Инсулин, тамактангандан кийин курсак сигналга гипоталамус клеткалары инсулин кабылдагычтарды (InsRs) жандырат. Бирок, өнөкөт бийик инсулин баскычтарда натыйжасында семирүү көбөйүшү, инсулинден да түрткү сыйлык жөнгө мээ борборлоруна иш мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Биз инсулин InsRs билдирип striatal антихолинергикалык interneurons камтыйт кыйыр механизм менен иш-аракеттер мүмкүн болгон көз каранды тинейджер (DA) ядросу accumbens-жылы боштондукка (УАК) жана caudate-putamen тыбыштын болот кабарлаган. Мындан тышкары, эки келемиштер түрдүү өнөкөт диета боемочулуктарды, азык-түлүк чектөө (FR) жана obesogenic (ОБ) тамактануу, тескери ОБ-жылы ийкемдүүлүгүн FR-жылы, ал эми жоготуу аспаптын ийкемдүүлүгүн менен инсулин үчүн striatal DA чыгаруу сезимталдык өзгөртпөйт. Жүрүш-туруш изилдөөлөр НАК орбитада кала инсулин болгон бир жупташкан глюкоза эритмеси даамы үчүн артыкчылык алуу үчүн зарыл экенин көрсөтүп турат. Жалпысынан, бул маалыматтар striatal инсулин белги азык-түлүк чечим таасир DA бошотулушун жандандырганын билдирбейт.

Ал, ошондой эле андан ары тамак төмөндөйт схемаларды appetitive терс жооп берет гипоталамус, учурунда жана тамактангандан кийин плазма инсулин бир туруктуу өсүшү инсулин кабылдагычтарга кыймылга (InsRs) деп белгиленет^{1, 2, 3}. Brain инсулин кан-мээ тосмо менен мээге плазмасынан активдүү транспорт менен, негизинен, уйку бези β клеткалардан, алынган^{4, 5, 6, 7, 8}, Ошондой эле ал жерде, нейрондордун инсулин синтези жана бошотуу далилдерди өсүп жатат да,^{1, 9}. Белгилей кетчү жагдай, кошумча-hypothalamic InsRs милдети чечилбеген бойдон калууда, бирок InsRs билдирүү, гипоталамус үчүн гана эмес,^{1, 2, 3}. ашыкча салмактуулук жана түрү II диабет жогорулатуу окуяны эске алып, инсулин жүгүртүүдөгү денгейй дайыма бийик жана мээ инсулин транспорт жана сезгич сезгичтиги болгон жатат азайган^{3, 8, 10, 11}, Ал түрткү сыйлык жөнгө мээ аймактарда инсулин милдетин түшүнүү үчүн абдан маанилүү болуп саналат. өзгөчө кызыгууну Brain облустарында азык-түлүк жана дары-дармек менен пайдалуу таасирин ортомчулук ядро ​​accumbens (УИА), анын ичинде^{12, 13}Жана адат-негизделген жүрүм-турум жана каалоолору рол ойнойт caudate-putamen (CPU)¹³. InsRs жогорку тыгыздык НАК болгон менен бул аймактарда, бою берилет^{3, 14}; InsRs да тинейджер (DA) midbrain, анын ичинде ventral tegmental аймагында да нейрондордун (VTA) жана substantia Nigra абз compacta (SNC) менен берилет¹⁵. Brain инсулин этаптары плазма инсулин топтолуусу жана дене adiposity жараша болот^{6, 7, 8}, Инсулин бул мээ аймактарында азык-түлүк сыйлык таасир үчүн InsRs боюнча иш-аракет болушу мүмкүн деген гипотезага алып баруучу^{3, 16, 17}.

striatal synaptosomes мурунку изилдөөлөр, окшошпогон клеткалары мээ сыра жана бододо, InsRs боюнча инсулин кошуу DA ташуу каражаты тарабынан DA өздөштүрүү өсүшүнө алып келет деп көрсөткөн (DAT)^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. Бул жараян PI3 Креатинкиназа белги аларыбызды билдирет^{19, 20}Жана плазманы кабыкчасындагы DAT киргизүү жыйынтыктар¹⁹. DA Оже жана DAT бетиндеги сөздөр диабет жана азык-түлүк чектөө кийин мал моделдер көргөн тёмёндёё менен, Таратылган инсулин аздыгы динамикалуу striatal DAT ишин байытып (FR)^{20, 21}. DAT иш инсулин-көз каранды көбөйөт айынан клетка сыртындагы DA топтоо азайтууга көрсөткөн ([DA]_o) VTA менен²³, DA бошотуу жана өздөштүрүү ортосундагы баланс өзгөрүүнү чагылдырган. VTA инсулиндин жеште, инсулин белгиленген ролу ылайык, курч microinjection азык-түлүк сыйлык төмөндөшү мүмкүн^{23, 24}, VTA жана SNC-DA нейрондордо InsRs жок чычкандар, ал эми тамак-аш ичүү көбөйдү жана семиздик болуп көрсөтүлгөн²⁵. инсулин VTA DA нейрон менен excitatory киргизүү узак мөөнөттүү депрессияга түзө алат да²⁴, Кайра жеште, бир ролу менен ырааттуу, инсулин таасири, ошондой эле, балким, DA чыгарууну жана autoreceptor-арачылыгы жайлатып азайтуу аркылуу DA нейрон атууга ылдамдыгын көбөйтүүгө болот²⁵. striatal DA бошотуу боюнча инсулин таза таасир алдын ала Ошондуктан кыйын. Чынында эле, натыйжалар боюнча инсулин таасиринин изилдөөлөрдүн striatal DA релизде экс Vivo сыра¹⁹ жана азык-түлүк сыйлыктан НАК инсулин жергиликтүү microinjection таасири²⁶ бирине карама-каршы келгендей көрүнөт. Бул чечүү үчүн, биз НАК жана тетиктин бир бүтүн микро-жылы Аксондор DA чыгарууну жана өнөктөштүктү баа менен экс Vivo колдонуу striatal сыра туруучу voltammetry тез издөө (Кск), жана сыйлык жүрүм НАК боюнча инсулин сигналдаштыруунун кесепеттерин аныкталат бододо,.

Биздин изилдөөлөр DA өздөштүрүү боюнча жарыш өсүшүнө карабастан, УАК жана тетиктин инсулин алгачкы таасири, DA боштондукка жогорулатуу экенин көрсөтүп турат. DA чыгарууну бул динамикалык жөнгө никотин acetylcholine (лар) кабылдагыч (nAChRs) ишке аркылуу күчөтүлгөн DA бошотууга алып келет striatal антихолинергикалык interneurons боюнча жандануусу (ChIs), бир инсулин-каранды жогорулатууну камтыйт. ChIs жана DA бошотуу боюнча инсулин таасири InsRs ортомчулугу аркасында жатат. Белгилей кетчү жагдай, DA бошотуу боюнча инсулин таасири FR келемиштер тартып бүдүрчөлөр менен күчөтүлгөн, бирок obesogenic боюнча келемиштер менен мокотконго жетишти (ОБ), тамак-аш. Бул маалыматтар DA чыгарууну ампер көрсөтүү экс Vivo сыра инсулин сыйлык белги болушу мүмкүн деп алдын ала үчүн инсулин, коргошун менен бододо,. Чынында эле, параллелдүү жүрүш-изилдөөлөр даам-артыкчылык Пропаганда чажыт сөөктөрүндө инсулин үчүн ролун көрсөтүп турат. Жалпысынан, бул ачылыштар тамак-аш тандоого таасир эте сыйлык белги катары инсулин үчүн жаңы ролун көрсөтүп турат

InsRs жогорулатуу боюнча иш инсулин striatal DA бошотууну туудурган

жергиликтүү баштапкы экспертиза туудурган [DA]_o Кск менен мониторинг экс Vivo менен келемиштер тартып striatal сыра ад либитум (AL) тамак-аш, суу алуу мүмкүнчүлүгү психологиялык тиешелүү топтолушунун бир катар боюнча инсулин курч колдонуу үчүн күтүүсүз натыйжаларды көрсөттү^{1, 4} өскөн бир кагуусу-жылдын апрел айында [DA]_o (Сүрөт. 1a-с), Инсулин EC менен₅₀ баалуулуктар 2-12 нм (натыйжа жарым максималдуу болуп турган топтолуу) (Сүрөт. 1b). туудурган көбөйдү [DA]_o Бул берилген өзгөчө калыштуу, деп максималдуу курсунун олуттуу өсүшү менен коштолгон (V_макс), Ар бир аймак боюнча DAT-арачылыгы жутулуу үчүн (стол 1) Айынан бир атаандаш кыскарышына алып келет, ал [DA]_o, Ошондой эле мурда кабарланган^{22, 23}. Анын ордуна, биз туудурган табылган [DA]_o 20 Н.М. инсулин менен максималдуу 55-30% күчөтүлгөн болчу; зор катыштык таасир району жогорку InsR сөз менен striatal субрегионалдык болуп НАК кабыгы, болгон^{1, 14}. бирдей шарттарда 30 Н.М. инсулин дуушар сыра striatal DA мазмунуна эч кандай өзгөрүү жок көрсөткөн (Кошумча сүрөт. 1a), Ошол инсулинди салууга эмес, жөн гана upregulating DA синтези караганда, динамикалык релиз жөнгө өзгөртөт. Белгилей кетчү жагдай, статуя боюнча инсулин таасири [DA]_o supraphysiological байытуу кездегидей ≥100 (складдынСүрөт. 1b). Бул инсулин таасир катары көбөйгөн DAT иш-релизди жетет натыйжасы эмес, V_макс Ошондой эле бул байытуу боюнча кол жууп калган (стол 1). Жалпысынан, бул маалымат ошол бойдон striatal микро-жылы, күнү инсулин басымдуу таасир апрел көрсөткөн [DA]_o DA өздөштүрүү боюнча жарыш өсүшүнө карабастан, боштондукка жогорулатуу болуп саналат.

  

  

(a) Орточо жылдын апрел-бир кагуусу [DA]_o НАК катмары, УАК инсулин өзөгү жана тетиктин чейин жана андан кийин (Ins) 30 Н.М. үчүн мисал менен; ката барлар салдык, бирок көрө (b); жебе сигналга убакыт көрсөтөт. Инсулин айынан жогорулаган [DA]_o жылы катмарда (55 ± 10% га), негизги жана тетиктин (37 ± 5% менен) (20 менен ± 4%) (***P<0.001). (b) Инсулин Effect сөөктөрүндө топтолуу психологиялык алкагында көз каранды (1-30 Н.М.) болгон (n= 22-24, F_5,133= 14.471, P<0.001), негизги (n= 36-76, F_5,308= 16.318, P<0.001) жана CPu (n= 30-62, F_5,253= 13.763, P<0.001), бирок ≥100 нМде жоготкон. (c) Чоку-жылдын апрел айында өкүлү жазуулар [Э]_o дары колдонуунун жок чажыт ядродогу бир ишканасында учурда салыштырмалуу (Кон), инсулин колдонуу учурунда (30 Н.М.) же инсулин InsR ингибиторун HNMPA (5 мкм) катышуусу менен кайрылган болчу. (d) Орточо чоку-жылдын апрел айында [DA]_o маалымат инсулин күчүнө алдын көрсөтүү (30 Н.М.) HNMPA, InsR окуянын S961 (1 мкм) жана PI3K ингибиторун LY294002 (1 мкм), ал эми Наезби-1R ингибиторун МЖӨ (1 мкм) тарабынан эмес, (n= 29-76; P> Инсулинге салыштырмалуу 0.9). For Сүрөт. 1a-д, n= Ар бир дары же инсулин топтоо үчүн 3-6 келемиштер тартып аймак күнүнө сайттардын саны; бир жолу Дисперс анализи, Tukey чынчыл мааниси сыноо (HSD). көрүү Кошумча сүрөт. 1b, с НАК кыртыш жана CPU маалыматтары үчүн.

• Баштапкыдай (98 KB)

 

 

Себеби инсулин да инсулин сыяктуу өсүшү себеп 1 кабылдагычтарга иш-аракет (Наезби-1Rs), болсо да 100 Н.М. (булак ашкан байытуу боюнча болот. 1), Биз туудурган [Э] боюнча инсулин жогорулатуу таасир ырастоо үчүн аракет_o болгон InsR көз каранды. Бул окуя болуп, таасири бир клеткадагы InsR ингибиторун тоскоол болгон сыяктуу эле, Гидрокси 2-naphthalenylmethylphosphonic кислотасы (HNMPA), жана InsR душманын менен S961, бирок Наезби-1Rs ылгап ингибиторун менен, picropodophyllin²⁴ (АКП; Сүрөт. 1c, д жана Кошумча сүрөт. 1b, с). Биз анда Dat боюнча инсулин-каранды жөнгө салуу үчүн жооптуу белги жол баштайт PI3 киназ тартуу, карап¹⁹. 1 мкм топтоштурууга, P13K ингибиторун LY249002 гана чоку-жылдын апрел айында эч кандай таасир эткен [Э]_o or V_макс (n= 29-76 сайттар (УАК негизги) дары күнүнө, P> 0.05, дисперсиянын бир тараптуу талдоосу (ANOVA); маалыматтар көрсөтүлгөн эмес), бирок инсулиндин пайда болгон таасирине тоскоол болгон [DA]_o Бардык striatal субаймактык (Сүрөт. 1d жана Кошумча сүрөт. 1b, с).

