Neuroscience. 2010 август 11; 169(1): 182-194. Жарыяланган онлайн 2010 Май 7. чтыкта: 10.1016 / j.neuroscience.2010.04.056
Фридберт Вайсс,Лорен Х. Парсонс,Гери Шультейс,Петри Хытия,Марж Т. Лоранг,Флойд Э. Блум, жанаGeorge F. Koob
+ Author Тиешеси
жалпылаган
Базалдык алдыңкы мээ допамини (DA) жана 5-HT нейротрансмиссиясы этанолдун курч күчөтүүчү аракеттеринин ортомчулугуна катышкан. Нейроадаптация теориялары өнөкөт башкаруудан кийин алкоголдун кескин түрдө активдештирилген нейрохимиялык системаларындагы компенсациялык өзгөрүүлөр болушу мүмкүн деп болжолдойт. Бул гипотезаны текшерүү үчүн, DA жана 5-HT чыгаруу 3 саат ичинде 5-8.7 жума этанол (8% с/в) суюк диета режиминин аягында көз каранды эркек Wistar келемиштердин өзөкчөлөрүндө микродиализ аркылуу көзөмөлдөндү. алып салуу жана этанолдун жаңыртылган жеткиликтүүлүгү учурунда (1) этанолду (10% с/а) 60 мүнөткө оперативдүү түрдө өз алдынча башкаруу мүмкүнчүлүгү, андан кийин (2) этанол-суюк диетага чексиз жетүү. Натыйжалар этанолсуз суюк диета менен жупташкан жана этанол же сууну өз алдынча башкарууга үйрөтүлгөн контролдук топтор менен салыштырылган. Көз каранды эмес келемиштерде операнттуу этанолдун өзүн-өзү башкаруусу NACда DA жана 5-HT релизинин көбөйүшүн жогорулатты. Өнөкөт этанол диетасынан баш тартуу 8 сааттык алып салуу мезгилинин ичинде бул өткөргүчтөрдүн чыгарылышынын прогрессивдүү басылышына алып келди. Этанолду өз алдынча башкаруу калыбына келтирилди жана DA чыгарууну алдын ала алуу деңгээлинде сактады, бирок 5-HT агып чыгуусун толугу менен калыбына келтире алган жок. 5-HT денгээлдери этанол суюк диета кайра 1 сааттын ичинде, бирок, тез калыбына. Бул табылгалар аккумбалдык моноаминди чыгаруунун жетишсиздиги этанолду алып салуу терс таасирдүү кесепеттерге алып келиши мүмкүн экенин көрсөтүп турат жана ошону менен көз каранды субъекттерде этанолду издөө жүрүм-турумуна түрткү болот.
тааныштыруу
Алкоголдук ичимдиктерди кыянаттык менен пайдалануу жана алардын медициналык жана социалдык патологиялары менен көз карандылык АКШда жана дүйнө жүзү боюнча баңги заттарды колдонуунун эң чоң көйгөйлөрүнүн бири бойдон калууда (Нельсон жана Стуссман, 1994;Гринфилд жана Вайснер, 1995; Райс жана Харрис, 1995). Спирттин анксиолитикалык жана эйфоригендик аракеттери бар жана бул касиеттер алкоголдун курч күчөтүүчү таасирине өбөлгө түзөт деп эсептелет, бул алкоголду улантууга жана акырында сезгич адамдарда катуу кыянаттык жана көз карандылыкка алып келиши мүмкүн. Акыркы жылдарда этанолдун курч күчөтүүчү таасиринин ортомчулугуна катышкан нейротрансмиттердик жана рецептордук системаларды аныктоодо олуттуу прогресске жетишилди (карап чыгуу үчүн, караңыз). Джанулакис, 1989; Hoffman .Удаалаш., 1990; Самсон, 1992; Сатуучулар жана башкалар, 1992; Фроэлич жана Ли, 1993; Хант, 1993; Грант, 1994; Табакофф жана Хоффман, 1996; Михич жана Харрис, 1995).
Спирттин фармакологиялык таасирине тиешеси бар көптөгөн нейротрансмиттердик системалардын ичинен дофамин (DA) жана 5-HT этанолдун мотивациялык таасириндеги болжолдуу ролу үчүн өзгөчө көңүл бурушкан.Cloninger, 1987; McBride .Удаалаш., 1991;Engel .Удаалаш., 1992; Самсон, 1992; Сатуучулар жана башкалар, 1992). ДА учурда, мажбурлоочу электрофизиологиялык (Gessa .Удаалаш., 1985; Brodie et al., 1990), нейрохимиялык (Imperato жана DiChiara, 1986; Wozniak et al., 1991; Yoshimoto .Удаалаш., 1991; Engel .Удаалаш., 1992) жана жүрүм-туруму (Imperato жана DiChiara, 1986; Waller .Удаалаш., 1986) далилдер этанолдун жүрүм-турумга тиешелүү дозалары мезолимбиялык DA сыйлык жолун активдештирет. Этанолду сыйлоодо DA ролунун түздөн-түз далили өз алдынча башкаруучу этанол NACда DA чыгарууну стимулдайт деген тыянактардан келип чыккан.Weiss .Удаалаш., 1993), келемиштер этанолду түздөн-түз meso-accumbens DA сыйлык жолунун вентралдык тегменталдык клетка денесинин аймагына өзү киргизет (Gatto et al., 1994) жана этанол үчүн жооп берген оперант DA нейротрансмиссиясы менен өз ара аракеттенген фармакологиялык агенттер тарабынан өзгөртүлгөн (McBride .Удаалаш., 1990;Samson et al., 1991; Ходж ж.б., 1993; Rassnick .Удаалаш., 1993). Акыр-аягы, алкоголизмдин генетикалык моделдеринде алкоголдук артыкчылык NACдагы DA мазмунунун азайышы менен байланыштырылды (Murphy .Удаалаш., 1982; Murphy .Удаалаш., 1987; Gongwer et al., 1989), ошондой эле этанолдун DA чыгарууну күчөтүүчү жана кыймыл-аракетти активдештирүүчү таасирине сезгичтиктин жогорулашы (Waller .Удаалаш., 1986; Cloninger, 1987; Fadda .Удаалаш., 1989; Engel .Удаалаш., 1992; Weiss .Удаалаш., 1993).
Ошондой эле этанол издөө жүрүм-турумуна 5-HT катышуусу үчүн жетиштүү далилдер бар. Этанол дозага жараша NACдагы 5-HT-нын чыгарылышын жогорулатат (Yoshimoto .Удаалаш., 1992), ал эми 5-HTтин синаптикалык жеткиликтүүлүгүн жогорулатуучу фармакологиялык дарылоо же рецептордук агонисттер аркылуу 5-HT трансмиссиясын түз активдештирүү жаныбарларда этанолду ыктыярдуу кабыл алууну басат (карап чыгуу үчүн, караңыз). Сатуучулар жана башкалар, 1992; LeMarquand et al., 1994) жана адамдарда алкоголду колдонууну азайтат (Наранжо жана башкалар, 1984, 1987, 1989, 1990; Горелик, 1989; Монти жана Альтервейн, 1991). Этанолду кыянаттык менен пайдалануудагы серотонергиялык ролду алдыңкы мээнин 5-HT курамындагы олуттуу кемчиликтер, 5-HT иннервациясынын төмөндөшү же 5-HT1A рецепторлорунун генетикалык жактан тандалып алынган, алкоголду артык көргөн кемирүүчүлөрдүн линияларында жогорулоосу менен тастыкталат.Murphy .Удаалаш., 1982, 1987;Yoshimoto .Удаалаш., 1985; Йошимото жана Комура, 1987; Gongwer et al., 1989; McBride .Удаалаш., 1990, 1994). Акыр-аягы, этанолдун субъективдүү таасирлери, жок эле дегенде, жарым-жартылай 5-HT нейротрансмиссиясына көз каранды, анткени 5-HT1A рецепторунун агонисттери (Signs and Schechter, 1988; Грант жана Коломбо, 1993; Krystal .Удаалаш., 1994), ал эми 5-HT3 антагонисттери этанолдун дискриминациялык стимулдоочу касиеттерин бөгөттөйт (Грант жана Баррет, 1991).
Бүгүнкү күнгө чейин этанол менен камсыз болгон арматуранын нейрофармакологиялык негиздери боюнча изилдөөлөрдүн көпчүлүгү көз каранды эмес жаныбарларда жүргүзүлгөн. Бирок, этанолду кыянаттык менен пайдалануу механизмдерин түшүнүү, ошондой эле көз каранды субъекттерде этанол менен камсыз болгон бекемдөөнүн биологиялык негиздерин түшүнүүнү талап кылат. Көз карандылыктын өнүгүшү клеткалык же молекулярдык деңгээлдеги адаптацияларды камтыйт, алар кыянаттык кылуучу заттардын фармакологиялык аракеттерине каршы турат жана ошону менен дары-дармекти үзгүлтүксүз колдонууга түрткү боло турган абстиненттик симптомдордун пайда болушуна алып келет (Koob жана Блум, 1988). Этанол NACдагы DA жана 5-HT экөөнүн тең чыгарылышын стимулдайт деген мурунку далилдерди эске алуу менен (Imperato жана DiChiara, 1986; Wozniak et al., 1991; Yoshimoto .Удаалаш., 1992; Weiss .Удаалаш., 1993), бул гипотеза этанолду алып салуу учурунда бул нейротрансмиттерлердин релизинин жетишсиздигин болжолдойт. Кеңейтүү боюнча, бул гипотеза этанолдун жаңыланган таасиринен кийин алып салуудан келип чыккан нейрохимиялык жетишсиздиктердин тескерисин болжолдойт. Бул гипотезаны текшерүү үчүн, бул эксперименттер этанолдун өнөкөт экспозициясынын жана этанолдун алынышынын интрацеребралдык микродиализди колдонуу менен NACдагы DA жана 5-HT чыгарууга тийгизген таасирин, ошондой эле этанол менен камсыздалган бекемдөөдө аккумбалдык моноаминдин чыгарылышынын ролун изилдеген. келемиштер.
