Front психиатрия. 2018; 9: 81.
Жарыяланган онлайн 2018 Mar 12. чтыкта: 10.3389 / fpsyt.2018.00081
PMCID: PMC5858605
PMID: 29593587
Minho Lee,1,† Тапия Cho,2,3,† Seung Hyun Юнг,2,4 Шион-Хи YIM,2 Сун-Min Cho,2,3 Жи-Won Чун,5 Су-Hyun Пайк,5 Силерни кижилер Eun Park,6,7 Dong Huey даярдыгы,7,8 Ji Eun Lee,7 Юнг-Сок Чой,9 Dai-Jin Ким,5,* жана Ен-Jun Чунг1,2,3,*
жалпылаган
маалымат
Интернет жана онлайн оюндар Addictive колдонуу мүмкүн болуучу психикалык оору деп атаган интернет оюн оору (IgD) болуп саналат. Altered microRNA (Mirna) сөздөр Profiles айрым психиатриялык оорулар менен ооругандардын канын жана мээ кыртышы менен маалым болгон жана Эпке катары сунуштады. Бирок, IgD кан Mirna таржымалы жөнүндө эч кандай маалыматтар келип түшкөн.
ыкмалары
IgD-байланышкан miRNAs билүү үчүн, биз TaqMan төмөн тыгыздыгы Mirna Array колдонуп 51 үлгүлөрдү (25 IgD жана 26 башкаруу) менен Mirna сөздөр өздүк талдоо. текшерүү үчүн, биз 36 карандысыз үлгүлөрдү (20 IgD жана 16 башкаруу) менен сандык арткы копиялоо УРК жасаган.
натыйжалары
ачылыш жана көз карандысыз текшерүү аркылуу, биз кыйла IgD тобунун downregulated үч miRNAs (HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-26b-5p, HSA-Mir-652-3p) аныкталган. үч Mirna өзгөртүүлөрдү бир топ эч кандай өзгөрүү [ыктымалдыгы катышы (ЖЕ) 22, 95% CI 2.29-211.11] менен караганда IgD коркунучу жогору болгон адамдар, ошондой эле ОРТ өзгөрүү miRNAs санына ттък курсту доза көбөйгөн. үч miRNAs болжолдуу максаттуу гендер нейрон Коктулардын бири менен байланыштуу болгон. Биз батыш чийип үч ылдый жагындагы максаттуу гендердин протеин сөздөр чалгындалган жана GABRB2 жана DPYSL2 билдирүү IgD тобунда бир кыйла жогору экенин ырастады.
жыйынтыктоо
Биз HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-26b-5p жана HSA-Mir-652-3p IgD оорулууларда downregulated эле сөздөрдү айткан. Биздин жыйынтыктар IgD боюнча, остеохондроздун, түшүнүүгө жардам берет.
тааныштыруу
Интернет жана Интернетке негизделген оюндарды Addictive пайдалануу көп Интернет мүмкүндүк алуу объектилер менен катар өлкөлөрдө бир коомдук көрүнүш эмес, бирок мүмкүн болуучу психикалык оору Интернет оюн башаламандыкты деп атаган (IgD) (1-3). эпидемиологиялык маалыматтар боюнча, өспүрүмдөр менен IgD таралышы курстары өлкөлөрдө 0.8 тартып 26.7% чейин өзгөрүп турат (4). Атап айтканда, изилдөө таралышы, мисалы, Түштүк Корея сыяктуу көптөгөн Азия өлкөлөрүндө өспүрүмдөр менен 10% жогору чендерди, Кытай, Таиланд, Гонконг көрсөтүп, Сингапур (4). IgD тааным менен бузулгандыгына, психо-коомдук мамилелери жана күнүмдүк жашоо менен байланышкан; Мисалы, окуу же кесиптик аткарууну төмөндөшү (4-7). IgD азыр киргизилген III бөлүм Психикалык бузулуу аныктоо жана статистикалык колдонмосунун бешинчи кайра карап чыгуу боюнча (андан ары изилдөө үчүн шарттары) (DSM-V) (8). Ошентсе да, анын clinico-коомдук мааниге карабастан, аз IgD артында молекулалык-генетикалык механизми жөнүндө белгилүү.
Акыркы масштабдуу эгиз изилдөөлөр IgD үчүн генетикалык билим сунуш кылышат (9, 10). Vink .Удаалаш. Нидерланды эгиз реестрге 5,247 monozygotic жана dizygotic өспүрүм эгиз менен милдеттүү Интернет пайдалануу жекече айырмачылыктарды иликтеп жана айырмачылыктар 48% генетикалык себеп менен түшүндүрүлөт деп билдирди (9). Li ж.б.. Байкалып 825 Кытай өспүрүм эгиз түгөйү жана генетикалык себеп айырмачылыктар 58-66% түшүндүрүп билдирди (10). Демек, мындай тинейджер кабылдагыч D2 ген эле neurotransmission, таанып-билүү жана маани тартылган гендердин polymorphisms (DRD2), Catecholamine-O-methyltransferase ген (COMT), Серотонин Ташуучу ген (5HTTLPR) Жана антихолинергикалык кабылдагыч никотин Alpha 4 ген (CHRNA4) Бир кыйла Интернетке башы менен байланышта болушу маалым болгон (11-13). Жакында эле, Ким менен ал. өндүрүш менен байланышкан дагы 100 ашык талапкер гендердин Чыгарылган текшерилип, иш-аракет, жана кийинки муун бир тизмек талдоо Күлкү зат жана rs2229910 деп билдирди NTRK3 ген IgD менен байланышкан (14).