DA аксон жана ChIs боюнча InsRs чектөө

байкалган көбөйтүү V_макс инсулин психологиялык денгээлде менен DA жутулуу үчүн ар кандай striatal даярдык боюнча жыйынтыктарын окшоп, DA аксон боюнча InsRs болушун болжолдойт^{18, 19, 20, 21, 22}. midbrain DA нейрон боюнча InsRs иш сөздөр да көрсөтүп жатат^{15, 23, 24, 25}, Striatal DA аксон боюнча InsR сөздөр билдирди элек. Биз бул аркылуу immunohistochemistry кайрылды. бир DA-синтездеп энзимдин immunoreactivity тарабынан аныкталган DA аксон боюнча InsR чектөө striatum чектелген сандык баа берүү боюнча тыгыз InsR immunoreactivity, тирозин, гидроксилаз (TH). Андыктан мурда протокол кабыл алган²⁷, Бул кадимки сүрөт эске TH + таржымалы менен замандаш InsR puncta саноо менен гана 90 ° тарабынан айланды InsR бейнеси кийин кайра саноо тартылган. InsR жана TH + таржымалын айкын Кайталанып менчиктин болсо, анда бул жол-жобосу жөнөкөй же 90 этабы жүзөгө ° же салыштырууга эсептешкиси бериши керек. Ошентсе да, бул талдоо 14 боюнча TH + Profiles 9% ± менен InsR puncta жана рухтун бир аз төмөндөшү байкалган (n= 42 талаалар, P<0.01, эки куйруктуу t-test; маалымат DA аксон боюнча InsR тастыктоочу,) көрсөтүлгөн эмес. More Кызыгы, Бирок, InsR striatum боюнча immunolabelling холин acetyltransferase кошумча immunolabelling менен striatal ChIs аныкталды ири уюлдук органдарына айырмаланган InsR сөздөрдү ачып берген (маек), Любляна синтези үчүн зарыл болгон негизги энзим. electrophysiological критерийлерин колдонуу²⁸ Алдын ала жан-клетка жазуусун изилдөө ChIs аныктоо үчүн, бир нече нейрондор biocytin толуп, андан кийин immunohistochemistry үчүн иштелип; Бул (4 / 4) бардык InsR менен маек да immunopositive болгон (Сүрөт. 2a). InsR жана НАК менен чатта биргелешип чектөө кийинки баа дээрлик бардык маек + нейрондор InsR (96% билдирди тастыктады; n= Эки келемиштер төрт бөлүмдө 27 / 28 нейрон).

  

  

(a) Chi biocytin толуп, анда сүйлөшсө immunolabelled жана InsR (4 / 4 өкүлү biocytin толгон ChIs); бириктирилген сүрөтү чогуу жергиликтештирүүнү көрсөтөт; шкала бар, 10 мкм. (b-e) Учурдагы тагылган (3-с узактыгы depolarizing бир катар striatal ChIs менен иш-аракет; 200, 300 жана 400 ПА; 120-с аралыгы) чейин жана инсулин кийин (30 Н.М.). (b) Жыштык ылайыкташтырууну Spike бир Chi (жогорку) иш-аракеттер мүмкүн болуучу жоготуу көрүнүп турат (AP) инсулин (төмөнкү) учурдагы инжектордук, ал эми учурдагы Тамырдын бою кайталана Муаммар убагында аткарууга; көрсөтүлгөн толук маалымат топтому d. (c) Өкүлү убакыт сабак AP саны инсулин-жасалма көбөйтүү Чикаго үчүн ар бир учурдагы кадам менен b. (d) Инсулин катнаштын AP саны учурдагы сигналдарга учурунда чейин жана жогорку күчүнө боюнча баяндама (n= 21 жупташкан сөлөкөт, 7 нейрондор, 5 келемиш) (e) Башкаруу шартында инсулин таасир (+ Ins) (Кон көрсөтүү жоопторун билдирет; n= 21 жупташкан сөлөкөт, 7 нейрондор, ***P<0.001, эки куйруктуу t-test), HNMPA (5 мкм катышуусу менен) (n= 12 жупташкан сөлөкөт, 4 нейрондор, 4 келемиш, P>0.05, эки-куйруктуу жупташкан t-test), жана МЖӨ (1 мкм катышуусу менен) (n= 18 жупташкан сөлөкөт, 6 нейрондор, 6 келемиш, **P<0.01, Уилкоксон жуп кол коюлган аскердик наамы боюнча тест дал келген). (f) Орточо жылдын апрел-бир кагуусу [DA]_o mecamylamine чажыт чейин жана инсулин кийин ядро ​​(30 Н.М.) жылы (ажылыгы; 5 мкм) же DHβE (1 мкм) 100% жогорку көзөмөл нормалуу (n= 20-40 келемиштер чейин абалы күнүнө аймак күнүнө 3-4 сайттар, P> 0.05 контролдоого каршы, жупташтырылбаган t-test). (g) Орточо жылдын апрел-бир кагуусу [DA]_o heterozygous контролдоо (Het) жана тездик бүдүрчөлөр менен чат KO чычкандар чейин жана инсулин (30 Н.М.) кийин 100% жогорку көзөмөлгө таркады. Инсулин айынан жогорулаган [DA]_o CPU чажыт сөөктөрүндө 190 ± 23% га heterozygous чычкандар, 140 ± НАК ядродогу 8% жана 137 ± 12% менен (n= 15-25 сайттар генотип күнүнө 3-4 чычкандардын тартып аймак күнүнө, **P<0.01, ***P<0.001 жана контролдоо жупташтырылбаган t-test), ал эми жылдын апрел [Э] эч таасир берген жок_o кандайдыр бир striatal аймак боюнча чат KO чычкандар (P> 0.1).

• Баштапкыдай (167 KB)

 

 

Инсулин Chi жандануусу көбөйтөт

striatal ChIs боюнча InsRs кызматтарга сыноо үчүн, биз бүт-клетка учурдагы-бириктиргич жазууну колдонуп Chi жандануусу боюнча инсулин таасирин карап. Chi жандануусу ишенимдүү өсүш жыштык байыр көрсөткөн иш-аракеттер мүмкүнчүлүктөрүн бир поезд козгоп 3-с depolarizing учурдагы жыйып, бир катар колдонуу менен бааланган (Сүрөт. 2b), Көп учурда азыркы Тамырдын-жылдын акырына карата Муаммар жоготуу менен. Кетчү нерсе, инсулин (30 Н.М.) өсүш жыштык байыр начарлагандыгынын, убакыттын өтүшү менен иш-аракеттер мүмкүн саны акырындык менен жогорулашына алып келди (Сүрөт. 2c), Максималдуу көбөйүү менен (Сүрөт. 2d, электрондук) Адатта 20 жана инсулин таасир 50 мин ортосунда көргөн. инсулин жок болсо, башкаруу ChIs кыжалат иш-аракеттер мүмкүнчүлүктөрүн саны эч кандай өзгөрүү жок көрсөткөн (P> 0.05, эки куйруктуу t-test; маалыматтар берилген эмес); Ошол убакыт аралыгында үстүнөн мониторинг башкаруу нейрондор менен салыштырганда, инсулин дуушар нейрондор кыжалат иш-аракеттер мүмкүнчүлүктөрүн санынын бир кыйла көп өзгөрүүлөрдү көрсөткөн (башкаруу n= 12 төрт нейрондордон стимул түгөй, инсулин n= Жети нейрондордон стимул түгөй 21, F_1,25= 5.63, P<0.05, эки тараптуу ANOVA аралашмасы; маалыматтар берилген эмес). Инсулиндин иш-аракет потенциалынын көбөйүшүнө тийгизген таасири HNMPA тарабынан алдын-алынган, бирок IGF-1R тандалма ингибитору PPP эмес (Сүрөт. 2e), Инсулин менен Чикаго жандануусу көбөйгөн көрсөтүп InsR арачылык кылган эле.

кыжалат [Э] менен инсулин жогорулатуу_o nAChRs жана Любляна талап кылат

Мурунку изилдөөлөр ChIs жана Любляна күчү жеткен DA аксон боюнча nAChRs аркылуу striatal DA чыгарууну жөнгө көрсөттү^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. курч инсулин таасири менен көргөн Chi жандануусу чексиз InsR ChIs жөнүндө сөз айкашы жана өркүндөтүү, бул нейрондор күчөтүлгөн DA эркиндикке алып келиши мүмкүн инсулин үчүн романы максаттуу болушу мүмкүн экенин билдирген. Бул сыноо үчүн, mecamylamine алдында инсулин күчүнө карап, бир эмес тандалма nAChR окуянын, же dihydro-β-erythroidine (DHβE) боюнча жакшырат β2 курамдык-камтыган (β2 *) nAChRs үчүн тандап соттошот DA аксон³⁵. Туудурган [DA]_o эки дары менен бир- тёмёндёгён болсо да, дароо бул антагонисттер катышуусу менен аныкталган бир Тамырдын-жылдын апрел айында [DA]_o (Мисалы, 13-26 NAC ядродогу% га), ошондой эле мурда кабарланган^{29, 30, 31, 32}. Лар жана nAChRs боюнча ролун колдоого алуу менен, статуя боюнча инсулин таасири [DA]_o mecamylamine да тоскоол болгон же DHβE (Сүрөт. 2f). инсулин-күчөтүлгөн DA бошотуу striatal Любляна сигналдаштыруунун тартууну ырастоо үчүн, биз инсулин күчүнө карап жылы экс Vivo Чат сөз генетикалык тездик структураларында ablated берилген чычкандар тартып striatal сыра (тездик менен чат KO чычкан) striatum, анын ичинде,³². ChIs бул чычкандар кала болсо да, Любляна синтези турган, жокко кыскарган алып келет, ал эми дагы бир кагуусу-жылдын апрел айында даярдуулук менен табылууга [DA]_o, Ошондой эле буга чейин айтылгандай,³². башкаруу heterozygous ОДНОПОМЕТНИКИ-жылы, инсулин (30 Н.М.) айынан жогорулаган [DA]_o НАК кыртыш жана ядро ​​жана 37-90% га CPU-жылы (Сүрөт. 2g), Чычкан striatum көргөн ампер ашпаган (мисалы, Анжир. 1). Бирок, статуя боюнча инсулин таасири [DA]_o тездик менен striatal комплексинин бою алынбаса болду чат KO чычкандар, DA чыгаруу үчүн инсулин-арачылыгы көбөйтүүнү көрсөтүүдө striatal лар, бирок мындай глутамат катары ChIs чейин биргелешип бошотулган өткөргүчтөрдү талап кылат³⁶.

туудурган [Э] боюнча инсулин таасири_o көз каранды диета

Плазма жана мээ инсулин шогырлануы орган adiposity жараша болот^{6, 7, 8}Жана инсулин үчүн мээ маселе боюнча акы өзгөрүүлөргө алып келиши мүмкүн. Ошондуктан биз диета AL салыштырмалуу өнөкөт FR же ОБ диета көзөмөлдөп же кармалып келемиштер тартып striatal сындырым нан менен, DA чыгарууну камсыз кылуу үчүн инсулин жөндөмүнө таасир гипотезаны сыналган. Күтүлгөндөй эле, плазма инсулин аздыгы AL же ОБ келемиштер караганда дене салмагын, FR төмөн инсулин менен байланыштуу болгон (Сүрөт. 3a жана стол 2). инсулин жүгүртүүдөгү Бул айырмачылыктарга карабай, жогорку-жылдын апрел айында [DA]_o НАК кыртыш жана өзөгү, жана тетиктин ичинде жайгашкан бир топ төмөн болгон экс Vivo AL салыштырмалуу диета Эки топтун striatal сыра (Сүрөт. 3b жана Кошумча сүрөт. 2 а, б), Инсулин кошумча нерселер абсолюттук статуя бийлик экени айтылып [DA]_o. Striatal DA мазмуну эмес, DA синтези караганда релиз жөнгө өзгөргөнүн көрсөтүп, диета топтор арасында бир айырмасы деле жок (Кошумча сүрөт. 2c). динамикалык жөнгө өзгөрүшүнө ылайык, инсулин үчүн striatal DA чыгарууну сезгичтик көз каранды тамактануу кыйла болду. FR келемиштер-жылы, инсулин шогырлануы AL эч кандай таасир эткен, ≤1 (складдынСүрөт. 1b), Статуя көбөйгөн [DA]_o (Сүрөт. 3c), ЕКнын менен көбөйгөн инсулин сезимталдыкты чагылдырган₅₀ FR striatum боюнча баалуулуктар (0.4-0.6 Н.М.) болжол менен AL төмөн деп баллга тартиби болгон (салыштыр: инжир 1b жана 3c). таптакыр айырмаланып, инсулин таасири ОБ striatum-жылы жоголуп кеткен; AL striatum бир максималдуу таасир эткен, атүгүл 30 Н.М. инсулин, (Сүрөт. 1b), ОБ эч кандай таасир эткен (Сүрөт. 3c).

