൂറോണൽ ലോക്കലൈസേഷനും, D1, D2 റിസപ്റ്ററുകളുടെ (43-45). D1 റിസപ്റ്ററുകളുടെ പ്രവർത്തനക്ഷമത ഉപയോഗിച്ച് ഫോസ്, ΔFosB ഇൻക്യുക്ഷൻ എന്നിവ മധ്യസ്ഥതയിലാക്കി എന്ന നിഗമനത്തെ ഈ പഠനങ്ങൾ സഹായിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, ഫോസ് എക്സ്പ്രഷന്റെ സെല്ലുലാർ പ്രാദേശികവൽക്കരണം മാനസിക അസ്വാസ്ഥ്യമുള്ള മരുന്നുകൾ നൽകപ്പെടുന്ന പാരിസ്ഥിതിക സാഹചര്യങ്ങളാൽ സ്വാധീനിക്കപ്പെടുന്നു (46, 47). ഉദാഹരണത്തിന്, വീട്ടിലെ കൂടയിൽ നൽകിയിരിക്കുന്ന ആംഫർട്ടാമയിൻ അല്ലെങ്കിൽ കൊകൈൻ D1 റിസപ്റ്ററുകൾക്ക് സഹവർത്തിക്കുന്ന P-പോസിറ്റീവ് സെല്ലുകളിൽ മുൻഗണനയുള്ള ഫോസിന്റെ ഉടൻ ആദ്യകാല ജീനുകളെ (ഫോസ് ഉൾപ്പെടെ) പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു. ഇതിനു വിപരീതമായി, ഈ മരുന്നുകൾ ഒരു നവീന പരിതസ്ഥിതിയിൽ നൽകുമ്പോൾ D1 D2, D2 റിസപ്റ്ററിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന എംഎസ്എൻസിൽ ഫോസ് എക്സ്പ്രെഷനെ പ്രചോദിപ്പിക്കും. ഞങ്ങളുടെ നിലവിലെ പഠനങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ച പ്രോട്ടോക്കോളിൽ മയക്കുമരുന്ന് കുത്തിവയ്പ്പ് ജോഡിയാക്കുന്നത് ഒരു പുതിയ പരിതസ്ഥിതിയിൽ എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നില്ല. എന്നിരുന്നാലും, DXNUMX റിസപ്റ്ററിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന MSN ൽ ΔFosB എക്സ്പ്രഷനുകൾക്ക് വിധേയമായ ഏതെങ്കിലും വിധത്തിലുള്ള സന്ദർഭ-ആശ്രിത സമ്മർദ്ദത്തെ ഞങ്ങൾ ഭരിക്കാൻ പാടില്ല.
ഇന്നത്തെ ഫലങ്ങളുടെ ശ്രദ്ധേയമായ ഒരു സവിശേഷത നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത, ΔFosB എക്സ്പ്രഷനുകളുടെ സമാന്തര മാതൃകയാണ്. വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രതയും ΔFosB എക്സ്പ്രഷനും ആരംഭിച്ചത് എംഎസ്എഫ്സിന്റെ Drd1-EGFP, DrD2-EGFP എന്നിവയിൽ പ്രത്യക്ഷപ്പെട്ടു. എന്നിരുന്നാലും, ഈ മാറ്റങ്ങൾ D1 റിസപ്റ്റർ അടങ്ങിയ ന്യൂറോണുകളിൽ മാത്രമേ സ്ഥിരതയുള്ളൂ. നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രതയും ΔFosB എക്സ്പ്രഷനും വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന നിരീക്ഷണത്തിനുള്ള ഒരു സാധ്യമായ വിശദീകരണം, D2 റിസപ്റ്ററുമായി ഉൾക്കൊള്ളുന്ന ന്യൂറോണുകളിൽ ട്രാൻസിറ്റിയായി കണ്ടെത്തിയവയാണ്, ഇത് D1, D2 ഡോപ്പാമിൻ റിസപ്റ്ററുകൾ സഹിതമുള്ള എംഎസ്എൻസിന്റെ ചെറിയ അംശത്തിൽ സംഭവിച്ചതാണ്. ഇങ്ങനെ, ഈ വർദ്ധനകളുടെ ട്രാൻസിറ്റ് സ്വഭാവം D2- ആക്സിഡന്റ് സിഗ്നലിങ് പാറ്റേണുകളിലുളള D1 റിസപ്റ്ററുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തിൻറെ വിനാശകരമായ പ്രത്യാഘാതങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കാം.48). നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത, ΔFosB എക്സ്പ്രഷനിലെ മാറ്റങ്ങള് റിവേഴ്സിബിള് ആയിരുന്നതിനാല്, ΔFosB യുടെ സ്ഥിരതയെ സ്വാധീനിക്കാന് D2 റിസപ്റ്റര്-ആക്സിഡന്റ് സിഗ്നലിങ് പാറ്റേണുകളുടെ കഴിവ് ഇത് പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു.