генетикалык себептерден тышкары, ал ошондой эле neurobehavioral мумкун epigenetically эмес код түзбөгөн, анын ичинде microRNAs (miRNAs) тарабынан контролдонуучу деп аталат (15, 16). miRNAs аз эмес код жалгыз калып РНК молекулалары бар (узундугу болжол менен 20-23 нуклеотид), бул терс mRNAs бузулуудан протеинди коддогон гендин билдиришине жөнгө салуу жана ар кандай оорулардын pathophysiological алууда маанилүү ролду ойнойт (17). CNS системасын өнүктүрүү жана жетилүүнүн тартылган далилдер коюлган miRNAs адам борбордук толкунданып системасынын (CN) көп жана жакшы кармалган, алардын максаттуу экспрессия көлөмүн иш экенин көрсөттү, (15). Ооба, акыркы изилдөөлөр Mirna сөздөр Profiles алардын сөздөр Profiles психикалык үчүн Эпке болушу мүмкүн деген божомолдор, психикалык оорулар менен ооругандардын мээ кыртышына өзгөртүлүшү экенин көрсөттү (15, 16, 18). Мисалы, патологоанатомиялык анализ жолу менен, Лопес ж.б.. metabotropic протоколу кабылдагыч-1202 ген сөздөр жөнгө салган Мир-4 эркбилдирүүсүнө, деп билдирди жана чечмелөө үчүн жооп божомолдойт, депрессияга оору менен ооругандардын prefrontal борбору кыртыштарда downregulated болду (19). biomarker текшерүүнүн шарттары, бул ыкма текшер CNS эт биопсиядан аткаруу мүмкүн эмес, анткени так чектөө бар. miRNAs кан (плазмадан же кан) табылышы мүмкүн болгондуктан, жүгүртүүдөгү miRNAs neuropsychiatric жабыркаган эмес invasive Эпке катары белгилүү бир артыкчылыгы бар. Бирок, бүгүнкү күнгө чейин, IgD жылы Mirna маалыматтарда жүгүртүүдөгү жөнүндө эч кандай изилдөө болгон. Mirna сөздөр өздүк жүгүртүүдөгү жакшыраак түшүнүү IgD өнүктүрүү механизмин тактоо жана клиникалык которууну камсыз кылуу үчүн жардам берет.
Бул макалада биз IgD жана контролдоо топтордун ортосундагы плазма miRNAs differentially билдирди байкоо салуу менен IgD-байланышкан Mirna белгилерин аныктоого багытталган жана алардын биологиялык таасирин изилдеген.
Материалдар жана ыкмалар
Изилдөө субъекттери
Биз 3,166 өспүрүм (12-18 жаштагы) DSM-V IgD бурчтан аркылуу изилденген. Алардын арасында, 251 (168 эркек жана 83 аял) DSM-V критерийлерге ылайык IgD катары диагнозу коюлган (8). 91 жеке (49 IgD антителолору жана 42 башкаруу) жалпысынан бул изилдөөгө макулдук берилген. Алардын арасында төрт адам салуу критерийлерге ылайык алынып салынды. Акыр-аягы, 87 адамдар (45 IgD сабактар жана 42 дени башкаруу адамдар) Бул макалада жазылган. Алардын арасында, 51 катышуучулары (25 IgD ооругандар жана 26 башкаруу) 2014 үчүн 2016 арасынан табылган ишке алынган. башка 36 катышуучулары (20 IgD ооругандар жана 16 башкаруу) 2016 көз карандысыз текшерүү жыйындысы катары кабыл алынган. Бардык катышуучулар Сеул St. Мариямдын ооруканасынын (Сеул, Түштүк Корея) жана Сеул Улуттук University Boramae ооруканада (Сеул, Түштүк Корея) чейин кабыл корей адамдар болгон. Бардык катышуучулар Affective бузулуу Корея детки-тиркемесинде негизделген психиатрдын структуралык маек жана шаблон (K-SADS-PL) дуушар болгон (20). Бардык катышуучулар Блок Дизайн жана балдар үчүн Корея-Wechsler чалгындоо масштаб байлыгы субтесттен, 4th өзгөртүүлөр жана толуктоолор менен (K-WISC-IV) аяктады (21). Impulsiveness Barratt Impulsiveness шкаласы (МС) боюнча баа берилди (22). Жүрүш-туруш Inhibition System (контейнерлери) жана жүрүм-турумдук Жандыруу системасы (BAS) таразасы табиятты өлчөм баа ченөө (23). Чыгаруу критерийлери мурунку же азыркы учурдагы негизги медициналык бузулуусунун киргизилген (мисалы, кант диабети), нейрологиялык бузукулук (мисалы, басып алуу бузулушу, башынан жаракат алган), психикалык ооруларды (мисалы, ири чөгүү бузукулук, тынчсыздануу бузулуштар), акыл-эсин өксүтүп, же кандайдыр бир зат кыянаттык менен (мисалы, , тамеки, кара куурай, спирт). изилдөө субъекттердин жалпы мүнөздөмөсү столдун жалпыланган Table1.1. Бул изилдөө Корея католик University Медикал колледжинин институттук Review Башкармасынын (MC16SISI0120) тарабынан бекитилген. Бардык катышуучулар жана алардын ата-энелери маалымат жазуу жүзүндөгү макулдугу көрүшкөн.
