ഡാഫോമിൻ D5 ഫോസ്ഫറിലേറ്റുകൾ ഡോസ്റീം സിഗ്നലിംഗ് (2)

അഭിപ്രായങ്ങൾ: D5 റിസപ്റ്ററുകൾക്കുള്ള Cdk2 ഡീലോമിൻ കുറയ്ക്കാൻ കാരണമാകുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്നു. വിചിത്രമായി, പരിഭാഷാ ഘടകം deltafosb Cdk5 ഉത്പാദനം പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു.

ജീയോങ് ജെ, പാർക്ക് യു, കിം ഡി.കെ, ലീ എസ്, ക്വാക്ക് വൈ, തുടങ്ങിയവരും. (2013) PLoS ONE 8 (12): EXX. doi: 84482 / journal.pone.10.1371

വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന

ഡോപ്പാമൻ D2 റിസപ്റ്റർ (DRD2) മൂഡ്, റിവാർഡ്, എമോഷൻ പോലുള്ള ഡോപ്പാമിൻ-അനുബന്ധ തലച്ചോർ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്ന ഒരു പ്രധാന റിസപ്റ്ററാണ്. സൈക്ലിൻ ആശ്രിത KINAS 5 (Cdk5) എന്നത് പ്രോൺലൈൻ സംവിധാനം ചെയ്യുന്ന സെറിൻ / ട്രിമോൺ കൈനസ് ആണ്. ഇതിന്റെ പ്രവർത്തനം മസ്തിഷ് റിവാർ സർക്യൂട്ടിലാണ്. DRD321 (D321IXX) എന്ന മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെക്ല്യൂളൽ ലൂപ്പിൽ സെർസർ 2 അവശിഷ്ടം (S2) Cdk3- ന്റെ ഒരു പുതിയ റഗുലേറ്ററി സൈറ്റാണ് എന്ന് ഈ പഠനത്തിൽ വ്യക്തമാക്കുന്നു. D52X ൽ S5 ന്റെ Cdk321 ആശ്രയിക്കുന്ന ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ നിരീക്ഷിച്ചു vitro ലെ സെൽ കൾച്ചർ സിസ്റ്റങ്ങൾ.

ഡി.എൻ.ഡി.എക്സ്.എൻ.എക്സ്.എക്സിൻറെ അഗണിസ്റ്റ്-ഉത്തേജക പ്രതലത്തിന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ ദുർബലപ്പെടുത്തി എസ്.ക്.ടി.എൻ.എൻ.എക്സ്.എക്സിനു താഴെയായി ജി പ്രോറ്റോൺ വിനിമയം കുറഞ്ഞുവെന്ന് ഞങ്ങൾ തുടർന്നു നിരീക്ഷിച്ചു. കൂടാതെ, ഡംപ്സ്റ്റീം കാപ് പാത്ത്വേ, ഹെർട്ടോറോളജിക്കൽ സിസ്റ്റത്തിലും, പി.എച്ച്.എൻ.എൻ.ഇക്സ് നോക്ക്ഔട്ട് ഭ്രൂണങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള പ്രാഥമിക ന്യൂറോണൽ സംസ്കാരങ്ങളിലും ഡിഎക്സ്എക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ്ക്സ് കുറഞ്ഞു വന്നിരുന്നു. ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് എസ്.എക്സ്.എൻ.എക്സ്.എക്സ് സിഡിഎംഎക്സ്-മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ DRD5 ഫംഗ്ഷനെ നിരോധിക്കുന്നു, ഡോപ്പാമിൻ സിഗ്നലിംഗിനുള്ള ഒരു നവീന നിയന്ത്രണ സംവിധാനം പ്രദാനം ചെയ്യുന്നു.

കണക്കുകൾ

ഉദ്ധരണി: ജീയോങ് ജെ, പാർക്ക് യു, കിം ഡി.കെ, ലീ എസ്, ക്വാക്ക് വൈ, തുടങ്ങിയവരും. (2013) Cdk5 ഫോസ്ഫോറിയെറ്റുകൾ ഡോപ്പൈൻ D2 റിസപ്ഷർട്ട് ആൻഡ് അടിവസ്ത്ര സിഗ്നലിംഗ് Attenuuates. PLoS ONE ഒരു 8 (12): E84482. doi: 10.1371 / journal.pone.0084482

എഡിറ്റർ: ജെയിംസ് പോർട്ടർ, നോർത്ത് ഡക്കോട്ട സർവകലാശാല, അമേരിക്കൻ ഐക്യനാടുകൾ

ലഭിച്ചവ മേയ് 10, 2013; അംഗീകരിച്ചു: നവംബർ XX, 14; പ്രസിദ്ധീകരിച്ചത്: ഡിസംബർ 31, 2013

പകർപ്പവകാശം: © 2013 ജിങ്ങ്ഗ് et al. ഇത് നിബന്ധനകൾക്ക് വിധേയമാക്കിയ ഒരു തുറന്ന ആക്സസ് ആർട്ടിക്കിൾ ആണ് ക്രിയേറ്റീവ് കോമൺസ് ആട്രിബ്യൂഷൻ ലൈസൻസ്യഥാർത്ഥ രചയിതാവും ഉറവിടവും ക്രെഡിറ്റ് നൽകിയിട്ടുള്ള, ഏതെങ്കിലും മാധ്യമത്തിൽ നിയന്ത്രണമില്ലാത്ത ഉപയോഗം, വിതരണം, പുനരുൽപാദനം അനുവദിക്കൽ.

ഫണ്ടിംഗ്: കൊറിയയുടെ ഗവൺമെന്റ് (MSIP) നിന്ന് ഗ്രാൻറുകൾ (NRF-2012R1NUMXXXXXXXXXXXXXXXX), കൂടാതെ കൊറിയൻ ബ്രെയിൻ റിസർച്ച് ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് (കെ.ബി.ആർ.ഐ.ആർ.ഐ) കൊറിയയുടെ എൻആർഎഫ് (2X2XXX01012923) MSIP ന്റെ അടിസ്ഥാന ഗവേഷണ പ്രോഗ്രാം (2012- 1). സ്കീഫോഫ്രീഷ്യൻ ആൻഡ് ഡിപ്രഷൻ (നാർസാഡ്) യങ് ഇൻവെസ്റ്റിഗേറ്റർ അവാർഡുകൾക്കായി നടത്തിയ ഗവേഷണത്തിനായി 4- ഉം 1028200 നാഷണൽ അലയൻസ് സ്വീകരിച്ചു. പഠന ഡിസൈൻ, ഡാറ്റ ശേഖരണം, വിശകലനം, പ്രസിദ്ധീകരിക്കാനുള്ള തീരുമാനം, കൈയെഴുത്തുപ്രതി തയ്യാറാക്കൽ എന്നിവയിൽ ഫണ്ടേഴ്സ്ക്ക് യാതൊരു പങ്കുമില്ല.

മത്സരിക്കുന്ന താൽപ്പര്യങ്ങൾ: രചയിതാക്കളെ എതിർക്കുന്നില്ലെന്ന് എഴുത്തുകാർ പ്രഖ്യാപിച്ചിട്ടുണ്ട്.

അവതാരിക

മോട്ടോർ കോർഡിനേഷൻ, മൂഡ് കൺട്രോൾ, റിവാർഡ് മെക്കാനിസം ഉൾപ്പെടെയുള്ള മസ്തിഷ്ക പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ ഡോപാമൈൻ സിഗ്നലിംഗ് ഉൾപ്പെടുന്നു [1]. ഡോപ്പാമൈൻ സിഗ്നലിംഗിൽ പ്രധാന ഘടകമായ സ്ട്രിറ്റാറ്റൽ മീഡിയൻ സ്പിന്നി ന്യൂറോണുകൾ (എംഎസ്എൻഎസ്) ഒരു ദോപോമിൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഉപവിഭാഗം പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ദ്പ്രേമൻ ടെംഗെൽസൽ ഏരിയ (VTA), സബ്സ്റ്റന്റിയ നിഗ്ര (SN) [2]. ഏഴ് ട്രാൻസ്മിംബൺ ഡൊമെയ്നുകളുള്ള ജി പ്രോട്ടീൻ കോപ്പഡ് റിസീപ്റ്ററുകൾ (GPCR), രണ്ട് ഉപവിഭാഗങ്ങൾ, D1- ഉം D2- പോലുള്ള റിസപ്റ്ററുകളും, ഡോപാമൈൻ സിഗ്നലിംഗിൽ ഇടപഴകുന്ന പ്രവർത്തനങ്ങൾ [1]. ഉദാഹരണത്തിന്, dopamine D1 പോലുള്ള റിസപ്റ്ററുകൾ (D1, D5) G വഴി അഡ്നൈലൈലി സൈക്ലസ് സജീവമാക്കുന്നുα കൾ മാത്രമല്ല, CAMP ന്റെ ഉയർന്ന തലവേദന വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, എന്നാൽ ഡോപ്മയിൻ D2 പോലുള്ള റിസീപ്റ്ററുകൾ (D2, D3, D4)ഞാൻ cAMP ന്റെ intracellular ലംബമാനം കുറയ്ക്കുക [1], [3].

ഡോപ്പാമൻ റിസപ്റ്ററുകൾക്കിടയിൽ, ഡിഎക്സ്എംഎക്സ്എക്സ് റിസപ്റ്റർ (DRD2) സ്കീസോഫ്രീനിയ, മയക്കുമരുന്ന് അടിമത്തം തുടങ്ങിയ നിരവധി പ്രധാന മാനസികരോഗ വിഡ്ഢികളിലെ പാത്തോഫിസിയോളജിയിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. [4]അത്തരത്തിലുള്ള നിരവധി ആന്റി സൈക്കോട്ടിക മരുന്നുകൾ കുറഞ്ഞത് ഭാഗികമായി DRD2 ലക്ഷ്യം വയ്ക്കുന്നത്. മൃഗങ്ങളുടെ മോഡലുകൾ ദുരുപയോഗം ചെയ്യുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള പെരുമാറ്റങ്ങളുടെ പ്രത്യാഘാതങ്ങളുമായി ഡിആർഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ് പ്രവർത്തനം നന്നായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്നും അറിയപ്പെടുന്നു [5]. PD, ERK, GSK2 എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഇടപെടുന്ന ഡിഎഡ്ഡക്സ്എൻഎക്സ് എക്സിക്യൂഷൻ അല്ലെങ്കിൽ താഴത്തെ ഇൻട്രാസെല്യൂളർ സിഗ്നലിംഗിലെ സൂക്ഷ്മദർശനത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾക്ക് ആൻഡെഡെൻപ്രസന്റ്സ്, മൂഡ് സ്റ്റെബിലൈസർ എഫക്ടിസിസി എന്നിവയുമായി ബന്ധമുണ്ട്. [1], [4], [6]. മസ്തിഷ്കത്തിൽ ഡിആർഡിഎൻഎൻഎൻഎക്സിനു വേണ്ടി ഈ നിർണായക പങ്കുകൾ ഉണ്ടായിട്ടും, ഡിഎച്ച്ഡിഎൻഎൻഎക്സ്എക്സ് പ്രോപ്പർട്ടികളിൽ നിന്നും വൈരുദ്ധ്യവും സങ്കീർണ്ണതയും നൽകുന്ന വിശദമായ നിയന്ത്രണ സംവിധാനങ്ങൾ പൂർണ്ണമായി മനസ്സിലാക്കാൻ കഴിഞ്ഞിട്ടില്ല.

ഡി.ആർ.ഡി.എക്സ്.എക്സ്.എക്സ്ക്സ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ മികച്ച-ട്യൂണലിൽ ഒന്നിലധികം പോസ്റ്റൽ അനൗപചാരിക പരിഷ്കരണങ്ങൾ ഏർപ്പെട്ടിട്ടുണ്ടെന്ന് തെളിവുകളുടെ പരിവർത്തനം സംയോജിപ്പിക്കൽ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഡിഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സ് എക്സ്പ്രെഷൻ ഗ്ലൈക്കോസൈലേൽ ഫോട്ടോയെടുപ്പ് ലേബലിംഗ് പഠനങ്ങൾക്ക് തുടക്കമായി [7], ഡിഎൻഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സിൽ ഡിഷൽഫൈഡ് ബോൺ രൂപീകരണം എന്നിവ ലിഗാൻഡ് ബൈൻഡിംഗിനുള്ള ഒരു പ്രധാന പരിഷ്കരണമായി തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട് [8]. കൂടാതെ, DRD2 ന്റെ ഫോസ്ഫോറലേഷൻ സൈറ്റുകൾ തുടക്കത്തിൽ കണ്ടെത്തി vitro ലെ റേഡിയോഐകോപ്പുകളുമായി ഇടപഴകുന്നതിലൂടെ, വിവിധ കൈനേറ്റങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് ഇടപെടുന്ന വിവിധ നിയന്ത്രണ മാർഗ്ഗങ്ങളിലേക്കുള്ള വഴികൾ നൽകുന്നു [9]. തീർച്ചയായും പ്രോട്ടീൻ കൈനസ് സി (പി.കെ.സി) കൃത്രിമ കാൽസ്യത്തിന്റെ ഡി.ആർ.ഡി.എക്സ്.എൻ.സെക്സ്-ഇൻഡിയേറ്റഡ് മൊബിലൈസേഷൻ ക്രമീകരിക്കുകയും സൈക്കോസ്കെലെറ്റൽ പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് DRD2 [10]. GPCR kinase 2 (GRK2) വഴിയുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ DRD2- ന്റെ അഗോണിസ്റ്റ്-ഇൻഡുഡന്റ് റെസെൻസിറ്റൈസേഷൻ പാറ്റേണുകളെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. [11].

