PSMC5 бир 19S Proteasomal ATPase, Ядро Accumbens Кокаин Иш жөнгө (2015)

PLoS One. 2015 May 11;10(5):e0126710. doi: 10.1371/journal.pone.0126710. eCollection 2015.

Ohnishi YH1, Ohnishi YN2, Накамура Т3, Оо М4, Кеннеди PJ5, Ясуюки О6, г. А7, Neve R8, Цузуки Т4, Nestler EJ5.

жалпылаган

ΔFosB туруктуу транскрипция фактору болуп саналат, ал кокаинге же башка кыянаттык менен колдонулуучу дарыларга өнөкөт таасир этүүгө жооп катары мээнин сыйлык схемасынын негизги бөлүгү болуп саналат. ΔFosB активдүү транскрипция фактору комплексин түзүү үчүн Jun үй-бүлө мүчөсү менен гетеродимеризацияланганы белгилүү болсо да, мээдеги ΔFosB үчүн башка мүмкүн болгон байланыштыруучу өнөктөштөрдү ачык изилдөө болгон эмес. Бул жерде ачыткы эки гибриддик анализдерди колдонуу менен биз PSMC5-ди SUG1 деп атайбыз, 19S протеасомдук комплексинин ATPase камтыган суббирдиги - ΔFosB менен жаңы өз ара аракеттенүүчү протеин катары. Биз NAc менен эндогендик ΔFosB жана PSMC5 ортосундагы мындай өз ара аракеттенүүнү текшерип, эки белоктор да ген активдештирүү менен байланышкан башка хроматин жөнгө салуучу белоктор менен комплекстерди түзөрүн көрсөтөбүз. Биз өнөкөт кокаин NAcдагы PSMC5тин цитоплазмалык эмес, өзөктүк деңгээлин жогорулатарын жана мээнин бул аймагында PSMC5тин ашыкча экспрессиясы кокаинге кыймыл-аракеттин реакциясына өбөлгө түзөрүн көрсөтөбүз. Биргелешип, бул табылгалар ΔFosB аракеттерине салым кошкон жаңы механизмди сүрөттөйт жана биринчи жолу PSMC5ти кокаин менен шартталган молекулярдык жана жүрүм-турумдук пластикалык жактан камтыйт.

шилтеме: Ohnishi YH, Ohnishi YN, Nakamura T, Ohno M, Kennedy PJ, Yasuyuki O, et al. (2015) PSMC5, 19S Proteasomal ATPase, Аккумбенс ядросунда кокаин аракетин жөнгө салат. PLoS ONE 10(5): e0126710. doi:10.1371/journal.pone.0126710

Академиялык редактор: Джеймс Эдгар McCutcheon Лестер University, Бириккен Падышалык

кабыл алынган: December 10, 2014; кабыл алынган: April 7, 2015; Жарыяланган: 11 мүмкүн, 2015

Copyright: © 2015 Ohnishi et al. Бул жобонун шарттарына ылайык таратылган ачык мүмкүндүк макала Creative Commons Attribution License, Ар кандай каражаттар менен чектөөсүз пайдалануу, жайылтуу жана кайра жол, ал түшөт түп жазуучу жана булагын камсыз

Маалыматтар болушу: Бардык тиешелүү маалыматтар кагаз ичинде болуп саналат.

Каржылоо: Бул иш Улуттук Саламаттыкты сактоо Институтунун, Баңгизатты кыянаттык менен пайдалануу боюнча Улуттук Институттун жана Ишибаши Фондунун жана Япониянын Илимди жайылтуу коомунун гранттары менен колдоого алынган (KAKENHI номерлери: 24591735, 26290064, 25116010). Каржылоочулардын изилдөөнү долбоорлоодо, маалыматтарды чогултууда жана талдоодо, басып чыгаруу чечиминде же кол жазманы даярдоодо ролу болгон эмес.

кызыкчылыктарын атаандашууда: Жазуучулар жок атаандаш кызыкчылык бар деп жарыялашкан.

тааныштыруу

ΔFosB, кесилген продукт FosB ген, транскрипция факторлорунун Fos үй-бүлөсүнө кирет, аларга ошондой эле c-Fos, толук узундуктагы FosB, Fra-1 жана Fra-2 кирет. ΔFosB, башка Fos белоктору сыяктуу эле, Jun үй-бүлө протеин-c-Jun, JunB же JunD менен гетеродимеризацияланып, активдүү AP-1 (активатор протеин-1) транскрипция факторунун комплексин түзүшөт, ал конкреттүү максаттуу гендердин экспрессиясын индукциялайт же репрессиялайт. [1,2].

ΔFosB наркоманияда негизги ролду ойной турганы далилденген.2]. Fos үй-бүлө протеиндеринин арасында өзгөчө, ал туруктуулугунун жогорку деңгээлине байланыштуу дары-дармектерди кайра-кайра колдонуудан кийин ядронун аккументтеринде (NAc) жана башка сыйлыкка байланыштуу мээ аймактарында топтолот.3,4], бул C-терминал дегрон домендеринин жоктугу жана бир нече протеин киназалары менен фосфорлануу менен шартталган.5-7]. NAcдагы ΔFosB мындай индукциясы кыянаттык менен колдонулган дарыларга жүрүм-турумдук жоопторду жогорулатат. Ошентип, бойго жеткен жаныбарлардын мээсинин бул аймагында ΔFosB ашыкча экспрессиясы вирустук векторлорду же индукциялануучу битрансгендик чычкандарды колдонуу менен жаныбардын кокаиндин жана апийимдердин кыймыл-аракетти активдештирүүчү жана пайдалуу таасирлерине сезгичтигин, ошондой эле жаныбардын өзүн-өзү башкарууга мотивациясын жогорулатат. кокаин [7-11]. Тескерисинче, ΔFosB басымдуу терс антагонисттеринин ашыкча экспрессиясы карама-каршы жүрүм-турум фенотиптерин пайда кылат [10-12].

Биз жана башкалар мурда JunD жана, балким, башка Jun үй-бүлө протеиндери in vivo мээдеги ΔFosB негизги байланыштыруучу өнөктөштөр экенин, гел жылытуу анализдерин колдонуу менен тастыктаган.13-15]. Бирок, бүгүнкү күнгө чейин, мээдеги ΔFosB милдеттүү өнөктөштөрүн ачык, калыс баалоо болгон эмес. Бул жерде биз ачыткы эки гибриддик анализди колдонуу менен ΔFosB үчүн жаңы байланыштыруучу өнөктөштөрдү аныктоого аракет кылдык.16,17]. Биздин маалыматтарыбыз көрсөткөндөй, SUG5 катары да белгилүү болгон PSMC1 ΔFosBдин in vitro жана NAc in vivo күчтүү өнөктөшү болуп саналат, анда ал кокаин менен шартталган транскрипцияны активдештирүү комплексинин бир бөлүгү катары ΔFosB менен кошулат, анда CBP (CREB милдеттүү белок да бар) ) жана p300 - экөө тең гистон ацетилтрансферазалар (HATs) - ошондой эле BRG1 (хроматинди кайра түзүүчү протеин). Биз кокаиндин өнөкөт таасири NAcдагы 5S протеасомдук комплексинин ATPase камтыган суббирдиги болгон PSMC19тин өзөктүк деңгээлин өзгөртүп, PSMC5 өз кезегинде кокаинге болгон жүрүм-турум жоопторун көзөмөлдөй турганын көрсөтөбүз.

