ഭക്ഷണത്തിനുശേഷം സംതൃപ്തി സൂചിപ്പിക്കുന്നതിന് ഇൻസുലിൻ ഹൈപ്പോതലാമസിലെ ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്ററുകൾ (ഇൻസ്ആർ) സജീവമാക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന അമിതവണ്ണം ഇൻസുലിൻ അളവ് കാലക്രമേണ ഉയർത്തുന്നു, ഇത് പ്രചോദനവും പ്രതിഫലവും നിയന്ത്രിക്കുന്ന മസ്തിഷ്ക കേന്ദ്രങ്ങളിലും ഇൻസുലിൻ പ്രവർത്തിക്കുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസിലും (എൻ‌എസി) കോഡേറ്റ്-പുട്ടമെനിലും ആക്ഷൻ പോബിളിറ്റി-ഡിപൻഡന്റ് ഡോപാമൈൻ (ഡിഎ) റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഇൻസുലിൻ സഹായിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങൾ ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്യുന്നു, അതിൽ ഇൻ‌സ്ആർ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന സ്ട്രൈറ്റൽ കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകൾ ഉൾപ്പെടുന്നു. കൂടാതെ, എലികളിലെ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ക്രോണിക് ഡയറ്റ് കൃത്രിമങ്ങൾ, ഭക്ഷ്യ നിയന്ത്രണം (എഫ്ആർ), ഒരു ഒബെസോജെനിക് (ഒബി) ഡയറ്റ് എന്നിവ ഇൻസുലിനിലേക്ക് സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡിഎ റിലീസിന്റെ സംവേദനക്ഷമതയെ വിപരീതമായി മാറ്റുന്നു, എഫ്ആറിൽ മെച്ചപ്പെട്ട പ്രതികരണശേഷി, എന്നാൽ ഒബിയിലെ പ്രതികരണശേഷി നഷ്ടപ്പെടുന്നു. ജോഡിയാക്കിയ ഗ്ലൂക്കോസ് ലായനിയുടെ സ്വാദിന് മുൻഗണന നേടുന്നതിന് എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ ഇൻസുലിൻ അളവ് അനിവാര്യമാണെന്ന് ബിഹേവിയറൽ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു. ഇവയെല്ലാം ചേർത്ത്, ഭക്ഷണ തിരഞ്ഞെടുപ്പുകളെ സ്വാധീനിക്കുന്നതിനായി സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗ് ഡിഎ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ഭക്ഷണ സമയത്തും അതിനുശേഷവും പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിക്കുന്നത് ഹൈപ്പോഥലാമസിലെ ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്ററുകളെ (ഇൻ‌സ്ആർ) സജീവമാക്കുന്നു, ഇത് വിശപ്പ് സർക്യൂട്ടുകൾക്ക് നെഗറ്റീവ് ഫീഡ്ബാക്ക് നൽകുന്നു, ഇത് കൂടുതൽ ഭക്ഷണം കുറയ്ക്കുന്നു^{1, 2, 3}. പ്രധാനമായും പാൻക്രിയാറ്റിക് β സെല്ലുകളിൽ നിന്നാണ് ബ്രെയിൻ ഇൻസുലിൻ ഉത്ഭവിക്കുന്നത്, രക്തത്തിൽ നിന്ന് തലച്ചോറിലേക്ക് പ്ലാസ്മയിൽ നിന്ന് തലച്ചോറിലേക്ക് സജീവമായ ഗതാഗതം^{4, 5, 6, 7, 8}, ന്യൂറോണൽ ഇൻസുലിൻ സിന്തസിസിനും റിലീസിനും കൂടുതൽ തെളിവുകൾ ഉണ്ടെങ്കിലും^{1, 9}. എക്സ്ട്രാ-ഹൈപ്പോഥലാമിക് ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ പ്രവർത്തനം പരിഹരിക്കപ്പെടാതെ കിടക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ ആവിഷ്കാരം ഹൈപ്പോതലാമസിൽ മാത്രം ഒതുങ്ങുന്നില്ല.^{1, 2, 3}. വർദ്ധിച്ചുവരുന്ന അമിതവണ്ണവും ടൈപ്പ് II പ്രമേഹവും കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, ഇൻസുലിൻ രക്തചംക്രമണം സ്ഥിരമായി ഉയർത്തുകയും മസ്തിഷ്ക ഇൻസുലിൻ ഗതാഗതവും റിസപ്റ്റർ സംവേദനക്ഷമതയും കുറയുകയും ചെയ്യുന്നു^{3, 8, 10, 11}, പ്രചോദനവും പ്രതിഫലവും നിയന്ത്രിക്കുന്ന മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിലെ ഇൻസുലിൻറെ പ്രവർത്തനം മനസിലാക്കേണ്ടത് വളരെ പ്രധാനമാണ്. പ്രത്യേക താൽപ്പര്യമുള്ള മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിൽ ന്യൂക്ലിയസ് അക്കുമ്പെൻസ് (എൻ‌എസി) ഉൾപ്പെടുന്നു, ഇത് ഭക്ഷണത്തിന്റെയും മയക്കുമരുന്നിന്റെയും പ്രതിഫലദായകമായ ഫലങ്ങൾക്ക് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്നു^{12, 13}, ശീലം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള പെരുമാറ്റങ്ങളിലും ആസക്തിയിലും ഒരു പങ്കു വഹിക്കുന്ന കോഡേറ്റ്-പുട്ടമെൻ (സിപിയു)¹³. ഈ പ്രദേശങ്ങളിലുടനീളം InsR- കൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു, ഏറ്റവും ഉയർന്ന സാന്ദ്രത NAc- ൽ സംഭവിക്കുന്നു^{3, 14}; വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയ (വിടിഎ), സബ്സ്റ്റാന്റിയ നിഗ്ര പാർസ് കോംപാക്റ്റ (എസ്എൻ‌സി) എന്നിവയുൾപ്പെടെ മിഡ്‌ബ്രെയിനിലെ ഡോപാമൈൻ (ഡി‌എ) ന്യൂറോണുകളും ഇൻ‌സ്ആറുകൾ പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു.¹⁵. ബ്രെയിൻ ഇൻസുലിൻ അളവ് പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രതയ്ക്കും ശരീരത്തിലെ അഡിപോസിറ്റിക്കും ആനുപാതികമാണ്^{6, 7, 8}, ഭക്ഷണ പ്രതിഫലത്തെ സ്വാധീനിക്കാൻ ഇൻസുലിൻ ഈ മസ്തിഷ്ക മേഖലകളിലെ ഇൻ‌സ്ആറുകളിൽ പ്രവർത്തിക്കുമെന്ന അനുമാനത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു^{3, 16, 17}.

സ്‌ട്രാറ്റിയൽ സിനാപ്‌ടോസോമുകൾ, വൈവിധ്യമാർന്ന കോശങ്ങൾ, മസ്തിഷ്ക കഷ്ണങ്ങൾ എന്നിവയിലെ മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ ഇൻ വിവോ ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ ഇൻ‌സുലിൻ‌ സജീവമാക്കുന്നത്‌ ഡി‌എ ട്രാൻ‌സ്‌പോർട്ടർ‌ (ഡി‌എ‌ടി) ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കൽ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമാകുമെന്ന് തെളിയിച്ചു^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. ഈ പ്രക്രിയയിൽ PI3 കൈനാസ് സിഗ്നലിംഗ് പാത്ത്വേ ഉൾപ്പെടുന്നു^{19, 20}, കൂടാതെ പ്ലാസ്മ മെംബറേനിൽ DAT ഉൾപ്പെടുത്തലിന് കാരണമാകുന്നു¹⁹. പ്രമേഹത്തിന്റെ മൃഗരീതികളിലും ഭക്ഷ്യ നിയന്ത്രണത്തിനുശേഷവും (FR) ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലും DAT ഉപരിതല പ്രകടനവും കുറയുന്നതോടെ ഇൻസുലിൻ അളവ് രക്തചംക്രമണം നടത്തുന്നു.^{20, 21}. DAT പ്രവർത്തനത്തിലെ ഇൻസുലിൻ ആശ്രിത വർദ്ധനവ് എവോക്ക്ഡ് എക്സ്ട്രാ സെല്ലുലാർ ഡിഎ ഏകാഗ്രത ([DA]_o) വി‌ടി‌എയിൽ²³, ഡി‌എ റിലീസും ഏറ്റെടുക്കലും തമ്മിലുള്ള ബാലൻസിലെ മാറ്റം പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു. തൃപ്തിയിൽ ഇൻസുലിൻ സ്ഥാപിച്ച പങ്ക് അനുസരിച്ച്, വിടിഎയിലെ ഇൻസുലിൻ അക്യൂട്ട് മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ ചെയ്യുന്നത് ഭക്ഷണ പ്രതിഫലം കുറയ്ക്കും^{23, 24}അതേസമയം, വി‌ടി‌എ, എസ്‌എൻ‌സി ഡി‌എ ന്യൂറോണുകളിൽ ഇൻ‌സ്ആർ ഇല്ലാത്ത എലികൾ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് വർദ്ധിക്കുകയും അമിതവണ്ണമാവുകയും ചെയ്യുന്നു²⁵. വി‌ടി‌എ ഡി‌എ ന്യൂറോണുകളിലേക്ക് ഇൻ‌സുലിൻ‌ എക്‌സിറ്റേറ്ററി ഇൻ‌പുട്ടിന്റെ ദീർഘകാല വിഷാദം ഉണ്ടാക്കുമെങ്കിലും²⁴, വീണ്ടും സംതൃപ്‌തിയിൽ ഒരു പങ്കുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഇൻസുലിൻ എക്‌സ്‌പോഷറിന് ഡിഎ ന്യൂറോൺ ഫയറിംഗ് നിരക്ക് വർദ്ധിപ്പിക്കാനും കഴിയും, ഒരുപക്ഷേ ഡിഎ റിലീസും ഓട്ടോറിസെപ്റ്റർ-മെഡിയേറ്റഡ് ഇൻഹിബേഷനും കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ²⁵. സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡി‌എ റിലീസിൽ ഇൻസുലിൻറെ മൊത്തം സ്വാധീനം പ്രവചിക്കാൻ പ്രയാസമാണ്. വാസ്തവത്തിൽ, ഇൻട്രുലിൻ ഡിഎ റിലീസിൽ ഇൻസുലിൻ ചെലുത്തുന്ന സ്വാധീനത്തെക്കുറിച്ചുള്ള പഠനങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ഫലങ്ങൾ ex vivo കഷണങ്ങൾ¹⁹ എൻ‌എ‌സിയിലെ ഇൻ‌സുലിൻ‌ ലോക്കൽ‌ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷന്റെ ഫലവും ഭക്ഷ്യ പ്രതിഫലത്തിൽ‌²⁶ പരസ്പരവിരുദ്ധമെന്ന് തോന്നുന്നു. ഇത് പരിഹരിക്കുന്നതിന്, എൻ‌എസി, സിപിയു എന്നിവയുടെ സൂക്ഷ്മ പരിസ്ഥിതിയിൽ ആക്‌സോണൽ ഡിഎ റിലീസും ഏറ്റെടുക്കലും ഞങ്ങൾ വിലയിരുത്തി ex vivo ഫാസ്റ്റ്-സ്കാൻ സൈക്ലിക് വോൾട്ടാമെട്രി (എഫ്‌സിവി) ഉപയോഗിച്ചുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ സ്ലൈസുകൾ, റിവാർഡ് സ്വഭാവത്തിൽ എൻ‌എസിയിലെ ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗിന്റെ ഫലങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു. ഇൻ വിവോ.

ഞങ്ങളുടെ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് എൻ‌എസിയിലും സിപിയുവിലുമുള്ള ഇൻസുലിൻറെ പ്രാഥമിക ഫലം ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കൽ വർദ്ധിപ്പിക്കുമ്പോഴും ഡി‌എ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുക എന്നതാണ്. ഡി‌എ റിലീസിന്റെ ഈ ചലനാത്മക നിയന്ത്രണത്തിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളുടെ (ChIs) എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റിയിൽ ഇൻസുലിൻ ആശ്രിത വർദ്ധനവ് ഉൾപ്പെടുന്നു, ഇത് നിക്കോട്ടിനിക് അസറ്റൈൽകോളിൻ (എസിഎച്ച്) റിസപ്റ്ററുകൾ (എൻ‌എസി‌ആർ) സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ മെച്ചപ്പെട്ട ഡി‌എ റിലീസിന് കാരണമാകുന്നു. ChI കളിലും ഡി‌എ റിലീസിലും ഇൻ‌സുലിൻറെ സ്വാധീനം ഇൻ‌സ്ആർ‌മാർ‌ മധ്യസ്ഥമാക്കുന്നു. ഡി‌എ റിലീസിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻറെ സ്വാധീനം എഫ്‌ആർ‌ എലികളിൽ‌ നിന്നുള്ള കഷണങ്ങളായി വർദ്ധിപ്പിക്കും, പക്ഷേ എലികളിൽ‌ ഒരു ഒബെസോജെനിക് (ഒ‌ബി) ഭക്ഷണരീതിയിൽ‌ മൂർച്ഛിക്കുന്നു. ഡിഎ റിലീസിന്റെ വിപുലീകരണം കാണിക്കുന്ന ഈ ഡാറ്റ ex vivo ഇൻസുലിൻ നൽകിയ കഷ്ണങ്ങൾ ഇൻസുലിൻ ഒരു റിവാർഡ് സിഗ്നലായി പ്രവർത്തിക്കുമെന്ന പ്രവചനത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു ഇൻ വിവോ. വാസ്തവത്തിൽ, സമാന്തര ബിഹേവിയറൽ പഠനങ്ങൾ ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് കണ്ടീഷനിംഗിൽ എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ ഇൻസുലിനുള്ള പങ്ക് തെളിയിക്കുന്നു. ഈ കണ്ടെത്തലുകൾ ഒന്നിച്ച്, ഭക്ഷണ തിരഞ്ഞെടുപ്പിനെ സ്വാധീനിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു റിവാർഡ് സിഗ്നലായി ഇൻസുലിൻ ഒരു പുതിയ പങ്ക് സൂചിപ്പിക്കുന്നു

ഇൻ‌സ്ആറുകളിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ പ്രവർ‌ത്തിക്കുന്നത്‌ സ്‌ട്രീറ്റൽ‌ ഡി‌എ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു

പ്രാദേശികമായി ആവിഷ്കരിച്ച [DA] പ്രാഥമിക പരിശോധന_o എഫ്‌സിവി ഉപയോഗിച്ച് നിരീക്ഷിക്കുന്നു ex vivo ഉള്ള എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ കഷ്ണങ്ങൾ പരസ്യം libitum (AL) ഭക്ഷണത്തിലേക്കും വെള്ളത്തിലേക്കുമുള്ള പ്രവേശനം ഫിസിയോളജിക്കലി പ്രസക്തമായ സാന്ദ്രതകളിലുടനീളം ഇൻസുലിൻ രൂക്ഷമായി പ്രയോഗിക്കുന്നുവെന്ന് അപ്രതീക്ഷിതമായി കണ്ടെത്തി^{1, 4} സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA] വർദ്ധിപ്പിച്ചു_o (ചിത്രം 1a - c), ഇൻസുലിൻ ഇസിയോടൊപ്പം₅₀ 2 - 12 nM (ന്റെ മൂല്യങ്ങൾ (പ്രഭാവം പകുതി പരമാവധി ആയ ഏകാഗ്രത)ചിത്രം 1B). വർദ്ധിച്ച ഇവോക്ക്ഡ് [DA]_o പ്രത്യേകിച്ചും അതിശയിപ്പിക്കുന്നതാണ്, ഇതിനൊപ്പം പരമാവധി നിരക്കിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവുണ്ടായി (V_{പരമാവധി}) ഓരോ ഉപമേഖലയിലും DAT- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഏറ്റെടുക്കലിനായി (പട്ടിക 1), ഇത് ആവിഷ്കരിച്ച [ഡി‌എ] മത്സരത്തിൽ കുറവുണ്ടാക്കും._o, മുമ്പ് റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തതുപോലെ^{22, 23}. പകരം, [DA] ഉളവാക്കിയതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി_o 20 nM ഇൻസുലിൻ പരമാവധി 55-30% വർദ്ധിപ്പിച്ചു; ഏറ്റവും വലിയ ആനുപാതിക പ്രഭാവമുള്ള പ്രദേശം എൻ‌എ‌സി ഷെൽ ആയിരുന്നു, ഇത് ഏറ്റവും ഉയർന്ന ഇൻ‌സ്ആർ എക്സ്പ്രഷനുമുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപമേഖലയാണ്^{1, 14}. സമാന സാഹചര്യങ്ങളിൽ 30 nM ഇൻസുലിൻ തുറന്നുകാണിക്കുന്ന സ്ലൈസുകൾ സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡി‌എ ഉള്ളടക്കത്തിൽ ഒരു മാറ്റവും കാണിച്ചില്ല (അനുബന്ധ ചിത്രം 1a), ഡി‌എൻ‌എ സിന്തസിസിനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനുപകരം ഇൻ‌സുലിൻ‌ ഡൈനാമിക് റിലീസ് റെഗുലേഷനിൽ‌ മാറ്റം വരുത്തുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ശ്രദ്ധേയമായി, ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനം [DA]_o സൂപ്പർഫിസിയോളജിക്കൽ സാന്ദ്രത at100 nM (നഷ്‌ടപ്പെട്ടു)ചിത്രം 1B). ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം പോലെ, റിലീസ് മറികടക്കുന്ന DAT പ്രവർത്തനം വർദ്ധിച്ചതിന്റെ ഫലമല്ല ഇത് V_{പരമാവധി} ഈ സാന്ദ്രതയിലും നഷ്ടപ്പെട്ടു (പട്ടിക 1). മൊത്തത്തിൽ, ഈ ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നത് കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കാത്ത മൈക്രോ എൻവയോൺമെന്റിൽ, ഇൻസുലിൻ പ്രബലമായ പ്രഭാവം [DA]_o ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിൽ ഒരേസമയം വർദ്ധനവുണ്ടായിട്ടും റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുക എന്നതാണ്.

  

  

(a) ശരാശരി സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എൻ‌എമ്മിനായി ചിത്രീകരിച്ചിരിക്കുന്ന ഇൻ‌സുലിൻ (ഇൻ‌സ്) ന് മുമ്പും ശേഷവും എൻ‌എസി ഷെൽ, എൻ‌എസി കോർ, സിപിയു എന്നിവയിൽ; പിശക് ബാറുകൾ ഒഴിവാക്കി, പക്ഷേ കാണുക (b); അമ്പുകൾ ഉത്തേജക സമയത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിച്ചത് [DA]_o ഷെല്ലിൽ (55 ± 10%), കോർ (37 ± 5%), സിപിയു (20 ± 4% പ്രകാരം) (***P<0.001). (b) ഷെല്ലിലെ ഫിസിയോളജിക്കൽ ശ്രേണിയിൽ (1 - 30 nM) ആശ്രിതത്വമാണ് ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം (n= 22 - 24, F_5,133= 14.471, P<0.001), കോർ (n= 36 - 76, F_5,308= 16.318, P<0.001), സിപിയു (n= 30 - 62, F_5,253= 13.763, P<0.001), പക്ഷേ lost100 nM ന് നഷ്ടപ്പെട്ടു. (c) പീക്ക്-എവോക്ക്ഡ് [ഡി‌എ] യുടെ പ്രതിനിധി റെക്കോർഡിംഗുകൾ_o മയക്കുമരുന്ന് ആപ്ലിക്കേഷന്റെ (കോൺ) അഭാവത്തിൽ, ഇൻസുലിൻ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എൻ‌എം) അല്ലെങ്കിൽ ഇൻ‌സുലിൻ ഒരു ഇൻ‌സ്ആർ ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് μM) ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ പ്രയോഗിക്കുമ്പോൾ എൻ‌എസി കോറിലെ ഒരു സൈറ്റിലെ സമയം. (d) ശരാശരി പീക്ക്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o HNMPA, InsR എതിരാളി S30 (961 μM), PI1K ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ LY3 (294002 μM) എന്നിവരുടെ ഇൻ‌സുലിൻ‌ (1 nM) പ്രഭാവം തടയുന്ന ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നു, പക്ഷേ IGF-1R ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ പി‌പി‌പി (1 μM)n= 29 - 76; P> 0.9 വേഴ്സസ് ഇൻസുലിൻ മാത്രം). വേണ്ടി ചിത്രം 1a - d, n= ഓരോ മരുന്നിനും ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രതയ്ക്കുമായി 3-6 എലികളിൽ നിന്ന് ഓരോ ഉപമേഖലയിലുമുള്ള സൈറ്റുകളുടെ എണ്ണം; വൺ-വേ അനോവ, ടുക്കി സത്യസന്ധമായ പ്രാധാന്യ പരിശോധന (എച്ച്എസ്ഡി). കാണുക അനുബന്ധ ചിത്രം 1b, സി NAc ഷെൽ, സിപിയു ഡാറ്റ എന്നിവയ്ക്കായി.

• പൂർണ്ണ വലുപ്പമുള്ള ചിത്രം (98 KB)

 

 

കാരണം, ഇൻസുലിൻ ഇൻസുലിൻ പോലുള്ള വളർച്ചാ ഘടകമായ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് റിസപ്റ്ററുകളിലും (ഐ‌ജി‌എഫ്-എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ) പ്രവർത്തിക്കാൻ കഴിയും, എന്നിരുന്നാലും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എൻ‌എമ്മിൽ കൂടുതലുള്ള സാന്ദ്രതയിലാണെങ്കിലും (റഫ. 1), ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിപ്പിച്ച പ്രഭാവം [DA]_o InsR ആശ്രയിച്ചിരുന്നു. ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ ഇൻ‌സ് ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ, ഹൈഡ്രോക്സി-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്-നാഫ്തലെനൈൽമെഥൈൽഫോസ്ഫോണിക് ആസിഡ് (എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ), ഇൻ‌സ്ആർ എതിരാളി എസ്‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എന്നിവയാൽ പ്രഭാവം തടഞ്ഞതിനാൽ ഇത് സംഭവിച്ചു, പക്ഷേ ഐ‌ജി‌എഫ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറുകളുടെ സെലക്ടീവ് ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ, പിക്രോപൊഡോഫിലിൻ²⁴ (പിപിപി; ചിത്രം 1c, d ഒപ്പം അനുബന്ധ ചിത്രം 1b, സി). DAT ന്റെ ഇൻ‌സുലിൻ‌-ആശ്രിത നിയന്ത്രണത്തിന് ഉത്തരവാദിയായ സിഗ്നലിംഗ് പാത ആരംഭിക്കുന്ന PI3 കൈനെയ്‌സിന്റെ പങ്കാളിത്തം ഞങ്ങൾ‌ പരിശോധിച്ചു.¹⁹. 1 μM ന്റെ സാന്ദ്രതയിൽ, P13K ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ LY249002 മാത്രം പീക്ക്-എവോക്ക്ഡ് [DA] നെ ബാധിച്ചില്ല._o or V_{പരമാവധി} (nഓരോ മരുന്നിനും = 29 - 76 സൈറ്റുകൾ (NAc കോർ), P> 0.05, വേരിയൻസിന്റെ വൺ-വേ വിശകലനം (ANOVA); ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല), എന്നിട്ടും ഇൻസുലിൻ എവോക്ക്ഡ് [DA]_o എല്ലാ സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപമേഖലകളിലും (ചിത്രം 1d ഒപ്പം അനുബന്ധ ചിത്രം 1b, സി).

