ഫിസിയോൽ ബിഹാവ. രചയിതാവ് കൈയെഴുത്തുപ്രതി; PMC 2015 Mar 10- ൽ ലഭ്യമാണ്.
അവസാനമായി എഡിറ്റുചെയ്ത ഫോമിൽ പ്രസിദ്ധീകരിച്ചത്:
ഫിസിയോൾ ബെഹവ്. 2008 Jun 9; 94 (3): 309 - 315.
ഓൺലൈൻ പ്രസിദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ടത് ജനുവരി 29. ദോഇ: 10.1016 / j.physbeh.2008.01.008
PMCID: PMC4354893
NIHMSID: NIHMS669562
വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന
പഞ്ചസാര അമിതമായി ഉപയോഗിക്കുന്നത് ദുരുപയോഗം ചെയ്യുന്ന മരുന്നുകൾ കഴിക്കുന്നതിനു സമാനമായ രീതിയിൽ ന്യൂറൽ പാതകളെ സജീവമാക്കും, ഇത് ആശ്രിതത്വത്തിന്റെ അനുബന്ധ ലക്ഷണങ്ങളിൽ കലാശിക്കും. നിലവിലെ പരീക്ഷണങ്ങൾ സുക്രോസിൽ അമിതമായി ഉപവസിക്കുകയും പിന്നീട് ഉപവസിക്കുകയും ചെയ്ത എലികൾ ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ ലക്ഷണങ്ങൾ കാണിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് പരിശോധിക്കുന്നു. 12-h അഭാവത്തിൽ എലികളെ പരിപാലിച്ചു, തുടർന്ന് 12-h ഒരു 10% സുക്രോസ് ലായനിയിലേക്കുള്ള ആക്സസ്, 28 ദിവസത്തേക്ക് ച ow, എന്നിട്ട് 36 h ന് ഉപവസിച്ചു. ഈ മൃഗങ്ങൾ സമാനമായ പ്ലസ്-മാർജിന്റെ എക്‌സ്‌പോസ്ഡ് ഭുജത്തിൽ കുറച്ച് സമയം ചിലവഴിച്ചത് സമാനമായ ഒരു പരസ്യ ലിബിതം ച group ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഉത്കണ്ഠ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. മൈക്രോഡയാലിസിസ് എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ അസറ്റൈൽകോളിനിലെ വർദ്ധനവും ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസ് ഷെല്ലിലെ ഡോപാമൈൻ റിലീസിലെ കുറവും വെളിപ്പെടുത്തി. ഈ ഫലങ്ങൾ ഹൈപ്പോഗ്ലൈസീമിയ മൂലമാണെന്ന് തോന്നുന്നില്ല. കണ്ടെത്തലുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് സുക്രോസ്, ച ow എന്നിവ അമിതമായി കഴിക്കുന്ന ഭക്ഷണവും തുടർന്ന് ഉപവാസവും ഉത്കണ്ഠയും മാറ്റം വരുത്തിയ ഡോക്യാമൈനും അസറ്റൈൽകോളിൻ ബാലൻസും ഉൾക്കൊള്ളുന്ന ഒരു അവസ്ഥ സൃഷ്ടിക്കുന്നു. ഇത് നലോക്സോണിന്റെ ഫലങ്ങൾക്ക് സമാനമാണ്, ഇത് ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കൽ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. ചില ഭക്ഷണ ക്രമക്കേടുകൾക്ക് ഇത് ഒരു ഘടകമാകാം.
മയക്കുമരുന്നിന് അടിമപ്പെടുന്നതിന്റെ ഒരു ഘടകമാണ് പിൻവലിക്കൽ [1]. ലെ മാഗ്നെൻ [2] ഒപിയോയിഡ് എതിരാളി നലോക്സോൺ എലികളിൽ ഒപിയേറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങൾ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്നത് രുചികരമായ കഫറ്റീരിയ ശൈലിയിലുള്ള ഭക്ഷണമാണ് നൽകിയതെന്ന് കണ്ടെത്തി. അതുപോലെ, ദിവസേനയുള്ള പഞ്ചസാരയുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനായി ഭക്ഷണത്തിൽ സൂക്ഷിക്കുന്ന എലികളും നലോക്സോണിനുള്ള പ്രതികരണമായി ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ ലക്ഷണങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു [3]. ഈ എലികൾ പിൻവലിക്കൽ, ഉയർന്ന പ്ലസ്-മാർജിൽ ഉത്കണ്ഠ, ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിൽ (എൻ‌എസി) വർദ്ധിച്ച അസറ്റൈൽകോളിൻ (എസിഎച്ച്) ഉള്ള എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡോപാമൈൻ (ഡിഎ) കുറയുന്നു. ഒരു സ്വഭാവത്തിന്റെ അന്തർലീനമായ ന്യൂറൽ മെക്കാനിസങ്ങൾ മനസിലാക്കാൻ ഒപിയോയിഡ് എതിരാളിയുടെ ഉപയോഗം പ്രധാനമാണെങ്കിലും, ഇത് സ്വാഭാവിക സാഹചര്യങ്ങളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണ്. വിട്ടുനിൽക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ സ്വമേധയാ ഉയർന്നുവരുന്ന പിൻവലിക്കൽ കൂടുതൽ യാഥാർത്ഥ്യബോധമുള്ളതും കാട്ടിലെ മൃഗങ്ങളുടെ പ്രതിഫലനമോ ക്ഷാമമോ കഠിനമായ ഭക്ഷണക്രമമോ സമയത്ത് മനുഷ്യന്റെ അവസ്ഥയാണ്.
പിൻവലിക്കലിന്റെ പെരുമാറ്റ, ജൈവ രാസ അടയാളങ്ങൾ വ്യക്തമാക്കുന്നതിന് ദുരുപയോഗ മരുന്നിൽ നിന്ന് വിട്ടുനിൽക്കുന്നത് മതിയാകും. മോർഫിൻ ഡിസ്പ്ലേ പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങളായ ഭൂചലനങ്ങൾ, വെറ്റ്-ഡോഗ് ഷെയ്ക്കുകൾ എന്നിവയിൽ നിന്ന് വിട്ടുനിൽക്കുന്ന എലികൾ [4,5]. ഈ സ്വഭാവങ്ങളോടൊപ്പം ഡിഎ സിസ്റ്റത്തിലെ മാറ്റങ്ങളുമുണ്ട്, സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി കുറയുന്നു1 കൂടാതെ ഡി2 റിസപ്റ്റർ mRNA [6], എൻഎസിയിൽ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡിഎ കുറഞ്ഞു [7,8] ഒപ്പം ആക്യുമ്പൻസ് എസിഎച്ചിലെ വർദ്ധനവും [9].
അതുപോലെ, രുചികരമായ ഭക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്ന് അഭാവം ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ പെരുമാറ്റ ലക്ഷണങ്ങളിൽ കലാശിക്കും. 24 അല്ലെങ്കിൽ 36 h നായി ഭക്ഷണവും കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ പഞ്ചസാരയും നീക്കംചെയ്യുമ്പോൾ പഞ്ചസാരയിലേക്കുള്ള ഇടയ്ക്കിടെ ആക്സസ് ഉള്ള ഭക്ഷണരീതികൾ എലികൾ മുമ്പ് പിൻവലിക്കുന്ന അവസ്ഥയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.3,10]. കൂടാതെ, ഭക്ഷ്യ അഭാവം മയക്കുമരുന്ന് ശക്തിപ്പെടുത്തുന്ന സ്വഭാവം വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് കാണിക്കുന്നു, ഇത് ഭക്ഷണം ഒഴിവാക്കുന്നതും ആസക്തി നിറഞ്ഞ സ്വഭാവങ്ങളും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം സൂചിപ്പിക്കുന്നു [11,12].