Материалдар жана ыкмалар

Ачыткы эки гибриддик скрининг

MaV203 ачыткы клеткалары (Invitrogen Life Technologies) ΔFosB протеининин ар кандай фрагменттерин айдап жүргөн pDBLeu менен биргелешип трансфекцияланган жана чычкандын мээ китепканасы pPC86да (Invitrogen Life Technologies) субклондолгон. Трансформацияланган клеткалар лейцин, триптофан жана гистидин жок жана 10 мМ 3-аминотриазолду камтыган SC-ортосунда өстүрүлдү. FosB фрагменттери менен талапкер өнөктөштүн ортосундагы байланыш үч кабарчы генди индукциялайт (His3, Ura3, жана LacZ) жана индукция трансформацияларды колдонулган маданияттуу шарттарда жашоого жөндөмдүү кылат. Позитивдүү клондор MaV203 клеткаларында ретрансформациялык анализдер менен жаңы pDBLeu-ΔFosB фрагменттери менен кайра сыналды.

Клетка сызыктар

Чычкан нейро 2А нейробластома клеткалары (ATCC) Бүркүттүн минималдуу маанилүү чөйрөсүндө (EMEM) (ATCC) сакталып, 10°C жана 37% CO5 менен XNUMX% түйүлдүктүн сывороткасы (FBS) менен толукталган.2. Чычкан 1А клеткалары Юсаку Накабеппудан (Фукуока, Япония) белек болгон [18] жана Дулбеконун MEMде (DMEM) (Life Technologies) сакталып, 10°Cде 37% FBS жана 5% CO менен толукталган.2. Клеткаларды плазмиддик ДНК менен трансфекциялоо өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Effectene (Qiagen) аркылуу ишке ашты.

PSMC5 жана ΔFosB конструкциялары

PSMC5тин бир нече мутанттык формалары, алардын ар биринин N-терминалында FLAG-белгиленген, иммунопреципитация же вирустук ортомчу генди өткөрүү эксперименттеринде колдонуу үчүн түзүлгөн. Аларга төмөнкүлөр кирет: PSMC5-K196M, PSMC5-Δспировка-коюлдук домен (PSMC5-ΔCC, 27-68 аминокислоталар жок), PSMC5-NT (белоктун N-терминалдык фрагментинен, аминокислота 1-151) жана PSMC5 -CT (белоктун С-терминалдык фрагментинен, 172 аминокислотадан турат) (караңыз. сүрөт 1). Биз ошондой эле N-терминал MYC-тегдүү ΔFosB жапайы тибиндеги формаларын, ошондой эле анын лейцин-сыдырма домениндеги мутация менен ΔFosB (Jun үй-бүлөсүнүн белоктору менен гетеродимеризацияны жок кылганы белгилүү болгон 182ден 205ке чейинки аминокислоталардын мутациясын) колдондук.6].

эскиз
Fig 1. ΔFosB in vitro PSMC5 менен байланышат.

 

A. ΔFosB, ΔFosB-LZM схемасы, анда лейцин сыдырма домени ΔFosB гетеродимеризациясын Jun белоктору менен жок кылуу үчүн мутацияланган жана ΔFosB N-терминусунун биринчи 2 аминокислоталары жок Δ78ΔFosB. B. PSMC5 схемасы, PSMC5 биринчи 151 аминокислоталарын камтыган PSMC5-NT, PSMC5 биринчи 235 аминокислоталары жок PSMC5-CT жана ширетилген спираль домени жок PSMC5-ΔCC (28–68 аминокислоталар) . AAA домени көптөгөн АТФазаларда болгон ар түрдүү уюлдук аракеттер менен байланышкан АТФазалар мотивине туура келет. C. 2.4 мкг pcDNA3.1-ΔFosB (тилектер 1-4) же ΔFosB-LZM (тилке 5) Neuro2.4a клеткаларына FLAG-белгиленген PSMC5 же ар кандай жок кылуу мутанттарынын 2 мкг менен биргелешип трансфекцияланган. Трансфекциядан эки күн өткөндөн кийин, клеткалар лизиске жана анти-FLAG антитело менен иммунопреципитацияга дуушар болгон, андан кийин анти-ΔFosB же анти-FLAG антителолору менен Батыш блотталган. Белгилей кетсек, ΔFosB, бирок ΔFosB-LZM эмес, PSMC5 же PSMC5-NT менен бекем туташат, бирок PSMC5-CT же PSMC5-ΔCC эмес. Сүрөттө көрсөтүлгөн маалыматтар үч өзүнчө эксперименттин ар биринде үч нускада кайталанган.

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.g001

жаныбарлар

Тогуз-11 жумалык C57BL/6J эркек чычкандары (The Jackson Laboratory) бардык эксперименттер үчүн колдонулган. Жаныбарлар 12 сааттык жарык-караңгы циклде тамак-ашка жана сууга жетүү мүмкүнчүлүгүнө ээ болгон ад либитум жана экспериментке 1 жума калганда көнүп калышкан. Эки кокаин дарылоо режими колдонулган. Кокаиндин биохимиялык таасирин изилдөө үчүн жаныбарларга суткалык 7 доза кокаин (20 мг/кг) же туз берилип, акыркы инъекциядан 24 саат өткөндөн кийин декапитация жолу менен өлтүрүлгөн. Бул стандарттуу протокол, ал дарыга көптөгөн молекулярдык жана клеткалык реакцияларды жаратат.7]. PSMC5тин кокаинге болгон жүрүм-турумдук реакцияларына таасирин изилдөө үчүн биз PSMC7.5 ΔFosB сыяктуу жаныбардын сезгичтигин жогорулатат деген гипотезага негизделген препараттын босогодон ашкан дозасын (5 мг/кг; Төмөндө кыймыл-аракеттин сезгичтигин караңыз) колдондук. кокаин [8]. Жаныбарларга жасалган бардык эксперименттер Синай тоосундагы жаныбарларды багуу жана пайдалануу боюнча мекемелик комитети тарабынан жактырылган.

