Гистон deacetylase ингибиторлору аял тала момолойлордун шериктеш артыкчылык түзүү үчүн шарттарды түзүү (2013)

Nat Neurosci. Автордун кол жазмасы; PMC 1-жылдын 2014-январында жеткиликтүү.

акыркы редактору катары жарыяланган:

Nat Neurosci. июль 2013; 16(7): 10.1038/nn.3420.

Жарыяланган онлайн Jun 2, 2013. чтыкта:  10.1038 / nn.3420

PMCID: PMC3703824

NIHMSID: NIHMS477621

Бул макаланын жарыяланган акыркы редакцияланган версиясын ушул жерден таба аласыз Nat Neurosci

КУП башка макалаларды карагыла деп келтирет жарыяланган макала.

Баруу:

жалпылаган

Коомдук моногамдык талаа чычканында (Microtus ochrogaster), жупташуу өнөктөш артыкчылыктын пайда болушу менен башталган жана окситоцин, вазопрессин жана дофамин сыяктуу ар кандай нейротрансмиттерлер менен жөнгө салынган туруктуу жуп байланыштарды жаратат. Бул жерде биз жуп-байланыш жөнгө салуу ортомчу потенциалдуу эпигенетикалык механизмдерин карап чыктык. Биз гистон деацетилаза ингибиторлору натрий бутират жана TrichoStatin A (TSA) жупташуу жок болгон ургаачы талаа чычкандарында өнөктөш артыкчылыктын пайда болушуна өбөлгө түзөрүн көрсөтөбүз. Бул окситоциндин (OTR) жана вазопрессин V1a рецепторлорунун (V1aR) спецификалык жогорулашы менен байланышкан, алардын тиешелүү промоутеринде гистон ацетилдештирүү көбөйүшү аркылуу. Андан тышкары, TSA көмөктөшкөн өнөктөш артыкчылык ядро ​​аккументтеринде OTR же V1aR блокадасы менен алдын алган. Маанилүү нерсе, жупташуу менен шартталган өнөктөш артыкчылык TSA сыяктуу OTR жана V1aR ген промоторлорунун эпигенетикалык жөнгө салынышын шарттады. Бул байкоолор Ошентип, TSA жана жупташуу жуп-байланыш эпигенетикалык жөнгө салуу үчүн биринчи түздөн-түз далилдерди камсыз кылуу, эпигенетикалык окуялар аркылуу өнөктөш артыкчылык көмөк көрсөтөт.

тааныштыруу

Социалдык тиешелүүлүк адамдын социалдык жүрүм-турумунун маанилүү мүнөздөмөсү болуп саналат жана социалдык когнитивдик дефицит шизофрения жана аутизм спектринин бузулуулары, ошондой эле көз карандылык жана депрессия сыяктуу көптөгөн нейропсихиатриялык оорулардын жалпы белгилери болуп саналат.1. Социалдык моногамдык талаа чычкандары (Microtus ochrogaster) лабораториялык жана эркин жашоочу инсандар узак мөөнөттүү жуп байланыштарды түзүшкөндүктөн, социалдык байланыштын нейробиологиялык негиздерин изилдөө үчүн абдан кызыктуу модель катары пайда болду.2-4, алар алгач өнөктөшкө карата тандалма таандык жүрүм-турумдун калыптанышы менен башталат, алар өнөктөш артыкчылык деп аталат.5. Өнөктөш артыкчылыктын бул калыптанышы ар кандай нейротрансмиттерлерди жана гормоналдык системаларды камтыйт, анын ичинде нейропептиддер окситоцин жана вазопрессин (AVP) жана мезолимбиялык дофамин5.

IЖалпысынан өнөктөштүн артыкчылыктарын калыптандыруу эркектерде ventral pallidum жана каптал септумда (LS) AVP нейротрансмиссиясы, ал эми ургаачы чычкандарда окситоциндин нейротрансмиссиясы (NAcc) ядросунда жана прелимбиялык кортекс аркылуу ишке ашырылат.6-8.

Адатта, жупташуу сыяктуу табигый сыйлыкка катышкан дофамин ошондой эле талаа чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарынын маанилүү ортомчусу катары иштейт. NAccдеги допаминдин D2 тибиндеги рецепторлорунун (D2R) активдешүүсү жеңилдетет, ал эми допаминдин D1 тибиндеги рецепторлорунун (D1R) активдештирүү эркек жана ургаачы чымчыктарда өнөктөш артыкчылыктарынын пайда болушуна тоскоол болот.9-11.

Маанилүү нерсе, окситоцин жана AVP V1a рецепторлорунун ген экспрессиясынын өзгөрүшү, тиешелүүлүгүнө жараша, OTR жана V1aR өнөктөштөрдүн артыкчылыктарына таасир этиши мүмкүн. Мисалы, ургаачы талаа чычкандарында, NAccда OTRдин ашыкча экспрессиясы жупташуу жок болгон учурда өнөктөштүн артыкчылыктарын жеңилдетет.12-14.

Жуп байланышын жөнгө салуудан тышкары, окситоцин жана AVP коомдук жүрүм-турумдун кеңири спектрине, анын ичинде социалдык таануу, агрессия жана энелик камкордукка катышат.15, 16. Белгилеп кетсек, кемирүүчүлөрдүн акыркы жүрүм-турумунун бузулушу эпигенетикалык механизмдер аркылуу узакка созулган нейроадаптацияларды, анын ичинде эстроген кабылдагыч альфасынын ДНК метилизациясын шарттайт.17 жана AVP гендер18, ошондой эле глюкокортикоиддик рецептордун промоторунун гистонду ацетилдештирүүсү19. Мындан тышкары, гистон деацетилаза (HDAC) ингибиторлору, кемирүүчүлөрдүн мээсинде гистондун ацетилизациясын жогорулатуу аркылуу гендин экспрессиясын күчөтөт.20, бул өзгөртүүлөрдү жокко чыгара алат19, жана түздөн-түз жыныстык кабыл алуу сыяктуу коомдук жүрүм-турумуна таасир этет21. Маанилүү нерсе, өпкө рагы клеткасынын линиясында HDAC ингибитору трихостатин А (TSA) гистондун ацетилдешин локалдуу көмөктөшүү менен OTR транскрипциясын түздөн-түз күчөтөт.22.

Ошондуктан, талаа чычкандарында өнөктөштөрдүн артыкчылыктарын түзүүнүн эпигенетикалык негизин сунуш кылууга болот. Бул гипотезаны текшерүү үчүн, биз алгач эки HDAC ингибиторунун, натрий бутиратынын (NaB) жана TSAнын, бойго жеткен ургаачы талаа чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарын калыптандырууга таасирин бааладык. Андан кийин, биз ургаачы талаа чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарын туудурууда TSAнын таасирин ортомчу молекулярдык механизмдерди изилдедик. Акыр-аягы, биз чогуу жашоо учурунда TSA тарабынан пайда болгон эпигенетикалык өзгөрүүлөр да жупташуу менен түрткү болгон же жокпу, аныктоого аракет кылды.

натыйжалары

TSA дарылоо өнөктөш артыкчылык берет

Жыныстык жактан таза эмес ургаачы чычкандарга интрацеребровентрикулярдык жол менен сайылган (icv.) 0.08, 0.4 же 4 камтыган CSF же CSF менен ng TSA жупташуусуз эркек менен 6 сааттык чогуу жашоонун алдында дароо эле, жана алардын өнөктөш артыкчылыгы андан кийин сыналган. Жупташуусуз эркек менен алты саат чогуу жашоо, ургаачы чычкандарда өнөктөш артыкчылыктарын пайда кылбайт.4 Ошентип, бул жүрүм-турум парадигмасы ар кандай дары-дармектердин өнөктөштөрдүн артыкчылыктарын калыптандырууга таасирин баалоо үчүн кеңири колдонулган.5.

CSF менен дарыланган жаныбарлар жупташуусуз бирге жашаган 6 сааттан кийин өнөктөш же бейтааныш адам менен тандалбаган жанаша байланышты көрсөтүштү (t15= 0.76, P = 0.46; Сүрөт. 1a). Бирок, сыноодон өткөн бардык дозаларда TSA менен дарыланган жаныбарлар бейтааныш адамга караганда өнөктөшү менен көбүрөөк убакыт өткөрүштү (t8= 4.35, P = 0.002 TSA 0.08 үчүн ng тобу; t15= 3.63, P = 0.002 TSA 0.4 үчүн ng тобу; жана t8= 2.58, P = 0.03 TSA 4 үчүн ng тобу). Маанилүү нерсе, кыймыл аракетинде эч кандай топ айырмачылыктар табылган жок (F3,46 = 1.25, P= 0.30, Сүрөт. 1b) жана тестирлөөчү аялдын бейтааныш адамга да, өнөктөшкө карата агрессивдүү жүрүм-туруму байкалган эмес, бул ТСАнын таасири кыймылдын өзгөрүшүнө же бейтааныш адамга социалдык жек көрүүсүнө эмес, социалдык артыкчылыкка мүнөздүү экенин көрсөткөн.