стол 1
изилдөө субъекттердин жалпы мүнөздөмөсү.
| ачылыш | текшерүү | Айкалыштырылган | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| башкаруу | IgD | Pжуптан | башкаруу | IgD | Pжуптан | башкаруу | IgD | Pжуптан | |
| N | 26 | 25 | 16 | 20 | 42 | 45 | |||
| Курак (жаш) | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 13 (12-17) | 13 (12-15) | 0.759 | 15 (13-18) | 14.5 (12-18) | 0.628 | 14 (12-18) | 14 (12-18) | 0.509 |
| Жумалык интернет оюн саат (ж) | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 5.25 (2-17) | 18 (6-46) | 1.27E-6a | 5.5 (2-23) | 8 (1-112) | 0.374 | 5.5 (2-23) | 14 (1-112) | 1.63E-5a |
| Ай сайын үй-бүлө кирешеси (млн KRW) | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 5 (1-9) | 3 (1-9) | 0.588 | 4 (4-4) | 2 (2-2) | 1.000 | 5 (1-9) | 3 (1-9) | 0.460 |
| Билим берүү (лет) | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 8 (7-9) | 8 (7-9) | 0.584 | 12 (12-12) | 6 (6-13) | 0.305 | 8 (7-12) | 8 (6-13) | 0.269 |
| K-WISC: бөгөттөөлөр дизайн | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 10.5 (4-17) | 10 (4-16) | 0.544 | 10 (3-16) | 12.5 (4-15) | 0.125 | 10 (3-17) | 11 (4-16) | 0.598 |
| K-WISC: лексика | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 9 (5-17) | 7 (5-13) | 0.174 | 9.5 (8-15) | 11.5 (5-15) | 0.595 | 9 (5-17) | 9 (5-15) | 0.527 |
| KS | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 24 (17-36) | 37 (22-51) | 3.81E-6a | 29 (17-34) | 59 (22-108) | 1.2E-5a | 25 (17-36) | 40 (22-108) | 2.05E-10a |
| МС | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 63 (35-75) | 67.5 (45-81) | 0.080 | 61 (45-79) | 63 (32-82) | 0.835 | 62 (35-79) | 65 (32-82) | 0.240 |
| BAS | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 31 (15-40) | 31 (13-51) | 0.558 | 36.5 (22-48) | 34 (27-52) | 1.000 | 32 (15-48) | 34 (13-52) | 0.637 |
| Чаканы | |||||||||
| Медианасы (мүн-макс) | 18 (10-26) | 17.5 (13-27) | 0.642 | 18.5 (12-25) | 20 (13-21) | 0.138 | 18 (10-26) | 19 (13-27) | 0.302 |
IgD, интернет оюн оору менен ооругандар; KS, кореялык интернет көз карандылык напсине системасы; ЭЭБ, Barratt Impulsivity системасы; БАС, Behavioral Кошулуу системасы; Урналар, Behavioral Inhibition системасы; KRW, Корея Won.
aP <0.05 (Манн – Уитни – Уилкоксон тест).
TaqMan төмөн тыгыздыгы Mirna Array (TLDA) эксперименттер
Сырткы кан ар бир катышуучунун чогултулган жана кан клеткаларынын lysis азайтуу үчүн 4 ч ичинде лабораторияга которулган. лг бөлмө температурасында 3,000 мүн 10 об боюнча ийбөө болду. Андан кийин, supernatant (плазманы катмары) кан клеткаларын булгоочу жок жыйналды. Таратылган miRNAs TaqMan Mirna ABC тазалоонун комплектиси (Адам Panel A; термодинамикалык Fisher илимий, Уолтхэм, MA, США) колдонуу менен алынганы чыгаруучулардын тапшырмасы боюнча. Кыскасы, ABC Санитардык-жылдын 50 μL плазма үлгүдөгү жана 100 μL аралаш болгон. максаттуу-каршы атайын Mirna магниттик мончок менен гибриддештирүү кийин, жүгүртүүдөгү miRNAs elution Санитардык-жылдын 100 μL менен мончок чейин болуп шайланган эле чектелген. ачылыш этапта, 381 miRNAs 51 плазма үлгүлөрдү (25 IgD антителолору жана 26 башкаруу) TaqMan Mirna ABC тазалоонун комплектиси менен каралып чыкты (Адам Panel A; термодинамикалык Fisher илимий, Уолтхэм, MA, USA) чыгаруучулардын көрсөтмөсүнө ылайык. Megaplex арткы копиялоо жана алдын-ампер сезимге Mirna сөз талдоо MegaplexPreAmp грунттарды Адам Pool A жана TaqManPreAmp Master пайдалануу үчүн cDNA санын көбөйтүү үчүн жасаган Mix (термодинамикалык Fisher Илимий). TLDA панелдүү А v2.0 (термодинамикалык Fisher Илимий) miRNAs билдирүүсүнө баа берүү үчүн ViiA7 реалдуу убакытта ПКО системасынын (термодинамикалык Fisher Илимий) боюнча чуркап кетти. Чийки маалыматтар ExpressionSuite программалык v1.0.4 (термодинамикалык Fisher Илимий) ар бир Mirna үчүн Ct баалуулуктарын аныктап алуу менен иштелип чыкты.