Иммунопреципитация жана Вестерн-блотинг

Нейро 2А клеткалары PSMC5тин жапайы же мутанттык формалары менен трансфекцияланган. Трансфекциядан эки күн өткөндөн кийин, клеткалар PBS менен жууп, RIPA буферинде (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 0.25% натрий дезоксихолаты, 10 мМ натрий бутират ингибитору, протейлтеза ингибитору) лизистелген. . Лизаттар бөлүнүп, иммундук эмес IgG (Sigma) же анти-FLAG антителолору (Сигма) менен 3 саат 4°Cде инкубацияланган. Иммунопреципитация сүрөттөлгөндөй протеин G мончоктору (Invitrogen) менен аткарылган.19]. Кыскача айтканда, иммунопреципитацияланган протеиндер SDS-PAGEга дуушар болгон жана жарыяланган протоколдордун негизинде анти-FosB/ΔFosB антителосун (Cell Signaling Technology) колдонуу менен батыштык блоттинг менен анализделген [7]. In vivo протеин менен байланыштыруучу анализдер үчүн биз өнөкөт кокаин менен дарылоодон кийин чычкандардын Punch-dissected NAc тазаланган ядролук фракцияларын колдондук (20 мг/кг IP күн сайын 7 күн бою, чычкандар акыркы инъекциядан 24 саат өткөндөн кийин колдонулат). Ядролук фракциялардан ко-иммунопреципитация өндүрүүчүнүн нускамаларына ылайык, Nuclear Complex Co-IP комплектинин (Active Motif) жардамы менен аткарылган. Төмөнкү антителолор колдонулган: MYC же ß-актин, Cell Signaling Technology (Danvers, MA), PSMC5 жана гистон H3, Abcam (Cambridge, MA), CBP, p300 жана BRG1, Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) жана FLAG M2, Sigma.

Immunohistochemistry

Иммуногистохимия жарыяланган процедураларга ылайык аткарылган [20]. Чычкандар анестезирленген жана PBS 4% параформальдегид менен intracardially perfused. Мээ 30% сахароза менен криопротекцияланган, андан кийин тоңдурулган жана колдонууга чейин -80°C сакталган. Короналдык бөлүктөр (40 мкм) криостатта кесилип, иммуногистохимия үчүн иштетилди. Эркин сүзүүчү бөлүмдөр 0.3% Тритон жана 3% кадимки эшек сывороткасы камтыган блоктоочу буферде алдын ала инкубацияланган. ΔFosB белоктун N-терминалдык бөлүгүнө (1/1000 Санта-Круз биотехнологиясы) каршы көтөрүлгөн теке поликлоналдык антитело аркылуу аныкталган. PSMC5 коёндун поликлоналдык антителосун колдонуу менен аныкталган (1/100 Abcam, Cambridge, MA). Сүрөттөр конфокалдык микроскоп менен алынган (60x чоңойтуу; Zeiss).

таяныч маа-

Бардык чычкандар аларды инъекциянын стрессине көнүктүрүү үчүн 3 күн бою күн сайын IP инъекцияларын алышкан. Эртеси күнү чычкандарга физиологиялык эритме же кокаиндин босогодон ашпаган дозасы (7.5 мг/кг; жогорудагы Жаныбарлар бөлүмүн караңыз) менен инъекцияланган жана дароо кыймыл-аракеттин жаңы кутуларына салынган. Чычкандардын кыймыл-аракети 30 мүнөткө амбулатордук нурлар үзүлгөндүктөн, фотобюм системасын колдонуу менен жазылган. Бул дарылоо 3 күн бою күн сайын кайталанат.

Интернетте чагылдырылуусу-арачылыгы ген берүү

Биз вирустук генди өткөрүү үчүн кеңири жарыяланган ыкмаларды колдондук.7,8,11,19]. Кыскача айтканда, PSMC5 же анын бир нече мутанттары үчүн экспрессия плазмиддери (жогоруда PSMC5 жана ΔFosB конструкцияларын караңыз) CMV промоутеринин көзөмөлү астында GFPди туюнтуучу бицистрондук p1005(+) HSV плазмидине субклондолгон жана PSMC5 же анын мутанттары үчүн IE4/5 промоутер. Кетамин (100 мг / кг) / ксилазин (10 мг / кг) наркоздун астында чычкандар кичинекей жаныбардын стереотаксикалык аспабына жайгаштырылып, баш сөөгүнүн бети ачылды. Отуз үч калибрлүү шприц ийнелери 0.5 мкл HSV векторун NAcга 10° бурчта (AP +1.6; ML +1.5; DV -4.4) 0.1 мкл/мин ылдамдыкта эки тараптуу куюу үчүн колдонулган. HSV инъекциясын алган жаныбарларга экспериментке чейин операциядан кийин 2 күн калыбына келтирүүгө уруксат берилген.

статистика

ANOVAs жана студенттин t-тесттери колдонулуп, маанилүүлүгү p <0.05 менен белгиленген, бир нече жолу салыштыруу үчүн оңдолгон.

натыйжалары

PSMC5: ΔFosB романынын милдеттүү өнөктөшү

Биз системаны автоактивдештирбестен ачыткы эки гибриддик анализде жем катары кызмат кылган ΔFosB тиешелүү фрагментин аныктоо үчүн алдын ала эксперименттерди жүргүздүк. Holo-ΔFosB протеиндин N-терминал 1-78 аминокислота фрагменти сыяктуу эле кабарчы генинин активдүүлүгүн өз алдынча козгоду. Бирок, N-терминал кесилген ΔFosB (сүрөт 1A), белоктун алгачкы 2 аминокислоталары жок Δ78ΔFosB деп аталган бул таасирге ээ болгон эмес. Ошондуктан, биз жем белок катары Δ2ΔFosB колдонгон.

Потенциалдуу байланыштыруучу өнөктөштөрдү текшерүү үчүн биз pPC86да субклондолгон чычкандын мээ китепканасын колдондук. Биз милдеттүү өнөктөштөр үчүн 11 талапкерди аныктадык. Бул протеиндер ΔFosBнин белгилүү гетеродимеризация өнөктөштөрүн камтыса да, c-Jun жана JunD (стол 1), буга чейин көп таралган талапкер PSMC5 болгон. Таң калыштуусу, бул кызыктуу табылга болду, анткени PSMC5 бир нече жыл мурун бир отчетто c-Fos менен in vitro менен байланышта болгон.21]. Бирок, PSMC5 кокаин аракетине катышкандыгы тууралуу алдын ала билдирүүлөр жок. Ошого карабастан, ачыткы эки гибриддик анализдеги PSMC5 сигналынын күчтүүлүгүнөн улам, биз мүмкүн болгон ΔFosB-PSMC5 өз ара аракеттенүүсүн андан ары изилдөөгө кириштик.

эскиз
Таблица 1. Δ2ΔFosB менен ачыткы эки гибриддик скринингдин натыйжалары.