МАТЕРИАЛДАР ЖАНА ЫКМАЛАР
субъекттери
Сыноо учурунда салмагы 400-600 граммга чейинки эркек Wistar келемиштери (Чарльз дарыясы) колдонулган. Келемиштер эки же үч топко бөлүнүп, нымдуулук жана температура (22°C) көзөмөлдөнгөн виварийде 12/12 саат жарык/караңгы циклде (саат 05:00дө, 17:00дө) тамак-ашка ad libitum жетүү менен жайгаштырылды. суу. Бардык жол-жоболор лабораториялык жаныбарларга кам көрүү жана пайдалануу боюнча Улуттук Саламаттыкты сактоо Институтунун көрсөтмөсүн катуу сактоо менен өткөрүлдү.
Жүрүм-турумду текшерүүчү аппарат
Этанолду өз алдынча башкаруу боюнча тренинг жана микродиализ тесттери мурда сүрөттөлгөндөй модификацияланган стандарттуу операнттык камераларда (Coulbourn Instruments, Аллентаун, ПА) өткөрүлдү (Weiss .Удаалаш., 1993) эки түрдүү суюктук күчөткүчтөрдү бир эле учурда көрсөтүүгө уруксат берүү жана микродиализ перфузиялык тутумунун компоненттерин жайгаштыруу. Кыскача айтканда, оперативдүү камералар эки тартылуучу рычагдар менен жабдылган. Тиешелүү операндумдагы жооптор 0.1 мл этанол эритмесин же сууну тордун полунан 0.15 см жогору жана операнттык камеранын алдыңкы пластинкасынын борборундагы рычагдардын ортосунда жайгашкан эки идиштин бирине (көлөмү 4 мл) алып келди. Операнттык камералар виварийге туташтырылган лабораториялык процедуралар бөлмөсүндө жайгашып, үнү басаңдатылган, желдетилген экологиялык кабиналарда (Coulbourn Instruments, Аллентаун, PA) курчалган. Суюктукту жеткирүү жана жүрүм-турумду жазуу микрокомпьютер тарабынан көзөмөлдөнгөн.
Этанолду өзүн-өзү башкаруу боюнча тренинг
Келемиштер этанолду же сууну өз алдынча башкарууга үйрөтүлгөн, эки рычагдуу, эркин тандалган операнттык тапшырмада өзгөртүлгөн (Вайс жана Кооб, 1991) таттуу эритмени жок кылуу процедурасы (Самсон, 1986). Келемиштер адегенде 22 сааттык сууну жок кылуу графигине (эки күн катары менен чектелген) жайгаштырылды жана үзгүлтүксүз күчөтүү графиги боюнча 30% (w/v) сахарин эритмеси үчүн эки рычагдын бирине жооп берүү үчүн күн сайын 0.2 мүнөттүк сессияларда окутулду. Операнттык жоопту ийгиликтүү алгандан кийин, суу үй капаска кайрадан ad libitum жеткиликтүү болду. Кийинки 6 күн ичинде бир жеткиликтүү рычаг менен жооп берүү 0.1 мл этанол (5%)/сахарин (0.2%) эритмесин жеткирүүгө алып келди. Андан кийин жаныбарларды бир рычагдагы ар бир басуу этанол/сахарин эритмесин жеткирүүгө алып келген, ал эми экинчи рычагдагы жооптор бирдей көлөмдө (0.1 мл) суунун берилишине алып келген бир эле график боюнча үйрөтүлгөн. Кийинки машыгуу учурунда этанолдун концентрациясы акырындык менен 10% (w/v) чейин көтөрүлдү, ал эми сахариндин концентрациясы акырындык менен төмөндөдү, андан кийин ичүүчү эритмеден таттуу зат толугу менен жок кылынды. 19 күнгө созулган бул таттуу эритменин өчүп кетүү баскычы аяктагандан кийин, этанолдун туруктуу деңгээли (16% с/а) байкалганга чейин өзүн-өзү башкаруу сессиялары дагы 21-10 күн бою улантылды. Бардык эркин тандоо окутуу жана тестирлөө тамак-аш же суюктук чектөөлөрсүз өткөрүлдү.
Нейротрансмиттердин чыгарылышына операнттык кутуга жөнөкөй таасир этүүнүн таасирин көзөмөлдөө үчүн тест чөйрөсүнө көнүп калган этанол-наив келемиштер да даярдалган. Этанолду өз алдынча башкаруучу келемиштерге окшош операнттук тарыхты камсыз кылуу үчүн, бул контролдук жаныбарлар адегенде 22 сааттык суюктукту чектөө графигине (эки күн катары менен чектелген), бирок суу үчүн гана рычаг менен басууга үйрөтүлгөн. Операнттык реакцияга ээ болгондон кийин, суу кайрадан үй капаска ad libitum жеткиликтүү болду, бирок келемиштер өзүн-өзү башкаруу камераларында сууга күн сайын 30 мүнөт жетүү мүмкүнчүлүгүн алууну улантышты. Мурунку натыйжаларга дал келет (Weiss .Удаалаш., 1993), бул жаныбарлар андан ары ажырабастан, олуттуу ылдамдыкта сууга жооп кайтарууну токтотушту, ошентип ылайыктуу "мотивацияланбаган" контролдук топту камсыз кылышты.
Стереотаксикалык хирургия
Этанолду өз алдынча башкаруунун туруктуу деңгээли алынгандан кийин, келемиштерге стереотаксикалык түрдө галотан (1.0-1.5%) наркоздун астында NACга багытталган дат баспас болоттон жасалган өнөкөт туруктуу каннула менен сергек микродиализ үчүн имплантацияланды. Жетектөөчү каннулалар (C313CS, Plastics One, Roanoke, VA) диализ сайтынын арка чегинен 2.0 мм жогору бир тараптуу түшүрүлүп, дат баспас болоттон жасалган баш сөөк бурамалар жана стоматологиялык цемент менен бекитилди. Брегмага шилтеме жасоо менен, координаттар алдынкы +1.3, орто ±1.6 жана вентралдык -4.2 атласына ылайык ((Paxinos жана Уотсон, 1986). 2.0 мм активдүү мембрана учтары менен микродиализ зонддорун колдонуу (гид cannula тышкары чыгып), диализ сайттар ventral координаттар -6.2 жана -8.2 ортосунда жайгашкан.
Этанол көз карандылыгын индукциялоо: суюк диеталар
Операциядан кийин 4 күндөн баштап этанолго жооп кайтаруу күн сайын 30 мүнөттүк этанолду өз алдынча башкаруу сессияларын кайра баштоо менен текшерилди. Туруктуу кабыл алуу деңгээли кайрадан байкалганда келемиштер суюк диета ыкмасын колдонуу менен этанолго көз каранды болгон (Лохри жана Райли, 1980). Бул лабораторияда ылайыкташтырылган суюк диета процедурасынын чоо-жайы мурда кабарланган (Rassnick .Удаалаш., 1992). Кыскача айтканда, этанол диетасы күн сайын жаңы даярдалган (саат 9:00дөн 10:00гө чейин) шоколаддын жыты бар Sustacal, тамактануу жагынан толук суюк тамак (Мид Джонсон, Inc.) этанол (95% с/ж), витамин менен толукталган. /минералдык аралашма (ICN Nutritional Biochemicals) жана болжол менен 8.7% этанолдон алынган калорияны камсыз кылган этанолду камтыган суюк диетаны (35% с/ж) түзүү үчүн суу (Лохри жана Райли, 1980). Бул жол-жобосу, адатта, биздин лабораторияда ушул сыяктуу, 80 мг% чейин кан этанол концентрациясын (BACs) өндүрүлгөн.Merlo Pich et al., 1995; Schulteis .Удаалаш., 1996). Контролдук келемиштер сахарозаны камтыган эквикалориялык эмес этанол камтыган диетаны алышты. Контролдук диетада сакталган келемиштердин калориясын жана дене салмагын этанолду кабыл алган келемиштерге барабар кармап туруу үчүн, этанол диетасын алган жаныбарларга чексиз мүмкүнчүлүк берилген, ал эми контролдук диета күн сайын чектелген өлчөмдө берилген ( чоо-жайы үчүн, карагыла Schulteis .Удаалаш., 1996).
