Ny endriky ny famokarana doka miteraka kakaine ao amin'ny D1 sy D2 dopamine receptor-izay misy ny neon-nerveur ao amin'ny nosy accumbens (2006)

Proc Natl Acad Sci US A. Feb 28, 2006; 103 (9): 3399-3404.
Navoaka tamin'ny aterineto Feb 21, 2006. doi:  10.1073 / pnas.0511244103
PMCID: PMC1413917
Neuroscience
Ity lahatsoratra ity dia cited by lahatsoratra hafa ao amin'ny PMC.

Abstract

Ny fiovaovan'ny toetran'ny psykostimulantan'ny indostrialy amin'ny dopaminoceptive ny neurons ao amin'ny nucbusus accumbens (NAcc) dia noheverina ho valin'ny fitsaboana ho an'ny adapta izay mifandray amin'ny fitondrantena mampihetsi-po maharitra. Ny NCcc dia ahitana singa roa samihafa amin'ireo neon-nify midadasika izay mampiseho avo lenta ambony na dopamine D1 na D2 receptors. Tao anatin'ity fandalinana ity dia nodinihintsika ny hamaroan'ny diera dipoavatra taorian'ny fitsaboana kôkainina efa niasa tao amin'ny D1 na D2 mpandray tsimok'aretina izay ahitana neon-nipoitra avo lenta amin'ny NAcc. Ireo fikarohana ireo dia nampiasa tebiteby transgenika izay nanambara ny EGFP teo ambany fifehezan'ny D1 na ny D2 mpandrindra mpanemotra (Drd1-EGFP na Drd2-EGFP). Taorian'ny andro 28 momba ny fitsaboana kôkaina sy ny andro 2 nialana, dia nitombo ny dindon-drivotra ny Drone1-EGFP- sy Dron2-EGFP-positive neurons. Na izany aza, ny fitomboan'ny dindon-drivotra dia tsy nisy afa-tsy tao amin'ny Drd1-EGFP-positive neurons 30 andro taorian'ny fanesorana zava-mahadomelina. Raha ny marina dia nitombo ihany koa ny fatran'ny ΔFosB hita tao amin'ny neurons Drd1-EGFP- sy Drd2-EGFP-positive taorian'ny andro 2 momba ny fidiran'ny zava-mahadomelina saingy ao amin'ny neurons Drd1-EGFP-positive taorian'ny andro fialan-tsasatra 30 androany. Ireo vokatra ireo dia maneho fa ny diplaoma mitongilana tsindraindray hita aorian'ny fitsaboana kokainina dia tsy misy afa-tsy ao amin'ny D1-receptor-containing neurons ary ny expression ΔFosB dia mifandray amin'ny fanabeazana sy / na ny fikojakojana dipoavatra ao D1 ary koa ny D2 receptor-containing neurons in NAcc.

Ny lalan'ny dopaminergic mesolimbika dia ahitana neurons ao amin'ny faritra faran'ny tegmental izay manadio ny nucleus accumbens (NAcc), tubercle olfactory, cortex prefrontal, ary amygdala (1), fa ny neurons dopaminergic nigrostriatal ao amin'ny fitrandrahana nigra (pars compacta) dia manome fiheverana miakatra ho any amin'ny dorsal striatum (2). Ny psikostimulants dia mampitombo ny fiforonan'ny dopamine ao amin'ny NAcc: kôkainina, amin'ny fanakanana ny dopamine fivoahana avy amin'ny fantsom-pirafitrasa synaptika, ary amphetamine, amin'ny fampiroboroboana ny fampidirana dopamine avy amin'ny terminal nerve (3-5). Ny fiverimberenan'ny fitantanana ny psychostimulants amin'ny fotoana fohy dia miteraka valin-kafatra amin'ny fitondran-tena (fahatsapan-tena) amin'ny fiantraikany mahery vaika amin'ireo zava-mahadomelina ireo (6-8). Ny ankamaroan'ny porofo manamarina dia manondro fa ny fiovan'ny adapta ao amin'ny faritra tegmental vegmental-ny rafitra dopaminergika NAcc no ivon'ny fanovana eo amin'ny plastika mampiavaka ny traikefa izay miteraka fihetsika mamoafady.

Ankoatra ny dopamine, ny glutamate dia ilaina amin'ny fampivoarana ny fahatsapana fihetsika ho valin'ny psychostimulants (9, 10). Ny neurons (MSNs) ao amin'ny ventral striatum dia mamela ny fijerin'ny glutamatergic amin'ny alàlan'ny boron-tsavona mialoha ny endriny izay midina eo amin'ny lohan'ny dipoavatra dendritika. Ny MSNs koa dia tanjona lehibe ho an'ireo dopaminergic axons izay midina eo amin'ny tendron'ny rindranasa (1, 11, 12). Noho izany, ny tsimokaretina dendritika amin'ny MSNs dia maneho ny efitranon'ny cellule izay ateraky ny fifindran'ny dopaminergic sy glutamatergic.