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.t001

Биринчиден, ΔFosB жана PSMC5 ортосундагы физикалык өз ара тастыктоо үчүн, биз in vitro биргелешип иммунопреципитациялык эксперименттерди жүргүздүк. Биз FLAG белгиси бар PSMC5 (сүрөт 1B), Нейро 2А клеткаларына трансфекцияланган, ΔFosB эффективдүү түрдө түшүрүлгөн (сүрөт 1C). Экинчиден, PSMC5теги анын ΔFosB менен байланышы үчүн жооптуу болгон аймакты аныктоо үчүн, биз бир нече FLAG теги бар PSMC5 мутанттарын түздүк (сүрөт 1B) жана ко-иммунопреципитация экспериментин кайталады. ΔFosB PSMC151 (PSMC5-NT) N-терминал 5 аминокислоталары менен эффективдүү түшүрүлгөн, бирок белоктун C-терминал 172 аминокислота фрагменти (PSMC5-CT) менен эмес.сүрөт 1C). PSMC5 спиралдоо домени (PSMC5-ΔCC) жок, ошондой эле ΔFosB туундулоодо натыйжасыз болгон. Бул табылгалар PSMC5 ΔFosB менен ΔFosB менен спиралданган доменди (аминокислота 27-68) байланыштырарын көрсөтүп турат. Мындан тышкары, FLAG-белгиленген PSMC5 мутацияланган лейцин сыдырма домени (ΔFosB-LZM) менен ΔFosB мутанттык формасын туташтырган жок (ΔFosB-LZM) (сүрөт 1C), ΔFosB же бул домен аркылуу PSMC5ти байланыштырарын же, кыязы, PSMC5 байланышы үчүн ΔFosB гетеродимеризациясы талап кылынарын көрсөтүп турат.

Өнөкөт кокаинди башкаруудан кийин NAc менен PSMC5-ΔFosB байланышы

Бул табылгалардын негизинде in vitro, биз NAc PSMC5 денгээлдери өнөкөт кокаин башкаруу жооп катары өзгөртүлгөн же жокпу, изилдеп чыктык. Биз өнөкөт кокаин цитоплазмалык деңгээлдер өзгөрбөстөн мээнин бул аймагындагы PSMC5 ядролук деңгээлин жогорулатарын субклеткалык фракциялоо жана вестерн блотинг аркылуу таптык (сүрөт 2A). Бул таасир кокаиндин бир дозасын колдонуудан кийин байкалган эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес). Кийинки биз NAcдагы PSMC5 жана ΔFosB локализациясын конфокалдык иммунофлуоресценттик микроскопия менен карап чыктык. Биз чычкандарды кокаиндин акыркы кайталанган дозасынан 24 саат өткөндөн кийин анализдедик, бул убакыттын чекити ΔFosB гана аныкталуучу FosB ген продукты (караңыз Nestler 2008). Биз NAcда күчтүү PSMC5 иммунореактивдүүлүгүн, анын ичинде күчтүү ядролук сигналды таптык. ~85% ΔFosB+ өзөктөрү PSMC5 үчүн (сүрөт 2B). Кошумчалай кетсек, биз NAc экстракттарында биргелешкен иммунопреципитация эксперименттерин жүргүздүк жана кокаинди өнөкөт дарылоодон кийин, ΔFosB анти-PSMC5 антитело тарабынан натыйжалуу түшүрүлгөнүн аныктадык (сүрөт 2C). Ал эми, NAc дары-наафтын анализи (кайра кайталанган туз сайгандан кийин) эч кандай аныкталбаган ΔFosB ылдый түшүргөн эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес). Бул маалыматтар клетка маданиятындагы биздин тыянактарыбызга шайкеш келет жана ΔFosB жана PSMC5 in vivo NAc менен өз ара аракеттенет.

эскиз
Fig 2. NAc чычкандагы PSMC5 жөнгө салуу.

 

A. Акыркы инъекциядан кийин 20 сааттан кийин анализденген жаныбарлар менен 7 күн бою туздуу же кокаин (24 мг/кг) менен күн сайын дарыланган чычкандардын NAc ядролук жана цитозолдук бөлчөктөрүн Western blotting. Кокаин PSMC5 ядролук, бирок cytosolic эмес, көлөмүн жогорулатат. Кокаиндин таасири тийбеген гистон H3 жана ß-актин жүктөө контролу катары колдонулган. Маалыматтар орточо ± SEM болуп саналат (n = 8-10 / топ, * p <0.05). B. эндогендик PSMC5 (жашыл) жана ΔFosB (көк) AC сыяктуу кокаин менен өнөкөт мамиле чычкандардын NAc менен бирге локалдаштыруу өнөкөт кокаин дарылоодон кийин чычкан NAc ядролук лизиттери башкаруу катары анти-PSMC5 антитело же чычкан IgG менен иммунопреципитация дуушар болгон , андан кийин Батыш анти-FosB/ΔFosB антителолору менен блотталган. Сүрөт in vivo NAcдагы PSMC5-ΔFosB өз ара аракеттенүүсүн көрсөтөт. B жана C маалыматтары үч өзүнчө эксперименттин ар биринде үч нускада кайталанган.

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.g002

PSMC5 in vitro ΔFosB экспрессиясын жакшыртат

PSMC5 протеасома комплексинин белгилүү мүчөсү болгондуктан, биз ал Rat 1A клеткаларын колдонуу менен ΔFosB деңгээлин жөнгө салаарын текшердик. PSMC5 ашыкча экспрессиясы ΔFosBнин базалдык деңгээлдерине эч кандай таасир тийгизген эмес, бирок клеткалардын сывороткасын стимулдаштырууда ΔFosB индукциясынын кичине, бирок олуттуу жакшырышына себеп болгон (сүрөт 3A). Окшош тенденция толук узундуктагы FosB үчүн байкалган, бирок эффект статистикалык мааниге жеткен эмес. Тескерисинче, келемиш 5А клеткаларындагы PSMC1 эндогендик экспрессиясын PSMC5ке багытталган siRNAларды колдонуу менен басаңдатуу, базалдык ΔFosB деңгээлине таасир эткен жок, бирок ΔFosB индукциясына сарык стимулдаштыруу аркылуу катуу бөгөт койду (сүрөт 3B). Окшош эффекттер толук метраждуу FosB үчүн да байкалган. Бул маалыматтар PSMC5 ΔFosB протеасомдук деградациясын өбөлгө кылбайт, протеазоманын негизги суббирдиги катары күтүлгөндөй, бирок анын ордуна максималдуу топтоо үчүн талап кылынат деп болжолдойт. FosB ген продуктылары in vitro, балким, белокторду турукташтыруу аркылуу.

эскиз
Fig 3. Rat 5A клеткаларында FosB/ΔFosB экспрессиясынын PSMC1 жөнгө салынышы.

 

A. Rat 1A клеткалары PSMC4 же башкаруу ДНК 5 мкг менен transfected. PSMC5 overexpression Батыш Blotting тарабынан аныкталган FosB же ΔFosB белоктун базалдык сөз деъгээлинде эч кандай таасир эткен эмес, бирок ΔFosB сывороткасы дем менен аз, бирок олуттуу өсүшү өндүрүлгөн (F (2,21) = 9.75, б = 0.001). B. Rat 1A клеткалары эки siRNAs же шифрленген РНКнын биринин 5 pmol менен трансфекцияланган (башкаруу). Эки siRNAs башкаруу шарттарына салыштырмалуу PSMC5 протеининин деңгээлин натыйжалуу төмөндөттү (siRNA #1, 23 ± 5% башкаруу; siRNA #2, 18 ± 6%; p <0.05; n = 4). PSMC5 кулатуусу FosB же ΔFosBнин базалдык деңгээлдерине эч кандай таасир тийгизген жок, бирок сыворотка стимулдаштыруу аркылуу FosB жана ΔFosB экөөнүн тең индукциясын басаңдатты (FosB: F(2,6) = 20.99, p = 0.002; ΔFosB: F(2,6) = 22.83). , p = 0.002).