Интракраниалдык микродиализ
Перфузия системасы. Мурда сүрөттөлгөн перфузиялык система (Weiss .Удаалаш., 1993) методдорун тууралоо үчүн өзгөртүлгөнПарсонс жана Адилет (1992) колдонулган. Кыскача айтканда, диализдин кириш жана чыгуу түтүгү эриген кремний диоксидинден (40 мкм id) туруп, канула туташтыргычынын ийкемдүү жазгы капкагынын ичинде корголгон (C313CS, Plastics One, Roanoke, VA). Диализдин кириш түтүгү перфузиялык насостон микродиализ зондуна баланстоочу рычагдын жардамы менен капастын ортосунан жогору жайгашкан эки каналдуу суюк бургуч (Instech, Plymouth Meeting, PA) аркылуу өткөрүлдү. Кирүүчү түтүк перфузия чөйрөсү катары жасалма CSF (aCSF) камтыган 1 мл Гамильтон шприцине суюк бургуч аркылуу туташтырылган. Перфузиялык чөйрө импульссуз шприц насосу менен жеткирилди (CMA/100; Bioanalytical Systems, West Lafayette, IN). Диализат кол менен 250 мкл микрофракция флакондоруна чогултулду. Үлгүлөр ошол замат кургак музда тоңдурулган жана анализге чейин -70°Cде сакталган.
Материалдар жана жалпы процедуралар. Интрацеребралдык жетектөөчү каннулалар жана концентрдик микродиализ зонддору (сырткы диаметри: 300 мкм; мембрана материалы, регенерацияланган целлюлоза; узундугу, 2 мм) тарабынан сүрөттөлгөндөй курулган. Парсонс жана Адилет (1992). Зонддор 0.2 мкл/мин ылдамдыкта aCSF менен перфузияланган жана сыноо жана диализат чогултуу башталганга чейин 5 саат мурун кыска, тайыз галотан наркозунун (<16 мин) астында жай киргизилген. [Беш жаныбар коммерциялык жеткиликтүү микродиализ зонддору (CMA/10; Bioanalytical Systems, West Lafayette, IN) менен 0.5 мкл/мүнөт агымы менен сыналды.] Келемиштерди микродиализ сыноо процедураларына көнүктүрүү үчүн жаныбарлар күн сайын диализге туташтырылган. активдүү эмес перфузиялык система (микродиализ зонддорун киргизбестен) тестирлөөдөн мурун ~2 жума бою үй клеткасында.
Перфузиялык чөйрө. 149 мден турган АКСФm NaCl, 2.8 мm KCl, 1.2 мm CaCl2, 1.2 мm MgCl2 жана 5.4 мm d-глюкоза (рН 7.2-7.4) колдонулган. Аскорбин кислотасы антиоксидант катары кошулган концентрацияда (0.25 мm) стриаталдык клеткадан тышкаркы мейкиндикке окшош.
Эксперименттик долбоорлоо жана процедуралар
Этанолдун өнөкөт экспозициясынын (КӨЗ КАРАНДЫ), алып коюунун жана андан кийинки оперативдүү өзүн-өзү башкаруунун DA жана 5-HTтин клеткадан тышкаркы деңгээлдерине тийгизген таасири (кадимки микродиализ менен өлчөнгөндөй) (1) "этанол менен ыңгайлаштырылган" келемиштерден турган эки контролдук шарт менен салыштырылган. этанолду өзүн-өзү башкаруу боюнча окутуунун тарыхы менен, бирок этанолдон көз каранды эмес (КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС) жана (2) сууну өз алдынча башкарууга үйрөтүлгөн нетанолду кабыл албаган келемиштер (ЭТАНОЛ-НАIVE). Этанолду кабыл алуунун эки эксперименталдык топторунда бирдей бөлүштүрүлүшүн камсыз кылуу үчүн этанолду кабыл алуунун туруктуу чендери (өзүн-өзү башкаруу боюнча тренингдин аягында ±10%) кеминде 0.5 гм/кг/30 болгон келемиштер гана. мин сессиясы экспериментке киргизилген. Бул тандоо критерийине жооп берген келемиштер, андан кийин КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана КӨЗ КАРАНДЫ шарттарга дайындалганга чейин этанолду баштапкы кабыл алуусунун негизинде мүмкүн болушунча дал келген. Келемиштердин үч тобу этанолдо (КӨЗ КАРАНДЫ) же контролдук суюк диеталарда (КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАIVE) тамактануунун жана суюктуктардын жалгыз булагы катары сакталган. Суюк диеталардын таасири узактыгы 3-5 жума (орточо ± SEM күндөрдүн саны: 26.95 ± 2.19) КӨЗ КАРАНДЫ жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС келемиштер үчүн жана 2-3 жума (16.84 ± 1.65 г) ЭТАНОЛ-НАIVE тобунда. Бул убакыттын ичинде эч кандай оперативдүү өзүн-өзү башкаруу сессиялары өткөрүлбөй, келемиштер үй капастарына камалып калышты. Микродиализ аркылуу NACдагы клеткадан тышкаркы DA жана 5-HT концентрацияларынын мониторинги келемиштердин үй клеткаларында этанол суюк диетасынын акыркы 2 саатында (же көз каранды эмес жана этанол-наив келемиштерде тиешелүү убакыт аралыгында) башталган жана улантылган. андан кийинки чыгуу жана өзүн-өзү башкаруу этаптарында. Этанолду алып салуу андан кийин 40 саатка этанолду камтыган диетага (8 мл) контролдук суюк диетаны алмаштыруу жолу менен чөктүрүлдү. Сыноо күнү үч дарылоо тобу тарабынан керектелген контролдук диетанын көлөмүн мүмкүн болушунча теңдөө үчүн, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштерге КӨЗ КАРАНДЫ келемиштер керектеген диетанын өлчөмүнө параллелдүү диетанын чектелген өлчөмү берилди. Тактап айтканда, микродиализдик зонддорду киргизүү убактысы (эксперименттин алдындагы түнү) менен "чечим алуу" фазасынын башталышынын ортосунда, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштер керектелген этанол диетасынын орточо көлөмүнө туура келген 70 мл контролдук диетаны алышты. КАРАНДЫ келемиштер тарабынан. Арыктоо фазасынын башталышында ЭТАНОЛ-НАIVE жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС топтор КӨЗ КАРАНДЫ келемиштерге берилген суммага туура келген кошумча 40 мл контролдук диетаны алышты. Бардык келемиштер алып салуу фазасынын аягында контролдук диетанын көбүн жешкен жана топтор арасында керектелген диетанын өлчөмдөрүндө эч кандай айырмачылыктар байкалган эмес. 4-6 сааттан кийин чычкандар үй клеткаларында виварийден өзүн-өзү башкаруу станциялары бар лабораториялык бөлмөгө өткөрүлүп берилди, алар этанолдон кийин 8 саатка чейин үй клеткаларында болушту. Hunter .Удаалаш., 1974; Rassnick .Удаалаш., 1992; Schulteis .Удаалаш., 1996). Бул учурда жаныбарлар операнттык камераларга жайгаштырылды жана 10 мүнөткө 60% (а/көлөм) этанолду (КӨЗ КАРАНДЫ жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС) же сууну (ЭТАНОЛ-НАЙВ) өз алдынча башкарууга мүмкүнчүлүк берилди. Өзүн-өзү башкаруу сессиясы аяктагандан 6 мүнөт өткөндөн кийин келемиштер үй капастарына кайтарылып, алар өздөрүнүн диеталарына чексиз мүмкүнчүлүк алышкан. Сыноолор бардык келемиштерде бир эле убакта (00:10дөн 00:20гө чейин) өткөрүлдү. Бүткүл эксперимент бою диализат 10 мүнөт аралыкта чогултулду, оперантты этанолду өз алдынча башкаруудан тышкары, үлгү алуу XNUMX мүнөт аралыкта жүргүзүлгөн.
HPLC моноамин анализдери
DA жана 5-HT диализат концентрациялары бир эле учурда ар бир үлгүдө микробордук тескери фазалык HPLC аркылуу аныкталган. Диализат 5 мкм ODS-2 мамычасына (0.5 × 100 мм; үйдө таңгакталган) VALCO жогорку басымдагы клапан аркылуу 1.0 мкл ички үлгү цикли менен жабдылган. Мобилдик фаза лимон кислотасынан турган (0.02 m)/натрий фосфаты (монобикалык, 0.04 m) 0.82 м камтыган буферm 1-декансульфон кислотасы ионду жупташтыруучу реагент катары, 4.9 мm триэтиламин, 0.2 мm Na2EDTA, жана 19% метанол (көрүнгөн pH 5.4). Мобилдик фаза колонка аркылуу ISCO (модель 500) HPLC шприц насосу менен 16 мкл/мин ылдамдыкта айдалды. Аналиттер EG&G Princeton Applied Research [(PARC) модели 400] амперометрдик контролер, айнектей көмүртек жумушчу электрод (PARC, MP 1304 модели) жана Ag/AgCl шилтеме электрод (BAS, RE1 модели) аркылуу электрохимиялык жол менен аныкталган. Колдонулган потенциал 700 мВ болгон (Ag/AgClге каршы). Сигнал менен аныкталган аныктоо чектери: ызы-чуу катышы >2 0.5 н болгонm DA жана 5-HT үчүн.