സൈക്ലിൻ ആശ്രിത KINOS 5 (Cdk5) എന്നത് പ്രോട്ടീൻ സംവിധാനം ചെയ്യുന്ന സെറിൻ / ട്രിമോൺ കൈനസ് ആണ്. അത്യാവശ്യ പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ മസ്തിഷ്ക- p35, p39 [12]. ന്യൂറോണൽ മൈഗ്രേഷൻ ആൻഡ് ആക്സോൺ ഗൈഡഡ്, സിങ്കിക്സ്എൻഎക്സ്, പി.എക്സ്.എ.എൻ.എൻ.എക്സ് എം എൽ സ് [13]. WDVE1, ephexin എന്നിവയിലെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ Cdk5 വഴി dendritic spine morphogenesis ക്രമീകരിക്കുമെന്ന് അടുത്തിടെ തെളിഞ്ഞു. [14]. കൂടാതെ, NMDA റിസീപ്റ്ററിന്റെ, NR5B, NR2A- മധ്യേയുള്ള NMDA പ്രവാഹങ്ങളുടെ ഉപരിതല എക്സ്പ്രഷൻ നിലകളും Cdk2 ക്രമീകരിക്കുന്നു. [15], [16]. സിഡ്ക്എക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ്, ഡോപാമീൻ സിസ്റ്റങ്ങൾ തമ്മിലുള്ള അവിശുദ്ധമായ ബന്ധത്തെ അനേകം തെളിവുകൾ പരിശോധിക്കുന്നു എന്നത് ശ്രദ്ധേയമാണ്. Cdk5 ഫോസ്ഫോരിലേറ്റുകൾ ടയറോസിൻ ഹൈഡ്രോക്സൈലാസ് (TH), അതിന്റെ സ്ഥിരതയനുസരിച്ച് നിയന്ത്രിക്കൽ, അങ്ങനെ ഡോപനാമിർക്ക് ഹോമിയോസ്റ്റാസിസ് [17]. പോസ്റ്റിപ്രോട്ടിക് ന്യൂറോണുകളിൽ, T75 ഡോപ്പാമിൻ, സൈക്ലിക്ക്-എ എംപി റെഗുലേറ്റഡ് ഫോസ്ഫോപ്രോടിൻ- 32 കെഡി (ഡാർപിപി-എൻ.എക്സ്.എക്സ്.) എന്നിവ ക്രമീകരിക്കുമ്പോൾ Cdk32 ഫോസ്ഫോറോൾ ആണ്, ഇത് PKA പ്രവർത്തനത്തെ തടയുകയും DRAP5- മധ്യി PKA സിഗ്നലിംഗിനെ പ്രതിരോധിക്കുകയും ചെയ്യാം. [18]. ഡോകമിൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഒരു പരോക്ഷ അഗസ്റ്റോട്ടായ കൊക്കൈൻ കൊക്കെയ്ൻ എലികൾ, എംആർഎൻഎ, പ്രോട്ടീൻ നിലകളിൽ ഇടത്തരം സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളിലെ സി ഡിക്എക്സ്എൻഎക്സ് വർദ്ധനവ് [19]. സംയുക്തമായി, മയക്കുമരുന്ന് ഉദ്ദ്യേശിച്ച സിനാപ്റ്റിക് അഡാപ്റ്റേഷനിൽ Cdk5 ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഈ പഠനത്തിൽ, DRD2, Cdk5 എന്നീ പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ ഒരു ഇടപെടൽ ഞങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഡോപാമൈൻ സിഗ്നലിംഗിൽ CDNXXX ന്റെ പങ്ക് ഇതിലുൾപ്പെടുന്നു.

വസ്തുക്കളും രീതികളും

ആൻറിബോഡികൾ

DRD321 (D321iXX) എന്ന മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെല്ലർ ലൂപ്പിൻറെ ഫോസ്ഫോ-സെറിൻ 2 (pS2) അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന പെപ്റ്റൈഡിനെതിരെ ആന്റി-മുയൽ സെറുകൾ ഉയർത്തി. പോഷെ-പെപ്റ്റൈഡ്, CNPDpSPAKPEK (PEPTRON), ആൻറിറ്റി ശുദ്ധീകരണത്തിനായി പെപ്റ്റൈഡ് കോമ്പ്യൂജെറ്റ് കോളം ഉണ്ടാക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു (3, PIERCE). ആന്റി-പിഎസ്എക്സ്എൻഎൻഎൻഎക്സ് ആൻറിബോഡി നിർമ്മാണ നിർദേശത്തെ തുടർന്ന് ഒരു ശുദ്ധീകരണ സംവിധാനത്താൽ സമ്പന്നമാക്കി. ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട ഫോസ്ഫോ ആന്റിബോഡി പി.ബി.എസ്സിൽ സംഭരിച്ചിരിക്കുന്നത് 20401% സോഡിയം അസീഡ്, 83% ജെലാറ്റിൻ എന്നിവയാണ്. Cdk321 / P0.1 ന്റെ പാശ്ചാത്യ മരുന്നും ഇമ്യൂണോസൈറ്റൊകെമിസ്ട്രിയ്ക്കായി ആന്റി-മൗസ് ആൻറി- Cdk0.1 ആൻറിബോഡിയും (SC-5) ആന്റി-മുയൽ ആൻറി- p249 ആൻറിബോഡിയും (സ്കിൻ 35) ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു. DRD820-GFP ന്റെ immunoprecipitation ന്റേയും വെസ്റ്റേൺ ബ്ളോട്ടിംഗിനുമായി ആന്റി-മൗസ് ആന്റി-ജിഎഫ്പി ആൻറിബോഡി (SC-5) ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു. Anti-mouse anti-GST antibody (sc-35), anti-mouse anti-GAPDH ആന്റിബോഡി (sc-9996), ആന്റി-മുയൽ ആന്റി- HA ആന്റിബോഡി (sc-2), ആന്റി-മുയൽ ആന്റി- 807) സാന്താക്രൂസ് ബയോടെക്നോളജിൽ നിന്ന് വാങ്ങി.

മൃഗങ്ങൾ

ജപ്പാനിലെ RIKEN ബ്രെയിൻ സയൻസസ് ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ടിലെ ഡോ. കറ്റ്സുക്കോ മൈക്കോസിബയിൽ നിന്നുള്ള ഒരു തരം സമ്മാനമാണ് p35 നോക്ക്ഔട്ട് മൌസ്. ഇത് പ്രാഥമിക ന്യൂറോൺ സംസ്കാരത്തിന് ഉപയോഗിക്കുന്നു. മുമ്പ് വിവരിച്ച പ്രകാരം ജനിതകവ്യത്യാസത്തിന്റെ പ്രൈമർ സെറ്റുകൾ ആയിരുന്നു XXX-GGTCTCCTCTTCTGTCAAGAAG, 5-GCTCTGCTAGACACATACTGTAC, 5- TCCATCT GCACGAGACTAGT [20]. ഐസിആർ എലികളും സ്പ്രെഗെ ഡാവ്ലി എലികളും മസ്തിഷ്മ lysate തയ്യാറെടുപ്പിനായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. പോഹാം യൂണിവേഴ്സിറ്റി ഓഫ് സയൻസ് ആന്റ് ടെക്നോളജി ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ ആനിമൽ കെയർ ആന്റ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകരിച്ച എല്ലാ മൃഗങ്ങളെപ്പറ്റിയും അംഗീകരിച്ചു.

പ്ലാസ്മിഡ് കൺസ്ട്രക്ടുകൾ

PFLAG-CMV-2 പ്ലാസ്മിഡ് വെക്റ്റർ ഉപയോഗിച്ചു് EGFP-N1 പ്ലാസ്മിഡ് വെക്റ്ററിലും DRD2- ന്റെ മൂന്നാമത് ഇൻറക്ക്കലോലുൾ ലൂപ്പിന്റേയും (DRD212 നീണ്ട ഐസോഫോമിൽ നിന്നുമുള്ള എൺപത് അമിനോ ആസിഡുകളുള്ള 373 അമിനോ ആസിഡുകളുൾപ്പെടെ) മൂന്നാമത്തെ ഇൻറക്ക്കലോലുൾ ലൂപ്പിൽ മനുഷ്യ DRD29 നീണ്ട ഐസോഫോം ഉപയോഗിക്കുന്നു. PcMV-HA പ്ലാസ്മിഡ് വെക്റ്ററിൽ മനുഷ്യ സിഡക്സ് XXX ചേർത്തിട്ടുണ്ട്. പിസിഡിഎൻഎ.എൻ.എൻ.എൻ.എൻ.എൽ.എൽ പ്ലാസ്മിഡ് വെക്റ്റർയിൽ മനുഷ്യ പിഎക്സ്എൻഎക്സ് എക്സ്. മനുഷ്യർ P2 ഒരു സൈക്മോമെല്ലാവോവിറസ് (CMV) പ്രൊമോട്ടറുടെ കീഴിൽ മനുഷ്യർ CdkXXX ഒരു pcDNA XXX വെക്റ്റർ ഉപയോഗിച്ച് ഡുമൽ എക്സ്പ്രഷൻ നിർമാണം (Cdk2 / P5), പ്രതിരോധ ആന്തരികവൽക്കരണം,35S] -GTPγഎസ് ബൈൻഡിംഗ് എകേ, റേഡിയോ ഒലിൻഡന്റ് ബൈൻഡിങ് അസെയും സിഎപിഎൻ എൻസൈം ഇമ്മ്യൂണോസെയും.

വിട്രോയിൽ കൈനസ് അസ്സെ

IP- ലിങ്ക്ഡ് vitro ലെ കിനേസ് അസെ താഴെ പറയുന്നതുപോലെ ചെയ്തു. ഒരു എലിയുടെ മസ്തിഷ്കം തലച്ചോറ് lysates ലഭിക്കുന്നതിന് ഡൻസ് homogenizer ന്റെ 3 സ്ട്രോക്കുകൾ വഴി 50 mL erythrocytes lysis ബഫർ (ELB) (8.0 mM Tris (pH 250), NMCl എൻഎംഎൽ, NMX, NMX, NMX, NMX- . LASATES 5 മിനിറ്റിന് ഹിമക്കട്ടയിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു, sonicated, and centrifuged at 0.1 × g XNUM മിനിറ്റിനുള്ളിൽ. സജീവ Cdk10 / P35 സങ്കീർണ്ണത ലഭിക്കുന്നതിന് സൂപ്പർബിറ്റന്റുകൾ ആന്റി-മുയൽ വിരുദ്ധ anti-p5 ആന്റിബോഡിയിൽ പ്രതിരോധിച്ചു. Cdk35 / P5 സങ്കീർണ്ണവും ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടതുമായ GST ഫ്യൂഷൻ പ്രോട്ടീൻ Adenosine 35'-triposphate ചേർത്ത്, [γ-32പി] (NEG-502H, PerkinElmer) കൂടാതെ കിനേസ് ബഫറിൽ ഇൻകുബേറ്റഡ് (30 എംഎം ഹെപ്പസ് (പിഎച്ച് 7.2), എംഎം എം എം എം എം ഐ ക്ലാൽ2, XMM mM DTT) ഊഷ്മാവിൽ തണുപ്പുകാലത്ത് 0.2 മണിക്കൂർ [18], [21]. ശുദ്ധീകരിച്ച Cdk5 / P25 കോംപ്ലക്സ് (14-516, Millipore) vitro ലെ മുകളിൽ വിവരിച്ച പോലെ കിനേസ് assay. പ്രതികരണ മിശ്രിതത്തിലേക്ക് 2 × സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് ബഫർ ചേർക്കുകയും 100 ° C യിൽ തിളപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. എസ്.ഡബ്ല്യു.പി-പിഎസിലേക്ക് സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു. സ്വീറ്റ് ഗ്യാലറിയിൽ ഉണക്കിയ ജെൽ കണ്ടെത്തി.

ലിക്വിഡ് ക്രോമോട്ടീഗ്രാം (LC) -മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി (എംഎസ്) / എം എസ് അനാലിസിസ്

ഐസി ലിങ്ക് ചെയ്ത ശേഷം, എൽ.ജി.-എം.എസ് / എം. എസ്. vitro ലെ kinase assay. ഞങ്ങൾ ടി.വി.ഉപയോഗിച്ച് എൽസി-എംഎസ് / എം എസ്സിന്റെ പെപ്റ്റൈഡ് ഐഡൻറിഫിക്കേഷൻ നടത്തുന്നു !! (ഡിസംബർ -1930-83). ഓരോ RAW ഡാറ്റാ ഫയലും ആദ്യം ട്രാൻസ്പ്രോമിക് പൈപ്പ് ലൈൻ (TPP, പതിപ്പ് 01) ഉപയോഗിച്ച് mzXML ആയി പരിവർത്തനം ചെയ്തു. പരിവർത്തനം ചെയ്ത എം.എസ്.എക്സ്.എൽ.കളിലെ എംഎസ് / എസ്എസ് സ്കാനുകൾ പിന്നീട് ജിഎസ്ഡി-ഡിഎക്സ്എൻഎൻഎൻഎക്സ്എക്സ് എക്സ്ക്വയർ ഉപയോഗിച്ച് X- ടൺ ഉപയോഗിച്ച് അൺലിപിറോട് മൗസ് പ്രോട്ടീൻ സീക്വൻസ് ഡാറ്റാബേസ് (പുറത്തിറക്കിയത് 2008_4.3) ഉപയോഗിച്ച് തിരയാൻ കഴിഞ്ഞു. മുൻകൂർ അയോണുകൾക്കായി 2010 ഡായും ഫ്രെയിംമെൻറ് അയോണുകൾക്കായി 07 ഡായും സഹിഷ്ണുത സജ്ജമാക്കി. ട്രൈപ്സനിനായുള്ള എൻസൈം സ്പെസിറ്റിവിറ്റി ഉപയോഗിച്ചു. Cysteine ​​(2 ഡാ), മെതെയോടൈൻ ഓക്സീകരണം (3 ഡാ), asparagine (3 ഡാ) എന്നിവയുടെ ഹൈഡ്രോളിസിസ്, സെറിൻറെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ (2 ഡോ) എന്നിവയ്ക്കായി വേരിയബിൾ പരിഷ്കരണ ഓപ്ഷനുകൾ ഉപയോഗിച്ചു.

രോഗപ്രതിരോധം

ELB lysis ബഫറിലെ സെൽ lysates ൽ Immunoprecipitation നടത്തുകയുണ്ടായി. ആന്റി-ജിഎഫ്പി ആൻറിബോഡി ആ ലിസിറ്റുകളിൽ ചേർക്കുകയും 3 ° C ൽ 4 മണിക്കൂറായി ഇൻകുബേറ്റഡ് ചെയ്യപ്പെടുകയും ചെയ്തു. പ്രോട്ടീൻ-എ agarose ഉപയോഗിച്ച് രോഗപ്രതിരോധം ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടു. 30 ° C യിൽ 37 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ SDS സാമ്പിൾ ലോഡിംഗ് ബഫറിലും, SDS-PAGE, വെസ്റ്റേൺ സ്ളോട്ട് എന്നിവയിലും ചുഴറ്റുണ്ടായിരുന്നു.

ജിഎസ്ടി പിൾ-ഡൗൺ അസെ

10 μg ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട GST, GST-D2XX- ന് എൺഎൻഎൻഎസിനായി ക്വിക് ബ്രെയിൻ ലൈസറ്റ് സംസ്കരിക്കപ്പെട്ടിരുന്നു. ലിസ്റ്റിലെ ബഫറോട് കൂട്ടിച്ചേർത്ത് 3 μL ന്റെ ഗ്ലൂത്തോത്തോയൻ (GSH) കോങ്കേറ്റഡ് സെപറോസ് 1.5B മുടി (4-30-4, GE ഹെൽത്ത് ഹെൽത്ത്) ചേർത്തു, കൂടുതലായി 17 മണിക്കൂർ വരെ ഉഴുന്നു. മുത്തുച്ചികൾ 0756 × ന് സെന്റ്രുഫുഗേഷൻ ശേഖരിച്ചുg ഒപ്പം lysis ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് 4 തവണ [22], [23]. Anti-cdk5 ആന്റി-പിഎക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് പാശ്ചാത്യപ്രയോഗത്തിലൂടെ ആഘാതങ്ങളെ വിശകലനം ചെയ്തു.