Ny Dopamine dia miasa amin'ny fametam-panafody lehibe roa, ny subfamily D1 (D1 sy D5 subtypes) ary ny subfamily D2 (D2, D3, ary D4 subtypes) (13). Ao amin'ny striatum dorsal, ny fikarohana anatomika dia nanaporofo fa ny STRIatonigral MSNs dia manana ny haavon'ny D1 receptors (miaraka amin'ny vatana P sy dynorphin), fa MSNs striatopallidal kosa dia manondro ny mpitsabo D2 (miaraka amin'ny enkephaline) (14-17). Ny fiheverana avy amin'ny NAcc dia sarotra kokoa noho ny ao amin'ny striatum dorsal, miaraka ny ampahany sy ny fototry ny NAcc manolo-tanana amin'ny faritra ambany eo amin'ny pallidum ventral ary ny faritra tegmental vegmental sy substantia nigra (18). Raha toa kosa ny mpitsabo D2 sy ny enkephaline dia avoaka amin'ny toerany amin'ny pallidum ventral, ny mpikirakira D1 sy ny vatana P dia hita fa mitovy amin'ny toerany amin'ny ventral pallidum sy ny faritra tegmental ventral (19). Ny fikarohana momba ny agonista sy ny mpanohitra izay mifidy ho an'ny D1 na D2 receptors dia mampiseho fa ireo D1 sy D2 solosaina dia takiana amin'ny fiovan'ny psychostimulant miankina amin'ny fitondran-tena (20-25). Na izany aza dia toa samy hafa ny andraikitr'ireo receptors ireo. Ohatra, ny fanentanana ireo mpanolo-tsain'ny D1 dia manenika ny kôkainina izay mikatsaka ny fampidirana cocaine sy ny cocaine mifandraika amin'ny fiarahan'ny cocaine, fa ny fanentanana ny solosaina D2 dia manampy amin'ny famerenana indray ny cocaine (26-28).

Ny tsy fitoviana amin'ny fitondran-tena mifandray amin'ny fiankinan-tsaina psychostimulant dia maharitra ela. Noho izany dia nisy ny liana be tamin'ny famantarana ny fiovan'ny zava-mahadomelina nandritry ny fotoana maharitra amin'ny molekiola sy ny endriky ny asan'ny neonalealin'ny reginina amin'ny dopamine sy glutamate (29-32). Ny fiheverana maharitra ny kôkainina na ny amphetamine dia hita fa mampitombo ny isan'ireo sampana sampana dendritika sy spines MSNs amin'ny NAcc (33-35). Ireo fiovana ara-drafitra ireo dia aseho hatrany mba hanohy hatramin'ny volana 1-3.5 aorian'ny fampiharana zava-mahadomelina farany (30, 35) ary nomena soso-kevitra ny hiova maharitra maharitra amin'ny plastika miaraka amin'ny psychotimulant.

Ny tanjon'ity fandinihana ankehitriny ity dia ny fandinihana ny fanovana ara-tsakafo kôkaine izay mampiova ny endriky ny dindritika amin'ny fametahana ny MSNs izay maneho na D1 na D2 receptors. Ao anatin'ireo fandalinana ireo, dia mampiasa totozy bakteria (BAC) ny bakteria (BAC) izay maneho EGFP eo ambany fifehezan'ny D1 (Drd1-EGFP) na D2 (Drd2-EGFP) dopamine mpanentana receptor (36). Ny vokatra dia maneho fa na dia mihabetsaka aza ny ambaratonga voalohany ao amin'ny D1 receptor-misy MSNs sy D2 receptor-containing MSNs, ny density miovaova dia tsy misy afa-tsy ao amin'ny D1 receptor-containing neurons. Ankoatr'izany dia misy fiovana mitovy amin'ny fanehoana ny trosan'ny transcription ΔFosB, izay milaza fa ny ΔFosB dia mety ho tafiditra amin'ny famolavolana sy / na ny fikojakojana ny dendritika ao amin'ny D1 ary koa ny D2 receptor-containing neurons in NAcc.

Results

Fandinihana ny MSNs amin'ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP BAC Transgenic Mice.

Ny endriky ny toetran'ny MSN avy amin'ny dorsal sy striatum ventral ao amin'ny Drd1-EGFP na Drd2-EGFP BAC dia mifototra amin'ny alalan'ny fanadihadiana ny fomba fiteny GFP (36). Ny fanehoana ny fahasamihafana amin'ny GFP amin'ny MSNs of striatum dorsal dia mitovy amin'ny an'ny endogenous D1 na D2 receptors, (36). Nanadihady ny fomba fitenin'ny GFP amin'ny NAcc amin'ny Drd1-EGFP na ny Drd2-EGFP (Aviavy. 1a ary b). Na dia ≈58% ny neurons amin'ny NAcc dia maneho ny GFP amin'ny tazomoka Drd1-EGFP (Aviavy. 1a), ≈48% ny neurônina amin'ny NAcc dia maneho ny GFP amin'ny tazan'ny Drd-2-EGFP (Aviavy. 1b). Ny MSN dia maneho ny 90-95% ny neurons rehetra amin'ny NAcc (12, 37). Ny solosaina D1 dia tsy miseho afa-tsy amin'ny MSNs, ary ny solosaina D2 dia miseho amin'ny MSNs sy amin'ny interneurons cholinergic, izay maneho ny 1-3% ny neurons striatal (37). Raha jerena ireo valiny ireo, ny vokatra dia maneho fa, minitra kely, ≈10-15% amin'ny MSNs amin'ny NAcc dia azo inoana fa maneho ny solosaina D1 sy D2.

1. 

Fandinihana ny MSNs ao amin'ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP. (a ary b) Ny voan'ny ati-doha nify avy NAcc of Drd1-EGFP (a) na Drd2-EGFP (b) Ny tadidiana transgenika BAC dia tsy voavolavola ho an'ny GFP sy NeuN (ho toy ny marika amin'ny ankapobeny). Ireo sary mihetsika dia mampiseho, amin'ny mavo, ny kolokaly ...

Famakafakana ny fitsinjarana dendritika ao amin'ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP Mice.