TLDA үчүн маалыматтар талдоо
Алгач ар бир миРНКнын чектик циклдарын (Ct мааниси) өлчөдүк. Ct мааниси> 35 болгон миРНКлар табылгыс деп табылып, кийинки анализден четтетилген. Бардык Ct маанилери адам плазмасында айланган эң туруктуу миРНКлардын бири болгон miR-374b (ΔCt мааниси) Ct маанисине чейин нормалдаштырылган (24). Bioconductor жылы HTqPCR пакетте бир log2 сөз бүктөмө өзгөртүү катышы (ΔΔCt балл) бир калибраторду катары контролдук үлгүлөрдү орточо маанилерин эсептелген (25). Ар бир Mirna максаттуу салыштырмалуу сандык (RQ) 2 катары аныкталган-ΔΔCt. эки топтун ортосундагы сөз айырмасын гипотетикалык сыноо үчүн, биз менен эксперименттерде партиясы таасирин катары heterogeneities басып орсок өзгөрмөлүү талдоо (SVA) колдонулат ки Bioconductor менен таңгак (26). а менен miRNAs P-мааниси <0.05 эки топтун ортосунда бир кыйла айырмаланган деп эсептелген.
Джин Set байытууну талдоо
ген белгиленген байытуу талдоо үчүн, биз ToppGene Suite менен ToppFun колдонгон (27) Бир кыйла Джин онтология (GO байытылган сырлары) (28) Шарттары, бейпил жана оору шарттары. бул жүрүштүн киргизүү, биз 1,230 талапкер miRNAs максаттуу гендерди алдын ала колдонулат. Жолду талдоо KEGG, BioCarta, Reactome, GeneMAPP жана MSigDBin ToppGene жолдору боюнча алдын ала максаттуу гендердин маанилүү жол табуу үчүн колдонулган. иш байытуу терминдердин мааниси Bonferroni-эске негизинде аныкталган Pжуптан.
Сандык Кайтарым Чечмелөө ПКО (qRT-PCR) Validation жана жайылтуу
differentially ачылыш этапта айтылган 10 miRNAs ырастоо үчүн, qRT-ПКО TaqMan MicroRNA пробасы (Мир-15b-5p, #000390 аркылуу жүргүзүлдү; Mir-26b-5p, #000407; Мир-29b-3p, # 000413; Mir-125b-5p, #000449; Мир-200c-3p, #002300; Мир-337-5p, #002156; Мир-411-5p, #001610; Мир-423-5p, #002340; Мир-483 -5p, #002338 жана Мир-652-3p, #002352) жана ViiA7 системасы (Life Technologies) чыгаруучулардын протоколго ылайык. жалпы РНК он nanograms TaqMan иш менен реалдуу убакыт ПКОдо артынан TaqMan MicroRNA Кайтарым Чечмелөө комплектиси (#4366596, Life Technologies), колдонуп Mirna-айкын грунттарды биринчи катарлуу cDNA динин кабыл алган. Ар бир Mirna боюнча RQ 2 катары аныкталган-ΔCtΔCt ички Mirna (Мир-374b-5p, #001319) каршы нерседей каралып жаткан үлгүдөгү үчүн чектик орбиталарында айырмасы кайсы. Бардык ПКО сезимге нускада ишке ашырылган, алардын Ct баалуулуктар орточо алынган. Биз даяр негизделген талдоо, ошондой эле жол менен ар бир Mirna бир log2 бүктөмө өзгөртүү катышы (ΔΔCt) эсептелген. Бир эмес параметрге Mann-Уитни-Уилкоксон сыналышы босогосун эки топтордун miRNAs билдирүү баскычтарда айырмачылыктарды сыноо үчүн аткарылган P0.05 бир жуптан.
Батыш чийип талдоо
Ар бир кан үлгү биринчи жогорку 14 жогорку мол белоктордун түгөнгөндө болгон (Методикалык иммуноглобулин G, иммуноглобулин A, serotransferrin, haptoglobin, Alpha-1 antitrypsin, fibrinogen, Alpha-2 глобулин, Alpha-1 кислотасы гликопротеинге, иммуноглобулин M, apolipoprotein КТ , apolipoprotein A-II, C3 жана transthyretin толуктап) MARS-14 мамычаны пайдаланып (4.6 × 50 мм, Agilent Technology, Санта Клара, CA, АКШ), батыш олдоксон талдоо чейин. MARS-14 колонна алынган чектелбеген бөлчөк бир Amicon Ultracel-3 качуу чыпкасы (3 KDA округда) аркылуу топтолгон, андан кийин белок топтолуу bicinchoninic кислотасы ыкмасын колдонуу менен аныкталган. контролдоо жана IgD кан үлгүлөрдүн бир суммалар (10 тартып мкг 30 чейин) 4-20% Mini-PROTEAN TGX темирбетон гел (Bio-Рад, CA, АКШ) боюнча бөлүнгөн жана polyvinylidene difluoride кабыкчасы менен өткөрүлүп берилди. Кийинки, мембрана TBS-T (190 MM NaCl, 25 ММ Tris-HCL, рН 7.5 жана 0.05% жоромолдоп 20) 5 мүн бөлмө температурасында 30% эмес майы кургак сүт менен тосулду. кабыкча анда DPYSL2 каршы негизги антителолор менен инкубатор болгон (1: 500, Novus биологиялык заттардын, Littleton, CO, АКШ), GABRB2 (1: 1000, Abcam, Кембридж, MA, АКШ), жана CNR1 (1: 100, Санта-Крус Biotechnology , Inc., Санта-Крус, CA, АКШ), DUSP4 (1: 500, MybioSource, Сан-Диего, CA, АКШ), жана PI15 (1: 500, MybioSource, Сан-Диего, CA, АКШ) кашык-T менен 5 % түнү 4 ° с, кургак сүт эмес майын, андан кийин тиешелүү орто антителолор да баш оору жана анти-чычкан менен (1: 1,000, Санта-Крус-биотехнология) же эчкинин каршы коён (1: 1,000, клетканын сигналдашуусунун, Ош, MA, USA ) 1 ч үчүн бөлмө температурасында хрен peroxidase менен коштолду. Сигнал аныктоо ECL реагенти (GE саламаттык сактоо, Piscataway, NJ, АКШ) менен chemiluminescence колдонуу менен аткарылган. Биз TotalLab 1D талдоо программалык (Non-линиялык динамикасы, апон Бирджанд, Улуу Британия) менен батыш олдоксон материалдар сан көрсөткүчтөрү. Андан кийин, densitometry катышы балл башка айтылгандай ар бир үлгүдөгү densitometry наркын бөлүү жолу менен эсептелген (29). нормалдашуу үчүн көзөмөл катары, кан үлгү 46 IgD биргелешкен жана башкаруу үлгүсүн ар бир экспериментте колдонулган. Статистикалык маанилүүлүгү босогосундагы менен эмес параметрге Mann-Уитни-Уилкоксон тест аркылуу аныкталган P0.05 бир жуптан.