Кандагы спиртти аныктоо
BACs ар бир келемиште этанол диетасына постэксперименталдык экспозициядан кийин 3-4 күн өткөндөн кийин бир жолу ченелген. БАК аныкталдыкийин микродиализ тестирлөө учурунда кан үлгүлөрүн алуу жол-жоболору аркылуу нейротрансмиттерди чыгаруу боюнча артефакттарды киргизүү мүмкүнчүлүгүнөн улам гана эксперименттердин аякташы. 0.1 мл кандын үлгүсү куйруктан кан чыгаруу ыкмасы менен саат 12:00дөн 2:00гө чейин алынды. Кан антикоагулянт катары 4 мкл гепаринди (1000 USp бирдик/мл) камтыган жабылган Эппендорф флакондоруна чогултулуп, 3200 айн/мин ылдамдыкта центрифугаланган. . Сыворотка trichloroacetic кислотасы менен экстракцияланган жана NAD-NADH ферментинин спектрофотометрдик ыкмасын (Сигма, Сент-Луис, MO) колдонуу менен этанолдун курамын текшерген.
гистология
Микродиализ жерлери эксперименттер аяктагандан кийин гистологиялык жактан текшерилди. Мээлер 5% галотан менен өлтүрүлгөндөн кийин алынып салынган жана 10% формальдегидде сакталган. УАКтын ичиндеги зонддун жайгашуусу кийинчерээк 50 мкм тоңдурулган, крезил кызгылт көк түскө боёлгон бөлүмдөрдөн текшерилди. Бардык изилденген учурларда диализ мембранасынын активдүү бөлүгүнүн кеминде 80% УАКтын анатомиялык чектеринде жайгашкан (сүрөт XNUMX). 1).
Микродиализдик зонддордун анатомиялык жайгашуусу.Вертикалдуу белгилер диализ мембраналарынын "активдүү" аймактарын билдирет. Бардык иликтөө жайгаштыруу 1.20 жана 2.20 мм алдыңкы жана 0.80-1.80 мм каптал брегма ортосунда бөлүштүрүлгөн.
Маалыматтарды талдоо
КӨЗ КАРАНДЫ, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАЙВЕ топторунун арасындагы диализат нейротрансмиттеринин концентрациясындагы айырмачылыктар DA жана 5-HT үчүн өзүнчө анализдерди колдонуу менен аралаш фактордук (Группалар × Тандоо интервалдары) ANOVAлар менен талданды. Операнттык өзүн-өзү башкаруу фазасында чогултулган диализат фракциялары алып салуу мезгилинин акыркы үч үлгүсүнө салыштырмалуу моноамин концентрацияларындагы айырмачылыктарга жана алып салуу акыркы саатындагы орточо DA жана 5-HT концентрацияларынан "базалык пайыздын" өзгөрүшүнө талданышты. . Жалпы ANOVAларда олуттуу негизги эффекттер же өз ара аракеттешүү ырасталгандан кийин, жеке каражаттардын ортосундагы айырмачылыктар Simple Effects ANOVA жана Дункандын Multiple Range пост-хок тесттери менен аныкталган. КӨЗ КАРАНДЫ жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС келемиштердин этанолду өз алдынча башкаруу маалыматтары эки куйруктуу Студенттин этанолду кабыл алуудагы айырмачылыктары үчүн талданган.t сыноо.
ЖЫЙЫНТЫКТАРЫ
Этанолдун өзүн-өзү башкаруу жана жүрүм-турумуна байкоо жүргүзүү
Операнттык өзүн-өзү башкаруу тренинги
Кырк үч келемиш сахаринди солгундоочу этанолду өзүн-өзү башкаруу боюнча окутуу процедурасынан өтүштү. Мурунку жумуштагыдай (Weiss .Удаалаш., 1990; Weiss .Удаалаш., 1993), жаныбарлардын көпчүлүгү этанолду өз алдынча башкаруунун туруктуу чендерин иштеп чыгышты, күнүмдүк керектөөлөр фармакологиялык жактан тиешелүү BACs өндүрүү үчүн жетиштүү. Күнүмдүк этанолду олуттуу же ишенимдүү кабыл ала албаган келемиштер (n = 11) андан ары окутуудан жана тестирлөөдөн четтетилген. Өзүн-өзү башкаруу тренингинин аягында орточо ± SEM 30 мүнөт этанол керектөө 0.72 ± 0.10 гм/кг болгон келемиштерде кийин КӨЗ КАРАНДЫ (n = 11) шарт жана 0.68 ± 0.05 гм/кг келемиштерде КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС (n = 10) топ. Сууну керектөө өзгөрүлмөлүү болгон, бирок этанол алуунун 40% дан төмөн бойдон калган. ETHANOL-NAIVE бардык келемиштери (n = 11) контролдоочу топ сууга жооп кайтарууну ийгиликтүү алды, бирок баштапкы стадияда үзгүлтүксүз суунун жетишсиздигинен улам жооп берүүнү токтотту.
Суюк диета
Суюк диета режиминин башталышында суюктуктун суюктуктун күнүмдүк керектөөсү болжол менен 70-80 мл/күн, этанолдун суткалык дозасы 6.1–7.0 гм. Диета керектөө 3-5 жумалык дарылоо мезгилинин ичинде 100-120 мл / д чейин көбөйдү (8.7-10.4 гм этанолго туура келет). Ичүүчү бөтөлкөлөрдү жаңы суюк диета менен толтургандан кийин 3 жана 4 сааттын ортосунда өлчөнгөн этанол диетасына кайра тийгенден кийин 2 же 3-күндөгү орточо ± SEM кан спиртинин концентрациясы 98.0 ± 21.7 мг% түздү. КӨЗ КАРАНДЫ (549.9 ± 20.4 гм), жуп менен азыктанган КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС (503.8 ± 5.4 гм) жана контролдоочу диета жуптары менен азыктанган ЭТАНОЛ-НАIVE арасында суюк диеталардын таасиринин аягында орточо ± SEM дене салмагында олуттуу айырмачылыктар байкалган жок. (463.5 ± 32.3 гм) топтор (F (2,29) = 3.37; NS).
Этанолду алып салуу
Этанол диетасын алып салгандан кийин жүрүм-турумга байкоо жүргүзүү этанолго көз карандылыкты пайда кылуу үчүн ушул сыяктуу суюк диета процедураларын колдонгон башка эмгекте сүрөттөлгөндөй жеңил абстиненттик синдромдун бар экендигин тастыктады (Hunter .Удаалаш., 1974; Merlo Pich et al., 1995; Schulteis .Удаалаш., 1996). Эч кандай конкреттүү сандык чен-өлчөмдөрдү колдонбосо да, байкалган алып салуу белгилери гиперреактивдүүлүк, маал-маалы менен титирөө же куйруктун катуулугу.
Өнөкөт этанолдун базалдык нейротрансмиттер деңгээлине тийгизген таасири
DA жана 5-HT бир эле жаныбарларда бир эле учурда көзөмөлдөнсө да, кээ бир учурларда бир же эки аналитиктин базалдык деңгээли аныктоо чегинен төмөн бойдон калган. Демек, DA үчүн маалыматтар КӨЗ КАРАНДЫ, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАIVE топторунун ар биринде эки келемиш үчүн жеткиликтүү болгон эмес, ал эми 5-HT маалыматтары үч КӨЗ КАРАНДЫ, эки КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана үч ЭТАНОЛ-НАIVE жаныбарлар үчүн жеткиликтүү эмес. Натыйжада үлгүлөрдүн өлчөмдөрү болгон n = 9/8 (DA/5-HT) көз каранды, n = 8/8 (DA/5-HT) ЭМЕС, жанаn = 9/8 (DA/5-HT) ETHANOL-NAIVE топторунда.
ETHANOL-NAIVE келемиштерде контролдук суюк диетанын акыркы 2 саатында өлчөнгөн орточо ± SEM базалдык диализат нейротрансмиттеринин концентрациясы 3.45 ± 0.64 н болгон.m DA жана 1.15 ± 0.22 н үчүнm 5-HT үчүн. ETHANOL-NAIVE башкаруу тобу менен салыштырганда, базалдык диализат DA деңгээли 3.90 ± 0.68 n маанилери менен КӨЗ КАРАНДЫ келемиштерде негизинен өзгөргөн жок.m. Тескерисинче, диализат 5-HT концентрациясы бул жаныбарларда 1.78 ± 0.28 н чейин жогорулаган.m (сүрөттү караңыз. 3). Статистикалык талдоо КАРАНДЫ келемиштерде 5-HT агып чыгышы ETHANOL-NAIVE караганда бир кыйла жогору экенин тастыктады (p < 0.05) жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС (p < 0.05) жаныбарлар (АНОВАдан кийинки Дункан:F (2,21) = 3.98; p <0.03).
дофамин (жогорку) Жана серотонин (Жыйынтык) этанол суюк диетасынын (КӨЗ КАРАНДЫ) же эквикалориялык контролдук диетанын (КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАИВ) таасири акыркы саатында жана андан кийинки 8 сааттык алып салуу мезгилинин ичинде агып чыгуу. Маалыматтар 20 саат аралыкта чогултулган 2 мүнөттүк үч үлгүдөгү базалдык маанилердин орточо ± SEM пайызы катары берилген [*p < 0.01; базалдык (Убакыт 0) деңгээлдерден айырмаланат]. ичи, Орточо ± SEM DA (жогорку) жана 5-HT (Жыйынтык) КӨЗ КАРАНДЫ, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС ЖАНА ЭТАНОЛГО ЖОК келемиштердеги диализат концентрациялары. Концентрациялоо маалыматтары алдын ала алынган баштапкы көрсөткүчкө (0 убакыт) жана жогорудагы баштапкы маалыматтардын пайызынын 7-8 сааттык алуу чекиттерине туура келет. Этанолду алып салуу DA жана 5-HT диализаттын деңгээлинин олуттуу төмөндөшү менен байланышкан [*F (1,23) = 23.02, p <0.001; **F (1,21) = 13.46, p < 0.0001. Тийиштүү КӨЗ КАРАНДЫ алдын ала алуудан (BSL) айырмаланат; жөнөкөй эффекттер ANOVA]. Этанол менен көнүп калган келемиштерде базалдык DA өндүрүшүнүн туруктуу жогорулашына да көңүл буруңуз [+ p < 0.05; КАРАНДЫ жана ЭТАНОЛ-НАIVE базалык көрсөткүчүнөн (BSL) айырмаланат].