ഇമ്മ്യൂണോസൈറ്റ്ഹൈമിസ്ട്രി

കവർസ്ലൈപ്പുകളിൽ സംസ്കരിക്കപ്പെട്ട HEK 293 സെല്ലുകളും സ്ട്രെയ്ലറ്റൽ ന്യൂറോണുകളും ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫേർഡ് സലൈൻ (പിബിഎസ്) ഉപയോഗിച്ച് കഴുകിയതും 4% പാറാ ഫോർമാൽഡിഹൈഡ് / പി ബി എസ് 3 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ മുക്കിയതും പരിഹരിച്ചു. പ്രാഥമിക ആൻറിബോഡി തടസ്സപ്പെടുത്തിയ പരിഹാരത്തിൽ ലയിപ്പിച്ചതാണ് (പിഎസ്എസുകളിൽ 30% കുതിരക്കൃഷിയും 2% ട്രൈറ്റൺ X-1 ഉം). അലക്സാഫുലോർ-എൻ.എം.എൻ.-കോമ്പ്യൂജെറ്റഡ് ആന്റി-മൗസ് ആൻറിബോഡി (A100, ക്ഷയരോഗവിദഗ്ധ), അലക്സാഫ്ലൂർ-എൻ.എക്സ്.എക്സ്. കോമ്പ്യൂജെറ്റഡ് ആൻറി മുയൽ ആൻറിബോഡി (A647, ക്ഷയരോഗം) എന്നിവ ഗാർഹിക ആന്റിബോഡികളായി ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു. ന്യൂക്ലിയസ് സ്റ്റിന്നിംഗിനായി ഹൂസ്സ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. ചിത്രങ്ങൾ കോപ്പൽ മൈക്രോസ്കോപി (Olympus, FluoView-20990) വഴി ലഭ്യമാക്കി.

റിസീപ്റ്റര് ഇന്റര്സലൈസേഷന് അസീ

ട്രാൻസ്ഫിക്കേഷനുശേഷം, 24 ° C യിൽ 1 മില്ലി 102 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ സെല്ലുകൾക്ക് 30 μM ക്വിൻപയോളിനെ (Q90, സിഗ്മ) നൽകി. ഓരോ പ്രതികരണത്തിനും 37 മില്ലിമീറ്റർ തണുത്ത PBS- ഉം 2 μL അലക്കോട്ടുകളും ഉപയോഗിച്ച് വീണ്ടും സെസ്സ് ചെയ്യപ്പെട്ടു. താഴെപറയുന്ന സാന്ദ്രതയിൽ 200 മണിക്ക് ഊഷ്മാവിൽ മരുന്നുകൾ കൈകാര്യം ചെയ്തു. 3 nM [3H] -സിപീപ്പർ (NET-565, PerkinElmer), 3 μM സൾപ്രിഡ് (895, TOCRIS), XMX μM ഹലോപീരിഡോൾ (H10, സിഗ്മ). ഹൈഡ്രോഫോബിക് [3H] -സ്പൈപ്പറോൺ മൊത്തം സൂചിപ്പിച്ച വാതീകരണങ്ങളെ ലേബൽ ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിക്കുകയും hydraphilic sulpiride ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്ക്രാപ്ടോൺ-ബന്ധിതമായി3H] സ്പിപെറോൺ സിഗ്നലുകൾ. മൊത്തം വെളിപ്പെടുത്തിയ മൂല്യനിക്ഷേപ മൂല്യങ്ങളിൽ നിന്ന് ഇൻററാക്യുലർ റിസപ്ഷൻ മൂല്യങ്ങൾ കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ മെമ്പ്രൻ-അസോസിയേഷൻ റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലുകൾ കണക്കുകൂട്ടുന്നു. GF / B (Millipore) ഫിൽറ്ററിൽ സെല്ലുകൾ ഫിൽട്ടർ ചെയ്യപ്പെടുകയും കഴുകുന്ന ബഫറിനൊപ്പം എട്ടു തവണ കഴുകി (3 mM Tris-HCl (pH 50), XMM mm NaCl). ഫിൽട്ടറുകൾ ഉണങ്ങിപ്പോയി, ദ്രാവക സ്റ്റിന്റിലേഷൻ കൌണ്ടർ ഉപയോഗിച്ചുകൊണ്ട് ബാക്കിയുള്ള റേഡിയോ ആക്റ്റിവിറ്റി അളന്നു [24].

സെൽ മെംബ്രെൻ തയ്യാറാക്കൽ

പരുത്തിക്കൃഷിക്ക് ശേഷം 100 മില്ലീമീറ്റർ സംസ്ക്കരണ വിഭവങ്ങളിൽ കഴുകി കളയുകയാണ് ഐസ്-തണുപ്പുള്ള പി.ബി.എസ് ഉപയോഗിച്ച് കഴുകിയത്, 1 മില്ലി HME ബഫറിൽ (25 മില്ലി ഹെപ്പസ് (പി.എച്ച് 7.5), MMc MgCl2, എൺ എംഎം എ എം ടി എം). ഹോണോനിസഡ് ലൈസറ്റുകൾ 1 × 10 മിനിറ്റിനൊപ്പം സെന്റീഫുഗ് ചെയ്യപ്പെട്ടു, സൂപ്പർഫാറ്റന്റുകൾ പിന്നീട് 500 × 10 മിനിറ്റിനകം സെന്റീഫൈഗുഡ് ചെയ്തു. HME ബഫറിൽ വീണ്ടും സസ്പെൻഡ് ചെയ്യപ്പെട്ട തൂണുകൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ ഉപയോഗിച്ചിരുന്നു.

[35S] -GTPγഎസ് ബൈൻഡിംഗ് എസ്സ്

സെൽ മെംബ്രൺ ഭിന്നങ്ങൾ അൾവേ ബഫറിൽ 1 μ എം ക്വിൻപിപ്രോ (Q102, സിഗ്മ) ഉപയോഗിച്ച് മുൻകാലികമായി ഇൻകുബേറ്റഡ് ചെയ്തു (25 mM HEPES (pH 7.5), MMX MMCl2, XMM mm NaCl, 100 mM EDTA, XMm mM GDP) 1 മിനിറ്റ്. [35S] -GTPγS (NET-030H, PerkinElmer) 3 nm ൽ അവസാനത്തെ എൻസെമൻസിനോളം ചേർക്കുകയും, ഒപ്പം 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ കൂടുതൽ ഇൻകുബേറ്ററാക്കി മാറ്റുകയും ചെയ്തു. ഐസ്ലറ്റ്-തണുത്ത ബഫറിന്റെ 90 μL (170 mM Tris-HCl (pH 10), XMM ml NaCl, MMCl MgCl2, കൂടാതെ 0.1 എംഎം ജിടിപി) പ്രതികരണം നിർത്താൻ കൂട്ടിച്ചേർത്തു. GF / B ഫിൽറ്റർ (മില്ലിപ്പോർ) ൽ മെബലന്മാർ ഫിൽറ്റർ ചെയ്യപ്പെടുകയും കഴുകുന്ന ബഫറിനൊപ്പം എട്ടു തവണ കഴുകി (3 mM Tris-HCl (pH 50), XMM mm NaCl). അഴുകൽ കൌണ്ടർ ഉപയോഗിച്ച് ഫിൽട്ടറുകൾ ഉണക്കപ്പെടുകയും റേഡിയോ ആക്റ്റിവിറ്റി അളക്കുകയും ചെയ്തു [25], [26].

റേഡിയലിഗാൻഡ് ബൈൻഡിംഗ് എസ്സ്

തയ്യാറാക്കിയത് സെൽ സ്തരങ്ങൾ 0.01 എൻഎം വച്ച് ഇൻകുബേറ്റഡ് ചെയ്തു [3H-സ്പിപെറോൺ (NET-565, PerkinElmer), അൾഷൻ ബഫറിൽ 102 മിനിറ്റ് ക്വിൻപോപ്ലിൻറെ (Q30, സിഗ്മ) സാന്ദ്രത വർദ്ധിക്കുന്നു (XNUM മില്ലി ഹെപ്പസ് (pH 25), MMc MgCl2, XMN m ml NaCl, 100 mM EDTA). GF / B ഫിൽറ്റർ (മില്ലിപ്പോർ) ൽ മെബലന്മാർ ഫിൽറ്റർ ചെയ്യപ്പെടുകയും കഴുകുന്ന ബഫറിനൊപ്പം എട്ടു തവണ കഴുകി (1 mM Tris-HCl (pH 3), XMM mm NaCl). ജിഎഫ് / സി ഫിൽട്ടറുകളിലൂടെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ഫിൽട്ടറേഷൻ പ്രതികരണമല്ലാതാക്കി. ഒരു ദ്രാവക സ്റ്റിന്റിലേഷൻ കൌണ്ടർ ഉപയോഗിച്ച് ബാക്കിയുള്ള റേഡിയോ ആക്റ്റിവിറ്റി അളന്നു [27]-[29].

CAMP എൻസൈം ഇമ്യൂണസ്സാസ്

ട്രാൻക്രിഫൈഡ് HEK 293 സെല്ലുകൾ 10 μM നുള്ള 6520 μM റാലിപ്ഗ്രാം (R1, സിഗ്മ) ഉപയോഗിച്ച് പ്രീ ക്രോട്ടുചെയ്ത്, തുടർന്ന് 0.1 μM ഫോർസ്കോൺ (F6886, സിഗ്മ) ഉപയോഗിച്ച് 102 മിനിറ്റിനുള്ള ക്വിൻപൈലിൻറെ (Q30, സിഗ്മ) സാന്ദ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുക. പ്രാഥമിക സംസ്ക്കരിച്ച സ്ട്രീമാട്ടൽ ന്യൂറോണുകൾ 10 μM നുള്ള 1 μM റാലിപ്ഗ്രാം ഉപയോഗിച്ച്, 1 μM ഡോപ്പാമിൻ 1 മണിക്കൂർ [22]. 0.1 M HCl ഉപയോഗിച്ച് സെൽ lysates തയ്യാറാക്കി CAMP അളവുകൾ CAMP എൻസൈം immunoassay കിറ്റ് (സഫയർ ബയോസൈൻസ്) നിർമാതാക്കളുടെ നിർദ്ദേശത്തെ പിന്തുടർന്ന് കണ്ടെത്തി.

പ്രൈമറി കൾച്ചറൽ സ്ട്രാറ്ററൽ ന്യൂറോൺ

മൗസ് എബ്രിയോണിക്ക് ബ്രെയിൻ (E15) മുതൽ സ്ട്രിയാറ്റൽ പ്രദേശം വേർതിരിച്ചെടുക്കപ്പെട്ടു. വിചിത്രമായ ടിഷ്യു 11095 ° C യിൽ 0.25% ട്രൈപ്സണിന്റെ (T4549-100, സിഗ്മ) അടങ്ങുന്ന അത്യന്താപേക്ഷിത മീഡിയ (MEM) (0.1, ക്ഷണക്കത്ത്), 6% DNase I എന്നിവയിൽ നിന്നും വേർപെടുത്തി. പ്ലാസ്റ്റിക് മാദ്ധ്യമങ്ങളിൽ സെല്ലുകൾ വീണ്ടും തുറന്നു. (എം.എം.എൻ. എം.എം. ഹെപ്പേസുള്ള (പിഎച്ച് 37), 0.01% (വോള്യം / വോളിയം) കുതിരവട്ടം (7.4- 10, GIBCO). നാല്പത് ദിവസങ്ങൾക്കുള്ളിൽ നാഡരോഗങ്ങൾ സംസ്ക്കരിക്കപ്പെട്ടു vitro ലെ (DIV 7) CAMP എൻസൈം ഇമ്മ്യൂണോസെസുകളിലേക്ക് പ്രയോഗിക്കുന്നതിനു മുമ്പായി B27 സപ്ലിമെന്റിൽ (17504- 044, Invitrogen) മെമ്മറിയിൽ.

ഫലം

DRD5- ന്റെ മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെക്ല്യൂലർ ലൂപ്പിൽ Cdk321 ഫോസ്ഫോറലേറ്റ് സെറീൻ 2 vitro ലെ

Cdk5 എന്ന സബ്സ്ട്രേറ്റുകളെ തിരിച്ചറിയാൻ Cdk5 അംഗീകാര ഏകോപിപ്പിക്കുന്ന കൺസെൻസസ് സീക്വൻസുകളായി (S / T) പിക്സ് (കെ / എച്ച് / ആർ) ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങൾ ഒരു നിർദ്ദിഷ്ട തിരയൽ നടത്തി. [30] കൂടാതെ DRD2 ഒരു സ്ഥാനാർഥി ഉപഗ്രഹം എന്ന് തിരിച്ചറിഞ്ഞു. സെറിൻ 321 ഉൾപ്പെടെയുള്ള സമവായമാണ് ക്രമം, DRD2 (D2iXX) ന്റെ മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെക്ല്യൂളി ലൂപ്പിൽ സ്ഥിതിചെയ്യുന്നു, അവിടെ വിവിധ നിയന്ത്രണ സംവിധാനങ്ങൾ ഉൾപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട് [3], [10], [11]. ക്രെഡിറ്റ് ഡിറക്യുഎൻഎക്സ് എന്ന വിഭാഗത്തിൽ ക്രമാനുഗതമായി പരിരക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ ഒരു പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നു.ചിത്രം XXXA).

ലഘുചിത്രം

ചിത്രം 1. DRD5 എന്ന മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെല്ലർ ലൂപ്പിൽ സിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എഫ് ഫോസ്ഫോരിലേറ്റുകൾ സെറിൻ 321 ഇൻട്രൂയിൽ

(എ) അമോനോ ആസിഡ് ശ്രേണിയുടെ വിന്യാസം വിവിധ ജൈവ വൃത്തങ്ങളിൽ നിന്ന് ഡിആർഡിഎൻഎക്സ്എക്സ്എക്സിൻറെ സംരക്ഷിത പ്രദേശങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു. ആക്സിസ്ക് ഉപയോഗിച്ച് സി ഡിക്യുഎൻഎക്സ്എക്സ് ഫോസ്ഫോറലേഷൻ സൈറ്റിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (ബി) IP- ലിങ്ക്ഡ് vitro ലെ recombinant GST-D2iXX, GST-D3XXMLX മിതമായ പ്രോട്ടീനുകൾ എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെടുത്തൽ. മസ്സാമിന്റെ പ്രതിവിധി ഉപയോഗിച്ച് മൃദുലമായോ സിഡിക്എക്സ്എക്സ്എക്സ്. ഫോസ്ഫോറലിറ്റഡ് പ്രോട്ടീനുകളുടെ ഓട്ടോമോഡീഗ്രാഫോറെ കോമസ്സിയുടെ മികച്ച നീല നിറത്തിൽ ഒരേ ജെൽ കൊണ്ട് കാണാം. GST-D2i3- കളിലേക്കും തുറന്ന ആരോഹൈഡിലേക്കും പൊരുത്തപ്പെടുന്ന റേഡിയോആക്ടീവ് സിഗ്നൽ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, P5- ൽ നിന്നുള്ള റേഡിയോആക്ടീവ് സിഗ്നലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (സി) D35iXXX ന്റെ ഫോസ്ഫോറലിറ്റഡ് പെപ്റ്റൈഡ് ശൃംഖലയുടെ MS / MS സ്പെക്ട്രം. സൈദ്ധാന്തികമായ ഫ്രാഗ്മേഷൻ പാറ്റേണുകൾ സ്പെക്ട്രം താഴെ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. എല്ലാ അകലത്തിലുള്ള അയോണുകളിലും, കണ്ടെത്തിയ y- ഉം b- അയോണുകളും സ്പെക്ട്രത്തിലാണ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. എസ്6 ഉം7 അണുക്കൾ XINX ന്റെ സെസ്സിനുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ശക്തമായി സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (D) ഇൻ విటോ GST-D5XXX & GST-MX-MXIN mutant പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിച്ചിരിക്കുന്ന Cdk25 / GST-p2 സങ്കീർണത ഉപയോഗിച്ച് kinase assay. കോമോസി ബൃഹത്തായ നീലനിറമടങ്ങിയ ഒരു ഓട്ടോമോഡീഗ്രാഫറിൽ ഫോസ്ഫോറലിറ്റഡ് പ്രോട്ടീനുകൾ കാണിച്ചു. GST-D3IXXX, തുറന്ന ആരോഹൈഡുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട റേഡിയോആക്ടീവ് സിഗ്നൽ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, GST-p2 ൽ നിന്നുള്ള റേഡിയോആക്ടീവ് സിഗ്നലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