അമിതമായ പഞ്ചസാര കഴിച്ചതിനുശേഷം ഉപവസിക്കുന്നത് എൻഎസിയിലെ ഡിഎ, എസി എന്നിവയുടെ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ലെവലിൽ മാറ്റം വരുത്തുമോ എന്ന് അറിയില്ല. നിലവിലെ പരീക്ഷണത്തിൽ, പഞ്ചസാര, ച ow എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ഉപവാസസമയത്ത് ഈ ന്യൂറോകെമിക്കലുകൾ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, പ്രകൃതിദത്ത ഓപിയോയിഡ് ഉത്തേജനത്തിന്റെ അഭാവം നലോക്സോൺ-വേഗത്തിൽ പിൻവലിക്കലിന്റെ ഫലങ്ങൾക്ക് സമാനമായ ഒരു തടസ്സത്തിന് കാരണമാകുമെന്ന സിദ്ധാന്തത്തിൽ, പ്രത്യേകിച്ചും ഡിഎയുടെ കുറവും എസി റിലീസിലെ വർദ്ധനവും NAc ഷെൽ. ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടിൽ ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ സോമാറ്റിക് അടയാളങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ കൂടുതൽ പൂർത്തീകരിക്കുന്നതിന് [3], പഞ്ചസാര അമിതമായി പിന്തുടർന്ന് നോമ്പുകാലത്ത് ഉയർന്ന പ്ലസ്-മാർജിന്റെയും രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെയും അളവ് കണക്കാക്കുന്നു.
1. വസ്തുക്കളും രീതികളും
1.1. പൊതു രീതികൾ
ടാക്കോണിക് ഫാമുകളിൽ (ജെർമൻ‌ട own ൺ, എൻ‌വൈ) നിന്ന് പുരുഷ സ്പ്രാഗ്-ഡാവ്‌ലി എലികൾ ലഭിച്ചു അല്ലെങ്കിൽ ടാക്കോണിക് ഫാമുകളിൽ നിന്ന് ഉത്ഭവിച്ച ഒരു സ്റ്റോക്കിൽ നിന്ന് പ്രിൻസ്റ്റൺ യൂണിവേഴ്സിറ്റി വൈവേറിയത്തിൽ വളർത്തുന്നു. വിപരീത 12-h വെളിച്ചത്തിൽ എലികളെ വ്യക്തിഗതമായി പാർപ്പിച്ചു: 12-h ഇരുണ്ട ചക്രം. എല്ലാ നടപടിക്രമങ്ങൾക്കും പ്രിൻസ്റ്റൺ യൂണിവേഴ്സിറ്റി ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ ആനിമൽ കെയർ ആന്റ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകാരം നൽകി.
1.2. പരീക്ഷണം 1: പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിക്കുമ്പോൾ ഉത്കണ്ഠ പ്രകടമാണോ?
പ്രധാന പരീക്ഷണ ഗ്രൂപ്പിലെ എലികൾ (300 - 450 g) (ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച ow; n = 9) 12-h അഭാവത്തിന്റെ ഭക്ഷണക്രമത്തിൽ പരിപാലിച്ചു, തുടർന്ന് 12% (w / v) സുക്രോസ് ലായനിയിലേക്കും സ്റ്റാൻഡേർഡ് എലി ച ow യിലേക്കും 10-h ആക്സസ് നൽകി (LabDiet #5001, PMI, സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, 3.02 kcal / g) 4 ദിവസത്തേക്ക് ഓരോ ദിവസവും 28 h ഇരുണ്ട ഘട്ടത്തിലേക്ക് ആരംഭിക്കുന്നു [13]. ഒരു നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പ് (പരസ്യ ലിബിതം ച ow; n = 7) സ്റ്റാൻഡേർഡ് എലി ചൗവിലേക്ക് പരസ്യ ആക്സസ് അനുവദിച്ചു. എല്ലാ മൃഗങ്ങൾക്കും വെള്ളം ലഭ്യമായ പരസ്യ സ്വാതന്ത്ര്യമുണ്ടായിരുന്നു. 2, 3 എന്നീ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ച മറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾ (ഇടവിട്ടുള്ള ച ow, പരസ്യ ലിബിറ്റം പഞ്ചസാര) ഉത്കണ്ഠയ്ക്കായി പരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടില്ല, കാരണം നലോക്സോണിനെത്തുടർന്ന് പിൻവലിക്കൽ അല്ലെങ്കിൽ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടിൽ ഉപവസിക്കുന്നതിന്റെ പെരുമാറ്റ സൂചനകൾ കാണിക്കുന്നതിൽ അവർ പരാജയപ്പെട്ടു [3].
28 ദിവസം, സാധാരണ 12-h അഭാവത്തിന് ശേഷം, പരീക്ഷണ ഗ്രൂപ്പിലെ എലികൾക്ക് പഞ്ചസാരയും ച ow വും അധിക 24 h ന് പ്രവേശനം നിഷേധിച്ചു. 36 h നുള്ള ച for യ്ക്കും നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പ് നഷ്‌ടപ്പെട്ടു. ഈ സമയത്ത്, മൃഗങ്ങൾക്ക് വെള്ളത്തിലേക്കുള്ള പരസ്യ പ്രവേശനം തുടർന്നു. ഫയൽ, ലിപ്പ, ബിയർ, ലിപ്പ എന്നിവയുടെ സാങ്കേതികത ഉപയോഗിച്ച് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മിനുട്ടിനായി എലവേറ്റഡ് പ്ലസ്-മാർ‌ഗിൽ മൃഗങ്ങളെ വ്യക്തിഗതമായി സ്ഥാപിച്ചു [14]. ഉപകരണത്തിന് നാല് കൈകളാണുള്ളത്, ഓരോ 10 സെന്റിമീറ്റർ വീതിയും 50 സെന്റിമീറ്റർ നീളവും, തറയിൽ നിന്ന് 60 സെന്റിമീറ്റർ ഉയർത്തി. എതിർവശത്തുള്ള രണ്ട് ഭുജങ്ങൾ ഉയർന്ന അതാര്യമായ മതിലുകളാൽ ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. മറ്റ് രണ്ട് കൈകൾക്കും സംരക്ഷണ മതിലുകൾ ഇല്ലായിരുന്നു. റെഡ്-ലൈറ്റിന് കീഴിലാണ് പരീക്ഷണം നടത്തിയത്. ശൈലിയുടെ മധ്യഭാഗത്ത് എലികൾ സ്ഥാപിക്കുകയും തുറന്ന അല്ലെങ്കിൽ അടച്ച ഭുജത്തിന് അഭിമുഖമായി മാറുകയും ചെയ്തു. ഓരോ പ്ലസ്-മാർഗ് ട്രയലും വീഡിയോ ടേപ്പ് ചെയ്ത് തലയും കൈയ്യും ഉപയോഗിച്ച് തുറന്ന ഭുജം, അടച്ച ഭുജം അല്ലെങ്കിൽ ശൈലിയുടെ മധ്യഭാഗം എന്നിവയിൽ ചെലവഴിച്ച സമയത്തിനായി സ്കോർ ചെയ്തു.
1.3. പരീക്ഷണം 2: ഉപവസിക്കുമ്പോൾ പഞ്ചസാര-അമിത എലികൾ ആക്യുമ്പൻസിലെ ഡിഎ, എസിഎച്ച് റിലീസുകളിൽ മാറ്റം വരുത്തിയോ?
മൈക്രോഡയാലിസിസിനായി ഗൈഡ് കാൻ‌യുലകൾ ഇംപ്ലാന്റ് ചെയ്യുന്നതിനായി ഒരു പ്രത്യേക കൂട്ടം എലികൾക്ക് (350-450 g) ശസ്ത്രക്രിയ നടത്തി. എലികൾക്ക് 20 mg / kg xylazine, 100 mg / kg ketamine (ip) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് കെറ്റാമൈനുമായി അനുബന്ധമായി അനസ്തേഷ്യ നൽകി (100 mg / kg, ip). ഉഭയകക്ഷി 21 ഗേജ് സ്റ്റെയിൻ‌ലെസ്-സ്റ്റീൽ ഗൈഡ് കാൻ‌യുലകൾ ലക്ഷ്യമിട്ടത് പിൻ‌വശം മീഡിയൽ ആക്യുമ്പൻസ് ഷെൽ ആണ് (മുൻഭാഗം: + 1.2 മില്ലീമീറ്റർ, ലാറ്ററൽ: 0.8 മില്ലീമീറ്ററും വെൻട്രൽ: 4.0 മില്ലീമീറ്ററും, ബ്രെഗ്മ, മിഡ്‌സാഗിറ്റൽ സൈനസ്, ലെവൽ തലയോട്ടിന്റെ ഉപരിതലം എന്നിവ പരാമർശിച്ച്) ഒരു സ്റ്റീരിയോടാക്സിക് ഉപകരണം ഉപയോഗിക്കുന്നു.