КӨЗ КАРАНДЫ ЖАНА ЭТАНОЛ-НАИВ келемиштердин ортосунда базалдык диализаттын DA деңгээлинде эч кандай айырма жок болсо, DA агып чыгуусу КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС топтун келемиштеринде 6.21 ± 0.72 н чейин жогорулаган.m (F (2,23) = 4.76;p < 0.02). Бул топтогу диализат DA деңгээли экөөнө тең КӨЗ КАРАНДЫ (p < 0.05) жана ЭТАНОЛ-НАIVE (p <0.05) келемиштер. ETHANOL-NAIVE башкаруу элементтеринен эч кандай айырмачылыктар 5 ± 0.97 н болгон КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС келемиштердин орточо ± SEM базалык 0.11-HT концентрациясында табылган жок.m (Сүрөт. 2).
Top, Орточо ± SEM диализат допамин концентрациялары өнөкөт этанол суюк диетанын таасири астында КАРАНДЫ келемиштердин ядросунда микродиализ аркылуу көзөмөлдөнөт, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС, бирок этанолго дуушар болгон келемиштер жана ETHANOL-NAIVE контролдоочу жаныбарлар. Көз каранды келемиштерде этанол-наив келемиштерден базалдык допамин чыгарууда эч кандай айырмачылыктар байкалган эмес. Бирок, өзүн-өзү башкаруу тренингинде этанолдун чектелген таасирин алган көз каранды эмес келемиштерде базалдык дофаминдин бөлүнүп чыгышы кыйла жогорулаган (*p < 0.05; ETHANOL-NAIVE жана КӨЗ КАРАНДЫ топтордон айырмаланат). Жыйынтык, КӨЗ КАРАНДЫ, КӨЗ КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштерде диализат серотонин концентрациялары. Базалдык 5-HT агып чыгуу этанол көз каранды келемиштерде олуттуу жогорулаган (*p < 0.05; ETHANOL-NAIVE жана NONPRENDENT келемиштерден айырмаланат).
DA жана 5-HT денгээлдеринде алып салуудан келип чыккан өзгөрүүлөр
Этанолду алып салуу DA жана 5-HT экөө тең диализаттын деңгээлинин акырындык менен төмөндөшү менен байланышкан. Этанолдон сегиз саат өткөндөн кийин, орточо ± SEM DA деңгээли 3.9 ± 0.68 н чейин төмөндөдү.m 2.31 ± 0.48 н чейинm же 64.2 ± 8.4% алып салууга чейинки базалдык деңгээлдер. Окшош басуу 5 ± 1.78 н кыскарган 0.26-HT агып, пайда болгон.m 0.89 ± 0.15 н чейинm же 55.1 ± 10.6% алып салууга чейинки концентрациялар. Бул маалыматтар сүрөттө жалпыланган 3, бул ошондой эле DA жана 5-HT деңгээли ЭТАНОЛ-НАIVE жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС топтордо ушул мезгил ичинде өзгөрүүсүз калганын көрсөтөт. Нейротрансмиттерлердин чыгарылышын токтотуудан келип чыккан басуу Дарылоо топторунун ортосундагы олуттуу өз ара аракеттенүүлөр менен тастыкталган жана диализат концентрациялары үчүн үлгү алуу убактысы (DA:F (8,92) = 5.86; p < 0.0001; 5-HT: F (8,84) = 9.02; p < 0.00001) жана алдын ала алынган баштапкы маанилердин пайызы (DA:F (8,92) = 5.93; p < 0.0001; 5-HT: F (8,84) = 4.28; p < 0.0002). Жөнөкөй эффекттердин кийинки анализи (Үлгү алуу убактысы) диализат концентрациясынын олуттуу төмөндөшүн тастыктады (DA)F (4,92) = 16.12; p < 0.0001; 5-HT: F (4,84) = 23.38; p < 0.0001) жана баштапкы деңгээлдердин пайызы (DAF (4,92) = 16.03; p < 0.0001; 5-HT: F (4,84) = 9.67; p < 0.0001) убакыттын өтүшү менен КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС же ЭТАНОЛ-НАIVE топторунда эмес.
DA жана 5-HT чыгаруу боюнча этанол өзүн-өзү башкаруу таасири
Операнттык өзүн-өзү башкаруу
Орточо ± SEM 60 мин көлөмүн жана 8 саат алуу мезгилинин акырына карата operantly өзүн-өзү башкаруу этанол өлчөмдөрү көз каранды келемиштер 5.55 ± 0.78 мл же 0.95 ± 0.14 гм / кг болгон. Бул топто этанолду кабыл алуу этанол менен шартталган, көз каранды эмес топтун көз каранды эмес келемиштеринен бир топ ашып кетти, ал 2.90 ± 0.55 мл же 0.57 ± 0.10 гм/кг (сүрөт). 4). Этанолду КӨЗ КӨЗ ЭМЕС тобуна караганда көбүрөөк керектөө статистикалык анализ менен тастыкталды (t 19 = 2.25;p <0.05).
60 мүнөттүк оперативдүү өзүн-өзү башкаруу сессиясында спирт ичимдиктерин ичүү (көз каранды, n = 10) жана (КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС, n = 11) келемиштер этанол же контролдук суюк диетаны алып салгандан кийин 8 саат ченелет. Чыгуу сыноо учурунда өз алдынча ичкен алкоголдун көлөмү көз каранды эмес келемиштерге караганда көз карандылыкта кыйла көп болгон (*p < 0.05; көз каранды эмес келемиштерден олуттуу айырмаланат, Студенттин t тест).
Кээ бир жаныбарларда эки нейротрансмиттерлердин бири гана өзүн-өзү башкаруунун башында аныкталган. DEPENDENT тобу (оригиналn = 11) DA же 5-HT боюнча маалыматтар статистикалык салыштыруу үчүн жеткиликтүү болгон, бирок экөө тең эмес, үч келемиштерди камтыды. DA жана 5-HT "топторундагы" спиртти орточо керектөө эки өткөргүчтүн аныктоодогу "ассиметриясынан" келип чыккан 1 сааттык сессияда бирдей болгон (DA: 0.93 ± 0.44 гм/кг; 5-HT: 0.95 ± 0.18 gm/kg), бирок убакыттын өтүшү менен этанол алууну бөлүштүрүүдө айырмачылык болгон (сүрөт. 5 E). NONDEPENDENT тобунда (оригинал n = 10), DA деңгээли үч жаныбарда аныктоо чегинен, ал эми төрт жаныбарда 5-HT концентрациясынан төмөн болгон. ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштердин арасында (оригинал n = 11), DA экиде аныкталган эмес, ал эми 5-HT үч жаныбарда аныкталбай калган. Эксперименттин бул бөлүгү үчүн алынган үлгү өлчөмдөрү төмөнкүдөй болгон: КӨЗ КАРАНДЫ (DA/5-HT: n = 8/8), КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС (DA/5-HT:n = 7/6), ЭТАНОЛ-НАIVE (DA/5-HT: n = 9/8).
Этанолду алып салуудан КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС жана КӨЗ КАРАНДЫ келемиштерде операнттик алкоголду өз алдынча башкаруунун DA жана 5-HT ядросунун агып чыгуусуна тийгизген таасири. Диализат нейротрансмиттеринин деңгээли сууну өз алдынча башкарууга үйрөтүлгөн ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштердеги деңгээлдерге салыштырылат. Бул топтогу суунун орточо керектөөсү анча деле эмес (<0.8 мл) жана көрсөтүлгөн эмес. A, Нейротрансмиттерлердин чыгарылышынын акыркы саатында жазылган деңгээлдердеги өзгөрүүлөр. Маалыматтар 20 сааттын ичинде чогултулган үч үлгүнүн орточо өлчөмү катары эсептелген баштапкы маанилердин пайызы катары көрсөтүлөт. B-D. Тиешелүү диализат нейротрансмиттер концентрациялары көрсөтүлгөн B (этанол-наив), C (КАРАНДЫ ЭМЕС), жанаD (КАРАНДЫ). Ар кандай эксперименталдык фазалардагы нейротрансмиттерлердин агып чыгышындагы өзгөрүүлөрдү көрсөтүү үчүн, B-D ошондой эле алдын ала алууну көрсөтүү (КЖТН) жана алып салуу (WD) 5 сааттын ичинде DA жана 8-HT диализат концентрациясы. штрихтик тилкелерди орточо ± SEM алуудан мурун диализат DA же 5-HT концентрациясын билдирет. E, КӨЗ КАРАНДЫ үчүн 10 мүнөт аралыкта өз алдынча этанолдун өлчөмдөрү (10% с/ж)катуу барлар) жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС (ачык барлар) топтор. КӨЗ КАРАНДЫ келемиштерде этанолдун өзүн-өзү башкаруусу DA деңгээлин алып салууга чейинки мааниге чейин калыбына келтирди. Ал эми, этанолдун өзүн-өзү башкаруусу 5-HT концентрациясын алып салуу деңгээлине чейин калыбына келтире алган жок. Бирок, этанол эффективдүү түрдө 5-HT релизинин ETHANOL-NAIVE башкаруу тобундагылар менен салыштырылган деңгээлде калыбына келтирилди (статистикалык салыштыруу үчүн, Жыйынтыктарды караңыз).