  

  

(a) Плазма инсулин топтолуу жакшы тамактандыруу топтордо дене салмагы менен байланышы бар (R= 0.76). (b) Орточо жылдын апрел-бир кагуусу [DA]_o НАК ядродогу (карагыла Кошумча сүрөт. 2a, б НАК кыртыш жана CPU) үчүн FR (38 ± 4%) төмөн болгон жана ОБ (25 ± 4%) AL каршы (n= Диета топтун 50-60 келемиштер тартып 5-6 сайттар, F_2,156= 23.337, бир жолу Дисперс анализи, Tukey HSD; ***P<0.001); OB жана FR (P<0.08). (c) Туудурган жана сезимталдыгы [DA]_o инсулин үчүн FR көбөйтүлгөн, бирок бөлүнсө, жоголгон (n= 21-49 сайттар 2-4 келемиштер күнүнө диета топтун топтолуу күнүнө аймак күнүнө бир жолу Дисперс анализи, Tukey HSD), ар кандай субаймактык FR-жылы AL келемиштер көбүрөөк этияттык менен (P<0.001 ар бир аймак үчүн; эки тараптуу ANOVA; CPu: F_{(Т¼м¼нд¼г³д¼й коркунучтарга диета ×; 3,286)}= 10.253; негизги: F_{(Т¼м¼нд¼г³д¼й коркунучтарга диета ×; 3,353)}= 6.166; кабыгы: F_{(Т¼м¼нд¼г³д¼й коркунучтарга диета ×; 3,195)}= 10.735).

• Баштапкыдай (124 KB)

 

 

Бул маалыматтар striatal InsR сезгичтигин жана дене adiposity ортосундагы кайтарым көз карандылыкты чагылдырган. Же болбосо, бирок, бул диета көз каранды айырмачылыктары өзгөртүп nAChR сезимталдыкты чагылдырышы мүмкүн. Ошондуктан биз ар бир диета топтун НАК ядродогу никотинге топтолуу жооп аныкталат. Никотин [DA] катышына салыштыруу жолу менен чыгууга мүмкүн болот nAChR көндүрүп, алып келет_o из 100 Hz беш буурчак кыскача поезд менен апрел айында бир-Тамырдын-жылдын апрел айында [DA]_o (5 б: 1 б катышы) nAChR жандыруу / ажеп бир көрсөткүчү катары^{30, 31}. Бул ыкманы колдонуу менен, биз НАК ядродогу nAChR маселе диета топтордун арасында эч кандай айырмачылыктарды табылган (Кошумча сүрөт. 3a-с). Мындан тышкары, 5 б башкаруу: 1 б катышы НАК ядродогу диета топтордун арасында бир айырмасы деле жок (Кошумча сүрөт. 3d) Же CPU (мисал эмес), бул тамак берүү nAChR көз каранды DA релиз жөнгө өзгөртпөйт. Ошентип, striatal InsR сезгичтиги FR AL келемиштер каршы, ал эми инсулин психологиялык байытуу боюнча striatal DA чыгарууну жөнгө жоготуу менен ОБ келемиш, жок күчөп кетиши шекилдүү.

НАК кабыгы инсулин коюлтулган даам артыкчылык modulates

Тамак-аш түзөтүү да тестке чейинки жана кийинки ingestive себептер боюнча түзүлөт; ар бир механизми толугу менен чечилген жок, бирок азыркы далилдер да НАК DA кабар шерик^{37, 38}. плазма жана мээ-жүлүн суюктугу (жүлүндүн) инсулин этаптары аралыкта глюкоза бийиктикте кийин бат эле көтөрүлүп эске алсак⁶Жана striatum инсулин өсүшү плазма инсулин көтөрүлүп 5 мин ичинде байкоого болот деген⁷, Бул аралыкта инсулин тамак учурунда боштондукка НАК DA бошотулушун жогорулатуу жана сыйлык механизмдерин-ingestive пост жазуу үчүн салым кошо алмак түбөлүккө чыгарууга болот. Биз буга чейин айтылгандай, даам-артыкчылык протоколго ылайыкташкан³⁷ келемиштер менен сахаринаты-таттуу глюкоза чечимдер менен НАК бир инсулин греч (InsAb) жергиликтүү колдонуу аркылуу ички инсулин таасирин тосуп жупташкан даамы үчүн артыкчылык төмөндөйт деген гипотезасын текшерүү үчүн. инсулин таасирин күчөтүү боюнча InsAb натыйжалуулугу бир сыналган экстракорпоралдык striatal synaptosomes салып DA өздөштүрүү пробирдик. Инсулин (30 Н.М.) бир кыйла жогорулашына алып келген V_макс НАК же CPU тартып synaptosomes менен (Кошумча сүрөт. 4) Менен ырааттуу, биздин V_макс striatal бүдүрчөлөр алынган маалыматтар (стол 1) Жана мурунку изилдөөлөр менен^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. инсулин жок болсо, InsAb да контролдук антитело иммуноглобулин G (IgG) да өзгөртүлөт V_макс контролдоо каршы DA жутулуу үчүн. IgG алдында, инсулин дагы бир кыйла жогорулашына алып келген V_макс; Бирок, инсулин таасири жөнүндө V_макс InsAb алдында каза болду (Кошумча сүрөт. 4).

кыртыш зыянды азайтуу жана кыртыш максаттуу сезимталдыкты сактап калуу үчүн, субъекттеринин эки топ биз InsAb менен ички NAC эмес темаларды бир тобун колдонуу жана коштоштуруудан караганда, жалган microinjection тартипте microinjection бир чай чечим мезгилде кезектешип турган сыналган жана башка менен транспорт. Демек, бир бөтөлкө-аналоги учурунда, эксперименталдык топ башка жыт менен жупташкан InsAb эки даамдын бири менен жана бири- жыйналыштарына жупташкан microinjections сөгүү microinjections кабыл алды (Сүрөт. 4a, Сол). башкаруу тобу да кездешүүчү-түрдөгү какырыкты (PBS) же IgG менен microinjections ортосуна жасалма microinjections кабыл алды. Эки чай чечимдер Пропаганда учурунда глюкозаны камтылган. артыкчылык InsAb-microinjected тобуна жасалма microinjection-жупташкан жыт көздөй которулушу күтүлүүдө, ал эми даам ортосунда эч кандай айырма тандоосу, контролдук-microinjected топто күтүлүүдө.

  

  

(a) Диаграмма бир бутылка шарттаган мисал (солдо) жана эки бутылка тест (оң). (b) Бир бөтөлкө-аналоги учурунда (мл) керектелген көлөмү. Infusion-аналоги сессияга жана microinjection дарылоо ортосунда олуттуу өз ара иштешүү чыкты (n= 19-20 келемиш топтун, F_(3,111)= 3.088, P<0.05, 2 × 4 ANOVA инфузия-кондициялоо сеансы боюнча кайталаган чаралар менен аралашкан). InsAb микроинъекциясы үчүнчүгө караганда контролдоого салыштырмалуу керектөөнү кыйла азайтты (t(40) = 3.026, **P<0.01) жана төртүнчү (t(40) = 3.052, **P<0.01, корголгон бир куйруктуу t-tests) Infusions. Жалган сайма же топтун керектөөнүн эч таасир берген жок (F_3,111= 1.110, 2 × 4 аралаш Дисперс жалган аналоги отурумунда кайталап иш-чаралар менен). (c) Көлөмү эки бөтөлкө даам-артыкчылык сыноо учурунда керектелген. Пропаганда учурунда даамына жана microinjection дарылоо ортосунда олуттуу өз ара иштешүү чыкты (F_1,37= 5.36, P<0.05, даам боюнча кайталаган чаралар менен эки тараптуу аралаш ANOVA). InsAb тобу жасалма жупташтырылган даамга салыштырмалуу InsAb жупташтырылган даамын бир аз аз сарптады (t(18) = 2.82, ** P<0.01, корголгон бир куйруктуу t-test); башкаруу тобу эч кандай даам артыкчылык бергенин көрсөттү (t(19) = 0.803, P> 0.05, корголгон t-test). топторду салыштырып, InsAb келемиш мунун-жупташкан даамы кыйла азыраак ичип (t(40) = 1.96,P<0.05) жана жасалма жупташтырылган даамдан кыйла көп (t(40) = 1.77,P<0.05, корголгон бир куйруктуу t-test) башкаруу караганда.

• Баштапкыдай (161 KB)

 

 

бир бутылка аналоги учурунда, InsAb microinjection кыйла үчүнчү жана төртүнчү каражаттардан учурунда транспорт менен салыштырганда керектөө азайган (Сүрөт. 4b). Ал эми, эки топ төрт жалган сайынуу учурунда чечүү Ошол эле көлөмдү жалмап кетти (F_3,111= 0.127, P>0.05, аралаш эки жолу Дисперс) (Сүрөт. 4b). сегиз аналоги сессияларында жалпы кийин, анын даам, татуу артыкчылык бир эле учурда эки чай чечимдерге чычкандар кирүүгө мүмкүнчүлүгү бар болчу, ал эки бөтөлкө сыноого бааланган (Сүрөт. 4a). Статистикалык анализ Пропаганда жүрүшүндө алынган даамына жана microinjection дарылоо ортосунда олуттуу өз ара ачып берген (Сүрөт. 4c). InsAb тобу жасалма-жупташкан даамданган салыштырганда InsAb-жупташкан даамы кыйла аз жалмап кетти (Сүрөт. 4c), Транспорт топ эми эч кандай даам артыкчылык бергенин көрсөттү (Сүрөт. 4c), Бүтүн инсулин белги таттуу калориялуу чечүү тандоо салым экендигин билдирген. транспорт каражаттары менен салыштырганда, InsAb-microinjected чычкандар мунун-жупташкан даамы кыйла аз ичип, бир кыйла жасалма-ийне-жупташкан даамы дагы (Сүрөт. 4c). IgG боюнча Microinjection (t(9) = 0.792. P>0.05, корголгон t-tests) же PBS (t(9) = 0.442. P>0.05, корголгон t-tests) InsAb microinjection бир менчиктин таасир керектөөдө же даам артыкчылык тёмёндёгён мүмкүнчүлүгү менен талашып, даам артыкчылык (маалыматтар көрсөтүлгөн жок) эч таасир берген жок. Ошондой эле InsAb топ сыноо боюнча InsAb топтун артыкчылык аз роман даамы үчүн артыкчылык эмес, сессияга жана сессия түрү ортосунда да өз ара кызматташтыктын жок эле (жалган акчанын салыштырмалуу иш жүзүндө мунун) белгилей кетүү керек (F_3,54= 1.584, P> 0.05, эки тараптуу ANOVA). Башкача айтканда, InsAb тобу InsAb инфузия-жупташтырылган даамына салыштырмалуу жасалма-инфузия-жупташтырылган даамды көбүрөөк колдонушкан эмес; тескерисинче, дарылоо топторунун ортосундагы айырмачылыктар инфузия-кондиционер сессияларында гана пайда болгон. Жалпысынан, бул маалыматтар НАКтагы инсулиндин гликемиялык жүктөм жөнүндө кабар берген даамга болгон артыкчылыкты бекемдөөдө роль ойной тургандыгын көрсөтүп турат.

Биз инсулин InsRs аркылуу Чикаго жандануусу салуучу менен nAChR-каранды абалда striatal DA бошотулушун күчөтүп жатканын кабарлаган. Биздин жыйынтыктар инсулин курсак белги өзүнүн белгиленген ролу тышкары, сыйлык белги катары кызмат кыла албайт деп ойлошот. Белгилей кетчү жагдай, DA бошотуу боюнча инсулин таасири, тамак-аш менен салмактуу болуп, кыйла FR кийин инсулин үчүн аяр кёбёйгён, ал эми бир ОБ диета инсулин-күчөтүлгөн жөнгө толук жоготуу. Бул өзгөртүүлөр плазма инсулин сапаты көз каранды диета деп табылды берген тескери жүгүртүүдөгү инсулин баскычтарында байланыштуу, жаткан InsR аяр өзгөртүүлөрдү чагылдырууга көрүнөт, бирок nAChR сезимталдык эмес. Акыр-аягы, биз мал алып даам-артыкчылык изилдөөлөр азык-түлүк менен байланышкан билим гана инсулин шерик эмес, УАК номиналдык таасир азык-түлүк артыкчылык, ал инсулин кабар билдирет, ошондой эле бир сыйлык белги катары өзүнүн ролун тастыктайт.