натыйжалары
Изилдөө субъекттери өзгөчөлүктөрү
изилдөө субъекттерине нг жана клиникалык белгилер столдун көрсөтүлгөн Table1.1. Биз IgD жана башкаруу топторунун салыштырмалуу Корея Интернет адат напсине шкаласы боюнча (K-Scale) башка сүрөттөлгөн (20, 30), IgD топ көзөмөл тобуна караганда бир кыйла жогору медианасы K-Scale Наркы (37 vs. 24 көрсөттү, P = 3.81 × 10-6) (Мазмуну (Table1) .1). IgD топтун интернет оюндарды өткөргөн медианалык жумалык убакыт, 18 ч бир кыйла узун башкаруу караганда (5.25 vs. болду P = 1.27 × 10-6). жаш курагы эки топтун ортосунда эч кандай олуттуу айрымасы сакталып калган, ал эми ай сайын үй-бүлө кирешеси, билим берүүнүн узактыгы блогу дизайны, жана K-WISC запасы Субтест жыйынтыгы менен, ЭЭБ, урналар, жана БАС.
Differentially IgD жана контролдоо ортосунда miRNAs сүйлө
IgD-байланышкан miRNAs таап үчүн, эки кадам (табылгандыгы жана көз карандысыз тастыктоо) мамилени кабыл алынган. изилдөө долбоорлоо жана жалпы стратегия Кошумча материалдар Figure S1 көрүнүп турат. ачылыш стадиясында, биз 51 үлгүлөрдү (25 IgD антителолору жана 26 башкаруу) 384 miRNAs камтыган Mirna толгон колдонуу Mirna сөз өздүк талдоо. 10 miRNAs билдирүү өлчөмү IgD жана контролдоо топтордун ортосундагы бир кыйла башкача болуп табылган (Мазмуну (Table2) .2). Бул 10 miRNAs салыштырмалуу сөз сапаты сүрөттө берилген Figure1.1. Алардын арасында, эки (HSA-Mir-423-5p жана HSA-Mir-483-5p) upregulated сегиз (HSA-Mir-15b-5p, HSA-Mir-26b-5p эле, HSA-Mir-29b-3p, HSA-Mir-125b-5p, HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-337c-5p, HSA-Mir-411-5p жана HSA-Mir-652-3p) IgD топто downregulated алынган.
стол 2
Differentially microRNAs (miRNAs) жана бүктөп өзгөртүүлөрдү билдирди.
| Mirna | ачылыш | текшерүү | Айкалыштырылган | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Pжуптан | Fold өзгөртүү | Pжуптан | Fold өзгөртүү | Pжуптан | Fold өзгөртүү | |
| HSA-Mir-15b-5p | 0.033 | 0.829 | 0.694 | 1.119 | 0.381 | 0.947 |
| HSA-Mir-26b-5pa | 0.008 | 0.871 | 0.049 | 0.841 | 0.013 | 0.857 |
| HSA-Mir-29b-3p | 0.005 | 0.400 | 0.560 | 1.187 | 0.089 | 0.647 |
| HSA-Mir-125b-5p | 0.021 | 0.582 | 0.290 | 0.950 | 0.069 | 0.723 |
| HSA-Mir-200c-3pa | 0.011 | 0.336 | 0.003 | 0.542 | 2.93 × 10-5 | 0.415 |
| HSA-Mir-337c-5p | 0.009 | 0.385 | 0.582 | 0.872 | 0.020 | 0.553 |
| HSA-Mir-411-5p | 0.004 | 0.322 | 0.336 | 1.282 | 0.158 | 0.595 |
| HSA-Mir-423-5p | 0.026 | 1.387 | 0.189 | 0.955 | 0.518 | 1.175 |
| HSA-Mir-483-5p | 0.018 | 1.861 | 0.765 | 1.413 | 0.211 | 1.647 |
| HSA-Mir-652-3pa | 0.019 | 0.715 | 0.049 | 0.877 | 0.011 | 0.782 |
amiRNAs кыйла ырааттуу түрдө эки ачылыш жана текшерүү топтому өзгөртүлүшү.