ΔFOSB, നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത എന്നിവയിൽ സമാന്തര മാറ്റങ്ങളുണ്ടെന്ന് നിരീക്ഷിച്ചു. ആദ്യകാല രൂപത്തിൽ ΔFosB ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്നതും എൻഎസിഎയിലെ D1 റിസപ്റ്റർ-ഉൾക്കൊള്ളുന്ന ന്യൂറോണുകൾക്കുള്ള ഡൻഡറിക് സ്പൈനുകളുടെ തുടർന്നുള്ള മരുന്നും ഉൾപ്പെടുന്നതുമായ ആശയമാണ്. ΔFosB ന്റെ expression നിയന്ത്രിക്കുന്നത് MSN- ൽ D1 / DARPP-32 / PP1- ആക്സിഡന്റ് സിഗ്നലിംഗ് പാത്ത്വേ49). സൈദ്ധാന്തിക വ്യായാമങ്ങൾക്ക് പ്രതിഫലിക്കുന്നതും ലോക്കോമോട്ടറുടെ സജീവവുമായ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ ΔFosB ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നുണ്ട് എന്ന് പല പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് (39), ന്യൂറോ ട്രാൻസ്മിറ്റർ റിസപ്റ്ററുകൾ, സിഗ്നലിംഗ് പ്രോട്ടീനുകൾ, ന്യൂറോണൽ മോർഫോളജി നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ ഉൾപ്പെടുന്ന പ്രോട്ടീനുകൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്ന ഒന്നിലധികം ജീനുകളുടെ ആവിഷ്കാരത്തെ സ്വാധീനിച്ചുകൊണ്ട്.50). എന്നിരുന്നാലും, വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് നട്ടെല്ല് രൂപീകരണത്തിൽ ഉൾപ്പെടുന്ന നിർദ്ദിഷ്ട തന്മാത്രാ സംവിധാനങ്ങൾ നിലവിൽ അറിവായിട്ടില്ല. ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ സി‌ഡി‌കെ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ റോസ്‌കോവിറ്റൈനിന്റെ ഇൻട്രാ കുമ്പൽ ഇൻഫ്യൂഷൻ കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു (51). മാത്രമല്ല, cdk5 ΔFosB- നായുള്ള ഒരു ഡ st ൺസ്ട്രീം ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ആണ്, ഇത് വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട നഷ്ടപരിഹാര അഡാപ്റ്റീവ് മാറ്റങ്ങളിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (52). അതിനാൽ, Cdk5- ആശ്രിത ഫോസ്ഫോറിലേഷനിലെ മാറ്റം കൊക്കെയ്ൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് നട്ടെല്ല് രൂപപ്പെടുന്നതിനും / അല്ലെങ്കിൽ നട്ടെല്ല് സ്ഥിരതയ്ക്കും അടിസ്ഥാനമായ ഒരു വിശ്വസനീയമായ സംവിധാനമാണ്. PAK (53), β-catenin (54), PSD-95 (55), സ്പിനോഫിലിൻ (56) Cdk5 നുള്ള സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റുകളാണ്, ഇവയെല്ലാം നട്ടെല്ല് മോർഫോജെനെസിസ് നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ ഏർപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (57-60). ഇവയുടെയും മറ്റ് സി‌ഡി‌കെ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സബ്‌സ്റ്റേറ്റുകളുടെയും കൂടുതൽ സ്വഭാവ സവിശേഷതകൾ സൈക്കോസ്തിമുലന്റുകൾ നട്ടെല്ല് രൂപപ്പെടുന്നതിനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനുള്ള സംവിധാനങ്ങളെക്കുറിച്ച് വെളിച്ചം വീശും.