DA же 5-HT концентрацияларында эч кандай олуттуу өзгөрүүлөр ЭТАНОЛ-НАIVE контролдоочу келемиштердин диализаттарында сууга жооп берүү мүмкүнчүлүгү берилген. Ал эми этанолду өз алдынча башкаруу DA жана 5-HT агып чыгууну ишенимдүү түрдө жогорулатты (сүрөт XNUMX). 5). Этанолду өз алдынча колдонуу DA агып чыгуунун 200-250% га көбөйүшүнө алып келди. Чынында, этанол өзүн-өзү башкаруунун алгачкы 10 мүнөтүнүн ичинде бул жаныбарларда DA агып чыгуусун калыбына келтирди. Мындан тышкары, калыбына келтирилгенден кийин, клеткадан тышкаркы DA концентрациясы 1 сааттык тесттин калган бөлүгүндө этанолду кабыл алуу менен ушул деңгээлде сакталган. Көз каранды келемиштерде өзүн-өзү башкаруу башталгандан кийин 145-HT агып чыгууда 5% га чейин тездик менен көтөрүлүп кетүү байкалган. Бирок, этанол алуудан мурун жазылган баалуулуктарга клеткадан тышкаркы 5-HT концентрациясын натыйжалуу калыбына келтире алган жок. Спирттин өзүн-өзү башкаруусунун DA чыгарууга тийгизген таасири диализаттын концентрациялары үчүн тең олуттуу топтор × Сынамдоо убактысынын өз ара аракеттенүүсү менен тастыкталган (F (20,210) = 2.45; p < 0.001) жана баштапкы деңгээлдердин пайызы (F (16,168) = 3.27; p < 0.0001) жана андан кийинки Жөнөкөй Effects ANOVAлары боюнча Сыналма алуу убактысы боюнча бир гана КӨЗ КАРАНДЫ топтогу өзгөрүүлөр (диализат концентрациясы: F (10,210) = 5.28;p < 0.0001; баштапкы маалыматтардын пайызы:F (10,210) = 4.32; p < 0.0001). 5-HT агып чыгуусунун спирт менен шартталган көбөйүшү ушу сыяктуу эле олуттуу Топтор × Сыналдоо убактысынын өз ара аракеттешүүсү (диализат концентрациясы: F (20,190) = 1.67;p < 0.05) же Топтордун негизги эффектиси (базалык өзгөрүүлөрдүн пайызы: F (8,152) = 3.9; p < 0.0005) жалпы ANOVA, андан кийин үлгү алуу убактысынын жөнөкөй эффекттерин талдоо (диализат концентрациялары:F (10,190) = 3.27; p < 0.001; баштапкы көрсөткүчтүн пайызы: F (8,152) = 3.59;p <0.001) КАРАНДЫ келемиштерде.
Этанолдун өзүн-өзү башкаруусу ошондой эле КӨЗ ЭМЕС топто DA жана 5-HTтин орточо ± SEM агып чыгышынын убактылуу көбөйүшүнө алып келди, базалдык маанилердин 130 ± 4.0% (DA) жана 141 ± 25.2% (5-HT) (сүрөт).5 C). Бул эффект жалпы ANOVAдан кийинки жөнөкөй эффекттердин анализи менен тастыкталды (жогоруда), ал диализаттын концентрацияларында да ишенимдүү айырмачылыктарды көрсөткөн (DA:F (2,210) = 4.32; p < 0.0001) же баштапкы маалыматтардын пайызы (5-HT: F (8,152) = 2.00; p <0.05) тандап алуу убактысы боюнча.
Суюк диетаны кайра киргизүү
Операнттык өзүн-өзү башкаруу тести аяктагандан кийин, этанол камтыган жана контролдоочу суюк диеталарга кайра таасир этүүнүн таасири 1 сааттын ичинде бир нече кокус тандалып алынган КӨЗ КАРАНДЫ (n = 5) жана ЭТАНОЛ-НАIVE (n = 7) келемиштер. Этанол суюк диетасынын жаңылануусунун ушул мезгилинде, DA агып чыгуусу оперативдүү өзүн-өзү башкаруу учурунда жетишилген деңгээлден бир аз төмөндөдү, ал алып салууга чейинки баштапкы деңгээлге салыштырмалуу бир аз (бирок анчалык деле маанилүү эмес) жогорулаган (сүрөт XNUMX). 6). Орточо ± SEM диализат DA концентрациясы этанол диетасын алып салгандан кийинки биринчи саатта (3.65 ± 0.71 н)m) алуу деңгээлинен (2.24 ± 0.74 н) олуттуу айырмаланганm; жалпы ANOVA кийин пландаштырылган салыштыруу:F (3,39) = 5.24; p < 0.01), бирок этанолду алып салганга чейин бул жаныбарларда катталган базалдык деңгээлден статистикалык жактан айырмаланбаган бойдон калган (3.98 ± 0.97 н).m) жана ETHANOL-NAIVE келемиштерден (4.14 ± 0.53).
Этанолдун кайра экспозициясынын жана суюк диетанын DA жана 5-HT деңгээлине тийгизген таасириn = 5) жана ЭТАНОЛ-НАIVE (n = 7) келемиштер. Салыштыруу үчүн, алдын ала алуу, алуу (8 саат) учурунда моноаминдин деңгээли жана оперативдүү өзүн-өзү башкаруу шарттары да камтылган. Бардык маалыматтар тиешелүү баскычтарында 1 саат орточо билдирет. [*DA, Айырмаланат Алдын ала алуу (p <0.05) жанаӨз алдынча башкаруу (p < 0.01) жана ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштердеги тиешелүү абалдан айырмаланат (p <0.05). 5-HT, Айырмаланаталып коюу жана Өз алдынча башкаруу(p < 0.05) жана тийиштүү ЭТАНОЛ-НАIVE абалынан айырмаланат (p <0.001]).
Этанол суюк диетасына кайра таасир эткенден кийин КӨЗ МЕНЕН тобундагы диализаттын 5-HT концентрациясы оперантты өз алдынча башкаруу учурунда катталган денгээлдерден жогору көтөрүлдү (1.25 ± 0.22 vs 1.46 ± 0.13 н)m; Сүрөт. 6). Орточо 5-HT агып чыгуусу алдын ала алуу деңгээлине жеткен жок (1.46 ± 0.13 vs 2.01 ± 0.41 н)m), Этанол суюк диета жетүү кийин 5-HT чейинки жана андан кийинки статистикалык айырмачылыктар айкын болгон.
DA жана 5-HT базалык деңгээлдеринен эч кандай айырмачылыктар Операнттык өзүн-өзү башкаруудан кийин контролдук диетага кирүү мүмкүнчүлүгү берилген КӨЗ КӨЗ КЕЛБЕГЕН келемиштерде жазылган эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес).
ТАЛКУУЛОО
Натыйжалар этанолду өз алдынча башкаруу NACдагы DA жана 5-HTтин клеткадан тышкаркы деңгээлин жогорулатат, этанолдун курч фармакологиялык жана бекемдөөчү иш-аракеттерине катышкан эки нейротрансмиттер, ал эми этанолду алып салуу чыгаруунун олуттуу басылышы менен коштолот. бул моноаминдердин. Натыйжалар ошондой эле көз каранды келемиштер этанолду алуу үчүн алып салуу учурунда "иштей турганын" жана этанолду керектөө алып салуу менен байланышкан экстранейрондук DA жана 5-HT тартыштыгын жокко чыгарарын көрсөтүп турат.
Бул изилдөөдө борбордук кызыкчылык DA жана 5-HTтин көз каранды субъекттерде алкоголдун күчөтүүчү таасирине катышуусун изилдөө болду. Этанолду алып салуу жаныбарлардын этанолду издөө жүрүм-турумуна түрткү берерин көрсөтүү адаттагыдай эле кыйын болгон (карап чыгуу үчүн, караңыз). Цицерон, 1980; Грант .Удаалаш., 1990; Мейш жана Стюарт, 1994Этанолду кабыл алууну мажбурлап абстиненттин бир нече эпизоддорунда абстиненттин симптомдорун жеңилдетүү менен байланыштырууга мүмкүнчүлүк берилген келемиштерде оң натыйжалар алынганына карабастан (Hunter .Удаалаш., 1974). Бирок, жакында этанолду баштоонун тийиштүү процедуралары менен келемиштер этанолду биринчи алып салуу тажрыйбасы учурунда да өзүн өзү башкара тургандыгы көрсөтүлдү (Schulteis .Удаалаш., 1996). Учурдагы натыйжалар бул байкоону тастыктайт жана этанолдун көз каранды келемиштерде күчөтүүчү таасирлери үчүн мүмкүн болгон нейрохимиялык негизди берет. Тактап айтканда, маалыматтар келемиштер этанолду өз алдынча башкаруу учурунда жана андан кийинки суюк диетаны керектөө учурунда DA агып чыгуусун калыбына келтирүүчү жана алып салууга чейинки деңгээлде кармап тургандай кылып жөнгө салганын көрсөтүп турат. Мурунку отчётто этанолдун интрагастралдык дозасы вентралдык стриатумда жетишсиз DA чыгарууну калыбына келтирип, этанолду алып салуу симптомдорун жокко чыгара тургандыгы көрсөтүлгөн.Rossetti .Удаалаш., 1992). Ушул экспериментте этанолду алуунун алдын алуу шарттарын калыбына келтирүү үчүн көрүнгөн жүрүм-турумдук “титрациясы” көз каранды субъекттерде этанол менен камсыздалган бекемдөөдө аккумбалдык DA чыгарылышын жана кеңейтүү менен кыянаттык жана көз карандылыкты улантуу менен бул жыйынтыкты кеңейтет.