ഡി‌എ ആക്‌സോണുകളിലും ChI കളിലും InsR- കളുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണം

ലെ വർദ്ധനവ് V_{പരമാവധി} ഇൻ‌സുലിൻറെ ഫിസിയോളജിക്കൽ ലെവലുകൾ‌ക്കൊപ്പം ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കുന്നതിന് ഡി‌എ ആക്സോണുകളിൽ‌ ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ സാന്നിധ്യം സൂചിപ്പിക്കുന്നു, മുമ്പത്തെ ഫലങ്ങൾ‌ വിവിധ സ്ട്രൈറ്റൽ‌ തയ്യാറെടുപ്പുകളിൽ‌^{18, 19, 20, 21, 22}. മിഡ്‌ബ്രെയിൻ ഡി‌എ ന്യൂറോണുകളിൽ‌ ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ പ്രവർത്തനപരമായ പ്രകടനം പ്രകടമാക്കിയിട്ടുണ്ടെങ്കിലും^{15, 23, 24, 25}, സ്‌ട്രാറ്റിയൽ‌ ഡി‌എ ആക്‌സണുകളിലെ ഇൻ‌സ്‌ആർ‌ എക്‌സ്‌പ്രഷൻ‌ റിപ്പോർ‌ട്ട് ചെയ്‌തിട്ടില്ല. ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രി ഉപയോഗിച്ചാണ് ഞങ്ങൾ ഇത് പരിഹരിച്ചത്. ഡി‌എ-സിന്തൈസിംഗ് എൻ‌സൈം, ടൈറോസിൻ ഹൈഡ്രോക്സിലേസ് (ടിഎച്ച്) എന്നിവയ്ക്കുള്ള ഇമ്യൂണോർ ആക്റ്റിവിറ്റി വഴി തിരിച്ചറിഞ്ഞ ഡി‌എ ആക്സോണുകളിലെ ഇൻ‌സ്ആർ ലോക്കലൈസേഷന്റെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ പരിമിതമായ അളവ് വിലയിരുത്തൽ. അതിനാൽ ഞങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത പ്രോട്ടോക്കോൾ സ്വീകരിച്ചു²⁷, സാധാരണ ഇമേജ് കാഴ്‌ചയിൽ TH + പ്രൊഫൈലുകളുമായി ഓവർലാപ്പുചെയ്‌ത InsR puncta എണ്ണുന്നതും ഇൻ‌സ്ആർ ഇമേജ് 90 by തിരിക്കുന്നതിന് ശേഷം വീണ്ടും എണ്ണുന്നതും ഉൾപ്പെടുന്നു. InsR, TH + പ്രൊഫൈലുകളുടെ ഓവർലാപ്പ് വ്യക്തമല്ലെങ്കിൽ, ഈ നടപടിക്രമം സാധാരണ അല്ലെങ്കിൽ 90 phase ഘട്ടത്തിന് പുറത്താണെങ്കിലും സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് സമാനമായ എണ്ണം നൽകണം. എന്നിരുന്നാലും, ഈ വിശകലനം 14 ± 9% ന്റെ TH + പ്രൊഫൈലുകളുള്ള ഇൻ‌സ്ആർ പങ്ക്റ്റയുടെ ഓവർലാപ്പിലെ കുറവ് കാണിച്ചു (n= 42 ഫീൽഡുകൾ, P<0.01, ജോടിയാക്കിയ രണ്ട് വാലുകൾ t-ടെസ്റ്റ്; ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല), ഡി‌എ ആക്‌സോണുകളിൽ‌ ഇൻ‌സ്ആർ സാന്നിധ്യം സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, കൂടുതൽ ക ri തുകകരമെന്നു പറയട്ടെ, എസി‌എച്ച് സമന്വയത്തിന് ആവശ്യമായ പ്രാഥമിക എൻസൈമായ കോളിൻ അസറ്റൈൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറേസിനായി (ചാറ്റ്) കോ-ഇമ്യൂണോലാബെല്ലിംഗ് വഴി സ്ട്രൈറ്റത്തിന്റെ ChI- കളായി തിരിച്ചറിഞ്ഞ വലിയ സെൽ ബോഡികളിലെ ഇൻ‌സ്ആർ ഇമ്യൂണോലാബെല്ലിംഗ്. ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്കൽ മാനദണ്ഡം ഉപയോഗിക്കുന്നു²⁸ പ്രാഥമിക മുഴുവൻ സെൽ-റെക്കോർഡിംഗ് പഠനങ്ങളിലും ChI- കൾ തിരിച്ചറിയുന്നതിന്, നിരവധി ന്യൂറോണുകൾ ബയോസൈറ്റിൻ നിറച്ച് ഇമ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിസ്ട്രിക്കായി പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു; ഇവയെല്ലാം (4 / 4) InsR, ChAT എന്നിവയ്‌ക്ക് പ്രതിരോധശേഷിയില്ലാത്തവയായിരുന്നു (ചിത്രം. 2). എൻ‌എ‌സിയിലെ ഇൻ‌സ്ആർ, ചാറ്റ് കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ എന്നിവയുടെ തുടർന്നുള്ള വിലയിരുത്തലിൽ എല്ലാ ചാറ്റ് + ന്യൂറോണുകളും ഇൻ‌സ്ആർ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്%; n= രണ്ട് എലികളിൽ നിന്ന് നാല് വിഭാഗങ്ങളിലായി 27 / 28 ന്യൂറോണുകൾ).

  

  

(a) ബയോസൈറ്റിൻ നിറച്ച ChI, തുടർന്ന് ChAT നായി ഇമ്യൂണോലബൽ, InsR (4 / 4 ബയോസൈറ്റിൻ നിറച്ച ChI- കളുടെ പ്രതിനിധി); ലയിപ്പിച്ച ചിത്രം സഹ-പ്രാദേശികവൽക്കരണം കാണിക്കുന്നു; സ്കെയിൽ ബാർ, 10 μm. (b-e) ഇൻസുലിൻ (3 nM) ന് മുമ്പും ശേഷവും നിലവിലെ പൾ‌സുകളെ ഡിപോലറൈസ് ചെയ്യുന്ന ഒരു ശ്രേണിയിലേക്കുള്ള (200- ന്റെ ദൈർഘ്യം; 300, 400, 120 pA; 30- ന്റെ ഇടവേളകൾ) സ്ട്രൈറ്റൽ ChI- കളുടെ പ്രതികരണം. (b) ഒരു ChI (മുകളിലുള്ള) ലെ സ്പൈക്ക് ഫ്രീക്വൻസി അഡാപ്റ്റേഷൻ നിലവിലെ കുത്തിവയ്പ്പിനിടെ പ്രവർത്തന ശേഷി (എപി) ഡിസ്ചാർജ് നഷ്ടപ്പെടുന്നതായി കാണപ്പെടുന്നു, അതേസമയം ഇൻസുലിൻ (താഴ്ന്നത്) ലെ നിലവിലെ പൾസിൽ ഉടനീളം സ്പൈക്കിംഗ് തുടരുന്നു; കാണിച്ചിരിക്കുന്ന പൂർണ്ണ ഡാറ്റ സെറ്റ് d. (c) ChI- നുള്ള നിലവിലെ ഓരോ ഘട്ടത്തിലും എപി നമ്പറിലെ ഇൻസുലിൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് വർദ്ധനവിന്റെ പ്രതിനിധി സമയ കോഴ്സ് b. (d) ഇൻസുലിൻ എക്‌സ്‌പോഷറിന്റെ മുമ്പും ശേഷവും കൈമാറിയ നിലവിലെ പൾസുകളുടെ സമയത്ത് എപി നമ്പറിന്റെ സംഗ്രഹം (n= 21 ജോടിയാക്കിയ ഉത്തേജനങ്ങൾ, 7 ന്യൂറോണുകൾ, 5 എലികൾ) (e) നിയന്ത്രണ സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഇൻസുലിൻ (+ ഇൻസ്) പ്രഭാവം കാണിക്കുന്ന ശരാശരി പ്രതികരണങ്ങൾ (കോൺ; n= 21 ജോടിയാക്കിയ ഉത്തേജനങ്ങൾ, 7 ന്യൂറോണുകൾ, ***P<0.001, ജോടിയാക്കിയ രണ്ട് വാലുകൾ t-ടെസ്റ്റ്), HNMPA (5 μM) ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ (n= 12 ജോടിയാക്കിയ ഉത്തേജനങ്ങൾ, 4 ന്യൂറോണുകൾ, 4 എലികൾ, P>0.05, ജോടിയാക്കിയ രണ്ട് വാലുകൾ t-test), കൂടാതെ PPP (1 μM) ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിലും (n= 18 ജോടിയാക്കിയ ഉത്തേജനങ്ങൾ, 6 ന്യൂറോണുകൾ, 6 എലികൾ, **P<0.01, വിൽ‌കോക്സൺ പൊരുത്തപ്പെട്ട ജോഡി റാങ്ക് ടെസ്റ്റിൽ ഒപ്പിട്ടു). (f) ശരാശരി സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o മെക്കാമൈലാമൈൻ (Mec; 30 μM) അല്ലെങ്കിൽ DHβE (5 μM) എന്നിവയിലെ ഇൻസുലിൻ (1 nM) ന് മുമ്പും ശേഷവും NAc കോറിൽ 100% പീക്ക് നിയന്ത്രണത്തിലേക്ക് സാധാരണമാക്കിയിരിക്കുന്നുn= 20 - 40 എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഓരോ ഉപാധിക്കും 3 - 4 സൈറ്റുകൾ, P> 0.05 വേഴ്സസ് കൺ‌ട്രോൾ, ജോടിയാക്കാത്തത് t-ടെസ്റ്റ്). (g) ശരാശരി സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o ഹെറ്ററോസൈഗസ് കൺട്രോൾ (ഹെറ്റ്), എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ഫോർബ്രെയിൻ സ്ലൈസുകളിൽ ചാറ്റ് ഇൻസുലിൻ (30 nM) ന് മുമ്പും ശേഷവുമുള്ള KO എലികൾ, 100% പീക്ക് നിയന്ത്രണത്തിലേക്ക് സാധാരണമാക്കി. ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിച്ചത് [DA]_o വൈവിധ്യമാർന്ന എലികളിൽ 190 ± 23% NAc ഷെല്ലിലും, 140 ± 8% NAc കോറിലും 137 ± 12% സിപുവിലും (n= ഓരോ ജനിതക ടൈപ്പിനും 15 - 25 എലികളിൽ നിന്ന് ഓരോ ഉപപ്രദേശത്തിനും 3 - 4 സൈറ്റുകൾ, **P<0.01, ***P<0.001 വേഴ്സസ് കൺ‌ട്രോൾ ജോടിയാക്കിയിട്ടില്ല t-ടെസ്റ്റ്), പക്ഷേ ആവിഷ്കരിച്ച [DA] നെ ബാധിച്ചില്ല_o ന്റെ ഏതെങ്കിലും സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപമേഖലയിൽ ചാറ്റ് KO എലികൾ (P> 0.1).

• പൂർണ്ണ വലുപ്പമുള്ള ചിത്രം (167 KB)

 

 

ഇൻസുലിൻ ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു

സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ChI- കളിലെ InsR- കളുടെ പ്രവർത്തനം പരിശോധിക്കുന്നതിന്, മുഴുവൻ സെൽ കറന്റ്-ക്ലാമ്പ് റെക്കോർഡിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റിയിൽ ഇൻസുലിൻ ചെലുത്തുന്ന സ്വാധീനം ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു. സ്‌പൈക്ക് ഫ്രീക്വൻസി അഡാപ്റ്റേഷനെ വിശ്വസനീയമായി പ്രദർശിപ്പിച്ച പ്രവർത്തന സാധ്യതകളുടെ ഒരു ട്രെയിൻ ലഭ്യമാക്കുന്നതിന് നിലവിലെ പൾസുകളെ ഡിപോളറൈസ് ചെയ്യുന്ന എക്സ്എൻയുഎംഎക്സ് സീരീസ് ഉപയോഗിച്ച് ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റി വിലയിരുത്തി (ചിത്രം 2B), പലപ്പോഴും നിലവിലെ പൾസിന്റെ അവസാനത്തോടെ സ്പൈക്കിംഗ് നഷ്‌ടപ്പെടും. ശ്രദ്ധേയമായി, ഇൻസുലിൻ (30 nM) സ്പൈക്ക് ഫ്രീക്വൻസി അഡാപ്റ്റേഷനെ ആകർഷിച്ചു, തൽഫലമായി കാലക്രമേണ പ്രവർത്തന സാധ്യതകളുടെ എണ്ണം ക്രമാതീതമായി വർദ്ധിക്കുന്നു (ചിത്രം 2c), പരമാവധി വർദ്ധനയോടെ (ചിത്രം 2d, ഇ) സാധാരണയായി ഇൻസുലിൻ എക്‌സ്‌പോഷറിന്റെ 20 നും 50 മിനിറ്റിനും ഇടയിൽ കാണപ്പെടുന്നു. ഇൻസുലിൻറെ അഭാവത്തിൽ, നിയന്ത്രണ ChI- കൾ ആവിഷ്കരിച്ച പ്രവർത്തന സാധ്യതകളുടെ എണ്ണത്തിൽ ഒരു മാറ്റവും കാണിച്ചില്ല (P> 0.05, ജോടിയാക്കിയ രണ്ട് വാലുകൾ t-ടെസ്റ്റ്; ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല); ഒരേ സമയ ഇടവേളയിൽ നിരീക്ഷിച്ച നിയന്ത്രണ ന്യൂറോണുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഇൻസുലിൻ തുറന്നുകാണിക്കുന്ന ന്യൂറോണുകൾ ആവിഷ്കരിച്ച പ്രവർത്തന സാധ്യതകളുടെ എണ്ണത്തിൽ ഗണ്യമായ മാറ്റം കാണിച്ചു (നിയന്ത്രണം nഇൻസുലിൻ എന്ന നാല് ന്യൂറോണുകളിൽ നിന്നുള്ള 12 ഉത്തേജക ജോഡികൾ nഏഴ് ന്യൂറോണുകളിൽ നിന്നുള്ള = 21 ഉത്തേജക ജോഡികൾ, F_1,25= 5.63, P<0.05, മിശ്രിത-അളവുകൾ ടു-വേ ANOVA; ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല). പ്രവർത്തന സാധ്യതയുള്ള സംഖ്യയിൽ ഇൻസുലിൻ ഉണ്ടാക്കുന്ന സ്വാധീനം എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ തടഞ്ഞു, പക്ഷേ ഐ‌ജി‌എഫ് -1 ആർ സെലക്ടീവ് ഇൻ‌ഹിബിറ്റർ പി‌പി‌പി (ചിത്രം 2e), ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിപ്പിച്ച ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റി InsR മധ്യസ്ഥമാണെന്ന് തെളിയിക്കുന്നു.

ആവിഷ്കരിച്ച [DA] ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിപ്പിക്കൽ_o nAChR- കളും ACH- ഉം ആവശ്യമാണ്

മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ‌, ഡി‌എ ആക്‌സണുകളിൽ‌ എൻ‌എ‌സി‌ആർ‌മാർ‌ വഴി സ്‌ട്രാറ്റിയൽ‌ ഡി‌എ റിലീസിനെ ChI കളും ACH ഉം നിയന്ത്രിക്കുന്നു^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. ChI- കളിലെ സമൃദ്ധമായ InsR എക്‌സ്‌പ്രഷനും അക്യൂട്ട് ഇൻസുലിൻ എക്‌സ്‌പോഷറിനൊപ്പം കാണപ്പെടുന്ന ChI എക്‌സിബിബിലിറ്റിയുടെ വർദ്ധനവും ഈ ന്യൂറോണുകൾ ഇൻസുലിൻ ലക്ഷ്യമിടുന്ന പുതിയ ടാർഗെറ്റുകളായിരിക്കാം, ഇത് മെച്ചപ്പെട്ട DA റിലീസിന് കാരണമാകും. ഇത് പരീക്ഷിക്കുന്നതിനായി, ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം പരിശോധിച്ചത് മെക്കാമിലാമൈൻ, നോൺ-സെലക്ടീവ് എൻ‌എ‌സി‌ആർ എതിരാളി, അല്ലെങ്കിൽ ഡൈഹൈഡ്രോ- β- എറിത്രോയ്ഡിൻ (DHβE), β2 സബ്‌യൂണിറ്റ് അടങ്ങിയ (β2 *) nAChR- കൾക്കായുള്ള സെലക്ടീവ് എതിരാളി ഡിഎ ആക്സോണുകൾ³⁵. ആവിഷ്കരിച്ചത് [DA]_o രണ്ട് മരുന്നുകളും സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [ഡിഎ] യുടെ വ്യാപ്തി കുറച്ചെങ്കിലും ഈ എതിരാളികളുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ ഇത് പെട്ടെന്ന് കണ്ടെത്തി._o (ഉദാഹരണത്തിന്, NAc കോറിലെ 13-26% പ്രകാരം), മുമ്പ് റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തത്^{29, 30, 31, 32}. എസി‌എച്ച്, എൻ‌എ‌സി‌ആർ‌ എന്നിവയ്‌ക്കായുള്ള ഒരു റോളിനെ പിന്തുണയ്‌ക്കുന്നതിന്‌, ഇൻ‌സുലിൻ‌ സ്വാധീനം [DA]_o മെക്കാമിലാമൈൻ അല്ലെങ്കിൽ DHβE (ചിത്രം 2f). ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിപ്പിച്ച ഡി‌എ റിലീസിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ എസിഎച്ച് സിഗ്നലിംഗിന്റെ പങ്കാളിത്തം സ്ഥിരീകരിക്കുന്നതിന്, ഇൻസുലിൻ ഇൻ-ഇൻ പ്രഭാവം ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു ex vivo ഫോർബ്രെയിൻ ഘടനകളിൽ (ഫോർബ്രെയിൻ) ചാറ്റ് എക്സ്പ്രഷൻ ജനിതകമായി നിർത്തലാക്കിയ എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ സ്ലൈസുകൾ ചാറ്റ് KO എലികൾ), സ്ട്രിയാറ്റം ഉൾപ്പെടെ³². ഈ എലികളിൽ ChI- കൾ കേടുകൂടാതെയിരിക്കുമെങ്കിലും, ACH സിന്തസിസ് നിർത്തലാക്കുന്നു, ഇത് കുറയുന്നു, പക്ഷേ ഇപ്പോഴും എളുപ്പത്തിൽ കണ്ടെത്താനാകുന്ന സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o, മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ³². നിയന്ത്രണ ഹെറ്ററോസൈഗസ് ലിറ്റർമേറ്റുകളിൽ, ഇൻസുലിൻ (30 nM) വർദ്ധിച്ച ആവിഷ്കരിച്ചു [DA]_o NAc ഷെല്ലിലും കോറിലും CPU- ൽ 37-90% (ചിത്രം 2g), എലി സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ കാണുന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ കവിയുന്നു (ഉദാഹരണത്തിന്, ചിത്രം. 1). എന്നിരുന്നാലും, ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനം [DA]_o ഫോർബ്രെയിനിലെ സ്ട്രൈറ്റൽ കോംപ്ലക്സിലുടനീളം ഇല്ലായിരുന്നു ചാറ്റ് കെ‌എ എലികൾ‌, ഇൻ‌സുലിൻ‌-മെഡിയേറ്റഡ് ഡി‌എ റിലീസിൻറെ വർദ്ധനവിന് സ്‌ട്രാറ്റിയൽ‌ എ‌സി‌എച്ച് ആവശ്യമാണെന്ന് തെളിയിക്കുന്നു, പക്ഷേ ഗ്ലൂറ്റമേറ്റ് പോലുള്ള ChI കളിൽ‌ നിന്നും കോ-റിലീസ് ചെയ്ത ട്രാൻസ്മിറ്ററുകൾ‌ അല്ല³⁶.

ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനം [DA]_o ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു

പ്ലാസ്മ, മസ്തിഷ്ക ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രത ശരീര അഡിപോസിറ്റിക്ക് ആനുപാതികമാണ്^{6, 7, 8}, കൂടാതെ ഇൻസുലിനുമായുള്ള മസ്തിഷ്ക സംവേദനക്ഷമതയിൽ നഷ്ടപരിഹാര മാറ്റങ്ങൾ വരുത്താം. അതിനാൽ‌, ഡി‌എ റിലീസ് പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഇൻ‌സുലിൻറെ കഴിവിനെ ഡയറ്റ് സ്വാധീനിക്കുന്നു എന്ന അനുമാനത്തെ ഞങ്ങൾ‌ പരീക്ഷിച്ചു, എലികളിൽ‌ നിന്നുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ‌ സ്ലൈസുകൾ‌ ഉപയോഗിച്ച് ഒരു എഫ്‌ആർ‌ അല്ലെങ്കിൽ‌ ഒ‌ബി ഡയറ്റിൽ‌ നിന്നും എ‌എൽ‌ നിയന്ത്രണങ്ങളിൽ‌ നിന്നും പരിപാലിക്കുന്നു. പ്രതീക്ഷിച്ചതുപോലെ, പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ അളവ് ശരീരഭാരവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, AL അല്ലെങ്കിൽ OB എലികളേക്കാൾ FR ൽ ഇൻസുലിൻ കുറവാണ് (ചിത്രം. 3 ഒപ്പം പട്ടിക 2). ഇൻസുലിൻ രക്തചംക്രമണത്തിൽ ഈ വ്യത്യാസങ്ങൾ ഉണ്ടായിരുന്നിട്ടും, പീക്ക്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o എൻ‌എസി ഷെല്ലിലും കോറിലും, സിപിയു ഗണ്യമായി കുറവായിരുന്നു ex vivo AL (ചിത്രം 3B ഒപ്പം അനുബന്ധ ചിത്രം 2 a, b), ഇൻ‌സുലിൻ‌ കൂടാതെ ഘടകങ്ങൾ‌ കേവലമായ ആവിഷ്കരിച്ച [DA]_o. സ്ട്രിയാറ്റൽ ഡി‌എ ഉള്ളടക്കം ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളിൽ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരുന്നില്ല, ഇത് ഡി‌എ സിന്തസിസിനേക്കാൾ റിലീസ് റെഗുലേഷനിൽ മാറ്റം സൂചിപ്പിക്കുന്നു (അനുബന്ധ ചിത്രം 2c). ഡൈനാമിക് റെഗുലേഷനിൽ വന്ന മാറ്റത്തിന് അനുസൃതമായി, ഇൻസുലിൻ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎ റിലീസിന്റെ സംവേദനക്ഷമത ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. FR എലികളിൽ, ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രത ≤1 nM, ഇത് AL- ൽ യാതൊരു ഫലവുമില്ല (ചിത്രം 1B), വർദ്ധിച്ച ഇവോക്ക്ഡ് [DA]_o (ചിത്രം 3c), ഇസിയോടൊപ്പം വർദ്ധിച്ച ഇൻസുലിൻ സംവേദനക്ഷമതയെ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു₅₀ FR സ്ട്രാറ്റാറ്റത്തിലെ (0.4 - 0.6 nM) മൂല്യങ്ങൾ AL- ൽ ഏതാണ്ട് കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള ക്രമം (താരതമ്യം ചെയ്യുക) അത്തി 1b ഒപ്പം 3c). ഇതിന് വിപരീതമായി, ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം OB സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ നഷ്ടപ്പെട്ടു; AL സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ പരമാവധി സ്വാധീനം ചെലുത്തിയ 30 nM ഇൻസുലിൻ പോലും (ചിത്രം 1B), OB- ൽ ഒരു ഫലവുമില്ല (ചിത്രം 3c).