Талапкер miRNAs боюнча qRT-парламенттик Validation
10 талапкер miRNAs ырастоо үчүн, биз qRT-УРК менен көз карандысыз текшерүү топтомун жүргүзүлөт (20 IgD антителолору жана 16 башкаруу) (Кошумча материалдар Мазмуну S1). Бул miRNAs үч (HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-26b-5p жана HSA-Mir-652-3p) олуттуу жарактуулук комплексин IgD тобу (стол менен downregulated алынган (Table2) .2). Үч башка miRNAs (HSA-Mir-337c-5p, HSA-Mir-125b жана HSA-Mir-423-5p) да IgD топто downregulated алынган, бирок бир кыйла. Калган төрт miRNAs (HSA-Mir-15b-5p, HSA-Mir-29b-3p, HSA-Mir-411-5p жана HSA-Mir-423-5p) жарактуулук комплекске тескери билдирди. Биз ачылыш жана текшерүү топтомун айкалыштырылган (45 IgD субъекттердин жана 42 башкаруу жалпы) кийин, үч тастыкталды miRNAs дайыма маанилүү болгон (Мазмуну (Table2) .2). Бул үч miRNAs боюнча CNS боюнча толук маалымат, хромосомалык жайгашкан, жетилген тизилүү жана сөз аздыгы Кошумча материалдар Мазмуну S2 бар.
IgD Тобокел боюнча үч miRNAs синхрон өзгөртүүлөргө синергетикалык Effect
үч miRNAs комплекстүү таасир баа берүү үчүн, биз ыктымалдыгы катышта (ОРТ), төрт чакан топторунун (0, 1, 2, же 3 Mirna өзгөртүүлөр менен) байкалган. Mirna өзгөртүү бөлүмдө айтылгандай RQ наркы менен аныкталган "Материалдар жана ыкмалар. "Үч miRNAs маркерлер IgD тобунун downregulated жок болгондуктан, анын RQ мааниси Mirna төмөн болуп өзгөртүлөт деп каршы болгон. үч miRNAs ар бир изилдөө субъекттин RQ баалуу маалымат Кошумча материалдар Мазмуну S3 бар. Ар бир бутагына, ыктымалдыгы анда ар бир IgD антителолору, ошол үчүн башкаруу санына карата катышы катары эсептелинген же кандайдыр бир Mirna өзгөртүүлөрдү жок кичи карама-каршы ар бир кичи мелдешүүдөн бөлүнүп эсептелген эле. үч Mirna өзгөртүүлөрдү менен адамдар ар кандай Mirna кемитпей караганда коркунучу 22 эсе жогору көрсөткөн (ЖЕ 22, 95% CI 2.29-211.11). ОРТ 0 үчүн 3 чейин өзгөрүү miRNAs саны өсүп динамика чагылдырылган (r2 = 0.996) (сүрөт (Figure22).
GO жана Талапкер miRNAs максаттуу гендерде жолуна талдоо
кыйла IgD топто downregulated үч Mirna маркерлер милдеттерин түшүнүк алуу үчүн, алардын максаттуу гендер miRWalk 2.0 базасын колдонуу менен алдын ала алынган (31). 1,230 ген жалпы ырааттуу төрт алгоритмдердин менен ылдый жагындагы максаттуу көрсөткүчтөрүн алдын ала алынган (miRWalk, Миранда, RNA22 жана Targetscan) miRWalk базасын колдонуу (32-34) (Кошумча материалдар Мазмуну S4). ToppGene Suite менен ToppFun колдонуп Джин белгиленген байытуу талдоо ошол miRNAs максаттуу гендер кыйла нейрон өнүктүрүү жолдору, мисалы, "Аксон жетекчилик" жана "neurogenesis" деген терминдерди GO менен байланыштуу болгон (Кошумча материалдар Мазмуну S5) экенин көрсөттү.
Болжолдонуучу Максаттуу экспрессия
үч miRNAs төмөн максаттуу гендер арасында 140 эки же андан көп miRNAs (Кошумча материалдар Мазмуну S4) үчүн бир эле учурда алдын ала алынган. ылдый жагындагы максаттуу ген, алардын белок сөздөр өлчөмү IgD жана контролдоо топтордун ортосундагы ар түрдүү же изилдөө үчүн, биз 2 гендерди тандалды (DUSP4 жана PI15), Бардык 3 miRNAs төмөн максаттуу көрсөткүчтөрүн алдын ала турган жана кошумча 3 ген (GABRB2, DPYSL2, жана CNR1) 2 miRNAs үчүн алдын ала жана 28 IgD антителолору жана 28 башкаруу эксперимент үчүн колдо плазма үлгүлөрү менен батыш олдоксон анализ жасаган эле. башка айтылгандай Биз тобу жана тыгыздыгы ченеп менен IgD жана башкаруу топторунун ортосундагы беш максаттуу сөздөрдү салыштырганда (29). Алардын арасында, DPYSL2 (28 IgD антителолору жана 28 башкаруу билдирүү тепкичтери, P = 0.0037) жана GABBR2 (27 IGD жана 28 башкаруу элементтери, P = 0.0052) IGD тобунда кыйла жогору болгон (Сүрөт) (Figure3) .3). Бирок, биз CNR1 түрдүү сөздөр алышмак эмес (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443) жана PI15 (P = 0.6346).