Таза [DA]_o Dat аркылуу DA чыгаруу жана DA өздөштүрүү ортосундагы балансты чагылдырат. ошол инсулинди DAT ишин жөнгө салуу мүмкүн көрсөтүү Мурунку далилдер^{18, 19, 20, 21, 22, 23} инсулин өсүшү статуя [Э] бир таза азайышына алып келиши керек деп алдын ала алып келди_o көбөйдү DA өздөштүрүү аркылуу. Бирок, биз striatum-жылы, инсулин таасири бул да татаал түзүлүшкө ээ экенин аныкташкан. инсулин таасири өсүшү эмес да V_макс Dat үчүн, апрел айында бир ырааттуу өсүшү менен инсулин негизги натыйжасы эмес, DA өздөштүрүү боюнча, DA чыгаруу болгон [DA]_o НАК кыртыш жана ядро ​​жана тетиктин ичинде инсулин топтолушунун психологиялык алкагында. өсүшү статуя менен да [DA]_o 100 Н.М. бир supraphysiological топтолуу көзөмөл баскычтарында кайра эле, V_макс Dat боюнча түшүндүрмө катары басымдуу таасирин жок кылуу, ошондой эле контролдоо чейин өзгөрүп турду. Анын ордуна, өздөштүрүү күчүнө, ошондой эле релиз жоготуу жогорку инсулин байытуу боюнча InsRs же ылдый белги жолдорунун downregulation менен көндүрүп өлчөнөт. Чынында эле, InsRs аралыкта кыртыштардын милдеттүү инсулин кийин тез endocytosis жана бузулууга дуушар¹, Инсулин же жогорку калория мүнөз жогорку кыска мөөнөттүү таасиринен кийин нейрондордун InsR ийкемдүүлүгүнө жоготуу үчүн пайда далилдер менен^{10, 11, 39}.

striatal DA чагылдырылууга чыгарууну күчөтүү үчүн инсулин үстөмдүк таасири эки башка акыркы жыйынтыгы менен салыштырат экс Vivo кесим изилдөөлөр. боюнча электрдик кыжалат ашып-ташып турса, биринчи кезекте, инсулин кыскарышына алып-жылы [³ёскён да H] striatal бүдүрчөлөр чейин да, [³H] DA толуп DAT тосулуп кийин табылды²². жарык экендигин эске алсак [³H] DA superfusing чечим табылышы үчүн кыртыштын боюнча DAT-арачылыгы жолдорун качып керек, бул протокол DAT жөнгө салуу үчүн өзгөчө сезгич болуп саналат. ошол инсулинди көрсөтүү Биздин натыйжалары ChIs жана nAChR кошулуу аркылуу DA бошотулушун жандандырды, DAT-арачылыгы өнөктөштүктү күчөтүү тышкары, инсулин-күчөтүлгөн [ичинде көрүнгөн парадоксалдуу жогорулатууга түшүндүрүп³Dat боюнча кесепеттерин атаандаш жатканда H] DA толуп көргөн бөгөлгөн²². Экинчи изилдөө VTA жылы somatodendritic DA бошотуунун түздөн-түз аныктоо үчүн Кск колдонулат, ошондой эле ал, DA өздөштүрүү боюнча инсулин басымдуу таасир ашык азайган чагылдырылган статуя [DA]_o (Булак. 23). жергиликтүү microcircuitry чейин бир катар себептерге айырмачылыктар, Аксондор DA релиз механизмдерин караганда somatodendritic үчүн⁴⁰Бул аймактык айырмачылык салым кошо алат. төмөндө айтылгандай, бирок, инсулин регионалдык көз каранды ролун эмес, карама-каршы, кошумча болушу мүмкүн.

Буга чейин, DA сигналдаштыруунун инсулин-каранды жөнгө салуунун ар кандай ролу DA нейрон боюнча InsRs түз жигердүүлүгү менен арачылык үчүн болжолдонуп жаткан. Биз бул жерде InsRs да striatal ChIs караштырып жатканын, ал инсулин диета инсулин таасири негизги ролду ойной алат striatal DA боштондукка, күчөтүш үчүн Чикаго жандануусу modulates көрсөтөт. Striatal ChIs көңүл, бекемдөө жана Associative окутууну жетектөөдө маанилүү ChIs үлгүлөрүнө Муаммар жарылып-тыныгуудан негизги сезүү стимулдарга жана жардам диск жооп катары ок жарылып көрсөтүү .Гипоталамус боюнча intralaminar ядролорунун, нейрондордо тартып болжолун кабыл алуу⁴¹. Ошондуктан, striatal ChIs боюнча InsRs боюнча инсулин аракет жуткан тамак сыйлык наркынын көбөйгөн кабыл салым thalamic атышуудан үчүн striatal ийкемдүүлүгүнө сезүү азык-түлүк гана таяна таасирин күчөтүү мүмкүн. Chi жигердүүлүгү менен striatal DA бошотуунун түздөн-түз колдоо ChIs дем жагдайлар DA бошотуу мээлеп катары артыкчылыктуу ролго ээ болот деген сунуш алып келди³³. Биздин маалыматтар инсулин-күчөтүлгөн Chi жандануусу жана Любляна белги DA бошотуу динамикалык көбөйөт айдоо менен бул биринчи колдоо далилдерди камсыз кылуу.

инсулин алдында бийик DA бошотуу, ошондой эле жылдын апрел-бир-тамыр кагуусун бөгөт болот да, алардын nAChR көндүрүп же muscarinic Любляна кабылдагыч (mAChR) жандануусуна себеп бир даражада белги лар бир өркүндөтүү, каршы ишенет [DA]_o (refs 29, 30, 31, 42). Ошентип, бул жерде билдирди механизмдери өлтүрүлүп тойбой менен байланышта болгон Любляна mAChRs ишке, жакшы болот⁴³.

Single-ангелы-жылдын апрел айында [DA]_o AL келемиштер караганда эки FR жана ОБ келемиштер төмөн болгон; Бул жыйынтыктар мурдагы отчеттор менен айкашында бар болсо да,^{44, 45, 46}Биздин изилдөөлөр дайыма убакыт алкагында эки диета топтун үч striatal субаймактык биринчи салыштырууну камсыз кылат. DA релизинде диета көз каранды өзгөрүүлөрдүн негизинде механизмдери тиешеси жок, жана ушул изилдөөлөрдүн кирбеген. Бирок, плазма инсулин аздыгы тескери FR жана ОБ мүнөз тарабынан белгиленет жана өзгөртүлөт экенин эске алганда, анын айынан ошол кыскарган күмөн [DA]_o эки топтордо диета көз каранды инсулин ченемдерин кесепети болуп саналат.

Башка жагынан алып караганда, тамак-аш жана ушундан кийин диета көз каранды плазма инсулин баскычтарында менен InsR аяр өзгөрүүлөр ОБ инсулин үчүн ийкемдүүлүгүн FR жана жоготуу инсулин көбөйгөн аяр үчүн, кыязы, түшүндүрмө беришет. FR же ОБ келемиштер салыштырмалуу AL же өзгөртүлүшү nAChR ийкемдүүлүгүнө башка түшүндүрүү үчүн эч кандай далили жок эле. биздин ачылыштар биринчи арасында FR менен striatal InsR сезимталдыкты көбөйүп турат үчүн да,¹⁸Салмак жоготуу жүлүндүн азайган инсулин баскычтарында менен коштолушу мүмкүн⁷, Кайсы FR инсулин үчүн DA чыгарууну күчөтүлгөн аяр салым болмок. Тескерисинче, ОБ келемиштер менен инсулин ийкемдүүлүгүн жоготуп салмагы пайда же ОБ мүнөз менен башчыны да азайган мээ InsR сезгичтигин мурдагы далилдер менен келет^{3, 10, 11}.

биздин экс Vivo тилүү маалыматтар инсулин, ошондой эле сыйлык жеште, ошондой эле окуя мүмкүн гипотезаны колдоо. Биз даам-артыкчылык Пропаганда учурунда НАК сөөктөрүндө эки тараптуу InsAb microinjection менен ички инсулин таасирин бөгөт коюу бул гипотезаны сыналган. инсулин таасирин тосуп, сыйлык ролун ылайык бекем инсулин сигналдаштыруунун менен байланышкан жыт салыштырмалуу жупташкан глюкоза камтыган чечүү даамданган үчүн артыкчылык кыскарган. НАК сөөктөрүндө инсулин бөгөт коюу, ошондой эле керектөө эч кандай таасир жалган же контролдук microinjections бар болчу, ал эми бир бутылка Пропаганда учурунда жупташкан чечимдин керектөө азайган. Бул маалыматтар НАК сөөктөрүндө инсулин-түлүк артыкчылык рол ойнойт деп айтууга мүмкүндүк берет. Мурунку изилдөөлөр НАК кала DA белги даам жаткан сатып алуу үчүн зарыл экенин көрсөттү^{37, 38}, Азыктык чечимдерди бекемдөө кесепеттерин ортомчулардын НАК Д.А. үчүн ролун тастыктаган. Ушундан улам, бул төмөндөшү күтүлүүдө мүмкүн эле глюкоза чечимге бекем инсулин бар экендиги менен жупташкан үчүн артыкчылык, УАК сөөктөрүндө DAT-кыйыр DA өздөштүрүү боюнча инсулин негизги күчүнө каршы ишенет [DA]_o ошондуктан көзөмөл-жупташкан даамы керектөөнү төмөндөтүү. сахароза керектөөнүн бир чек ара өсүшү менен Биздин жыйынтыктар НАК сөөктөрүндө мурунку изилдөө инсулин microinjection турган жылы адамдар менен, ошондой эле туруктуу болуп, мал оозеки сахароза өзүн-өзү башкаруу менен алектенет убакыт көбөйдү²⁶, Ал өскөн DA өздөштүрүү күтүлгөн кесепеттеринен карама-каршы эле. Жалпысынан, бул жүрүм-турум маалыматтар striatal ChIs менен өркүндөтүлгөн DA бошотуу боюнча инсулин алдын ала таасири менен туруктуу. Бирок, бул натыйжалар striatum боюнча кеңири таралган InsR сөз берип, мониторинг жүрүм-striatal microcircuitry башка элементтерин катышуусун четке какпайт^{1, 14}.

Бул жерде билдирди изилдөөлөр инсулин калориялуу Наркы пикир рол ойнойт биринчи далилдеп турат, ошондуктан кем жана семиздик сабактар ​​да инсулин таасири үчүн маанилүү натыйжага ээ, тамак-пайдалуу таасирлери. Бир нече изилдөө тамак-пост-ingestive таасирлери карабастан, даамы берилүүсүнүн жолдору да сакталгандыгын көрсөтүп турат⁴⁷, УАК DA чыгарууну жана жүрүм-мактап жогорулатуу^{37, 47}. Ошентип, кийинки absorptive инсулин жооп тамактын глюкоза түшүмүн коддорду жана колдонууну иштетүү азык-түлүк артыкчылык жана жүрүш-бекемдөөгө өбөлгө болот. Бирок, инсулин денгээлдери жана борбордук InsR сезимталдыкты жүгүртүлүшү озгоруулор демейдегиден башкача бир ролго ээ болушу мүмкүн, ошондой эле жүрүм-ийкемдүү. Мисалы, hypoinsulinaemia жана FR сабактар ​​боюнча InsR ийкемдүүлүгүнө толуктоочу upregulation күчөшүнө алардын маанайы бир мааниге ээ болот⁴⁸. Тескерисинче, ОБ келемиштер жерде чагылдырган түрү II диабет же семирүү борбордук инсулин албастыгы, ордун жогорку глюкоза индекси менен тамак ичүү айдап, Жута төмөнкү сыйлык бир ролунун мааниде салым кошо алышмак^{49, 50}. Ошондуктан, striatal инсулин сезгичтигин көбөйүшү же азайышы да ичкилик жеп жана / же семирүү, натыйжада, патологиялык жегенине салым кошо алган.

Жалпысынан, биздин ачылыштар сыйлык белги катары инсулин үчүн жаңы ролун ачып. Мындай ролу VTA салып microinjected инсулин-түлүк сыйлык менен байланышкан таяна үчүн гедонисттик менен азыктанып, артыкчылык төмөндөтүүгө мүмкүн экенин, анын ичинде акыркы жыйынтыгы, бир тойгондон белги катары белгилүү иш менен карама-каршы^{23, 24}. Бул да көз каранды милдеттерин инсулин үчүн көрүнгөн кантип каршы ролдор суроо элдешүүгө болот туулат. жооп Бул таасир, тескерисинче, карама-каршы эмес, толук болушу мүмкүн. Ушул жыйынтык striatum менен инсулин бир жуткан тамак сыйлык Наркы пикир экенин көрсөтүп турат. бир эле учурда бул Тамакка колдонулган кайталоо бекемдеп, анын азыктык, ошентип, пайдалуу сапаттары бир эс белгилеген белги жеште, бир эки ролу жөн инсулин, тамакка чейин маанилүү бир максатка кызмат кылуу үчүн уруксат бериши мүмкүн.

Animal колдонуу

Animal-жоболору NIH протоколдорго ылайык жана Medicine Animal сактоо жана пайдалануу боюнча комитетинин NYU мектеби тарабынан бекитилет. Бардык жаныбарлар 12 ч жарык болгон: кара цикл, 06 тартып жарык менен: 00 18 үчүн: 00; экс Vivo 08 сыра ортосунда даярдалды: 00 жана 12: 00. AL келемиштер жана чычкандар менен механикалык изилдөөлөр өткөрүлдү экс Vivo чычкандар контракттын баары диета тобу салыштыруу жана жүрүш-изилдөөлөр үчүн жайда болчу, ал эми эки-экиден бөлмөсүнө жаныбарлардан сыра.