രീതികൾ
മൃഗങ്ങൾ.
D1 അല്ലെങ്കിൽ D2 ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ നിയന്ത്രണത്തിലുള്ള ഒരു EGFP ട്രാൻസ്ജെൻ വഹിക്കുന്ന എലികൾ ജെൻസാറ്റ് BAC ട്രാൻസ്ജെനിക് പ്രോജക്റ്റ് സൃഷ്ടിച്ചു (36). ഈ പഠനത്തിൽ ഉപയോഗിച്ച ട്രാൻസ്ജെനിക് എലികൾ 4-5 ആഴ്ച പഴക്കമുള്ളതും സ്വിസ്-വെബ്‌സ്റ്റർ പശ്ചാത്തലത്തിലുമായിരുന്നു. എലികളെ ഒരു 12: 12-h ലൈറ്റ് / ഡാർക്ക് സൈക്കിളിൽ പരിപാലിക്കുകയും ഭക്ഷണവും വെള്ളവും ലഭ്യമായ പരസ്യ ലിബിതം ഉപയോഗിച്ച് 2-5 ഗ്രൂപ്പുകളിൽ പാർപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. എല്ലാ മൃഗ പ്രോട്ടോക്കോളുകളും ലബോറട്ടറി മൃഗങ്ങളുടെ പരിപാലനത്തിനും ഉപയോഗത്തിനുമുള്ള നാഷണൽ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് ഓഫ് ഹെൽത്ത് ഗൈഡ് അനുസരിച്ചായിരുന്നു, അവ റോക്ക്ഫെല്ലർ യൂണിവേഴ്സിറ്റി ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ ആനിമൽ കെയർ ആന്റ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകരിച്ചു.
മയക്കുമരുന്ന് ചികിത്സ.
വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സ (പ്രതിദിനം 30 mg / kg), എലിയുടെ NAcc യുടെ കാമ്പിലും ഷെല്ലിലും MSN- കളുടെ നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രതയിൽ ശക്തമായ വർദ്ധനവ് ഉണ്ടാക്കുന്നതായി റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തു, എന്നാൽ കുറഞ്ഞ അളവ് (15 mg / kg) നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത വർദ്ധിപ്പിച്ചു ഷെൽ (61). അതിനാൽ എൻ‌എ‌എ‌സിയുടെ രണ്ട് ഭാഗങ്ങളിലും ഘടനാപരമായ മാറ്റം വരുത്താൻ ഞങ്ങൾ കൊക്കെയ്ൻ ഉയർന്ന ഡോസ് ഉപയോഗിച്ചു. എലികൾക്ക് തുടർച്ചയായി 30 ദിവസത്തേക്ക് ഒരു കുത്തിവയ്പ്പ് (ip) 5 mg / kg കൊക്കെയ്ൻ-HCl (അല്ലെങ്കിൽ സലൈൻ) ലഭിച്ചു, തുടർന്ന് 2 കുത്തിവയ്പ്പില്ലാത്ത ദിവസങ്ങൾ, തുടർച്ചയായി 4 ആഴ്ചകളിൽ ഈ നടപടിക്രമം ആവർത്തിച്ചു. വീട്ടിലെ കൂട്ടിൽ കുത്തിവയ്പ്പുകൾ നടത്തി. 2WD അല്ലെങ്കിൽ 30WD, മ mouse സ് തലച്ചോറുകൾ DiI ലേബലിംഗിനും കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രിക്കും വേണ്ടി പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു.
ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈ ഡൈ ഉപയോഗിച്ച് ബാലിസ്റ്റിക് ലേബലിംഗ്.
എലികളെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലിഗ്രാം / കിലോ സോഡിയം പെന്റോബാർ‌ബിറ്റൽ ഉപയോഗിച്ച് അനസ്തേഷ്യ ചെയ്യുകയും പി‌ബി‌എസിന്റെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലി ഉപയോഗിച്ച് ട്രാൻസ്കാർ‌ഡിയലായി പെർഫ്യൂസ് ചെയ്യുകയും തുടർന്ന് പി‌ബി‌എസിലെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്% പാരഫോർമൽ‌ഹൈഡ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലി ഉപയോഗിച്ച് ദ്രുതഗതിയിൽ പെർഫ്യൂഷൻ ചെയ്യുകയും ചെയ്തു (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലി / മിനിറ്റ്). തലച്ചോറുകൾ തലയോട്ടിയിൽ നിന്ന് വേഗത്തിൽ നീക്കംചെയ്യുകയും 80 മിനുട്ടിനായി 5% പാരഫോർമാൽഡിഹൈഡിൽ പോസ്റ്റ് ഫിക്സ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. റഫറൻസിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈ ഡൈ (മോളിക്യുലാർ പ്രോബ്സ്) ബാലിസ്റ്റിക് ഡെലിവറിയിലൂടെ ബ്രെയിൻ സ്ലൈസുകൾ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് μm) ലേബൽ ചെയ്തു. 38. കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രത സോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് സംയോജിത ഡിഐ ലേബലിംഗ്-ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രി രീതി വികസിപ്പിച്ചെടുത്തു. എക്സ്ഐ‌എൻ‌എം‌എക്സ് മിനിറ്റിനായി പി‌ബി‌എസിലെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്% ട്രൈറ്റൺ എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഉപയോഗിച്ച് ഡീ-ലേബൽ ചെയ്ത വിഭാഗങ്ങൾ പെർമാബിലൈസ് ചെയ്തു, തുടർന്ന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എക്സ് ട്രൈറ്റൺ എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, പി‌ബി‌എസിലെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്% സാധാരണ ആട് സെറം എന്നിവയിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എച്ച്. ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങളെ 0.01% സാധാരണ ആട് സെറം / 100% ട്രൈറ്റൺ എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, ജി‌എൻ‌പി ആന്റിബോഡി (അബ്കാം, കേംബ്രിഡ്ജ്, എം‌എ) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് 15 h ന് temperature ഷ്മാവിൽ, കഴുകി, ഇൻ‌ക്യുബേറ്റ് ചെയ്ത് 0.01: 100 FITC- സംയോജിത ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡി (മോളിക്യുലാർ പ്രോബ്സ്). വിഭാഗങ്ങൾ മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് സ്ലൈഡുകളിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും മൗണ്ടിംഗ് മീഡിയം ഉപയോഗിച്ച് കവർസ്ലിപ്പ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. ബാലിസ്റ്റിക് ലേബലിംഗ് രീതി ഡെൻഡ്രിറ്റിക് നട്ടെല്ല് ഘടനയെക്കുറിച്ച് വിശദമായ വിശകലനം അനുവദിച്ചു, കൂടാതെ ലഭിച്ച ഫലങ്ങൾ എലികളുടെ മസ്തിഷ്ക കഷ്ണങ്ങളിൽ ഗോൾഗി-കോക്സ് ഇംപ്രെഗ്നേഷൻ രീതി ഉപയോഗിച്ച് മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളുമായി ഗുണപരമായും അളവിലും താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ് (34). എന്നിരുന്നാലും, മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി, ഡീ-സ്റ്റെയിൻ ന്യൂറോണുകളിൽ രണ്ട് തലയുള്ള മുള്ളുകൾ ഞങ്ങൾ അപൂർവ്വമായി നിരീക്ഷിച്ചു. സ്റ്റെയിനിംഗ് രീതികളുടെ സംവേദനക്ഷമത അല്ലെങ്കിൽ മ mouse സിന്റെ വേരിയബിളിറ്റി (ഈ പഠനം) വേഴ്സസ് എലി ടിഷ്യു (ഈ പഠനം)34).
ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോഹമിസ്ട്രി.
മുകളിൽ വിവരിച്ചതുപോലെ മൃഗങ്ങളെ അനസ്തേഷ്യ ചെയ്യുകയും പെർഫ്യൂസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. തലച്ചോറുകൾ 4% C യിൽ 4% paraformaldehyde ൽ നീക്കംചെയ്യുകയും സംഭരിക്കുകയും ചെയ്തു. ക്രയോപ്രൊട്ടക്ഷനായി പി‌ബി‌എസ് ലായനിയിൽ തലച്ചോറുകൾ 30% സുക്രോസിലേക്ക് മാറ്റി. കൊറോണൽ വിഭാഗങ്ങൾ (12 μm) ഒരു ഫ്രീസുചെയ്യുന്ന മൈക്രോടോമിൽ (ലൈക) മുറിച്ച് ഇമ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രിക്കായി പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു. മസ്തിഷ്ക വിഭാഗങ്ങൾ പിന്നീട് 0.3 മിനിറ്റിന് PBS- ൽ 100% Triton X-15- ൽ പെർമാബിലൈസ് ചെയ്യുകയും PBS- ൽ രണ്ടുതവണ കഴുകുകയും ചെയ്തു. പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികൾക്ക് (പി‌ബി‌എസിലെ 10% സാധാരണ ആട് സെറത്തിൽ ലയിപ്പിച്ചവ) രാത്രിയിൽ 1 at C ൽ എക്‌സ്‌പോസ് ചെയ്യപ്പെട്ടു, തുടർന്ന് പി‌ബി‌എസിൽ കഴുകിക്കളയുകയും സെക്കൻഡറി ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. 37 h ന് 1 h- നുള്ള ആന്റിബോഡികൾ. ഇനിപ്പറയുന്ന ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ചു: റാബിറ്റ് ആന്റി-പാൻ-ഫോസ്ബി (എസ്‌സി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്; സാന്താക്രൂസ് ബയോടെക്നോളജി), മ mouse സ് ആന്റി-ന്യൂഎൻ (കെമിക്കോൺ), റാബിറ്റ് ആന്റി ജിഎഫ്പി, എഫ്‌ഐ‌ടി‌സി-സംയോജിത ആന്റി-റാബിറ്റ് ഐ‌ജിജി, റോഡാമൈൻ- സംയോജിത ആന്റി-മൗസ് IgG (മോളിക്യുലാർ പ്രോബ്സ്). ട്രിപ്പിൾ ലേബലിംഗിനായി (osFosB, NeuN, GFP), മസ്തിഷ്ക വിഭാഗങ്ങളെ ആദ്യം പാൻ വിരുദ്ധ ഫോസ്ബി ആന്റിബോഡി, ന്യൂൻ ആന്റിബോഡി എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് പ്രതിരോധശേഷി നൽകി, തുടർന്ന് ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡികളുമായി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു (റോഡാമൈൻ-സംയോജിത ആന്റി-റാബിറ്റ് IgG, സിയാൻ-കൺജഗേറ്റഡ് ആന്റി-മൗസ് IgG ). സെനോൺ ലേബലിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യ ഉപയോഗിച്ച് ജിഎഫ്പി ഇമ്യൂണോസ്റ്റെയിനിംഗിനായി ഇരട്ട സ്റ്റെയിൻ മസ്തിഷ്ക വിഭാഗങ്ങൾ കൂടുതൽ പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു (സെനോൺ അലക്സാ ഫ്ലവർ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്, മോളിക്യുലാർ പ്രോബ്സ്). ആന്റി-പാൻ-ഫോസ്ബി ആന്റിബോഡി ഫോസ്ബിയുടെ എൻ ടെർമിനസിലേക്ക് ഉയർത്തുകയും os ഫോസ്ബിയും മുഴുനീള ഫോസ്ബിയും തിരിച്ചറിയുകയും ചെയ്യുന്നു (62). വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കെയ്ൻ ചികിത്സയ്ക്കുശേഷം osFosB അല്ലെങ്കിലും FosB അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് ഫോസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ആന്റിജനുകൾ സ്ഥിരമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്നതായി കാണിച്ച മുൻ പഠനങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി, രോഗപ്രതിരോധ ശേഷിയിലെ ദീർഘകാല വർദ്ധനവ് osFosB യുടെ സ്ഥിരമായ പ്രകടനത്തെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ അനുമാനിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഉപ്പുവെള്ളം ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളിൽ കാണപ്പെടുന്ന രോഗപ്രതിരോധ ഫോസ്ബി സിഗ്നലിന്റെ ഐഡന്റിറ്റി അജ്ഞാതമാണ്. ലെ സ്ഥിതിവിവര വിശകലനം പട്ടിക 1 സ്റ്റുഡന്റ്സ് ഉപയോഗിച്ചു t പരീക്ഷിക്കുക.