doi: 10.1371 / ജേർണൽ.pone.0084482.g001

സിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്ഫോസ്ഫോസ്ഫോർട്ട് ലേക്ക് D5iXX ന്റെ ശേഷി വിലയിരുത്തുന്നതിന് ഞങ്ങൾ IP- ലിങ്ക് ചെയ്ത vitro ലെ എംഎഫ് മസ്തിഷ്ക ലൈസറ്റ് മുതൽ സമ്പുഷ്ടമായ Cdk5 / P35 കോംപ്ലക്സ് ഉപയോഗിച്ച് pinNUMX ഇമണോപോപ്രസിറ്റേഷൻ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട റീകോംബിനന്റ് GST-D35XXX (അമിനോ ആസിഡ് അവശിഷ്ടങ്ങൾ 2-3) പ്രോട്ടീനുകൾ അടങ്ങിയ ഉപരിതലങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് kinase assays. നാം പരിശുദ്ധി ചരക്കുസേവന-ദ്ക്സനുമ്ക്സിക്സനുമ്ക്സ ആൻഡ് ചരക്കുസേവന-ദ്ക്സനുമ്ക്സിക്സനുമ്ക്സ സ്ക്സനുമ്ക്സഅ പ്രോട്ടീൻറെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ സിഗ്നലുകൾ നിരീക്ഷിച്ചു, എന്നാൽ സിഗ്നൽ ഗണ്യമായി ചരക്കുസേവന-ദ്ക്സനുമ്ക്സിക്സനുമ്ക്സ സ്ക്സനുമ്ക്സഅ ഉപയോഗിച്ച് കുറഞ്ഞു ചെയ്തു (ചിത്രം. 1B). GST-D321XX ൽ XINX ന്റെ സെസ്ലൈൻ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ പരിശോധിക്കാൻ, IP- ലിങ്ക് ചെയ്ത സാമ്പിളുകളുടെ LC-MS / MS വിശകലനം ഞങ്ങൾ നടത്തി. vitro ലെ LTQ XL പിണ്ഡം സ്പെക്ട്രോമെട്രി ഉപയോഗിച്ചുള്ള kinase assays. സ്ഥിരമായ രീതിയിൽ, ഫോസ്ഫോ-സെറിൻ 321 പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ പിണ്ഡത്തിന് സമാനമായ ഫോസ്ഫോ പെപ്റ്റൈഡുകൾ വീണ്ടെടുക്കപ്പെട്ടു (ചിത്രം 1C). LC-MS / MS വിശകലനം സമയത്ത് ഡാറ്റ അനുസരിച്ചുള്ള ഏറ്റെടുക്കൽ സാമ്പിളിൽ ധാരാളം പ്രോട്ടീനുകൾ കണ്ടുപിടിക്കാൻ ശ്രമിക്കുന്നു [31], ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് 321IXX പ്രദേശത്ത് 5 ശേഷിയുള്ള സിഡിക്എക്സ്എക്സിലെ ആധികാരിക ഫോസ്ഫോറലേഷൻ സൈറ്റാണ്. GST-D2XX ൽ Cdk3 ൽ XineX- ന്റെ നേരിട്ടുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ തെളിയിക്കാൻ, vitro ലെ ശുദ്ധീകരിച്ച റെക്കോബിൻ ജിഎൻസ്ടി -XXXXXX പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിച്ച Cdk5 / GST-p25 കോംപ്ലക്സ് ഉപയോഗിച്ച് kinase assay നടത്തി. ഞങ്ങൾ GST-D2XXXXXXXXXXXA ൽ ഇല്ലാതിരുന്ന GST-D3XXX ൽ പ്രധാനപ്പെട്ട ഒരു phosphorylation സിഗ്നൽ കണ്ടെത്തിചിത്രം. 1D). ഒന്നിച്ചുചേർത്താൽ, ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് Cdk2- മദ്ധ്യസ്ഥൻ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ എന്നതിനായുള്ള D3I321 S5 അവശിഷ്ടം മുൻഗണന ലക്ഷ്യം.

സെല്ലുകളിൽ DRD5- ന്റെ മൂന്നാം ഇൻട്രാസല്യൂലൽ ലൂപ്പിൽ Cdk321 ഫോസ്ഫോറലേറ്റ് സെറീൻ 2

XineX ന്റെ സെസ്ക്രീനിലെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ തിരിച്ചറിയാൻ, ഞങ്ങൾ ഫോസ്ഫോ-സെറിൻ 321 (pS321) പ്രത്യേകം പ്രത്യേകം ശ്രദ്ധിച്ചു. ഐപി ലിങ്കുചെയ്തവയിൽ നിന്നുള്ള സാമ്പിളുകൾ vitro ലെ പിസിഎക്സ്എൻഎസ്എക്സ് ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ച് പാശ്ചാത്യപ്രയോഗത്തിലൂടെ കൈനസ് അസെയെ വിശകലനം ചെയ്തു. GS-D321XXX നെ ആശ്രയിച്ചിരുന്ന കിരണേസിൻറെ പ്രതികരണത്തിൽ ഒരു സവിശേഷമായ ബാൻഡ് കാണിച്ചു.ചിത്രം XXXA). ഡിഎൻഡിക്സ്.എൻ.എക്സ്. ഡിഎൻഡിഎൻഎക്സ്എക്സ് സെല്ലുകളിൽ സെഡ്നിൻ 321 ന്റെ സെൽവിൻ XXX സെൽ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ പരിശോധിക്കാൻ, എച്ഡി- XXXXXXXXXXX- ഉം ജി.എച്ച്.പി.യും ഡി.എൻ.ഡി.എക്സ്.എക്സ്.എക്സ്.എക്സ്. ആന്റി-പാക്സക്സ് ആന്റിബോഡികൾ. DRD2- ജിഎഫ്പി യുടെ സാന്നിദ്ധ്യത്തിൽ മാത്രമാണ് ഡി.എൻ.ഡി.എക്സ്.എൻ.എക്സ്.എക്സ് ഗ്ലൈക്കോസിലൈസേഷൻ ആയ ജിഎഫ്പി ആൻറിബോഡി പ്രതിരോധം ആന്റി-ജിഎഫ്പി ആൻറിബോഡി, കൂടാതെ ആന്റി-പിഎസ്എക്സ്എൻഎൻഎക്സ് ആൻറിബോഡി എന്നിവ സി ഡിക്യുഎൻഎക്സ് എക്സ്എക്സ് / പിഎക്സ്എൻഎക്സ് കോക്സ് എക്സ്പ്രെഷനിൽ മാത്രം സമാന ഡി ഡി ഡിഎക്സ്എൻഎക്സ് സിഗ്നലുകൾ കണ്ടുപിടിച്ചിരുന്നു (ചിത്രം. 2B) [7]. Cdk321, D5IXX (FLAG-D2XX), കൂടാതെ D3IXX (FLAG-D2XXXXXXXXX) എന്നീ രൂപങ്ങളിലുള്ള രൂപകൽപ്പനയും XINX ൻറെ സെർസിൻറെ മൂല്യനിർണ്ണയം ഉറപ്പാക്കാൻ. ഫ്ലാഗുകൾ ദ്ക്സനുമ്ക്സിക്സനുമ്ക്സ ഫ്ലാഗ്-ദ്ക്സനുമ്ക്സിക്സനുമ്ക്സ സ്ക്സനുമ്ക്സഅ ഹെക് ക്സനുമ്ക്സ ൽ എച്എ-ച്ദ്ക്ക്സനുമ്ക്സ ആൻഡ് പ്ക്സനുമ്ക്സ ഉപയോഗിച്ചോ അല്ലാതെയോ പ്രകടിപ്പിച്ച സെല്ലുകൾ ഒരു സ്ദ്സ്-ജെൽ മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് ഗുണമേന്മാ വിശകലനത്തിനു. ഒരു പ്രധാനപ്പെട്ട Cdk3 ആശ്രയിക്കുന്ന മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് FLAG-D2X ന് വേണ്ടി നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, എന്നാൽ FLAG -XXXXXXXXXA ന് (ചിത്രം 2C). അഗസ്റ്റോസ്റ്റിക് ഉത്തേജക പ്രകാരമുള്ള Ser2 ൽ ഞങ്ങൾ DRD321 ന്റെ ഫോസ്ഫോറലേഷൻ ലെവലിനെയും ഞങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തു. ക്യുൻപിറോളിനാൽ ഉദ്ധരിക്കപ്പെട്ട എച്ഡി ഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്-ജിഎഫ്പി, സിഡിക്എക്സ്എക്സ്എക്സ് / പിഎക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് കോശങ്ങളെ ഉദ്ധരിച്ച് ഹെങ്ക് 293 സെല്ലുകൾ സെൽ lysates ൽ നിന്നും ആന്റി-ജിഎഫ്പി ഇമ്മാനോപ്ഫ്രീസിറ്റേറ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ആന്റി-ജിഎഫ്പി ആന്റി-പിഎസ്എക്സ്എൻഎക്സ് ആക്സ്ടൈഡുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പാശ്ചാത്യപ്രയോഗത്തിലൂടെ വിശകലനം ചെയ്തു. നാം സെർക്എൻഎക്സ്എക്സിൽ DRD2- ന്റെ സിഡിക്എക്സ്എക്സ്-എംഐഐസിഎൽ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ അഗസ്റ്റോസ്റ്റിക് ഉത്തേജനം ബാധിച്ചിട്ടില്ലെന്ന് കണ്ടെത്തി, GRK- ഉം PKC- മദ്ധ്യസ്ഥരായ ഫോസ്ഫോറലിസുകളുംചിത്രം. 2D) [32], [33]. സെല്ലുലാർ എൻവയോൺമെന്റിൽ DRD5 ന്റെ 321 ശേഷിപ്പിന്റെ സെർസർ Xcode ഫോസ്ഫൊറെലൈറ്റ് ചെയ്യാൻ Cdk2 ന് കഴിയും എന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ലഘുചിത്രം

ചിത്രം 2. സെല്ലുകളിൽ DRD5 ന്റെ മൂന്നാം ഇൻറക്ക്കലോലർ ലൂപ്പിൽ സിഡ്ക്എക്സ്.എക്സ് ഫോസ്ഫോറിയെറ്റുകൾ സെറിൻ 321.

5- ന്റെ സെഡ്കൺഎംഎക്സ്-മദ്ധ്യേഷ്യൻ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ആന്റി-പിഎസ്എക്സ്എൻഎക്സ് ആൻറിബോഡി ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു. (എ) ഐ.പി. ലിങ്ക്ഡിൽ നിന്നുള്ള സാമ്പിളുകൾ vitro ലെ GST-D2IXX പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് kinase assay സൂചിപ്പിച്ച ആന്റിബോഡികളുമായി പാശ്ചാത്യ blotting (WB) ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു. അമ്പടയാളങ്ങൾ GST-D3XXX- കൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (ബി) DRD2-GFP ഉം DRD3 S2A-GFP ഉം HK-Cdk2- ഉം എച്ച് XKX സെല്ലുകളിൽ പിഎക്സ്എഎൻഎസക്സുമൊക്കെയായി സൂചിപ്പിച്ചിരുന്നു. ആന്റി-ജിഎഫ്പി ഇമ്യൂൺപ്രിസിപ്പിറ്റേറ്റുകൾ പാശ്ചാത്യപ്രയോഗത്തിലൂടെ ജിപിപി ആന്റി, പിഎസ്എക്സ്എൻഎക്സ് ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. DRD321 സിഗ്നലുകളെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ജിപിഎൽ ആന്റിനൊപ്രിപ്രിറ്റേറ്റുകളിൽ നിന്നും നോൺസ്പെക്സിക് സിഗ്നലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഒരു IP റിങിനുള്ള മൊത്തം ലൈസിൻറെ% വാല്യു '% input' ആണ്. ദുർബല എക്സോഗേനസ് Cdk5 സിഗ്നലുകൾ ആസ്റ്ററിക്സ് സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. (സി) ജെൽ മൊബിലിറ്റി ഷിഫ്റ്റ് സ്കെയ് ഹെക് 35 കളങ്ങൾ ട്രാൻസ്ഫർ ചെയ്തത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് വെസ്റ്റേൺ ബ്ളോട്ടിംഗിലൂടെ വിശകലനം ചെയ്തു. (D) ക്യുൻപൈലിലോടൊപ്പം HK 293 സെല്ലുകൾ ചികിത്സിച്ചു. ആന്റി-ജിഎഫ്പി ഇമ്മാനോപ്ഫ്രീസിറ്റേറ്റുകൾ പാശ്ചാത്യ ആന്റി-ജിഎഫ്പി ആന്റി-പിഎസ്എക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് ആന്റിബോഡികളുമായി വിശകലനം ചെയ്തു. ഓപ്പൺ എ അമ്പ്ഹെഡ് ഹെഡ് ആൻ-ജിഎഫ്പി ഇമ്മാനോപ്ഫ്രീപ്റ്റിറ്റുകളിൽ നിന്നും നോൺസ്പെക്റ്റിക് സിഗ്നലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

doi: 10.1371 / ജേർണൽ.pone.0084482.g002

Cdk5 / P35 കോംപ്ലക്സ്, DRD2 എന്നിവ ശാരീരികമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു

Cdk5 / P35 സങ്കീർണതയും DRD2 ഉം തമ്മിലുള്ള ഭൌതിക പരസ്പര പരതയെക്കുറിച്ച് അന്വേഷിച്ചു. കാരണം Cdk5 / P5 സങ്കീർണ്ണതയുമായി നിരവധി Cdk35 സബ്സ്ട്രാറ്റ്സ് [23], [34], [35]. ആദ്യം, ജി.എസ്.ടി പുൾ-ഡൌൺ പരീക്ഷണം നടത്തി. ശുദ്ധീകരിച്ച റെക്കോബിൻറ്റ് GST-D2XXX പ്രോട്ടീൻ എലറ്റ് ബ്രെയിൻ ലൈസറ്റ് കൊണ്ട് ഇൻകുബേറ്റഡ് ചെയ്തു, ജിഎസ്ടി പുൽ-ഡൗൺ അപര്യാപ്തതകൾ പാശ്ചാത്യപ്രകടനത്തിന് വിശകലനം ചെയ്തു. കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ചിത്രം XXXADRD5- ഉം Cdk35 / P2 സങ്കീർണ്ണതക്കും ഇടയിൽ ശാരീരിക സംവേദനാശയമായി സൂചിപ്പിക്കുന്നത് പുൾ-ഡീ-ഡൈപ്സ്പൈസിറ്റേറ്റുകളിൽ എൻഡോജനസ് സിഡിക്സ്എൻഎക്സ്, പിഎക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് എന്നിവ തിരിച്ചറിഞ്ഞു (ചിത്രം XXXA). മാത്രമല്ല, എച്എ-ച്ദ്ക്ക്സനുമ്ക്സ ആൻഡ് പ്ക്സനുമ്ക്സ ദ്ര്ദ്ക്സനുമ്ക്സ-ഗ്ഫ്പ് ആൻഡ് ച്ദ്ക്ക്സനുമ്ക്സ / പ്ക്സനുമ്ക്സ (പ്രകടിപ്പിച്ചു ഹെക് ക്സനുമ്ക്സ സെൽ ല്യ്സതെസ് നിന്ന്-ഗ്ഫ്പ് വിരുദ്ധ ഇംമുനൊപ്രെചിപിതതെസ് കണ്ടെത്തിചിത്രം. 3B). കൂടാതെ, ഞങ്ങൾ ഇംമുനൊച്യ്തൊഛെമിചല് വിശകലനത്തിന് പ്രവർത്തനത്തിലൂടെ ദ്ര്ദ്ക്സനുമ്ക്സ-ഗ്ഫ്പ്, എച്എ-ച്ദ്ക്ക്സനുമ്ക്സ ആൻഡ് പ്ക്സനുമ്ക്സ ഹെക് ക്സനുമ്ക്സ കോശങ്ങൾ (എന്ന സ്തര പ്രദേശത്ത് കാര്യമായ കോ-പ്രാദേശികവൽക്കരണ സിഗ്നലുകൾ കാണിക്കുന്ന നിരീക്ഷിച്ചുചിത്രം 3C, അപ്പർ പാനലുകൾ). ഞങ്ങൾ ന്യൂറോണൽ സന്ദർഭത്തിൽ DRD2, Cdk5 / P35 എന്നിവ സഹ-പ്രാദേശികവൽക്കരണവും അന്വേഷിച്ചു. DRD2, Cdk5 / P35 (DRD7-GFP) എന്നിവ കൃത്രിമ സ്ട്രൈറ്റൽ ന്യൂറോണുകളിൽ (DIV2) എൻഡോജിയസ് സിഡിക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്, പി.എക്സ്.എൻ.എക്സ് എക്സ്,ചിത്രം 3C, താഴെ പാനലുകൾ). DRD2, Cdk5 / P35 സങ്കീർണമായ രൂപങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കാൻ കഴിയുമെന്നതിനാൽ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് DRD2 ഒരു സിഡിക്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എന്റെ ഫിസിയോളജിക്കൽ സബ്സ്ട്രാറ്റെയാണ്.