Rat диета режим

Эркегинин Спрэг-Dawley чычкандар (Taconic) 8-10 апта 21-30 күн бою диета режимдери козгоо эски болчу. Радж жарым-туш диета топторго берилген: баш алгачкы салмагын-орунда болгон, андан кийин чычкандардын ар бир үчилтик диета топтордун арасында туш келди таркатылды. AL чычкандар FR же ОБ мүнөз боюнча жупташкан келемиштер сыяктуу эле мезгил ичинде чычкан чау эркин кирүүгө мүмкүнчүлүгү бар болчу. Бардык келемиштер сууга эркин жетүү болчу. Тамак-аш чектөө буга чейин ишке ашырылган⁵¹; кыскача, чычкандар дене салмагын тамак-аш ушул салмак кошпогонго Мисирден жазалары, андан кийин 40% га кыскарган чейин күн сайын стандарттык чычкан чау-жылдын AL башатынын 50-20% алды. ОБ келемиш чычкан чау жана шоколад менен, орто жогорку майы жана кант менен жогорку тоюмдуу суюктук камсыз эркин кирүүгө мүмкүнчүлүгү бар болчу⁵².

Алдыңкы мээ чат нокаут чычкандар

бир шарттуу floxed allele менен Mice чат (чат^Flox) Бир менен өтүп келген Nkx2.1^CRE transgenic линия чычкандар Любляна синтез кыскарышына кайсы өндүрүү үчүн тездик менен чектелген³². Non-мутант transgenic ОДНОПОМЕТНИКИ башкаруу болгон; алардын генотиптер CRE⁺;чат^{Flox / +} жана CRE^-;чат^{Flox / Flox} "Heterozygotes" деп аталат. тилүү изилдөө үчүн колдонулган Эркегинин чычкандар бар ад либитум мүмкүндүк алуу Chow жана суу.

экс Vivo тилүү даярдоо жана психологиялык чечимдер

Чычкан же чычкан аябай 50 мг кг anaesthetized алынган^-1 pentobarbital (intraperitoneal (IP)) жана чириген. voltammetry үчүн coronal тездик сыра (300-400-мкм туурасы) бир Leica VT1200S титирек Буудай microtome боюнча кесилген (Leica Microsystems; Bannockburn, IL) муз-суукта HEPES-түрдөгү жасалма жүлүндүн (aCSF) камтыган (мм): NaCl (120); NaHCO₃ (20); глюкоза (10); HEPES кислотасы (6.7); KCL (5); HEPES натрий тузу (3.3); CaCl₂ (2); жана MgSO₄ (2) 95% O менен equilibrated,₂/ 5% CO₂. Сыра анан эксперимент алдында 1 ч үчүн бөлмө температурасында бул чечимге сакталып калган^{30, 32, 53}. electrophysiology үчүн anaesthetization кийин, чычкандар камтыган transcardially муз муздак чечүү менен эле иштеген болгон (мм): сахароза (225); KCL (2.5); CaCl₂ (0.5); MgCl₂ (7); NaHCO₃ (28); Наум₂PO₄ (1.25); глюкоза (7); ascorbate (1); жана кайра карату (3) жана 95% O менен equilibrated₂/ 5% CO₂. Сыра бул чечим менен кесилген, андан кийин өзгөртүлгөн aCSF камтыган (мм) бир калыбына бөлмөгө өткөрүп: NaCl (125); KCL (2.5); Наум₂PO₄ (1.25); NaHCO₃ (25); MgCl₂(1); CaCl₂ (2); глюкоза (25); ascorbate (1); карату (3); жана Менин о-inositol (4) 95% O менен equilibrated,₂/ 5% CO₂; Бул чечим 34 ° С болгон экен, анда бөлмө температурасында да бара-бара сууп жол⁵⁴. Бардык voltammetry жана психология эксперименттер 32 мл мүн боюнча superfused болгон ° C, 1.5 бир чумкутулуунун жазуу бөлмөгө өткөрүлдү^-1 aCSF камтыган (мм) менен: NaCl (124); KCL (3.7); NaHCO₃ (26); CaCl₂ (2.4); MgSO₄ (1.3); KH₂PO₄ (1.3); жана глюкоза (10), жана оору жана кан Методикалык сунуштар (BSA, 0.05-0.1 мл мг^-1) 95% O менен equilibrated₂/ 5% CO₂; сыра эксперименттер алдында 30 мүн бул чөйрөдө салмактуулукту жок уруксат берилген.

Fast-сканер туруучу voltammetry

Туудурган DA релиз изилдөөлөр мээ бүдүрчөлөр менен Кск жардамы менен өткөрүлдү^{32, 53} эркек келемиштер даярдалган же чат тездик нокаут чычкандар жана heterozygote башкаруу (5-8 жума). изилдөө чат нокаут чычкандар сокур, бирок, чычкан диета топтор сокур так айкын мумкун эле. Voltammetric өлчөө бир Миллар репчатом (терапия жана стоматология Dr Джулиан Сент Барталамей жана Royal Лондон мектебинде Миллер атайын өтүнүчү боюнча жеткиликтүү, Лондон University) менен кабыл алынган. Шарттуу бурчтук толкундун + 0.7 V (салыштырмалуу Ag / AgCl) үчүн -1.3 бир скандоочу чөйрөсүн, Кск үчүн пайдаланылган, 800 V с скандоочу чен^-1Жана 100 мс-жылдын аралыгын Үлгү алуу^{30, 32, 53}. Берилиштер Clampex 1200 программалык (молекулярдык түзмөктөр) тарабынан контролдонуучу DigiData 7.0B A / D тактасын колдонуп сатып алган. DA релиз Кошборбордуу стимул электрод колдонуп угулган жок; стимул кагуусу менен бир- 0.4-0.6 мА жана узактыгы 100 μs болду^{30, 32, 53}. Жергиликтүү бир кагуусу дем НАК өзөгү жана тетиктин ичинде колдонулган; Бирок, кыскача көп-жыштыктуу кагуусу поезд (100 Hz беш крупа) айынан күчөтүш үчүн колдонулган [DA]_o НАК сөөктөрүндө. Эки стимул парадигма DA-релизди иш-аракет болушу мүмкүн жана Ca деп капа²⁺ көз каранды, учурда бошотулган глутамат менен Гебанын каранды^{42, 55}Жана бир эле убакта Любляна бошотуп алып баруучусу^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. апрел айында сандык баалоо үчүн [DA]_o, Электроддор 32 ° С Д.А. белгилүү байытуу менен aCSF ар бир экспериментте кийин бир экспериментте колдонулган ар бир дары катышуусу менен курулду алынган⁵³.

Voltammetry айынан боюнча инсулин таасирин баалоо үчүн эксперименттер [DA]_o эки протоколдор да колдонуу менен алынган. мониторинг жүргүзүлгөн инсулин колдонуу үчүн убакыт курсун (Sigma, I5523) аныктоо үчүн баштапкы эксперимент туудурган [DA]_o бир сайтка ар бир 5 мүн. Инсулин ырааттуу туудурган [Э] кийин, колдонулган_o (Адатта 4-5 өлчөө) алынган; инсулин таасири 50-60 мин кийин максималдуу болуп, анан туудурган [DA]_o экспериментте (адатта 90 мүн жалпы инсулин таасирленүү узактыгы ушул деъгээлде сакталып калган, Сүрөт. 1c). Натыйжада, инсулин таасири эсепке алуу менен бааланган туудурган [DA]_o бүдүрчөлөр менен 4-5 дискреттик объектилерде (+ 1.5 bregma тартып мм) контролдук шарттарында үч ар striatal субаймактык (aCSF же aCSF плюс дары) жана максималдуу инсулин күчүнө кирген күндөн тартып (60-80 мүн ашуун үлгүлөрдү алуу) боюнча дагы бир жолу, андан кийин бул үлгүлөр, ар бир аймак боюнча орточо алынган. тилүү даярдоо кийин, убакыттын өтүшү менен азайып инсулин таасири; убакытты азайтуу үчүн экс Vivo жана мал пайдаланууну оптималдаштыруу үчүн, адатта, бир жаныбардан, эки сындырым нан, ошол эле учурда, эсепке алуу бөлмөсүнө текшерилген. анын ичинде HNMPA trisacetoxymethyl Эстер инсулин таасир талашуу үчүн колдонулган дары-дармектер, 15 superfusing аркылуу инсулин алдында мүн aCSF колдонулган (HNMPA-AM_3; Enzo Life Sciences), S961 (Novo Nordisk), LY294002 (Сигма), picropodophyllotoxin (МЖӨ; Tocris), mecamylamine (Tocris) жана DHβE (Tocris). Натыйжалары айтылгандай, диета топтордун арасында никотин Любляна кабылдагыч мүмкүн өзгөртүп сезгичтиги чокусуна катышын менен салыштыруу аркылуу текшерилет болгон [DA]_o 5-б (100 Hz) 1-б менен апрел айында ошол менен апрел айынан (5 б: 1 б катышы)^{30, 31} 0-500 Н.М. никотиндин (Сигма) катышуусу менен НАК ядродогу.

аныктоо V _макс айынан тартып [DA]_o striatal бүдүрчөлөр менен Транзиттик

DAT-кыйыр DA өздөштүрүү боюнча инсулин-жасалма өзгөрүүлөргө баа берүү үчүн, анын айынан баскычы түшкөн алгачкы бөлүгү [DA]_o буйру Michaelis-Menten эсептөөлөр болушту Чыгарып V_макс (Максималдуу Оже курсу туруктуу)⁵⁶. K_m (Бул тескери Д.А. үчүн DAT туугандаша менен байланыштуу) 0.2 мкм белгиленет жана striatal субаймактык боюнча окшош болуп белгилүү болгон⁵⁷ жана инсулин каранды (кара Кошумча сүрөт. 4 коштомо).

Жан-клетка жазуу

Brain сыра 29 күндүк жаштагы эркек келемиштер үчүн 35- чейин даярдалды; эсепке алуу шарттары DA релиз изилдөөлөрдө колдонулган окшош эле. Жан-клетка учурдагы-бириктиргич жаздыруулар кадимки усулдар пайдаланышкан⁵⁴. Striatal ChIs бир Olympus BX51WI микроскоп (Olympus Америка борбору өрөөнү, ПА) Infrared түрдүү-тоскоолдуктарды контраст оптика жана × 40 суу куяр максатында колдонуу менен ченеп чыкты. пипетка чечим (мм) камтылган: K-глюконат (129); KCL (11); HEPES (10); MgCl₂ (2); EGTA (1); Na₂-ATP (2); Na₃-GTP (0.3); жана рН 7.2-7.3 Кох менен байланышат. Чат immunoreactivity үчүн жазылган нейрондор баалоо үчүн, 0.3% biocytin пипетка чечүү жана кыскача жазылган нейрондор (~ 5 мүн) киргизилген клеткадагы мазмунун жуулуп азайтуу үчүн. Пипетка каршылык ~ 3-5 MΩ болчу. Жазуулар бир Axopatch 200B күчөткүч (молекулярдык түзүлүш, Sunnyvale CA) жана аз өтүп 2 KHz боюнча чыпкаланган аркылуу алынган. ChIs белгиленген electrophysiological критерийлер боюнча аныкталган²⁸; көпчүлүгү башында tonically активдүү болушкан, ал эми иш жамап кийин убактында азайттым. Бирок, азыркы сайылган ийкемдүүлүгү убакыттын өтүшү жалпысынан туруктуу жана ырааттуу болгон, ошондуктан Chi жандануусу боюнча инсулин таасир (жыйынтыктарын карагыла) иликтөө үчүн колдонулган. Бул жооп InsRs жана Наезби-1Rs ролун карап эксперименттерде HNMPA же МЖӨ же Chi була бүтө электе эле, жок эле дегенде, 20 мүн колдонулган. Кээ бир клеткаларда, өсүшү 16 мин же андан чейин максималдуу жок болсо да, инсулин максималдуу таасирлери гана, адатта катнаш ~ 50 мин кийин байкалган. Мындан тышкары, МЖӨ жазылган алты нейрондордун төрт, инсулин менен калыбына келтирүү жана өсүш санын баштап ашкан чейин өсүш санынын алгачкы кыскарышына алып келди. Демек, бардык эксперименттерде, инсулин таасири инсулин колдонуу алдында дароо туудурган сабактары санына Spike саны боюнча эң жогорку таасирин салыштырып, сан көрсөткүчтөрү болгон. жогорку таасир жетүү үчүн күндөрдө айкын айырмасы траншын жазылган клетканын канчалык, анын ичинде бир катар себептерге, чагылдыра алган. Туудурган аракет касиеттери да салыштырмалуу убакыт пункттарында инсулин жок ChIs-жылы жазылган.