  

  

(a) പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രത തീറ്റ ഗ്രൂപ്പുകളിലുടനീളം ശരീരഭാരവുമായി നല്ല രീതിയിൽ ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു (R= 0.76). (b) ശരാശരി സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o NAc കോറിൽ (കാണുക അനുബന്ധ ചിത്രം 2a, b NAc ഷെല്ലിനും CPU നും വേണ്ടി) FR (38 ± 4%), OB (25 ± 4%), AL (n= ഓരോ ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പിനും 50 - 60 എലികളിൽ നിന്നുള്ള 5 - 6 സൈറ്റുകൾ, F_2,156= 23.337, വൺ-വേ ANOVA, Tukey HSD; ***P<0.001); OB വേഴ്സസ് FR (P<0.08). (c) ഉണക്കിയതിന്റെ സംവേദനക്ഷമത [DA]_o ഇൻസുലിൻ എഫ്‌ആറിൽ വർദ്ധിപ്പിച്ചു, പക്ഷേ ഒബിയിൽ നഷ്ടപ്പെട്ടു (n= എല്ലാ ഉപമേഖലകളിലും എഫ്‌ആർ, എഎൽ എലികൾ എന്നിവയ്‌ക്കെതിരായ കൂടുതൽ സംവേദനക്ഷമതയുള്ള ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പിന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഏകാഗ്രതയ്ക്ക് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സൈറ്റുകൾ, വൺ-വേ അനോവ, ടുക്കി എച്ച്എസ്ഡി)P<0.001 ഓരോ പ്രദേശത്തിനും; ടു-വേ അനോവ; സിപിയു: F_{(conc × diet; 3,286)}= 10.253; കോർ: F_{(conc × diet; 3,353)}= 6.166; ഷെൽ: F_{(conc × diet; 3,195)}= 10.735).

• പൂർണ്ണ വലുപ്പമുള്ള ചിത്രം (124 KB)

 

 

ഈ ഡാറ്റ സ്‌ട്രൈറ്റൽ ഇൻ‌സ്‌ആർ സംവേദനക്ഷമതയും ബോഡി അഡിപ്പോസിറ്റിയും തമ്മിലുള്ള വിപരീത ബന്ധത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, മറ്റൊരു തരത്തിൽ, ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള ഈ വ്യത്യാസങ്ങൾ‌ മാറ്റം വരുത്തിയ എൻ‌എ‌സി‌ആർ‌ സംവേദനക്ഷമതയെ പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം. അതിനാൽ ഓരോ ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്നും NAc കോറിലെ നിക്കോട്ടിൻ സാന്ദ്രീകരണ പ്രതികരണം ഞങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു. നിക്കോട്ടിൻ nAChR ഡിസെൻസിറ്റൈസേഷന് കാരണമാകുന്നു, ഇത് [DA] അനുപാതത്തെ താരതമ്യം ചെയ്ത് കണക്കാക്കാം._o സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA] ലേക്ക് 100 Hz- ൽ അഞ്ച് പൾസുകളുടെ ഒരു ഹ്രസ്വ ട്രെയിൻ ഉപയോഗിച്ചു._o (5 p: 1 p അനുപാതം) nAChR സജീവമാക്കൽ / ഡിസെൻസിറ്റൈസേഷന്റെ സൂചികയായി^{30, 31}. ഈ സമീപനം ഉപയോഗിച്ച്, NAc കോറിലെ nAChR സംവേദനക്ഷമതയിൽ ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയില്ല (അനുബന്ധ ചിത്രം 3a - c). കൂടാതെ, നിയന്ത്രണം 5 p: 1 p അനുപാതം NAc കോറിലെ ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളിൽ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരുന്നില്ല (അനുബന്ധ ചിത്രം 3d) അല്ലെങ്കിൽ സിപിയു (ചിത്രീകരിച്ചിട്ടില്ല), ഡയറ്റ് എൻ‌എ‌സി‌ആർ‌-ആശ്രിത ഡി‌എ റിലീസ് റെഗുലേഷനിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നില്ലെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. അതിനാൽ, എഫ്‌ആർ വേഴ്സസ് എഎൽ എലികളിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഇൻസ്‌ആർ സംവേദനക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കാണപ്പെടുന്നു, പക്ഷേ ഒബി എലികളിൽ ഇത് ഇല്ല, ഇൻസുലിൻ ഫിസിയോളജിക്കൽ സാന്ദ്രതയിൽ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎ റിലീസിന്റെ നിയന്ത്രണം നഷ്ടപ്പെടുന്നു.

എൻ‌എസി ഷെൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ കണ്ടീഷൻ‌ഡ് ഫ്ലേവർ‌ മുൻ‌ഗണന മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു

കഴിക്കുന്നതിനു മുമ്പും ശേഷവുമുള്ള ഘടകങ്ങളാണ് ഭക്ഷ്യ മുൻഗണനകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നത്; ഓരോന്നിനും വേണ്ടിയുള്ള സംവിധാനങ്ങൾ പൂർണ്ണമായും പരിഹരിച്ചിട്ടില്ല, പക്ഷേ നിലവിലെ തെളിവുകൾ രണ്ടിലും NAc DA സിഗ്നലിംഗിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു^{37, 38}. പെരിഫറൽ ഗ്ലൂക്കോസ് ഉയർച്ചയ്ക്ക് ശേഷം പ്ലാസ്മ, സെറിബ്രോസ്പൈനൽ ഫ്ലൂയിഡ് (സി‌എസ്‌എഫ്) ഇൻസുലിൻ അളവ് അതിവേഗം ഉയരുന്നു⁶, കൂടാതെ പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ എലവേഷന്റെ 5 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഇൻസുലിൻ വർദ്ധനവ് കണ്ടെത്താനാകും⁷, ഭക്ഷണത്തിനിടയിൽ പെരിഫറൽ ഇൻസുലിൻ റിലീസ് ചെയ്യുന്നത് എൻ‌എസി ഡി‌എ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്നും ഇൻ‌ജെജസ്റ്റിനു ശേഷമുള്ള റിവാർഡ് മെക്കാനിസങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുമെന്നും അനുമാനിക്കുന്നത് യുക്തിസഹമാണ്. മുമ്പ് വിവരിച്ച ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് പ്രോട്ടോക്കോൾ ഞങ്ങൾ സ്വീകരിച്ചു³⁷ എൻ‌എസിയിലെ ഇൻസുലിൻ ആന്റിബോഡിയുടെ (ഇൻ‌സാബ്) പ്രാദേശിക ആപ്ലിക്കേഷനിലൂടെ എൻ‌ഡോജെനസ് ഇൻ‌സുലിൻറെ സ്വാധീനം തടയുന്നത് ജോഡിയാക്കിയ രസം മുൻ‌ഗണന കുറയ്‌ക്കുമെന്ന അനുമാനത്തെ പരീക്ഷിക്കുന്നതിനായി എലികളിലെ സാചാരിൻ-മധുരമുള്ള ഗ്ലൂക്കോസ് പരിഹാരങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച്. ഇൻസുലിൻറെ ഫലങ്ങൾ തടയുന്നതിൽ ഇൻ‌സാബിന്റെ ഫലപ്രാപ്തി ഒരു vitro ലെ സ്ട്രിയാറ്റൽ സിനാപ്റ്റോസോമുകളിലേക്ക് ഡിഎ ഏറ്റെടുക്കൽ. ഇൻസുലിൻ (30 nM) ഗണ്യമായ വർദ്ധനവിന് കാരണമായി V_{പരമാവധി} NAc അല്ലെങ്കിൽ CPu- ൽ നിന്നുള്ള സിനാപ്റ്റോസോമുകളിൽ (അനുബന്ധ ചിത്രം 4), ഞങ്ങളുടെ സ്ഥിരത V_{പരമാവധി} സ്ട്രൈറ്റൽ സ്ലൈസുകളിൽ നിന്നുള്ള ഡാറ്റ (പട്ടിക 1) മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങളോടൊപ്പം^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. ഇൻ‌സുലിൻറെ അഭാവത്തിൽ‌, ഇൻ‌സാബോ കൺ‌ട്രോൾ‌ ആന്റിബോഡി ഇമ്യൂണോഗ്ലോബുലിൻ‌ ജി (ഐ‌ജി‌ജി) യിലോ മാറ്റം വരുത്തിയില്ല V_{പരമാവധി} ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിനും നിയന്ത്രണത്തിനും എതിരായി. ഐ.ജി.ജിയുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, ഇൻസുലിൻ ഇപ്പോഴും ഗണ്യമായ വർദ്ധനവിന് കാരണമായി V_{പരമാവധി}; എന്നിരുന്നാലും, ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം V_{പരമാവധി} ഇൻ‌സാബിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ‌ നഷ്‌ടപ്പെട്ടു (അനുബന്ധ ചിത്രം 4).

ടിഷ്യു കേടുപാടുകൾ കുറയ്ക്കുന്നതിനും ടിഷ്യു ടാർഗറ്റിന്റെ സംവേദനക്ഷമത സംരക്ഷിക്കുന്നതിനുമായി, രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളുടെ വിഷയങ്ങൾ പരീക്ഷിച്ചു, അതിൽ ഞങ്ങൾ ഒരു കൂട്ടം വിഷയങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനുപകരം ഇൻസാബുമായി ഒരു സുഗന്ധ പരിഹാരം ജോടിയാക്കുന്നതിനുപകരം ഒരു മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ നടപടിക്രമത്തിലൂടെ ഇൻട്രാ-എൻ‌എസി മൈക്രോഇഞ്ചക്ഷൻ മാറ്റി. വാഹനം. തൽഫലമായി, ഒരു കുപ്പി-കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ, പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പിന് രണ്ട് സുഗന്ധങ്ങളിലൊന്നുമായി ജോടിയാക്കിയ ഇൻ‌സാബ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകൾ ലഭിച്ചു, കൂടാതെ ഇതര സെഷനുകളിൽ‌, മറ്റ് സ്വാദുമായി ജോടിയാക്കിയ മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകൾ‌ (ചിത്രം. 4, ഇടത്തെ). നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പിന് ഫോസ്ഫേറ്റ്-ബഫർ‌ഡ് സലൈൻ (പി‌ബി‌എസ്) അല്ലെങ്കിൽ ഐ‌ജി‌ജിയുടെ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകൾ ഉപയോഗിച്ച് മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകൾ ലഭിച്ചു. രണ്ട് സുഗന്ധ പരിഹാരങ്ങളിലും കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് ഗ്ലൂക്കോസ് അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്. കൺട്രോൾ-മൈക്രോ ഇൻജക്റ്റഡ് ഗ്രൂപ്പിൽ സുഗന്ധങ്ങൾക്കിടയിൽ വ്യത്യസ്‌തമായ മുൻഗണനകളൊന്നും പ്രതീക്ഷിച്ചിരുന്നില്ല, അതേസമയം മുൻഗണന ഇൻസാബ്-മൈക്രോ ഇൻജക്റ്റഡ് ഗ്രൂപ്പിലെ മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ-ജോടിയാക്കിയ ഫ്ലേവറിലേക്ക് മാറുമെന്ന് പ്രതീക്ഷിച്ചിരുന്നു.

  

  

(a) ഒരു കുപ്പി കണ്ടീഷനിംഗ് (ഇടത്), രണ്ട് കുപ്പി പരിശോധന (വലത്) എന്നിവ ചിത്രീകരിക്കുന്ന ചിത്രം. (b) ഒരു കുപ്പി-കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന അളവ് (മില്ലി). ഇൻഫ്യൂഷൻ-കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനും മൈക്രോ ഇൻജെക്ഷൻ ചികിത്സയും തമ്മിൽ ഒരു സുപ്രധാന ഇടപെടൽ ഉണ്ടായിരുന്നു (n= ഓരോ ഗ്രൂപ്പിനും 19 - 20 എലികൾ, F_(3,111)= 3.088, P<0.05, 2 × 4 മിക്സഡ് ANOVA ഇൻഫ്യൂഷൻ-കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനിൽ ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളുമായി). മൂന്നാമത്തെ നിയന്ത്രണവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇൻ‌സാബ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ ഉപഭോഗം ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു (t(40) = 3.026, **P<0.01) നാലാമത്തേതും (t(40) = 3.052, **P<0.01, പരിരക്ഷിത ഒറ്റ-വാലുള്ളത് t-tests) കഷായം. മോക്ക് കുത്തിവയ്പ്പുകൾ ഒരു ഗ്രൂപ്പിലെയും ഉപഭോഗത്തെ ബാധിച്ചില്ല (F_3,111= 1.110, 2 × 4 മിശ്രിത ANOVA, മോക്ക് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനിൽ ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളുമായി). (c) രണ്ട്-കുപ്പി ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് പരിശോധനയിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന വോളിയം. കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് സ്വാദും മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ ചികിത്സയും തമ്മിൽ കാര്യമായ ഇടപെടൽ ഉണ്ടായിരുന്നു (F_1,37= 5.36, P<0.05, രസം സംബന്ധിച്ച ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളോടുകൂടിയ ടു-വേ മിക്സഡ് ANOVA). മോക്ക്-ജോടിയാക്കിയ ഫ്ലേവറുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇൻ‌സാബ്-ജോടിയാക്കിയ രസം ഇൻ‌സാബ് ഗ്രൂപ്പ് വളരെ കുറവാണ് (t(18) = 2.82, ** പി<0.01, പരിരക്ഷിത ഒറ്റ-വാലുള്ളത് t-ടെസ്റ്റ്); നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പ് ഫ്ലേവർ മുൻഗണനകളൊന്നും കാണിച്ചില്ല (t(19) = 0.803, P> 0.05, പരിരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു t-ടെസ്റ്റ്). ഗ്രൂപ്പുകളെ താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഇൻസാബ് എലികൾ ഇൻഫ്യൂഷൻ-ജോടിയാക്കിയ സ്വാദിൽ വളരെ കുറവാണ് കുടിച്ചത് (t(40) = 1.96, *P<0.05) കൂടാതെ മോക്ക്-ജോടിയാക്കിയ സ്വാദും (t(40) = 1.77, *P<0.05, പരിരക്ഷിത ഒറ്റ-വാലുള്ളത് t-ടെസ്റ്റ്) നിയന്ത്രണങ്ങളേക്കാൾ.

• പൂർണ്ണ വലുപ്പമുള്ള ചിത്രം (161 KB)

 

 

വൺ-ബോട്ടിൽ കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ, മൂന്നാമത്തെയും നാലാമത്തെയും കഷായങ്ങളിൽ വാഹനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇൻ‌സാബ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ ഉപഭോഗം ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു (ചിത്രം 4B). ഇതിനു വിപരീതമായി, നാല് മോക്ക് ഇഞ്ചക്ഷൻ സെഷനുകളിലും രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളും ഒരേ അളവിൽ പരിഹാരം ഉപയോഗിച്ചു (F_3,111= 0.127, P>0.05, മിക്സഡ് ടു-വേ ANOVA) (ചിത്രം 4B). മൊത്തം എട്ട് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകൾക്ക് ശേഷം, രണ്ട് കുപ്പി പരിശോധനയിൽ രസം മുൻഗണന വിലയിരുത്തി, അതിൽ എലികൾക്ക് ഒരേസമയം രണ്ട് സുഗന്ധ പരിഹാരങ്ങളിലേക്കും പ്രവേശനം ഉണ്ടായിരുന്നു (ചിത്രം. 4). സ്ഥിതിവിവര വിശകലനത്തിൽ സ്വാദും കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് ലഭിച്ച മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ ചികിത്സയും തമ്മിലുള്ള സുപ്രധാന ഇടപെടൽ വെളിപ്പെടുത്തി (ചിത്രം 4c). മോക്ക്-ജോടിയാക്കിയ ഫ്ലേവറുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഇൻ‌സാബ് ജോടിയാക്കിയ രസം ഇൻ‌സാബ് ഗ്രൂപ്പ് വളരെ കുറവാണ്.ചിത്രം 4c), അതേസമയം വാഹന ഗ്രൂപ്പ് ഫ്ലേവർ മുൻ‌ഗണന കാണിച്ചില്ല (ചിത്രം 4c), ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗ് ഒരു മധുരമുള്ള കലോറിക് പരിഹാരം തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിന് കാരണമായി എന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. വാഹനവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഇൻ‌സാബ്-മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്റ്റഡ് എലികൾ‌ ഇൻ‌ഫ്യൂഷൻ‌-ജോടിയാക്കിയ രസം വളരെ കുറവാണ്, കൂടാതെ മോക്ക്-ഇഞ്ചക്ഷൻ-ജോടിയാക്കിയ സ്വാദും (ചിത്രം 4c). IgG യുടെ മൈക്രോഇൻ‌ജെക്ഷൻ (t(9) = 0.792. P>0.05, പരിരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു t-ടെറ്റുകൾ) അല്ലെങ്കിൽ പി‌ബി‌എസ് (t(9) = 0.442. P>0.05, പരിരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു t-സ്റ്റെറ്റുകൾ) ഫ്ലേവർ മുൻ‌ഗണനയെ ബാധിച്ചില്ല (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല), ഇൻ‌സാബ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷന്റെ നിർ‌ദ്ദിഷ്‌ട ഇഫക്റ്റ് ഉപഭോഗം അല്ലെങ്കിൽ‌ ഫ്ലേവർ‌ മുൻ‌ഗണന കുറയാനുള്ള സാധ്യതയ്‌ക്കെതിരെ വാദിക്കുന്നു. ഇൻ‌സാബ് ഗ്രൂപ്പിനായി സെഷനും സെഷൻ‌ തരവും (യഥാർത്ഥ ഇൻ‌ഫ്യൂഷനും മോക്ക് ഇൻ‌ഫ്യൂഷനും) തമ്മിൽ യാതൊരു ഇടപെടലും ഇല്ലാത്തതിനാൽ‌, പരിശോധനയിൽ‌ ഇൻ‌സാബ് ഗ്രൂപ്പിന്റെ മുൻ‌ഗണന കുറഞ്ഞ നോവൽ‌ ഫ്ലേവറിനുള്ള മുൻ‌ഗണനയല്ല എന്നതും ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്.F_3,54= 1.584, P> 0.05, ടു-വേ ANOVA). അതായത്, ഇൻ‌സാബ് ഇൻ‌ഫ്യൂഷൻ‌-ജോടിയാക്കിയ ഫ്ലേവറുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ‌ ഇൻ‌സാബ് ഗ്രൂപ്പ് മോക്ക്-ഇൻ‌ഫ്യൂഷൻ‌-ജോടിയാക്കിയ രസം കൂടുതൽ‌ ഉപയോഗിച്ചില്ല; പകരം, ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ ഇൻഫ്യൂഷൻ കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ മാത്രമാണ് ഉയർന്നുവന്നത്. മൊത്തത്തിൽ, ഗ്ലൈസെമിക് ലോഡിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്ന ഒരു രസം മുൻഗണന ശക്തിപ്പെടുത്തുന്നതിൽ എൻ‌എസിയിലെ ഇൻസുലിൻ ഒരു പങ്കു വഹിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

InsR- കൾ വഴി ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റി മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിലൂടെ ഇൻസുലിൻ സ്‌ട്രാറ്ററ്റൽ ഡിഎ റിലീസിനെ എൻ‌എസി‌ആർ-ആശ്രിത രീതിയിൽ വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങൾ ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്യുന്നു. തൃപ്‌തികരമായ സിഗ്നലിംഗിൽ ഇൻസുലിൻ അതിന്റെ സ്ഥാപിത പങ്ക് കൂടാതെ ഒരു റിവാർഡ് സിഗ്നലായി വർത്തിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. എഫ്‌ആർ‌ക്ക് ശേഷം ഇൻ‌സുലിൻ‌ സംവേദനക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിച്ചുകൊണ്ട് ഡി‌എ റിലീസിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻറെ സ്വാധീനം ഭക്ഷണത്തിലൂടെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യപ്പെടുന്നു എന്നത് ശ്രദ്ധേയമാണ്, പക്ഷേ ഒ‌ബി ഡയറ്റിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ വർദ്ധിപ്പിച്ച നിയന്ത്രണത്തിന്റെ പൂർണ്ണമായ നഷ്ടം. പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ അളവ് ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നുവെന്ന് കണ്ടെത്തിയെങ്കിലും ഇൻസുലിൻ അളവ് രക്തചംക്രമണവുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഇൻസ്ആർ സംവേദനക്ഷമതയിലെ മാറ്റങ്ങൾ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നതായി തോന്നുന്നു, പക്ഷേ എൻ‌എ‌സി‌ആർ സംവേദനക്ഷമത ഉണ്ടായിരുന്നില്ല. അവസാനമായി, മൃഗങ്ങളോട് പെരുമാറുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഞങ്ങളുടെ ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് പഠനങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗ് ഭക്ഷണ മുൻ‌ഗണനയെ സ്വാധീനിക്കുന്നു, ഇത് ഭക്ഷണവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട പഠനത്തിൽ ഇൻസുലിൻ ഉൾക്കൊള്ളുക മാത്രമല്ല, പ്രതിഫല സിഗ്നലായി അതിന്റെ പങ്ക് സ്ഥിരീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

നെറ്റ് [DA]_o ഡി‌എ റിലീസും ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലും തമ്മിലുള്ള ബാലൻസ് പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു. DAT പ്രവർത്തനം നിയന്ത്രിക്കാൻ ഇൻസുലിൻ സഹായിക്കുമെന്ന് കാണിക്കുന്ന മുമ്പത്തെ തെളിവുകൾ^{18, 19, 20, 21, 22, 23} ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിക്കുന്നത് ആവിഷ്കരിച്ച [ഡിഎ] കുറയാൻ കാരണമാകുമെന്ന പ്രവചനത്തിലേക്ക് നയിച്ചു._o വർദ്ധിച്ച ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കൽ വഴി. എന്നിരുന്നാലും, സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ, ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം ഇതിനേക്കാൾ സങ്കീർണ്ണമാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. ഇൻസുലിൻ എക്സ്പോഷർ വർദ്ധിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും V_{പരമാവധി} DAT നെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, ഇൻ‌സുലിൻറെ പ്രാഥമിക ഫലം ഡി‌എ റിലീസിലായിരുന്നു, ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിലല്ല, ആവിഷ്കരിച്ച [ഡി‌എ] സ്ഥിരമായ വർദ്ധനവോടെ._o എൻ‌എസി ഷെല്ലിലും കോർ, സിപിയു എന്നിവയിലെ ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രതയുടെ ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിധിയിലുടനീളം. വർദ്ധിച്ചെങ്കിലും [DA]_o 100 nM ന്റെ ഒരു സൂപ്പർഫിസിയോളജിക്കൽ സാന്ദ്രതയിൽ നിയന്ത്രണ നിലകളിലേക്ക് പഴയപടിയാക്കി, V_{പരമാവധി} നിയന്ത്രണത്തിൽ നിന്ന് മാറ്റമില്ലാതെ, വിശദീകരണമായി DAT- യിലെ പ്രധാന സ്വാധീനം ഇല്ലാതാക്കുന്നു. പകരം, ഏറ്റെടുക്കലിനേയും റിലീസിനേയും ബാധിക്കുന്ന നഷ്ടം ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ ഡിസെൻസിറ്റൈസേഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ഉയർന്ന ഇൻസുലിൻ സാന്ദ്രതയിൽ ഡ st ൺസ്ട്രീം സിഗ്നലിംഗ് പാതകളെ തരംതാഴ്ത്തുന്നതിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. പെരിഫറൽ ടിഷ്യൂകളിൽ ഇൻസുലിൻ ബന്ധിപ്പിച്ചതിനുശേഷം ഇൻ‌സ്ആർ‌മാർ‌ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള എൻ‌ഡോസൈറ്റോസിസിനും അധ d പതനത്തിനും വിധേയമാകുന്നു¹, ഉയർന്ന അളവിലുള്ള ഇൻസുലിൻ അല്ലെങ്കിൽ ഉയർന്ന കലോറി ഭക്ഷണരീതികളിലേക്ക് ഹ്രസ്വകാല എക്സ്പോഷർ ചെയ്തതിന് ശേഷം ന്യൂറോണൽ ഇൻസ്ആർ സംവേദനക്ഷമത നഷ്ടപ്പെടുന്നതിന് തെളിവുകൾ സഹിതം^{10, 11, 39}.

ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡിഎ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ഇൻസുലിൻ പ്രബലമായ പ്രഭാവം മറ്റ് രണ്ട് സമീപകാല ഫലങ്ങളുമായി വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു ex vivo സ്ലൈസ് പഠനങ്ങൾ. ആദ്യത്തേതിൽ, ഇൻസുലിൻ വൈദ്യുതപ്രേരിത ഓവർഫ്ലോ കുറയാൻ കാരണമായി [³എച്ച്] വർദ്ധിച്ചെങ്കിലും സ്‌ട്രാറ്റിയൽ സ്ലൈസുകളിൽ നിന്നുള്ള ഡി.എ.³H] DAT തടഞ്ഞപ്പോൾ DA ഓവർഫ്ലോ കണ്ടെത്തി²². പുറത്തിറക്കിയത് [³എച്ച്] സൂപ്പർഫ്യൂസിംഗ് ലായനിയിൽ കണ്ടെത്തുന്നതിന് ടിഷ്യുയിലുടനീളം DAT- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഏറ്റെടുക്കലിൽ നിന്ന് DA രക്ഷപ്പെടണം, ഈ പ്രോട്ടോക്കോൾ DAT നിയന്ത്രണത്തിന് പ്രത്യേകിച്ചും സെൻസിറ്റീവ് ആണ്. DI- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഏറ്റെടുക്കൽ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനൊപ്പം, ഇൻസുലിൻ ChI- കളിലൂടെയും NAACR ആക്റ്റിവേഷനിലൂടെയും ഡിഎ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു, ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിപ്പിച്ചതിലെ വിരോധാഭാസപരമായ വർദ്ധനവ് ഇത് വിശദീകരിക്കും [³H] DAT- ൽ മത്സരിക്കുന്ന ഇഫക്റ്റുകൾ തടഞ്ഞപ്പോൾ കണ്ട DA ഓവർഫ്ലോ²². രണ്ടാമത്തെ പഠനം വി‌ടി‌എയിലെ സോമാറ്റോഡെൻഡ്രിറ്റിക് ഡി‌എ റിലീസ് നേരിട്ട് കണ്ടെത്തുന്നതിന് എഫ്‌സിവി ഉപയോഗിച്ചു, പക്ഷേ ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിൽ ഇൻസുലിൻ പ്രബലമായ ഒരു പ്രഭാവം കണ്ടെത്തി, ഇത് കുറയുന്നത് [ഡി‌എ]_o (റഫ. 23). പ്രാദേശിക മൈക്രോ സർക്കിട്രി മുതൽ സോമാറ്റോഡെൻഡ്രിക് വേഴ്സസ് ആക്സോണൽ ഡി‌എ റിലീസ് മെക്കാനിസങ്ങൾ വരെയുള്ള നിരവധി ഘടകങ്ങളിലെ വ്യത്യാസങ്ങൾ⁴⁰, ഈ പ്രാദേശിക വ്യത്യാസത്തിന് കാരണമാകാം. എന്നിരുന്നാലും, ചുവടെ ചർച്ച ചെയ്തതുപോലെ, ഇൻസുലിൻ പ്രദേശികമായി ആശ്രയിക്കുന്ന റോളുകൾ പരസ്പരവിരുദ്ധമായതിനുപകരം പരസ്പര പൂരകമാകാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.

മുമ്പ്, ഡി‌എ സിഗ്നലിംഗിന്റെ ഇൻ‌സുലിൻ‌-ആശ്രിത നിയന്ത്രണത്തിന്റെ ഏതെങ്കിലും പങ്ക് ഡി‌എ ന്യൂറോണുകളിൽ‌ ഇൻ‌സ്ആറുകൾ‌ നേരിട്ട് സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുമെന്ന് കണക്കാക്കപ്പെട്ടിരുന്നു. ഇൻ‌ട്രോളുകൾ‌ സ്ട്രൈറ്റൽ‌ ChI കളിലും പ്രകടിപ്പിക്കുന്നുണ്ടെന്നും ഇൻ‌സുലിൻ‌ സ്ട്രൈറ്റൽ‌ ഡി‌എ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ChI എക്‌സിബിബിലിറ്റി മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നുവെന്നും ഇത് ഭക്ഷണത്തിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ സ്വാധീനിക്കുന്നതിൽ‌ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിച്ചേക്കാമെന്നും ഞങ്ങൾ‌ ഇവിടെ കാണിക്കുന്നു. തലാമസിന്റെ ഇൻട്രലാമിനാർ ന്യൂക്ലിയസുകളിൽ നിന്നുള്ള ന്യൂറോണുകളിൽ നിന്ന് സ്‌ട്രിയാറ്റൽ ChI- കൾക്ക് പ്രൊജക്ഷനുകൾ ലഭിക്കുന്നു, ഇത് പ്രധാന സെൻസറി ഉത്തേജനങ്ങൾക്ക് മറുപടിയായി പൊട്ടിത്തെറിക്കുന്ന വെടിവയ്പ്പ് പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ശ്രദ്ധ, ശക്തിപ്പെടുത്തൽ, അനുബന്ധ പഠനം എന്നിവയിൽ പ്രധാനമായ ChI- കളിൽ ബർസ്റ്റ്-പോസ് സ്പൈക്കിംഗ് പാറ്റേണുകൾ നയിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.⁴¹. ആയതിനാൽ‌, ഇൻ‌ട്രോളിൽ‌ ChI കളിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻറെ പ്രവർ‌ത്തനം തലാമിക് ഫയറിംഗിനോടുള്ള പ്രതികരണശേഷിയിൽ‌ സെൻ‌സറി ഫുഡ് സൂചകങ്ങളുടെ സ്വാധീനം വർദ്ധിപ്പിക്കും, ഇത് കഴിച്ച ഭക്ഷണത്തിൻറെ പ്രതിഫലമൂല്യത്തെക്കുറിച്ചുള്ള ധാരണ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു. ChI ആക്റ്റിവേഷൻ വഴി സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡി‌എ റിലീസിന്റെ നേരിട്ടുള്ള പ്രമോഷൻ, ഡി‌എ റിലീസിന്റെ ട്രിഗറുകളായി ChI- കൾ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്ന ഘടകങ്ങൾക്ക് ഒരു പ്രത്യേക പദവി ഉണ്ടായിരിക്കുമെന്ന നിർദ്ദേശത്തിലേക്ക് നയിച്ചു.³³. ഇൻ‌സുലിൻ‌ മെച്ചപ്പെടുത്തിയ ChI എക്‌സിബിറ്റബിലിറ്റിയും എ‌സി‌എ സിഗ്നലിംഗ് ഡ്രൈവിംഗ് ഡി‌എൻ‌എ റിലീസിലെ ചലനാത്മക വർദ്ധനവുമൊക്കെയായി ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ ഇതിന് ആദ്യത്തെ പിന്തുണാ തെളിവുകൾ നൽകുന്നു.

ഇൻസുലിൻ സാന്നിധ്യത്തിൽ എലവേറ്റഡ് ഡി‌എ റിലീസ് എ‌സി‌എച്ച് സിഗ്നലിംഗിലെ വർദ്ധനവിനെതിരെ വാദിക്കുന്നു, ഇത് എൻ‌എ‌സി‌ആർ ഡിസെൻസിറ്റൈസേഷൻ അല്ലെങ്കിൽ മസ്‌കറിനിക് എസിഎച്ച് റിസപ്റ്റർ (എം‌എസി‌ആർ) ആക്റ്റിവേഷന് കാരണമാകുന്നു, ഇവയിലേതെങ്കിലും സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [ഡി‌എ] അടിച്ചമർത്താൻ കഴിയും._o (റഫ 29, 30, 31, 42). അതിനാൽ, ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത സംവിധാനങ്ങൾ mAChR- കളുടെ ACH ആക്റ്റിവേഷനിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്‌തമാണ്, അവ വെറുപ്പും സംതൃപ്തിയും ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു⁴³.

സിംഗിൾ-പൾസ്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o AL എലികളേക്കാൾ FR, OB എലികളിൽ കുറവാണ്; ഈ ഫലങ്ങൾ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടുകളുമായി യോജിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും^{44, 45, 46}, ഞങ്ങളുടെ പഠനങ്ങൾ‌ ഒരു സ്ഥിരമായ സമയപരിധിക്കുള്ളിൽ‌ രണ്ട് ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളിലെ മൂന്ന്‌ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ‌ ഉപപ്രദേശങ്ങളുടെ ആദ്യത്തെ വ്യവസ്ഥാപിത താരതമ്യം നൽകുന്നു. ഡി‌എ റിലീസിലെ ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള മാറ്റങ്ങൾക്ക് അടിസ്ഥാനമായ സംവിധാനങ്ങൾ വിശദീകരിച്ചിട്ടില്ല, മാത്രമല്ല അവ ഇന്നത്തെ പഠനങ്ങളുടെ പരിധിക്കപ്പുറവുമാണ്. എന്നിരുന്നാലും, പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ അളവ് എഫ്‌ആർ, ഒബി ഡയറ്റുകൾക്ക് വിപരീതമായി മാറ്റം വരുത്തുന്നുവെങ്കിൽ, ആവിഷ്കരിച്ച [ഡിഎ] കുറയാൻ സാധ്യതയില്ല._o രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളിലും ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള ഇൻസുലിൻ അളവിന്റെ അനന്തരഫലമാണ്.

മറുവശത്ത്, ഭക്ഷണവുമായി ഇൻ‌സ്ആർ സംവേദനക്ഷമതയിലുണ്ടായ മാറ്റങ്ങളും അതിന്റെ ഫലമായി ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള പ്ലാസ്മ ഇൻസുലിൻ അളവും എഫ്‌ആറിലെ ഇൻസുലിൻ വർദ്ധിച്ച സംവേദനക്ഷമതയ്ക്കും ഒബിയിലെ ഇൻസുലിൻ പ്രതികരണശേഷി നഷ്ടപ്പെടുന്നതിനും ഏറ്റവും സാധ്യതയുള്ള വിശദീകരണം നൽകുന്നു. എ‌എല്ലിനെതിരായ എഫ്‌ആർ‌ അല്ലെങ്കിൽ‌ ഒ‌ബി എലികളിൽ‌ മാറ്റം വരുത്തിയ എൻ‌എ‌സി‌ആർ‌ സംവേദനക്ഷമതയെക്കുറിച്ച് ബദൽ‌ വിശദീകരണത്തിന് തെളിവുകളൊന്നുമില്ല. എഫ്‌ആറുമായുള്ള വർദ്ധിച്ച സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഇൻസ്‌ആർ സംവേദനക്ഷമത സൂചിപ്പിക്കുന്ന ആദ്യത്തേതിൽ ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ ഉണ്ടെങ്കിലും¹⁸, ശരീരഭാരം കുറയ്ക്കുന്നതിനൊപ്പം സി‌എസ്‌എഫിലെ ഇൻസുലിൻ അളവ് കുറയുന്നു⁷, ഇത് എഫ്‌ആറിലെ ഇൻസുലിൻ ഡിഎ റിലീസിന്റെ വർദ്ധിച്ച സംവേദനക്ഷമതയ്ക്ക് കാരണമാകും. വിപരീതമായി, ഒബി എലികളിലെ ഇൻസുലിൻ പ്രതികരണശേഷി കുറയുന്നത് ശരീരഭാരം അല്ലെങ്കിൽ ഒബി ഡയറ്റുകൾ മൂലമുണ്ടാകുന്ന മസ്തിഷ്ക ഇൻസ്ആർ സംവേദനക്ഷമത കുറയുന്നതിന് മുമ്പത്തെ തെളിവുകളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.^{3, 10, 11}.

നമ്മുടെ ex vivo സ്ലൈസ് ഡാറ്റ ഇൻസുലിൻ പ്രതിഫലത്തെയും സംതൃപ്തിയെയും സൂചിപ്പിക്കുമെന്ന അനുമാനത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ ഉഭയകക്ഷി ഇൻ‌സാബ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ ഉപയോഗിച്ച് എൻ‌ഡോജെനസ് ഇൻ‌സുലിൻറെ പ്രഭാവം തടഞ്ഞുകൊണ്ടാണ് ഞങ്ങൾ‌ ഈ സിദ്ധാന്തം പരീക്ഷിച്ചത്. പ്രതിഫലത്തിലെ ഒരു പങ്ക് അനുസരിച്ച്, ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം തടയുന്നത് ജോടിയാക്കിയ ഗ്ലൂക്കോസ് അടങ്ങിയ ലായനിയിലെ സ്വാദുള്ള മുൻഗണന കുറഞ്ഞു, ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സ്വാദും. എൻ‌എസി ഷെല്ലിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ തടയുന്നത് ഒരു കുപ്പി കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് ജോടിയാക്കിയ ലായനി ഉപഭോഗം കുറയുന്നു, അതേസമയം പരിഹാസമോ നിയന്ത്രണ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകളോ ഉപഭോഗത്തെ ബാധിച്ചില്ല. എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ ഇൻസുലിൻ ഭക്ഷണ മുൻ‌ഗണനയിൽ ഒരു പങ്കു വഹിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഫ്ലേവർ കണ്ടീഷനിംഗ് ഏറ്റെടുക്കുന്നതിന് എൻ‌എസിയിൽ കേടുകൂടാതെ ഡി‌എ സിഗ്നലിംഗ് ആവശ്യമാണെന്ന് മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്^{37, 38}, പോഷക പരിഹാരങ്ങളുടെ ശക്തിപ്പെടുത്തൽ ഫലങ്ങൾക്ക് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്നതിൽ എൻ‌എസി ഡി‌എയുടെ പങ്ക് സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു. ഈ വെളിച്ചത്തിൽ‌, ഇൻ‌സുലിൻ‌ ലഭ്യതയുമായി ജോടിയാക്കിയ ഗ്ലൂക്കോസ് ലായനിയുടെ മുൻ‌ഗണന എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ DAT- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻറെ പ്രാഥമിക ഫലത്തിനെതിരെ വാദിക്കുന്നു, കാരണം ഇത് കുറയുമെന്ന് പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു [DA]_o അതിനാൽ നിയന്ത്രണ-ജോടിയാക്കിയ രസം ഉപഭോഗം കുറയ്ക്കുക. എൻ‌എ‌സി ഷെല്ലിലെ ഇൻസുലിൻ മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ മൃഗങ്ങൾ ഓറൽ സുക്രോസ് സ്വയംഭരണത്തിൽ ഏർപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന സമയം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും സുക്രോസ് ഉപഭോഗത്തിൽ അതിർത്തി വർദ്ധനവ് വരുത്തുകയും ചെയ്ത ഒരു മുൻ പഠനത്തിലെ ഫലങ്ങളുമായി ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ സ്ഥിരത പുലർത്തുന്നു.²⁶, വർദ്ധിച്ച ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിന്റെ പ്രതീക്ഷിച്ച പരിണതഫലത്തിന് വിപരീതമായിരുന്നു ഇത്. മൊത്തത്തിൽ, ഈ ബിഹേവിയറൽ ഡാറ്റ സ്ട്രൈറ്റൽ ChI- കളിൽ ഇൻസുലിൻ പ്രവചിച്ച സ്വാധീനവും മെച്ചപ്പെടുത്തിയ DA റിലീസുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഈ ഫലങ്ങൾ മോണിറ്റേർഡ് ബിഹേവിയറുകളിൽ സ്ട്രൈറ്റൽ മൈക്രോ സർക്കിട്ടറിയുടെ മറ്റ് ഘടകങ്ങളുടെ പങ്കാളിത്തത്തെ ഒഴിവാക്കുന്നില്ല, സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഉടനീളം വ്യാപകമായ ഇൻ‌സ്ആർ എക്സ്പ്രഷൻ നൽകിയിട്ടുണ്ട്^{1, 14}.

കലോറി മൂല്യം ആശയവിനിമയം ചെയ്യുന്നതിൽ ഇൻസുലിൻ ഒരു പങ്കു വഹിക്കുന്നു എന്നതിന്റെ ആദ്യത്തെ തെളിവാണ് ഇവിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌ത പഠനങ്ങൾ, അതിനാൽ ഭക്ഷണത്തിന്റെ പ്രതിഫലദായകമായ ഫലങ്ങൾ, ഭാരം കുറഞ്ഞതും അമിതവണ്ണമുള്ളതുമായ വിഷയങ്ങളിൽ ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനിക്കുന്നതിൽ പ്രധാന സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു. രുചി കൈമാറ്റം ചെയ്യാനുള്ള വഴികൾ കേടുകൂടാതെയിരിക്കുമ്പോഴും, ഭക്ഷണത്തിനു ശേഷമുള്ള പ്രത്യാഘാതങ്ങൾ ഉണ്ടെന്ന് നിരവധി പഠനങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു⁴⁷, NAc DA റിലീസും സ്വഭാവത്തിന്റെ പോസിറ്റീവ് ബലപ്പെടുത്തലും വർദ്ധിപ്പിക്കുക^{37, 47}. അതിനാൽ, പോസ്റ്റ്-ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുന്ന ഇൻസുലിൻ പ്രതികരണം ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഗ്ലൈസെമിക് വിളവ് എൻ‌കോഡുചെയ്യുകയും ഉപഭോഗത്തെ പ്രാപ്തമാക്കുന്ന ഭക്ഷണ മുൻ‌ഗണനകളും പെരുമാറ്റങ്ങളും ശക്തിപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യും. എന്നിരുന്നാലും, ഇൻ‌സുലിൻ‌ ലെവലിൽ‌ വ്യാപകമായ മാറ്റങ്ങളും സെൻ‌ട്രൽ‌ ഇൻ‌സ്‌ആർ‌ സെൻ‌സിറ്റിവിറ്റിയും അസാധാരണമായതിനൊപ്പം അഡാപ്റ്റീവ് സ്വഭാവത്തിലും ഒരു പങ്കു വഹിച്ചേക്കാം. ഉദാഹരണത്തിന്, ഹൈപ്പർ ഇൻസുലിനീമിയയും എഫ്ആർ വിഷയങ്ങളിൽ ഇൻ‌സ്ആർ സെൻ‌സിറ്റിവിറ്റിയുടെ കോമ്പൻസേറ്ററി അപ്ഗ്രഗുലേഷനും അമിതമായി പെരുമാറുന്നതിനുള്ള ഒരു ഘടകമാണ്.⁴⁸. നേരെമറിച്ച്, ടൈപ്പ് II പ്രമേഹത്തിലോ അമിതവണ്ണത്തിലോ ഉള്ള സെൻട്രൽ ഇൻസുലിൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി, ഒബി എലികളിൽ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നത്, കഴിച്ചതിനെത്തുടർന്ന് പ്രതിഫലം കുറയുന്നതിന് കാരണമാകും, ഉയർന്ന ഗ്ലൈസെമിക് സൂചികയുള്ള ഭക്ഷണങ്ങൾ നഷ്ടപരിഹാരമായി നൽകാം^{49, 50}. അതിനാൽ, ഇൻസുലിൻ സംവേദനക്ഷമതയുടെ വർദ്ധനവ് അല്ലെങ്കിൽ കുറവ് പാത്തോളജിക്കൽ ഭക്ഷണത്തിന് കാരണമാകാം, ഇത് അമിത ഭക്ഷണത്തിനും / അല്ലെങ്കിൽ അമിതവണ്ണത്തിനും കാരണമാകുന്നു.

മൊത്തത്തിൽ, ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ റിവാർഡ് സിഗ്നലായി ഇൻസുലിൻ ഒരു പുതിയ പങ്ക് വെളിപ്പെടുത്തുന്നു. വി‌ടി‌എയിലേക്ക്‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്റ്റുചെയ്യുന്നത് ഹെഡോണിക് തീറ്റയും ഭക്ഷ്യ പ്രതിഫലവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സൂചനകൾ‌ക്കായുള്ള മുൻ‌ഗണനയും കുറയ്‌ക്കുമെന്ന് സമീപകാല കണ്ടെത്തലുകൾ‌ ഉൾപ്പെടെ, അത്തരം ഒരു പങ്ക് ഒരു തൃപ്തി സിഗ്നലായി അറിയപ്പെടുന്നു.^{23, 24}. ഈ ഡി‌എ-ആശ്രിത ഫംഗ്ഷനുകളിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ എതിർ‌ക്കുന്ന റോളുകൾ‌ എങ്ങനെ പൊരുത്തപ്പെടുത്താൻ‌ കഴിയും എന്ന ചോദ്യം ഇത് ഉയർ‌ത്തുന്നു. ഈ ഇഫക്റ്റുകൾ പരസ്പരവിരുദ്ധമായതിനേക്കാൾ പരസ്പര പൂരകമാണ് എന്നതാണ് ഉത്തരം. നിലവിലെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഇൻസുലിൻ കഴിച്ച ഭക്ഷണത്തിന്റെ പ്രതിഫലമൂല്യം അറിയിക്കുന്നു. സംതൃപ്‌തിയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നതിൽ ഇരട്ട പങ്ക് ഇൻസുലിൻ ഭക്ഷണം അവസാനിപ്പിക്കുന്നതിന്റെ പ്രധാന ഉദ്ദേശ്യത്തെ നിറവേറ്റാൻ അനുവദിച്ചേക്കാം, അതേസമയം തന്നെ അതിന്റെ പോഷകാഹാരവും പ്രതിഫലദായകവുമായ ഗുണങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഒരു മെമ്മറി സ്ഥാപിക്കുകയും അതുവഴി കുടൽ സ്വഭാവത്തിന്റെ ആവർത്തനം ശക്തിപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.

മൃഗങ്ങളുടെ കൈകാര്യം ചെയ്യൽ

മൃഗങ്ങളുടെ നടപടിക്രമങ്ങൾ എൻ‌എ‌എച്ച് മാർ‌ഗ്ഗനിർ‌ദ്ദേശങ്ങൾ‌ക്കനുസൃതമായിരുന്നു, കൂടാതെ എൻ‌യു‌യു സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ അനിമൽ കെയർ ആന്റ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകരിച്ചു. എല്ലാ മൃഗങ്ങളും 12 h പ്രകാശത്തിലായിരുന്നു: ഇരുണ്ട ചക്രം, 06: 00 മുതൽ 18: 00; ex vivo 08: 00, 12: 00 എന്നിവയ്ക്കിടയിൽ കഷ്ണങ്ങൾ തയ്യാറാക്കി. AL എലികളിലും എലികളിലും മെക്കാനിസ്റ്റിക് പഠനങ്ങൾ നടത്തി ex vivo മൃഗങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള കഷ്ണങ്ങൾ ജോഡികളായി സൂക്ഷിക്കുന്നു, അതേസമയം എല്ലാ ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പ് താരതമ്യത്തിനും പെരുമാറ്റ പഠനത്തിനും എലികളെ ഒറ്റയ്ക്ക് പാർപ്പിച്ചിരുന്നു.