കുറഞ്ഞത് 1 ആഴ്ചയെങ്കിലും ശസ്ത്രക്രിയയിൽ നിന്ന് കരകയറാൻ എലികളെ അനുവദിച്ചു. പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പായ 1 പരീക്ഷണത്തിലെ നടപടിക്രമങ്ങൾക്ക് സമാനമാണ് (n = 6) പ്രതിദിനം 12-h അഭാവത്തിൽ പരിപാലിക്കപ്പെട്ടു, തുടർന്ന് 12% സുക്രോസ്, സ്റ്റാൻഡേർഡ് എലി ച ow എന്നിവയിലേക്കുള്ള 10-h ആക്സസ്, 4 h ഇരുണ്ട ഘട്ടത്തിലേക്ക് ആരംഭിക്കുന്നു, 28 ദിവസങ്ങളിൽ അമിതവേഗം (അതായത്, ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച ow) പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു. ഒരേ ഷെഡ്യൂളിൽ സുക്രോസ് ഇല്ലാതെ ഒരു നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പ് പരിപാലിച്ചു (ഇടവിട്ടുള്ള ച ow, n = 7), മറ്റൊരു ഗ്രൂപ്പ് പ്രതിദിന പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow യിൽ പരിപാലിക്കുന്നു (n = 6). 28 ദിവസം, ഓരോ എലിയും മൈക്രോഡയാലിസിസ് ചേമ്പറിലേക്ക് മാറ്റുകയും ന്യൂറോ ട്രാൻസ്മിറ്റർ വീണ്ടെടുക്കൽ സ്ഥിരപ്പെടുത്താൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് ഒരു അന്വേഷണം അക്രിലിക് സിമൻറ് 14-16 h ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥാപിക്കുകയും ഉറപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. മൈക്രോഡയാലിസിസ് പ്രോബുകൾ നിർമ്മിച്ചത് സിലിക്ക ഗ്ലാസ് ട്യൂബിംഗിലാണ് (37 internalm ആന്തരിക വ്യാസം, പോളിമിക്രോ ടെക്നോളജീസ് Inc., ഫീനിക്സ്, AZ) ഒരു 26 ഗേജ് സ്റ്റെയിൻ‌ലെസ് സ്റ്റീൽ ട്യൂബിനുള്ളിൽ സെല്ലുലോസ് ട്യൂബിംഗിന്റെ മൈക്രോഡയാലിസിസ് ടിപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് എപ്പോക്സി ഉപയോഗിച്ച് അടച്ചിരിക്കുന്നു (സ്പെക്ട്രം മെഡിക്കൽ കമ്പനി, ലോസ് ഏഞ്ചൽസ്, CA, 6000 MW, 0.2 mm പുറം വ്യാസം × 2.0 mm നീളം) [15]. ഗൈഡ് കാൻ‌യുലയിൽ നിന്ന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലീമീറ്റർ നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന പേടകങ്ങൾ അക്കുമ്പെൻസ് ഷെല്ലിലെ ഉദ്ദേശിച്ച സൈറ്റിലെത്തുന്നു. ബഫർ ചെയ്ത റിംഗറിന്റെ പരിഹാരം (5 mM NaCl, 142 mM KCl, 3.9 mM CaCl2, 1.0 mM MgCl2, 1.35 mM Na2HPO4, 0.3 mM NaH2PO4, pH7.35) സ്ഥിരത കാലയളവിനായി 0.5 µL / min എന്ന ഫ്ലോ റേറ്റിലും പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പും ശേഷവും 1.3 µL / min 2 h ന്. എസിഎച്ചിന്റെ എൻസൈമാറ്റിക് ഡീഗ്രേഡേഷനെ തടസ്സപ്പെടുത്തിക്കൊണ്ട് എസിയുടെ അടിസ്ഥാന വീണ്ടെടുക്കൽ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനായി റിംഗറിന്റെ പരിഹാരത്തിൽ നിയോസ്റ്റിഗ്മൈൻ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് µM) ചേർത്തു.
12 ദിവസം അവസാന 28-h സുക്രോസ് ആക്സസ് കാലയളവ് അവസാനിച്ചപ്പോൾ, എല്ലാ എലികളിൽ നിന്നും ച ow, സുക്രോസ്, വെള്ളം എന്നിവ നീക്കംചെയ്തു. ഡയാലിസിസ് പരീക്ഷണത്തിന്റെ 36 h നായി വെള്ളം നീക്കംചെയ്തു, കാരണം കുടിവെള്ളത്തിന് DA, ACh എന്നിവയുടെ അടിസ്ഥാന അളവ് മാറ്റാൻ കഴിയും [16], ഇത് ഫലങ്ങളെ ആശയക്കുഴപ്പത്തിലാക്കും. 1, 3, 20 h ഉപവാസത്തിനുശേഷം 12 h (24 × 36-min സാമ്പിളുകൾ) നായി മൈക്രോഡയാലിസിസ് സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു (ഭക്ഷണമോ പഞ്ചസാരയോ വെള്ളമോ ലഭ്യമല്ല). ഓരോ സാമ്പിളും വിഭജിച്ചു, പകുതി ഡിഎ വിശകലനത്തിനും പകുതി എസിഎച്ചിനും.
1.4. ഡോപാമൈൻ, അസറ്റൈൽകോളിൻ പരിശോധനകൾ
ഡി‌എയും അതിന്റെ മെറ്റബോളിറ്റുകളായ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ഡൈഹൈഡ്രോക്സി-ഫെനിലാസെറ്റിക് ആസിഡും (ഡോപക്) ഹോമോവാനിലിക് ആസിഡും (എച്ച്വിഎ) റിവേഴ്സ് ഫേസ്, ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി, ഇലക്ട്രോകെമിക്കൽ ഡിറ്റക്ഷൻ (എച്ച്പി‌എൽ‌സി-ഇസി) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു. 3,4-cmL സാമ്പിൾ ലൂപ്പിലേക്ക് സാമ്പിളുകൾ കുത്തിവച്ചു, 20-cm നിരയിലേക്ക് 10 mm-bore, 3.2 µm, C3 പാക്കിംഗ് (ബ്ര rown ൺ‌ലി കോ. മോഡൽ 18, സാൻ ജോസ്, CA). മൊബൈൽ ഘട്ടത്തിൽ 6213 mM സോഡിയം ഫോസ്ഫേറ്റ്, 60 EDM EDTA, 100 mM ഹെപ്റ്റനോസൾഫോണിക് ആസിഡ്, 1.24% vol / vol മെത്തനോൾ എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ഡിഎ, ഡോപാക്, എച്ച്വിഎ എന്നിവ ഒരു കൊളോമെട്രിക് ഡിറ്റക്ടർ (ESA Co. മോഡൽ 5A, ചെൽ‌സ്ഫോർഡ്, MA) ഉപയോഗിച്ച് കണ്ടീഷനിംഗ് സാധ്യത + 5100 mV, ഒപ്പം cell500 mV- യിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്ന സെൽ സാധ്യത എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് അളന്നു.