Figure 1  

Трихостатин А (TSA) курч инъекциясы жупташуу жок болгон ургаачы талаа чычкандарында өнөктөш артыкчылыктарын калыптандырууга көмөктөшөт. (а) Жүлүн суюктугу (ЖСФ) менен дарыланган ургаачылар 6 саат бою эркекке тийип, жупташуу болбогондо, тандалбаганын көрсөтүштү. ...

TSA өнөктөш артыкчылыкты түзүүгө катышкан мээ структураларында гистондун ацетилдешин күчөтөрүн изилдөө үчүн аялдардын өзүнчө партиясына TSAнын орточо дозасы (0.4) сайылган. nж) жана 30 мүнөт, 2 же 9 саат бою жупташуу болбогондо эркек менен чогуу жашаган. Белгилей кетчү нерсе, глобалдык гистон H3 ацетилдештирүү (Lys14) деъгээлинде эч кандай олуттуу вариация NAcc жана caudate путамендеринде каалаган убакта аныкталган эмес.P > 0.05 бардык топтор үчүн, Fig. 1c & d). Бул NAcc же куйруктуу путамендеги глобалдык гистон H3 ацетилизациясына таасирин тийгизбегенине карабастан, TSA жупташуу болбогондо өнөктөш артыкчылыктарын түзүүгө көмөктөшөөрүн көрсөтүп турат.

Маанилүү нерсе, натрий бутират NAcc глобалдык гистон H6 acetylation (Lys3) көбөйүшү менен байланышкан, бир эркек менен 14 саат бою жупташуусуз бирге жашагандан кийин, ургаачы чычкандардын өнөктөш артыкчылыгын жеңилдеткен.Кошумча Figure 1). ТСАнын өнөктөштүн артыкчылыктарын түзүүгө тийгизген таасири ошентип башка HDAC ингибитору менен кайталанышы мүмкүн, бул өнөктөштүн артыкчылыктарын жеңилдетүүдөгү TSAнын өзгөчө эмес таасирине караганда, HDAC ингибиторунун катышуусун сунуштайт. TSA бир кыйла өзгөчө жана affine класс I / II HDAC ингибитору экенин эске алуу менен23, 24, жана TSA жүрүм-турум таасирлери NaB караганда көбүрөөк айкын болгон үчүн, биз изилдөөнүн төмөнкү бөлүктөрүндө конкреттүү молекулярдык корреляцияларды изилдөө үчүн NaB үстүнөн TSA колдонууну тандап алган.

TSA көмөктөшкөн өнөктөштүн артыкчылыктарынын молекулярдык байланыштары

NAcc чычкандарынын генинин экспрессия деңгээлиндеги вариациялар моногамдуу жана моногамдык эмес чычкандардын ортосундагы ар кандай жупталуу стратегиялары менен, айрыкча, талаа чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарынын түзүлүшүнүн өзгөрүшү менен байланышкан.12, 13, 25, 26, биз TSA көмөктөшкөн өнөктөш артыкчылык калыптанышы NAcc ген экспрессиясынын вариациялары менен байланышканбы же жокпу, баалады.

TSA дарылоо (0.4 ng, icv.) CSF менен иштетилген контролдорго салыштырмалуу 2 саат чогуу жашагандан кийин NAccдеги OTR mRNA деңгээлинин көбөйүшүнө себеп болгон (t10 = 2.38, P = 0.038, Сүрөт. 2a), бул 9 саат чогуу жашагандан кийин туруктуу болгон (t9 = 2.17, P = 0.058, Сүрөт. 2b). V1aR mRNAнын бир аз, бирок олуттуу эмес өсүшү TSA инъекциясынан кийин NAccде 2 сааттан кийин байкалса да, өлчөнгөн башка mRNAs үчүн, анын ичинде D1R же D2R үчүн эч кандай башка топтук айырмачылыктар аныкталган эмес.P > 0.05, Сүрөт. 2a, б). Маанилүү нерсе, эч кандай убакыт чекитинде жана өлчөнгөн ар кандай мРНК үчүн каудат путамендеринде эч кандай топтук айырмачылыктар байкалган эмес (P >0.05 бардык топтор үчүн, Сүрөт. 2c, д), TSA менен дарыланган жаныбарларда байкалган OTR мРНКсынын көбөйүшү NAccге мүнөздүү болгондугун сунуштайт. Мындан тышкары, мындай жогорулатуу жөнгө салуу эркек менен чогуу жашагандан кийин гана болгон, анткени NAccтеги OTR жана V1aR mRNA деңгээли бирге жашоосуз TSA инъекциясынан 2 саат өткөндөн кийин өзгөрүүсүз калган (OTR: CSF тобу үчүн 100.0% ± 11.70, TSA86.7 үчүн 12.11% ± XNUMX). топ, t12 = 0.79, P = 0.444; V1aR: CSF тобу үчүн 100.0% ± 26.24, TSA тобу үчүн 92.3% ± 13.75, t9 = 0.27, P = 0.791).

Figure 2  

TSA дарылоо (0.4 nж) ургаачы талаа чычкандарынын эркеги менен чогуу жашоо учурунда жупташуу болбогондо окситоцин (ОТР) жана вазопрессин (V1aR) рецепторлорун жогорулатат. OTR mRNA (a,b) жана белок (e,f) деңгээли 2 (a,e) жана 9 сааттан кийин жогорулатылган ...

OTR мРНКнын жогорку деңгээлдерине ылайык, TSA менен дарыланган жаныбарлар да NAccтин эки убакыт чекиттеринде да жогорку OTR протеининин деңгээлин көрсөтүшкөн (2 саат: t10 = 2.34, P = 0.041; 9 саат: t10 = 3.16, P = 0.01, Сүрөт 2e,f), бирок куйруктуу путамен эмес (t10 = 0.41, P = 0.69, 2g, h). Кызыктуусу, TSA инъекциясынан кийин 1 же 2 сааттан кийин NAccде V9aR mRNA деңгээлдеринин олуттуу өзгөрүүсү аныкталган эмес (Сүрөт. 2a, б), V1aR протеининин деңгээли 9 саатта, CSF менен дарыланган жаныбарларга салыштырмалуу, NAcc (t9 = 3.46, P = 0.007, Сүрөт. 2f) бирок куйруктуу путамен эмес (t10 = 0.98, P = 0.35, Сүрөт. 2h). Кээ бир вариацияларга карабастан, NAcc жана caudate putamenдериндеги D1R жана D2R протеининин деңгээли TSA администрациясы тарабынан олуттуу таасир эткен эмес (P > 0.05, Сүрөт 2e-h).

TSA oxtr жана avpr1a гистонду ацетилдештирет

TSA менен дарылоодон кийин бирге жашагандан кийин mRNA жана OTR үчүн протеин деңгээлинин көбөйүшү TSA, кыязы, транскрипцияны көбөйтөт деп болжолдойт. октр, белоктун которууну же жүгүртүүсүн өзгөртүүгө караганда, OTR үчүн коддоочу ген. Мындан тышкары, V1aR протеиндин деңгээли NAccде жогору болгон, бул TSA дарылоодон кийин mRNA деңгээлинин бир аз, бирок олуттуу эмес өсүшү менен байланыштуу (Анжир. 2). TSA күчтүү класс I жана II HDAC ингибитору экенин эске алуу менен23, 24, 27, биз TSA гистондун ацетилдешин жогорулатат деп гипотеза кылдык октр жана avpr1a NAccдеги промоторлор, андан кийин алардын транскрипциясын күчөтөт. Жаныбарлардын жаны партиясы алынды icv. TSA инъекциясы (0.4 nж) курмандыкка чалаар алдында 30 мүнөт жупташкан жок, ошол замат эркек менен чогуу жашаган. 30 мүнөттүк убакыт терезеси келемиштер менен чычкандарга жергиликтүү TSA инъекциясынан кийин гистондун ацетилденүүсүнүн максималдуу жогорулашын билдирген мурунку иштердин негизинде тандалган.28, 29. H3K14 ацетилдөө октр жана avpr1a андан кийин промоторлор хроматиндин иммунопреципитациясы менен анализденди.