ലഘുചിത്രം

ചിത്രം 3. Cdk5 / P35 എന്നതിന് ഒരു സങ്കീർണത സൃഷ്ടിക്കാൻ കഴിയും DRD2.

(എ) എലിയുടെ മസ്തിഷ്ക്കസമീകരണത്തോടെ ജി.എസ്.ടി-ഡി.എക്സ്.ഐ.എൻ.എക്സ്.എക്സ്.എക്സ് പ്രോട്ടീന്റെ ശുദ്ധീകൃത രാസപ്രയോഗത്തിലൂടെ ജി.എസ്.ടി പുൾ-ഡൗൺ അസി. ജിഎസ്ടി പുൽ-ഡൗൺ അപര്യാപ്തതകൾ പാശ്ചാത്യപ്രജനന വിശകലനങ്ങൾക്ക് വിധേയമായി. 'ബീഡ്' ജിഎസ്ടി പ്രോട്ടീനുകൾ ഇല്ലാതെ പിൻവലിക്കപ്പെടുന്ന പ്രവാഹം സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (ബി) DRD2, Cdk3 / P2 സങ്കീർണ്ണതയുടെ immunoprecipitation. ആൻറി ജിഎഫ്പി ഐപി ട്രാൻക്യുട്ടഡ് സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് ലൈസിറ്റുകളിൽ നിന്ന് പാശ്ചാത്യ ചോർത്തൽ വിശകലനത്തിന് വിധേയമായിരുന്നു. DRD5 സിഗ്നലുകളെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ജിപിഎൽ ആന്റിനൊപ്രിപ്രിറ്റേറ്റുകളിൽ നിന്നും നോൺസ്പെക്സിക് സിഗ്നലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഇൻപുട്ടിനു വേണ്ടിയുള്ള ഒരു overexposed ബ്ലോട്ട് വലത് വശത്താണ് കാണിക്കുന്നത്. (സി) DRD35 ആൻഡ് Cdk2 / p2 എന്ന ഇമ്മ്യൂണോസൈറ്റിക്കെമിക്കൽ അനാലിസിസ്. DRD5-GFP ഉം Cdk35 / P293 ഉം ഉള്ള ഹൈക് 10 സെല്ലുകൾ ആന്റി-സിഡക്സ് XXX ആന്റി-പിഎക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് ആന്റിബോഡികളുമായി (അപ്പർ പാനലുകൾ) നിറഞ്ഞിരുന്നു. DRD2-GFP വികാസം ആയ സ്ടയലറ്റൽ ന്യൂറോണുകളിലും, ആന്റി-പിക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് ആന്റി-എക്സ്എക്സ്എൻഎക്സ്എക്സ് ആന്റിബോഡികളിലും (ലോവർ പാനലുകൾ) ഒറ്റയ്ക്കാണ് പ്രകടിപ്പിച്ചത്. ന്യൂക്ലിയസ് സ്റ്റിന്നിംഗിനായി ഹൂസ്സ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. സ്കെയിൽ ബാർ 5 μm ആണ്. എല്ലാ ചിത്രങ്ങളും കോപ്പൽ മൈക്രോസ്കോപ്പി ഉപയോഗിച്ച് നേടിയെടുത്തു (ഒളിമ്പസ്, ഫ്ലൂവോക് -83).

doi: 10.1371 / ജേർണൽ.pone.0084482.g003

DRD5 Attenuates അസിസ്റ്റന്റ് പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ Cdk2- മധ്യിവിയുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ

G പ്രോട്ടീൻ വിൽക്കുന്നതിലും, റിസോർട്ടറി ഇന്റഗ്രേഷലൈസിങ്, അണ്ടർസെല്ലുലർ ലോക്കൽവൈസേഷൻ, മൊഡ്യൂലേറ്റർ പ്രോട്ടീനുകളുമായി ബന്ധപ്പെടുത്തൽ തുടങ്ങിയ GPCR- കളുടെ ഗുരുതരമായ ഗുണങ്ങൾ ഫോസ്ഫോറലേഷൻ മോഡേൾ ചെയ്യുന്നതായി റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. [9], [11], [24]. ഒരുഗൊനിസ്റ്റ്-ഇൻപുണ്ട് റിസപ്റ്റർ ഇന്റലിജലൈസേഷൻ സിഗ്നൽ ഗതാഗതത്തിന്റെ ഒരു സുപ്രധാന നിയന്ത്രണ പ്രക്രിയയാണ്. DRD5 ഇന്റേക്കറൈസേഷന്റെ Cdk2- മീഡിയാഡ് മോഡുലേഷൻ ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു. DRD293- ഉം DRD2 S2A-GFP- യും XDX μM ക്വിൻപൈലിലോടുകൂടിയ ഡി.ക്.ഡി.എക്സ്.എൻ.എം.എക്സ് XXX- ജിഎഫ്പി, കൂടാതെ അഗണിസ്റ്റ്-ഉത്തേജിത DRD321 ഇന്റേണിക്കേഷനുംചിത്രം XXXA). [3H] DRD2-GFP എക്സ്പ്രസ് കോശങ്ങളുടെ സിപിയർലൈൻ സിഗ്നലുകൾ 30 മിനിറ്റ് ക്വിൻപോളോ ട്രീറ്റ്മെന്റിൽ ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കുകയും 90 മിനിറ്റിൽ വീണ്ടെടുക്കുകയും ചെയ്തു. രസാവഹമായി,3എച്ച്] DRD2-GFP, സിഡിക്എക്സ്എക്സ് എക്സ് / എക്സ്എക്സ് എക്സ്ക്ലൂസിംഗ് സെല്ലുകളുടെ സ്പിപ്പെറോൺ സിഗ്നലുകൾ 5 മിനിറ്റ് ക്വിൻപോറോളിൻ ട്രെൻഷനിലയിൽ കുറച്ചിരുന്നുവെങ്കിലും എൺപത് മിനിറ്റിൽചിത്രം XXXA, രണ്ടാം ഭാഗം). മറുവശത്ത്, [3എച്ച്] ദ്ര്ദ്ക്സനുമ്ക്സ സ്ക്സനുമ്ക്സഅ-ഗ്ഫ്പ് പ്രകടിപ്പിച്ചും സെല്ലുകളുടെ -സ്പിപെരൊനെ സിഗ്നലുകൾ ക്സനുമ്ക്സ മിനിറ്റിന് കുറച്ചു പരിഗണിച്ച് ച്ദ്ക്ക്സനുമ്ക്സ / പ്ക്സനുമ്ക്സ കൂടെ കോ-ആവിഷ്കാര, ക്സനുമ്ക്സ മിനിറ്റിന് കണ്ടെടുത്തത്. മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് DRD2 ഡി.എൻ.ഡി.എൻ.എൻ.എക്സ്ക്സ് ദീർഘനേരം അഗ്രോണമിൻ ഉത്തേജകത്തിലേക്ക് പ്ലാസ്മ നീരാവിയിലേക്ക് റീസൈക്കിൾ ചെയ്യുന്നു. [11]. ടിDRD5- ന്റെ DRD2 ഇൻക്വൊയ്മറേഷനുശേഷം പുനർനിശ്ചിത പ്രക്രിയകളിൽ Cdk2- മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ഉൾപ്പെടുന്നുവെന്ന് കാണുന്നു.

ലഘുചിത്രം

ചിത്രം 4. DRD5 ഉപരിതല എക്സ്പ്രെഷൻ, ഡൗൺസ്ട്രീം സിഗ്നലിംഗ് എന്നിവ സി ഡിക്എക്സ്എക്സ്-മധ്യസ്ഥിത ഫോസ്ഫോറലേഷൻ ശ്രദ്ധിക്കുന്നു.

(എ) DRD2 ഉപരിതല expression by measuring [3H] സ്പിപെറോൺ ബൈൻഡിംഗ് ട്രാൻസ്ഫോമുഡ് HEK293 സെല്ലുകൾ സൂചിപ്പിക്കപ്പെട്ട സമയം XENX μM ക്വിൻപിറോളിനൊപ്പം വിളവെടുക്കപ്പെട്ടു, തുടർന്ന് തൊണ്ണൂറ്റിയിൽ nM [3എച്ച്] -സ്പിറോൺ ചികിത്സ 3 മണിക്കൂർ. റേഡിയോആക്റ്റിവിറ്റി അളക്കുകയും ഉപരിതല സിഗ്നലുകൾ കണക്കാക്കുകയും ചെയ്തു. പിശക് ബാറുകൾ അർത്ഥമാക്കുന്നത് mean SE (n = 8; * p <0.05, ** p <0.01; ഡുനെറ്റ് പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റിനൊപ്പം വൺ-വേ ANOVA: എല്ലാ നിരകളും vs. നിര നിരയും താരതമ്യം ചെയ്യുക). (ബി) [35S] -GTPγഎസ്. സൂചിപ്പിക്കപ്പെട്ട കോശങ്ങൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത സെൽ മെംബറേൻ തയ്യാറാക്കി. Membrane തയ്യാറെടുപ്പുകൾ, 1 μM ക്വിൻപോസിളിലും, തുടർന്ന് തുടർച്ചയായി 3 എംഎം [35S] -GTPγ90 മിനുട്ട് എസ്. പിശക് ബാറുകൾ അർത്ഥമാക്കുന്നത് mean SE (n = 8; * p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001; ബോൺഫെറോണി പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റുള്ള വൺ-വേ ANOVA: എല്ലാ ജോഡി നിരകളും താരതമ്യം ചെയ്യുക). (സി) ക്വിൻ‌പിറോൾ മത്സരിക്കുന്ന [3H] സ്പിപെറോൺ ബൈൻഡിംഗ് ട്രാൻസ്ഫൂഡഡ് കോശങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള മെയ്ക്ട്രിൻ തയ്യാറെടുപ്പുകൾ 0.01 നും [3എച്ച്] -സ്പിറോൺ, ക്വിൻ‌പിറോളിന്റെ സാന്ദ്രത 30 മിനിറ്റ് വർദ്ധിപ്പിക്കുക. ഗ്രാഫ്പാഡ് നോൺ-ലീനിയർ റിഗ്രഷൻ നേടി. പിശക് ബാറുകൾ അർത്ഥമാക്കുന്നത് mean SE (n = 3) എന്നാണ്. (ഡി) കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട HEK 293 സെല്ലുകളിലെ cAMP എൻസൈം ഇമ്മ്യൂണോആസെ. കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട സെല്ലുകളെ 10 മണിക്കൂറിന് 1 µM റോളിപ്രാം ഉപയോഗിച്ച് പ്രീട്രീറ്റ് ചെയ്തു, തുടർന്ന് 0.1 µM ഫോർസ്കോളിനൊപ്പം ചികിത്സിക്കുകയും 30 മിനിറ്റ് ക്വിൻ‌പിറോളിന്റെ സാന്ദ്രത വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. ഗ്രാഫ്പാഡ് നോൺ-ലീനിയർ റിഗ്രഷൻ നേടി. പിശക് ബാറുകൾ ശരാശരി ± SE (n = 4; ** p <0.01; രണ്ട്-വാലുള്ളവയെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു t-ടെറ്റുകൾ). (ഇ) കാട്ടു തരം പ്ക്സനുമ്ക്സ നോക്കൗട്ട് ഭ്രൂണങ്ങൾ (DIV ക്സനുമ്ക്സ) നിന്ന് കൾച്ചേഡ് സ്ത്രിഅതല് ന്യൂറോണുകൾ ക്സനുമ്ക്സ പ്രതി ക്സനുമ്ക്സ ധൂളികൾ ഡോപ്പാമിൻ പിന്നാലെ ക്സനുമ്ക്സ പ്രതി ക്സനുമ്ക്സ ധൂളികൾ രൊലിപ്രമ് കണ്ടിരുന്നത്. പിശക് ബാറുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്ന ± ± SE (n = 35; **p<0.01; രണ്ട് വാലുള്ള t-ടെറ്റുകൾ).

doi: 10.1371 / ജേർണൽ.pone.0084482.g004

സി ഡിക്എക്സ്എക്സ്-മധ്യസ്ഥിത ഫോസ്ഫോരിലേഷനോടുകൂടിയ DRD2 ന് അഗ്രോൺ-സ്റ്റെയിറ്റാലുഡ് ജി പ്രോറ്റീന്റെ വിന്യാസത്തിന്റെ ഭേദഗതിയെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾ പിന്നീട് വിശകലനം ചെയ്തു [35S] -GTPγഎസ് [25], [26]. DRD2-GFP, DRD2 S321A-GFP, കൂടാതെ Cdk5 / P35 കൂടാതെ HEK X സെല്ലുകളിൽ. 293 μM ക്വിൻപോപിൾ ഉപയോഗിച്ച് മെമ്പറേൻ തയ്യാറാക്കുകയും ഉത്തേജിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.35S] -GTPγഎസ് സംഗ്രഹം. DRD2-GFP ഉം Cdk5 / xXXX എക്സ്പ്രസനിങ് സെൽ മെംബ്രൺ ഗണ്യമായി കാണിക്കുന്നു [35S] -GTPγമറ്റെല്ലാ സെൽ സ്തരവുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ എസ്.ചിത്രം. 4B). ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, Cdk5- മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ, DRD2 ൽ agonist-stimulated G പ്രോട്ടീൻ ബിൻഡിനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു.