20-സെന്റിമീറ്റർ C10 അനലിറ്റിക്കൽ കോളം (Chrompack Inc., Palo Alto, CA) ഉള്ള 18-withL സാമ്പിൾ ലൂപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് റിവേഴ്സ് ഫേസ് HPLC-EC ഉപയോഗിച്ചാണ് ACH അളക്കുന്നത്. അസ്ഥിരമാക്കിയ എൻസൈം റിയാക്ടറാണ് എസി‌എച്ചിനെ ബീറ്റൈൻ, ഹൈഡ്രജൻ പെറോക്സൈഡ് എന്നിവയിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്തത് (സിഗ്മ, സെന്റ് ലൂയിസ്, എം‌ഒ എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള അസറ്റൈൽകോളിനെസ്റ്ററേസ്, കോളിൻ ഓക്‌സിഡേസ്, ക്രോംപാക്ക് ഇങ്ക്, പാലോ ആൾട്ടോ, സിഎയിൽ നിന്നുള്ള നിര). പിഎച്ച് 200 ന് 8.0 എംഎം പൊട്ടാസ്യം ഫോസ്ഫേറ്റായിരുന്നു മൊബൈൽ ഘട്ടം. ഒരു ആമ്പറോമെട്രിക് ഡിറ്റക്ടർ ഉപയോഗിച്ചു (ഇജി & ജി പ്രിൻസ്റ്റൺ അപ്ലൈഡ് റിസർച്ച്, ലോറൻസ്‌വില്ലെ, എൻജെ). ഒരു എഗ്-എ‌ജി‌സി‌എൽ റഫറൻസ് ഇലക്ട്രോഡിനെ (ഇജി & ജി പ്രിൻസ്റ്റൺ അപ്ലൈഡ് റിസർച്ച്) 500 എം‌വിയിൽ സജ്ജമാക്കിയ പ്ലാറ്റിനം ഇലക്ട്രോഡിൽ (ബി‌എ‌എസ്, വെസ്റ്റ് ലഫായെറ്റ്, ഐ‌എൻ) ഹൈഡ്രജൻ പെറോക്സൈഡ് ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ടു.
മൂന്ന്, 20-min സാമ്പിളുകൾ 12, 24, 36 h ഉപവാസത്തിൽ ശേഖരിച്ചു. ഓരോ മണിക്കൂറിലും, മൂന്ന് സാമ്പിളുകളുടെ ഡാറ്റ ശരാശരി കണക്കാക്കി. ഡിഎ, എസി എന്നിവയ്ക്കുള്ള ഡാറ്റ ഓരോ ഗ്രൂപ്പിനുമുള്ള എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എച്ച് ഡിപ്രിവേഷൻ ടൈം പോയിന്റിന്റെ ശതമാനമായി പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെട്ടു, ഇടയ്ക്കിടെ ഭക്ഷണം നൽകുന്ന എലികൾ സാധാരണയായി ഭക്ഷണം പ്രതീക്ഷിക്കും.
1.5. ഹിസ്റ്റോളജി
പരീക്ഷണത്തിന്റെ അവസാനം മൈക്രോഡയാലിസിസ് പ്രോബ് പ്ലേസ്മെന്റ് പരിശോധിക്കുന്നതിനായി ഹിസ്റ്റോളജി നടത്തി. എലികൾക്ക് സോഡിയം പെന്റോബാർബിറ്റലിന്റെ അമിത അളവ് ലഭിച്ചു, ആഴത്തിൽ അനസ്തേഷ്യ ചെയ്തപ്പോൾ ഇൻട്രാ കാർഡിയലായി എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്% സലൈൻ ഉപയോഗിച്ച് പെർഫ്യൂസ് ചെയ്തു, തുടർന്ന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഫോർമാൽഡിഹൈഡ്. തലച്ചോറുകൾ നീക്കം ചെയ്യുകയും ഫ്രീസുചെയ്യുകയും പരീക്ഷണ നുറുങ്ങുകളുടെ സൈറ്റുകൾ കണ്ടെത്തുന്നതുവരെ അവ മുറിച്ചുമാറ്റിയപ്പോൾ (0.9 sm കഷ്ണങ്ങൾ, അക്കുമ്പെൻസിന് മുൻപിൽ ആരംഭിച്ച്) പരിശോധിക്കുകയും ചെയ്തു. അന്വേഷണ ട്രാക്കുകൾ ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചുകഴിഞ്ഞാൽ, പാക്സിനോസ്, വാട്സൺ എന്നിവരുടെ അറ്റ്ലസ് ഉപയോഗിച്ച് അവ ആസൂത്രണം ചെയ്തു [17].
1.6. പരീക്ഷണം 3: സുക്രോസിലെ വിട്ടുമാറാത്ത അമിതഭാരം കാരണം രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവിൽ മാറ്റങ്ങൾ ഉണ്ടോ?
(എ) ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച ow (300-h അഭാവം, തുടർന്ന് 350% സുക്രോസ് ലായനിയിലേക്കും ച ow യിലേക്കും 28-h ആക്സസ്, മൂന്ന് ഘട്ടങ്ങളിലുള്ള എലികൾ (12-12 g) 10 ദിവസങ്ങളിൽ പരിപാലിക്കപ്പെട്ടു. ; n = 10), (ബി) ഇടവിട്ടുള്ള ച ow (12-h അഭാവം, തുടർന്ന് 12-h സ്റ്റാൻഡേർഡ് എലി ച ow യിലേക്കുള്ള ആക്സസ് (സുക്രോസ് ഇല്ല), 4 h ആരംഭിച്ച് ഇരുണ്ട ഘട്ടത്തിലേക്ക്; n = 10), അല്ലെങ്കിൽ (സി) പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow (n = 9). 12, 24, 36 h എന്നിവയുടെ അഭാവത്തെ തുടർന്ന് ച ow, പഞ്ചസാര എന്നിവ നീക്കം ചെയ്യുകയും വാൽ-രക്ത സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിക്കുകയും ചെയ്തു. ഒരു പരീക്ഷണകാരി മൃഗത്തെ സ ently മ്യമായി പിടിച്ച് വാലിന്റെ അഗ്രത്തിൽ നിന്ന് രക്തം ശേഖരിച്ചു, മറ്റൊരാൾ വാൽ അഗ്രത്തിൽ നിന്ന് അണുവിമുക്തമായ സ്കാൽപൽ ഉപയോഗിച്ച് 5 മില്ലീമീറ്ററിനെക്കുറിച്ച് ചെറിയ മുറിവുണ്ടാക്കി. രക്തം ഒരു കാപ്പിലറി ട്യൂബിൽ ശേഖരിക്കുകയും കേന്ദ്രീകൃതമാക്കുകയും സെറം ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ് വിശകലനം ചെയ്യുകയും അനലക്സ് ജി‌എം‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഫാസ്റ്റ് എൻസൈമാറ്റിക് മെറ്റബോളിസർ (അനലോക്സ്, ലുനെൻ‌ബർഗ്, എം‌എ) ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. 7- ദിവസ ആക്സസ് കാലയളവിൽ, പഞ്ചസാര, ച ow എന്നിവ കഴിക്കുന്നത് ദിവസവും അളക്കുന്നു, കൂടാതെ ശരീരഭാരം ആഴ്ചതോറും അളക്കുന്നു. ശരീരഭാരം ഓരോ സമയത്തും നഷ്ടപ്പെടുമ്പോൾ അളന്നു.
1.7. സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ
പ്ലസ്-മാർജ് ഡാറ്റ ഒറ്റ-വാലുള്ള, ജോഡിയാക്കാത്ത വിദ്യാർത്ഥികളുടെ ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു t-ടെസ്റ്റ്. കോഹൻസ് d, ഇത് ഇഫക്റ്റ് വലുപ്പം അളക്കുന്നു [18], ഒപ്പം prep, ഇത് പകർ‌ത്തലിന്റെ സാധ്യത നൽകുന്നു [19], ഉം കണക്കാക്കി. മുകളിൽ വിവരിച്ചതുപോലെ ഡിഎ, എസിഎച്ച് എന്നിവയ്‌ക്കായുള്ള ഡാറ്റ നോർ‌മലൈസ്ഡ് ബേസ്‌ലൈനിൽ നിന്നുള്ള ശതമാനം വ്യത്യാസമായി വിശകലനം ചെയ്തു, രണ്ട് രീതിയിലുള്ള ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികൾ ഉപയോഗിച്ച് ANOVA യും അതിനുശേഷം പോസ്റ്റ് ഹോക് ടുക്കി ടെസ്റ്റുകളും. രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ്, ശരീരഭാരം, കഴിക്കുന്ന ഡാറ്റ എന്നിവ അനോവയുടെ രണ്ട് വഴികളിലൂടെ വിശകലനം ചെയ്തു.