Жогорку басымдуу суюк заттардын

чычкан striatal бүдүрчөлөр (400-мкм туурасы) боюнча DA мазмуну электрохимиялык аныктоо менен жогорку басымдуу суюк заттардын жардамы менен аныкталган⁵⁸. Slice түгөй 30 мүн 32 ° С aCSF жылы equilibrated болду, анан жуп бир кесим башка 60 же 32 Н.М. инсулин менен aCSF менен инкубатор, ал эми aCSF жылы 10 ° C боюнча кошумча 30 мүн инкубатордо болгон. диета тобу салыштыруу үчүн, striatal кыртыш 30-60 мин кийинки калыбына келтирүү менен жыйналды. инкубаторлор кийин, ашыкча aCSF кылдат бүдүрчөлөр алынып, striatal ткандардын (7-10 мг) үлгүсүн кургак муз тоңуп калган, таразага тартып, анан кийин -80 ° C сакталып боюнча сакталган. талдоо күнү, үлгүлөрдү аргон менен кирдеген, муз-суук, eluent менен sonicated алынган⁵⁸, 2 мүн үчүн microcentrifuge менен жип ийрип, алып HPLC тилкеде түздөн-түз көздөй supernatant сайгандан (BAS, Батыш Lafayette, IN); детекторунун 0.7 V каршы Ag / AgCl коюлган айнекке көмүртек электрод болчу.

Immunohistochemistry

иммуногистохимиялык азык- үчүн, чычкандар хлоралоза менен anaesthetized алынган (50 мг кг^-1, Интеллектуалдык менчик), андан кийин transcardially 154 мм кездешүүчү Санитардык-жылы PBS (10 мм NaCl менен эле иштеген, рН 7.2) Бул PBS жылы 4% paraformaldehyde кийин; мээси жок жана coronal бөлүмдөрү (20 мкм) эле кесип, шарттуу түрдө иштелип чыккан^{27, 59}. Immunofluorescence сүрөттөлүштөр Nikon PM 800 confocal микроскоп Spot программа тарабынан контролдонуучу бир санарип камера менен жабдылган (диагностикалык приборлор Inc.) жана × 100 максаты (сандык улахана = 1.4) пайдалануу менен алынган же × 510 колдонуп, дүрбүсү менен LSM 63 confocal микроскоп менен объективдүү (сандык улахана = 1.2). Lasers Аргон (488 нм), ал / Ne (543 нм) жана / Ne болгон (633 нм). Ар бир Laser үчүн тийиштүү чыпкалары confocal микроскоп программалык тарабынан тандалып алынган. Pinhole көлөмү тандалып колдонулат жана бөлүм Жоондугу максаты менен ар түрдүү z-stack муун; Биз программалык (адатта 30 мкм) тарабынан көрсөтүлгөн оптималдуу pinhole Наркы тандап алды. Digital Files акыркы сүрөттөр Adobe Photoshop 7.0 аркылуу иштелип менен deconvolution программалык (AutoQuant иштетүүчү) менен текшерилген. Бардык сүрөттөр жарык жана тескерисинче эске алынган; Мындай өзгөрүүлөрдү айкелдин бардык бөлүктөрүнө бирдей кабыл алынган. Striatal DA аксон эки TH антителолорду колдонуп аныкталды: polyclonal AB152 коён анти-TH (1: 800) жана monoclonal MAB318 чычкан анти-TH (1: 500) (экөө тең Chemicon-жылдан тартып). Үч InsR антителолор колдонулду: СК-57342 жана СК-09 (1: 100; Санта-Крус), жана PP5 (Pfizer белеги). ар бир өзгөчөлүгү буга чейин көрсөтүп келген^{60, 61}Жана тиешелүү бөгөт коюу полипептиддин алдында антителолор СК-57342 же PP5 менен immunolabelling жоктугуна азыркы изилдөөлөр менен далилденди. Чат антитело AB144 (1: 200; Millipore) болгон, жана biotin багыттарын (1: 200) болгон. каршы-коен Alexa 488 эшек эле колдонулган орто антителолор (Invitrogen), же эшек каршы коён Cy2 (Джексон лабораториясы, Бар Харбор ME), эшек анти-теке Cy3 (Jackson) эшек анти-чычкан Cy5 (Jackson).

TH + аксон менен InsRs биргелешип жергиликтештирүүнү баа берүү үчүн, биз кабыл алынат Kir6.2, ATP-сезгич К көзөнөкчөлөр пайда курамдык бөлүгү бар экендигин аныктоо үчүн мурда сүрөттөлгөн колдонгон⁺ DA аксон менен каналдар²⁷. Puncta өкүлү InsRs TH immunoreactivity менен superimposition кокустан кандайдыр бир даражада пайда болушу мүмкүн экенин билдирген такталган сүрөттөр боюнча таратылган. Бул гипотезаны сынаш үчүн, биз үч 42 көз карандысыз тармактарда InsR / TH superimpositions санап НАК эки келемиштер чейин бөлүктөрдү immunolabelled. InsR санариптик Files анда оболоп ° 90 айландырылат жана эсеби жок көп жолу; айлануу көпчүлүк тармактарында (Results карагыла) TH менен жергиликтүү-CO InsR puncta саны азайган. айлануу менен superimpositions санынын кыскаруусу²⁷ DA аксон менен байланышкан ар бир striatal жаатындагы InsR puncta үлүшү көрсөтүлгөн.

Кандын жана глюкоза инсулин ELISA

Trunk кан тилүү изилдөө үчүн кесүү убагында жыйналды. Blood глюкоза стандарттык кан глюкоза монитор менен дароо чечкиндүү болгон. инсулин үчүн кошумча кан EDTA-камтыган тубе чогултулган жана 1,500 боюнча ийбөө болдуg 15 мүн; supernatant (плазма) чогултулган жана ALPCO Rat Инсулин ELISA комплекти менен кайра иштетүүгө чейин -80 ° С да сакталган.

Cannula жайгаштыруу жана гистологиялык текшерүү

Кырк бир Эркегинин Спрэг-Dawley чычкандар (Taconic жана Charles River) башында салмагы 350-425 г кетамин менен anaesthetized алынган (100 мг кг^-1, Интеллектуалдык менчик) жана xylazine (10 мг кг^-1, Интеллектуалдык менчик) жана stereotaxically эки өнөкөт теген жол cannulae (26 орны) жайгаштырылган НАК досунун сөөктөрүндө мунун сайттарга эки тараптуу 2.0 мм көкүрөк койду⁶² (1.6 мм место bregma үчүн; sagittal көктөлгөн үчүн 2.1 мм жанынан, Сунуштар кийинки карай 8 ° чукул, 5.8 мм сөөгү бетине ventral). Rats banamine берилген (2.0 мг кг^-1, Жылкыда) пост-хирургиялык нестендирме катары оорутпай калыбына төмөнкү жана андан кийин эрте. Бир жума хирургиялык кийин, чычкандар изилдөө калган, алардын кийинки хирургиялык калыбына салмагы 80% га FR боюнча (жогоруда айтылган) жайгаштырылган жана колдоого алынган. Cannula жайгаштыруу жүрүш сыноо аяктагандан кийин histologically аныкталган. Ар бир чычкан CO менен өлтүрүлгөн₂, башы кесилген жана мээ алынып, 10% буфердик формалинде> 48 с. Тоңдурулган короналдык бөлүктөр (40 мкм калыңдыгы) Рейхерт-Юнг Криостатында кесилип, желатин менен капталган айнек слайддарга эрип, крезил фиалка менен боёлгон. Берилген келемиштен алынган маалыматтар, эгер эки канюляла ортоңку NAc кабыгынын чегинде болсо гана колдонулган⁶² (Анын ичинде номиналдык / өзөгү же жер кыртышын / жыт tubercle чек ара) (Кошумча сүрөт. 5); бул критерийлердин негизинде, эки келемиш акыркы талдоого алынып салынды.

Даам-артыкчылык аналоги чейинки таасири

Радж сессиясынын ортосунда бир заматта (үй, капаска) жана алты 30-мин-бир-күнү алдын-ала иштелген жыйналыштарына (тест ашканаларда) бир 0.2-ч аралык менен сууга% натрий сахаринаты (Сигма) 48 үчүн кабыл алды. Радж эки 5-мин-бир-күнү 0.2% натрий сахаринаты таасири жыйналыштарына 0.05% менен таттуу жүзүм же алча Kool-жардам (Kraft Foods) суу менен кабыл алды. Биринчи Kool-жардам ала таасири жыйынында үчүн, келемиштер жарым алча-чай чечим кабыл алып, жана башка жарым жүзүм чай чечим кабыл алды. даамдар бардык чычкандар ар даамын сурамжылоого камсыз кылуу үчүн экинчи Kool-жардам ала таасири отурумунда тескерисинче болгондо. Топтомо алдын ала таасир сессияларын үчүн өлчөнгөн. Testing бөлмөлөр жаңы төшөнчү-орунчу менен ачык-айкын пластикалык клеткаларына эле. алдын ала таасири сессияларында үчүн, чычкандар бөлмөгө эки тараптын бир эле чечүүгө мүмкүнчүлүк бар болчу. түнү чейинки таасири жыйынында кошпогондо, бардык жерде ар кандай окутуу же сыноо алдында 30-мин көнүгүшүп мезгил менен, жүрүш-туруш тартиби залында өткөрүлдү.

Бир бөтөлкө аналоги

Мурунку изилдөөлөр ventromedial гипоталамус салып InsAb деп microinjection көрсөтүп, жүрүм-туруму жана глюкагон затты тамактандырууга инсулин таасирин бөгөт болот^{63, 64}. Бул жерде биз азык-түлүк тандоо күчөтүү боюнча инсулин мүмкүн ролун баалоо үчүн ушул ыкманы колдонгон. Радж жарым-туш келди эки топтун, контролдук же эксперименталдык (InsAb) эске алынган алдын-ала таасири жыйноо көлөмү боюнча дайындалган. же IgG (Abcam ab137; контролдук топто, чычкандар унаа (2.7 мм NaCl жана 10 мм KCL 81032 мм кездешүүчү туруучу microinjection PBS); алган 0.5 мкг μl^-1 Төртиликтин өкүлү, ошондой эле), эки чай чечимдердин бирин жалмап алдында НАК сөөктөрүндө microinjection кабыл алып, жана башка чай чечимди талап алдында жалган microinjection. эксперименталдык топ-жылы, чычкандар InsAb (Abcam ab46707 менен НАК кабыгы microinjection алышты; 0.5 мкг μl боюнча 1 μl^-1 Төртиликтин өкүлү, ошондой эле) бир чай чечүүгө таасири алдында кабыл алынган, жалган microinjection башка чейин таасиринен. суюктук microinjection жана жалган microinjection ортосундагы кезек менен субъекттеринин эки комплект microinjections жалпы саны бул microinjection сайтында мүмкүн кыртыш зыян жана этияттык жоготуп азайтуу, төрт гана Ошондуктан, колдонулган⁶⁵. Анткени суюктук microinjection, башкаруу чечүү же InsAb 30 мм узартылышы эки 50-см узундугуна ишкер-5 кесим 31 μl Hamilton ийнелерди Дистиллирленген суу менен толтурулган бир акырына карата тиркелет жана 2.0-арымын Injector cannulae башка аягында жүктөлгөн болду жайгаштырылган жол тышкары. мунун көлөмүнүн μl 0.5 90 0.005 μl с өлчөмүндө с ашуун жеткирилди^-1; Injector ~ 60 с таркатуу үчүн убакыт жол үчүн жерге таштап, андан кийин Injector stylet менен алмаштырылган.

Rats microinjection же жалган microinjection аяктоо 2 мин ичинде жүрүш-жайлары түздөн-түз өткөрүлүп берилди. Аналоги чечимдер 0.2% натрий сахаринаты, 0.05% таттуу жүзүм же алча Kool-жардамды жана 0.8% глюкозаны камтылган. Solution мүмкүндүк алуу күнүнө мүн 30 менен чектелет. ичүүгө мүмкүнчүлүгү бар палатасынын жупташкан даам жана каптал жарым-туш дайындалган жана ар бир топтун боюнча эл болгон. microinjections ортосундагы аралык сегиз аналоги сессияларында жалпы акчанын жана жасалма сессиясынын ортосунда тагышты, жок дегенде 72 ч болчу.

Эки-бутылка артыкчылыктуу сыноо

акыркы аналоги сессиянын кырк сегиз саат өткөндөн кийин, чычкандар да аналоги даам үчүн бир эле учурда мүмкүнчүлүгү менен сыноо бөлмөлөргө жайгаштырылган; глюкоза жок чечимдер, 0.2% жүзүм же алча Kool-Көмөгүнүн 0.05% натрий сахаринаты болду. Testing 2 күндүн ичинде болгон (60 мүн күнүнө). жалган-жупташкан же мунун-жупташкан чечим камтыган ичүүчү түтүкчө кызматы ар бир чычкан, капаска эки тараптын ар бир чечимдин керектөө үчүн сыналган камсыз кылууга мезгилде кезектешип болгон. Ар бир даамы менен чечүү алууда артыкчылык аныктоо үчүн эки тест күн орточо болду.