Ny fampisehoana GFP ao amin'ny tazomoka Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP dia nahasoa ny manala ny sela amin'ny sela. Na dia izany aza, ny signal GFP amin'ny dendrites sy ny andrin-dendritika dia somary saro-bidy mba hamela ny fandinihan'izy ireo aorian'ny fitsaboana amin'ny antibody anti-GFP. Ny fampiasana ranon-tsarin'ny fluorescent dia nampiasaina tamin'ny antsipirihany mba hampisehoana ny populaire neuronal amin'ny fomba haingana sy mandaitra (38). Azo ampiasaina amin'ny fampiasana an'io fomba io ny neurônika manontolo, ary toa mitovy amin'ny Golgi-Cox ny tazo. Mba hamakafakanana ny morphologie dendritique ny neurons amin'ny NAcc, ny fivalom-bikam-pandrefesana dia nofaritana tamin'ny lipophile fluorescence lamosina 1,1'-diotadecyl-3,3,3 ', 3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) amin'ny fampiasana basy iray. Ohatra iray momba ny MSI nofatorana DiI Aviavy. 1c. Ao anatin'ireo fepetra ampiasaina, dia matetika isika dia mahita karazana neurônina tsy misy dendrites mihoatra ny hafa avy amin'ny neurons hafa. Amin'ny alàlan'ny fanamafisana avo kokoa dia azo tsidihina ny morphologie dendritika, anisan'izany ny andiam-panodikana dendritika (Aviavy. 1d).

Avy eo izahay dia nampiasa marika DiI sy ny immunohistochemistry ho an'ny GFP na Drd1-EGFP na Drd2-EGFP tetikasa tselatra, izay azo natao tamin'ny fampiasana fihenam-bidy marefo ho an'ny permeabilization amin'ny tissue (jereo fomba). Amin'ny alalan'ny fampitahana ny diarin'ny Dii sy ny fitenin'ny GFP amin'ny selan'ny MSNs dia azontsika atao ny manavaka ny neurons DiI- sy GFP-positive na DiI-positive sy GFP-negatif ao Drd1-EGFP (Aviavy. 2a) na Drd2-EGFP (Aviavy. 2b). Ho an'ireto fikarohana manaraka ireto dia nodinihintsika ny morphologie dendritika amin'ny siramamy DiI sy GFP-positive ihany avy amin'ny tazomoka Drd1-EGFP na Drd2-EGFP.

2. 

Famakafakana ny tsindrona dendritika ao amin'ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP. Ny neurons amin'ny NAcc na môtô Drd1-EGFP (a) na môtô Drd2-EGFP (b) dia nosoratana voalohany tamin'ny DiI (mena) ary avy eo dia nanaiky ny immunohistochemistry mampiasa antibody anti-GFP (EGFP, maitso). ihany ...

Fitsaboana nahitana kôkaine mahazatra amin'ny fitomboan'ny raboka ambony amin'ny MSNs amin'ny fitenenana na Drd1-EGFP na Drd2-EGFP.

Ny môtera Drd1-EGFP na Drd2-EGFP dia nampidirina imbetsaka tamin'ny kôkainina (30 mg / kg) na saline nandritra ny herinandro efatra naharitra (jereo fomba). Roa andro (2WD) na 30 andro (30WD) taorian'ny fitsaboana farany, dia notontosaina ny marika amin'ny DiY sy ny immunohistochemistry araka ny voalaza etsy ambony. Ny fikarohana natao teo aloha dia nitatitra fa nitombo ny fihenan-tsokosoko tamin'ny fitsaboana nihatra tamin'ny amphetamine tamin'ny dendrite lavitra, fa tsy proximal ny MSNs amin'ny NAcc (35). Noho izany, dia voafetra ny fandalinantsika amin'ireo dendrites faramparany (izany hoe ireo sampana faharoa na fahatelo), anisan'izany ireo faritry ny faritra. Rehefa nodinihina tao amin'ny 2WD, dia hita fa nihabetsaka ny dindon-drivotra vokatry ny MSNs Drd1-EGFP-positive (128% ny vondrona saline) (Aviavy. 3a ary c) ary farafaharatsiny ao amin'ny neurons Drd2-EGFP-positive (115% amin'ny vondrona saline) (Aviavy. 3 b ary d). Taorian'ny 30WD, dia nitombo ny dindon-tsiram-bolam-ponenana tao amin'ny neurons Drd1-EGFP-positive (118% ny fanaraha-maso ny solika) (Aviavy. 3 a ary c) fa tsy amin'ny neurons Drd2-EGFP-positive (Aviavy. 3 b ary d).

3. 

Ny kôkainina mahatsikaiky dia mampitombo ny hamafin'ny habaka ao amin'ny MSDs Drd1-EGFP- na Drd2-EGFP-positive MSNs amin'ny NAcc. (a ary b) Drd1-EGFP (a) na Drd2-EGFP (b) Ny totozy dia voan'ny saline (Sal) na cocaine (Coc, 30 mg / kg) mandritra ny herinandro 4. Ny kitapo 2WD na 30WD dia novaina ...

Ny fombam-pitomboana ireo andrin-tsokajy dia manova ny halavany sy ny sakan'ny sakam-pasika. Noho izany, dia sokajintsika ho fanodikodinam-panafody ho any amin'ny efam-pandrefesana efatra (kisarisary, holatra, matevina ary filopodia) ao amin'ny 2WD avy amin'ny cocaine (data tsy misy). Ny habetsaky ny karazana holatra (119.7 ± 4.0%, P <0.01) sy hazondamosina manify (120.0 ± 3.4%, P <0.01) dia nitombo tamin'ny fitsaboana kôkainina tao amin'ny Drd1-EGFP-positive MSNs, fa ny hakitroky ny kofehy (182.4 ± 21.6%, P <0.05) sy hazondamosin'ny holatra (122.5 ± 5.0%, P <0.01) dia nitombo tao amin'ny MSNs Drd2-EGFP-positive. Tsy nisy fiakarana lehibe eo amin'ny tsilo mikitroka amin'ny neurôdra tsara-Drd1-EGFP na ny hazondamosina manify ao amin'ny neurons Drd2-EGFP-positive.