2. ഫലം
2.1. ശരീരഭാരം, പഞ്ചസാരയുടെ അളവ്, ച ow കഴിക്കൽ
എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ദിവസത്തെ ആക്സസ് കാലയളവിൽ ശേഖരിച്ച ഡാറ്റ, സുക്രോസിലേക്ക് അമിതമായി ആക്സസ് ഉള്ള എലികൾ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ദിവസത്തെ എക്‌സ്‌പോഷർ കാലയളവിൽ സുക്രോസ് കഴിക്കുന്നത് വർദ്ധിപ്പിച്ചതായി വെളിപ്പെടുത്തി (F(27, 279) = 4.9, p <0.001; ചിത്രം XXXA), സുക്രോസ് അല്ലെങ്കിൽ ഗ്ലൂക്കോസ് ഉപയോഗിച്ച് ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടുകളിൽ കാണിച്ചതിന് സമാനമായ ഒരു കണ്ടെത്തൽ [3,20]. ച int ഇൻ‌ടേക്ക് ഡാറ്റ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ ഒരു പ്രധാന വ്യത്യാസം കാണിച്ചു. ഇടയ്ക്കിടെ പഞ്ചസാര ആക്സസ് ഉള്ള എലികൾ പരസ്യ ലിബിറ്റമിനേക്കാളും ഇടവിട്ടുള്ള ച ow ഗ്രൂപ്പുകളേക്കാളും കുറഞ്ഞ ച ow കഴിച്ചു (F(2,26) = 60.8, p <0.001; ചിത്രം. 1B). എന്നിരുന്നാലും, മൊത്തം ദൈനംദിന കലോറി ഉപഭോഗത്തിൽ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ വ്യത്യാസമില്ല (ചിത്രം 1C).
28- ദിവസ ആക്സസ് കാലയളവിൽ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ ശരീരഭാരത്തിൽ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നുമില്ല; എന്നിരുന്നാലും, സമയത്തിന്റെ ഒരു ഫലമുണ്ടായി, മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകളും 28 ദിവസങ്ങളിൽ ഭാരം വർദ്ധിപ്പിച്ചു (F(4,104) = 298.9, p <0.001). 36 മണിക്കൂർ അഭാവത്തിൽ, എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കും ശരീരഭാരം കാലക്രമേണ കുറഞ്ഞു (F(2,52) = 1957.8, p <0.001), ഏത് സമയത്തും (12, 24 അല്ലെങ്കിൽ 36 മണിക്കൂർ) ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ വ്യത്യാസമില്ല.
2.2. പരീക്ഷണം 1: പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിച്ചതിനുശേഷം ഉത്കണ്ഠയുടെ പെരുമാറ്റ സൂചികകൾ
5 മിനുട്ടിനായി എലവേറ്റഡ് പ്ലസ്-മാർ‌ഗിൽ സ്ഥാപിക്കുമ്പോൾ, 36 h ഭക്ഷണക്കുറവിന് ശേഷം ഇടയ്ക്കിടെ പഞ്ചസാര + ച ow യിൽ പരിപാലിച്ചിരുന്ന എലികൾ കുറച്ച് സമയം ചെലവഴിച്ചു (18 ± 4 s, ആകെ സമയത്തിന്റെ 6%) സുക്രോസ് അനുഭവം ഇല്ലാത്ത തുല്യമായി നഷ്ടപ്പെട്ട പരസ്യ ലിബിറ്റം-ച group ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ പ്ലസ്-മാർഗ് (34 ± 8 s, മൊത്തം സമയത്തിന്റെ 11%; t(16) = 2.01, p <0.05, d = 1.03, ഇവിടെ 0.8 അല്ലെങ്കിൽ ഉയർന്നത് ഒരു വലിയ ഇഫക്റ്റ് വലുപ്പമായി കണക്കാക്കുന്നു [18], ഒപ്പം prep = 0.87; ചിത്രം. 2).
2.3. പരീക്ഷണം 2: പഞ്ചസാര-അമിത എലികൾ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡിഎ കുറയ്ക്കുകയും ഉപവാസ സമയത്ത് എൻ‌എസി ഷെല്ലിൽ എസി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു
ഗ്രൂപ്പും സമയവും തമ്മിൽ ഒരു സുപ്രധാന ഇടപെടൽ ഉണ്ടായിരുന്നു (12, 24, 36 h അഭാവം) (F(4,28) = 2.86, p <0.05; ചിത്രം XXXA). 24 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിനുശേഷം, ഡിഎ റിലീസ് മുമ്പ് ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച ow വിന് ഗ്രൂപ്പിനായി 68 ± 6%, പരസ്യ ലിബിതം ച group ഗ്രൂപ്പിന് 72 ± 5% എന്നിങ്ങനെ കുറഞ്ഞു, അതേസമയം ഇടവിട്ടുള്ള ച group ഗ്രൂപ്പിന് (95 ± 7%) മാറ്റമില്ല. . 36 h ഉപവാസത്തിനുശേഷം, ഇടവിട്ടുള്ള സുക്രോസ് + ച group ഗ്രൂപ്പിന് (61 ± 14%) കുറവായിരുന്നു, ഈ സമയത്ത് ഇത് പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow ഗ്രൂപ്പിനേക്കാൾ (113 ± 14%, p <0.05) ഇടവിട്ടുള്ള ച group ഗ്രൂപ്പും (104 ± 15, p <0.05).
ഇടവിട്ടുള്ള വേഷങ്ങൾക്ക് = ക്സനുമ്ക്സ ± ക്സനുമ്ക്സ പേയിംഗ് ആൻഡ് ക്സനുമ്ക്സ ± ക്സനുമ്ക്സ പ്മൊല് / സാമ്പിൾ; പരസ്യം ഡിഎ അല്ലെങ്കിൽ ACH ഒന്നുകിൽ സദാ ക്സനുമ്ക്സ H ഗ്രൂപ്പുകൾ വ്യത്യാസങ്ങൾ (ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + വേഷങ്ങൾക്ക് = ക്സനുമ്ക്സ ക്സനുമ്ക്സ പി.ജി ആൻഡ് ക്സനുമ്ക്സ ± ക്സനുമ്ക്സ പ്മൊല് / സാമ്പിൾ ± ഉണ്ടായിരുന്നു libitum chow = 12 ± 1.6 pg, 0.3 ± 0.4 pmol / sample; യഥാക്രമം DA, ACh).
24 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിനുശേഷം, എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കും DOPAC ലെവലുകൾ കുറച്ചു (F(2,34) = 33.8, p <0.001). സമാനമായത്, നോൺ-സുപ്രധാന പ്രവണത 36 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിൽ കണ്ടെങ്കിലും. എച്ച്വിഎ റിലീസിലും സമയത്തിന്റെ സ്വാധീനം ഉണ്ടായിരുന്നു (F(2,34) = 6.97, p <0.001). ഡോപാക്കിനെയും ഡി‌എയെയും പോലെ, എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കും എച്ച്വിഎ 24 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിൽ കുറഞ്ഞു (പട്ടിക 1). എന്നിരുന്നാലും, ഉപവാസത്തിന്റെ 36 h ആയപ്പോഴേക്കും, ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച group ഗ്രൂപ്പിനായി (119 ± 20%) എച്ച്വിഎ കൂടുതലായിരുന്നു, പക്ഷേ പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow, ഇടവിട്ടുള്ള ച ow ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് ഇത് കുറഞ്ഞു.
ഡിഎയുടെ വിപരീത ദിശയിൽ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ എസിഎച്ച് മാറ്റി. ഗ്രൂപ്പും സമയവും തമ്മിൽ ഒരു സുപ്രധാന ഇടപെടൽ ഉണ്ടായിരുന്നു (F(4, 30) = 4.81, p <0.005; ചിത്രം. 3B). ഇടവിട്ടുള്ള സുക്രോസ് + ച group ഗ്രൂപ്പിനായി (24 ± 115%) 10 h ഉപവാസത്തിന് ശേഷം ACH വർദ്ധിച്ചു; p <0.05), പക്ഷേ പരസ്യ ലിബിറ്റം ച group ഗ്രൂപ്പിനോ (77 ± 13%) അല്ലെങ്കിൽ ഇടവിട്ടുള്ള ച group ഗ്രൂപ്പിനോ (90 ± 15%) അല്ല. 36 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിനുശേഷം ഈ വ്യത്യാസം വർദ്ധിപ്പിച്ചു, പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow (164 ± 14%) ലെ ലെവലുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള സുക്രോസ് + ച group ഗ്രൂപ്പിനായി (97 ± 17%) എസിഎച്ച് ഉയരുന്നു; p <0.05) ഇടവിട്ടുള്ള ച ow (104 ± 15%; p <0.05) നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകൾ.
ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള സുക്രോസ് + ച ow, ഇടവിട്ടുള്ള ച ow എലികൾ എന്നിവയ്ക്ക് സാധാരണയായി ഭക്ഷണം ലഭിക്കുമ്പോഴാണ് ആദ്യത്തെ 12 മണിക്കൂർ ഉപവാസത്തിനുശേഷം അടിസ്ഥാന നടപടികൾ സ്വീകരിച്ചത്. അങ്ങനെ, 36-h അളവിന് ശേഷം 24-h ഉപവാസ സമയ-പോയിന്റ് കൃത്യമായി 12 h ആയിരുന്നു. സിർകാഡിയൻ സൈക്കിളിലെ ഈ ഘട്ടത്തിൽ ച ow- ഫെഡ് കൺ‌ട്രോൾ ഗ്രൂപ്പുകൾ ഡിഎ അല്ലെങ്കിൽ എ‌സി‌എച്ചിൽ മാറ്റങ്ങൾ കാണിച്ചില്ല, അതേസമയം പഞ്ചസാര-ബിൻ‌ജിംഗ് ഗ്രൂപ്പിന് ഡി‌എയും ഉയർന്ന എ‌സി‌എച്ചും കുറവായിരുന്നു.
പ്രോബ് പ്ലെയ്‌സ്‌മെന്റുകൾ പ്രാഥമികമായി എൻ‌എസിയുടെ ഷെല്ലിലാണെന്ന് ഹിസ്റ്റോളജി പരിശോധിച്ചു (ചിത്രം. 4).
2.4. പരീക്ഷണം 3: പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിച്ചതിന് ശേഷമുള്ള പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങൾ ഹൈപ്പോഗ്ലൈസീമിയയുമായി നേരിട്ട് ബന്ധപ്പെടുന്നില്ല
ഗ്രൂപ്പുകളിൽ രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നുമില്ല (12 h = 5.1-7.8 mmol, 24 h = 4.6 - 6.9 mmol, 36 h = 4.2 - 6.4 mmol എന്നിവയ്ക്കുള്ള ശ്രേണി). എന്നിരുന്നാലും, സമയത്തിന്റെ ഒരു ഫലമുണ്ടായി, 36 h ന്റെ അഭാവത്തിൽ എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകൾക്കും രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ് കുറയുന്നു (F(2,52) = 52.8, p <0.001).
3. ചർച്ച
3.1. പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിക്കുമ്പോൾ ഉണ്ടാകുന്ന ഉത്കണ്ഠയുടെ പെരുമാറ്റ സൂചനകൾ
ഉത്കണ്ഠയുടെ ഏറ്റവും സാധാരണമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന മൃഗ പരിശോധനകളിൽ ഒന്നാണ് എലവേറ്റഡ് പ്ലസ്-മാർജ് [14,21], കൂടാതെ പൊതുവായ ഉത്കണ്ഠയ്‌ക്കും ഇത് വ്യാപകമായി സാധൂകരിക്കപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു [22] മയക്കുമരുന്ന് പിൻവലിക്കൽ മൂലമുണ്ടാകുന്ന ഉത്കണ്ഠ [23]. എക്സ്നൂംക്സ് പരീക്ഷണത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, പഞ്ചസാരയിലേക്കുള്ള ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള ഭക്ഷണക്രമം പിന്തുടർന്ന് നോമ്പെടുക്കുന്നത് ഉയർന്ന പ്ലസ്-മാർഗ് കണക്കാക്കിയാൽ ഉത്കണ്ഠയ്ക്ക് കാരണമാകുമെന്നാണ്. മുമ്പ് പഞ്ചസാര അമിതമായി ഉപയോഗിച്ചിരുന്ന എലികൾ 1% സമയം ശൈലിയുടെ തുറന്ന കൈയ്യിൽ ചെലവഴിച്ചു, പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow ഗ്രൂപ്പിനുള്ള 6% മായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ. ഈ ഡാറ്റ മറ്റുള്ളവർ നേടിയ മൂല്യങ്ങളുടെ പരിധിയിലാണ്, കൂടാതെ ഫലങ്ങൾ ഈ നടപടിക്രമം ഉപയോഗിച്ച് സാധാരണയായി കണ്ടെത്തിയതിന് സമാനമാണ് [24,25]. മോർഫിനിൽ നിന്ന് സ്വമേധയാ പിന്മാറിയതിനെത്തുടർന്ന് കണ്ടെത്തിയ ഓപ്പൺ-ആം പര്യവേഷണത്തിന് സമാനമാണ് ഈ കണ്ടെത്തൽ [26]. മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളിൽ, പഞ്ചസാരയുടെയും ച ow യുടെയും പരസ്യ ഭക്ഷണക്രമത്തിൽ പരിപാലിക്കപ്പെടുന്ന മൃഗങ്ങൾ നലോക്സോൺ നൽകുമ്പോൾ ഉത്കണ്ഠയുടെ ലക്ഷണങ്ങളൊന്നും കാണിച്ചില്ല, അതേസമയം ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള പഞ്ചസാരയും ച ow ഡയറ്റും പരിപാലിക്കുന്ന മൃഗങ്ങൾ അതേ അളവിൽ നലോക്സോൺ നൽകുമ്പോൾ ഉത്കണ്ഠ കാണിക്കുന്നു [3]. പഞ്ചസാരയിലേക്കുള്ള പരസ്യ ആക്സസ് ആം‌ഫെറ്റാമൈനിലേക്കുള്ള ക്രോസ് സെൻസിറ്റൈസേഷൻ ഉൾപ്പെടെയുള്ള ആശ്രിതത്വത്തിന്റെ മറ്റ് പെരുമാറ്റ ചിഹ്നങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിലും പരാജയപ്പെട്ടു [27] മദ്യം കഴിക്കാനുള്ള സാധ്യതയും [28]. പഞ്ചസാരയിലേക്കുള്ള ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള പ്രവേശനം ഈ സ്വഭാവങ്ങളെ ഉളവാക്കുന്നു. പരസ്യ ഇഫക്റ്റുകൾ ലഭ്യമാക്കുന്നതിൽ ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള ആക്‌സസ്സിന്റെ പ്രാധാന്യം സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, പരസ്യ ലിബിറ്റം സാചാരിൻ ഒഴിവാക്കുന്നത് വിഷാദരോഗം പോലുള്ള പെരുമാറ്റങ്ങൾക്ക് കാരണമാകാത്ത കണ്ടെത്തലുകളിലൂടെയാണ് [29], ഇത് പിൻവലിക്കൽ സമയത്ത് നിരീക്ഷിക്കാൻ കഴിയുന്ന മറ്റൊരു സ്വഭാവമാണ്. ഈ മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, ഇന്നത്തെ പരീക്ഷണത്തിൽ പരസ്യ ലിബിറ്റം പഞ്ചസാര പരീക്ഷിച്ചിട്ടില്ല.
ഇത് സുക്രോസ് ഭക്ഷണത്തിന്റെ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷനല്ല, മറിച്ച് ഭക്ഷണത്തിൽ നിന്ന് വിട്ടുനിൽക്കുന്നതാണ് സുക്രോസ്-ബിംഗിംഗ് എലികളിലെ ഉത്കണ്ഠയുടെ ലക്ഷണങ്ങളെ വ്യക്തമാക്കുന്നത്. ദിവസേനയുള്ള 12-h ആക്സസ് ഉള്ള പഞ്ചസാര-അമിത എലികൾ, അതിനുശേഷം 12-h അഭാവം, സാധാരണ 12-h, ദിവസേനയുള്ള എലവേറ്റഡ് പ്ലസ്-മാർജിൽ ഉത്കണ്ഠ, അൾട്രാസോണിക് ഡിസ്ട്രസ് കോളുകൾ അല്ലെങ്കിൽ ഉത്കണ്ഠ എന്നിവയുടെ സോമാറ്റിക് അടയാളങ്ങൾ കാണിക്കുന്നില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. ഭക്ഷ്യ ദാരിദ്ര്യ കാലയളവ് [3]. നിലവിലെ ഫലങ്ങൾ 36-h അഭാവം ഉത്കണ്ഠ പ്രതിഭാസത്തിന് കാരണമാകുമെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു.