[³H] DA Оже striatal synaptosomes жылы InsAb натыйжалуулугун баалоо үчүн

Striatal synaptosomes^{21, 66} AL келемиштер (эркек, 350-400 ж) тарабынан даярдалган, УАК (кабыгы жана өзөгү) жана тетиктин кесилген жана өзүнчө даярдалган. Ар бир аймактан келген Tissue мотор-кууп Teflon, сокбилек менен айнек homogenizer бир муз-суук 15 М сахароза чечүү 0.32 көлөмүнүн гомогендүү болгон; жуушат жана экстрагирлөө кийин, акыркы таблетка муз суук 0.32 M кант кайра токтотулду^{21, 66}. [баштаардан мурда³H] DA Оже пробирдик⁶⁶, Synaptosomal aliquots Оже Санитардык-жылдын 180 μl жалпы көлөмүнүн 15 NM инсулин бар же жок экендиги боюнча 30 ° С 30 мүн шейкерде инкубатор, ал унаага (PBS) же InsAb менен (акыркы бөлүштүрүү 1: 500) , IgG (акыркы бөлүштүрүү 1: 500) же тейлеши. Өздөштүрүү туруучу камтылган (мм): NaCl (122); Na₂HPO₄ (3); Наум₂PO₄ (15); KCL (5); MgSO₄ (1.2); глюкоза (10), CaCl₂ (1); nialamide (0.01); tropolone (0.1); жана аскорбин кислотасы (0.001), рН 7.4. Өздөштүрүү боюнча [³H] DA болгон топтолушунун ар кандай болгону менен, 20-, ошондой эле өз жүктөрүн ыргытып тездик менен ар бир synaptosomal токтотуу 96 μl берүүгө демилгеси менен Д. (0.003-1.0 мкм) жана [³H] DA (5 Н.М.); 5 ° C бир табак-шейкерде 25 мин кийин, Оже суук, тез боштук чыпкалап тарабынан токтотулган⁶⁶. кудуктун күнүнө Counts pmoles кабыл алынган, анда мүнөтүнө жалпы белок мг чейин түзөтүлгөн. Бардык сынамыгын жок дегенде төрт жолу үч нускада жасаган, кайталанып турду, V_макс жана K_m Biosoft Келл Radlig программалык (Cambridge, Улуу Британия) менен эсептелген.

статистикалык анализ

Маалыматтар ± Шем катары берилет; мааниси жупташкан же түгөйсүз Студенттик көнүп бааланган t-tests же Дисперс анализи, башкача каралбаса көрсөтүлгөн. voltammetry маалыматтар үчүн, n бир striatal аймак ичинде бул сайт үчүн сайттын өзгөргүчтүк берген, жазуу сайттардын саны аралык жаныбардын аралык же уики-аралык кесим өзгөрүлүшүнө жогору^{30, 32, 55, 56}; малдын саны ар бир маалымат пакети үчүн белгилей кетүү керек. EC₅₀ боюнча инсулин жана никотиндин колдонуу үчүн чокусуна-жылдын апрел айында [DA]_o Prism 6.0 (GraphPad программалык Inc., La Jolla, CA) эсептелген. electrophysiological маалыматтар үчүн, статистикалык маанилүүлүгү жупташкан пайдалануу бааланган t-tests же Уилкоксон экзамендер Prism 6.0, же SAS 9.3 (SAS институту Inc., Кэри, NC) аралаш эки жолу ANOVA. даам-артыкчылык Пропаганда менен инсулин тартуу баа берүү үчүн, эки илиминде колдонулган унаа мамиле кошпогондо, бирдей эле протоколдорду колдонуудан аяктады. Биринчи изилдөөдө, 10 келемиш PBS унаа настойка алынган жана 9 InsAB менен настойка кабыл алды. Экинчи изилдөөдө, 10 келемиш 10 жана IgG унаа настойка алган InsAb менен настойка кабыл алды. Infusion-аналоги учурунда жок эки унаа топтордун (PBS же IgG) ортосунда эч кандай олуттуу айырма болгон (F₁₉= 0.619, аралаш эки жолу Дисперс) мунун-аналоги отурумунда кайталап иш-чаралар менен) же сыноо боюнча (F₁₉= 0.012, эки тараптуу аралаш Дисперс даамы боюнча кайталап иш-чаралар менен). Демек, эки эксперименттер талдоо үчүн коштолду. Бул талдоо үчүн 2 × 4 ANOVA (мунун-аналоги күнү кайталап иш-чаралар менен) кошулган Пропаганда учурунда microinjection дарылоо кесепеттерин аныктоо үчүн колдонулат, коргоп турат t-tests (бир аналоги сессиялар microinjection дарылоо керектөө көлөмү төмөндөп турган аныктоо үчүн куйрук). Ошол эле талдоо жалган аналоги сессияларын аяктады. эки бөтөлкө даам-артыкчылык сыноо учурунда аналоги дарылоо таасирин аныктоо үчүн маалыматтар ар кандай эки жол Дисперс колдонуу (жыт жөнүндө кайталап иш-чаралар менен) текшерилген, корголгон кийин t-tests (бир InsAb каалоону төмөндөтөт гипотезасын текшерүү үчүн куйрук).

Бул кандай гана мисал үчүн: Stouffer, MA жана башкалар. Инсулин антихолинергикалык interneurons иштетип striatal тинейджер бошотулушун арттырат жана бул сыйлык билдирет. Nat. Commun. 6: 8543 чтыкта: 10.1038 / ncomms9543 (2015).