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.g003

ΔFosB жана PSMC5 NAcда CBP, p300 жана BRG1 менен комплекстерди түзөт

PSMC5 ΔFosB функциясына таасир этиши мүмкүн болгон транскрипциялык механизмдерди жакшыраак түшүнүү үчүн, биз өнөкөт кокаин менен дарыланган шарттарда NAc эки белоктор үчүн мүмкүн болгон кошумча байланыштыруучу өнөктөштөрдү изилдедик. PSMC5 CBP — HAT менен байланышат жана HeLa клеткаларындагы MHC-II проксималдык промоторунда гистон Н3 ацетилдешин жогорулатат деген бир билдирүү бар.22]. Мындан тышкары, CBP жетишсиз чычкандар кокаинге карата жүрүм-турумунун сезгичтигин, ошондой эле гистондун ацетилдешин төмөндөтөт. FosB промоутер [23]. Ошентип, биз PSMC5 ΔFosB менен CBP жана, балким, башка транскрипциялык активаторлорду камтыган комплекстердин бир бөлүгү катары байланыша алабы же жокпу, сынап көрдүк.

Биз алгач ΔFosB Neuro300A клеткаларында CBP жана p2, тиешелүү HATти эффективдүү түшүргөнүн көрсөттүк.сүрөт 4A). Ал эми, ΔFosB лейцин сыдырма мутант түрү, күтүлгөндөй, бул иш көрсөткөн эмес. Ошо сыяктуу эле, PSMC5 натыйжалуу CBP жана p300 түшүрдү (сүрөт 4B). Кызыктуусу, бул эффект ΔFosBди түшүрбөгөн PSMC5-ΔCC үчүн да байкалды, бул PSMC5 протеиндин башка домендери аркылуу CBP жана p300 менен өз ара аракеттенет жана анын ΔFosB менен байланышынан көз карандысыз.

эскиз
Fig 4. ΔFosB жана PSMC5 CBP, p300 жана BRG1 менен in vitro жана in vivo менен өз ара аракеттенишет.

 

A. Neuro2A клеткалары MYC-тег ΔFosB же MYC-тег ΔFosB-LZM 2.4 мкг менен transfected. Клетка экстракттары анти-CBP же анти-p300 антителолору менен иммунопреципитацияланган, ал эми чөкмөлөр ошол эле антитело же анти-MYC антителолору менен батыштан блотталган. CBP жана p300 экөө тең ΔFosB менен өз ара аракеттенишет жана мындай өз ара аракеттешүү бузулбаган лейцин сыдырмасын талап кылат. B. Neuro2A клеткалары FLAG-белгиленген PSMC2.4 же FLAG-белгиленген PSMC5-ΔCC 5 мкг менен transfected. Клетка экстракттары анти-CBP же анти-p300 антителолору менен иммунопреципитацияланган, ал эми чөкмөлөр ошол эле антитело менен же анти-FLAG антителолору менен батыштан алынган. CBP жана p300 экөө тең PSMC5 менен өз ара аракеттенишет жана мындай өз ара аракеттер CC доменин талап кылбайт. C. өнөкөт кокаин дарылоо кийин чычкан NAc ядролук lysates анти-CBP же анти-p300 антитело менен immunoprecipitation дуушар болгон. Анти-FosB / ΔFosB антителолору менен пайда болгон чөкмөлөрдүн кийинки Батыш блоттору ΔFosB жана CBP / p300 ортосундагы эндогендик өз ара аракеттенүүнү көрсөттү. D. Ошол эле өзөктүк лизаттардын аликвоттору анти-BRG1 же анти-PSMC5 антителолору менен иммунопреципитацияга дуушар болгон, андан кийин анти-FosB/ΔFosB же анти-BRG1 антителолору менен чөкмөлөрдүн батыш тазалоосу. Натыйжалар ΔFosB жана BRG1 жана BRG1 жана PSMC5 ортосундагы эндогендик өз ара аракеттенүүнү көрсөтөт. E. CBP / p300, BRG1 жана PSMC5 менен өз ара ΔFosB: JunD гетеродимерлерден турган транскрипциялык активдештирүү комплексинин схемалык сүрөтү.

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.g004

Бул өз ара аракеттенүү in vivo да болгонун тастыктоо үчүн, биз кокаинди ΔFosB жана өзөктүк PSMC5 деңгээлин, андан кийин анти-CBP же анти-p300 антителолору менен иммунопреципитацияланган NAc экстрактыларын индукциялоо үчүн өнөкөт түрдө башкардык. Биздин клетка маданиятынын маалыматтарына ылайык, CBP же p300 иммунопреципитациясы ΔFosBди эффективдүү түшүрдү (сүрөт 4C). Биз BRG1 өнөкөт кокаинден кийин NAcда активдештирүү менен бирге BRG5 кээ бир ΔFosB максаттуу гендерине жалданган деген биздин мурунку тыянакыбыздын негизинде SWI-SNF хроматинди ремоделинг комплексинин негизги бөлүмчөсү болгон BRG1 дагы ΔFosB жана PSMCXNUMX менен байланыша алабы же жокпу сынап көрдүк.24]. Биз BRG1дин иммунопреципитациясы NAc экстрактыларында ΔFosBди түшүргөнүн жана PSMC5тин иммунопреципитациясы да ошондой эле эндогендик BRG1ди кошо преципитациялаганын таптык.сүрөт 4D). Чогуу алганда, бул жыйынтыктар ΔFosB-PSMC5 NAcда CBP/p300 жана BRG1ди камтыган комплекстерди түзөрүн көрсөтүп турат (сүрөт 4E).

PSMC5 ашыкча экспрессия кокаинге кыймыл-аракетти күчөтөт

PSMC5тин NAcдагы ΔFosB менен көрүнүктүү байланышы бизди мээнин бул аймагындагы PSMC5 деңгээлин жогорулатуу кокаинге болгон жүрүм-турумдук реакцияларды жөнгө салаарын иликтөөгө түрткү берди. Биз жапайы типтеги PSMC5 же анын мутанттарынын бирин ашыкча экспрессия кылган Герпес Simplex Virus (HSV) векторун түздүк жана векторлорду NAc in vivo ичинде текшердик (сүрөт 5A). Клетка ядросунда PSMC5тин вирустук ортомчулугу басымдуулук кылат (сүрөт 5B). Жапайы типтеги PSMC5ти ашыкча экспрессиялаган чычкандар кокаиндин баштапкы дозаларына өзгөргөн жоопторду көрсөткөн эмес, бирок GFP-экспрессиялоочу контролдук чычкандарга салыштырмалуу кокаиндин кайталанма дозаларына жооп катары кыймыл-аракеттин активдешүүсүн көрсөткөн. Ал эми, PSMC5 мутанттык формасын ашыкча экспрессиялаган чычкандар бул эффектти көрсөткөн эмес (PSMC5-ΔCC)сүрөт 5B). Кызыктуусу, жапайы типтеги протеиндин ATPase активдүүлүгү жок PSMC5-K196M ашыкча экспрессиясы да кокаиндин кыймыл-аракет реакцияларын күчөткөн.