Ny kôkainina mahatsiravina dia mampiharihary ny ΔFosB expression ao amin'ny Drd1-EGFP- na Drd2-EGFP-Positive MSNs amin'ny NAcc.

ΔFosB dia mpikambana ao amin'ny Fos family of transcription factors. Raha toa ka miteraka haingana sy miseraseran'ny isa ao amin'ny NAcc ny fitantanana ny kôkaina, dia mampitombo ny haavon'ny ΔFosB ny famerenana indray ny cocaine. Ankoatra izany, ny fitomboan'ny fivoahana ΔFosB dia mitohy ao amin'ny NAcc mandritra ny herinandro maromaro aorian'ny fialany amin'ny fisondrotry ny zava-mahadomelina ary nasaina handray anjara amin'ny fanaraha-maso maharitra ny fitenenana, na dia tapaka aza ny fitsaboana.29, 39, 40).

Mba handinihana ny fampidirana ny ΔFosB amin'ny NAcc avy amin'ny Drd1-EGFP na Drd2-EGFP manaraka ny fitsaboana kôkaina, dia nandinika ny fosabana FosB sy GFP isika tamin'ny alalan'ny dika mitovy (Aviavy. 4 ary table 1) Ny antibody antibody anti-FosB dia manaiky ny endriny rehetra amin'ny FosB, saingy mihevitra isika fa ny immunostain mitombo dia manondro ΔFosB (jereo fomba ho an'ny adihevitra misimisy kokoa). Ao amin'ny tazo azo avy amin'ny saline, 16% ny neurons Drd1-EGFP-positive ary 15% ny neurons Drd2-EGFP-positive dia naneho ny tsy fahampian-tsakafo FosB niaraka tamin'ny hafanam-be (Aviavy. 4 a ary b ary table 1). Ny fitsaboana kôkainina efa nodinihan'ny 2WD dia nahitana fitomboana lehibe amin'ny isan'ny neurons Drd1-EGFP-positive izay niara-niasa tamin'ny ΔFosB (55% ny neurons GFP-positive) (Aviavy. 4c ary table 1). Ny fitomboana kely kokoa, saingy mbola manan-danja amin'ny fisehoan-teny ΔFosB dia hita ao amin'ny neurons Drd2-EGFP-positive (25% ny neurons GFP-positive) (Aviavy. 4d ary table 1). Raha ny marina, ny fiovan'ny ADN dia nitazona ny neurons Drd1-EGFP-positif (46% ny neurons GFP-positive) fa tsy amin'ny neurons Drd2-EGFP-positive (15% ny neurons GFP-positive) taorian'ny 30WD (Aviavy. 4 e ary f ary table 1). Mariho fa ny fitomboan'ny ΔFosB dia hita ao Aviavy. 4f dia tonga amin'ny neurons Drd2-EGFP-negatif.

4. 

Ny kôkainina mahatsiravina dia manosika ny ΔFosB amin'ny MSDs Drd1-EGFP- na Drd2-EGFP-positive MSNs amin'ny NAcc. Drd1-EGFP (a, c, ary e) na Drd2-EGFP (b, d, ary f) ny totozy nohajaina tamin'ny saline na kôkainina mahatsiravina araka ny voalaza Aviavy. 3. 2WD (c ary d) na 30WD (e ary ...
Table 1. 

Ny habetsaky ny neurons EGFP-positive milaza ny ΔFosB

Discussion

Ny fanindrahindrana maharitra maharitra amin'ny dopaminergic neurotransmission dia heverina fa fitondrantena mihetsiketsika mifandray amin'ny fanafody psychostimulant. Amin'ny ankapobeny, ny fitombon'ny psikostimulant-induced amin'ny dindritika ny dindritika dia ny MSNs amin'ny NAcc dia noheverina ho mifamatotra amin'ny famerenana indray ny fifandraisana amin'ny synaptic (30). Ny NCcc dia ahitana ny dika roa miavaka amin'ny MSN izay maneho avo ny D1 na D2 receptors Dopamine. Ao anatin'ity fandalinana ity dia nodinihintsika ny hamaroan'ny dindon-damosina amin'ny D1 na ny D2 mpandray ny MSNs amin'ny NAcc taorian'ny fitsaboana kôkainina. Ny vokatry ny vokatra dia mampiseho fa na dia mihabetsaka aza ny dindry dia mipoitra ao amin'ny D1 receptor-misy MSNs sy D2 receptor-containing MSNs, ny fiovaovana dipoavatra dia tsy misy afa-tsy ao amin'ny D1-receptor-containing neurons. Ankoatra izany, mahita fomba fiovana mitovy amin'ny fanehoana ny fepetra famaritana ΔFosB ao amin'ny D1 sy D2 mpandray ny MSNs.