талкулоо
Бул miRNAs нейрондордун өнүктүрүүгө тиешеси бар деп билдирди келет (35, 36) Жана мээ miRNAs айырмачылыктары сөздөр, мисалы, шаблон катары психикалык оорулардын байкалат (37). Ошондуктан, ал Mirna маалыматтарда IgD пайдалуу Эпке болушу мүмкүн жүгүртүүдөгү алектениши ыктымал. Таратылган miRNAs түрдүү neuropsychiatric бузулуусун Эпке катары сунуштаганыбызда (38-40); Бирок, IgD өнүктүрүү артында молекулярдык механизми, анын клиникалык жана коомдук мааниге карабастан, негизинен белгисиз. Тактап айтканда, IgD-байланыштуу miRNAs эч кандай изилдөөлөр болгон. Бул изилдөөнүн негизги максаты эки болду. Биринчиден, биз IgD менен байланышкан плазма miRNAs табууга аракет кылган. Экинчиден, биз ылдый жагындагы максаттуу гендердин протеин сөздөр и чалгындоонун эсебинен Mirna талапкерлердин биологиялык кесепеттерге баа. Mirna сөз таржымалын жана талапкерлердин ылдыйкы тастыктоо геномунун жалпы текшерүү аркылуу, биз үч miRNAs ошол сөздөрдү тапкан (HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-26b-5p жана HSA-Mir-652-3p) болгон башкаруу караганда IgD менен ооруган бир кыйла төмөн. башка жети Mirna талапкерлердин сөздөр ченемдүүлүктөрү тастыктоо жасала жок да, ал бул изилдөөгө чакан өлчөмү жалган терс болушу мүмкүн. биздин билим үчүн, бул кан Mirna сөз айкашы Profiles IgD пайдалуу Эпке болушу мүмкүн экендиги боюнча биринчи отчет болуп саналат. үч Mirna маркерлер айкалышы IgD кабылган адамдар эрте аныктоо үчүн минимум invasive куралы катары кызмат кыла алат.
Бул изилдөөдө аныкталган miRNAs түрдүү neuropsychiatric башаламандыктарга катышкан деп билдирилди. Кандагы HSA-Mir-200c билдирүү мындай шаблон катары бир катар психикалык оорулар менен downregulated экени маалым болду (41) Жана негизги депрессиялык эпизоддор (42). Mir-200c жалпы тездик караганда кичинекей бөлчөк көбүрөөк жогорку билдирди керек билдирди (43), Ошондой эле нейрондордун клетка өлүмү менен байланышкан болушу керек (44). Бул мурунку отчеттордун негизинде, Мир-200c neurodevelopment тартылган жана анын сөз сүйлөй турган болсо neuropsychiatric оорулар менен байланышта болушу мүмкүн. Бир нече изилдөөлөр Мир-652 жана neuropsychiatric оорулардын коркунучу ортосунда пикир айтып жатышат. Биздин мамиле сыяктуу эле, шаблон үчүн кан Эпке аныктоо, Лай ж.б.. шаблон менен ооругандар кадимки башкаруу менен TLDA талдоо жүргүзүлгөн жана HSA-Mir-652, анын ичинде жети miRNAs differentially шаблон менен ооруган билдирди деп тапты (45). кийинки изилдөө, кадимкидей бийлигинен Mirna сөз маалыматтарды колдонуу жана ийгиликтүү белгилүү шаблон божомолдоо моделин иштеп (46). HSA-Mir-652 боюнча өзгөртүү сөз алкоголиктер байкалган (47). HSA-Mir-26b нейрондордун клетка нин жандандырылат деп табылган (48). Перкинс .Удаалаш. HSA-Mir-26b шаблон бейтаптардын prefrontal кабында downregulated деп билдирди (49).
Бул miRNAs боюнча козголгон сөз жана IgD боюнча, остеохондроздун, ортосундагы мамиле колдоо үчүн эч кандай түз далилдер бар болсо да, биз бул miRNAs боюнча dysregulation биз алдын ала ылдый ген ар кандай мурдагы отчетторунун негизинде IgD боюнча, остеохондроздун менен байланыштуу болушу мүмкүн деп тыянак чыгарсак болот . үч miRNAs төмөн гендердин кээ бир мисалы, GABRB2, CNR1, NRXN1, жана DPYSL2 neuropsychiatric оорулар менен бирге болгон. Гамма-гормондор кислотасы (Гебада) CNS негизги Тоскоол болуучу Нейротрансмиттер болуп саналат. Gaba кабылдагычтын Dysregulation, анын ичинде көз neuropsychiatric оорулар, тынчсыздануу жана депрессия менен аткыланды (50), IgD да негизги бөлүгү болгон (8). Gaba сезгич гендердеги генетикалык polymorphisms ичкиликке берилип кеткен жана шаблон менен байланышкан белгиленди (51, 52). Dihydropyrimidinase сыяктуу 2 (DPYSL2) microtubule жамаатына, кичинекей сигналдаштыруунун жана Аксондор өсүш жөнгө салуу боюнча ролун ойнойт collapsin жооп медиатор белок үй-бүлөнүн мүчөсү болуп саналат. Ошондуктан, бул молекула психикалык оорулар үчүн biomarker катары сунуш кылынган (53, 54). жылы Polymorphism DPYSL2 ген, ошондой эле спирт ичимдиктерин пайдалануу бузулуу менен байланышкан деп билдирди (55). Мурунку отчеттор жана маалыматтар GABRB2 жана DPYSL2, downregulated miRNAs агым боюнча максаттуу, анын overexpression IgD ичинде neuropsychiatric оорулардын патогенези үчүн да зор мааниге ээ экендигин көрсөттү. Каннабиноид кабылдагыч түрү 1 (CNR1) Нейротрансмиттер чыгарууну жана Каннабиноид сигналдаштыруунун баш аламандыктарды modulates бир presynaptic heteroreceptor болуп ар кандай neuropsychiatric оорулар менен байланышкан (56). генетикалык Объеке CNR1 ген Буга бир зат көз карандылыгы менен бирге белгилүү (57). келемиш модели боюнча, ventral Hippocampus CNR1 жандандыруу нормалдуу коомдук жүрүм-турумун жана кыялыбыз менен да таасирин тийгизбей койбойт (58). NRXN үй-генетикалык өзгөрүү көз каранды, анын ичинде ар түрдүү neuropsychiatric башаламандыктарга катышкан деп белгилүү болгон (59).