എലി ഭക്ഷണ രീതികൾ

പ്രായപൂർത്തിയായ പുരുഷ സ്പ്രാഗ്-ഡാവ്‌ലി എലികൾ (ടാക്കോണിക്) 8-10 ആഴ്ചകൾ പഴക്കമുള്ളതാണ്, 21-30 ദിവസം നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന ഭക്ഷണ രീതികൾ ആരംഭിക്കുമ്പോൾ. എലികളെ സെമി-റാൻഡം ആയി ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളിലേക്ക് നിയോഗിച്ചു: വിഷയങ്ങളെ പ്രാരംഭ ഭാരം അനുസരിച്ച് റാങ്ക് ചെയ്തു, തുടർന്ന് എലികളുടെ ഓരോ മൂവരും ക്രമരഹിതമായി ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ വിതരണം ചെയ്തു. FR അല്ലെങ്കിൽ OB ഡയറ്റുകളിൽ ജോടിയാക്കിയ എലികളുടെ അതേ കാലയളവിൽ AL എലികൾക്ക് എലി ച ow സിലേക്ക് സ access ജന്യ ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു. എല്ലാ എലികൾക്കും സ to ജന്യമായി വെള്ളം ലഭ്യമായിരുന്നു. ഭക്ഷ്യ നിയന്ത്രണം മുമ്പത്തെപ്പോലെ നടപ്പാക്കിയിരുന്നു⁵¹; ചുരുക്കത്തിൽ, ശരീരഭാരം 40% കുറയ്ക്കുന്നതുവരെ എലികൾക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡ് എലി ച ow കഴിക്കുന്നതിന്റെ ALN ന്റെ 50-20% ദിവസേന ലഭിച്ചു, അതിനുശേഷം ഈ ഭാരം നിലനിർത്താൻ ഭക്ഷണം ടൈറ്ററേറ്റ് ചെയ്തു. ഒബി എലികൾക്ക് എലി ച ow, ചോക്ലേറ്റ് എന്നിവയിലേക്ക് സ access ജന്യ ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു, മിതമായ കൊഴുപ്പും പഞ്ചസാരയും അടങ്ങിയ വളരെ രുചികരമായ ദ്രാവകം ഉറപ്പാക്കുക⁵².

ഫോർ‌ബ്രെയിൻ ചാറ്റ് നോക്കൗട്ട് എലികൾ

ന്റെ സോപാധികമായ ഫ്ലോക്സ് അല്ലീലുള്ള എലികൾ ചാറ്റ് (ചാറ്റ്^{ഫ്ലോക്സ്}) a ഉപയോഗിച്ച് മറികടന്നു Nkx2.1^Cre എലികളെ ഉൽ‌പാദിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ട്രാൻസ്ജെനിക് ലൈൻ, അതിൽ എ‌സി‌എച്ച് സിന്തസിസ് നിർത്തലാക്കുന്നത് ഫോർ‌ബ്രെയിനിൽ പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു³². പരിവർത്തനം ചെയ്യാത്ത ട്രാൻസ്ജെനിക് ലിറ്റർമേറ്റുകൾ നിയന്ത്രണങ്ങളായിരുന്നു; അവരുടെ ജനിതകരൂപങ്ങൾ Cre⁺;ചാറ്റ്^{ഫ്ലോക്സ് / +} ക്രീ^-;ചാറ്റ്^{ഫ്ലോക്സ് / ഫ്ലോക്സ്} അവയെ 'ഹെറ്ററോസൈഗോട്ടുകൾ' എന്ന് വിളിക്കുന്നു. സ്ലൈസ് പഠനത്തിനായി ഉപയോഗിക്കുന്ന മുതിർന്ന പുരുഷ എലികൾ ഉണ്ടായിരുന്നു പരസ്യം libitum ച ow, വെള്ളം എന്നിവയിലേക്കുള്ള പ്രവേശനം.

എക്സ് വിവോ സ്ലൈസ് തയ്യാറാക്കലും ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിഹാരങ്ങളും

എലികളോ എലികളോ 50 mg കിലോ ഉപയോഗിച്ച് ആഴത്തിൽ അനസ്തേഷ്യ ചെയ്തു^-1 പെന്റോബാർബിറ്റൽ (ഇൻട്രാപെറിറ്റോണിയൽ (ഐപി)) ശിരഛേദം ചെയ്തു. വോൾട്ടാമെട്രിക്കായി, ഐസ്-തണുത്ത ഹെപ്സ്-ബഫർ‌ഡ് കൃത്രിമ സി‌എസ്‌എഫ് (എസി‌എസ്‌എഫ്) അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ലൈക്ക വിടിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് വൈബ്രേറ്റിംഗ് ബ്ലേഡ് മൈക്രോടോമിൽ (ലൈക മൈക്രോസിസ്റ്റംസ്; (300); നഹ്‌കോ₃ (20); ഗ്ലൂക്കോസ് (10); ഹെപ്സ് ആസിഡ് (6.7); KCl (5); ഹെപ്സ് സോഡിയം ഉപ്പ് (3.3); CaCl₂ (2); MgSO₄ (2), 95% O യുമായി സന്തുലിതമാണ്₂/ 5% CO₂. പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് 1 h- നുള്ള temperature ഷ്മാവിൽ സ്ലൈസുകൾ ഈ ലായനിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു^{30, 32, 53}. ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്ക്, അനസ്തേഷ്യയ്ക്ക് ശേഷം, എലികളെ ട്രാൻസ്കാർഡിയലായി ഐസ്-തണുത്ത ലായനി ഉപയോഗിച്ച് (എം‌എമ്മിൽ) ഉൾക്കൊള്ളുന്നു: സുക്രോസ് (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്); KCl (225); CaCl₂ (0.5); MgCl₂ (7); നഹ്‌കോ₃ (28); NaH₂PO₄ (1.25); ഗ്ലൂക്കോസ് (7); അസ്കോർബേറ്റ് (1); ഒപ്പം പൈറുവേറ്റ് (3), കൂടാതെ 95% O യുമായി സമതുലിതമാവുന്നു₂/ 5% CO₂. ഈ ലായനിയിൽ കഷ്ണങ്ങൾ മുറിച്ചുമാറ്റി, (എം‌എമ്മിൽ‌) അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന പരിഷ്‌ക്കരിച്ച എസി‌എസ്‌എഫിൽ ഒരു റിക്കവറി ചേമ്പറിലേക്ക് മാറ്റി: NaCl (125); KCl (2.5); NaH₂PO₄ (1.25); നഹ്‌കോ₃ (25); MgCl₂(1); CaCl₂ (2); ഗ്ലൂക്കോസ് (25); അസ്കോർബേറ്റ് (1); പൈറുവേറ്റ് (3); ഒപ്പം മൈ-നോസിറ്റോൾ (4), 95% O യുമായി സന്തുലിതമാണ്₂/ 5% CO₂; ഈ പരിഹാരം തുടക്കത്തിൽ 34 at C ആയിരുന്നു, തുടർന്ന് room ഷ്മാവിൽ ക്രമേണ തണുക്കാൻ അനുവദിച്ചു⁵⁴. എല്ലാ വോൾട്ടാമെട്രി, ഫിസിയോളജി പരീക്ഷണങ്ങളും 32 at C ലെ ഒരു സബ്‌മെർ‌ഷൻ റെക്കോർഡിംഗ് ചേമ്പറിൽ നടത്തി, അത് 1.5 ml മി.^-1 (mM- ൽ) അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന aCSF ഉപയോഗിച്ച്: NaCl (124); KCl (3.7); നഹ്‌കോ₃ (26); CaCl₂ (2.4); MgSO₄ (1.3); കെ.എച്ച്₂PO₄ (1.3); ഒപ്പം ഗ്ലൂക്കോസ് (10), ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ (BSA, 0.05 - 0.1 mg ml^-1) 95% O ഉപയോഗിച്ച് സമതുലിതമാക്കി₂/ 5% CO₂; പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് 30 മിനുട്ട് ഈ പരിതസ്ഥിതിയിൽ സമതുലിതമാക്കാൻ സ്ലൈസുകൾ അനുവദിച്ചു.

ഫാസ്റ്റ്-സ്കാൻ ചാക്രിക വോൾട്ടമെട്രി

മസ്തിഷ്ക കഷ്ണങ്ങളിൽ എഫ്‌സിവി ഉപയോഗിച്ച് എവോക്ക്ഡ് ഡിഎ റിലീസ് പഠനങ്ങൾ നടത്തി^{32, 53} പുരുഷ എലികളിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയത് അല്ലെങ്കിൽ ചാറ്റ് ഫോർ‌ബ്രെയിൻ നോക്ക out ട്ട് എലികളും ഹെറ്ററോസൈഗോട്ട് നിയന്ത്രണങ്ങളും (5 - 8 ആഴ്ച). ലെ പഠനങ്ങൾ ചാറ്റ് നോക്ക out ട്ട് എലികൾ അന്ധരായിരുന്നു, പക്ഷേ എലി ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് വ്യക്തമായ പ്രതിഭാസങ്ങളുണ്ടായിരുന്നു, അത് അന്ധത ഒഴിവാക്കുന്നു. ഒരു മില്ലർ വോൾട്ടാമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ചാണ് വോൾട്ടാമെട്രിക് അളവുകൾ നടത്തിയത് (സെന്റ് ബാർത്തലോമിവിലെ ഡോ. ജൂലിയൻ മില്ലറിനും ലണ്ടൻ സർവകലാശാലയിലെ റോയൽ ലണ്ടൻ സ്‌കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ ആൻഡ് ഡെന്റിസ്ട്രിക്കും പ്രത്യേക അഭ്യർത്ഥന പ്രകാരം ലഭ്യമാണ്). എഫ്‌സി‌വിക്കായി ഒരു പരമ്പരാഗത ത്രികോണ തരംഗരൂപം ഉപയോഗിച്ചു, സ്കാൻ ശ്രേണി −0.7 മുതൽ + 1.3 V വരെ (Ag / AgCl നെതിരായി), 800 V s ന്റെ സ്കാൻ നിരക്ക്^-1, 100 ms ന്റെ സാമ്പിൾ ഇടവേള^{30, 32, 53}. ക്ലാംപെക്സ് എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് സോഫ്റ്റ്വെയർ (മോളിക്യുലർ ഡിവൈസുകൾ) നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഡിജിഡാറ്റ എക്സ്എൻഎംഎക്സ്ബി എ / ഡി ബോർഡ് ഉപയോഗിച്ചാണ് ഡാറ്റ നേടിയത്. ഏകാഗ്രമായ ഉത്തേജക ഇലക്ട്രോഡ് ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎ റിലീസ് ആവിഷ്കരിച്ചു; ഉത്തേജക പൾസ് ആംപ്ലിറ്റ്യൂഡ് 1200-7.0 mA ഉം ദൈർഘ്യം 0.4 wass ഉം ആയിരുന്നു^{30, 32, 53}. പ്രാദേശിക സിംഗിൾ-പൾസ് ഉത്തേജനം NAc കോർ, സിപിയു എന്നിവയിൽ ഉപയോഗിച്ചു; എന്നിരുന്നാലും, ആവിഷ്കരിച്ച [DA] വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ ഒരു ഹ്രസ്വ ഹൈ-ഫ്രീക്വൻസി പൾസ് ട്രെയിൻ (100 Hz- ലെ അഞ്ച് പൾസുകൾ) ഉപയോഗിച്ചു._o NAc ഷെല്ലിൽ. രണ്ട് ഉത്തേജക മാതൃകകളും പ്രവർത്തന സാധ്യതയും Ca ഉം ആയ DA റിലീസിനെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു²⁺ ആശ്രയിക്കുന്നത്, ഒരേസമയം പുറത്തിറങ്ങിയ ഗ്ലൂട്ടാമേറ്റ്, GABA എന്നിവയാൽ ബാധിക്കപ്പെടില്ല^{42, 55}, ഒപ്പം ഒരേസമയം പുറത്തിറങ്ങിയ എസിഎച്ച് വഴി ഇത് സുഗമമാക്കുന്നു^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. ആവിഷ്കരിച്ച [DA] കണക്കാക്കാൻ_o, എസി‌എസ്‌എഫിലെ ഓരോ പരീക്ഷണത്തിനുശേഷവും നൽകിയ പരീക്ഷണത്തിനിടെ ഉപയോഗിച്ച ഓരോ മരുന്നിന്റെയും സാന്നിധ്യത്തിലും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് at C യിൽ അറിയപ്പെടുന്ന ഡി‌എയുടെ സാന്ദ്രത ഉപയോഗിച്ച് ഇലക്ട്രോഡുകൾ കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്തു.⁵³.

ആവിഷ്കരിച്ച [DA] ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനം വിലയിരുത്തുന്നതിനുള്ള വോൾട്ടാമെട്രി പരീക്ഷണങ്ങൾ_o രണ്ട് പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് നേടി. ഇൻസുലിൻ (സിഗ്മ, I5523) പ്രഭാവത്തിനുള്ള സമയ കോഴ്സ് നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള പ്രാരംഭ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തിയത് നിരീക്ഷിച്ചാണ് നടത്തിയത് [DA]_o ഒരൊറ്റ സൈറ്റിലെ ഓരോ 5 മിനിറ്റിലും. സ്ഥിരമായി ആവിഷ്കരിച്ചതിന് ശേഷം ഇൻസുലിൻ പ്രയോഗിച്ചു [DA]_o ലഭിച്ചു (സാധാരണയായി 4 - 5 അളവുകൾ); 50-60 മിനിറ്റിന് ശേഷം ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം പരമാവധി ആയിരുന്നു, തുടർന്ന് അത് [DA]_o പരീക്ഷണ സമയത്തേക്ക് ഈ നിലയിൽ തുടർന്നു (സാധാരണയായി 90 മി. മൊത്തം ഇൻസുലിൻ എക്സ്പോഷർ; ചിത്രം 1c). തുടർന്ന്, റെക്കോർഡുചെയ്‌ത ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം വിലയിരുത്തി [DA]_o നിയന്ത്രണ സാഹചര്യങ്ങളിൽ (എസി‌എസ്എഫ് അല്ലെങ്കിൽ എസി‌എസ്എഫ് പ്ലസ് മരുന്ന്) ഓരോ മൂന്ന് സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപമേഖലകളിലും സ്ലൈസുകളിലുള്ള (ബ്രെഗ്മയിൽ നിന്ന് + എക്സ്എൻയുഎംഎംഎം) വ്യതിരിക്തമായ സൈറ്റുകളിൽ (എസി‌എസ്എഫ് അല്ലെങ്കിൽ എസി‌എസ്എഫ് പ്ലസ് മരുന്ന്) വീണ്ടും പരമാവധി ഇൻസുലിൻ ഇഫക്റ്റിന്റെ സമയത്ത് (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് മിനിറ്റിന് മുകളിലുള്ള സാമ്പിൾ) ഈ സാമ്പിളുകൾ ഓരോ ഉപമേഖലയ്ക്കും ശരാശരി കണക്കാക്കി. സ്ലൈസ് തയ്യാറാക്കിയതിനുശേഷം ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം കുറഞ്ഞു; സമയം കുറയ്ക്കുന്നതിന് ex vivo മൃഗങ്ങളുടെ ഉപയോഗം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിന്, സാധാരണയായി, ഒരു മൃഗത്തിൽ നിന്ന് രണ്ട് കഷ്ണങ്ങൾ ഒരേ സമയം റെക്കോർഡിംഗ് ചേമ്പറിൽ പരീക്ഷിച്ചു. എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ ട്രൈസാസെറ്റോക്സിമെത്തൈൽ ഈസ്റ്റർ (എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ-എ‌എം ഉൾപ്പെടെ) സൂപ്പർ‌ഫ്യൂസിംഗ് എ‌സി‌എസ്‌എഫ് വഴി ഇൻ‌സുലിൻറെ പ്രഭാവത്തെ വെല്ലുവിളിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന മരുന്നുകൾ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌ മിനിറ്റിന് മുമ്പ് പ്രയോഗിച്ചു._3; എൻസോ ലൈഫ് സയൻസസ്), എസ്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് (നോവോ നോർഡിസ്ക്), ലൈക്സ്നക്സ് (സിഗ്മ), പിക്രോപോഡോഫില്ലോടോക്സിൻ (പി‌പി‌പി; ടോക്രിസ്), മെക്കാമിലാമൈൻ (ടോക്രിസ്), ഡി‌എച്ച്ഇ (ടോക്രിസ്). ഫലങ്ങളിൽ വിവരിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, പീക്ക് [DA] അനുപാതത്തെ താരതമ്യപ്പെടുത്തിക്കൊണ്ട് ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിൽ നിക്കോട്ടിനിക് എസിഎച്ച് റിസപ്റ്ററുകളുടെ മാറ്റം വരുത്തിയ സംവേദനക്ഷമത പരീക്ഷിച്ചു._o 5 p (100 Hz) ഉപയോഗിച്ചുകൊണ്ട് 1 p ആവിഷ്കരിച്ചത് (5 p: 1 p അനുപാതം)^{30, 31} 0 - 500 nM നിക്കോട്ടിൻ (സിഗ്മ) സാന്നിധ്യത്തിൽ NAc കോറിൽ.

നിർണ്ണയിക്കൽ V _{പരമാവധി} [DA]_o സ്ട്രൈറ്റൽ സ്ലൈസുകളിലെ ട്രാൻസിയന്റുകൾ

DAT- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കലിൽ‌ ഇൻ‌സുലിൻ‌-ഇൻ‌ഡ്യൂസുചെയ്‌ത മാറ്റങ്ങൾ‌ വിലയിരുത്തുന്നതിന്, ആവിഷ്കരിച്ച [ഡി‌എ] വീഴുന്ന ഘട്ടത്തിന്റെ പ്രാരംഭ ഭാഗം_o എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റുചെയ്യുന്നതിന് മൈക്കിളിസ്-മെന്റൻ സമവാക്യത്തിൽ വളവുകൾ ഘടിപ്പിച്ചു V_{പരമാവധി} (പരമാവധി ഏറ്റെടുക്കൽ നിരക്ക് സ്ഥിരത)⁵⁶. K_m (ഇത് DA- നായുള്ള DAT യുടെ ബന്ധവുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു) 0.2 μM ൽ നിശ്ചയിച്ചിട്ടുണ്ട്, ഇത് സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപപ്രദേശങ്ങളിൽ സമാനമാണെന്ന് അറിയപ്പെടുന്നു⁵⁷ ഇൻസുലിൻ ബാധിക്കില്ല (കാണുക അനുബന്ധ ചിത്രം 4 അടിക്കുറിപ്പ്).

മുഴുവൻ സെൽ റെക്കോർഡിംഗ്

29- മുതൽ 35- ദിവസം പ്രായമുള്ള ആൺ എലികൾ വരെ മസ്തിഷ്ക കഷ്ണങ്ങൾ തയ്യാറാക്കി; ഡിഎ റിലീസ് പഠനങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ചതിന് സമാനമാണ് റെക്കോർഡിംഗ് വ്യവസ്ഥകൾ. മുഴുവൻ സെൽ കറന്റ്-ക്ലാമ്പ് റെക്കോർഡിംഗുകളും പരമ്പരാഗത രീതികൾ ഉപയോഗിച്ചു⁵⁴. ഇൻഫ്രാറെഡ് ഡിഫറൻഷ്യൽ-ഇന്റർഫറൻസ് കോൺട്രാസ്റ്റ് ഒപ്റ്റിക്‌സും × 51 വാട്ടർ-ഇമ്മേഴ്‌ഷൻ ഒബ്ജക്റ്റും ഉപയോഗിച്ച് ഒളിമ്പസ് BX40WI മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് (ഒളിമ്പസ് അമേരിക്ക, സെന്റർ വാലി, പി‌എ) ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്‌ട്രിയാറ്റൽ ChI- കൾ ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചത്. പൈപ്പറ്റ് ലായനി അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു (mM- ൽ): കെ-ഗ്ലൂക്കോണേറ്റ് (129); KCl (11); ഹെപ്സ് (10); MgCl₂ (2); EGTA (1); നാ₂-ATP (2); നാ₃-GTP (0.3); കൂടാതെ KOH ഉപയോഗിച്ച് pH 7.2-7.3 ലേക്ക് ക്രമീകരിച്ചു. ChAT ഇമ്മ്യൂണോആക്ടിവിറ്റിക്കായി റെക്കോർഡുചെയ്‌ത ന്യൂറോണുകൾക്കായി, 0.3% ബയോസൈറ്റിൻ പൈപ്പറ്റ് ലായനിയിൽ ഉൾപ്പെടുത്തി, ന്യൂറോണുകൾ സംക്ഷിപ്തമായി രേഖപ്പെടുത്തി (~ 5 മിനിറ്റ്) ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ ഉള്ളടക്കങ്ങൾ നേർപ്പിക്കുന്നത് കുറയ്ക്കുന്നതിന്. പൈപ്പറ്റ് പ്രതിരോധം ~ 3 - 5 MΩ ആയിരുന്നു. ഒരു ആക്സോപാച്ച് എക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ബി ആംപ്ലിഫയർ (മോളിക്യുലർ ഡിവൈസുകൾ, സണ്ണിവാലെ സിഎ), ലോ പാസ് ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് കിലോ ഹെർട്സ് എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് റെക്കോർഡിംഗുകൾ ലഭിച്ചു. സ്ഥാപിത ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്കൽ മാനദണ്ഡങ്ങൾക്കനുസരിച്ചാണ് ChI- കൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞത്²⁸; മിക്കതും തുടക്കത്തിൽ ടോണിക്കായി സജീവമായിരുന്നു, പക്ഷേ പാച്ചിംഗ് കഴിഞ്ഞ് പ്രവർത്തനം വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, നിലവിലെ കുത്തിവയ്പ്പിനോടുള്ള പ്രതികരണശേഷി കാലക്രമേണ ശക്തവും സ്ഥിരവുമായിരുന്നു, അതിനാൽ ChI എക്‌സിബിറ്റബിളിറ്റിയിൽ ഇൻസുലിൻ ചെലുത്തുന്ന സ്വാധീനത്തെക്കുറിച്ച് അന്വേഷിക്കാൻ ഇത് ഉപയോഗിച്ചു (ഫലങ്ങൾ കാണുക). ഈ പ്രതികരണത്തിൽ‌ ഇൻ‌സ്‌ആറുകളുടെയും ഐ‌ജി‌എഫ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറുകളുടെയും പങ്ക് പരിശോധിക്കുന്നതിനുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളിൽ‌, ഒരു ChI പാച്ച് ചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പായി എച്ച്‌എൻ‌എം‌പി‌എ അല്ലെങ്കിൽ പി‌പി‌പി കുറഞ്ഞത് 1 മിനിറ്റെങ്കിലും പ്രയോഗിച്ചു. ~ 20 മിനുട്ട് എക്‌സ്‌പോഷറിന് ശേഷം ഇൻസുലിൻ മാത്രം പരമാവധി ഫലങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കാറുണ്ട്, എന്നിരുന്നാലും ചില സെല്ലുകളിൽ, 16 മിനിറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ അതിൽ കൂടുതൽ വരെ വർദ്ധനവ് ഉണ്ടായിരുന്നില്ല. മാത്രമല്ല, പി‌പി‌പിയിൽ രേഖപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്ന ആറ് ന്യൂറോണുകളിൽ നാലിലും, ഇൻസുലിൻ വീണ്ടെടുക്കുന്നതിന് മുമ്പായി സ്‌പൈക്ക് നമ്പറിൽ പ്രാരംഭ കുറവുണ്ടാക്കി. തൽഫലമായി, എല്ലാ പരീക്ഷണങ്ങളിലും, ഇൻസുലിൻ പ്രയോഗത്തിന് തൊട്ടുമുമ്പുള്ള സ്പൈക്കുകളുടെ എണ്ണവുമായി സ്പൈക്ക് നമ്പറിലെ പരമാവധി പ്രഭാവം താരതമ്യപ്പെടുത്തി ഇൻസുലിൻ പ്രഭാവം കണക്കാക്കി. പീക്ക് ഇഫക്റ്റിലെത്താനുള്ള സമയത്തിലെ പ്രകടമായ വ്യത്യാസം സ്ലൈസിലെ റെക്കോർഡുചെയ്‌ത സെല്ലിന്റെ ആഴം ഉൾപ്പെടെ നിരവധി ഘടകങ്ങളെ പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം. താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്ന സമയ പോയിന്റുകളിൽ ഇൻസുലിൻ ഇല്ലാത്ത സാഹചര്യത്തിൽ ChI- കളിൽ ആവിഷ്കരിച്ച പ്രവർത്തന സാധ്യതകളും രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.