Ireo fikarohana ireo dia nampiasa bisex transgenic BAC izay maneho ny GFP amin'ny famaritana manokana MSNs eo ambany fifehezan'ny D1 na D2 mpandrindra mpanemotra. Ankoatr'izay dia namolavola dika-dian-dàlana izahay izay nanambatra ny immunohistochemistry ho an'ny GFP miaraka amin'ny fametavetan'ny ballistes ny neurons mampiasa DiI. Ny fikarohana taloha dia nampiasa ny fomba fiasa Golgi-Cox mba hamakafakanana ny vokatry ny psychostimulants amin'ny dianjato (34), ary ny fomba fiasa DiI nampiasaina teto dia namokatra vokatra izay azo oharina amin'ny habetsahany. Noforoninay ny fomba fanoratana dika mitovy satria ny fàfana Golgi dia tsy mifanaraka amin'ny immunohistochemistry. Ny fanaovana firaisana ara-nofo dia matetika mitaky ny fanalefahana amin'ny tavy amin'ny fanadiovana, ny dingana izay matetika dia mitarika ny solubilization ny lipophilic ny loko avy amin'ny membrane (38). Na izany aza, amin'ny fandalinana amin'izao fotoana izao, ny fitsaboana GFP dia tsy mitaky be loatra amin'ny fahadiovana amin'ny fahabangan'ny fibreabilitation ka azo ampiasaina miaraka amin'ny fanoritana lipophile amin'ny lipophile. Ny fomba fanoratana dika mitovy dia tokony ho tena ilaina amin'ny fandinihana ny fanovana ara-tsôkôlà eo amin'ny tsindrona dendritika, ohatra raha ampiasaina amin'ny famakafakana ny tadin'ny tadin'ny transgenic BAC izay aseho amin'ny GFP ao amin'ny populaire ny neurons ao amin'ny cortex (36).

Na dia misy aza ny adihevitra hafa, dia inoana fa ny D1 sy ny D2 receptors dia faritana amin'ny ankapobeny amin'ny sehatra mivantana (striatonigral) sy indirect (striatopallidal) ho an'ny neurons ho an'ny virtoaly, (17, 41). Ny endriky ny fisehoana voalohany momba ny lokan'ny GFP ao amin'ny tazomoka Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP dia nifanaraka tamin'io famaranana io (36). Ankoatr'izay, ny fandalinantsika ny isan'ny GFP-positive neurons ao NAcc avy amin'ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP dia mifanaraka amin'ny fehin-keviny fa 」50% amin'ny MSNs dia manonona afa-tsy D1 receptors ihany, izay ≈35-40% manonona afa-tsy D2 receptors, ary ny ≈10-15% dia miara-miasa amin'ny mpitsidika D1 sy D2. Io fiantraikan'ny fiaraha-miombon'antoka io dia mitovitovy amin'ny fandinihan'ny fandalinana striatum dorsal izay mampifangaro ny fandrefesana ny rafi-pandrefesana tokana miaraka amin'ny teknolojian'ny RT-PCR mba hisorohana sy hanamafisana ny mRNAs (≈17% coexpression of enkephaline and substance P) (42). Tsara homarihina fa ny fandalinantsika amin'izao fotoana izao dia tsy mamaly ny fanontaniana maneho ny hevitr'ireo receptors D3, D4, sy D5, ary tsy adinon'izy ireo amin'ny adihevitra ambany amin'ny solosaina D1 ao amin'ny MSN izay maneho avo ny D2 solosaina na ny mifamadika amin'izany.

Maro ireo fikarohana natao teo aloha no nandinika ny famelabelarana ny fisainan'ny Fostoxulant-induced Fos sy ny anjara asan'ny D1 sy D2 receptors (43-45). Ireo fikarohana ireo dia nanohana ny fehin-kevitra fa ny Fos sy ny ΔFosB famindrana dia afahana amin'ny fampiatoana ny solosaina D1. Na dia izany aza, ny toetoetran'ny fôsily amin'ny fosafosa Fos dia voakasiky ny tontolon'ny tontolo iainana izay ampanaovina fanafody psychostimulant (46, 47). Ohatra, ny amphetamine na ny kôkainina atolotra ao amin'ny tranom-bahiny dia miteraka akaiky ny fototarazo vao haingana (ao anatin'izany ny Fos) ao amin'ny sela P-positive sela izay miara-miasa amin'ny solosaina D1. Mifanohitra amin'izany, ireo zava-mahadomelina ireo dia mety hiteraka fisehoan-kevitra ao amin'ny D1 sy ny D2 mpandray ny MSNs raha ampidirina amin'ny tontolo vaovao. Ny protocola ampiasaina amin'ny fandalinantsika amin'izao fotoana izao dia tsy midika fa ny fampidirana rongony dia mifototra amin'ny tontolo iainana vaovao. Na izany aza dia tsy afaka manapaka ny karazan-tsiansa miankina amin'ny ati-tany izay tompon'andraikitra amin'ny fitenin'ny ΔFosB ao amin'ny receptor D2-misy MSNs.

Ny mampiavaka ny vokatra amin'izao fotoana izao dia ny lamina mifandraika amin'ny fihenan-tsakobaky ny hazondamosina ary ny expression ΔFosB. Mihabetsaka ny dindon-drivotra ary ny expression ΔFosB dia nitranga tamin'ny MSNs naneho ny Drd1-EGFP sy Drd2-EGFP. Na izany aza, ireo fiovana ireo dia tsy misy afa-tsy ao amin'ny D1 receptor-containing neurons. Ny fanazavana iray mety ho an'ny fanamarihana izay nitombo ny haavon'ny fivontosana ary ny expression ΔFosB dia hita fa hita ao amin'ny D2 receptor-containing neurons dia ny miteraka kely amin'ny MSNs izay miara-miasa amin'ny D1 sy D2 dopamine receptors. Noho izany, ny toetran'ny fitomboan'ireny fitomboana ireny dia mety misy ifandraisany amin'ny vokatra fanoherana ataon'ny D2 fampidiran-tserasera amin'ny D1-miankina amin'ny lalan'ny signaling (48). Ny mahaliana dia ny fanovana ny dipoavatra sy ny ΔFosB dia mety hiverimberina, izay mety haneho ny fahaiza-manaon'ny D2 mpandray an-tsoratra miankina amin'ny fahazoan-dàlana hizarana ny fahamarinan'ny ΔFosB.