കൂടാതെ, quinpirole-competing [3എച്ച്-സ്പിപെറോൺ ബൈൻഡിംഗ് എസെയിസുകൾ ഡി.ഡി.എൻ.എക്സ്.എക്സ്.എക്സിൽ എക്സ്റ്റീരിയൽ-ആൻറിവിറ്റിയിൽ സി ഡിക്എക്സ്എക്സ്-എം.ഐ.ഡിയേറ്റഡ് ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ വഴിയുണ്ടാവുന്ന ഏതൊരു മാറ്റത്തെയും കുറിച്ച് അന്വേഷിക്കാൻ നടത്തിയത്. മത്സരാധിഷ്ഠിത മത്സരം [3H] - ക്വിൻപോളിൻറെ വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന സാന്ദ്രത ചികിത്സയ്ക് വഴി ട്രാൻസ്ഫണ്ടറിൽ നിന്ന് മെംബ്രെ തയാറാക്കുക. ക്വിൻപാൽരോളിനെ മത്സരിപ്പിക്കുക,3H] -DXD2-GFP, DRD2 S321A-GFP എന്നിവയിലുള്ള സ്പീപ്പറോൺ സമാനമായ logK ഉണ്ടാക്കിi (DRD9.789-GFP- നായി -2, DRD9.691 S2A-GFP- ന് -321), DRD2 ലേക്ക് ലിഗാൻഡിനുള്ള ബന്ധം DRD5- ൽ Cdk2- മധ്യിഫോസ് ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ വഴി ഗണ്യമായി ബാധിച്ചിട്ടില്ലെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു (ചിത്രം 4C).

DRD5-CAMP സിഗ്നലിങ് പാത്ത്വേ ഉപയോഗിച്ച് Cdk2- മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ താഴേക്ക് ക്രമീകരിക്കുന്നു

അടുത്തതായി, DRD2- ന്റെ Cdk5- ന്റെ പരിഷ്ക്കരണം ഡൗൺസ്ട്രീം സിഗ്നലിംഗ് പാഥേകൾ ബാധിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു. DRD2-GFP, DRD2 S2A-GFP എന്നിവ CAMP എൻസൈം പ്രതിരോധം ഉപയോഗിച്ച് ഉപയോഗിച്ച കോശങ്ങളിലെ adenylyl സൈക്ലെയ്സ് മുഖേന ഫോക്സിനുള്ള സെൻട്രൽ പ്രൊഡക്ഷൻ ഡാഗ്സോൾൻ-ഉത്തേജിത CAMP ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കുന്നതിന് ഞങ്ങൾ DRD321 മധ്യസ്ഥൻ നിരോധിച്ചു. ഡിഎച്ച്ഡിഎൻഎക്സ്-എക്സ്പെസിങ് സെല്ലുകൾ ഡിഎൻഎസ് ആശ്രിത രീതിയിൽ ക്വിൻപിപ്രോളിന് പ്രതികരിച്ചുള്ള CAMP അളവ് കുറഞ്ഞു. Cdk2 / p5 ന്റെ സഹ-പ്രകടനം, CAMP രൂപവത്കരണത്തിന്റെ പരമാവധി പരിമിത പദം കുറയ്ക്കുന്നുചിത്രം 4D, ഇടത് പാനൽ). മറുവശത്ത്, DRD2 S321A-GFP ആവിഷ്കരിക്കുന്ന കോശങ്ങളിൽ, Cdk5 / P35 ന്റെ വ്യാപ്തി (ക്വിൻപോളിൻ ചികിത്സയ്ക്കായി പ്രതികരിച്ചുകൊണ്ടാണ് CAMP രൂപങ്ങൾ ഫലപ്രദമായി തടഞ്ഞത്)ചിത്രം 4D, വലത് പാനൽ). DRD5 ന്റെ Cdk2- മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ, DRD2 ന്റെ ഡ്രോസ്സ്ട്രീം cAMP സിഗ്നലിംഗ് പാത്ത്വേയിൽ തടയാനുള്ള പ്രവർത്തനം കാണിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. കൂടുതൽ ഫിസിയോളജിക്കൽ പ്രസക്തമായ സജ്ജീകരണത്തിൽ ഈ പ്രതിഭാസത്തെ സ്ഥിരീകരിക്കാൻ, ഞങ്ങൾ ആവശ്യമായ സിക്ക്ക്യുഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്പി പാസ്സ്വേർഡ് പി.എക്സ്.എൻ.എക്സ്.എക്സിലെ നോക്കൗട്ട് ഭ്രൂണങ്ങളിൽ നിന്നും പ്രാഥമിക സംസ്ക്കരിച്ച ന്യൂറോണുകൾ ഉപയോഗിച്ചു. പ്രാഥമിക സംസ്ക്കരിച്ച സ്ട്രീമാട്ടൽ ന്യൂറോണുകൾ 35 μM ഡോപ്പാമിനുപയോഗിച്ച് CAMP എൻസൈം രോഗപ്രതിരോധം ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു. ഡോപ്പാമിൻ ഉത്തേജിത സമയത്ത് കാട്ടുനശൈലി ന്യൂറോണുകളുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ P5 നോക്കൗട്ട് എലികളിൽ നിന്നുള്ള നാൻഡുകളുടെ കുറവ് CAMP ലെവലുകൾ പ്രദർശിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നുചിത്രം. 4E). ടിഒന്നിച്ചു ചേർന്ന്, DRD5 ന്റെ cAMP പാതയിലൂടെയുള്ള DRD2 ന്റെ cdk2- മധ്യിയിലുള്ള ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ഫലങ്ങൾ കുറഞ്ഞുവെന്നാണ് ഞങ്ങൾ വിശ്വസിക്കുന്നത്.

സംവാദം

DRD2 ഞങ്ങൾ Cdk5- ന്റെ ഒരു നവമായ ഉപരിതലമായി ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞു. DRD2 ഉപരിതല എക്സ്പ്രഷൻ ഡ്രോപ്പ്-റഗുലർ ഇൻഫ്രാസ്ട്രക്ചറിനെ ഡ്രോസ്-റെഗുലേറ്റർ ഇൻററൈസലൈസിൻറെ ഗതിയെ ബാധിക്കുന്നതിനാൽ ഫോസ്ഫോറലീകരണം ഡ്രോണിക്സ്i-കോപ്പിംഗ്, ഡൌൺസ്ട്രീം CAMP പാത്ത്വേ. ഡിഎക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സ്എക്സിൽ ദീർഘവും ചെറിയ ഐസോഫോമിലും ഫോസ്ഫോളിലേഷൻ ശേഷി S321 ഉള്ളതിനാൽ, ഈ പഠനത്തിൽ നിർദ്ദേശിച്ച സംവിധാനം DRD2- മധ്യേയുള്ള സിഗ്നലിങ്.

DRD2 സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളിൽ പ്രധാന ഡോപ്പാമിൻ റിസപ്റ്റർ ഉപപാതമായിട്ടാണ് കണക്കാക്കപ്പെട്ടിട്ടുള്ളത് എങ്കിലും പരിസ്ഥിതി ഉത്തേജക പരിപാടിയുടെ മറുപടിയായി ലഭ്യതയിൽ മാറ്റങ്ങൾ വരുത്താനായി അത് അംഗീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്. അഗ്രോണമിസ്റ്റ് ഉദ്ദ്യേശം ഡീൻസിനിറ്റൈസേഷനും ഡി.ആർ.ഡി.എൻ.എൻ.എൻ.എൻ.എക്സ് എക്സ്.എൻ.യുടെ പുനർജ്ജീവനവും വിപുലമായി പഠനവിധേയമാക്കി [11], [24]. പ്രത്യേകിച്ച്, നിരവധി പഠനങ്ങൾ കാണിച്ചുതന്നിട്ടുള്ളത്, കോകൈൻ, ആംഫാറ്റാമിൻ മുതലായ ദീർഘകാല മനോരോഗ വിദഗ്ധരുടെ ഫലങ്ങൾ, സ്ട്രൈറൽ സിനാപ്സിലെ ഡൈജാമൈന്റെ പുറന്തള്ളൽ നില ഉയർത്തുന്നു, കൂടാതെ ഡിഎൻഡിഎക്സ്എക്സ് ദിനചര്യ [36]. ക്രമാതീതമായ കൊക്കെയ്ൻ ഉപയോക്താക്കൾ കൃത്രിമഭാഗത്ത് DRD2 തോത് കുറയ്ക്കുകയും, ന്യൂക്ലിയസ് അംബുംബനുകളിൽ DRD2 ലഭ്യത (എൻ സി സി), എലികളുടെയും പ്രാഥമികാരോഗ്യ വിദഗ്ധരുടെയും മരുന്നും തേടുന്നതും [37]-[39]. ഈ കണ്ടെത്തലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, DRD2 ൻറെ പ്രവർത്തനക്ഷമത, വിവിധ തരത്തിലുള്ള മയക്കുമരുന്ന് exposure ഉൾപ്പെടെയുള്ള നിരവധി ഉത്തേജകങ്ങൾക്ക് പ്രതികരിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമായോ അല്ലെങ്കിൽ നഷ്ടപരിഹാര നിയന്ത്രണത്തിലോ ആണ്. DRD321 ന്റെ മൂന്നാമത്തെ ഇന്റർസെക്ല്യൂലർ ലൂപ്പിലെ S2 ശേഷി Cdk5 ഉപയോഗിച്ച് ഫോസ്ഫോറോൾ ചെയ്യപ്പെടുമെന്ന് നമ്മുടെ ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു. ഇത് CAMP പാതയിൽ DRD2 ന്റെ തടസ്സം ഉണ്ടാക്കുന്നു. DRP5 ഉപരിതല ലഭ്യതയുടെ ചലനാത്മകമായ സ്വഭാവവുമായി ബന്ധപ്പെടുത്താവുന്ന ഇതര ഡയപ്പമിനോസെപ്റ്റീവ് ന്യൂറോണുകളിൽ സിഡിക്എക്സ്എക്സ്എക്സുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഒരു നൂതന റെഗുലേറ്ററി മെക്കാനിസം ഈ ആശയവിനിമയം നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.

ന്യൂറോണൽ അന്തരീക്ഷത്തിലെ അനുയോജ്യമായ മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തുന്നതിൽ സിഡിക്എക്സ്എക്സ്എക്സ് ഒരു പ്രധാന ഘടകമാണെന്ന് അറിയുക. ഉദാഹരണമായി, ലിംപിക് സർക്യൂട്ടിലെ ന്യൂറോണുകളിൽ ഡൻഡറിക് സ്പൈനിന്റെ ഘടനാപരവും പ്രവർത്തനപരവുമായ മാറ്റങ്ങൾ, തുടർച്ചയായി മനോരോഗപരമായ ഉത്തേജകത്തിന്റെ അനന്തരഫലങ്ങളിൽ ഒന്നാണ് [40]. ഈ മാറ്റങ്ങളോടൊപ്പം CAMP പ്രതികരണ എലമെന്റ്-ബിൻഡി പ്രോട്ടീൻ (ക്യുബിബി), ΔFOSB, ദീർഘകാല കോക്കെയ്ൻ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷനുള്ള പ്രതികൂല നിർണ്ണയിക്കുന്ന ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെ വിവിധ മോളികുലാർ മാറ്റങ്ങളും ഉണ്ടാകുന്നു. [41], [42]. പ്രധാനമായും, ΔFosB ന്റെ ലക്ഷ്യം Cdk5 ആണ് [19], ഡിഎൻഡിട്രിക് സ്പൈൻ ഡൈനാമിക്സിൽ ഉൾപ്പെടുന്ന അനേകം നിർണ്ണായകമായ ഘടകങ്ങൾ, ഉദാഹരണത്തിന്, PSD-95, p21-activated kinase (PAK), β-catenin, spinophilin എന്നിവ Cdk5 substrates [43]-[46]. സി ഡിക്യുഎൻഎക്സ്എക്സ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ സ്ഥിരതയോ, ജനിതക അല്ലെങ്കിൽ ഔഷധ കൃത്രിമത്വമോ dendritic spine morphology, കൊക്കെയ്നുമായുള്ള പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങളിൽ നിന്ന് വ്യതിയാനങ്ങൾ, mesolimbic dopamine circuits ന്റെ തന്മാത്രകളും മോർഫോളജിക്കൽ മാറ്റങ്ങളിൽ Cdk5- നായുള്ള നിർണായക റോളുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. [47], [48]. DRD2, DRD5 ന്റെ ഒരു പുതിയ ലക്ഷ്യം DRD5, ദോകമിൻ സിസ്റ്റത്തിന്റെ അഡാപ്റ്റിക് മാറ്റങ്ങളെക്കുറിച്ച് കൂടുതൽ ഉൾക്കാഴ്ച നൽകുന്നത് DRD2 ന്റെ തുടർച്ചയായ മയക്കുമരുന്നുകളുടെ പ്രതികരണമായി, ΔFOSB- ന്റെ മധ്യനിര അധിഷ്ടിത നിയന്ത്രണം CDD2 ന്റെ ഫോസ്ഫോരിലേഷനിൽ . കൂടാതെ, DRDXNUMX നിരവധി സെല്ലുലാർ പ്രോസസുകളെ ബാധിക്കുന്നു, അതിൽ CAMP, MAP കൈനസ് പാഥേകൾ, ഡൌൺസ്ട്രീം ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ പരിപാടികൾ [42], [49]. അതിനാൽ, ഈ പഠനത്തിലെ കണ്ടെത്തലുകൾ DRD2 ന്റെ നേരിട്ടുള്ള നിയന്ത്രണം Cdk5 ആയി വിവരിക്കുക മാത്രമല്ല ഡോപാമൈൻ സംവിധാനത്തെ വിട്ടുമാറാത്ത മയക്കുമരുന്ന് വെളിപ്പെടുത്തലുകളുടെ ഒരു പുതിയ ഉൾക്കാഴ്ച നൽകുകയും ചെയ്യുന്നു.

രചയിതാവിന്റെ സംഭാവന

പരീക്ഷണങ്ങൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത് രൂപകൽപ്പന ചെയ്തത്: JJ YUP DH SKP. പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തി: JJ YUP DKK YK. ഡാറ്റ വിശകലനം: JJ YUP DKK SL YK SAL HL YSG DH SKP. സംഭാവന ചെയ്ത വാതകങ്ങൾ / വസ്തുക്കൾ / വിശകലന ഉപകരണങ്ങൾ: YHS. പേപ്പർ എഴുതി: JJ SKP.