DAдан айырмаланып, 5-HT деңгээли этанолду өз алдынча башкаруу учурунда жарым-жартылай калыбына келтирилген. Бул жыйынтыкка бир нече түшүндүрмөлөр себеп болушу мүмкүн. Этанол көз каранды эмес келемиштердеги курч таасиринен айырмаланып, көз каранды келемиштерде 5-HT релизине акырындык менен же кечиктирилген таасирин тийгизиши мүмкүн, бирок бул мүмкүн эместей сезилет, анткени этанол 5 мүнөттүн ичинде 10-HT агып чыгуусунун тез алгачкы өсүшүн жараткан. өзүн-өзү башкаруунун башталышы. Же болбосо, 5-HT синтези жана/же бөлүп чыгаруу механизмдери этанолдун өнөкөт экспозициясынын жүрүшүндө же алып салуу учурунда бузулушу мүмкүн, натыйжада этанолдун таасирине жалпысынан сунуш кылынган жооптуулук төмөндөйт, мисалы, этанолдун аккумбалга тийгизген таасиринин басаңдашы менен. Этанолго чыдамдуу P келемиштерде 5-HIAA деңгээли (Murphy .Удаалаш., 1988). Үчүнчү чечмелөө көз каранды топтун алдын ала 5-HT деңгээли этанол-наив келемиштерге салыштырмалуу бир кыйла жогорулаганын байкоого байланыштуу. Эгерде өнөкөт этанол менен 5-HT релизинин күчөшүнүн негизинде жаткан адаптациялоочу өзгөрүүлөр кыска мөөнөттүү болсо жана алып салуу учурунда тез өзгөрүп кетсе, кайра алуунун алдын ала толук калыбына келиши күтүлбөйт. Чынында, бул учурда 5-HT агып чыгуунун "жарым-жартылай" калыбына келтирүү функционалдуу түрдө "толук" калыбына келтирилиши мүмкүн.
5-HT маалыматтарынын этанолду чыгаруунун мотивациялык таасирлерине тийгизген кесепеттерин эске алуу менен, нейротрансмиттерлердин жетишсиздигинин - жарым-жартылай болсо да - жокко чыгаруунун азап чегип кетиши этанолду издөө жүрүм-турумун шарттайт. Чынында эле, адабияттарды карап чыгууда, ЛеМарканд жана кесиптештери (LeMarquand et al., 1994) этанолду алып салуу менен коштолгон 5-HT системаларынын функционалдык активдүүлүгүнүн төмөндөшү этанолду кабыл алууну кайра баштоо үчүн биохимиялык шарттарды түзүшү мүмкүн деген тыянакка келүү. Бирок, этанолду алып салуу менен коштолгон аффективдүү өзгөрүүлөргө аккумбал 5-HT өзгөчө ролу белгиленүүдө. Индиана P жана HAD линияларынын генетикалык жактан тандалган келемиштеринде спирт ичимдиктерин колдонуу NACдагы 5-HT нейротрансмиссиясынын функционалдык активдүүлүгүнүн төмөндөшү менен байланыштырылды.Murphy .Удаалаш., 1982, 1987; Gongwer et al., 1989; McBride .Удаалаш., 1990) жана бул келемиштер тынчсыздануунун жүрүм-турумунун ар кандай чараларында жогорулаган анксиогендик жоопту көрсөтөт (Stewart .Удаалаш., 1993). Аккумбалдык серотонергиялык жетишсиздик бул жаныбарлардын тынчсыздануусунун негизинде жаткандыктан, спирт ичимдиктерин этанолду ичүүгө түрткү берүүчү аффективдүү шарттар келемиштерге артыкчылык берет жана алып салуу учурунда ичүүнү кайра баштоо жалпы нейрохимиялык негизди бөлүшөт деп божомолдоого болот.
Өзүн-өзү башкаруу сессиясынын алдындагы 5 сааттык этанолду алып салуу мезгилинде клеткадан тышкаркы DA жана 8-HTтин прогрессивдүү төмөндөшү, striatal DA жүгүртүүдөгү жана бүт кыртыш мазмунунун кыскаруусуна байланыштуу мурунку байкоолорду кеңейтет (Гил ж.б., 1992), ошондой эле кемирүүчүлөрдүн бүт мээсинде, лимбиялык жана стриаталдык ткандардын препараттарында 5-HT метаболизминин жана 5-HT же анын метаболитинин, 5-гидроксиндолеассус кислотасынын (5-HIAA) мазмунунун кыскарышы (Кан жана Скаддер, 1976; Tabakoff et al., 1977; Бадави жана Эванс, 1983; Кемпф жана башкалар, 1990; Wahlström et al., 1991; Yamamura et al., 1992). Андан да маанилүүсү, бул натыйжалар алкоголдук жана башка кыянаттык заттардын курч күчөтүүчү таасири менен коштолгон мээнин сыйлык аймагына моноамин функциясын алып салуу менен байланышкан кемчиликтерди локалдаштыруу.
NACдагы DA жана 5-HTтин чыгарылышын же экстранейрондук концентрациясын жөнгө салуучу механизмдерге карата, бул маалыматтар этанолдун өнөкөт таасири учурунда "системанын ичиндеги адаптациянын" өнүгүшүн болжолдойт, мисалы, ошол эле нейрохимиялык системалар этанолдун курч фармакологиялык таасири менен активдештирилген дарылар тынымсыз стимулдаштыруунун жоктугунда функционалдык дефицитти көрсөтөт (Koob жана Блум, 1988). Спирт А 10 вентралдык тегменталдык DA нейрондорунун атуу ылдамдыгын кескин жогорулатат (Gessa .Удаалаш., 1985; Brodie et al., 1990) ал эми этанолду алып салуу учурунда A 10 нейрондук активдүүлүк кескин басаңдалат (Диана Арбенина и др., 1992, 1993). Ошентип, этанол-наив келемиштерге караганда этанол суюк диетасына дуушар болгон жаныбарларда DA алуунун алдын ала деңгээлинин жогорулашын байкабоо (сүрөт 1). 3), этанол алынып салынгандан кийин DA агып чыгуусунун кескин төмөндөшү менен бирге этанол менен өнөкөт стимулдаштырууну "тең салмактуулукка" келтирүү үчүн мезо-аккумбенс DA активдүүлүгүнүн басылышын чагылдырышы мүмкүн. Биохимиялык деңгээлдеги адаптивдик өзгөрүүлөр, ошондой эле DA-ны алдын ала чыгарууда көз каранды жана этанол-наив келемиштердин ортосундагы айырмачылыктардын жоктугунун механизми катары кызмат кылышы мүмкүн, ошондой эле алып салуу учурунда экстранейрондук ДАнын азайышы. Мисалы, өнөкөт этанолдун таасири К+-стимулдашкан DA чыгаруу (Дарден жана Хант, 1977) болжол менен Ca ингибирлөө аркылуу2+ агылып келүү (Ким .Удаалаш., 1994) же кальцийдин киришин жана DA бөлүп чыгарууну ажыратуу менен (Лесли .Удаалаш., 1986). Андан да маанилүүсү, этанолду катуу башкаруу DA синтезин стимулдайт, ал эми өнөкөт этанол менен дарыланган жаныбарларда бул таасир жок болот (Tabakoff and Hoffman, 1978;Fadda .Удаалаш., 1980).
Нейроадаптивдик эсеп 5-HT учурунда анча айкын болушу мүмкүн, мында этанолду колдонбогон жана көз каранды эмес келемиштерге салыштырмалуу алдын ала алуу (б.а., өнөкөт этанол менен стимулданган) деңгээли жогорулаган, бул өнөкөт этанол менен дарылоо көбөйөрүн көрсөткөн мурунку маалыматтарды ырастаган тыянак. алдыңкы мээ кыртышынын деңгээли 5-HT жана 5-HIAA (Тайтелл жана Майерс, 1973; Мена жана Эррера, 1980; Хант жана Мажхрович, 1983; Моринан, 1987; Kaneyuki et al., 1991). Бирок, бул этанол чакырык менен өндүрүлгөн мээ 5-HIAA мазмунун көбөйтүү этанол чыдамдуу спирт артыкчылыктуу (P) келемиштер, атап айтканда, NAC (Murphy et al., 1988; McBride .Удаалаш., 1990). Ошентип, өнөкөт этанол режиминин аягында көбөйгөн 5-HT агып кетиши этанол диетасына баштапкы серотонергиялык реакцияга салыштырмалуу азайган (б.а., адаптациялуу алсызданууну көрсөткөн) болушу мүмкүн. Бул гипотеза ырастоону күтүп жатканына карабастан, 5-HT релизинин басылышы өнөкөт этанолго жооп катары 5-HT функциясында нейроадаптивдүү өзгөрүүлөрдүн бар экендигин ачык эле көрсөтүп турат.