Мурда байкалган OTR mRNA жана протеиндин деңгээлинин жогорулашына ылайык, TSA менен дарыланган жаныбарларда гистон H460 ацетилдештирүү өтө жогору өсүштү (+3%) көрсөттү. октр NAccте CSF менен иштетилген башкаруу органдарына салыштырмалуу ген промоутору (t10 = 5.88, P = 0.0002), бирок куйруктуу путамен эмес (t9= 0.31, P = 0.76, Сүрөт. 3a). Мындан тышкары, гистон Н3 ацетилдештирүү avpr1a NAccте TSA (+30%) башкаруудан кийин промоутер 196 мүнөттөн кийин бир кыйла жогорулаган.t10 = 3.12, P = 0.01) бирок куйруктуу путамен эмес (t9= 0.38, P = 0.71), CSF менен иштетилген башкаруу органдарына салыштырмалуу (Сүрөт. 3b). Ошондуктан, TSA эркек менен чогуу жашагандан 30 мүнөт өткөндөн кийин NAccда гистондун ацетилдөөчү жерин көбөйттү.

Figure 3  

TSA дарылоо гистондун ацетилдешин күчөтөт октр жана avpr1a жупташуу жок эркек менен бирге жашоо учурунда промоутерлор. Гистон Н3 ацетилдөө (Lys14) ат октр (а) жана avpr1a (б) промоторлор ядронун аккументтеринде (NAcc) көбөйгөн, бирок андай эмес ...

TSA OTR жана V1aR аркылуу өнөктөш артыкчылыктарын жеңилдетет

Эксперименттердин мурунку топтомунан аракеттин молекулярдык модели пайда болду, мында бирге жашоо учурунда TSA гистондун ацетилдешин күчөтөт. октр жана avpr1a промоторлор, андан кийин алардын транскрипциясын күчөтүп, натыйжада бирге жашоо мезгили башталгандан кийин 1 саатка чейин OTR жана V9aR протеининин деңгээлин жогорулатат. Маанилүү нерсе, бул TSA эффектиси сайтка мүнөздүү, анткени caudate putamen таасири тийбейт. Бул жерде биз TSA менен шартталган OTR жана V1aRдин көбөйүшү өнөктөштөрдүн артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетүү менен байланышканбы же жокпу, сынап көрдүк. Ургаачы талаа чычкандары NAcc ичине TSA инъекциясын алышкан (0.04nг) алдын ала инъекция менен же ансыз (TSA инъекциясына 30 мүнөт калганда, 0.5nэки башка OTR антагонисттеринин бирин камтыган CSF же CSF, OTA(B) жана OTA(T) же V1aR антагонист (V1aRA). TSA инъекциясынан кийин дароо эле ургаачылар жупташуусуз 6 саат бою эркек менен чогуу жашашкан, андан кийин өнөктөш артыкчылык тести өткөн.

CSF менен дарыланган жаныбарлар өнөктөш артыкчылык көрсөткөн эмес (t5 = 0.17, P = 0.87, Сүрөт. 4a). Бирок, TSA менен дарыланган жаныбарлар "бөтөн адамга" караганда "өнөктөш" менен жанаша байланышта кыйла көбүрөөк убакыт өткөрүштү, бул NAccге түздөн-түз бир жолу TSA инъекциясы жупташуусуз өнөктөштөрдүн артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетүү үчүн жетиштүү экенин көрсөтүп турат (t5 = 7.04, P = 0.0009). Кызыктуусу, OTA(B), OTA(T) же V1aRA менен алдын ала дарылоо аркылуу OTR же V1aR блокадасы TSA таасирин алдын алган.P >0.05 бардык топтор үчүн). кыймыл аракетте эч кандай топ айырмачылыктар табылган жок (F4,32 = 1.89, P = 0.14, Сүрөт. 4b), бул маалыматтар NAccдеги TSA жүрүм-турумга мүнөздүү түрдө OTR жана V1aR ортомчу механизмдери аркылуу өнөктөш артыкчылыктарын түзүүгө көмөктөшөт деп болжолдойт.

Figure 4  

TSA көмөктөшкөн өнөктөш артыкчылыгы үчүн окситоцин- (OTR) жана вазопрессин (V1aR) рецепторлорунун ортомчу нейротрансмиссиясы аял ядросунун аккументтеринде талап кылынат. (а) TSA аккумбенс ядросуна куюлганда өнөктөштүн артыкчылыктарын жеңилдетет (0.04 ng ар тарапка), ...

Жупташуу TSA сыяктуу нейроадаптацияларды жаратат

Мурунку байкоолорубуздан кийин, биз аял NAccдеги окситоцин жана вазопрессин нейротрансмиссиясынын эпигенетикалык потенциалы жупташуу болбогондо өнөктөштүн артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетүү үчүн жетиштүү экендигин аныктадык. Бул нейроадаптациялар шериктик артыкчылыктын табигый калыптанышында да пайда болоорун изилдөө үчүн, ургаачы талаа чычкандары бир эркек менен 24 саат бою жупташуу учурунда бирге жашаган, бул өнөктөш артыкчылыкка түрткү берет.4, жана курмандыкка чалынган. Жыныстык жактан таза эмес аялдарга салыштырмалуу биз OTR жана V1aR mRNA жана NAcc протеининин деңгээлинин көбөйгөнүн байкадык (OTR: +38%, t10 = 2.68, P mRNA үчүн = 0.02 жана +58%, t8 = 3.05, P белок үчүн = 0.01; V1aR: +89%, t14= 2.53, P mRNA үчүн = 0.02 жана +26%, t20 = 2.23, P = 0.037 белок үчүн, Сүрөт. 5a, б).

Figure 5  

Жупташуу менен бирге жашоо окситоцин (OTR) жана вазопрессин (V1aR) рецепторлорунун регуляциясын күчөтөт. 24 саат Жупташуу менен эркек менен бирге жашоо OTR (a) жана V1aR (b) mRNA жана протеинди жөнгө салат ...

OTR жана V1aR үчүн мРНКнын жана протеиндин деңгээли жупташуу менен биргелешип көбөйгөндүктөн, биз андан ары бул жогорулоонун эпигенетикалык өркүндөтүлүшү менен байланышы бар-жогун изилдедик. октр жана avpr1a гендердин транскрипциясы. Ошентип, ургаачылардын жаңы партиясы эркек менен 6 саат бою жупташуу жана H3K14 ацетилдештирүү менен бирге жашашкан. октр жана avpr1a хроматиндин иммунопреципитациясы менен өлчөнгөн промоторлор. OTR жана V1aR mRNA жана протеиндин деңгээлине ылайык, ургаачы талаа чычкандары жогорку H3K14 ацетилдешин көрсөтөт. октр жана avpr1a Жыныстык жактан таза эмес аялдарга салыштырмалуу NAcc промоутерлери (октр: t9 = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t9 = 2.91, P = 0.017 Сүрөт. 5c, д). Бул маалыматтар ТСА менен дарылоодон кийин байкалгандай, ургаачы талаа чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарын ишенимдүү түрткөн бирге жашоо парадигмалары эпигенетикалык механизмдер аркылуу NAccдеги OTR жана V1aR экспрессиясын жөнгө салууну сунуштайт.