Ny fandinihana fa misy fiovana miovaova amin'ny fitenin'ny ΔFosB sy ny dktam-boaloboka dia mifanaraka amin'ny hevitra hoe ny ΔFosB dia tafiditra ao anatin'ny fananganana voalohany ary ny fikolokoloana ny dendrina dendritika ao amin'ny recepteur D1 izay misy neurons ao NAcc. Ny famoahana ny ΔFosB dia voafehin'ny D1 / DARPP-32 / PP1-miankina amin'ny lalan'ny signaling ao amin'ny MSNs (49). Fanadihadiana marobe no nampiseho fa ΔFosB dia manana anjara toerana manan-danja eo amin'ny fihetsika mahafa-po sy mivezivezy eo amin'ny fiarahamonim-pahasalamana (39), azo inoana fa mitarika ny fanehoana ny fototarazo maromaro izay ahitana ny mpandidy ny neurotransmitter, manamarina proteinina, ary proteinina mifandray amin'ny fifehezana ny morphologie neuronal (50). Na izany aza, ny toetran'ny molekiolan'ny ankamaroan'ny kôkaine dia tsy fantatra hatramin'izao. Ny fikarohana natao teo aloha dia nampiseho fa ny fampidirana intraaccumbal ny rsquotovinine Cdk5 inhibitor dia mihamitombo ny cocaine izay miteraka fitomboan'ny dindo (51). Ankoatra izany, Cdk5 dia sehatra taribidin'ny ADN ho an'ny ΔFosB ary tafiditra amin'ny fanovana ara-pananatrarana izay mifandraika amin'ny fitsaboana kôkainina (52). Noho izany, ny fanovana eo amin'ny phosphorylation Cdk5 miankina dia mikarokaroka izay mahatonga ny voan'ny kôkaine mipetaka sy / na ny toeran'ny otrikaretina. PAK (53), β-catenin (54), PSD-95 (55), ary spinophiline (56) dia manohana ny Cdk5 ary izy rehetra dia tafiditra amin'ny fanaraha-maso ny morphogenesis ny hazon-damosina (57-60). Ny endriny hafa amin'ny karazam-panafody hafa sy ny Cdk5 hafa ao anaty voalavo dia hanantena ny fomba fiasa mifehy ny famolavolan'ny psykostimulants.

fomba

Animals.

Ny totozy mitondra entana EGGP iray eo ambany fifehezan'ny D1 na D2 receptors DXNUMX dia novolavolain'ny tetikasa transgenic Gensat BAC (36). Ny totozy nampiasaina tamin'io fandinihana io dia 4-5 herinandro efa hatry ny ela ary tao amin'ny background-n'i Swiss-Webster. Ny mice dia voatazona ao amin'ny 12: 12-h famantaranandro maivana sy maizina ary napetraka ao anaty vondrona 2-5 miaraka amin'ny sakafo sy rano misy ny ad libitum. Ny tatitra rehetra momba ny biby dia nifanaraka tamin'ny National Institutes of Guide to Health Care momba ny fikarakarana sy ny fampiasana ny biby laboratoara ary nankatoavin'ny Komitim-piaraha-miasa momba ny fiompiana biby fiompy sy fambolena ao Rockefeller.

Drug Treatment.

Ny fitsaboana kokainan'ny kôkainina (30 mg / kg, isan'andro) dia nitatitra mba hampitombo ny fiovaovan'ny MSNs amin'ny tendrony sy ny akoran'ny NAcc avy amin'ny rat, fa ny doka ambany kokoa (15 mg / kg) ny akorandriaka (61). Noho izany dia nampiasa ny doka avoakan'ny kôkainina izahay mba hampindrana ny fanovana amin'ny fomba ofisialy amin'ny lafiny roa amin'ny NAcc. Ny misea dia nahazo fitsaboana (IP) of 30 mg / kg cocaine-HCl (na saline) isan'andro ho an'ny andro 5 andro manaraka, arahin'ny andro tsy misy fialan-tsasatra 2, ary naverina averina io herinandro io mandritra ny herinandro 4. Natao tao anaty tranom-bahinin'ny tokantrano ny injections. 2WD na 30WD, ny taolam-pandaminana dia novaina ho diarin'ny DiI sy / na immunohistochemistry.

Ballistic Labeling with the Fluorescent Dye DiI.