ഉയർന്ന പ്രകടനമുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി

ഇലക്ട്രോകെമിക്കൽ ഡിറ്റക്ഷൻ ഉള്ള ഉയർന്ന പ്രവർത്തനക്ഷമതയുള്ള ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഉപയോഗിച്ചാണ് എലി സ്ട്രിയറ്റൽ സ്ലൈസുകളുടെ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്- thicknessm കനം) ഡി‌എ ഉള്ളടക്കം നിർണ്ണയിച്ചത്.⁵⁸. സ്ലൈസ് ജോഡികൾ എസി‌എസ്‌എഫിലെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മിനിറ്റിന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മിനിറ്റിന് സമതുലിതമാക്കി, തുടർന്ന് ഒരു ജോഡിക്ക് ഒരു സ്ലൈസ് അധിക എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മിനിറ്റിന് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് at സിയിൽ എസി‌എസ്‌എഫിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു, മറ്റൊന്ന് എസി‌എസ്‌എഫിൽ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എൻ‌എം ഇൻസുലിൻ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. ഡയറ്റ് ഗ്രൂപ്പ് താരതമ്യത്തിനായി, 30-32 മി. പോസ്റ്റ്-റിക്കവറിയിൽ സ്ട്രൈറ്റൽ ടിഷ്യു ശേഖരിച്ചു. ഇൻകുബേഷനെത്തുടർന്ന്, അധിക എസി‌എസ്‌എഫ് കഷ്ണങ്ങളിൽ നിന്ന് ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം നീക്കംചെയ്തു, സ്ട്രൈറ്റൽ ടിഷ്യുവിന്റെ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എം‌ജി) ഒരു സാമ്പിൾ തൂക്കി, ഉണങ്ങിയ ഐസ് ഉപയോഗിച്ച് ഫ്രീസുചെയ്ത് പിന്നീട് −60 at C ൽ സൂക്ഷിക്കുന്നു. വിശകലന ദിവസം, സാമ്പിളുകൾ ഐസ്-തണുത്ത, വിശദമായ, ആർഗോൺ ഉപയോഗിച്ച് ഡീഓക്സിജൻ ഉള്ള സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു⁵⁸, 2 മിനിറ്റിനായി ഒരു മൈക്രോസെൻട്രിഫ്യൂജിൽ കറങ്ങുന്നു, കൂടാതെ സൂപ്പർനേറ്റന്റ് എച്ച്പി‌എൽ‌സി നിരയിലേക്ക് നേരിട്ട് കുത്തിവയ്ക്കുന്നു (BAS, വെസ്റ്റ് ലഫായെറ്റ്, IN); എഗ് / എ‌ജി‌സി‌എല്ലിനെതിരായി എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് വിയിൽ സജ്ജീകരിച്ച ഗ്ലാസ്സി കാർബൺ ഇലക്ട്രോഡായിരുന്നു ഡിറ്റക്ടർ.

ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോഹമിസ്ട്രി

ഇമ്മ്യൂണോഹിസ്റ്റോകെമിക്കൽ ലേബലിംഗിനായി, എലികളെ സോഡിയം പെന്റോബാർബിറ്റൽ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലിഗ്രാം കിലോ) ഉപയോഗിച്ച് അനസ്തേഷ്യ ചെയ്തു^-1, ip), തുടർന്ന് പി‌ബി‌എസ് (154 mM ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിലെ 10 mM NaCl, pH 7.2) ഉപയോഗിച്ച് ട്രാൻസ്‌കാർഡിയലായി പെർഫ്യൂസ് ചെയ്തു, തുടർന്ന് ഈ PBS- ൽ 4% പാരഫോർമൽഡിഹൈഡ്; തലച്ചോറുകൾ നീക്കം ചെയ്യുകയും കൊറോണൽ വിഭാഗങ്ങൾ (20 μm) പരമ്പരാഗതമായി മുറിക്കുകയും പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു^{27, 59}. സ്പോട്ട് സോഫ്റ്റ്വെയർ (ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ഇൻസ്ട്രുമെന്റ്സ് ഇങ്ക്) നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഡിജിറ്റൽ ക്യാമറയുള്ള ഒരു നിക്കോൺ പിഎം എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് കോൺ‌ഫോക്കൽ മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ചും ഒരു × 800 ഒബ്ജക്റ്റ് (ന്യൂമെറിക്കൽ അപ്പർച്ചർ = എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്) ഉപയോഗിച്ചോ അല്ലെങ്കിൽ ഒരു × 100 ഉപയോഗിച്ച് ഒരു സീസ് എൽ‌എസ്‌എം എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് കൺ‌ഫോക്കൽ മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ചോ ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് ചിത്രങ്ങൾ ലഭിച്ചു. ഒബ്ജക്റ്റ് (സാംഖിക അപ്പർച്ചർ = 1.4). ആർഗോൺ (510 nm), He / Ne (63 nm), He / Ne (1.2 nm) എന്നിവയായിരുന്നു ലേസറുകൾ. ഓരോ ലേസറിനും ഉചിതമായ ഫിൽട്ടറുകൾ കോൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്‌കോപ്പ് സോഫ്റ്റ്വെയർ തിരഞ്ഞെടുത്തു. ഉപയോഗിച്ച ഒബ്ജക്റ്റും സെക്ഷൻ കനവും ഉപയോഗിച്ച് പിൻഹോൾ വലുപ്പം വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു z-സ്റ്റാക്ക് ജനറേഷൻ; സോഫ്റ്റ്വെയർ സൂചിപ്പിച്ച ഒപ്റ്റിമൽ പിൻഹോൾ മൂല്യം ഞങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുത്തു (സാധാരണയായി 30 μm). അഡോബ് ഫോട്ടോഷോപ്പ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഉപയോഗിച്ച് അന്തിമ ചിത്രങ്ങൾ പ്രോസസ്സ് ചെയ്തുകൊണ്ട് ഡിജിറ്റൽ ഫയലുകൾ ഡീകോൺവൊല്യൂഷൻ സോഫ്റ്റ്വെയർ (ഓട്ടോക്വാന്റ് ഇമേജിംഗ്) ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു. എല്ലാ ചിത്രങ്ങളും തെളിച്ചത്തിനും ദൃശ്യതീവ്രതയ്ക്കുമായി ക്രമീകരിച്ചു; അത്തരം ക്രമീകരണങ്ങൾ ചിത്രത്തിന്റെ എല്ലാ ഭാഗങ്ങളിലും ഒരേപോലെ ചെയ്തു. രണ്ട് ടിഎച്ച് ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്ട്രിയറ്റൽ ഡിഎ ആക്സോണുകൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞത്: പോളിക്ലോണൽ എബിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് റാബിറ്റ് ആന്റി ടിഎച്ച് (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്), മോണോക്ലോണൽ എം‌ബി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് മ mouse സ് ആന്റി-ടിഎച്ച് (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്) (രണ്ടും കെമിക്കോണിൽ നിന്ന്). മൂന്ന് ഇൻ‌സ്ആർ ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ചു: sc-7.0, sc-152 (1: 800; സാന്താക്രൂസ്), PP318 (ഫൈസറിൽ നിന്നുള്ള ഒരു സമ്മാനം). ഓരോന്നിന്റെയും പ്രത്യേകത മുമ്പ് തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്^{60, 61}, അനുബന്ധ പഠനങ്ങളിൽ പെപ്റ്റൈഡിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ sc-57342 അല്ലെങ്കിൽ PP5 ആന്റിബോഡികളുള്ള ഇമ്യൂണോലാബെല്ലിംഗിന്റെ അഭാവം സ്ഥിരീകരിച്ചു. ചാറ്റ് ആന്റിബോഡി AB144 (1: 200; മില്ലിപോർ), ബയോട്ടിൻ വെക്റ്ററിൽ നിന്നുള്ളതാണ് (1: 200). ഉപയോഗിച്ച ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡികൾ കഴുത ആന്റി റാബിറ്റ് അലക്സാ എക്സ്എൻഎംഎക്സ് (ഇൻവിട്രോജൻ), അല്ലെങ്കിൽ കഴുത ആന്റി റാബിറ്റ് സൈക്സ്നക്സ് (ജാക്സൺ ലബോറട്ടറി, ബാർ ഹാർബർ, എംഇ), കഴുത ആന്റി-ആട് സൈക്സ്നക്സ് (ജാക്സൺ), കഴുത ആന്റി-മൗസ് സൈക്സ്നക്സ് (ജാക്സൺ) എന്നിവയായിരുന്നു.

ടിഎച്ച് + ആക്സോണുകളിലെ ഇൻ‌സ്ആറുകളുടെ കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ വിലയിരുത്തുന്നതിന്, എടിപി-സെൻ‌സിറ്റീവ് കെ യുടെ സുഷിര രൂപീകരണ ഉപ യൂണിറ്റായ കിർ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്‌സിന്റെ സാന്നിധ്യം തിരിച്ചറിയാൻ ഞങ്ങൾ മുമ്പ് വിവരിച്ച രീതികൾ ഉപയോഗിച്ചു.⁺ ഡിഎ ആക്സോണുകളിലെ ചാനലുകൾ²⁷. ക്രമീകരിച്ച ചിത്രങ്ങളിലുടനീളം ഇൻ‌സ്‌ആറുകളെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്ന പൻ‌ക്റ്റ വിതരണം ചെയ്തു, ഇത് ടിഎച്ച് രോഗപ്രതിരോധ ശേഷി ഉള്ള സൂപ്പർ‌പോസിഷൻ ഒരു പരിധിവരെ ആകസ്മികമായി സംഭവിക്കാം എന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഈ അനുമാനം പരിശോധിക്കുന്നതിന്, രണ്ട് എലികളിൽ നിന്ന് മൂന്ന് എൻ‌എസി ഇമ്മ്യൂണോലബൽഡ് വിഭാഗങ്ങളിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് സ്വതന്ത്ര ഫീൽഡുകളിലെ ഇൻ‌സ്ആർ / ടിഎച്ച് സൂപ്പർഇമ്പോസിഷനുകൾ ഞങ്ങൾ കണക്കാക്കി. ഇൻ‌സ്ആർ ഡിജിറ്റൽ ഫയലുകൾ‌ പിന്നീട് 42 ° ഘടികാരദിശയിൽ‌ തിരിക്കുകയും എണ്ണങ്ങൾ‌ ആവർത്തിക്കുകയും ചെയ്‌തു; റൊട്ടേഷൻ മിക്ക ഫീൽഡുകളിലും ടിഎച്ചിനൊപ്പം പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ച ഇൻസ്ആർ പങ്ക്ടയുടെ എണ്ണം കുറച്ചു (ഫലങ്ങൾ കാണുക). ഭ്രമണത്തോടുകൂടിയ സൂപ്പർഇമ്പോസിഷനുകളുടെ എണ്ണം കുറയുന്നു²⁷ ഡി‌എ ആക്സോണുകളുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഓരോ സ്ട്രൈറ്റൽ ഫീൽഡിലും ഇൻ‌സ്ആർ പൻ‌ക്റ്റയുടെ അനുപാതം സൂചിപ്പിച്ചു.

രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസും ഇൻസുലിൻ എലിസയും

സ്ലൈസ് പഠനത്തിനായി ശിരഛേദം ചെയ്യുന്ന സമയത്ത് തുമ്പിക്കൈ രക്തം ശേഖരിച്ചു. ഒരു സാധാരണ രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസ് മോണിറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് രക്തത്തിലെ ഗ്ലൂക്കോസ് ഉടനടി നിർണ്ണയിക്കപ്പെട്ടു. ഇൻസുലിൻ വേണ്ടി, അധിക രക്തം EDTA അടങ്ങിയ ട്യൂബുകളിൽ ശേഖരിക്കുകയും 1,500 ൽ കേന്ദ്രീകൃതമാക്കുകയും ചെയ്തുg 15 മിനുട്ടിനായി; ഒരു ആൽ‌പ്കോ റാറ്റ് ഇൻ‌സുലിൻ‌ എലിസ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് പ്രോസസ് ചെയ്യുന്നതുവരെ സൂപ്പർ‌നാറ്റൻറ് (പ്ലാസ്മ) ശേഖരിച്ച് −80 at C ൽ സൂക്ഷിച്ചു.

കാൻ‌യുല പ്ലെയ്‌സ്‌മെന്റും ഹിസ്റ്റോളജിക്കൽ വെരിഫിക്കേഷനും

തുടക്കത്തിൽ 350-425 ഗ്രാം ഭാരം വരുന്ന നാൽപത്തിയൊന്ന് മുതിർന്ന പുരുഷ സ്പ്രാഗ്-ഡാവ്‌ലി എലികൾ (ടാക്കോണിക്, ചാൾസ് റിവർ) കെറ്റാമൈൻ (100 mg കിലോ) ഉപയോഗിച്ച് അനസ്തേഷ്യ ചെയ്തു^-1, ip) xylazine (10 mg kg^-1, ip) കൂടാതെ സ്റ്റീരിയോടാക്സിക്കലായി രണ്ട് കാലാനുസൃതമായി ഇൻ‌വെല്ലിംഗ് ഗൈഡ് കാൻ‌യുല (26 ഗേജ്) ഉപയോഗിച്ച് ഇംപ്ലാന്റ് ചെയ്തു, NAc മീഡിയൽ ഷെല്ലിലെ ഇൻഫ്യൂഷൻ സൈറ്റുകളിലേക്ക് ഉഭയകക്ഷി 2.0 മില്ലീമീറ്റർ⁶² (ബ്രെഗ്മയ്ക്ക് മുൻവശത്തുള്ള എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എം‌എം; എലികൾക്ക് ബനാമൈൻ (1.6 mg കിലോ) നൽകി^-1, subcutaneous) അനസ്തേഷ്യയിൽ നിന്നും സുഖം പ്രാപിച്ചതിനു ശേഷമുള്ള ശസ്ത്രക്രിയയ്ക്ക് ശേഷമുള്ള വേദനസംഹാരിയായി. ശസ്ത്രക്രിയ കഴിഞ്ഞ് ഒരാഴ്ച കഴിഞ്ഞ്, എലികളെ എഫ്.ആറിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും (മുകളിൽ വിവരിച്ചത്) പഠനത്തിന്റെ ശേഷിക്കുന്ന ശസ്ത്രക്രിയയ്ക്ക് ശേഷമുള്ള വീണ്ടെടുക്കൽ ഭാരത്തിന്റെ 80% നിലനിർത്തുകയും ചെയ്തു. ബിഹേവിയറൽ ടെസ്റ്റിംഗ് പൂർത്തിയാക്കിയ ശേഷം ഹിസ്റ്റോളജിക്കലായി കാനുല പ്ലേസ്മെന്റ് നിർണ്ണയിക്കപ്പെട്ടു. ഓരോ എലിയും സി.ഒ.₂, ശിരഛേദം ചെയ്യുകയും തലച്ചോറ് നീക്കം ചെയ്യുകയും 10% ബഫർഡ് ഫോർമാലിൻ> 48 മണിക്കൂർ. ഫ്രീസുചെയ്‌ത കൊറോണൽ വിഭാഗങ്ങൾ (40-μm കനം) ഒരു റീചെർട്ട്-ജംഗ് ക്രയോസ്റ്റാറ്റിൽ മുറിച്ചുമാറ്റി, ജെലാറ്റിൻ-പൊതിഞ്ഞ ഗ്ലാസ് സ്ലൈഡുകളിൽ ഘടിപ്പിച്ച്, ക്രസീൽ വയലറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു. രണ്ട് കാൻ‌യുലകളും മധ്യ എൻ‌എസി ഷെല്ലിനുള്ളിലാണെങ്കിൽ‌ മാത്രം നൽകിയ എലിയിൽ‌ നിന്നുള്ള ഡാറ്റ ഉപയോഗിച്ചു⁶² (ഷെൽ / കോർ അല്ലെങ്കിൽ ഷെൽ / ഘ്രാണ ട്യൂബർ സർക്കിൾ ബോർഡർ ഉൾപ്പെടെ) (അനുബന്ധ ചിത്രം 5); ഈ മാനദണ്ഡങ്ങളുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, അന്തിമ വിശകലനത്തിൽ നിന്ന് രണ്ട് എലികളെ ഒഴിവാക്കി.

ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് കണ്ടീഷനിംഗ് പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ

എലികൾക്ക് ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് (ഹോം കേജിൽ) ആറ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-മിനി-പ്രതിദിന സെഷനുകൾ പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ (ടെസ്റ്റിംഗ് ചേമ്പറുകളിൽ) മുതൽ 30% സോഡിയം സാചാരിൻ (സിഗ്മ) വരെ വെള്ളത്തിൽ സെഷനുകൾക്കിടയിൽ ഒരു 0.2-h ഇടവേളയിൽ ലഭിച്ചു. എലികൾക്ക് 48% മധുരമില്ലാത്ത മുന്തിരി അല്ലെങ്കിൽ ചെറി കൂൾ-എയ്ഡ് (ക്രാഫ്റ്റ് ഫുഡ്സ്) വെള്ളത്തിൽ 5% സോഡിയം സാച്ചറിൻ എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്ന രണ്ട് 0.2- മിനിറ്റിന് പ്രതിദിന സെഷനുകൾ ലഭിച്ചു. ആദ്യത്തെ കൂൾ-എയ്ഡ് പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ സെഷനിൽ, എലികളിൽ പകുതിയും ചെറി-സുഗന്ധമുള്ള പരിഹാരവും മറ്റ് പകുതിക്ക് മുന്തിരി-സുഗന്ധ പരിഹാരവും ലഭിച്ചു. എല്ലാ എലികളും ഓരോ സ്വാദും സാമ്പിൾ ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് രണ്ടാമത്തെ കൂൾ-എയ്ഡ് പ്രീ-എക്സ്പോഷർ സെഷനിൽ സുഗന്ധങ്ങൾ മാറ്റി. എല്ലാ പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ സെഷനുകൾക്കും കഴിക്കുന്നത് അളന്നു. പുതിയ കിടക്കകളുള്ള വ്യക്തമായ പ്ലാസ്റ്റിക് കൂടുകളായിരുന്നു ടെസ്റ്റിംഗ് അറകൾ. എല്ലാ പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ സെഷനുകൾക്കും, അറയുടെ ഇരുവശത്തും ഒരേ പരിഹാരത്തിലേക്ക് എലികൾക്ക് പ്രവേശനമുണ്ടായിരുന്നു. ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ സെഷൻ ഒഴികെ, എല്ലാ സെഷനുകളും ഒരു ബിഹേവിയറൽ പ്രൊസീജിയർ റൂമിലാണ് നടത്തിയത്, ഏതെങ്കിലും പരിശീലനത്തിനോ പരിശോധനയ്‌ക്കോ മുമ്പായി ഒരു 0.05- മി.

ഒറ്റ കുപ്പി കണ്ടീഷനിംഗ്

വെൻട്രോമെഡിയൽ ഹൈപ്പോതലാമസിലേക്ക് ഇൻസാബിന്റെ മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ വഴി ഇൻസുലിൻ ഭക്ഷണ സ്വഭാവത്തിലും ഗ്ലൂക്കോൺ സ്രവത്തിലും ഉണ്ടാകുന്ന സ്വാധീനത്തെ തടയുമെന്ന് മുൻ പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.^{63, 64}. ഭക്ഷണം തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നതിൽ ഇൻസുലിൻ സാധ്യമായ പങ്ക് വിലയിരുത്താൻ ഞങ്ങൾ ഇവിടെ ഈ സമീപനം ഉപയോഗിച്ചു. കൺട്രോൾ അല്ലെങ്കിൽ പരീക്ഷണാത്മക (ഇൻ‌സാബ്) രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളായി ശരാശരി പ്രീ-എക്‌സ്‌പോഷർ ഇൻ‌ടേക്ക് വോള്യത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി എലികളെ സെമി റാൻഡം ആയി നിയോഗിച്ചു. നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പിൽ, എലികൾക്ക് വാഹനം ലഭിച്ചു (മൈക്രോഇൻ‌ജെക്ഷൻ പി‌ബി‌എസ്; എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എം‌എം ഫോക്ഫേറ്റ് ബഫറിലെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എം‌എം കെ‌സി‌എൽ) അല്ലെങ്കിൽ ഐ‌ജി‌ജി (അബ്‌കാം അബ്‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്;^-1 രണ്ട് സ്വാദുള്ള പരിഹാരങ്ങളിൽ ഒന്ന് കഴിക്കുന്നതിനുമുമ്പ് എൻ‌എസി ഷെല്ലിലെ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ, മറ്റ് സുഗന്ധമുള്ള ലായനി കഴിക്കുന്നതിനുമുമ്പ് ഒരു മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ. പരീക്ഷണാത്മക ഗ്രൂപ്പിൽ, എലികൾക്ക് ഇൻ‌സാബിന്റെ NAc ഷെൽ മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ ലഭിച്ചു (അബ്‌കാം ab46707; 0.5 μg Xl ന്റെ 1 μl^-1 ഒരു സ്വാദുള്ള ലായനിയിൽ എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പ് പി‌ബി‌എസിൽ, സ്വീകരിച്ചത് പോലെ), മറ്റൊന്ന് എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പായി മൈക്രോ ഇൻജെക്ഷൻ പരിഹസിക്കുക. ഫ്ലൂയിഡ് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനും മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനും തമ്മിൽ ഒന്നിടവിട്ടുള്ള രണ്ട് സെറ്റ് വിഷയങ്ങൾ‌ ഉപയോഗിച്ചു, അതിനാൽ‌ മൊത്തം മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകളുടെ എണ്ണം നാലായി പരിമിതപ്പെടുത്തി, അതുവഴി ടിഷ്യു കേടുപാടുകൾ‌ കുറയ്‌ക്കുകയും മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ സൈറ്റിൽ‌ സംവേദനക്ഷമത നഷ്ടപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു.⁶⁵. ഫ്ലൂയിഡ് മൈക്രോഇൻ‌ജെക്ഷനായി, കൺ‌ട്രോൾ സൊല്യൂഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ഇൻ‌സാബ് രണ്ട് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് സെന്റിമീറ്റർ നീളമുള്ള പി‌ഇ-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ട്യൂബിംഗിലേക്ക് ഒരു അറ്റത്ത് ഘടിപ്പിച്ചിട്ടുള്ള എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് aml ഹാമിൽട്ടൺ സിറിഞ്ചുകളിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ നിറച്ചിരിക്കുന്നു, മറുവശത്ത് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ഗേജ് ഇൻ‌ജെക്ടർ കാൻ‌യുലയിലേക്ക്, ഇത് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എം‌എം ഇംപ്ലാന്റ് ചെയ്ത ഗൈഡുകൾക്ക് അപ്പുറം. 30 infl ഇൻഫ്യൂഷൻ വോള്യങ്ങൾ 50 sl ന് 5 μl s എന്ന നിരക്കിൽ കൈമാറി^-1; വ്യാപനത്തിനുള്ള സമയം അനുവദിക്കുന്നതിനായി ഇൻജക്ടർ ~ 60 s ന് പകരം വച്ചിരുന്നു, തുടർന്ന് ഇൻജക്ടർ സ്റ്റൈലറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിച്ചു.