талкулоо

Бул изилдөөдө биз биринчи жолу өнөктөш артыкчылыктарын түзүүнүн эпигенетикалык жөнгө салуу жөнүндө кабарлайбыз. Биринчиден, биз HDAC ингибиторунун башкаруусу менен NAccдеги гистон ацетилдештирүү көбөйүшү жупташуу болбогондо бойго жеткен ургаачы талаа чычкандарында өнөктөш артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдете тургандыгын көрсөттүк. TКанча, биз аялдарда өнөктөштөрдүн артыкчылыктарынын пайда болушу эпигенетикалык жактан шартталгандыгынын түздөн-түз далилин ачтык, анткени эркек менен чогуу жашоо жана жупташуу күчөгөн. октр жана avpr1a NAccтеги гистонду ацетилдештирүү аркылуу гендердин экспрессиясы. NAccдеги TSA администрациясы өнөктөштүн артыкчылыгын жаратты жана NAccтеги OTR mRNA жана белоктордун жогорку деңгээлине алып келди. Андан тышкары, глобалдык гистон H3 ацетилдештирүү TSA менен дарыланган ургаачыларда эч кандай таасир этпесе да, гистондун ацетилденүүсүнүн байкалаарлык байышы байкалган. октр NAccдеги промотор TSA администрациясынан кийин 30 мүнөттө эле байкалган. Акыр-аягы, NAccдеги OTRди бөгөттөө TSA көмөктөшкөн өнөктөш артыкчылыкка жол бербөө үчүн жетиштүү болду. Окшош эпигенетикалык жактан негизделген модификациялар жупташуу менен чогуу жашагандан кийин аныкталгандыктан, өнөктөштүн артыкчылыктарын жараткан процедуралар боюнча, биздин маалыматтар социалдык жүрүм-турумду эпигенетикалык жөнгө салуу моделин алдыга койду. DЭркек, TSA же жупташуу менен бирге жашоодо, тез арада белгилүү бир гистон H3 ацетилдешин индукциялайт. октр NAccдеги промотор, анын транскрипциясын күчөтөт, натыйжада OTR mRNA жана протеиндин деңгээли жогорулайт, бул андан кийин өнөктөштүн артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетет.

Ургаачы тыш чычкандарда эркеги менен 6 саат бою жупталуусуз бирге жашоо өнөктөш артыкчылыктарын пайда кылбайт.4жана бул жүрүм-турум парадигмасы фармакологиялык манипуляциялардын өнөктөштүн артыкчылыктарын индукциялоосуна таасирин изилдөө үчүн колдонулган.5. Биздин изилдөөбүздө, туздуу же CSF менен дарыланган контролдор өнөктөштү жактырбаса, NaB же TSA менен дарыланган ургаачы талаа чычкандарында. NaB да, TSA да жалпы кыймылга таасир этпегендиктен, алардын өнөктөштүн артыкчылыктарына тийгизген таасири кыймылга экинчилик эмес, жүрүм-турумга мүнөздүү болуп көрүндү. TSAнын бул өзгөчө таасири биздин молекулярдык байкоолорубуз менен дагы тастыкталды. Чынында эле, башкарылса да icv., биз NAccда ген экспрессиясынын белгилүү бир өзгөрүшүн аныктай алдык, бирок чектеш структурада эмес, каудат путаменинде. Мындан тышкары, ал тургай, NAcc ичинде, D1R жана D2R mRNA жана белок денгээлдери таасир этпеген бойдон калууда. Мындай өзгөчөлүк I жана II класстагы HDACларга да таасир эткен TSA сыяктуу кеңири HDAC ингибитору үчүн таң калыштуу көрүнөт. Ошого карабастан, TSA сүт эмүүчүлөрдүн геномундагы гендердин аз гана бөлүгүнүн экспрессиясына таасир этээри кабарланган.30-32, анын ичинде чычкандарда20.

Биз бул жерде Лис3 боюнча гистон Н14 ацетилдешин көрсөттүк октр промоутер, гендин транскрипциясын жогорулатуу менен байланышкан модификация, анын ичинде мээнин пластикасы учурунда33, 34, жогорку OTR мРНК жана белок денгээлин баса белгилейт. TSA жооп катары, гистон acetylation боюнча октр промоутер адамдын клетка линиясында анын транскрипциясын активдештирүүнү күчөтөт жана жеңилдетет22, биздин тапканыбызды колдойт октр эпигенетикалык жактан жөнгө салынышы мүмкүн. NAccдеги OTRдин локалдык блокадасы TSAнын жүрүм-турумдук таасирин алдын алуу үчүн жетиштүү болгондуктан, биздин маалыматтарыбыз TSA менен шартталган OTRдин NAccде чогуу жашоо учурундагы экспрессиясы өнөктөштүн артыкчылыктарын калыптандырууну жеңилдеткенин көрсөтүп турат. Мындан тышкары, жупташуу менен 24 саат бирге жашоо, бул жол-жобосу прерия чычкандарынын ургаачы чычкандарында өнөктөштүн артыкчылыктарын ишенимдүү түрдө жаратат, NAcc ургаачысында OTR экспрессиясынын ушундай эле өсүшүнө түрткү болду. Бул окситоциндин жана анын рецепторунун ургаачы чычкандарда өнөктөш артыкчылыктарын түзүүнүн нейробиологиясына белгилүү катышуусу менен толук дал келет. Жупташуу NAccдеги клеткадан тышкаркы окситоцин деңгээлинин көбөйүшүнө түрткү берет25, жана NAccге окситоциндин жергиликтүү инфузиясы жупташуу болбогондо өнөктөштүн артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетет8. Мындан тышкары, OTR антагонисттери окситоцинди башкаруу же жупташуу менен шартталган өнөктөш артыкчылыктарынын пайда болушуна бөгөт коюшат8, 35. Маанилүү нерсе, аял NAccдеги OTRдин вирустук ортомчу ашыкча экспрессиясы өнөктөш артыкчылыктарын түзүүнү жеңилдетүү үчүн жетиштүү.12, 13.

OTR ролун күчөтүүдөн тышкары, биздин натыйжалар жупташуу болбогондо эркек менен чогуу жашоо учурунда эпигенетикалык механизмдер аркылуу OTR генинин экспрессиясын активдештирүү үчүн далилдерди берет. Чынында эле, өнөктөш артыкчылыкка түрткү берүү үчүн жетишсиз болсо да, кыска убакыттын ичинде жупташуу жок мындай чогуу жашоо өнөктөш артыкчылыктарын калыптандыруунун негизинде жаткан нейробиологиялык процесстерди активдештирет.. Мисалы, эркектин эки сааттык эркин таасири аял NAccде окситоциндин бөлүнүп чыгышынын бир аз, бирок олуттуу эмес жогорулашына алып келет.25. Демек, TSA же NaB эркек менен чогуу жашоонун натыйжасында келип чыккан нейроадаптацияларды күчөтүп, өнөктөштүн артыкчылыктарын өнүктүрүүгө көмөктөшөт деп сунуштоого болот. Кызыктуусу, мындай потенциалдаштыруу I жана II класстагы HDAC ингибиторлору, анын ичинде NaB жана TSA, башкаруучу жаныбарларда узак мөөнөттүү эстутумдун пайда болушуна алып келбеген окуу окуясынын консолидациясын жеңилдеткен кемирүүчүлөрдө кабарланган.36, 37. Бул түшүнүктү колдоо үчүн бирге жашоонун узак мөөнөттөрү (мисалы,., 48hours) жупташуу жок болгон учурда да өнөктөш артыкчылыкка түртүшү мүмкүн4. Ошондой эле, NAcc ургаачысында жупташуу менен бирге жашоо TSA дарылоо менен бирге жашагандан кийин байкалган эпигенетикалык механизмдер аркылуу OTR жана V1aR экспрессиясынын жогорулашына түрткү бергендигин белгилей кетүү маанилүү, бул TSA жана жупташуу көмөктөшүүнүн бирдей жолдоруна таасирин тийгизет. өнөктөш артыкчылыктарын түзүү. Маанилүү нерсе, TSA эркек менен чогуу жашоо болбогондо, аял NAccде OTR жана V1aRдин жогорулашына түрткү бербейт. Жалпысынан алганда, бул TSA бул же ар кандай нейроадаптацияларды өз алдынча активдештирбестен, табигый түрдө эркек менен чогуу жашоонун натыйжасында келип чыккан эндогендик нейроадаптацияларды потенциациялоо аркылуу өнөктөш артыкчылыктарын калыптандырууга көмөктөшөт деген гипотезаны колдойт.