эскиз
Fig 5. NAcтеги PSMC5 ашыкча экспрессиясы кокаинге кыймыл-аракеттин реакциясын жогорулатат.

 

A. өкүлү HSV ортомчу transgene сөз орто NAc. AC, алдыңкы комиссия. NAc негизги жана кабык субрегиондору сүрөттө белгиленген. B. HSV-PSMC60 инъекциясынан кийин NAc нейрондорунун PSMC5 иммуногистохимиялык боёшунун B. өкүлү жогорку чоңойтуулары (5x) протеин DAPI боёгу менен белгиленгендей басымдуу ядролук экенин көрсөтүп турат. C. Чычкандар NAcге эки тараптуу HSV инъекцияларын, андан кийин кокаиндин босогодон ашкан дозаларын күнүмдүк IP инъекцияларын (7.5 мг/кг) алды. Локомотордук реакциялар дарынын суткалык 3 дозасынын биринчи жана акыркысына жооп катары көрсөтүлөт. PSMC5 же PSMC5-K196M ашыкча экспрессиясы кайталанган кокаинге кыймыл-аракеттин реакциясын жогорулатат, бул PSMC5-ΔCC менен байкалган эмес. Трансгендердин кокаиндин баштапкы дозаларына кыймылдуу реакцияларына олуттуу таасири болгон эмес. ANOVA F(3,125) = 4.163, *p<0.05 Дуннеттин постхок тести боюнча.

чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0126710.g005

талкулоо

Бул изилдөөнүн натыйжалары ΔFosB мээге анын таасирин ортомчулук кылган жаңы механизмин жана кокаин иш-аракетине катышкан жаңы механизмин ачып берет. Калыс мамилени, ачыткы эки гибриддик анализди колдонуу менен, биз PSMC5ти ΔFosB үчүн жаңы милдеттүү өнөктөш катары аныктадык. Биз бул табылганы PSMC5-ΔFosB бекем байланышын көрсөтүү менен in vitro жана NAc in vivo маданияттуу клеткаларында да тастыктадык. Маанилүү нерсе, PSMC5 өзөктүк деңгээл өнөкөт кокаин башкаруу менен NAc түрткү болот. Биз андан ары PSMC5-ΔFosB байланышы башка бир нече транскрипциялык активатор протеиндери, атап айтканда CBP жана p300 (эки HATs) жана BRG1 (SWI-SNF хроматинди ремоделинг комплекстеринин негизги түзүүчүсү) менен бирге болоорун көрсөттүк. Биргеликте, биздин табылгаларыбыз PSMC5 өнөкөт кокаинди башкаруунун жүрүшүндө жок дегенде белгилүү ΔFosB-индукцияланган гендерге тартылган транскрипциялык активдештирүү комплексинин бир бөлүгү деген гипотезаны колдойт (сүрөт 4E). Бул гипотеза менен шайкеш NAc ичинде PSMC5 ашыкча экспрессиясы, ΔFosB өзү ашыкча экспрессиясы сыяктуу, кокаинге карата жүрүм-турумдук жоопторду өбөлгө түзөт деген кошумча табылга. Бул in vivo байкоолорду PSMC5-ΔFosB-HAT-BRG1 өз ара аракеттешүүсүн in vitro кабарчысынын анализдерин колдонуу менен мүнөздөөгө кийинки изилдөөлөрдө кызыктуу болмок.

PSMC5тин кокаин аракетине катышуусу толугу менен жаңы. Адегенде протеасоманы түзгөн АТФазалардын чоң үй-бүлө мүчөсү катары аныкталган PSMC5 көп жылдар бою бир нече транскрипция факторлору, анын ичинде c-Fos, p53, ядролук гормон рецепторлору жана базалдык транскрипция комплексинин түзүүчүлөрү менен өз ара аракеттенишин көрсөткөн.25], бирок, бир нече функционалдык изилдөөлөр жылдар бою аткарылган [26]. Анын эң жакшы белгиленген аракети культураланган клеткаларда MYC транскрипция факторлорунун активдүүлүгүн жогорулатуу болуп саналат.27]. PSMC5тин транскрипциялык механизмдерге тийгизген таасири ген транскрипциясын жөнгө салууда ubiquitination-протеасомдук активдүүлүктүн потенциалдуу ролун сунуш кылды, бирок PSMC5тин мындай жөнгө салууга катышуусу бүгүнкү күнгө чейин дээрлик текшерилбеген бойдон калууда [28,29].

Мээдеги PSMC5 функциясы жөнүндө өтө аз нерсе белгилүү. Мурунку изилдөө мээнин бүтүндөй PSMC5 мРНКнын кеңири таралган экспрессиясын көрсөттү.30], бирок анын функционалдык активдүүлүгү изилденбеген бойдон калды. Биздин табылгалар ген транскрипциясын жөнгө салуудагы ролун жана анын мээдеги ubiquitination-протеасомдук функциясы менен болгон байланышын жакшыраак түшүнүү үчүн бул кызыктуу белокту андан ары изилдөөгө түрткү берет. PSMC5тин ΔFosB менен байланышы PSMC5тин спиралданган домени аркылуу ишке ашырылат. Мындан тышкары, PSMC5тин кокаинге кыймыл-аракеттин реакциясын илгерилетүү жөндөмдүүлүгү, оролгон катушка доменин талап кылганда, протеинге таандык ATPase активдүүлүгүн талап кылбайт. Бул натыйжалар, жок эле дегенде, биздин системада, PSMC5 негизги иш-аракети анын ΔFosB жана башка транскрипциялык жөнгө салуучу белоктор менен байланышы аркылуу ортомчулук болушу мүмкүн, ал эми анын протеасомдук активдүүлүгү аркылуу эмес, мүмкүнчүлүгүн жогорулатат. Бул жана альтернативдик мүмкүнчүлүктөрдү түздөн-түз текшерүү үчүн мындан аркы иштер керек. PSMC5тин вирустук ортомчу ашыкча экспрессиясы ΔFosB менен өз ара аракеттенүү аркылуу кокаинге кыймыл-аракеттин реакциясын жогорулатты деген гипотеза, 3 күндүк кокаинди дарылоо режимин колдонууга карабастан, акылга сыярлык, анткени бул убакыттын ичинде мээде ΔFosB олуттуу деңгээлде чогула турганы белгилүү.3].