മൈക്രോഇൻ‌ജെക്ഷൻ അല്ലെങ്കിൽ മോക്ക് മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷൻ പൂർത്തിയാക്കി 2 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ എലികളെ നേരിട്ട് പെരുമാറ്റ അറകളിലേക്ക് മാറ്റി. കണ്ടീഷനിംഗ് പരിഹാരങ്ങളിൽ 0.2% സോഡിയം സാചാരിൻ, 0.05% മധുരമില്ലാത്ത മുന്തിരി അല്ലെങ്കിൽ ചെറി കൂൾ-എയ്ഡ്, 0.8% ഗ്ലൂക്കോസ് എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. പരിഹാര ആക്‌സസ് ഓരോ സെഷനും 30 മിനിറ്റായി പരിമിതപ്പെടുത്തി. ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലും ജോഡിയാക്കിയ സ്വാദും ചേംബറിന്റെ വശവും അർദ്ധ ക്രമരഹിതമായി നിയോഗിക്കുകയും സമതുലിതമാക്കുകയും ചെയ്തു. മൈക്രോ ഇൻ‌ജെക്ഷനുകൾ‌ക്കിടയിലുള്ള ഇടവേള കുറഞ്ഞത് 72 h ആയിരുന്നു, മൊത്തം എട്ട് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകൾ‌ക്ക് ഇൻ‌ഫ്യൂഷനും മോക്ക് സെഷനുകളും തമ്മിൽ മാറിമാറി.

രണ്ട്-കുപ്പി മുൻഗണന പരിശോധന

അവസാന കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷന് നാൽപത്തിയെട്ട് മണിക്കൂർ കഴിഞ്ഞ്, രണ്ട് കണ്ടീഷനിംഗ് സുഗന്ധങ്ങളിലേക്കും ഒരേസമയം പ്രവേശനമുള്ള ടെസ്റ്റിംഗ് ചേമ്പറുകളിൽ എലികളെ സ്ഥാപിച്ചു; ഗ്ലൂക്കോസ് ഇല്ലാതെ 0.2% മുന്തിരിയിലോ ചെറി കൂൾ-എയ്ഡിലോ 0.05% സോഡിയം സാച്ചറിൻ പരിഹാരങ്ങൾ. 2 ദിവസങ്ങളിൽ പരിശോധന നടന്നു (പ്രതിദിനം 60 മിനിറ്റ്). കേജിന്റെ ഇരുവശങ്ങളിലുമുള്ള ഓരോ ലായനിയുടെയും ഉപയോഗത്തിനായി ഓരോ എലിയും പരീക്ഷിച്ചുവെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് മോക്ക്-ജോടിയാക്കിയ അല്ലെങ്കിൽ ഇൻഫ്യൂഷൻ-ജോടിയാക്കിയ ലായനി അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ഡ്രിങ്കിംഗ് ട്യൂബിന്റെ സ്ഥാനം മാറിമാറി. മുൻ‌ഗണന നിർണ്ണയിക്കാൻ രണ്ട് ടെസ്റ്റ് ദിവസങ്ങളിൽ ഓരോ സുഗന്ധ പരിഹാരത്തിന്റെയും അളവ് ശരാശരി കണക്കാക്കി.

[³എച്ച്] ഇൻ‌സാബ് ഫലപ്രാപ്തി വിലയിരുത്തുന്നതിന് സ്ട്രിയറ്റൽ സിനാപ്റ്റോസോമുകളിൽ ഡി‌എ ഏറ്റെടുക്കൽ

സ്ട്രിയറ്റൽ സിനാപ്റ്റോസോമുകൾ^{21, 66} AL എലികളിൽ നിന്ന് (പുരുഷൻ, 350-400 g), NAc (ഷെൽ, കോർ), സിപിയു എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ച് പ്രത്യേകം തയ്യാറാക്കി. ഓരോ പ്രദേശത്തു നിന്നുമുള്ള ടിഷ്യു ഒരു ഐസ്-തണുത്ത 15 M സുക്രോസ് ലായനിയിലെ 0.32 വോള്യങ്ങളിൽ ഒരു ഗ്ലാസ് ഹോമോജെനൈസറിൽ മോട്ടോർ പ്രവർത്തിപ്പിക്കുന്ന ടെഫ്ലോൺ പെസ്റ്റലുമായി ഏകീകൃതമാക്കി; കഴുകിക്കളയുന്നതിനും കേന്ദ്രീകൃതമാക്കലിനും ശേഷം, ഐസ്-തണുത്ത 0.32 M സുക്രോസിൽ അവസാന ഗുളിക വീണ്ടും സസ്പെൻഡ് ചെയ്തു^{21, 66}. ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് [³എച്ച്] ഡിഎ ഏറ്റെടുക്കൽ പരിശോധന⁶⁶, 180 minl ന്റെ ഏറ്റെടുക്കൽ ബഫറിന്റെ മൊത്തം അളവിലുള്ള സിനാപ്‌ടോസോമൽ ആൽക്കോട്ടുകൾ 15 മിനുട്ട് 30 min C ന് 30 min C യിൽ ഒരു ഷേക്കറിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു, 1 nM ഇൻസുലിൻ സാന്നിധ്യത്തിലോ അഭാവത്തിലോ, വാഹനത്തിൽ (PBS) അല്ലെങ്കിൽ InsAb (അന്തിമ ഡില്യൂഷൻ 500: 1) , IgG (അന്തിമ ഡില്യൂഷൻ 500: 122) അല്ലെങ്കിൽ വാഹനത്തിൽ. ഏറ്റെടുക്കൽ ബഫർ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു (mM- ൽ): NaCl (XNUMX); നാ₂HPO₄ (3); NaH₂PO₄ (15); KCl (5); MgSO₄ (1.2); ഗ്ലൂക്കോസ് (10), CaCl₂ (1); നിയാലാമൈഡ് (0.01); ട്രോപോലോൺ (0.1); അസ്കോർബിക് ആസിഡ് (0.001), pH 7.4. ഏറ്റെടുക്കൽ [³H] ഓരോ സിനാപ്റ്റോസോമൽ സസ്പെൻഷന്റെയും 20 μl വേഗത്തിൽ 96- വെൽ പ്ലേറ്റുകളിലേക്ക് ഡിഎ (0.003-1.0 μM), [³H] DA (5 nM); 5 at C ലെ ഒരു പ്ലേറ്റ്-ഷേക്കറിലെ 25 മിനിറ്റിന് ശേഷം, തണുത്തതും വേഗത്തിലുള്ളതുമായ വാക്വം ഫിൽ‌ട്രേഷൻ വഴി ഏറ്റെടുക്കൽ അവസാനിപ്പിച്ചു⁶⁶. ഓരോ കിണറിനുമുള്ള എണ്ണം pmoles ആയി പരിവർത്തനം ചെയ്തു, തുടർന്ന് മിനിറ്റിൽ മൊത്തം പ്രോട്ടീന്റെ mg ആയി തിരുത്തി. എല്ലാ പരിശോധനകളും മൂന്നിരട്ടിയായി നടത്തുകയും കുറഞ്ഞത് നാല് തവണയെങ്കിലും ആവർത്തിക്കുകയും ചെയ്തു; V_{പരമാവധി} ഒപ്പം K_m ബയോസോഫ്റ്റ് കെൽ റാഡ്‌ലിഗ് സോഫ്റ്റ്വെയർ (കേംബ്രിഡ്ജ്, യുകെ) ഉപയോഗിച്ചാണ് കണക്കാക്കിയത്.

സ്ഥിതിവിവര വിശകലനം

ഡാറ്റ അർത്ഥമാക്കുന്നത് means sem; ജോടിയാക്കിയതോ ജോടിയാക്കാത്തതോ ആയ വിദ്യാർത്ഥികളെ ഉപയോഗിച്ച് പ്രാധാന്യം വിലയിരുത്തി t-ടെറ്റുകൾ അല്ലെങ്കിൽ ANOVA, മറ്റുവിധത്തിൽ സൂചിപ്പിച്ചിട്ടില്ലെങ്കിൽ. വോൾട്ടാമെട്രി ഡാറ്റയ്‌ക്കായി, n ഒരു റെക്കോർഡിംഗ് സൈറ്റുകളുടെ എണ്ണം, ഒരു സ്ട്രൈറ്റൽ ഉപമേഖലയിലെ സൈറ്റ്-ടു-സൈറ്റ് വേരിയബിളിറ്റി ഇന്റർ-അനിമൽ അല്ലെങ്കിൽ ഇന്റർ-സ്ലൈസ് വേരിയബിളിനേക്കാൾ വലുതാണെന്ന് കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ^{30, 32, 55, 56}; ഓരോ ഡാറ്റാ സെറ്റിനും മൃഗങ്ങളുടെ നമ്പർ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്. ഇസി₅₀ ഇൻസുലിൻ, നിക്കോട്ടിൻ എന്നിവ പീക്ക്-എവോക്ക്ഡ് [DA]_o പ്രിസം എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് (ഗ്രാഫ്പാഡ് സോഫ്റ്റ്വെയർ ഇങ്ക്., ലാ ജൊല്ല, സി‌എ) ഉപയോഗിച്ചാണ് കണക്കാക്കിയത്. ഇലക്ട്രോഫിസിയോളജിക്കൽ ഡാറ്റയ്ക്കായി, ജോടിയാക്കിയത് ഉപയോഗിച്ച് സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകളുടെ പ്രാധാന്യം വിലയിരുത്തി t-ടെറ്റുകൾ അല്ലെങ്കിൽ പ്രിസം എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സിൽ ഒരു വിൽ‌കോക്സൺ ടെസ്റ്റ്, അല്ലെങ്കിൽ എസ്‌എ‌എസ് എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സിൽ (എസ്‌എ‌എസ് ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂട്ട് ഇങ്ക്., കാരി, എൻ‌സി) ഒരു മിശ്രിത ടു-വേ അനോവ. ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് കണ്ടീഷനിംഗിൽ ഇൻസുലിൻ പങ്കാളിത്തം വിലയിരുത്തുന്നതിന്, ഉപയോഗിച്ച വാഹന ചികിത്സയൊഴികെ സമാനമായ പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് രണ്ട് പൂർണ്ണ പഠനങ്ങൾ പൂർത്തിയാക്കി. ആദ്യ പഠനത്തിൽ, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എലികൾക്ക് പി‌ബി‌എസിന്റെ വാഹന സന്നിവേശവും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്‌സിന് ഇൻ‌സാബിന്റെ സന്നിവേശവും ലഭിച്ചു. രണ്ടാമത്തെ പഠനത്തിൽ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എലികൾക്ക് ഐ‌ജിജിയുടെ വാഹന സന്നിവേശവും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്‌സിന് ഇൻ‌സാബിന്റെ സന്നിവേശവും ലഭിച്ചു. ഇൻഫ്യൂഷൻ കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ രണ്ട് വാഹന ഗ്രൂപ്പുകളും (പി‌ബി‌എസ് അല്ലെങ്കിൽ ഐ‌ജി‌ജി) തമ്മിൽ കാര്യമായ വ്യത്യാസമില്ല.F₁₉= 0.619, മിക്സഡ് ടു-വേ ANOVA) ഇൻഫ്യൂഷൻ-കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനിൽ ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളോടെ) അല്ലെങ്കിൽ പരിശോധനയിൽ (F₁₉= 0.012, രസം സംബന്ധിച്ച ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളുള്ള ദ്വി-വഴി മിക്സഡ് ANOVA). തൽഫലമായി, രണ്ട് പരീക്ഷണങ്ങളും വിശകലനത്തിനായി സംയോജിപ്പിച്ചു. ഈ വിശകലനത്തിനായി, കണ്ടീഷനിംഗ് സമയത്ത് മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ ചികിത്സയുടെ ഫലങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ ഒരു എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് × എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് മിക്സഡ് അനോവ (ഇൻഫ്യൂഷൻ-കണ്ടീഷനിംഗ് ദിനത്തിൽ ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളോടെ) ഉപയോഗിച്ചു, തുടർന്ന് പരിരക്ഷിതവും t-ടെറ്റുകൾ (ഏത് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ മൈക്രോ ഇൻജക്ഷൻ ചികിത്സയിൽ ഉപഭോഗം കുറയുന്നു എന്ന് നിർണ്ണയിക്കാൻ ഒരു വാലുണ്ട്). മോക്ക് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിലും ഇതേ വിശകലനം പൂർത്തിയാക്കി. രണ്ട് കുപ്പി ഫ്ലേവർ-പ്രിഫറൻസ് ടെസ്റ്റിനിടെ കണ്ടീഷനിംഗ് ചികിത്സയുടെ ഫലം നിർണ്ണയിക്കാൻ, മിശ്രിത ദ്വി-വേ ANOVA ഉപയോഗിച്ച് ഡാറ്റ വിശകലനം ചെയ്തു (രസം സംബന്ധിച്ച് ആവർത്തിച്ചുള്ള നടപടികളോടെ), തുടർന്ന് പരിരക്ഷിതവും t-ടെസ്റ്റുകൾ (ഇൻ‌സാബ് മുൻ‌ഗണന കുറയ്‌ക്കുമെന്ന അനുമാനത്തെ പരീക്ഷിക്കുന്നതിനായി ഒരു വാലുണ്ട്).

ഈ ലേഖനം എങ്ങനെ ഉദ്ധരിക്കാം: സ്റ്റഫർ, എം.എ. Et al. കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകൾ‌ സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ ഇൻ‌സുലിൻ‌ സ്ട്രൈറ്റൽ‌ ഡോപാമൈൻ‌ റിലീസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും അതുവഴി പ്രതിഫലത്തെ സൂചിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. നാറ്റ്. കമ്യൂൺ. 6: 8543 doi: 10.1038 / ncomms9543 (2015).