Ny misea dia nopetahana tamin'ny pentobarbital 80 mg / kg ary nopotserina tamin'ny alàlan'ny 5 ml of PBS, ary avy eo dia nalaina avy amin'ny 40 ml 4% paraformaldehyde ao PBS (20 ml / min). Nesorina haingana avy tao amin'ny karandoha ny atidoha ary napetraka tao amin'ny 4% paraformaldehyde ho an'ny 10 min. Ny felam-boninkazo (100 μm) dia nofaritana tamin'ny lamosin'ny lantihy amin'ny fluorescent DiI (Molecular Probes) araka ny voalaza ao amin'ny ref. 38. Ny endri-tsoratra Diiam-pifandraisana sy ny immunochistochemistry dia nampivelatra miaraka amin'ny fihenan-tsakafo vitsivitsy. Ny fizarana dii-marika dia navela hizara amin'ny 0.01% Triton X-100 ao amin'ny PBS ho an'ny 15 min ary avy eo dia nidiran'ny 0.01% Triton X-100 sy 10% sanda goat normal ao PBS ho an'ny 1 h mba hampihenana ny mari-pamantarana tsy voafaritra. Ny fizarana ho an'ny tissue dia nampidirina miaraka amin'ny 1% normalized goat serum / 0.01 Triton X-100 sy anti-GFP antibody (Abcam, Cambridge, MA) ho an'ny 2 h amin'ny hafanana amin'ny efitra fandroana, ary voasasa ao anaty 1: fanesorana ny FITC- antibody conjugated secondary (Molecular Probes). Ny fizarana dia napetraka eo amin'ny fitohizan'ny mikrosopika ary nopetahana amin'ny fitaovana miditra. Ny fomba fanaovana fametahana ballist dia namela ny fanadihadihana amin'ny antsipiriany momba ny rafitra dendritika, ary ny vokatra azo dia nahitana kalitao sy quantitatively raha oharina tamin'ny fandalinana teo aloha tamin'ny fampiasana ny fomba fametrahana ny Golgi-Cox ao amin'ny tsibon'ny ati-doha34). Na izany aza, raha oharina amin'ny fandalinana teo aloha, dia mahalana dia tsikaritra ny tsiranoka roapolo ao amin'ny Dié-neurons voapetaka. Io fahasamihafana io dia mety ho vokatry ny fahatsapana ny fomba fikarakarana na ny fandikana ny mozika (fianarana) mifanohitra ny ratin'ny tazo (34).

Immunohistochemistry.

Nohazavaina ny biby ary nofofohana araka izay voalaza etsy ambony. Nesorina ny masera ary najanona tamin'ny 4% paraformaldehyde tamin'ny 4 ° C nandritra ny alina. Ny atidoha dia nafindra tao amin'ny 30% sucrose ao amin'ny vahaolana PBS ho an'ny cryoprotection. Ny fizarana Coronal (12 μm) dia nopetahana tamin'ny mikrora maivana maitso (Leica) ary avy eo novaina ho an'ny immunohistochemistry. Ny fizarana siramamy dia navotsotra tao amin'ny 0.3% Triton X-100 ao amin'ny PBS ho an'ny 15 min ary nanalefaka indroa tao amin'ny PBS. Ny fizarana dia novosaina tao amin'ny 10% serum-goat serum ao PBS ho an'ny 1 h ao 37 ° C, nipoitra tamin'ny antibody voalohany (navotsaina tamin'ny serine goat 1 ao amin'ny PBS) tamin'ny alina tao 4 ° C, ary avy eo nanalefaka tao amin'ny PBS ary nidona tamin'ny sekoly ambaratonga faharoa Antikôla ho an'ny 1 h amin'ny 37 ° C. Ny antibody manaraka dia nampiasaina: Anti-Pan-FosB (SC-48, 1: 500, Santa Cruz Biotechnology), anti-NeuN (Chemicon), anti-GFP, anti-GFP conjugated IgG, and rhodamine- ny konjugated anti-mouse IgG (Molecular Probes). Ho an'ny mari-pamantarana telo (ΔFosB, NeuN, ary GFP), ny fizarana ny atidoha dia nalaina voalohany tamin'ny antibody antibody antibody anti-NeuN anti-pan ary antibody anti-NeuN ary avy eo dia niterain'ny antibody faharoa (rhodamine-conjugated anti-babbit IgG sy cyan-conjugated anti-mouse IgG ). Ny fizotry ny atidoha indroa dia voatsindry noho ny tsy fahampian'ny GFP mampiasa ny teknolojia famantarana Zenon (Zenon Alexa Fluor 488, Molecular Probes). Ny antibody anti-pan-FosB dia natsangana ho any amin'ny ambaratonga N an'ny FosB ary manaiky ΔFosB sy FosB feno (62). Araka ny fikarohana natao vao haingana izay nampiseho fa ΔFosB, fa tsy FosB na hafa fiantrana mifandraika amin'ny Fos dia voambara mialoha ny fitsaboana kôkainina, dia mihevitra isika fa ny fihenan'ny fitomboan'ny tsy fahampian-tsakafo dia mampiseho ny fanehoana tsy mendrika ny ΔFosB. Na izany aza, tsy fantatra ny famantarana momba ny signal FosB tsy mitongilana hita ao amin'ny totozy natsangana. Statistiques analyse in table 1 nampiasa ny mpianatra t fitsapana.

Dendritique Analysis Spine.

Ny MSNs tsirairay ao amin'ny NAcc dia nofinidy ho an'ny fanadihadin-tsakafo miorina amin'ny marimaritra maromaro. (i) Nisy fifandonana kely na tsy nisy nifandraisany tamin'ny sela hafa nomena mba hahazoana antoka fa tsy hikorontana ny fizotry ny sela samihafa. (ii) Faritra farafahakeliny telo fara-fahakeliny tokony ho hita amin'ny sela hampiasaina ho an'ny fanadihadiana. (III) Distite distal (terminal dendrites na akaiky ny terminal dendrite) no nojerena. Ny dendrites avy amin'ny MSN roa ao anaty sy ny akoron'ny NAcc dia nohadihadiana. Na dia nahatsikaritra MSN kely aza (spiny type II) izahay, dia tsy nandinika afa-tsy MSN (spiny type I) ihany. Mba hikajiana ny hakitroky ny hazondamosina, ny halavan'ny dendrite (> 20 μm ny halavany) dia nalaina tamin'ny alàlan'ny fampiasana mikraoskaopy confocal (Zeiss LSM 510) miaraka amin'ny solomaso fanitrihana solika (× 40). Ny sary dendrite rehetra dia nalaina samy hafa z ny halavirana (0.5-1 μm fandalinana lalina) mba handinihana ny morphologie ny dendritika. Ny fandrefesana rehetra dia natao tamin'ny rindrambaiko fanadihadiana metamorph (Universal Imaging, Downingtown, PA). Ny fandalinana statistika dia nampiasa ny fitsapana Kolmogorov-Smirnov.