OИзилдөө NAcc V1aRдин аялдын өнөктөш артыкчылыктарын калыптандыруудагы маанилүү ролун баса белгилейт, анткени TSA менен дарыланган жаныбарлар V1aR деңгээли жогорураак, алардын блокадасы TSA тарабынан жеңилдетилген өнөктөш артыкчылыктарынын пайда болушуна жол бербейт.. Мындан тышкары, бул таасирлер гистондун жогорку деңгээлдеги ацетилдениши менен байланышкан avpr1a оптималдуу эмес убакыт чекити менен шартталган V1aR мРНКнын олуттуу жогорулашына карабастан. Биз гистон эмес белокторду ацетилдөө аркылуу TSA тарабынан белоктун туруктуулугун жөнгө салууну жокко чыгара албайбыз.38, бул табылга окшош экенин көрсөтүп турат октр промоутер, TSA алдыга жылдырышы мүмкүн avpr1a жергиликтүү гистон ацетилдештирүү аркылуу транскрипция. Эркектин жуп байланышына AVP салымы сүрөттөлгөн5, анын аялдын жүрүм-турумундагы ролу дагы эле талаштуу. Бир жагынан, а icv. AVP инъекциясы V1aR же OTR блокадасынын алдын алуу менен эркек жана ургаачы чычкандарда өнөктөш артыкчылыктарын түзүүгө көмөктөшөт.39. Башка жагынан алып караганда, бир icv. V1aR антагонистинин инъекциясы эркектерде жупташуудан келип чыккан өнөктөш артыкчылыктарын бөгөттөйт, бирок ургаачы чычкандарда эмес40. Бирок, бардык бул изилдөөлөр колдонулган icv. инъекциялар, тартылган түзүмдөрдү мындан ары түшүнүүгө жол бербейт. Бул жерде биз NAcc ичиндеги AVP нейротрансмиссиясы ургаачы чычкандарда өнөктөш артыкчылыктарын түзүүгө катышышы мүмкүн экендигинин биринчи далилин келтиребиз, ал эми адабияттардын көбү анын ар кандай чөйрөлөрдө, мисалы, ventral pallidum, каптал септум, керебет ядросу сыяктуу чөйрөлөрдө катышуусун сүрөттөйт. stria terminalis, эркектерде амигдала5. Демек, аялдын NAcc ичиндеги OTR же V1aR блокадасы TSA дарылоодон кийин өнөктөш артыкчылыктарынын пайда болушуна жол бербөө үчүн жетиштүү болгонун белгилей кетүү кызыктуу, бул өнөктөш артыкчылыктарын түзүү V1aR жана OTR экөөнү тең активдештирүүнү талап кылат.. Tанын тыянагы AVP менен шартталган өнөктөштүн артыкчылыктары үчүн LSдагы OTR жана V1aRге бир эле учурда кирүү өтө маанилүү деген прерий чычкандардын эркек эркектеринин мурунку байкоолоруна шайкеш келет жана аны колдойт.6. Мындан тышкары, TSA менен дарыланган жаныбарларда OTR жана V1aR деӊгээлдеринин белгилүү бир жогорулашын байкоо жуп байланыш үчүн AVP жана окситоцин нейротрансмиссияларын бир эле учурда активдештирүү талабын колдойт.

Окситоцин жана AVP менен айкалышта, NAccдеги допамин нейротрансмиссиясы ургаачы чычкандарда өнөктөштүн артыкчылыктарын түзүүдө модуляцияланат.9. Жупташуу NAccде дофаминдин бөлүнүп чыгышын шарттайт9, рецепторлордун деңгээлдериндеги вариациялар жупташуу менен бирге жашагандан кийин гана байкалат - 24 сааттан көп, бул жуп байланышын сактоо үчүн маанилүү.10. Бул байкоолорго ылайык, TSA менен дарыланган ургаачы талаа чычкандары допамин D1R жана D2R рецепторлорунда олуттуу өзгөрүүсүз өнөктөш артыкчылыктарын көрсөтүштү. Ошондуктан, допамин кабылдагыч жөнгө бул жоктугу TSA өзгөчөлүгү үчүн дагы бир далил болуп саналат.

Биздин маалыматтар биринчи жолу жуп-байланыш нейробиологиясынын эпигенетикалык компоненти болуп саналат жана TSA ургаачы чычкандардын "уруксат берүүчү абалын" жаратып, чогуу жашоого табигый молекулярдык жоопту күчөтөт жана күчтүү социалдык өз ара аракеттенүүнүн калыптанышына өбөлгө түзөт деп болжолдойт. өнөктөш артыкчылыкка алып келет. Демек, TSA көмөктөшкөн өнөктөш артыкчылыктары мындан ары да бекемделиши мүмкүн жана туруктуу байланышка алып келиши мүмкүн деген гипотеза жасоо азгырык. Катышуучу конкреттүү HDACs аныктала элек болсо да, TSAнын прерия чычкандарындагы моногамдык жашоо стратегиясы менен байланышкан башка жүрүм-турумдарга, мисалы, тандалма агрессия жана эки ата-эненин камкордугуна тийгизген таасирин мындан ары изилдөө кызыктуу болмок. Адамдарда жуп байланыштын нейробиологиялык механизмдерин моделдөөдө талаа чычкандарынын актуалдуулугун эске алуу менен5, жана келечектүү HDAC ингибиторлору буга чейин клиникалык сыноолордо24, 41, 42, биздин маалыматтар коомдук жүрүм-турумга таасир этүүчү жаңы фармакологиялык мүмкүнчүлүктөр үчүн жол ачат.

ыкмалары

субъекттери

Жыныстык жактан таза эмес ургаачы талаа чычкандары (Microtus ochrogaster) лабораториялык асыл тукум колониясынан 21 күн болгондо эмчектен чыгарылып, бир жыныстуу бир тууган жуптарга суу жана тамак-аш менен желим клеткаларга (12 × 28 × 16 см) жайгаштырылды. ад либитум. Бардык капастар 14:10 саат жарык-караңгы цикл астында кармалып, температура болжол менен 20°C болгон. Бардык жаныбарлар 70-90 күнгө жеткенде туш келди эксперименталдык топторго бөлүнгөн. Колдонулган жаныбарлардын саны биздин топтун жана башкалардын чөйрөдөгү мурунку изилдөөлөрүнүн негизинде күч анализи менен айкалышкан. Эксперименттик жол-жоболор Флорида мамлекеттик университетинин жаныбарларды багуу жана пайдалануу боюнча институттук комитети тарабынан бекитилген.

Drugs

Натрий бутират (NaB), туздуу эриген жана трихостатин А (TSA), жасалма мээ-жүлүн суюктугу ташуучу (CSF, BioFluids, Rockville, MD) эриген Sigma-Oldrich (Сент-Луис, MO) экөө тең сатып алынган. NaB карынга инъекцияланган (ip) 600 мг/кг дозада, ал чычкандардын бир нече мээ структураларында гистондун ацетилдешин индукциялоосу белгилүү.43, 44. Ошо сыяктуу эле, TSA үчүн колдонулган доза диапазону жергиликтүү гистонду ацетилдөө окуяларын жана кемирүүчүлөрдүн ген экспрессиясынын вариацияларын индукциялоодо анын натыйжалуулугун аныктоочу мурунку ишке негизделген.19, 20. Тандалма V1aR рецептор антагонисти V1aRA, d(CH2)5[Tyr(Me)]AVP жана OTR антагонисти OTA(B), [d(CH2)5, Тир(Мен)2, Thr4, Tyr-NH29]-OVT), Бахемден (Торренс, Калифорния) алынган. Экинчи, көбүрөөк тандалма OTR антагонист, OTA(T), dGly-NH2-d(CH2)5 [Тир(Мен)2, Анда4]ОВТ45, боорукердик менен доктор Морис Мэннинг тарабынан берилген (Толедо университети, OH). Бул антагонисттер жана колдонулган дозалар, тиешелүүлүгүнө жараша V1aR же OTR үчүн алардын тандалмалыгын көрсөткөн мурунку изилдөөлөрдүн негизинде тандалган.35, 39, 46-49.

Стереотаксикалык кануляция жана микроинъекция

Аялдар натрий пентобарбитал (1 мг / 10 г дене салмагы) менен анестезияланган жана 26 калибрлүү дат баспас болоттон жасалган гид канулалар (Plastics One, Roanoke, VA) стереотаксикалык имплантацияланган, каптал карынчага багытталган (бир тараптуу; мурун тилкеси -2.5 мм, 0.6. rostral, 1.0 мм каптал жана 2.6 мм ventral брегмага) же сайтка өзгөчө NAcc үчүн (эки тараптуу; мурун тилкеси -2.5 мм, 1.7 мм rostral, ± 1.0 мм эки тараптуу жана 4.5 мм ventral брегмага). Айыктыруудан 3 күн өткөндөн кийин, субъекттер ТСАнын ар кандай концентрациясын камтыган CSF же CSF микроинъекцияларын алышты. OTR же V1aR үчүн тандалма антагонисттер колдонулганда, алар TSAга 30 мүнөт калганда сайылган. Инъекциялар 33 калибрлүү ийне менен максаттуу аймакка жетектөөчү канюладан 1 мм ылдыйга чейин, каптал карынчага 500 нл инъекция көлөмүндө жасалды (icv.) же 200 нЛ ар бир тарапка NAcc. Ийне Гамильтон шприцине (Гамильтон, Рено, Н.В.) полиэтилен-20 түтүкчөлөрү аркылуу туташтырылган жана поршендик депрессия акырындык менен жүргүзүлүп, ар бир сайынуу үчүн 1 мүнөт талап кылынган. Эксперименттин аягында бардык субъекттердин башын тез кесүү жолу менен курмандыкка чалышты жана эксперименталдык шарттарды көрбөгөн байкоочу тарабынан канулалардын жайгашуусун текшерүү үчүн мээлер алынды. Туура эмес жайгаштырылуучу канулалары бар субъекттер маалыматтарды талдоодон чыгарылды.