Бул табылгалар мээни жөнгө салуунун молекулярдык негиздерин изилдөөдө калыс, ачык эксперименталдык ыкмаларды колдонуунун пайдалуулугун дагы да далилдейт. PSMC5 биздин алгачкы көңүл ачыткы эки гибриддик анализде анын ΔFosB менен көрүнүктүү байланышына гана негизделген, бирок ал кокаинди кайталап башкаруу аркылуу NAcде алынган транскрипциялык өзгөрүүлөрдүн маанилүү компоненти болуп көрүнөт. PSMC5тин өзөктүк деңгээли кокаин менен индукцияланган жана өз кезегинде PSMC5 андан кийин кокаин менен шартталган транскрипциялык активдештирүү комплекстерине салым кошкон деталдуу механизмдерин жакшыраак түшүнүү учурдагы иликтөөлөрдүн чордону болуп саналат. Ошол эле учурда, биздин ачыткы эки гибриддик анализ ΔFosB бир нече кошумча болжолдуу байланыштыруучу өнөктөштөрүн көрсөттү (стол 1) бул дагы кокаин моделдерине түздөн-түз экспертиза жүргүзүүнү талап кылат. Бул иш биргелешип, кокаин NAc функциясын өзгөрткөн татаал молекулярдык механизмдерди түшүнүүгө жардам берет.

Acknowledgments

Бул иш Баңгизаттарды кыянаттык менен пайдалануу боюнча улуттук институттун гранттарынын жана Ишибаши Фондунун жана Япониянын Илимди жайылтуу коомунун (KAKENHI номерлери: 24591735, 26290064, 25116010) колдоосу менен колдоого алынган.

Author Contributions

Эксперименттерди ойлоп тапкан жана долбоорлогон: YHO YNO EJN. Эксперименттерди аткарган: YHO YNO PJK RN. Маалыматтарды талдоо: YHO YNO EJN. Кошулган реагенттер/материалдар/анализ куралдары: TN MO OY AN RN TT. Кагазды жазган: YHO EJN.