അവലംബം

  1. 1. മിസലേൽ സി, നാഷ് എസ് ആർ, റോബിൻസൺ എസ്.വി, ജബീർ എം, കാറോൺ എം ജി (എക്സ്.എൻ.എൻ.) ഡോപാമീൻ റിസപ്റ്ററുകൾ: ഘടന മുതൽ പ്രവർത്തനം വരെ. ഫിസിയോൾ റവന്യൂ 1998: 78-189.
  2. 2. വൈസ് റെവ (2002) ബ്രെയിൻ റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടറി: ഇൻസെൻസസ് ഇൻസെൻറീസിൽ നിന്നുള്ള ഇൻസൈറ്റുകൾ. ന്യൂറോൺ 36: 229-240. doi: 10.1016 / s0896-6273 (02) 00965-0
  3. ലേഖനം കാണുക
  4. PubMed / NCBI
  5. google സ്കോളർ
  6. ലേഖനം കാണുക
  7. PubMed / NCBI
  8. google സ്കോളർ
  9. ലേഖനം കാണുക
  10. PubMed / NCBI
  11. google സ്കോളർ
  12. ലേഖനം കാണുക
  13. PubMed / NCBI
  14. google സ്കോളർ
  15. ലേഖനം കാണുക
  16. PubMed / NCBI
  17. google സ്കോളർ
  18. ലേഖനം കാണുക
  19. PubMed / NCBI
  20. google സ്കോളർ
  21. ലേഖനം കാണുക
  22. PubMed / NCBI
  23. google സ്കോളർ
  24. ലേഖനം കാണുക
  25. PubMed / NCBI
  26. google സ്കോളർ
  27. ലേഖനം കാണുക
  28. PubMed / NCBI
  29. google സ്കോളർ
  30. ലേഖനം കാണുക
  31. PubMed / NCBI
  32. google സ്കോളർ
  33. ലേഖനം കാണുക
  34. PubMed / NCBI
  35. google സ്കോളർ
  36. ലേഖനം കാണുക
  37. PubMed / NCBI
  38. google സ്കോളർ
  39. ലേഖനം കാണുക
  40. PubMed / NCBI
  41. google സ്കോളർ
  42. ലേഖനം കാണുക
  43. PubMed / NCBI
  44. google സ്കോളർ
  45. ലേഖനം കാണുക
  46. PubMed / NCBI
  47. google സ്കോളർ
  48. ലേഖനം കാണുക
  49. PubMed / NCBI
  50. google സ്കോളർ
  51. ലേഖനം കാണുക
  52. PubMed / NCBI
  53. google സ്കോളർ
  54. ലേഖനം കാണുക
  55. PubMed / NCBI
  56. google സ്കോളർ
  57. ലേഖനം കാണുക
  58. PubMed / NCBI
  59. google സ്കോളർ
  60. ലേഖനം കാണുക
  61. PubMed / NCBI
  62. google സ്കോളർ
  63. ലേഖനം കാണുക
  64. PubMed / NCBI
  65. google സ്കോളർ
  66. ലേഖനം കാണുക
  67. PubMed / NCBI
  68. google സ്കോളർ
  69. ലേഖനം കാണുക
  70. PubMed / NCBI
  71. google സ്കോളർ
  72. ലേഖനം കാണുക
  73. PubMed / NCBI
  74. google സ്കോളർ
  75. ലേഖനം കാണുക
  76. PubMed / NCBI
  77. google സ്കോളർ
  78. ലേഖനം കാണുക
  79. PubMed / NCBI
  80. google സ്കോളർ
  81. ലേഖനം കാണുക
  82. PubMed / NCBI
  83. google സ്കോളർ
  84. ലേഖനം കാണുക
  85. PubMed / NCBI
  86. google സ്കോളർ
  87. ലേഖനം കാണുക
  88. PubMed / NCBI
  89. google സ്കോളർ
  90. ലേഖനം കാണുക
  91. PubMed / NCBI
  92. google സ്കോളർ
  93. ലേഖനം കാണുക
  94. PubMed / NCBI
  95. google സ്കോളർ
  96. ലേഖനം കാണുക
  97. PubMed / NCBI
  98. google സ്കോളർ
  99. ലേഖനം കാണുക
  100. PubMed / NCBI
  101. google സ്കോളർ
  102. ലേഖനം കാണുക
  103. PubMed / NCBI
  104. google സ്കോളർ
  105. ലേഖനം കാണുക
  106. PubMed / NCBI
  107. google സ്കോളർ
  108. ലേഖനം കാണുക
  109. PubMed / NCBI
  110. google സ്കോളർ
  111. ലേഖനം കാണുക
  112. PubMed / NCBI
  113. google സ്കോളർ
  114. ലേഖനം കാണുക
  115. PubMed / NCBI
  116. google സ്കോളർ
  117. ലേഖനം കാണുക
  118. PubMed / NCBI
  119. google സ്കോളർ
  120. ലേഖനം കാണുക
  121. PubMed / NCBI
  122. google സ്കോളർ
  123. ലേഖനം കാണുക
  124. PubMed / NCBI
  125. google സ്കോളർ
  126. ലേഖനം കാണുക
  127. PubMed / NCBI
  128. google സ്കോളർ
  129. ലേഖനം കാണുക
  130. PubMed / NCBI
  131. google സ്കോളർ
  132. ലേഖനം കാണുക
  133. PubMed / NCBI
  134. google സ്കോളർ
  135. ലേഖനം കാണുക
  136. PubMed / NCBI
  137. google സ്കോളർ
  138. ലേഖനം കാണുക
  139. PubMed / NCBI
  140. google സ്കോളർ
  141. ലേഖനം കാണുക
  142. PubMed / NCBI
  143. google സ്കോളർ
  144. 3. നീവ് കെ.എ, സീമൻസ് ജെ.കെ., ട്രാൻറം-ഡേവിഡ്സൺ എച്ച് (2004) ഡോപ്പാമൻ റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗ്. ജെ റിസെറ്റ് സിഗ്നൽ ട്രാൻസ്മിക് റിസെക്സ് റിം ചെയ്യൽ: 24- 165. doi: 205 / lrst-10.1081
  145. 4. അമർ എസ്, ഷാൾസെൽ ജി, മാൻ എൽ, ഷമീർ എ, ഡീൻ ബി, തുടങ്ങിയവരും. സ്കീസോഫ്രീനിയ പാത്തോഫിസിയോളജിയിൽ പോസ്റ്റ്-ഡോപാമീൻ D2008 റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗ് ഘടകങ്ങളുടെ സാധ്യമായ പങ്കാളിത്തം. Int J Neuropsycharmacacl: 2-11. doi: 197 / s205
  146. 5. കെയ്ൻ എസ്ബി, നെഗുസ് എസ്.എസ്, മെല്ലോ എൻ കെ, പട്ടേൽ എസ്, ബ്രിസ്റ്റോ എൽ, തുടങ്ങിയവരും. (2002) കൊക്കൈൻ സ്വയം-അഡ്മിനിസ്ട്രേഷനിലെ ഡോപ്പാമൻ D2 പോലുള്ള റോൾ പങ്ക്: D2 റിസപ്റ്റർ മ്യൂറ്റന്റ് എലികളുമൊത്തുള്ള പഠനങ്ങൾ, നോവൽ D2 റിസപ്റ്റർ ശത്രുക്കൾ. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 22: 2977-2988.
  147. 6. ലീ എസ്, ജീയോങ് ജെ, പാർക്ക് യു, ക്വക് വൈ, ലീ എസ്.ഇ, തുടങ്ങിയവരും. (2012) Par-4 പ്രോട്ടീൻ എക്സ്പ്രെഷനിനുള്ള ഉദ്ദരണികളുമായി സഹകരിച്ചുകൊണ്ട് ഡോപ്പാമിൻ സിഗ്നലിംഗ് മൂല്യനിർണ്ണയം നടത്തുന്നു. PLoS One 7: E45618. doi: 10.1371 / journal.pone.0045618
  148. 7. ഫിബ്ബൺ സിസ്, എലസാർ സി, ഫ്യൂച്ചർ എസ് (എക്സ്.എൻ.എക്സ്) ഡിഎൻഎംഎക്സ്എക്സ് ഡോപ്പാമൻ റിസപ്റ്ററിന്റെ ദീർഘവും ചെറിയ ഐസോഫോമുകളുമായുള്ള വ്യത്യസ്തമായ ഗ്ലൈക്കോസൈലേറ്റും കടന്നുകയറ്റ കടത്തലും. J Biol Chem 1995: 2-270. doi: 29819 / jbc.29824
  149. 8. റീഡർ TA, മോളിന-ഹോൽഗോഡോ ഇ, ലൈമ എൽ, ബൗളിയാന എസ്, ഡീവാർ കെ.എം. (1992) നിർദ്ദിഷ്ട [3H] റാക്ലോപ്റൈഡ് നിയോറിയേറാറ്റൽ ഡോപ്പാമീൻ D2 റിസപ്റ്ററുകൾക്ക്: ഡിഷൽഫൈഡ്, സൾഫ് ഹൈഡ്രൽ ഗ്രൂപ്പുകളുടെ പങ്ക്. ന്യൂറോചെമ് റിസ്ക് 9: 17-749. doi: 759 / bf10.1007
  150. 9. Ng GY, O'Dowd BF, കാരൺ എം, ഡെനിസ് എം, ബ്രാൻ എം.ആർ, തുടങ്ങിയവരും. (1994) SF2 കളങ്ങളിൽ മനുഷ്യന്റെ D9L ഡോപ്പാമിൻ റിസെപ്റ്ററിന്റെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ആൻഡ് പൽമിറ്റോലൈേഷൻ. ജെ ന്യൂറോചെം 63: 1589 - 1595. doi: 10.1046 / j.1471-4159.1994.63051589.x
  151. 10. ലീ എം, ബെർമാക് ജെസി, വാങ് സി ഡബ്ല്യു, ഷൗ ക്യു (2000) ആക്ടിൻ-ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ (എപിപി -എൻഎക്സ്എക്സ്) വഴി ഡോപ്പാമിൻ ഡി (XNUM) റസിപ്റ്റർ സിഗ്നലിങ് മോഡിക്കൽ. മോളിലെ ഫാമസോൾ 2: 280-57.
  152. 11. ചോ ജി, മിൻ സി, മാ എൽ, കുറോസ് എച്ച്, തുടങ്ങിയവരും. (2010) എഗണിസ്റ്റ്-ഇൻഡുഡന്റ് എൻഡോസൈറ്റോസിസ് ആൻഡ് റിസപ്റ്റർ ഫോസ്ഫോറലേഷൻ ഡോപ്പാമീൻ ഡി (2) റിസപ്റ്ററുകളുടെ റീസെൻസിറ്റൈസേഷൻ. മോൾ എൻഡോക്രിനോൾ 24: 574-586. doi: 10.1210 / me.2009-0369
  153. 12. സായ് LH, Delalle I, Caviness VS Jr, Chae T, Harlow E (1994) P35 ഒരു സൈക്ലിൻ-ആശ്രിതമായി കൈനസ് 5- ന്റെ ഒരു ന്യൂറൽ-സ്പെഷ്യൽ റഗുലേറ്ററി ഉപഭോഗമാണ്. സ്വഭാവം 371: 419-423. doi: 10.1038 / 371419X0
  154. 13. ധവാൻ ആർ, സായ് എൽ.എച്ച് (2001) ഒരു ദശകം CDK5. നാറ്റ് റവ മോൾ സെൽ ബിയൽ 2: 749-759. doi: 10.1038 / 35096019
  155. 14. ഫിൻ എകെ, ഐപി NY (2007) സൈക്ലിൻ ആശ്രിത KINAS 5 ലിങ്കുകൾ ഡൈൻറിക്ടിക് നട്ടെല്ല് വികസന സമയത്ത് ആക്ടീന്റെ സൈറ്റോസക്കിലെറ്റിലേക്കുള്ള പുറം കണ്ണികൾ. സെൽ അഡ് മിംർ 1: 110- നം. doi: 112 / cam.10.4161
  156. 15. Wang J, Liu S, Fu Y, Wang JH, Lu Y (2003) Cdk5 സജീവമാക്കൽ ഹൈപോകോപൽ CA1 സെൽ മരണം വരെ നേരിട്ട് ഫോസ്ഫോരിലേറ്റ് എൻഎംഡിഎ റിസപ്റ്ററുകളിലൂടെ ഉണ്ടാകുന്നു. നാനോ ന്യൂറോസി 6: 1039 - 1047. doi: 10.1038 / nn1119
  157. 16. Zhang S, Edelmann L, ലിയു ജെ, Crandall JE, Morabito MA (2008) Cdk5 ടിറോസിൻ 1472 NR2b ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ നിയന്ത്രിക്കുകയും എൻഎംഡിഎ റിസപ്റ്ററുകളുടെ ഉപരിതല പ്രകടനം. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 28: 415-424. doi: 10.1523 / jneurosci.1900-07.2008
  158. 17. മോയ് ലിബ്, സായ് എൽഎച്ച് (2004) സൈക്ലിൻ ആശ്രിത Kinase 5 ഫോസ്ഫോറിലോറ്റ്സ് സെറിൻ 31 ടയറോസീൻ ഹൈഡ്രോക്സൈലാസ്, അതിന്റെ സ്ഥിരതയെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. J Biol Chem 279: 54487-54493. doi: 10.1074 / jbc.m406636200
  159. 18. ബിബ്ബ് ജെഎ, സ്നൈഡർ ജി.എൽ, നിഷി എ, യാൻ സി, മീജർ എൽ, തുടങ്ങിയവരും. (1999) DARPP-32 ന്റെ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ Cdk5 ന്യൂറോണുകളിൽ ഡോപ്പാമിൻ സിഗ്നലിംഗ് മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു. സ്വഭാവം 402: 669-671.
  160. 19. ബിബ്ബ് ജെഎ, ചെൻ ജെ, ടെയ്ലർ ജെ., സ്വെൻസിങ്സൺ പി, നിഷി എ, തുടങ്ങിയവരും. (2001) കൊക്കെയ്നുമായുള്ള ദീർഘകാലമായുള്ള എക്സ്പോഷർ മൂലം ന്യൂറോണൽ പ്രോട്ടീൻ Cdk5 നിയന്ത്രിച്ചിരിക്കുന്നു. സ്വഭാവം 410: 376-380.
  161. 20. ഓഷമ ടി, ഓഗാവ എം, വീരന്ന, ഹിരാസാവ എം, ലോണേനേക്കർ ജി, തുടങ്ങിയവരും. (2001) വികസ്വര മൗസ് തലച്ചോറിലെ കോർട്ടിക്കൽ ന്യൂറോണുകളുടെ സ്ഥാനത്തേക്കുള്ള സൈക്ളിൻ-ആശ്രിത KINAS 5 / P35, Reelin / DB1 എന്ന സംയുക്ത സംഭാവനകൾ. പ്രോക്ക് നത് അഡാഡ് സയൻസ് യു.എസ്.എൻ: 98-2764. doi: 2769 / pnas.10.1073