1. Schulingkamp, ​​RJ, Pagano, TC, Hung, D. & Raffa, RB Инсулин рецепторлору жана мээдеги инсулин аракети: карап чыгуу жана клиникалык кесепеттери. Neurosci. Biobehav. Аян 24, 855–872 (2000).
   • CAS
   • ISI
   • PubMed
   • макала
   • Show контекст
2. Gerozissis, К. Brain инсулин, энергетика жана глюкоза гомеостаз; гендер, курчап турган чөйрөнү жана зат алмашуу патологиялар. Eur. J. Pharmacol. 585, 38-49 (2008).
3. CAS
4. PubMed
5. макала
6. Show контекст
7. CAS
8. PubMed
9. макала
10. Show контекст
11. CAS
12. PubMed
13. макала
14. Show контекст
15. CAS
16. PubMed
17. макала
18. Show контекст
19. CAS
20. ISI
21. PubMed
22. макала
23. Show контекст
24. ISI
25. PubMed
26. макала
27. Show контекст
28. CAS
29. PubMed
30. макала
31. Show контекст
32. Show контекст
33. CAS
34. ISI
35. PubMed
36. макала
37. Show контекст
38. CAS
39. ISI
40. PubMed
41. макала
42. Show контекст
43. CAS
44. ISI
45. PubMed
46. Show контекст
47. ISI
48. PubMed
49. макала
50. Show контекст
51. CAS
52. ISI
53. PubMed
54. макала
55. Show контекст
56. CAS
57. ISI
58. PubMed
59. макала
60. Show контекст
61. Show контекст
62. CAS
63. ISI
64. PubMed
65. макала
66. Show контекст
67. CAS
68. ISI
69. PubMed
70. макала
71. Show контекст
72. CAS
73. ISI
74. PubMed
75. макала
76. Show контекст
77. PubMed
78. макала
79. Show контекст
80. Show контекст
81. CAS
82. PubMed
83. макала
84. Show контекст
85. ISI
86. PubMed
87. макала
88. Show контекст
89. CAS
90. ISI
91. PubMed
92. макала
93. Show контекст
94. CAS
95. ISI
96. PubMed
97. макала
98. Show контекст
99. CAS
100. PubMed
101. макала
102. Show контекст
103. Show контекст
104. CAS
105. ISI
106. PubMed
107. макала
108. Show контекст
109. CAS
110. ISI
111. PubMed
112. макала
113. Show контекст
114. CAS
115. ISI
116. PubMed
117. макала
118. Show контекст
119. CAS
120. ISI
121. PubMed
122. макала
123. Show контекст
124. PubMed
125. макала
126. Show контекст
127. CAS
128. ISI
129. PubMed
130. макала
131. Show контекст
132. CAS
133. PubMed
134. макала
135. Show контекст
136. CAS
137. ISI
138. PubMed
139. макала
140. Show контекст
141. CAS
142. PubMed
143. макала
144. Show контекст
145. ISI
146. PubMed
147. макала
148. Show контекст
149. Show контекст
150. Show контекст
151. CAS
152. ISI
153. PubMed
154. макала
155. Show контекст
156. CAS
157. ISI
158. PubMed
159. макала
160. Show контекст
161. CAS
162. ISI
163. PubMed
164. макала
165. Show контекст
166. CAS
167. ISI
168. PubMed
169. макала
170. Show контекст
171. CAS
172. ISI
173. PubMed
174. Show контекст
175. CAS
176. ISI
177. PubMed
178. макала
179. Show контекст
180. PubMed
181. макала
182. Show контекст
183. CAS
184. ISI
185. PubMed
186. макала
187. Show контекст
188. CAS
189. ISI
190. PubMed
191. макала
192. Show контекст
193. CAS
194. ISI
195. PubMed
196. макала
197. Show контекст
198. CAS
199. ISI
200. PubMed
201. макала
202. Show контекст
203. Show контекст
204. CAS
205. ISI
206. PubMed
207. Show контекст
208. Show контекст
209. Show контекст
210. Show контекст
211. CAS
212. ISI
213. PubMed
214. макала
215. Show контекст
216. CAS
217. PubMed
218. макала
219. Show контекст
220. CAS
221. ISI
222. PubMed
223. Show контекст
224. Show контекст
225. CAS
226. PubMed
227. макала
228. Show контекст
229. ISI
230. PubMed
231. макала
232. Show контекст
233. Show контекст
234. ISI
235. PubMed
236. макала
237. Show контекст
238. Show контекст
239. CAS
240. ISI
241. PubMed
242. макала
243. Show контекст
244. Show контекст
245. Vogt, MC & Bruning, эмбриондон карылыкка чейинки гомеостаз жана глюкоза метаболизмин контролдоодо CNS инсулининин сигнализациясы. Тренддер Эндокринол. Metab. 24, 76–84 (2013).
246. Havrankova, J., Schmechel, D., Roth, J. & Brownstein, M. Келемиш мээсиндеги инсулиндин идентификациясы. Proc. Natl Acad. Илимий илим. АКШ 75, 5737-5741 (1978).
247. Кинг, GL & Джонсон, S. Эндотелий клеткалары аркылуу инсулинди рецепторлордун жардамы менен ташуу. Илим 227, 1583–1586 (1985).
248. Strubbe, JH, Porte, D. Jr & Woods, SC Инсулиндин реакциясы жана чычкандагы орозо кармоо жана тамактануу учурунда плазмадагы жана мээдеги суюктуктагы глюкозанын деңгээли. Physiol. Behav. 44, 205–208 (1988).
249. Банктар, WA & Kastin, AJ Панкреатиялык эки пептидге: инсулин жана амилинге кан-мээ тоскоолунун дифференциалдык өткөрүмдүүлүгү. Пептиддер 19, 883–889 (1998).
250. Банктар, WA мээ инсулин булагы. Eur. J. Pharmacol. 490, 5-12 (2004).
251. Nemoto, Т. жана башкалар. инсулин синтездөө жана чычкан Hippocampus жана мээ кабыгында анын затты жөнүндө жаңы көз караштар: гликоген synthase аркылуу proinsulin деъгээлинин amyloid-β1-42 айынан азайтуу Креатинкиназа-3β. Клетканын сигнал. 26, 253-259 (2014).
252. Де Соуза, Ч. жана башкалар. семиз-бай диета керектөө бир proinflammatory жооп кыймылга келтирип, гипоталамус клеткалары инсулин каршылыгына негиз түзөт. Эндокринология 146, 4192-4199 (2005).
253. Anthony, К. жана башкалар. инсулин каршы табити жана сыйлык контролдоо мээ тармактарда инсулин-статуя жооп өчүүсү: зат алмашуу синдрому менен тамак-начарлагандар контролдоо үчүн мээ негиз? Диабет 55, 2986-2992 (2006).
254. Kelley, AE & Berridge, KC Табигый сыйлыктардын нейрологиясы: көз карандылыкка байланыштуу дарыларга болгон тиешеси. J. Neurosci. 22, 3306–3311 (2002).
255. Koob, GF & Volkow, ND көз карандылыкты Neurocircuitry. Нейропсихофармакология 35, 217–238 (2010).
256. Werther, GA жана башкалар. Localization жана пайдалануу чычкан мээ жана бези менен инсулин кабылдагычтардын мүнөздөрү экстракорпоралдык autoradiography жана computerized densitometry. Эндокринология 121, 1562-1570 (1987).
257. Figlewicz, DP, Evans, SB, Murphy, J., Hoen, M. & Baskin, DG Келемиштин ventral tegmental зонасында / substantia nigra (VTA / SN) инсулин жана лептин рецепторлорунун экспрессиясы. Brain Res. 964, 107–115 (2003).
258. Доуз, LC жана башкалар. Инсулин белги жана көз карандылык. Neuropharmacology 61, 1123-1128 (2011).
259. Figlewicz, DP & Sipols, AJ Energy жөнгө салуучу сигналдар жана тамак-аш сыйлыгы. Фармакол. Биохимия. Behav. 97, 15–24 (2010).
260. Паттерсон, TA жана башкалар. Ачарчылыкты чычкан тинейджер ташуучунун РНКны жана ишин азаят. Neuroendocrinology 68, 11-20 (1998).
261. Carvelli, L. жана башкалар. PI 3-Креатинкиназа тинейджер өздөштүрүү жөнгө салуу. J. Neurochem. 81, 859-869 (2002).
262. Williams, JM жана башкалар. Hypoinsulinemia тинейджер боюнча amphetamine-көндүрүшкөн ташып жөнгө салат. PLoS Biol. 5, e274 (2007).
263. Zhen, J., Reith, MEA & Carr, KD Чычкан стриатумундагы өнөкөт азык-түлүк чектөөсү жана дофаминдин ташуучу функциясы. Brain Res. 1082, 98–101 (2006).
264. Schoffelmeer, AN жана башкалар. Инсулин кокаин сезгич monoamine Ташуучу милдетин жана сезимдерге жүрүм modulates. J. Neurosci. 31, 1284-1291 (2011).
265. Вентралдык тегменталь аймагындагы мебель, DM, Wong, JC, Dong, YJ & Borgland, SL инсулин гедоникалык тамактанууну азайтып, кайра жүктөөнү көбөйтүү менен допамин концентрациясын басат. Eur. J. Neurosci. 36, 2336–2346 (2012).
266. Labouebe, G. жана башкалар. Инсулин endocannabinoids аркылуу ventral tegmental аянты тинейджер нейрондордун узун мөөнөттүү депрессияга негиз түзөт. Nat. Neurosci. 16, 300-308 (2013).
267. Konner, AC жана башкалар. энергетикалык гомеостаз контролдоо боюнча catecholaminergic нейрондордо инсулин жылдырыш үчүн ролу. Клетканын Metab. 13, 720-728 (2011).
268. Figlewicz, DP, Bennett, JL, Aliakbari, S., Zavosh, A. & Sipols, AJ Инсулин чычкандарда сахарозанын курч колдонулушун жана сахарозанын өзүн-өзү башкаруусун азайтуу үчүн ар кандай CNS сайттарында иштейт. Ам. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R388 – R394 (2008).
269. Patel, JC, Witkovsky, P., Coetzee, WA & Rays, ME Стриаталдык допаминдин сек-секундага чейин жөнгө салынышы, алдын-ала синаптикалык К_ATP Каналы. J. Neurochem. 118, 721-736 (2011).
270. Tepper, JM & Bolam, JP Неостриаталдык интернейрондордун функционалдык ар түрдүүлүгү жана өзгөчөлүгү. Curr. Opin. Neurobiol. 14, 685-692 (2004).
271. Чжоу, ФМ, Лианг, Ю. & Дани, JA Эндогендик никотиндик холинергиялык иш-аракет стриатумдагы допаминдин бөлүнүп чыгышын жөнгө салат. Нат. Neurosci. 4, 1224–1229 (2001).
272. Райс, ME & Cragg, SJ Никотин стриатумдагы сыйлыкка байланыштуу допамин сигналдарын күчөтөт. Нат. Neurosci. 7, 583-584 (2004).
273. Zhang, H. & Sulzer, D. Никотин менен допаминдин чыгарылышынын жыштыгына көз каранды модуляциясы. Нат. Neurosci. 7, 581-582 (2004).
274. Patel, JC, Rossignol, E., Rice, ME & Machold, RP Стриаталдык допаминдин бөлүнүп чыгышына жана мээ тамырынын холинергиялык кириштери менен кыймылдаткыч жүрүм-турумуна каршы. Нат. Коммун. 3, 1172 (2012).
275. Threlfell, S. жана башкалар. Striatal тинейджер-релиз антихолинергикалык interneurons менен синхрондуу иш менен иштетилди. Нейрон 75, 58-64 (2012).
276. Cachope, R. жана башкалар. антихолинергикалык interneurons иргеп жандантуу accumbal .Суигон тинейджер бошотулушун арттырат сыйлык кайра иштетүү үчүн обон белгилөө. Клетканын Rep. 2, 1-9 (2012).
277. Джонс, IW, Болам, JP & Воннакот, S. Никотин ацетилхолин рецепторунун бета2 суббирлик иммунореактивдүүлүгүнүн пресинаптикалык локалдашуусу нигростриаталдык допаминергиялык нейрондордо. J. Comp. Neurol. 439, 235–247 (2001).
278. Higley, MJ жана башкалар. Антихолинергикалык interneurons striatum орозо VGluT3 көз каранды glutamatergic берүүнү ортомчу. PLoS БИР 6, e19155 (2011).
279. Touzani, K., Bodnar, R. & Sclafani, A. Допамин D1 сыяктуу рецепторлорду ядро ​​аккумуляторунда активдештирүү келемиштердеги азык-түлүк шартталган даамдын артыкчылыктарын алуу үчүн өтө маанилүү. Eur. J. Neurosci. 27, 1525–1533 (2008).
280. Sclafani, A., Touzani, K. & Bodnar, RJ Dopamine жана тамак-аш артыкчылыктарын үйрөнгөн. Physiol. Behav. 104, 64-68 (2011).
281. Mayer, CM & Belsham, DD Борбордук инсулиндин сигнализациясы инсулин рецепторунун субстрат-1 серин фосфорланышы, протеазомалдык деградация жана лизосомалык инсулин рецепторунун деградациясы аркылуу инсулиндин узак мөөнөттүү таасири менен начарлайт. Эндокринология 151, 75–84 (2010).
282. Райс, ME, Пател, JC & Cragg, SJ Допаминдин бөлүнүшү базалдык ганглияда. Neuroscience 198, 112-137 (2011).
283. Smith, Y., Surmeier, DJ, Redgrave, P. & Kimura, M. Базальдык ганглияга байланыштуу жүрүм-турум которуштурууга жана бекемдөөгө таламикалык салымдар. J. Neurosci. 31, 16102–16106 (2011).
284. Threlfell, S. жана башкалар. Striatal muscarinic кабылдагычтар көкүрөк striatum каршы ventral менен антихолинергикалык interneurons боюнча айырмаланган сезгич чакан аркылуу тинейджер берүү иши көз каранды өбөлгө. J. Neurosci. 30, 3398-3408 (2010).
285. Hoebel, BG, Avena, NM & Rada, P. Accumbens допамин-ацетилхолин тең салмактуулугу жана качуу. Curr. Opin. Фармакол. 7, 617-627 (2007).
286. Pothos, EN, Creese, I. & Hoebel, BG Арыктоо менен чектелген тамак-аш өзөктүк клеткадан тышкаркы дофаминди төмөндөтөт жана допаминдин амфетаминге, морфинге жана тамак-ашка болгон реакциясын өзгөртөт. J. Neurosci. 15, 6640–6650 (1995).
287. Geiger, BM жана башкалар. чычкан азык-жылы семирүүдөн жабыркагандардын mesolimbic тинейджер neurotransmission тартыштыкты. Neuroscience 159, 1193-1199 (2009).
288. Morris, JK жана башкалар. Инсулинге nigrostriatal тинейджер милдетин бузбаган бир долбоорго ээ. Exp. Neurol. 231, 171-180 (2011).
289. Де Araujo, IE жана башкалар. даам кабылдагыч сигналдаштыруунун жок Food сыйлык. Нейрон 57, 930-941 (2008).
290. Stice, E., Spoor, S., Bohon, C. & Small, DM Семирүү жана тамак-ашка стриаталдык жооптун ортосундагы мамиле TaqIA A1 аллели тарабынан башкарылат. Илим 322, 449–452 (2008).
291. Wang, Г.Ж. жана башкалар. Brain тинейджер жана семирип кетүү. Lancet 357, 354-357 (2001).
292. Джонсон, PM & Кени, PJ тинейджер D2 рецепторлору көз карандылык сыяктуу сыйлык дисфункциясы жана семиз чычкандарда милдеттүү түрдө тамактануу. Нат. Neurosci. 13, 635-641 (2010).
293. Carr, KD, Kim, G.-Y. & Cabeza de Vaca, S. Түздөн-түз допаминдик рецептордук агонисттердин сыйлык берүүчү жана кыймылдаткыч таасирлери келемиштердеги тамак-аштын өнөкөт чектелиши менен көбөйтүлөт. Психофармакология (Берл.) 154, 420-428 (2001).
294. Levin, BE & Keesey, RE Дененин ар кандай салмагынан коргонуу, диетанын айынан чыккан семиз жана чыдамдуу чычкандарда белгиленген чекиттер. Ам. J. Physiol. 274, R412 – R419 (1998).
295. Patel, JC & Rice, ME Аксоналдык жана соматодендриттик дофаминдин бөлүнүшүн көзөмөлдөө мээнин кесиндилеринде тез сканерленген циклдик вольтамметрияны колдонуу. Методдору Mol. Биол. 96, 243-273 (2013).
296. Lee, CR, Витковский, П. & Райс, ME H substantia nigra pars reticulata GABAergic нейрон активдүүлүгүн жөнгө салуу₂O₂ flufenamic кислотасы сезгич каналдар жана K аркылуу_ATP Каналы. Front. Syst. Neurosci. 5, 14 (2011).
297. Chen, BT, Moran, KA, Avshalumov, MV & Rays, ME Соматодендриттик допаминдин чыңалууга сезгич Ca менен чектелген регуляциясы²⁺ Каналы Аксондор тинейджер чыгарууну бекем жөнгө салуу менен карама-каршы. J. Neurochem. 96, 645-655 (2006).
298. Li, X. жана башкалар. чычкандардын LRRK2 overexpression менен жакшыртылган striatal тинейджер берүү жана кыймыл-аткаруу үйбүлөлүк Паркинсон оорусу мутант G2019S тарабынан жок кылынат. J. Neurosci. 30, 1788-1797 (2010).
299. Wu, Q., Reith, MEA, Wightman, RM, Kawagoe, KT & Garris, PA Чыныгы убакытта вольтамметрия менен өлчөнгөн электрдик допамин динамикасынан бошонуу жана сиңирүү параметрлерин аныктоо. J. Neurosci. Методдор 112, 119–133 (2001).
300. Чен, BT, Авшалумов, MV & Rays, ME H₂O₂ кичинекей тинейджер чыгарууну роман, ички модулятору болуп саналат. J. Neurophysiol. 85, 2468-2476 (2001).
301. Витковский, П., Пател, Дж.К., Ли, CR & Райс, ME Нигралдык допаминергиялык нейрондордун somatodendritic бөлүмүнөн допаминге катышкан белоктордун иммуноцитохимиялык идентификациясы. Neuroscience 164, 488-496 (2009).
302. Sugimoto, К. жана башкалар. чычкан аралыкта беймаза инсулин кабылдагыч: анын жайгашкан жери жана сүрүлүп жонулган isoforms. Диабет Metab. Рез. Аян 16, 354-363 (2000).
303. Санчес-Alavez, M. жана башкалар. Инсулин жылуу-сезгич нейрондорго түздөн-түз тыюу салуу менен артериялык себеп болот. Диабет 59, 43-50 (2010).
304. Paxinos, G. & Watson, C. Стереотаксикалык координаттардагы келемиштер мээси 6th edn Academic (2007).
305. Strubbe, JH & Mein, CG VMHде инсулин антителолорунун эки тараптуу сайылышына жооп катары тамактануу көбөйдү. Physiol Behav. 19, 309-313 (1977).
306. Paranjape, SA жана башкалар. уйку бези глюкагон заттын боюнча ventromedial гипоталамус клеткалары инсулин таасири бододо,. Диабет 59, 1521-1527 (2010).
307. Акылдуу, RA & Hoffman, DC Интракраниалдык саюу жолу менен дары-дармек менен сыйлоо механизмдерин локалдаштыруу. Синапс 10, 247–263 (1992).
308. Zhen, J., Maiti, S., Chen, N., Dutta, AK & Reith, MEA 4- (2-бензидрилокси-этил) -1- (4-фторобензил) пиперидин жана аспартат 68дин гидроксипиперидин аналогунун ортосундагы өз ара байланыш. адамдын допамин ташыгычы. Eur. J. Pharmacol. 506, 17–26 (2004).

Download шилтемелер

Бул изилдөөлөр NIH гранттар DA033811 (-түлүккө, KDC жана жеткиргиле), NS036362 (MER), DA03956 (KDC) жана NARSAD көз карандысыз экспертти сыйлыгы (KDC) тарабынан колдоого алынган. S961 Dr Lauge Schaffer, Novo Nordisk келген баалуу белеги болчу. PP5 антитело Pfizer келген баалуу белеги болчу. Биз алуу үчүн программа үчүн дары доктор Чарлз Николсон, NYU мектебине ыраазычылык V_макс Кск маалыматтардан баалуулуктар.