പരീക്ഷണത്തിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് നോമ്പുകാലത്ത് ഉത്കണ്ഠ കണ്ടെത്തുന്നത് ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങൾക്ക് സമാനമാണ്, ഇത് ഒപിയോയിഡ് എതിരാളി നലോക്സോൺ [3]. പഞ്ചസാര-അമിത എലികളിലെ നലോക്സോണിനോടുള്ള സംവേദനക്ഷമത ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഫലമായി എൻ‌ഡോജെനസ് ഒപിയോയിഡ് റിസപ്റ്ററുകളിൽ മാറ്റം വരുത്താൻ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തെ അമിതമായി ബാധിക്കുന്നത് എൻ‌കെഫാലിൻ എം‌ആർ‌എൻ‌എ, എൻഎസിയിലെ μ- ഒപിയോയിഡ് റിസപ്റ്റർ ബൈൻഡിംഗ് എന്നിവ മാറ്റുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്ന റിപ്പോർട്ടുകളിൽ ഇത് സ്ഥിരീകരിച്ചു [30-32]. ഇപ്പോഴത്തെ പഠനത്തിൽ കാണപ്പെടുന്ന അഭാവത്തെത്തുടർന്ന് പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങൾ പഞ്ചസാര കലർത്തിയ മൃഗങ്ങളിൽ എൻ‌ഡോജെനസ് ഒപിയോയിഡ് ഉത്തേജനത്തിന്റെ അഭാവം മൂലമാകാം.
ഈ ഫലങ്ങൾ മുമ്പ് പഞ്ചസാരയെ അമിതമായി ബാധിച്ച എലികളിൽ ഉപവാസത്തെ പിന്തുടരുന്ന അല്ലെങ്കിൽ സ്വമേധയാ പുറത്തുവരുന്ന ഒപിയേറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കൽ അടയാളങ്ങളുടെ മറ്റ് റിപ്പോർ‌ട്ടുകളുമായി യോജിക്കുന്നു. ദുരിതത്തിന്റെ സോമാറ്റിക് അടയാളങ്ങൾക്ക് പുറമേ [3], ആക്രമണാത്മക പെരുമാറ്റങ്ങളും ശരീര താപനിലയിലെ കുറവും ശ്രദ്ധയിൽപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട് [10]. സ്വഭാവത്തിലും ശരീരശാസ്ത്രത്തിലുമുള്ള ഈ മാറ്റങ്ങൾ ഒപിയേറ്റുകളിൽ നിന്ന് പിൻവാങ്ങുമ്പോൾ നിരീക്ഷിച്ചതിന് സമാനമാണ് [33,34], കൂടാതെ പഞ്ചസാര ലായനിയിലേക്ക് ഇടയ്ക്കിടെ പ്രവേശിക്കുന്ന ഒരു ഭക്ഷണക്രമം ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ ലക്ഷണങ്ങളിൽ കലാശിക്കുമെന്ന സിദ്ധാന്തത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുക.
3.2. പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിക്കുമ്പോൾ അക്യുമ്പൻസിലെ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡിഎ, എസിഎച്ച്
രണ്ട് നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ 36 h ഉപവാസത്തിൽ, ഇടവിട്ടുള്ള പഞ്ചസാര + ച group ഗ്രൂപ്പിനായി ഡിഎ അളവ് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു. ഭക്ഷണവും വെള്ളവും ഇല്ലാതാകുന്നത് എലികളിൽ ഡിഎ ടോൺ നഷ്ടപ്പെടാൻ കാരണമാകുമെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. അതേ സമയം, എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ എസിഎച്ച് ഉയർത്തുന്നു, ഇത് ഒപിയോയിഡ് പിൻവലിക്കൽ പോലുള്ള അവസ്ഥയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകൾ ഈ ഫലം കാണിച്ചില്ല. 36-h ടൈം പോയിന്റിലെ പ്രകാശ / ഇരുണ്ട ചക്രത്തിന്റെ അതേ ഘട്ടമായ ഈ 12-h ടൈം പോയിന്റിൽ, പരസ്യ ലിബിറ്റം ച ow ഗ്രൂപ്പിനായി ഡിഎ അടിസ്ഥാന നിലകളിലേക്ക് മടങ്ങി (ചിത്രം XXXA). പോൾസണും റോബിൻസണും നിർദ്ദേശിച്ചതുപോലെ, പരസ്യ ലിബിതം ച group ഗ്രൂപ്പിലെ ആക്യുമ്പൻസ് ഡിഎ റിലീസ് ഒരു ദൈനംദിന താളം പിന്തുടർന്നുവെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു [35]. മറ്റുള്ളവരും സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ സമാനമായ മാറ്റങ്ങൾ നിർദ്ദേശിച്ചിട്ടുണ്ട് [36,37]. ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള ച group ഗ്രൂപ്പിൽ ഈ ദൈനംദിന പ്രഭാവം നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിരുന്നില്ല, കാരണം ചാക്രിക തീറ്റ ഡിഎ റിലീസിന്റെ സാധാരണ സിർകാഡിയൻ താളത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തിയേക്കാം.
ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള പഞ്ചസാര + ച group ഗ്രൂപ്പിലെ എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡിഎയുടെ കുറവ് മോർഫിനിൽ നിന്ന് സ്വമേധയാ പിൻവാങ്ങുമ്പോൾ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തതിന് സമാനമാണ് [7], ഒപ്പം വിട്ടുനിൽക്കലിനു ശേഷം പഞ്ചസാരയുടെ അളവ് പുന st സ്ഥാപിക്കുന്നതിൽ ഒരു പങ്ക് വഹിക്കാം [38]. എപ്പോൾ വേണമെങ്കിലും ഡിഎ റിലീസിൽ താരതമ്യേന ചെറിയ മാറ്റം കാണിക്കുന്ന ഇടവിട്ടുള്ള ച group ഗ്രൂപ്പിനൊപ്പം ലഭിച്ച ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, ച ow മാത്രമല്ല, പഞ്ചസാരയും ച ow യും അമിതമായി സംയോജിപ്പിക്കുന്നത് നിരീക്ഷിച്ച ഫലങ്ങൾ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്നതിൽ പ്രധാനമാണെന്ന്.
DOPAC ഉം HVA ഉം സാധാരണയായി DA ന് സമാനമായ പാറ്റേണുകൾ പിന്തുടരുന്നുണ്ടെങ്കിലും, ഇത് എല്ലായ്പ്പോഴും അങ്ങനെയല്ല. നിലവിലെ പരീക്ഷണത്തിൽ, ഡോപാക്കും എച്ച്വി‌എയും ഡി‌എയുമായി നിരീക്ഷിച്ചതുപോലുള്ള ഒരു ദൈനംദിന വ്യതിയാനം കാണിച്ചില്ല, പകരം കാലക്രമേണ അത് അടിച്ചമർത്തപ്പെട്ടു. മറ്റുള്ളവർ NAc ലെ ഈ മെറ്റബോളിറ്റുകളിൽ സിർകാഡിയൻ ഏറ്റക്കുറച്ചിലുകൾ റിപ്പോർ‌ട്ടുചെയ്‌തിട്ടുണ്ടെങ്കിലും [35], 36 h നായുള്ള ഉപവാസ സമയത്ത് ഈ അളവ് അളന്ന ഏതെങ്കിലും പേപ്പറുകളെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾക്ക് അറിയില്ല. അതിനാൽ, ഇപ്പോഴത്തെ പരീക്ഷണത്തിൽ, ച control നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പിലെ ഡിഎ മെറ്റബോളിസത്തെ ഉപവാസം ബാധിച്ചിരിക്കാം.