Бирге жашоо жана өнөктөш артыкчылык тести

Ошол замат төмөнкү Ип., icv., же NAcc ичине дары инъекциялары, ургаачылар жупташуусуз 6 саат бою эркек менен чогуу жашашкан. Жупташуу жок экендиги видеого тартылган жүрүм-турумду карап чыгуу менен тастыкталган. Жупташуудан келип чыккан нейроадаптацияларды изилдөө үчүн эстроген менен даярдалган ургаачылар (күнүнө 2мкг, Ип., 3 күн бою) эркек менен 6 же 24 саат бою чогуу жашаган жана жупташуу бар экендиги текшерилген. ж³з³нд¼ жактырат видеотасмага (бирге жашоонун алгачкы 6 саатында 11дан 6ге чейин).

Өнөктөш тандоо тести, мурда сүрөттөлгөндөй, 6 сааттык чогуу жашагандан кийин дароо аткарылган11. Кыскача айтканда, үч камералуу тестирлөө аппараты эки параллелдүү бирдей клеткаларга туташтырылган нейтралдуу капастан турган, ар биринде стимулдаштыруучу жаныбар - бейтааныш эркек "чоочун" же чогуу жашоо мезгилинде колдонулган тааныш эркек "өнөктөш" бар. Аялдар 3 сааттык тестирлөө учурунда аппараттын ичинде эркин жүрүшкөн жана стимулчу эркектер бири-бири менен түздөн-түз байланышка жол бербестен, клеткаларына байланган. Сеанс толугу менен видеого тартылып алынган жана субъекттин өнөктөш же бейтааныш адам менен жанаша байланышынын узактыгы кийин биологиялык топторду билбеген машыккан экспериментатор тарабынан сандык түрдө аныкталган. Өнөктөштүн артыкчылыгы жупташкан, эки куйруктуу адамдар тарабынан аныкталгандай, бейтаанышка караганда өнөктөшү менен дене байланышына көбүрөөк убакыт короткон субъекттер катары аныкталган. t-тест. Мындан тышкары, үч камералуу аппарат стимул камераларына ургаачылардын киришинин саны менен көрсөтүлгөн кыймыл активдүүлүгүн аныктоого мүмкүндүк берүүчү фотобюлдук-датчиктер менен жабдылган. Ошентип, бул кыймыл-аракет баллы бизге дарылардын аялдардын жүрүм-турумуна, мисалы, жалпы активдүүлүк, тынчсыздануу же биздин топ жана башкалар тарабынан кеңири колдонулган жаңы чөйрөнү изилдөө сыяктуу болжолдуу экинчи даражадагы таасирин көзөмөлдөөгө мүмкүндүк берет.12.

РНК жана белокторду экстракциялоо

Ургаачылардын башын тез кесүү жолу менен курмандыкка чалышкан жана мээлери дароо алынып, кургак музга тоңдурулган. Короналдык бөлүкчөлөр (200 мкм) криостатта кесилип, микроскоптун слайддарына орнотулган аяз. 1 мм диаметри менен эки тараптуу кыртыш Punches бүт NAcc жана caudate putamen алынган, акыркы башкаруу аймагы болуп, кайра иштетилген чейин -80 ° C сакталган. Жалпы РНК жана протеиндер өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык TRI-Reagent протоколунун жардамы менен алынган (Молекулярдык изилдөө борбору, Цинциннати, OH).

Вестерн-блот тарабынан белоктун экспрессиясынын анализи

10% полиакриламиддик гелде (гистондор үчүн 15%) бөлүнгөндөн кийин белоктор нитроцеллюлоза мембраналарына өткөрүлүп берилген жана төмөнкү негизги антителолор менен инкубацияланган: анти-ОТР (sc-8102, 1:1000), -V1aR (sc-18096, 1:500), -D1R (sc-33660, 1:1000), -D2R (sc-9113, 1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), -актин (A2066, 1:1000, Сигма Олдрих. Сент-Луис, MO) же анти-ацетил гистон H3 (Lys14, №06–911, 1:1000) жана жалпы Н3 (#05–928, 1:1000, Millipore, Temecula, CA). Бардык антителолор адамдарда, келемиштерде жана чычкандарда колдонулушу үчүн тастыкталган, алар менен талаа чычкандары гомологиянын жогорку пайызын бөлүшөт (81ден 96%га чейин). HRP-конъюгацияланган экинчилик антитело менен гибриддештирүүдөн кийин мембраналар ECL (ECL SuperSignal West Dura субстраты, Pierce Biotechnologies, Rockford, IL) менен ачылган жана Fuji XAR тасмасында (Fuji Film, Токио, Япония) ачылган. Сандык аныктоо AIS 6.0 Image программасы (Imaging Research, Сент-Катаринес, Онтарио, Канада) аркылуу жүргүзүлдү жана жалпы гистон H3 сигналына нормалдашылган ацетил-Н3 сигналынан башка бардык сигналдар актинге бир эле мембрана ичинде нормалдашты. Нормалдаштырылган маалыматтар андан кийин CSF менен дарыланган жаныбарлардын пайызы катары көрсөтүлөт.

Жарым сандык реалдуу убакыттагы полимераздык чынжыр реакциясы (RT-PCR)

0.5 мкг жалпы РНК толуктоочу ДНК синтези үчүн иштетилип, андан кийин мурда сүрөттөлгөндөй талданган.50 никотинамид адениндинуклеотиддегидрогеназа (NADH) генине нормалдашуу менен. Бардык реакциялар үч нускада жасалды жана алардын өзгөчөлүгү эрүү ийри сызыгын талдоо жана 2% агароза гелинде бөлүү аркылуу текшерилди. Колдонулган праймер ырааттуулугу төмөнкүдөй болгон: 5'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-3' (Fwd) жана 5'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-3' (Rev) OTR үчүн, 5'-GAGGTGAACAATGGCACTAAAACC-3' (үчүн) жана GTAACCAGAGAG'5'-GGCAGAAGCTTCCTT (Аян) AVP3aR, 1'- TTAACAACAATGGGGCTGTG-5' (үчүн) жана 3'-GGCATGAGGGATCAGTAAA-5' (Rev) D3R үчүн, 1'-GTGAAGGCGCTGTAGAGGAC-5' (үчүн) жана 3'-CGGGGCTGTG-5' (үчүн) ) D3R үчүн жана 2'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-5' (үчүн) жана 3'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-5' (Аян) NADH үчүн. Нормалдаштырылган маалыматтар CSF менен дарыланган жаныбарлардын пайызы катары көрсөтүлөт.

Хроматин иммунопреципитациясы

Гистон H3 ацетилдөө (Lys14) NAcc жана caudate putamen кыртышынын пунчтарында өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Magna ChIP протеин G Tissue Kit (Millipore, Temecula, CA) колдонуу менен талданды. Кыскача айтканда, 1% формальдегид менен кайчылаш байланыштыргандан кийин хроматин Misonix XL-2000 аркылуу 200–600 б.б. фрагменттерге кесилди. Андан кийин ацетилденген H3 (Lys14) гистонунун иммунопреципитациясы 10 мкг антиацетил-Н3 (Lys14) антителосу (Миллипор) менен 4°C түндө ишке ашты. Жуулгандан кийин, мончоктордон элюция жана кайчылаш байланышты кайтаруу, иммунопреципитацияланган ДНК тазаланган жана iCycler платформасында (жогоруну караңыз) RT-PCR аркылуу үч нускада талданган. Праймерлер 236 бп узундуктагы аймакты күчтөндүрүү үчүн иштелип чыккан, биринчи экзондун агымынын жогору жагында 128 б. б.октр, Genbank кошулуусу #AF079980), же 192 б. узундуктагы аймак прерий чычкан V141aR үчүн коддолгон биринчи экзондун агымынан 1 бит жогору жайгашкан.avpr1a, Genbank кошулуусу #AF069304). Тартиптер төмөнкүдөй болгон: 5'-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3' (Fwd) жана 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3' (Аян). октр, жана 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3' (Fwd) жана 5'-TGCAGAGCCAGGCGCTTTCC-3' (Аян) үчүн avpr1a. Ар бир үлгү тиешелүү INPUT мааниси менен нормалдаштырылган жана маалыматтар андан кийин CSF менен дарыланган жаныбарлардын пайызы катары көрсөтүлөт.