УАКтын клеткадан тышкаркы моноамин жетишсиздиги, алкоголдук ичимдиктерди алып салуу белгилеринин, атап айтканда, этанолдун кескин түрдө пайда болгонуна карама-каршы болгон аффективдик өзгөрүүлөрдүн негизинде болушу мүмкүн. Этанол мээнин стимуляциясынын сыйлыгын кескин түрдө жогорулата алат (бул феномен, жок дегенде жарым-жартылай, мезолимбиялык DA өткөрүүнүн функционалдык бүтүндүгүнө көз каранды) (Моолтен жана Корнецкий, 1990; Lewis, 1991), ал эми этанолду алып салуу интракраниалдык өзүн-өзү стимулдаштыруу босогосунун жогорулоосу менен өлчөнгөн сыйлык тартыштыгы менен коштолот (Schulteis .Удаалаш., 1995). 5-HT активдештирүү мээнин стимулдоочу сыйлыгын колдоо же күчтөндүрүү үчүн кээ бир далилдер бар (Гибсон жана башкалар, 1970;Miliaressis et al., 1975; Редгрейв жана Хоррелл, 1976). Ошентип, бул өткөргүчтүн экстранейрондук жетишсиздиги DAга көз каранды сыйлык тартыштыгын күчөтүшү мүмкүн, айрыкча NACдагы DA чыгарууда 5-HTтин көмөкчү ролунун акыркы далилдеринин негизинде (Chen .Удаалаш., 1991; Devaud and Hollingsworth, 1991; Йошимото жана Макбрайд, 1992; Парсонс жана Адилеттүүлүк 1993). Бул контекстте, бул изилдөөдө клеткадан тышкаркы жетишсиздиктин прогресси, анын ичинде мээ стимулдаштыруу сыйлык жетишсиздиги, гиперактивдүүлүк, жүрүм-турумдук бөгөт коюу жана анксиогендик таасирлери менен байланышкан иш менен тыгыз байланышта жүрүм-турум алып салуу симптомдору пайда болушу жана убактылуу профили менен тыгыз параллелдүү экенин белгилей кетүү кызыктуу.Болдуин и др., 1991; Rassnick .Удаалаш., 1992;Schulteis .Удаалаш., 1995). Ошентип, бул жүрүм-турумдук жана нейрохимиялык өзгөрүүлөрдүн синхрондуу пайда болушу этанолду алып салуу менен коштолгон терс таасирдүү шарттарда DA жана 5-HT ролун чагылдырышы мүмкүн.
DA жана 5-HT ролу этанол сыйлык жана көз каранды болгон бул изилдөөдө негизги тынчсыздануу болгонуна карабастан, этанол өз алдынча башкаруу көз каранды эмес келемиштер бул өткөргүчтөрдүн бошотуу боюнча таасири да кызыктуу. Көз каранды эмес топтогу DA чыгаруунун көбөйүшү мурунку отчетту тастыктайт (Weiss .Удаалаш., 1993) жана андан ары этанолдун курч күчөтүүчү аракеттеринде DA ролун колдойт. Этанолду көз каранды эмес келемиштер тарабынан өзүн-өзү башкаруу өзгөчө мааниге ээ болгон, анткени бул натыйжалар системалык жана жергиликтүү спирт ичимдиктерин колдонуудан кийин УАКда 5-HT релизинин көбөйгөндүгүнүн жыйынтыктарын кеңейтет.Yoshimoto .Удаалаш., 1991, 1992) этанолдун курч күчөтүүчү аракеттеринде 5-HT үчүн мүмкүн болгон ролго.
ЭТАНОЛ-НАIVE жана КӨЗ КАРАНДЫ топторго салыштырганда, базалдык DA чычкандарынын кыйла жогору болгондугу таң калыштуу болду, анткени көз каранды эмес жаныбарлар 2-3 жума бою этанолду ала алышкан эмес, ал эми контролдук суюк диетага киргизилгенге чейин. микродиализ тести. Бул байкоону түшүндүрүүнүн бир мүмкүнчүлүгү, алкоголдук ичимдиктерге үзгүлтүксүз жетүү базалдык DA чыгаруунун туруктуу жогорулашына алып келиши мүмкүн. Же болбосо, бул жыйынтык эксперименталдык жана контролдук жаныбарларды тандоого байланыштуу болушу мүмкүн. Этанол менен үйрөтүлгөн келемиштер КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС же КӨЗ КАРАНДЫ топторго, эгерде алар тандоо критерийине жооп бергенде гана дайындалды (этанолду суткалык керектөө ≥ 0.5 гм/кг этанол), ал эми бардык ЭТАНОЛ-НАIVE келемиштер ылгабай текшерилди. Эгер келемиштерде этанолду көп кабыл алууга шарт түзгөн дофаминергиялык "аномалия" бар деп болжолдонсо, анда бул тандоо процесси КӨЗ КАРАНДЫ жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС үлгүлөрдөгү базалдык DA-нын жакшыртылган релизине карата "нейрохимиялык тенденцияны" киргизген болушу мүмкүн. Бул эсеп боюнча, КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС келемиштердеги күчөтүлгөн DA агымы ушул нейрохимиялык мүнөздөмөсү бар субъекттерди кошууну жактырган тандоо процедурасынын натыйжасы болушу мүмкүн. КӨЗ КАРАНДЫ жана КӨЗ КАРАНДЫ ЭМЕС топтордун ортосундагы базалдык DA агып чыгуусунун айырмачылыктарын эске алуу менен, бул эсеп ошондой эле өнөкөт этанол келемиштердин бул популяциясында базалдык DA релизинин басылышына алып келет деген тыянакка келет.
Бирок, бир нече ойлор бул чечмелөөгө каршы чыгышат. ETHANOL-NAIVE жана КӨЗ КАРАНДЫ келемиштердин маалыматтарынын ортосундагы клеткадан тышкаркы DA айырмачылыктарынын жоктугу мурунку маалыматтар менен жакшы макулдашат. экстракорпоралдык изилдөөлөр көрсөткөндөй, өнөкөт этанол менен дарыланган жаныбарлар стриаталдык же аккумбалдык DA синтези жана DOPAC деңгээли боюнча тазаланбаган башкаруулардан айырмаланбайт (Табакофф жана Хоффман, 1978; Fadda .Удаалаш., 1980; Patel жана Pohorecky, 1989; Гил ж.б., 1992). Азыркы жана мурунку бүтүндөй кыртыш маалыматтарынын ортосундагы ырааттуулукту эске алуу менен (алар этанолду мажбурлап киргизүүнүн кандайдыр бир түрүн колдонушкан жана, демек, потенциалдуу тандоону камтыган эмес), азыркы тандоо процедуралары гана күчөтүлгөн режимди эсепке алышы күмөндүү көрүнөт. NONDEPENDENT тобунда DA чыгаруу. Бул таасир этанолду үзгүлтүксүз керектөө менен байланыштуу болушу мүмкүндүгүн түздөн-түз колдоо бул лабораторияда жасалган акыркы иштерден келип чыккан, кокусунан тандалып алынган Wistar келемиштери ич ара этанолду көп жолу инъекцияга кабылган. NAC акыркы этанол дарылоодон кийин 24 саат ченегенде (A. D. Smith жана F. Weiss, жарыяланбаган байкоолор). Башка жагынан алганда, бул маалыматтар этанолдун кайталанма таасири NACдагы базалдык DA агымын жогорулатат деген гипотезаны колдосо да, тырышууNONDEPENDENT тобунда базалдык DA агып чыгуусунун күчөшү так ырастоону талап кылат жана этанолду издөө жүрүм-туруму үчүн бул табылганын потенциалдуу мааниси тактоо бойдон калууда.
Жыйынтыктап айтканда, натыйжалар алкоголдун курч күчөтүүчү касиеттерине ортомчу деп эсептелген эки нейротрансмиттердик система да көз каранды субъекттерде алкоголдун күчөтүүчү иш-аракеттеринде роль ойношу мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Бул натыйжалар нейроадаптация теорияларына колдоо көрсөтөт, алар мээнин сыйлык схемаларындагы физиологиялык өзгөрүүлөрдүн натыйжасында келип чыгат, алар дары-дармектин таасири токтотулгандан кийин дарыга карама-каршы жооптор катары көрүнөт.
Шилтемелер
- кабыл алынган November 2, 1995.
- Revision кабыл алды February 23, 1996.
- кабыл алынган February 28, 1996.
Бул иш AA 08164 жана AA 10531 (FW) Алкоголдук ичимдиктерди кыянаттык менен пайдалануу жана алкоголизм гранттары боюнча Улуттук институт жана AA 06420 Улуттук алкоголизм жана алкоголизм боюнча адистештирилген борбор гранты (GK, FW; Директор, GFK) тарабынан колдоого алынган. PH биомедициналык изилдөө борборунан келген окумуштуу болгон, Alko Ltd., Хельсинки, Финляндия. Бул Scripps изилдөө институтунун NP-8871 басылмасы.
Кат Friedbert Weiss, Нейрофармакология бөлүмү (CVN-15), The Scripps изилдөө институту, 10666 North Torrey Pines Road, La Jolla, CA 92037 дарегине кайрылуу керек.
- Copyright © 1996 Нейро коому
;