шилтемелер

  1. 1. Morgan JI, Curran T (1995) Дароо-эрте гендер: он жылдан кийин. Trends Neurosci 18: 66–67. pmid:7537412 doi: 10.1016/0166-2236(95)80022-t
  2. 2. Nestler EJ (2008) Көз карандылыктын транскрипциялык механизмдери: deltaFosB ролу. Philos Trans R Soc London B Biol Sci 363: 3245–3255. doi: 10.1098/rstb.2008.0067. pmid: 18640924
  3. Кароо-берене
  4. PubMed / NCBI
  5. Google окумуштуу
  6. Кароо-берене
  7. PubMed / NCBI
  8. Google окумуштуу
  9. Кароо-берене
  10. PubMed / NCBI
  11. Google окумуштуу
  12. Кароо-берене
  13. PubMed / NCBI
  14. Google окумуштуу
  15. Кароо-берене
  16. PubMed / NCBI
  17. Google окумуштуу
  18. Кароо-берене
  19. PubMed / NCBI
  20. Google окумуштуу
  21. Кароо-берене
  22. PubMed / NCBI
  23. Google окумуштуу
  24. Кароо-берене
  25. PubMed / NCBI
  26. Google окумуштуу
  27. Кароо-берене
  28. PubMed / NCBI
  29. Google окумуштуу
  30. Кароо-берене
  31. PubMed / NCBI
  32. Google окумуштуу
  33. Кароо-берене
  34. PubMed / NCBI
  35. Google окумуштуу
  36. Кароо-берене
  37. PubMed / NCBI
  38. Google окумуштуу
  39. Кароо-берене
  40. PubMed / NCBI
  41. Google окумуштуу
  42. Кароо-берене
  43. PubMed / NCBI
  44. Google окумуштуу
  45. Кароо-берене
  46. PubMed / NCBI
  47. Google окумуштуу
  48. Кароо-берене
  49. PubMed / NCBI
  50. Google окумуштуу
  51. Кароо-берене
  52. PubMed / NCBI
  53. Google окумуштуу
  54. Кароо-берене
  55. PubMed / NCBI
  56. Google окумуштуу
  57. Кароо-берене
  58. PubMed / NCBI
  59. Google окумуштуу
  60. Кароо-берене
  61. PubMed / NCBI
  62. Google окумуштуу
  63. Кароо-берене
  64. PubMed / NCBI
  65. Google окумуштуу
  66. Кароо-берене
  67. PubMed / NCBI
  68. Google окумуштуу
  69. Кароо-берене
  70. PubMed / NCBI
  71. Google окумуштуу
  72. Кароо-берене
  73. PubMed / NCBI
  74. Google окумуштуу
  75. Кароо-берене
  76. PubMed / NCBI
  77. Google окумуштуу
  78. Кароо-берене
  79. PubMed / NCBI
  80. Google окумуштуу
  81. Кароо-берене
  82. PubMed / NCBI
  83. Google окумуштуу
  84. Кароо-берене
  85. PubMed / NCBI
  86. Google окумуштуу
  87. Кароо-берене
  88. PubMed / NCBI
  89. Google окумуштуу
  90. 3. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, et al. (1994) Өнөкөт кокаин жана башка өнөкөт дарылоо аркылуу мээдеги Фос сымал белоктордон турган узакка созулган AP-1 комплексинин индукциясы. Нейрон 13: 1235–1244. pmid:7946359 doi: 10.1016/0896-6273(94)90061-2
  91. 4. Hiroi N, Brown J, Haile C, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ (1997) FosB мутант чычкандары: Fos-байланыштуу белоктордун өнөкөт кокаин индукциясын жоготуу жана кокаиндин психомотордук жана пайдалуу таасирлерине сезгичтиктин жогорулашы. Proc Natl Acad Sci USA 94: 10397–10402. pmid:9294222 doi: 10.1073/pnas.94.19.10397
  92. 5. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ (2006) Phosphorylation менен ΔFosB туруктуулугун жөнгө салуу. J Neurosci 26: 5131–5142. pmid:16687504 doi: 10.1523/jneurosci.4970-05.2006
  93. 6. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, et al. (2007) Консервацияланган C-терминал дегрон доменинин жоктугу ΔFosB уникалдуу туруктуулугуна өбөлгө түзөт. Eur J Neurosci 25: 3009–3019. pmid: 17561814
  94. 7. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J, Kourrich S, Collins M, et al. (2013) Өнөкөт кокаинге болгон жүрүм-турумдук жана структуралык жооптор ядронун кабыгындагы ΔFosB жана CaMKIIди камтыган илгерилетүү циклин талап кылат. J Neurosci 33: 4295–4307 doi: 10.1523/JNEUROSCI.5192-12.2013. pmid: 23467346
  95. 8. Kelz MB, Chen Jr, Carlezon WA Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. (1999) Мээде ΔFosB транскрипция факторунун экспрессиясы кокаинге болгон сезимталдыкты көзөмөлдөйт. Nature 401: 272–276. pmid: 10499584
  96. 9. Колби CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW (2003) ΔFosB кокаин үчүн стимулду күчөтөт. J Neurosci 23: 2488–2493. pmid:12657709
  97. 10. McClung CA, Nestler EJ (2003) CREB жана DFosB тарабынан ген экспрессиясын жана кокаин сыйлыгын жөнгө салуу. Nat Neurosci 11: 1208–1215. pmid:14566342 doi: 10.1038/nn1143
  98. 11. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, et al. (2006) ΔFosB: ΔFosB үчүн маанилүү ролу morphine иш-жылы ядронун аккументтери. Nature Neurosci 9: 205–211. pmid:16415864 doi: 10.1038/nn1636
  99. 12. Пикмен MC, Колби С, Перротти LI, Текумалла П, Карл Т, Улери П, ж.б. (2003) Трансгендик чычкандарда c-Jun үстөмдүк кылуучу терс мутанттын индукциялануучу, мээ аймагынын өзгөчө экспрессиясы кокаинге болгон сезимталдыкты төмөндөтөт. Brain Res 970: 73–86. pmid:12706249 doi: 10.1016/s0006-8993(03)02230-3
  100. 13. Чен Дж, Нье Хе, Келц МБ, Хирои Н, Накабеппу Ю, ж.б. (1995) дельта FosB жана FosB сыяктуу белокторду электроконвульсивдүү талма жана кокаин менен дарылоо. Mol Pharmacol 48: 880–889. pmid: 7476919
  101. 14. Хирои Н, Марек ГДж, Браун Дж, Йе Х, Сауду Ф, Вайдя В.А., ж.б. (1998) Electroconvulsive талма молекулярдык, клеткалык жана жүрүм-турум иш-аракеттери fosB ген негизги ролу. J Neurosci 18: 6952–6962. pmid: 9712664
  102. 15. Perez-Otano I, Mandelzys A, Morgan JI (1998) MPTP Parkinsonism dopaminergic жолдорунда бир D-FosB сыяктуу белоктун туруктуу билдирүү менен коштолот. Mol Brain Res 53: 41–52. pmid:9473580 doi: 10.1016/s0169-328x(97)00269-6
  103. 16. Ма Дж, Пташне М (1988) Эукариоттук транскрипция ингибиторун активаторго айландыруу. 55-уяча: 443–446. pmid:3180218 doi: 10.1016/0092-8674(88)90030-x
  104. 17. Chien CT, Bartel PL, Sternglanz R, Fields S (1991) Эки гибриддик система: кызыктырган протеин менен өз ара аракеттенген белоктордун гендерин аныктоо жана клондоо ыкмасы. Proc Natl Acad Sci USA 88: 9578–9582. pmid:1946372 doi: 10.1073/pnas.88.21.9578
  105. 18. Nakabeppu Y 1, Oda S, Sekiguchi M (1993) Delta FosB тарабынан тынч келемиш Rat-1A клеткаларынын пролиферативдик активдешүүсү. Mol Cell Biol 13:4157–4166. pmid:8321220
  106. 19. Scobie KN, Damez-Werno D, Sun H, Shao N, Gancarz A, Panganiban CH, et al. (2014) кокаин иш-жылы поли (ADP-ribosyl) ation негизги ролу. Proc Natl Acad Sci USA 111: 2005–2010. doi: 10.1073/pnas.1319703111. pmid: 24449909
  107. 20. Перротти LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, et al. (2008) кыянаттык менен дары-дармектер менен мээдеги ΔFosB индукциясынын айырмаланган үлгүлөрү. Синапс 62: 358–369. doi: 10.1002/syn.20500. pmid: 18293355
  108. 21. Wang WL, Chevray PM, Nathans D (1996) Сүт эмүүчүлөрдүн Sug1 жана c-Fos ядролук 26S протеазомасында. Proc Natl Acad Sci USA 93: 8236–8240. pmid:8710853 doi: 10.1073/pnas.93.16.8236
  109. 22. Koues OI 1, Dudley RK, Truax AD, Gerhardt D, Bhat KP, McNeal S, et al. (2008) 19S протеасомдук ATPase Sug1 тарабынан негизги гистокомплекстүү класс II проксималдык промотордо ацетилденүүнү жөнгө салуу. Mol Cell Biol 28: 5837–5850. doi: 10.1128/MCB.00535-08. pmid: 18662994
  110. 23. Levine AA, Guan Z, Barco A, Xu S, Kandel ER, Schwartz JH (2005) CREB-милдеттүү протеин чычкан стриатумундагы fosB промоутеринде гистондорду ацетилдөө менен кокаинге жооп кайтарат. Proc Natl Acad Sci USA 102: 19186–19191. pmid:16380431 doi: 10.1073/pnas.0509735102
  111. 24. Кумар А, Чой КХ, Рентал В, Цанкова Н.М., Теобальд DEH, Труонг ХТ, ж.б. (2005) Хроматинди ремоделизациялоо стриатумдагы кокаин менен шартталган пластикалыктын негизги механизми болуп саналат. Нейрон 48: 303–314. pmid:16242410 doi: 10.1016/j.neuron.2005.09.023
  112. 25. St-Arnaud R (1999) Транскрипциялык жөнгө салуучулар үчүн кош функциялар: миф же чындык. J Cell Biochem Suppl 32/33: 32–40. doi: 10.1002/(sici)1097-4644(1999)75:32+<32::aid-jcb5>3.0.co;2-x
  113. 26. Ferrell K, Wilkinson CRM, Dubiel W, Gordon C (2000) 26S протеазомунун жөнгө салуучу суббирдик өз ара аракеттенүүсү, татаал маселе. Trends Biochem Sci 25:83–88. pmid:10664589 doi: 10.1016/s0968-0004(99)01529-7
  114. 27. von der Lehr N, Johansson S, Larson LG (2003) Myc жөнгө салынуучу транскрипцияда ubiquitin/proteasome системасынын таасири. Клетка цикли 2–5: 403–407. doi: 10.4161/cc.2.5.484
  115. 28. Geng FQ, Wenzel S, Tansey WP (2012) Ubiquitin and proteasomes in transscription. Анну Аян Биохим 81: 177–201. дой: 10.1146/annurev-biochem-052110-120012. pmid:22404630
  116. 29. Коллинз Г.А., Танси ВП (2006) Протеазома: транскрипция үчүн пайдалуу куралбы? Curr Op Genet Dev 16: 197–202. pmid: 16503126
  117. 30. Sun DH, Swaffield JC, Johnston SA, Milligan CE, Zoeller RT, Schwartz LM (1997) Чычкандардын нерв системасында дифференциалдуу түрдө чагылдырылган филогенетикалык жактан сакталган Sug1 CAD үй-бүлө мүчөсүнүн идентификациясы. Dev Neurobiol 33: 877–890. doi: 10.1002/(sici)1097-4695(199712)33:7<877::aid-neu2>3.0.co;2-5