Статистикалык анализдер жана маалыматтарды иштетүү

Өнөктөштүн артыкчылыктарын талдоо үчүн бирге жашоо мезгилинде жупталуу жүрүм-турумун көрсөткөн же туура эмес жайгаштырылуучу канюлалары бар жаныбарлар алынып салынган. Бардык башка молекулярдык анализдер үчүн, ар бир биологиялык топ үчүн эң көп дегенде бир маалымат чекити чектен чыккан деп аныкталганда алынып салынган. Эксперименттердин көбү кайталанган, натыйжалар абдан ачык болгон учурларды кошпогондо. Өнөктөштүн артыкчылык тести учурунда стимулчу жаныбар менен жанаша байланышта өткөргөн убакыт эки куйруктуу жупталуу менен талданган. t-тест. кыймыл упайлары эки куйруктуу колдонуу менен талдоого алынган t-тест (эки топ үчүн) же бир тараптуу ANOVA (экиден ашык топ үчүн) жана зарыл болгон учурда, Фишердин PLSD Пост-туз сыноолор маанилүү чеги менен өткөрүлдү P < 0.05. Нормалдуулугун текшергенден кийин, бардык башка маалыматтар эки куйруктуу менен талдоого алынган t- алдын ала текшерилген бирдей же бирдей эмес дисперсияларды болжолдоочу тест. Бардык статистикалык анализдер StatView программасын (SAS институту) колдонуу менен аткарылган. Берилиштер алардын тиешелүү башкаруу органдарына стандартташтырылганда (CSF, Saline же жупташуу топторунун %), статистикалык анализдер чийки маалыматтарга жүргүзүлгөн.

Кошумча материал

Acknowledgments

Бул иш Улуттук Психикалык Ден соолук Институту (NIMH) тарабынан MK жана ZWге MHR21-083128 жана ZW үчүн MHR01-058616 гранттары тарабынан колдоого алынган. Биз ошондой эле Доктор Морис Мэннингге OTR антагонисти OTA(T) берешен белеги үчүн ыраазычылык билдиребиз.

Шилтемелер

 

Кызыкчылыктардын келишпестиги: Жазуучулар кызыкчылыктардын эч кандай чыр-жар.

Author салымдары

HW, FD жана YL эксперименттерди жасашты. HW жана FD маалыматтарды талдоо. HW, FD, ZW жана MK изилдөөнү иштеп чыгышкан. FD, ZW жана MK кагазды жазган. Бардык авторлор жыйынтыктарды талкуулап, кол жазма боюнча пикирлерин айтышты.