36 h ഉപവാസത്തിനുശേഷം ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ എസിഎച്ച് അളവ് ഒരു പ്രധാന വ്യത്യാസം കാണിച്ചു. എൻഎസിയിലെ എസിഎച്ച് ഇൻ‌ജസ്റ്റീവ് സ്വഭാവത്തിൽ ഉൾ‌പ്പെട്ടിരിക്കുന്നു [39] പ്രത്യേകിച്ചും തൃപ്തി [40-44], കൂടാതെ, ഡിഎ കുറയുമ്പോൾ, എസിഎച്ച് വെറുപ്പ് വളർത്താം [40,45-48]. ഇപ്പോഴത്തെ പരീക്ഷണത്തിൽ നോമ്പുകാലത്ത് ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള പഞ്ചസാര + ച ow എലികളിൽ കാണപ്പെടുന്ന എസിഎച്ചിന്റെ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവ് പ്രതിഫലം നഷ്ടപ്പെടുന്നതിന്റെ നെഗറ്റീവ് വശങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടാം. മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത കണ്ടെത്തലുകൾ സുക്രോസ് ഡയറ്റിൽ നിന്നുള്ള അഭാവത്തിന്റെ ഫലമാണെന്ന സിദ്ധാന്തത്തിന് പിന്തുണ നൽകുന്നു. എലികൾ സുക്രോസ് റിലീസ് ഡി‌എയിൽ മുഴങ്ങുന്നു, കൂടാതെ എൻഎസിയിൽ എസിഎച്ച് റിലീസിന്റെ അറ്റൻ‌വ്യൂഷൻ കാണിക്കുന്നു [20,49], ഇത് നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന സമയത്ത് കാണുന്ന നിലവിലെ ഫലങ്ങൾക്ക് വിപരീതമാണ്. ഇടയ്ക്കിടെയുള്ള പഞ്ചസാര + ച group ഗ്രൂപ്പിലെ അക്യുമ്പൻസ് ഡി‌എയും എ‌സിയും തമ്മിലുള്ള അസന്തുലിതാവസ്ഥ, എന്നാൽ നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകളിലല്ല, 1 പരീക്ഷണത്തിൽ കാണപ്പെടുന്ന ഉത്കണ്ഠയ്ക്ക് കാരണമായേക്കാം.
3.3. പഞ്ചസാര അമിതമായി എലികളിൽ ഉപവസിക്കുമ്പോൾ രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ്
ഹൈപ്പോഗ്ലൈസീമിയ ഒരു വിദ്വേഷകരമായ അവസ്ഥയിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം, അതിൽ നിന്ന് ഒരു മൃഗം ഭക്ഷണം കഴിച്ച് രക്ഷപ്പെടാൻ ശ്രമിച്ചേക്കാം. ഈ പ്രതികൂല അവസ്ഥയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പെരുമാറ്റങ്ങൾ നലോക്സോൺ ഭരണത്തിനിടയിലോ സുക്രോസ് അമിത എലികളിലെ ഉപവാസത്തിലോ നിരീക്ഷിച്ചതിന് സമാനമാണ് [50]. മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തെ സ്വാധീനിക്കാൻ നിരവധി ഘടകങ്ങൾക്ക് കഴിയും. എന്നിരുന്നാലും, ഹൈപ്പോഗ്ലൈസീമിയ സമയത്ത് നിരീക്ഷിച്ച സ്വഭാവങ്ങളും ഉത്കണ്ഠയ്ക്കിടെ നിരീക്ഷിച്ച സ്വഭാവങ്ങളും തമ്മിലുള്ള സമാനത കാരണം, ഈ പഠനം രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ് അളക്കുന്നത് നിരീക്ഷിച്ച ഫലങ്ങൾ കേവലം അസാധാരണമായ ഗ്ലൈസെമിക് നില മൂലമല്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നു. രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവ് എല്ലാ ഗ്രൂപ്പുകളിലും സമാനമായിരുന്നു, അതിനാൽ പെരുമാറ്റ വ്യത്യാസങ്ങളോ ഡിഎ, എസി റിലീസുകളിലെ മാറ്റങ്ങളോ കണക്കിലെടുക്കുന്നില്ല. രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവിലുള്ള മാറ്റങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കപ്പെടാത്തതും തീറ്റക്രമീകരണത്തിന്റെ ഫലമായി ശരീരഭാരത്തിൽ വ്യത്യാസമില്ലാത്തതുമായതിനാൽ ഗ്രൂപ്പുകളിലുടനീളം ഇൻസുലിൻ അളവ് സ്ഥിരമായി തുടരുന്നുവെന്ന് അനുമാനിക്കാം. അങ്ങനെ, ഇപ്പോഴത്തെ കണ്ടെത്തലുകളും ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടിലുള്ളവയും [30], രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസിന്റെ അളവിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങളുടെ ഫലമല്ല പെരുമാറ്റ, ന്യൂറോകെമിക്കൽ മാറ്റങ്ങൾ എന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുക. പകരം അവ എൻ‌ഡോജെനസ് ഒപിയോയിഡ്, ഡിഎ സിസ്റ്റങ്ങളിലെ മാറ്റങ്ങൾ ചേർന്നതാകാം.
4. ഉപസംഹാരം
ഓപിയോയിഡിനെ ആശ്രയിച്ചുള്ള മൃഗങ്ങൾക്ക് മോർഫിൻ പോലുള്ള ദുരുപയോഗം ചെയ്യപ്പെടുന്ന ഒരു വസ്തുവിനെ നഷ്ടപ്പെടുമ്പോൾ നിരീക്ഷിക്കുന്നതിനു സമാനമായ പെരുമാറ്റ, ന്യൂറോകെമിക്കൽ അഡാപ്റ്റേഷനുകൾക്ക് പഞ്ചസാര അമിതമാകുന്നതിനെ തുടർന്നുള്ള ദീർഘകാല നഷ്ടം കാരണമാകും. ഓപിയറ്റ് പോലുള്ള പിൻവലിക്കലിന്റെ ഈ സൂചകങ്ങൾ ആശ്രയത്വത്തിന്റെ അടയാളങ്ങളാണ്. ഈ കണ്ടെത്തൽ, മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളുമായി ചേർന്ന്, പഞ്ചസാര അമിതമായി ആശ്രയിക്കുന്നത് ഡോപാമിനേർജിക്, ഒപിയോയിഡ് മാറ്റങ്ങൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള ആശ്രിതത്വത്തിന്റെ മറ്റ് അടയാളങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുമെന്ന് കാണിക്കുന്നു [30,32], നലോക്സോൺ-ത്വരിതപ്പെടുത്തിയതും സ്വമേധയാ പിൻവലിക്കുന്നതും [3], ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളുമായി ക്രോസ് സെൻസിറ്റൈസേഷൻ [27,51], വിട്ടുനിന്നതിനുശേഷം പഞ്ചസാരയുടെ അളവ് വർദ്ധിക്കുന്നത് [38], മുമ്പ് പഞ്ചസാരയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സൂചനകൾക്കായി പ്രതികരിക്കുന്ന സമയത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള വർദ്ധനവ് [52], മദ്യം കഴിക്കാനുള്ള സാദ്ധ്യത [28], ആശ്രിതത്വം നിരവധി അളവുകളിൽ പ്രകടമാണെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു [53,54]. അമിതമായ ഭക്ഷണത്തിന് കാരണമായേക്കാവുന്ന പ്രതികൂല ഘടകങ്ങൾ മനസിലാക്കാൻ നിലവിലെ കണ്ടെത്തലുകൾ പ്രധാനമായിരിക്കാം.
കടപ്പാടുകൾ
ഈ ഗവേഷണത്തെ യു‌എസ്‌പി‌എച്ച്എസ് ഗ്രാന്റ് AA-12882 (BGH ലേക്ക്), DA-16458, DK-79793 (എൻ‌എം‌എയ്ക്കുള്ള ഫെലോഷിപ്പുകൾ) എന്നിവ പിന്തുണച്ചിട്ടുണ്ട്.
അവലംബം
;