ഡെൻഡ്രിറ്റിക് നട്ടെല്ല് വിശകലനം.
നിരവധി മാനദണ്ഡങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി നട്ടെല്ല് വിശകലനത്തിനായി NAcc ലെ വ്യക്തിഗത MSN- കൾ തിരഞ്ഞെടുത്തു. (i) വ്യത്യസ്ത സെല്ലുകളിൽ നിന്നുള്ള പ്രക്രിയകൾ ആശയക്കുഴപ്പത്തിലാകില്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് ലേബൽ ചെയ്ത മറ്റ് സെല്ലുകളുമായി ചുരുങ്ങിയത് അല്ലെങ്കിൽ ഓവർലാപ്പ് ഇല്ല. (ii) സെല്ലുകൾ വിശകലനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് കുറഞ്ഞത് മൂന്ന് പ്രാഥമിക ഡെൻഡ്രൈറ്റുകളെങ്കിലും ആവശ്യമാണ്. (Iii) ഡിസ്റ്റൽ ഡെൻഡ്രൈറ്റുകൾ (ടെർമിനൽ ഡെൻഡ്രൈറ്റുകൾ അല്ലെങ്കിൽ ടെർമിനൽ ഡെൻഡ്രൈറ്റിന് സമീപം) പരിശോധിച്ചു. എൻ‌എ‌സിയുടെ കാമ്പിലും ഷെല്ലിലുമുള്ള രണ്ട് എം‌എസ്‌എൻ‌മാരിൽ നിന്നുമുള്ള ഡെൻഡ്രൈറ്റുകൾ വിശകലനം ചെയ്തു. വിരളമായി നട്ടെല്ലുള്ള MSN- കൾ (സ്പൈനി തരം II) ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, സാന്ദ്രമായ നട്ടെല്ലുള്ള MSN- കൾ (സ്പൈനി ടൈപ്പ് I) മാത്രമേ ഞങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തിട്ടുള്ളൂ. നട്ടെല്ല് സാന്ദ്രത കണക്കാക്കാൻ, ഡെൻ‌ഡ്രൈറ്റിന്റെ (> 20 μm നീളമുള്ള) ഒരു എണ്ണ ഇമ്മേഴ്‌സൺ ലെൻസ് (× 510) ഉപയോഗിച്ച് ഒരു കോൺ‌ഫോക്കൽ മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് (സീസ് എൽ‌എസ്എം 40) ഉപയോഗിച്ച് കണ്ടെത്തി. ഡെൻഡ്രൈറ്റുകളുടെ എല്ലാ ചിത്രങ്ങളും വ്യത്യസ്തമായി എടുത്തതാണ് z ഡെൻഡ്രിറ്റിക് മുള്ളുകളുടെ രൂപഭേദം പരിശോധിക്കുന്നതിന് ലെവലുകൾ (0.5-1 deepm ഡെപ്ത് ഇടവേളകൾ). എല്ലാ അളവുകളും മെറ്റമോർഫ് ഇമേജ് അനാലിസിസ് സോഫ്റ്റ്വെയർ (യൂണിവേഴ്സൽ ഇമേജിംഗ്, ഡ own ണിംഗ് ട own ൺ, പി‌എ) ഉപയോഗിച്ചാണ് നടത്തിയത്. സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ വിശകലനത്തിൽ കോൾമോഗോറോവ്-സ്മിർനോവ് ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു.
റഫറുകളിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ഡെൻഡ്രൈറ്റുകളിൽ നിന്നുള്ള പ്രോട്രഷനുകളെ അവയുടെ നീളത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി നാല് തരം തിരിച്ചിട്ടുണ്ട്. 63 ഒപ്പം 64. ക്ലാസ് 1 പ്രോട്ടോറഷനുകൾ, സ്റ്റബ്ബി പ്രോട്ടോബുറൻസുകൾ എന്നും വിളിക്കപ്പെടുന്നു, അവയ്ക്ക് 0.5 2 μm നീളമുണ്ടായിരുന്നു, വലിയ നട്ടെല്ല് തലയില്ല, കഴുത്ത് ഉണ്ടെന്ന് തോന്നുന്നില്ല; ക്ലാസ് 0.5, അല്ലെങ്കിൽ മഷ്റൂം ആകൃതിയിലുള്ള മുള്ളുകൾ 1.25 മുതൽ 3 μm വരെ നീളമുള്ളവയായിരുന്നു, അവയ്ക്ക് ചെറിയ കഴുത്തും വലിയ നട്ടെല്ല് തലയും ഉണ്ടായിരുന്നു; ക്ലാസ് 1.25, അല്ലെങ്കിൽ നേർത്ത മുള്ളുകൾ, 3.0 നും 4 μm നും ഇടയിലായിരുന്നു, ഒപ്പം ചെറിയ തലകളുള്ള നീളമേറിയ നട്ടെല്ല് കഴുത്തും ഉണ്ടായിരുന്നു; ക്ലാസ് XNUMX, അല്ലെങ്കിൽ ഫിലോപൊഡിയൽ എക്സ്റ്റെൻഷനുകൾ, നീളമുള്ള ഫിലമെന്റസ് പ്രോട്ടോറഷനുകളായിരുന്നു, അവയ്ക്ക് നട്ടെല്ല് തലയിൽ വ്യക്തതയില്ല.
അക്നോളജ്മെന്റ്
യുണൈറ്റഡ് സ്റ്റേറ്റ്സ് പബ്ലിക് ഹെൽത്ത് സർവീസ് ഗ്രാന്റ് ഡാക്സ്നൂംക്സ് (പിജി, എസിഎൻ എന്നിവയ്ക്ക്), സൈമൺസ് ഫ Foundation ണ്ടേഷൻ, പീറ്റർ ജെ. ഷാർപ്പ് ഫ Foundation ണ്ടേഷൻ, പിക്കവർ ഫ Foundation ണ്ടേഷൻ, എഫ്എം കിർബി ഫ .ണ്ടേഷൻ എന്നിവ ഈ ജോലിയെ പിന്തുണച്ചിട്ടുണ്ട്.
അബ്രീവിയേഷൻസ്
- നാക്ക്
- ന്യൂക്ലിയസ് accumbens
- എംഎസ്എൻ
- ഇടത്തരം വലിപ്പമുള്ള സ്പൈനി ന്യൂറോൺ
- BAC
- ബാക്ടീരിയ കൃത്രിമ ക്രോമസോം
- DrD1
- ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ D1 പ്രൊമോട്ടർ-നയിക്കുന്നത്
- DrD2
- ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ D2 പ്രൊമോട്ടർ-നയിക്കുന്നത്
- DiI
- 1,1′-diotadecyl-3,3,3, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
- 2WD
- അവസാന മയക്കുമരുന്ന് ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം 2 ദിവസങ്ങൾ
- 30WD
- അവസാന മയക്കുമരുന്ന് ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം 30 ദിവസങ്ങൾ.
അടിക്കുറിപ്പുകൾ
താൽ‌പ്പര്യ പ്രസ്താവനയുടെ പൊരുത്തക്കേട്: പൊരുത്തക്കേടുകളൊന്നും പ്രഖ്യാപിച്ചിട്ടില്ല.
അവലംബം
;