1. ഷൂലിംഗ്‌ക്യാമ്പ്, ആർ‌ജെ, പഗാനോ, ടിസി, ഹംഗ്, ഡി. & റാഫ, ആർ‌ബി ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്ററുകളും തലച്ചോറിലെ ഇൻസുലിൻ പ്രവർത്തനവും: അവലോകനവും ക്ലിനിക്കൽ ഫലങ്ങളും. ന്യൂറോസി. ബയോബെഹവ്. റവ. 24, 855–872 (2000).
   • CAS
   • ISI
   • PubMed
   • ലേഖനം
   • സന്ദർഭം കാണിക്കുക
2. ജെറോസിസിസ്, കെ. ബ്രെയിൻ ഇൻസുലിൻ, എനർജി, ഗ്ലൂക്കോസ് ഹോമിയോസ്റ്റാസിസ്; ജീനുകൾ, പരിസ്ഥിതി, ഉപാപചയ പാത്തോളജികൾ. യൂറോ. ജെ. ഫാർമകോൾ. 585, 38 - 49 (2008).
3. CAS
4. PubMed
5. ലേഖനം
6. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
7. CAS
8. PubMed
9. ലേഖനം
10. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
11. CAS
12. PubMed
13. ലേഖനം
14. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
15. CAS
16. PubMed
17. ലേഖനം
18. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
19. CAS
20. ISI
21. PubMed
22. ലേഖനം
23. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
24. ISI
25. PubMed
26. ലേഖനം
27. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
28. CAS
29. PubMed
30. ലേഖനം
31. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
32. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
33. CAS
34. ISI
35. PubMed
36. ലേഖനം
37. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
38. CAS
39. ISI
40. PubMed
41. ലേഖനം
42. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
43. CAS
44. ISI
45. PubMed
46. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
47. ISI
48. PubMed
49. ലേഖനം
50. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
51. CAS
52. ISI
53. PubMed
54. ലേഖനം
55. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
56. CAS
57. ISI
58. PubMed
59. ലേഖനം
60. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
61. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
62. CAS
63. ISI
64. PubMed
65. ലേഖനം
66. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
67. CAS
68. ISI
69. PubMed
70. ലേഖനം
71. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
72. CAS
73. ISI
74. PubMed
75. ലേഖനം
76. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
77. PubMed
78. ലേഖനം
79. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
80. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
81. CAS
82. PubMed
83. ലേഖനം
84. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
85. ISI
86. PubMed
87. ലേഖനം
88. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
89. CAS
90. ISI
91. PubMed
92. ലേഖനം
93. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
94. CAS
95. ISI
96. PubMed
97. ലേഖനം
98. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
99. CAS
100. PubMed
101. ലേഖനം
102. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
103. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
104. CAS
105. ISI
106. PubMed
107. ലേഖനം
108. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
109. CAS
110. ISI
111. PubMed
112. ലേഖനം
113. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
114. CAS
115. ISI
116. PubMed
117. ലേഖനം
118. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
119. CAS
120. ISI
121. PubMed
122. ലേഖനം
123. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
124. PubMed
125. ലേഖനം
126. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
127. CAS
128. ISI
129. PubMed
130. ലേഖനം
131. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
132. CAS
133. PubMed
134. ലേഖനം
135. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
136. CAS
137. ISI
138. PubMed
139. ലേഖനം
140. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
141. CAS
142. PubMed
143. ലേഖനം
144. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
145. ISI
146. PubMed
147. ലേഖനം
148. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
149. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
150. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
151. CAS
152. ISI
153. PubMed
154. ലേഖനം
155. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
156. CAS
157. ISI
158. PubMed
159. ലേഖനം
160. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
161. CAS
162. ISI
163. PubMed
164. ലേഖനം
165. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
166. CAS
167. ISI
168. PubMed
169. ലേഖനം
170. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
171. CAS
172. ISI
173. PubMed
174. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
175. CAS
176. ISI
177. PubMed
178. ലേഖനം
179. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
180. PubMed
181. ലേഖനം
182. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
183. CAS
184. ISI
185. PubMed
186. ലേഖനം
187. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
188. CAS
189. ISI
190. PubMed
191. ലേഖനം
192. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
193. CAS
194. ISI
195. PubMed
196. ലേഖനം
197. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
198. CAS
199. ISI
200. PubMed
201. ലേഖനം
202. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
203. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
204. CAS
205. ISI
206. PubMed
207. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
208. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
209. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
210. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
211. CAS
212. ISI
213. PubMed
214. ലേഖനം
215. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
216. CAS
217. PubMed
218. ലേഖനം
219. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
220. CAS
221. ISI
222. PubMed
223. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
224. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
225. CAS
226. PubMed
227. ലേഖനം
228. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
229. ISI
230. PubMed
231. ലേഖനം
232. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
233. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
234. ISI
235. PubMed
236. ലേഖനം
237. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
238. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
239. CAS
240. ISI
241. PubMed
242. ലേഖനം
243. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
244. സന്ദർഭം കാണിക്കുക
245. ഭ്രൂണം മുതൽ വാർദ്ധക്യം വരെ energy ർജ്ജ ഹോമിയോസ്റ്റാസിസ്, ഗ്ലൂക്കോസ് മെറ്റബോളിസം എന്നിവയുടെ നിയന്ത്രണത്തിലുള്ള വോഗ്, എംസി & ബ്രൂണിംഗ്, ജെസി സിഎൻഎസ് ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗ്. ട്രെൻഡുകൾ എൻഡോക്രിനോൽ. മെറ്റാബ്. 24, 76–84 (2013).
246. ഹവ്രാൻ‌കോവ, ജെ., ഷ്മെചെൽ, ഡി., റോത്ത്, ജെ. & ബ്ര rown ൺ‌സ്റ്റൈൻ, എം. എലി തലച്ചോറിലെ ഇൻസുലിൻ തിരിച്ചറിയൽ. പ്രോ. നാറ്റ് അക്കാഡ്. സയൻസ്. യുഎസ്എ 75, 5737–5741 (1978).
247. കിംഗ്, ജി‌എൽ & ജോൺസൺ, എസ്. എൻ‌ഡോതെലിയൽ സെല്ലുകളിലുടനീളം ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്റർ-മെഡിയേറ്റഡ് ട്രാൻസ്പോർട്ട്. ശാസ്ത്രം 227, 1583–1586 (1985).
248. സ്ട്രബ്ബ്, ജെ‌എച്ച്, പോർട്ടെ, ഡി. ഫിസിയോൾ. ബെഹവ്. 44, 205-208 (1988).
249. ബാങ്കുകൾ, ഡബ്ല്യുഎ & കാസ്റ്റിൻ, എജെ രണ്ട് പാൻക്രിയാറ്റിക് പെപ്റ്റൈഡുകളിലേക്കുള്ള രക്ത-മസ്തിഷ്ക തടസ്സത്തിന്റെ ഡിഫറൻഷ്യൽ പെർമാബിബിലിറ്റി: ഇൻസുലിൻ, അമിലിൻ. പെപ്റ്റൈഡ്സ് 19, 883–889 (1998).
250. ബാങ്കുകൾ, WA സെറിബ്രൽ ഇൻസുലിൻ ഉറവിടം. യൂറോ. ജെ. ഫാർമകോൾ. 490, 5 - 12 (2004).
251. നെമോടോ, ടി. Et al. ഇൻസുലിൻ സിന്തസിസിനെക്കുറിച്ചും എലി ഹിപ്പോകാമ്പസ്, സെറിബ്രൽ കോർട്ടെക്സിൽ അതിന്റെ സ്രവണം എന്നിവയെക്കുറിച്ചും പുതിയ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ: അമിലോയിഡ്- β1-42 ഗ്ലൈക്കോജൻ സിന്തേസ് കൈനാസ്- 3β വഴി പ്രോൻസുലിൻ ലെവൽ കുറയ്ക്കുന്നു. സെൽ സിഗ്നൽ. 26, 253 - 259 (2014).
252. ഡി സ za സ, സി.ടി. Et al. കൊഴുപ്പ് അടങ്ങിയ ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഉപയോഗം ഒരു പ്രോഇൻഫ്ലമേറ്ററി പ്രതികരണം സജീവമാക്കുകയും ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ ഇൻസുലിൻ പ്രതിരോധം ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. എൻ‌ഡോക്രൈനോളജി 146, 4192 - 4199 (2005).
253. ആന്റണി, കെ. Et al. മസ്തിഷ്ക ശൃംഖലകളിലെ ഇൻസുലിൻ-ഉത്തേജിത പ്രതികരണങ്ങളുടെ ശ്രദ്ധ, വിശപ്പ് നിയന്ത്രിക്കുന്നതും ഇൻസുലിൻ പ്രതിരോധത്തിൽ പ്രതിഫലം: മെറ്റബോളിക് സിൻഡ്രോമിലെ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനുള്ള സെറിബ്രൽ അടിസ്ഥാനം? പ്രമേഹം 55, 2986 - 2992 (2006).
254. കെല്ലി, എഇ & ബെറിഡ്ജ്, കെസി പ്രകൃതി പ്രതിഫലത്തിന്റെ ന്യൂറോ സയൻസ്: ആസക്തി ഉളവാക്കുന്ന മരുന്നുകളുടെ പ്രസക്തി. ജെ. ന്യൂറോസി. 22, 3306–3311 (2002).
255. കൂബ്, ജി‌എഫ് & വോൾ‌കോ, എൻ‌ഡി ന്യൂറോ സർക്കിട്രി ഓഫ് ആസക്തി. ന്യൂറോ സൈക്കോഫാർമക്കോളജി 35, 217–238 (2010).
256. വെർതർ, ജി.എ. Et al. എലി തലച്ചോറിലെയും പിറ്റ്യൂട്ടറി ഗ്രന്ഥിയിലെയും ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്ററുകളുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണവും സ്വഭാവവും vitro ലെ ഓട്ടോറാഡിയോഗ്രാഫി, കമ്പ്യൂട്ടറൈസ്ഡ് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി. എൻ‌ഡോക്രൈനോളജി 121, 1562 - 1570 (1987).
257. ഫിഗ്ലെവിക്സ്, ഡിപി, ഇവാൻസ്, എസ്ബി, മർഫി, ജെ., ഹോയൻ, എം. ബ്രെയിൻ റെസ്. 964, 107–115 (2003).
258. ഡോസ്, എൽസി Et al. ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗും ആസക്തിയും. ന്യൂറോഫാർമക്കോളജി 61, 1123 - 1128 (2011).
259. ഫിഗ്ലെവിക്സ്, ഡിപി & സിപോളുകൾ, എജെ എനർജി റെഗുലേറ്ററി സിഗ്നലുകൾ, ഫുഡ് റിവാർഡ്. ഫാർമകോൾ. ബയോകെം. ബെഹവ്. 97, 15–24 (2010).
260. പാറ്റേഴ്‌സൺ, ടി.എ. Et al. ഭക്ഷണത്തിന്റെ അഭാവം എം‌ആർ‌എൻ‌എയും എലി ഡോപാമൈൻ ട്രാൻ‌സ്‌പോർട്ടറിന്റെ പ്രവർത്തനവും കുറയ്ക്കുന്നു. ന്യൂറോഎൻഡോക്രിനോളജി 68, 11 - 20 (1998).
261. കാർവെല്ലി, എൽ. Et al. ഡോപാമൈൻ ഏറ്റെടുക്കലിന്റെ PI 3- കൈനാസ് നിയന്ത്രണം. ജെ. ന്യൂറോകെം. 81, 859 - 869 (2002).
262. വില്യംസ്, ജെ.എം. Et al. ഡോപാമൈനിന്റെ ആംഫെറ്റാമൈൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്പോർട്ടിനെ ഹൈപ്പോഇൻസുലിനെമിയ നിയന്ത്രിക്കുന്നു. PLoS Biol. 5, e274 (2007).
263. ഷെൻ, ജെ., റീത്ത്, എം‌ഇ‌എ & കാർ, കെ‌ഡി വിട്ടുമാറാത്ത ഭക്ഷണ നിയന്ത്രണവും എലി സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ ഡോപാമൈൻ ട്രാൻ‌സ്‌പോർട്ടറും പ്രവർത്തിക്കുന്നു. ബ്രെയിൻ റെസ്. 1082, 98–101 (2006).
264. ഷോഫെൽമീർ, AN Et al. കൊക്കെയ്ൻ സെൻസിറ്റീവ് മോണോഅമിൻ ട്രാൻസ്പോർട്ടർ പ്രവർത്തനവും ആവേശകരമായ പെരുമാറ്റവും ഇൻസുലിൻ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു. ജെ. ന്യൂറോസി. 31, 1284 - 1291 (2011).
265. വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയയിലെ മെബൽ, ഡിഎം, വോംഗ്, ജെസി, ഡോംഗ്, വൈജെ & ബോർഗ്ലാൻഡ്, എസ്‌എൽ ഇൻസുലിൻ ഹെഡോണിക് തീറ്റ കുറയ്ക്കുകയും വർദ്ധിച്ച റീഅപ് ടേക്ക് വഴി ഡോപാമൈൻ സാന്ദ്രത തടയുകയും ചെയ്യുന്നു. യൂറോ. ജെ. ന്യൂറോസി. 36, 2336–2346 (2012).
266. ലബൗബെ, ജി. Et al. എൻഡോകണ്ണാബിനോയിഡുകൾ വഴി വെൻട്രൽ ടെഗ്‌മെന്റൽ ഏരിയ ഡോപാമൈൻ ന്യൂറോണുകളുടെ ഇൻസുലിൻ ദീർഘകാല വിഷാദം ഉണ്ടാക്കുന്നു. നാറ്റ്. ന്യൂറോസി. 16, 300 - 308 (2013).
267. കൊന്നർ, എ.സി. Et al. എനർജി ഹോമിയോസ്റ്റാസിസിന്റെ നിയന്ത്രണത്തിലുള്ള കാറ്റെകോളമിനർജിക് ന്യൂറോണുകളിൽ ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗിനുള്ള പങ്ക്. സെൽ മെറ്റാബ്. 13, 720 - 728 (2011).
268. ഫിഗ്ലെവിച്ച്സ്, ഡിപി, ബെന്നറ്റ്, ജെ എൽ, അലിയക്ബാരി, എസ്., സാവോഷ്, എ. & സിപ്പോളുകൾ, എജെ ഇൻസുലിൻ വിവിധ സിഎൻ‌എസ് സൈറ്റുകളിൽ പ്രവർത്തിക്കുകയും തീവ്രമായ സുക്രോസ് ഉപഭോഗം കുറയ്ക്കുകയും എലികളിൽ സുക്രോസ് സ്വയംഭരണം നടത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. ആം. ജെ. ഫിസിയോൾ. റെഗുൽ. ഇന്റഗ്രർ. കോം‌പ്. ഫിസിയോൾ. 295, R388 - R394 (2008).
269. പട്ടേൽ, ജെ സി, വിറ്റ്കോവ്സ്കി, പി., കോറ്റ്സി, ഡബ്ല്യുഎ & റൈസ്, എംഇ സബ്സെക്കന്റ് റെഗുലേഷൻ ഓഫ് സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡോപാമൈൻ റിലീസ് പ്രീ-സിനാപ്റ്റിക് കെ_{എടിപി} ചാനലുകൾ. ജെ. ന്യൂറോകെം. 118, 721 - 736 (2011).
270. ടെപ്പർ, ജെ‌എം & ബോലം, ജെ‌പി പ്രവർത്തനപരമായ വൈവിധ്യവും നിയോസ്ട്രിയറ്റൽ ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളുടെ പ്രത്യേകതയും. കർ. തുറക്കുക. ന്യൂറോബയോൾ. 14, 685–692 (2004).
271. സ ou, എഫ്എം, ലിയാങ്, വൈ. & ഡാനി, ജെ‌എ എൻ‌ഡോജെനസ് നിക്കോട്ടിനിക് കോളിനെർജിക് പ്രവർത്തനം സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഡോപാമൈൻ റിലീസ് നിയന്ത്രിക്കുന്നു. നാറ്റ്. ന്യൂറോസി. 4, 1224–1229 (2001).
272. റൈസ്, എം‌ഇ & ക്രാഗ്, എസ്‌ജെ നിക്കോട്ടിൻ സ്‌ട്രൈറ്റത്തിൽ പ്രതിഫലവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ഡോപാമൈൻ സിഗ്നലുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. നാറ്റ്. ന്യൂറോസി. 7, 583–584 (2004).
273. Ng ാങ്, എച്ച്. & സൾസർ, ഡി. ഫ്രീക്വൻസി-ഡിപൻഡന്റ് മോഡുലേഷൻ ഓഫ് ഡോപാമൈൻ റിലീസ് നിക്കോട്ടിൻ. നാറ്റ്. ന്യൂറോസി. 7, 581–582 (2004).
274. പട്ടേൽ, ജെ‌സി, റോസിഗ്നോൾ, ഇ., റൈസ്, എം‌ഇ & മക്കോൾഡ്, ആർ‌പി ഫോർ‌ബ്രെയിൻ, ബ്രെയിൻ‌സ്റ്റൈം കോളിനെർജിക് ഇൻ‌പുട്ടുകൾ എന്നിവയാൽ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡോപാമൈൻ റിലീസ്, എക്സ്പ്ലോറേറ്ററി മോട്ടോർ ബിഹേവിയർ എന്നിവയുടെ നിയന്ത്രണത്തെ എതിർക്കുന്നു. നാറ്റ്. കമ്യൂൺ. 3, 1172 (2012).
275. ത്രെൽഫെൽ, എസ്. Et al. കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളിലെ സിൻക്രണസ് ആക്റ്റിവിറ്റിയാണ് സ്ട്രിയറ്റൽ ഡോപാമൈൻ റിലീസ് പ്രവർത്തനക്ഷമമാക്കുന്നത്. ന്യൂറോൺ 75, 58 - 64 (2012).
276. കാച്ചോപ്പ്, ആർ. Et al. കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളുടെ സെലക്ടീവ് ആക്റ്റിവേഷൻ അക്യുമ്പൽ ഫാസിക് ഡോപാമൈൻ റിലീസ് മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു: റിവാർഡ് പ്രോസസ്സിംഗിനായി ടോൺ സജ്ജമാക്കുന്നു. സെൽ റിപ്പ. 2, 1 - 9 (2012).
277. ജോൺസ്, ഐ‌ഡബ്ല്യു, ബോലം, ജെ‌പി & വോണാകോട്ട്, എസ്. ജെ. ന്യൂറോൾ. 2, 439-235 (247).
278. ഹിഗ്ലി, എംജെ Et al. കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകൾ‌ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ‌ വേഗത്തിലുള്ള VGluT3- ആശ്രിത ഗ്ലൂട്ടാമറ്റർ‌ജിക് ട്രാൻസ്മിഷനെ മധ്യസ്ഥമാക്കുന്നു. PLoS ONE 6, e19155 (2011).
279. ട z സാനി, കെ., ബോഡ്‌നർ, ആർ. & സ്‌ക്ലഫാനി, എ. യൂറോ. ജെ. ന്യൂറോസി. 1, 27–1525 (1533).
280. സ്‌ക്ലഫാനി, എ., ട z സാനി, കെ. & ബോഡ്‌നർ, ആർ‌ജെ ഡോപാമൈൻ എന്നിവരും ഭക്ഷണ മുൻ‌ഗണനകളും പഠിച്ചു. ഫിസിയോൾ. ബെഹവ്. 104, 64–68 (2011).
281. മേയർ, സി‌എം & ബെൽ‌ഷാം, ഡി‌ഡി ഇൻ‌സുലിൻ റിസപ്റ്റർ സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് -1 സെറീൻ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ, പ്രോട്ടിയാസോമൽ ഡീഗ്രേഡേഷൻ, ലൈസോസോമൽ ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്റർ ഡീഗ്രഡേഷൻ എന്നിവ വഴി ദീർഘകാല ഇൻസുലിൻ എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുന്നതിലൂടെ സെൻട്രൽ ഇൻസുലിൻ സിഗ്നലിംഗ് വർദ്ധിക്കുന്നു. എൻ‌ഡോക്രൈനോളജി 151, 75–84 (2010).
282. റൈസ്, എം‌ഇ, പട്ടേൽ, ജെ‌സി & ക്രാഗ്, എസ്‌ജെ ഡോപാമൈൻ ബേസൽ ഗാംഗ്ലിയയിൽ റിലീസ്. ന്യൂറോ സയൻസ് 198, 112–137 (2011).
283. സ്മിത്ത്, വൈ., സർമിയർ, ഡിജെ, റെഡ്ഗ്രേവ്, പി. & കിമുര, എം. തലാമിക് ബാസൽ ഗാംഗ്ലിയയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ബിഹേവിയറൽ സ്വിച്ചിംഗിനും ബലപ്പെടുത്തലിനുമുള്ള സംഭാവനകൾ. ജെ. ന്യൂറോസി. 31, 16102–16106 (2011).
284. ത്രെൽഫെൽ, എസ്. Et al. സ്ട്രിയറ്റൽ മസ്‌കറിനിക് റിസപ്റ്ററുകൾ വെൻട്രൽ വേഴ്സസ് ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിലെ കോളിനെർജിക് ഇന്റേൺ‌യുറോണുകളിൽ വ്യതിരിക്തമായ റിസപ്റ്റർ സബ്‌ടൈപ്പുകൾ വഴി ഡോപാമൈൻ ട്രാൻസ്മിഷന്റെ പ്രവർത്തന ആശ്രയത്തെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു. ജെ. ന്യൂറോസി. 30, 3398 - 3408 (2010).
285. ഹോബൽ, ബി‌ജി, അവെന, എൻ‌എം & റഡ, പി. അക്കുമ്പെൻസ് ഡോപാമൈൻ-അസറ്റൈൽകോളിൻ ബാലൻസ് സമീപനത്തിലും ഒഴിവാക്കലിലും. കർ. തുറക്കുക. ഫാർമകോൾ. 7, 617–627 (2007).
286. പോത്തോസ്, ഇഎൻ, ക്രീസ്, ഐ. ജെ. ന്യൂറോസി. 15, 6640–6650 (1995).
287. ഗൈഗർ, ബി.എം. Et al. എലി ഭക്ഷണത്തിലെ അമിതവണ്ണത്തിൽ മെസോലിംബിക് ഡോപാമൈൻ ന്യൂറോ ട്രാൻസ്മിഷന്റെ കുറവുകൾ. ന്യൂറോ സയൻസ് 159, 1193 - 1199 (2009).
288. മോറിസ്, ജെ.കെ. Et al. ഇൻസുലിൻ പ്രതിരോധം നൈഗ്രോസ്ട്രിയൽ ഡോപാമൈൻ പ്രവർത്തനത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നു. കാലഹരണപ്പെടൽ. ന്യൂറോൾ. 231, 171 - 180 (2011).
289. ഡി അറ uj ജോ, ഐ.ഇ. Et al. രുചി റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗിന്റെ അഭാവത്തിൽ ഭക്ഷണ പ്രതിഫലം. ന്യൂറോൺ 57, 930 - 941 (2008).
290. സ്റ്റൈസ്, ഇ., സ്പൂർ, എസ്., ബോഹോൺ, സി. & സ്മോൾ, ഡിഎം അമിതവണ്ണവും ഭക്ഷണത്തോടുള്ള മൂർച്ചയുള്ള പ്രതികരണവും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം ടാകിയ എ 1 അല്ലീലാണ് മോഡറേറ്റ് ചെയ്യുന്നത്. ശാസ്ത്രം 322, 449–452 (2008).
291. വാങ്, ജി.ജെ. Et al. ബ്രെയിൻ ഡോപാമൈനും അമിതവണ്ണവും. ലാൻസെറ്റ് 357, 354 - 357 (2001).
292. ജോൺസൺ, പി‌എം & കെന്നി, പി‌ജെ ഡോപാമൈൻ ഡി 2 റിസപ്റ്ററുകൾ‌ ആസക്തി പോലുള്ള റിവാർഡ് ഡി‌ഫൻ‌ഷനും അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിൽ‌ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണവും. നാറ്റ്. ന്യൂറോസി. 13, 635-641 (2010).
293. കാർ, കെ.ഡി, കിം, ജി.- വൈ. & കാബെസ ഡി വാക, എസ്. നേരിട്ടുള്ള ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ അഗോണിസ്റ്റുകളുടെ റിവാർഡിംഗും ലോക്കോമോട്ടർ-ആക്റ്റിവേറ്റിംഗ് ഇഫക്റ്റുകളും എലികളിലെ വിട്ടുമാറാത്ത ഭക്ഷണ നിയന്ത്രണത്താൽ വർദ്ധിപ്പിക്കും. സൈക്കോഫാർമക്കോളജി (ബെർ.) 154, 420–428 (2001).
294. ലെവിൻ, ബി‌ഇ & കീസി, RE പ്രതിരോധം ശരീരഭാരം വ്യത്യാസപ്പെടുത്തുന്നത് ഭക്ഷണക്രമത്തിൽ പൊണ്ണത്തടിയുള്ളതും പ്രതിരോധശേഷിയുള്ളതുമായ എലികളിൽ. ആം. ജെ. ഫിസിയോൾ. 274, R412 - R419 (1998).
295. പട്ടേൽ, ജെ‌സി & റൈസ്, എം‌ഇ മോണിറ്ററിംഗ് ആക്‌സോണൽ, സോമാറ്റോഡെൻഡ്രിറ്റിക് ഡോപാമൈൻ റിലീസ് എന്നിവ മസ്തിഷ്ക കഷ്ണങ്ങളിൽ ഫാസ്റ്റ്-സ്കാൻ സൈക്ലിക് വോൾട്ടാമെട്രി ഉപയോഗിച്ച്. രീതികൾ മോഡൽ. ബയോൾ. 96, 243–273 (2013).
296. ലീ, സി‌ആർ‌, വിറ്റ്‌കോവ്സ്കി, പി. & റൈസ്, എം‌ഇ റെഗുലേഷൻ ഓഫ് സബ്സ്റ്റാൻ‌ഷ്യ നിഗ്ര പാർ‌സ് റെറ്റിക്യുലേറ്റ GABAergic ന്യൂറോൺ‌ ആക്റ്റിവിറ്റി എച്ച്₂O₂ ഫ്ലൂഫെനാമിക് ആസിഡ് സെൻ‌സിറ്റീവ് ചാനലുകൾ വഴിയും കെ_{എടിപി} ചാനലുകൾ. ഫ്രണ്ട്. സിസ്റ്റ്. ന്യൂറോസി. 5, 14 (2011).
297. ചെൻ, ബിടി, മൊറാൻ, കെ‌എ, അവ്‌ഷാലുമോവ്, എം‌വി & റൈസ്, എം‌ഇ ലിമിറ്റഡ് റെഗുലേഷൻ ഓഫ് സോമാറ്റോഡെൻഡ്രിക് ഡോപാമൈൻ റിലീസ് വോൾട്ടേജ് സെൻ‌സിറ്റീവ് Ca²⁺ ചാനലുകൾ ആക്‌സോണൽ ഡോപാമൈൻ റിലീസിന്റെ ശക്തമായ നിയന്ത്രണത്തിന് വിരുദ്ധമാണ്. ജെ. ന്യൂറോകെം. 96, 645 - 655 (2006).
298. ലി, എക്സ്. Et al. എലികളിലെ എൽ‌ആർ‌ആർ‌കെ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് അമിതപ്രയോഗത്തിനൊപ്പം മെച്ചപ്പെടുത്തിയ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡോപാമൈൻ ട്രാൻസ്മിഷനും മോട്ടോർ പ്രകടനവും ഫാമിലി പാർക്കിൻസൺസ് രോഗം മ്യൂട്ടേഷൻ ജിഎക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഇല്ലാതാക്കുന്നു. ജെ. ന്യൂറോസി. 2, 2019 - 30 (1788).
299. വു, ക്യൂ., റീത്ത്, എം‌ഇ‌എ, വൈറ്റ്മാൻ, ആർ‌എം, കവാഗോ, കെ‌ടി & ഗാരിസ്, പി‌എ തത്സമയ വോൾട്ടമെട്രി ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്ന വൈദ്യുതപരമായി വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത ഡോപാമൈൻ ഡൈനാമിക്സിൽ നിന്നുള്ള റിലീസ്, ഏറ്റെടുക്കൽ പാരാമീറ്ററുകൾ നിർണ്ണയിക്കുക. ജെ. ന്യൂറോസി. രീതികൾ 112, 119-133 (2001).
300. ചെൻ, ബിടി, അവ്‌ഷാലുമോവ്, എംവി & റൈസ്, എംഇ എച്ച്₂O₂ സിനാപ്റ്റിക് ഡോപാമൈൻ റിലീസിന്റെ ഒരു നോവൽ, എൻ‌ഡോജെനസ് മോഡുലേറ്റർ ആണ്. ജെ. ന്യൂറോഫിസിയോൾ. 85, 2468 - 2476 (2001).
301. വിറ്റ്കോവ്സ്കി, പി., പട്ടേൽ, ജെസി, ലീ, സിആർ & റൈസ്, എം‌ഇ ഇമ്യൂണോ സൈറ്റോകെമിക്കൽ ഐഡന്റിഫിക്കേഷൻ ഓഫ് ഡോപാമൈൻ റിലീസിൽ ഉൾപ്പെടുന്ന നൈഗ്രൽ ഡോപാമെർജിക് ന്യൂറോണുകളുടെ സോമാറ്റോഡെൻഡ്രിക് കമ്പാർട്ടുമെന്റിൽ നിന്ന്. ന്യൂറോ സയൻസ് 164, 488–496 (2009).
302. സുഗിമോട്ടോ, കെ. Et al. എലി പെരിഫറൽ നാഡിയിലെ ഇൻസുലിൻ റിസപ്റ്റർ: അതിന്റെ സ്ഥാനവും പകരമായി വിഘടിച്ച ഐസോഫോമുകളും. ഡയബറ്റിസ് മെറ്റാബ്. റെസ്. റവ. 16, 354 - 363 (2000).
303. സാഞ്ചസ്-അലവേസ്, എം. Et al. Warm ഷ്മള-സെൻസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളെ നേരിട്ട് തടയുന്നതിലൂടെ ഇൻസുലിൻ ഹൈപ്പർതേർമിയയ്ക്ക് കാരണമാകുന്നു. പ്രമേഹം 59, 43 - 50 (2010).
304. പാക്സിനോസ്, ജി. & വാട്സൺ, സി. ദി റാറ്റ് ബ്രെയിൻ ഇൻ സ്റ്റീരിയോടാക്സിക് കോർഡിനേറ്റ്സ് ആറാം പതിപ്പ് അക്കാദമിക് (6).
305. സ്ട്രബ്ബെ, ജെ‌എച്ച് & മെയിൻ, സി‌ജി വി‌എം‌എച്ചിലെ ഇൻ‌സുലിൻ ആന്റിബോഡികളുടെ ഉഭയകക്ഷി കുത്തിവയ്പ്പിനുള്ള പ്രതികരണമായി ഭക്ഷണം വർദ്ധിപ്പിച്ചു. ഫിസിയോൾ ബെഹവ്. 19, 309–313 (1977).
306. പരഞ്ജപെ, എസ്.ഐ. Et al. പാൻക്രിയാറ്റിക് ഗ്ലൂക്കോൺ സ്രവത്തിൽ വെൻട്രോമെഡിയൽ ഹൈപ്പോതലാമസിലെ ഇൻസുലിൻ സ്വാധീനം ഇൻ വിവോ. പ്രമേഹം 59, 1521 - 1527 (2010).
307. വൈസ്, ആർ‌എ, ഹോഫ്മാൻ, ഡി‌സി ഇൻട്രാക്രാനിയൽ കുത്തിവയ്പ്പുകളിലൂടെ മയക്കുമരുന്ന് റിവാർഡ് മെക്കാനിസങ്ങളുടെ പ്രാദേശികവൽക്കരണം. സിനാപ്‌സ് 10, 247–263 (1992).
308. ഷെൻ, ജെ., മൈതി, എസ്., ചെൻ, എൻ., ദത്ത, എകെ & റീത്ത്, എം‌ഇ‌എ 4- (2-ബെൻ‌ഹൈഡ്രൈലോക്സി-എഥൈൽ) -1- (4-ഫ്ലൂറോബെൻ‌സൈൽ) പൈപ്പെരിഡിൻ, അസ്പാർട്ടേറ്റ് 68 എന്നിവയുടെ ഹൈഡ്രോക്സിപൈറിഡിൻ അനലോഗ് തമ്മിലുള്ള ഇടപെടൽ ഹ്യൂമൻ ഡോപാമൈൻ ട്രാൻസ്പോർട്ടർ. യൂറോ. ജെ. ഫാർമകോൾ. 506, 17–26 (2004).

റെഫറൻസുകൾ ഡൌൺലോഡ് ചെയ്യുക

ഈ പഠനങ്ങളെ എൻ‌എ‌എച്ച് ഗ്രാന്റുകളായ ഡാക്സ്നൂംക്സ് (എം‌ഇ‌ആർ, കെ‌ഡി‌സി, എം‌ഇ‌ആർ), എൻ‌എസ്‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് (എം‌ഇ‌ആർ), ഡാക്സ്നൂംക്സ് (കെ‌ഡി‌സി), നാർ‌സാദ് ഇൻഡിപെൻഡന്റ് ഇൻവെസ്റ്റിഗേറ്റർ അവാർഡ് (കെ‌ഡി‌സി) എന്നിവ പിന്തുണച്ചിട്ടുണ്ട്. നോവോ നോർഡിസ്‌കിലെ ഡോ. ലാഗ് ഷാഫറിൽ നിന്നുള്ള ഉദാരമായ സമ്മാനമായിരുന്നു എസ്എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്. PP033811 ആന്റിബോഡി ഫൈസറിൽ നിന്നുള്ള ഉദാരമായ സമ്മാനമായിരുന്നു. സോഫ്റ്റ്‌വെയർ എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റുചെയ്‌തതിന് എൻ‌യു‌യു സ്കൂൾ ഓഫ് മെഡിസിൻ ഡോ. ചാൾസ് നിക്കോൾസൺ നന്ദി പറയുന്നു V_{പരമാവധി} FCV ഡാറ്റയിൽ നിന്നുള്ള മൂല്യങ്ങൾ.