түздөн-түз жол менен үч Mirna талапкерлердин биологиялык кесепеттерге карап үчүн, биз алардын ылдый жагындагы максаттуу гендердин протеин сөздөр каралды. Улам Плазма үлгүлөрдүн чектелген болушу үчүн, 140 жалпы талапкерлердин (2 же miRNAs агым катары алдын ала), биз 5 максаттуу (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4 жана PI15) GABRB2 билдирүү батыш чийип жана тастыктады каралат жана DPYSL2 IgD тобунда бир кыйла жогору болгон. Мурунку отчеттор жана маалыматтар GABRB2 жана DPYSL2, downregulated miRNAs агым боюнча максаттуу, анын overexpression IgD ичинде neuropsychiatric оорулардын патогенези таасирин тийгизиши мүмкүн деп божомолдошот. нейрон өнүгүү жолдорунун жана жолу талдап-иликтөөлөрдүн натыйжалары, ошондой эле Mirna маркерлер neurobiological кесепеттерге колдоо. Дагы бир кызыктуу ачылыш miRNAs учурда өзгөртүлгөн синергетикалык таасири болду. Бардык 3 miRNAs боюнча downregulation менен адамдар жок downregulation менен караганда 22 жолу коркунучу жогору көрсөткөн, жана ОРТ бир дозасын-каранды абалда жогорулаган. Бул үч өзгөртүүлөрдү киргизүү жөнүндө CI кенен байланыштуу чектелген өлчөмү боюнча да, так алгылыктуу байланышы (r2 = 0.996) үч миРНКнын синергетикалык эффектин колдойт.
Биз IgD-байланышкан бардык үч Mirna өзгөртүүлөрдү менен Mirna маркерлер жана жеке адамдарга ар кандай Mirna өзгөртүүлөрдү жок караганда коркунучу 22 эсе жогору болгон таап болсо да, бул изилдөө бир нече чектөөлөр бар. Биринчиден, кичинекей үлгү башка маанилүү Mirna белгилерин жок ыктымалдыгын көбөйгөн. Экинчиден, биздин маалымат плазма Mirna Profiles же себеби же таасир жокпу тактоо үчүн жетиштүү эмес эле, анткени, биз клиникалык шарттарда бул эмес invasive маркерлер, биологиялык ролун тастыктоо мүмкүн эмес. Андан ары Mirna Каттоо жана ылдыйкы ген талдоо мээ кыртышы банктан адамдын мээси кыртышын колдонуу менен түздөн-түз жооп бере албайт. бир оюн оору мал моделге мээ кыртышы талдоо, ошондой эле пайдалуу болмок. Үчүнчүдөн, улам Плазма үлгүлөрдү чектелген болушу үчүн, биз беш гана ылдый талапкер молекулаларды каралат. чоъураак үлгү топтому менен ылдый жагындагы максаттуу изилдөө ары IgD молекулярдык механизмдерин түшүнүүгө жардам берет.
Демек, жогоруда көрсөтүлгөндөй, Mirna сөз таржымалын жана көз карандысыз тастыктоо геномунун жалпы текшерүү аркылуу, биз үч IgD байланышкан miRNAs (HSA-Mir-200c-3p, HSA-Mir-26b-5p жана HSA-Mir-652-3p) ачылган. Алардын ылдый ген көптөгөн ар түрдүү neuropsychiatric башаламандыктарга катышкан деп билдирди жана бул ылдый ген өзгөртүп сөз эксперименталдык текшерүү ушул изилдөөдө аныкталган miRNAs менен аткарган колдоо. Биз үч Mirna боюнча downregulation адамдар IgD жогорку коркунучу бар деп табылган. Бирге белгилүү клиникалык же экологиялык тобокелдиктин жана диагностикалык критерийлер менен, биздин ачылыштар IgD жогорку тобокелге адамдарга жардам берүү үчүн эрте кийлигишүүсүн өбөлгө түзөт.
этика билдирүүсү
Бул изилдөө Корея католик University Медикал колледжинин институттук Review Башкармасынын (MC16SISI0120) тарабынан бекитилген. Бардык катышуучулар жана алардын ата-энелери маалымат жазуу жүзүндөгү макулдугу көрүшкөн.
Author Contributions
ML жана ГК бул кагаз үчүн бирдей салым кошкон. ML, D-JK жана Y-JC изилдөөгө арналган. SJ, S-MC, YP, DC жана JL тажрыйба жана маалымат муунду аткарылган. J-WC, S-HP, J-СК, жана D-JK кандын үлгүлөрүн жана клиникалык маалыматтарды. ML, ГК, S-HY жана Y-JC маалыматтарды талдоо. ML, ГК, S-HY жана Y-JC кол жазманы сүрөттөлгөн. Y-JC долбоорун жетектеген.
Пайыздык Маалыматтын чыр
Жазуучулар изилдөө кызыкчылыктардын мүмкүн болуучу чыр-чатак катары боло турган кандайдыр бир соода же каржылык мамилелер жок жүргүзүлдү деп.
Шилтемелер
Каржылоо. Бул иш илим министрлиги жана МКТ жана келечекте пландаштыруу (NRF-2015M3C7A1064778) тарабынан каржыланып, Корея Улуттук кору аркылуу Brain изилдөө программасынын грант (NRF) тарабынан колдоого алынган.
Кошумча материал
Ушул макала үчүн Кошумча материалдар онлайн тапса болот http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.
шилтемелер
;