  162. 21. Morabito MA, Sheng M, Tsai LH (2004) സൈക്ലിൻ ആശ്രിത KINAS 5 ന്യൂറോണുകളിൽ പോസ്റ്റിനോട്ടിക്കൽ ഡെൻസിറ്റി പ്രോട്ടീൻ PSD- ൻറെ എൻ-ടെർമിനൽ ഡൊമെയ്നിന് ഫോസ്ഫോറിയലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 95: 24-865. doi: 876 / jneurosci.10.1523-4582
  163. 22. പാർക്ക് എസ് കെ, എൻഗൂയ്ൻ എം ഡി, ഫിഷർ എ, ലൂക്ക് എംപി, അഫർ എൽ ബി, തുടങ്ങിയവരും. (2005) പാർട്ട്-എക്സ്.എം.എക്സ് ലിങ്കുകൾ ഡോപ്പാമിൻ സിഗ്നലിംഗ് ആൻഡ് ഡിപ്രഷൻ. സെൽ 4: 122-275. doi: 287 / j.cell.10.1016
  164. 23. നിതാംമിർ എം, സ്മിത്ത് ഡി എസ്, അയലാ ആർ, പെങ് ജെ, കോ ജെ, തുടങ്ങിയവരും. (2000) NUDEL LIS5 ഉം സൈടോപ്ലാസ്മസി ഡൈനിനുമായി സഹകരിക്കുന്ന ഒരു നൂതന Cdk1 ഉപഗ്രഹമാണ്. ന്യൂറോൺ 28: 697-711. doi: 10.1016 / s0896-6273 (00) 00147-1
  165. 24. കിം കെ.എം., വലേൻസാനോ കെ.ജെ, റോബിൻസൺ എസ്ആർ, യാവോ ഡബ്ല്യു.ഡബ്ല്യു, ബരാക്ക് എൽഎസ്, തുടങ്ങിയവരും. (2001) ജി പ്രോറ്റീൻ-കപ്പ്പ്ലെഡ് റിസപ്റ്റർ കൈനസ്, ബീറ്റാ-അറയിനുകൾ എന്നിവ വഴി ഡോപാമീൻ D2, D3 റിസപ്റ്ററുകളുടെ വിഭിന്ന നിയന്ത്രണം. J Biol Chem 276: 37409-37414. doi: 10.1074 / jbc.m106728200
  166. 25. Waldhoer M, Bofill-Cardona E, Milligan G, Freissmuth M, നാനോഫ് സി (1998) Suramin ആൻഡ് didemethylated suramin (NF1) വഴി നൂൽനൂൽ ആഡിനായോൺ ആൻഡ് D2 ഡോപ്പാമിൻ റിസപ്റ്ററുകൾ വിഭിന്ന നഗ്നമായ. മോളിലെ ഫാമസോൾ 037: 53-808.
  167. 26. ബോഫിൽ-കാർഡോണ ഇ, കുഡ്ലസെക്ക് ഒ, യാങ്ങ് ക്വി, അഹോൺ എച്ച്, ഫ്രീസിൽമുത്ത് എം, തുടങ്ങിയവരും. (2000) D2-dopamine receptor ലേക്കുള്ള calmodulin ബൈൻഡിംഗ് ജി പ്രോട്ടീൻ സജീവമാക്കൽ സ്വിച്ച് അറസ്റ്റ് വഴി റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗ് കുറയ്ക്കുന്നു. J Biol Chem 275: 32672-32680. doi: 10.1074 / jbc.m002780200
  168. 27. List SJ, സീമൻ പി (1981) ഡോപ്പമിൻ ആൻഡ് സെറോടോണിൻ റിസപ്റ്റർ ഘടകങ്ങൾ [3H] സ്പൈപറോൺ തലച്ചോറിൻറെ എലികൾക്കും ബാധകമാണ്. പ്രോക്ക് നത് അഡാഡ് സയൻസ് യു.എസ്.എൻ: 78-2620. doi: 2624 / pnas.10.1073
  169. 28. ഗാർഡനർ ബി, സ്ട്രേഞ്ച് പിജി (1998) D2 (ദൈർഘ്യം) ഡോപ്പമിൻ റിസപ്റ്ററുകളിൽ അഗണിസ്റ്റ് പ്രവർത്തനം: ലിഗാണ്ട് ബൈൻഡിംഗ് ആൻഡ് ഫംഗ്ഷണൽ അസ്സസ്. BR J ഫാർമക്കോൾ 124: 978-984. doi: 10.1038 / sj.bjp.0701926
  170. 29. Dopamine D2003 റിസപ്റ്ററിൻറെ ഉയർന്ന സമ്പന്ന സൈറ്റുകളിൽ നിന്നുള്ള ഡിമ്പമിഡൺ സീമൻ പി, ടാലീരിയോ ടി, കൊഎൻഎൻ (3) ഡോപ്പാമൈൻ ഡിസ്പെസെൻസ്, എന്നാൽ [2H] റക്ലോപ്റൈഡ് അല്ലെങ്കിൽ [3H] സ്പീപ്പറോൺ ഐസോട്ടോണിക് മീഡിയത്തിൽ: മനുഷ്യ പോസിറ്റോൺ എമിഷൻ ടോമിഗ്രഫി ഇംപ്ലിക്കേഷൻസ്. സമന്വയിപ്പിക്കുക 3: 49-209. doi: 215 / syn.10.1002
  171. 30. Obenauer JC, Cantley LC, Yaffe MB (2003) സ്കാൻസറ്റ് 2.0: ഹ്രസ്വ സീക്വൻസ്സ് മോഹീഫുകൾ ഉപയോഗിച്ച് സെൽ സിഗ്നലിംഗ് പരസ്പര പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ പ്രോട്ടോമിയം വിശകലനം. ന്യൂക്ലിയർ ആസിഡുകൾ Res 31: 3635-3641. doi: 10.1093 / nar / gkg584
  172. 31. ലിയു എച്ച്, സദിയോഗോവ് ആർജി, യേറ്റ്സ് ജെആർഎക്സ് XX (3) ഷോട്ട്ഗൺ പ്രോട്ടോമോമിക്സിന്റെ ആപേക്ഷിക പ്രോട്ടീൻ സമൃദ്ധിക്ക് ക്രമരഹിത സാംപ്ലിംഗ് ഒരു മോഡൽ. അനൽ ചെമ്മോൺ 2004: 76-4193. doi: 4201 / ac10.1021
  173. 32. Ito K, Haga T, Lameh J, Sadee W (1999) ഡോപ്പാമിൻ D2 റിസപ്റ്ററുകൾ പിടിച്ചടക്കുന്നത് ജി-പ്രോട്ടീൻ കപ്പിൾ റിസപ്റ്റർ കൈനസ് 2 അല്ലെങ്കിൽ 5- ന്റെ സഹസംവിധാനത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. യുുർ ജെ ജൊകോഹെം 260: 112-119. doi: 10.1046 / j.1432-1327.1999.00125.x
  174. 33. Namkung Y, Sibley DR (2004) Protein kinase സി ഫോസ്ഫോറലേഷൻ, ഡീസിൻസിറ്റൈസേഷൻ, ട്രാഫിക്കിംഗ് എന്നിവയാണ് D2 dopamine receptor. J Biol Chem 279: 49533-49541. doi: 10.1074 / jbc.m408319200
  175. 34. വാങ് എഎസ്, ലീ ആർ.എച്ച്, ചുംഗ് എയി, യംഗ് പി.കെ, ചുംഗ് എസ്.കെ., തുടങ്ങിയവരും. (2011) പാർക്കിൻസൺസ് രോഗം മാതൃകയിലുള്ള സ്വയംഭ്രംശം വേണ്ടി എക്സോഫോളിൻ B5 Cdk1 മദ്ധ്യസ്ഥൻ ഫോസ്ഫോരിലേഷൻ ആവശ്യമാണ്. നാറ്റ് സെൽ ബിയർ 13: 568-579. doi: 10.1038 / ncb2217
  176. 35. കേശാവാനി എസ്, ലിയു കെഎഫ്, മക്ലൗലിൻ ഡിഎം, ബ്രൌൺലീസ് ജെ, അക്കർലെ എസ്, തുടങ്ങിയവരും. (2001) p35 / cdk5 binds and phosphorylates ബീറ്റ catinin കൂടാതെ ബീറ്റാ catenin / presenilin-1 ഇടപെടൽ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. യുവർ ജെ ന്യൂറോഴ്സി 13: 241-247. doi: 10.1046 / j.1460-9568.2001.01376.x
  177. 36. Kuhar MJ, Ritz MC, Boja JW (1991) കൊക്കെയ്ൻ ഉപോൽപ്പന്ന സ്വഭാവമുള്ള ഡോപാമീൻ സിദ്ധാന്തം. ട്രെൻഡുകൾ ന്യൂറോസി 14: 299-302. doi: 10.1016 / 0166-2236 (91) 90141-g
  178. 37. വോൾക്കോ ​​എൻഡി, ഫൗളർ ജെ.എസ്, വോൾഫ് എ.പി, ഷ്ലൈർ ഡി, ഷിയേ സി, തുടങ്ങിയവർ. (1990) പോസ്റ്റിനാപ്റ്റിക് ഡോപാമീൻ റിസപ്റ്ററുകളിൽ വിട്ടുമാറാത്ത കോക്കെയ്ൻ ദുരുപയോഗം. ആം ജൈ സൈക്യാട്രിക്സ് 147: 719-724.
  179. 38. ഡിൽലി ജെ.ഡബ്ല്യു., ഫ്രയർ ടി.ഡി., ബ്രിച്ചാർഡ് എൽ, റോബിൻസൺ ഇ.എസ്., തിബാബാൾഡ് ഡി, തുടങ്ങിയവരും. (2007) ന്യൂക്ലിയസ് അംബുംബൻസ് D2 / XX റിക്സേഴ്സ് വൈവിധ്യവസ്തുതയും കൊകൈൻ ശക്തിയും പ്രവചിക്കുന്നു. ശാസ്ത്രം 3: 315-1267. doi: 1270 / science.10.1126
  180. 39. നാദർ എം.എ, മോർഗൻ ഡി, ഗേജ് എച്ച്ഡി, നാദർ എസ്.എച്ച്, കാൾഹൌൺ ടി എൽ, തുടങ്ങിയവരും. (2006) കുരങ്ങുകളിൽ വിട്ടുമാറാത്ത കൊക്കൈൻ സ്വയം-നിയന്ത്രണ സമയത്ത് ഡോപാമീൻ D2 റിസപ്റ്ററുകളുടെ PET ഇമേജിംഗ്. നാനോ ന്യൂറോസി 9: 1050 - 1056. doi: 10.1038 / nn1737
  181. 40. റോബിൻസൺ ടി.ഇ, കോൾബ് ബി (1997) അംബാട്ടമൈനിനൊപ്പം മുൻകാല പഠനം നടത്തിയ ന്യൂക്ലിയസ് അംബുംബനുകളും പ്രീപ്രൊണ്ടൽ കോർട്ടക്സ് ന്യൂറോണുകളിലുമുള്ള സ്ഥിരമായ ഘടനാപരമായ മാറ്റങ്ങൾ. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 17: 8491-8497.
  182. 41. റോബിൻസൺ ടി.ഇ, കോൾബ് ബി (1999) ആംഫെറ്റാമൈൻ അല്ലെങ്കിൽ കൊകൈൻ ആവർത്തിച്ചുള്ള ചികിത്സയ്ക്കുശേഷം ന്യൂക്ലിയസ് അംബുംബൻസ് ആൻഡ് ഫ്രെൻറോൾട്ട കോർട്ടക്സിലെ ഡൻഡറൈറ്റ്സ് ആൻഡ് ഡൻഡറിക് സ്പിന്നുകൾ രൂപകല്പനയിലെ മാറ്റങ്ങൾ. യുവർ ജെ ന്യൂറോഴ്സി 11: 1598-1604. doi: 10.1046 / j.1460-9568.1999.00576.x
  183. 42. McClung CA, നെസ്റ്റ്ലർ ഇജെ (2003) ക്രെബിറ്റ് ആൻഡ് ഡെൽറ്റോ ഫോസ്ബെൻ ജീനിക് എക്സ്പ്രഷന്റെയും കോകൈൻ റിവാളിന്റെയും നിയന്ത്രണം. നാനോ ന്യൂറോസി 6: 1208 - 1215. doi: 10.1038 / nn1143
  184. 43. ഫെങ് ജെ, യാൻ സി, ഫെരേര എ, ടോമിസാവ കെ, ലിയാവു ജെഎ, തുടങ്ങിയവരും. (2000) Spinophilin ഡൻഡറിക് മുള്ളുകളുടെ രൂപീകരണവും പ്രവർത്തനവും ക്രമീകരിക്കുന്നു. പ്രോക്ക് നത് അഡാഡ് സയൻസ് യു.എസ്.എൻ: 97-9287. doi: 9292 / pnas.10.1073
  185. 44. PRANGE O, മർഫി TH (2001) കോർട്ടിക്കൽ ന്യൂറോണുകളുടെ ആദ്യകാല വളർച്ചയുടെ സമയത്ത് തൂക്കമില്ലാത്ത ഡൈനിറ്റിക് സാന്ദ്രത-95 ക്ലസ്റ്ററുകളുടെ മാസ്റ്ററൽ ട്രാൻസ്ഫോർമറും സ്ഥിരമായ നട്ടെല്ല് മുൻകരുതലുകളുമായുള്ള സഹകരണവും. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 21: 9325-9333.
  186. 45. Murase S, Mosser E, Schuman EM (2002) സിപാപ്ടിക് ഘടനയിലും പ്രവർത്തനത്തിലും മാറ്റങ്ങൾ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്ന ന്യൂറോണൽ സ്പിന്നുകളിലേക്ക് ബീറ്റാ-കാറ്റനിലനെ നശിപ്പിക്കുന്നു. ന്യൂറോൺ 35: 91-105. doi: 10.1016 / s0896-6273 (02) 00764-x
  187. 46. ഹായിഷി എം.എൽ., ചോയി സി, റാവു ബി.എസ്, ജംഗ് ഹൈ, ലീ എച്ച് കെകെ, തുടങ്ങിയവരും. (2004) ഫോർബ്രെയിൻ സ്പെഷ്യൽ ആധിപത്യ-നെഗറ്റീവ് പാക്ക് ട്രാൻജെജനിക് എലികളിലെ കോർട്ടിക്കൽ സിനാപ്റ്റിക് മോർഫോളജി, ദുർബലമായ മെമ്മറി ഏകീകരണം എന്നിവ മാറ്റി. ന്യൂറോൺ 42: 773-787. doi: 10.1016 / j.neuron.2004.05.003
  188. 47. ബെനവൈഡ്സ് ഡി.ആർ, ക്വിൻ ജേക്കബ്, ഷാങ് പി, ഹവാസ്ലി എഎച്ച്, ഡിലിയോൺ ആർജെ, തുടങ്ങിയവരും. (2007) Cdk5 കോകൈൻ റിവാർഡ് മോഡിക്കും, പ്രചോദനം, സ്ട്രൈറ്റൽ ന്യൂറോൺ ആവേശം. ജെ ന്യൂറോഴ്സി 27: 12967-12976. doi: 10.1523 / jneurosci.4061-07.2007
  189. 48. മേയർ ഡി എ, റിഷർ ഇ, ബെൻകോവിക് എസ്എ, ഹായാഷി കെ, കാൻസി ജെ.ഡബ്ല്യു, തുടങ്ങിയവരും. കൊക്കോയിൻ, മോട്ടോർ ലേണിംഗ്, ഡൻഡറിക് മോർഫോളജി എന്നിവക്ക് ലോക്കോമാറ്റിക് പ്രതികരണങ്ങൾ Cdk2008 മാറ്റുന്നതിനുള്ള സ്ട്രിയാറ്റൽ ഡിസറ്യൂലേഷൻ (5). പ്രോക്ക് നത് അഡാഡ് സയൻസ് യു.എസ്.എൻ: 105-18561. doi: 18566 / pnas.10.1073
  190. 49. Impey S, Obrietan K, Storm DR (1999) പുതിയ കണക്ഷനുകൾ ഉണ്ടാക്കുന്നു: ന്യൂറോണൽ പ്ലാസ്റ്റിക്റ്റിയിൽ ERK / MAP കിനേസ് സിഗ്നലിങ്ങിന്റെ പങ്ക്. ന്യൂറോൺ 23: 11-14. doi: 10.1016 / s0896-6273 (00) 80747-3