шилтемелер

1. Бора Е, Юцел М, Аллен Н.Б. Адамдын жакындык жүрүм-турумунун нейробиологиясы: психиатриялык оорулар үчүн кесепеттери. Психиатриядагы учурдагы пикир. 2009;22:320–325. [PubMed]
2. Thomas JA, Birney EC. Чыр чычкандын ата-энелик камкордугу жана жупталуу системасы, (Microtus ochrogaster) Жүрүш-туруш экологиясы жана социобиология. 1979;5:171–186.
3. Getz LL, Hofmann JE. Эркин жашоочу талаа чычкандарында коомдук уюм, (Microtus ochrogaster) Жүрүш-туруш экологиясы жана социобиология. 1986;18:275–282.
4. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Ургаачы талаа чычкандарынын (Microtus ochrogaster) өнөктөш артыкчылыктарын өнүктүрүү: Социалдык жана сексуалдык тажрыйбанын ролу. Гормондор жана жүрүм-турум. 1992;26:339–349. [PubMed]
5. Жаш KA, Gobrogge KL, Liu Y, Wang Z. Жуп байланыштын нейробиологиясы: социалдык моногамдык кемирүүчүлөрдүн көз караштары. Нейроэндокринологиядагы чек аралар. 2011;32:53–69. [КУП акысыз макала] [PubMed]
6. Liu Y, Кертис JT, Wang Z. Каптал септумдагы Vasopressin эркек талаа чычкандарынын (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience менен жуп байланыш түзүлүшүн жөнгө салат. 2001;115:910–919. [PubMed]
7. Lim MM, Young LJ. Моногамдуу прерий чычканында жуп байланыштын пайда болушунун негизинде вазопрессинге көз каранды нейрондук схемалар. Неврология. 2004;125:35–45. [PubMed]
8. Liu Y, Wang ZX. Ядро кылдат тинейджер аял тала момолойлордун менен жуп байланыш түзүүгө жөнгө салуу боюнча өз ара accumbens. Neuroscience. 2003; 121: 537-544. [PubMed]
9. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Ядродогу допамин D2 рецепторлору талаа чычкандарынын (Microtus ochrogaster) Behavioral Neuroscience үчүн социалдык байланышы үчүн маанилүү. 2000;114:173–183. [PubMed]
10. Aragona BJ, .Удаалаш. Ядро тинейджер differentially моногамдык түгөй байланыштарынын түзүү жана сактоо үчүн ортомчулук accumbens. Nat Neurosci. 2006; 9: 133-139. [PubMed]
11. Liu Y, et al. Nucleus accumbens допамин моногамдык кемирүүчүлөрдүн түрүндөгү социалдык байланыштын амфетаминден келип чыккан бузулушуна ортомчулук кылат. Улуттук илимдер академиясынын эмгектери. 2010;107:1217–1222. [КУП акысыз макала] [PubMed]
12. Keebaugh AC, Young LJ. Жыныстык жетилүүгө чейинки ургаачы чычкандардын өзөктөрүндө окситоцин рецепторунун экспрессиясынын көбөйүшү аллопаренталдык сезимталдыкты жана чоңдордо өнөктөш артыкчылыктарын калыптандырууну күчөтөт. Гормондор жана жүрүм-турум. 2011;60:498–504. [КУП акысыз макала] [PubMed]
13. Ross HE, et al. Аккумбенс ядросунда окситоцин рецепторлорунун тыгыздыгынын өзгөрүшү моногамдык жана полигамдуу чычкандардын аффилирдик жүрүм-турумуна дифференциалдык таасир этет. Neuroscience журналы. 2009;29:1312–1318. [КУП акысыз макала] [PubMed]
14. Pitkow LJ, et al. Вазопрессин рецепторунун генинин моногамдуу чычкандын вентралдык алдыңкы мээсине өтүшү менен кошулууну жана жуп-байланышты түзүүнү жеңилдетүү. Neuroscience журналы. 2001;21:7392–7396. [PubMed]
15. Веенема AH. Жашоонун алгачкы социалдык тажрыйбасы окситоцин жана вазопрессин менен жөнгө салынган коомдук жүрүм-турумду кантип өзгөртөөрүн түшүнүү үчүн. Гормондор жана жүрүм-турум. 2012;61:304–312. [PubMed]
16. Francis DD, Young LJ, Meaney MJ, Insel TR. Энелерге кам көрүүдөгү табигый түрдө пайда болгон айырмачылыктар окситоцин жана вазопрессин (V1a) рецепторлорунун экспрессиясы менен байланышкан: Гендердик айырмачылыктар. Нейроэндокринология журналы. 2002;14:349–353. [PubMed]
17. Шампан FA, et al. Эстроген кабылдагыч-α1b промотер жана эстроген кабылдагыч-α-экспрессиясынын метилизациясы менен байланышкан энелик камкордук аял тукумунун медиалдык преоптикалык аймагында. Эндокринология. 2006;147:2909–2915. [PubMed]
18. Murgatroyd C, et al. Динамикалык ДНК метилдөө программалары эрте жашоодогу стресстин туруктуу терс таасирин тийгизет. Nat Neurosci. 2009;12:1559–1566. [PubMed]
19. Weaver ICG, et al. Энелердин жүрүм-туруму боюнча эпигенетикалык программалоо. Nat Neurosci. 2004;7:847–854. [PubMed]
20. Weaver ICG, Meaney MJ, Szyf M. бойго жеткенде кайра болуп саналат тукумунун гиппокампалдык транскриптом жана тынчсыздануу-арачы жүрүм-турумуна энелик кам көрүү таасири. Америка Кошмо Штаттарынын Улуттук илимдер академиясынын эмгектери. 2006;103:3480–3485. [КУП акысыз макала] [PubMed]
21. Bonthuis PJ, Patteson JK, Rissman EF. Жыныстык кабылдоочулукка ээ болуу: хроматин ацетилдештирүү, эстроген рецептор-α жана энелик гормондор. Эндокринология. 2011;152:3172–3181. [КУП акысыз макала] [PubMed]
22. Zhong S, Fields CR, Su N, Pan YX, Robertson KD. Эпигенетикалык модификациялардын фармакологиялык бөгөт коюусу, ген экспрессиясынын профилин түзүү менен бирге, өпкө рагында аберранттык ДНК метилизациясынын жана гистон деацетилизациясынын жаңы максаттарын ачып берет. Онкоген. 2007;26:2621–2634. [PubMed]
23. Yoshida M, Horinouchi S, Beppu T. Trichostatin A жана трапоксин: хроматиндин түзүлүшү жана функциясын гистон acetylation ролу үчүн роман химиялык изилдөөлөр. Биоэсселер. 1995;17:423–430. [PubMed]
24. Monneret C. Гистон деацетилаза ингибиторлору. Медициналык химиянын европалык журналы. 2005;40:1–13. [PubMed]
25. Ross HE, et al. Ургаачы чычкандардын аффилиативдик жүрүм-турумун жөнгө салуучу окситоцин системасынын мүнөздөмөсү. Неврология. 2009;162:892–903. [КУП акысыз макала] [PubMed]
26. Жаш LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Борбордук окситоцин рецепторунун ген экспрессиясындагы түрлөрдүн айырмачылыктары: Промотерлордун ырааттуулугунун салыштырма анализи. Нейроэндокринология журналы. 1996;8:777–783. [PubMed]
27. Witt O, Deubzer HE, Milde T, & Oehme I. HDAC үй-бүлөсү: рактын тиешелүү максаттары кандай? Рак каттары. 2009;277:8–21. [PubMed]
28. Vecsey CG, et al. Гистон деацетилаза ингибиторлору CREB аркылуу эстутумду жана синаптикалык пластикалыкты жогорулатат: CBP-каранды транскрипциялык активдештирүү. Neuroscience журналы. 2007;27:6128–6140. [КУП акысыз макала] [PubMed]
29. Монси МС, Ота К.Т., Акингбаде ИФ, Хонг ES, Шафе Г.Е. Эпигенетикалык өзгөрүүлөр Коркунучтун эс тутумунун консолидациясы жана каптал Амигдаланын синаптикалык пластикасы үчүн өтө маанилүү. PLoS ONE. 2011;6:e19958. [КУП акысыз макала] [PubMed]
30. Van Lint C, Emiliani S, Verdin E. Клеткалык гендердин кичинекей бөлүгүнүн экспрессиясы гистон гиперацетилизациясына жооп катары өзгөрөт. Ген экспрессиясы. 1996;5:245–253. [PubMed]
31. Mariadason JM, Corner GA, Augenlicht LH. Кыска чынжырлуу май кислоталары менен шартталган жоон ичеги клеткасынын жетилишинин жолдорунда генетикалык кайра программалоо: Трихостатин А, Сулиндак жана Куркумин менен салыштыруу жана жоон ичеги рагынын химиялык алдын алуу үчүн тийгизген таасири. Рак изилдөө. 2000;60:4561–4572. [PubMed]
32. Halsall J, Gupta V, O'Neill LP, Turner BM, Nightingale KP. Гендер көбүнчө HDAC ингибиторлору тарабынан индукцияланган глобалдык гистон гиперацетилизациясынан корголот. PLoS ONE. 2012;7:e33453. [КУП акысыз макала] [PubMed]
33. Ito K, Adcock I. Гистонду ацетилдештирүү жана гистонду деацетилдештирүү. Молекулярдык биотехнология. 2002;20:99–106. [PubMed]
34. Molfese DL. Эпигенетика аркылуу неврологияны өнүктүрүү: Окуунун жана эс тутумдун молекулярдык механизмдери. Өнүгүү нейропсихологиясы. 2011;36:810–827. [КУП акысыз макала] [PubMed]
35. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Социалдык кошулуунун уюлдук механизмдери. Гормондор жана жүрүм-турум. 2001;40:133–138. [PubMed]
36. Hawk JD, Florian C, Abel T. Класс I гистон деацетилазалардын машыгуудан кийинки intrahippocampal бөгөт коюу узак мөөнөттүү объект жайгашкан эстутумду жакшыртат. Үйрөнүү жана эс тутум. 2011;18:367–370. [КУП акысыз макала] [PubMed]
37. Стефанко Д.П., Барретт Р.М., Ли А.Р., Реолон Г.К., Вуд М.А. HDAC бөгөт коюу аркылуу объектти таануу үчүн узак мөөнөттүү эстутумду модуляциялоо. Улуттук илимдер академиясынын эмгектери. 2009;106:9447–9452. [КУП акысыз макала] [PubMed]
38. Yang XJ, Seto E. Lysine Acetyllation: Башка Posttranslational өзгөртүүлөр менен кодификацияланган кайчылаш. Молекулярдык клетка. 2008;31:449–461. [КУП акысыз макала] [PubMed]
39. Чо ММ, ДеВрис AC, Уильямс Дж.Р., Картер CS. Окситоцин менен вазопрессиндин эркек жана ургаачы талаа чычкандарында (Microtus ochrogaster) өнөктөш каалоосуна тийгизген таасири. 1999;113:1071–1079. [PubMed]
40. Инсел ТР, Хулихан Т.Ж. Жуптарды бириктирүү үчүн гендердик механизм: моногамдык чычкандарда окситоцин жана өнөктөш артыкчылыктарын түзүү. Behavioral Neuroscience. 1995;109:782–789. [PubMed]
41. Stimson L, La Thangue NB. HDAC ингибиторлоруна клиникалык жоопторду болжолдоо үчүн биомаркерлер. Рак каттары. 2009;280:177–183. [PubMed]
42. Iannitti T, Palmieri B. Натрий Phenylbutyrate клиникалык жана эксперименталдык колдонмолор. R&Dдагы дарылар. 2011;11:227–249. [КУП акысыз макала] [PubMed]
43. Kumar A, et al. Хроматинди ремоделизациялоо - бул стриатумдагы кокаин менен шартталган пластикалыктын негизги механизми. Нейрон. 2005;48:303–314. [PubMed]
44. Шредер ФА, Лин КЛ, Крузио БИЗ, Акбарян С. Чычкандагы гистон деацетилаза ингибиторун, натрий бутиратынын антидепрессантка окшош таасирлери. Биологиялык психиатрия. 2007;62:55–64. [PubMed]
45. Manning M, et al. Вазопрессин жана окситоцин V1a, V1b, V2 жана OT рецепторлору үчүн пептиддик жана пептиддик эмес агонисттер жана антагонисттер: изилдөө куралдары жана потенциалдуу терапиялык агенттер. In: Inga DN, Rainer L, редакторлор. Мээ изилдөөдөгү прогресс. Elsevier; 2008. 473–512-бб. [PubMed]
46. ​​Витт ДМ, Инсель ТР. Тандалган окситоцин антагонисти прогестерондун аялдардын сексуалдык жүрүм-турумун жеңилдетет. Эндокринология. 1991;128:3269–3276. [PubMed]
47. Winslow JT, Хастингс N, Картер CS, Harbaugh CR, арал TR. моногамдык тала момолойлордун менен жуп байланыш борбордук гормонду үчүн ролу. Nature. 1993; 365: 545-548. [PubMed]
48. Insel T. Окситоцин – тиешелүүлүгү үчүн нейропептид: жүрүм-турумдук, рецептордук авторадиографиялык жана салыштырма изилдөөлөрдөн алынган далилдер. Психоневроэндокринология. 1992;17:3–35. [PubMed]
49. Insel T, Wang Z, Ferris C. микротин кемирүүчүлөрдүн коомдук уюштуруу менен байланышкан мээ vasopressin кабылдагыч бөлүштүрүү үлгүлөрү. Neuroscience журналы. 1994;14:5381–5392. [PubMed]
50. Hollis F, Duclot F, Gunjan A, Kabbaj M. Жекече айырмачылыктар социалдык жеңилүүнүн ангедонияга жана келемиш гиппокампындагы гистон ацетилизациясына тийгизген таасири. Гормондор жана жүрүм-турум. 2011;59:331–337. [КУП акысыз макала] [PubMed]