Ny fitrandrahana avy amin'ny dendrites dia sokajy ho karazany efatra mifototra amin'ny halavany araka izay voafaritra ao anaty refs. 63 ary 64. Ny protrusions kilasy 1, izay antsoina koa hoe protuberances strawby, dia <0.5 μm ny halavany, tsy nanana lohan-damosina lehibe, ary toa tsy nisy hatoka; ny kilasy 2, na ny hazondamosina miendrika holatra, dia teo anelanelan'ny 0.5 sy 1.25 μm ny halavany ary niavaka tamin'ny tendany fohy sy lohan-damosina lehibe; ny kilasy 3, na ny hazondamosina manify, dia eo anelanelan'ny 1.25 sy 3.0 μm ary misy hatoka hazokely lavalava misy loha kely; kilasy 4, na fanitarana filopodial, dia protrusions lava filamentous izay tsy nanana lohan'ny hazondamosina azo zahana.

Fankasitrahana

Ity asa ity dia tohanan'ny United States Health Service Grant DA10044 (ho an'ny PG sy ACN) ary ny The Simons Foundation, ny Peter J. Sharp Foundation, ny Picower Foundation ary ny FM Kirby Foundation.

fanafohezan-teny

  • NAcc
  • nucleus accumbens
  • MSN
  • ny neuron
  • Bac
  • chromosome amin'ny artificial bacterium
  • Drd1
  • dopamine receptor D1 promoter-driven
  • Drd2
  • dopamine receptor D2 promoter-driven
  • DiI
  • 1,1'-diotadecyl-3,3,3 ', 3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
  • 2WD
  • 2 andro aorian'ny fitsaboana farany
  • 30WD
  • 30 andro aorian'ny fitsaboana farany.

fanamarihana ambany pejy

 

Fifandirana ny fanambarana lietna: Tsy misy fifandonana voalaza.

References

1. Totterdell S., Smith ADJ Chem. Neuroanat. 1989, 2: 285-298. [PubMed]
2. Smith Y., Bevan MD, Shink E., Bolam JP Neuroscience. 1998, 86: 353-387. [PubMed]
3. Heikkila RE, Orlansky H., Cohen G. Biochem. Pharmacol. 1975, 24: 847-852. [PubMed]
4. Ritz MC, Lamb RJ, Goldberg SR, Kuhar MJ Science. 1987, 237: 1219-1223. [PubMed]
5. Nestler EJ Trends Pharmacol. Sci. 2004, 25: 210-218. [PubMed]
6. Kalivas PW, Stewart J. Brain Res. Rev. 1991; 16: 223-244. [PubMed]
7. Pierce RC, Kalivas PW Brain Res. Rev. 1997; 25: 192-216. [PubMed]
8. Robinson TE, Berridge KC Annu. Rev. Psychol. 2003, 54: 25-53. [PubMed]
9. Wolf ME, Khansa MR Brain Res. 1991, 562: 164-168. [PubMed]
10. Vanderschuren LJ, Kalivas PW Psychopharmacology. 2000, 151: 99-120. [PubMed]
11. Sesack SR, Pickel VMJ Comp. Neurol. 1992, 320: 145-160. [PubMed]
12. Smith AD, Bolam JP Trends Neurosci. 1990, 13: 259-265. [PubMed]
13. Sibley DR, Monsma FJ, Jr. Trends Pharmacol. Sci. 1992, 13: 61-69. [PubMed]
14. Beckstead RM, Cruz CJ Neuroscience. 1986, 19: 147-158. [PubMed]
16. Gerfen CR, Young WS, III Brain Res. 1988, 460: 161-167. [PubMed]
16. Gerfen CR Trends Neurosci. 2000, 23: S64-S70. [PubMed]
17. Gerfen CR, Engber TM, Mahan LC, Susel Z., Chase TN, Monsma FJ, Jr., Sibley DR Science. 1990, 250: 1429-1432. [PubMed]
18. Zahm DS Neurosci. Biobehav. Rev. 2000; 24: 85-105. [PubMed]
19. Lu X.-Y, Ghasemzadeh MB, Kalivas PW Neuroscience. 1998, 82: 767-780. [PubMed]
20. Koob GF, Le HT, Creese I. Neurosci. Lett. 1987, 79: 315-320. [PubMed]
21. Woolverton WL, Virus RM Pharmacol. Biochem. Behav. 1989, 32: 691-697. [PubMed]
22. Bergman J., Kamien JB, Spealman RD Behav. Pharmacol. 1990, 1: 355-363. [PubMed]
23. Mpitantana an'i Epping-Jordan, Markou A., Koob GF Brain Res. 1998, 784: 105-115. [PubMed]
24. Caine SB, Negus SS, Mello NK, Bergman JJ Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 291: 353-360. [PubMed]
25. De Vries TJ, Cools AR, Shippenberg TS NeuroReport. 1998, 9: 1763-1768. [PubMed]
26. Self DW, Barnhart WJ, Lehman DA, Nestler EJ Science. 1996, 271: 1586-1589. [PubMed]
27. Khroyan TV, Barrett-Larimore RL, Rowlett JK, Spealman RDJ Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 294: 680-687. [PubMed]
28. Allweireldt AT, Weber SM, Kirschner KF, Bullock BL, Neisewander JL Psychopharmacology. 2002, 159: 284-293. [PubMed]
29. Nestler EJ Nat. Rev. Neurosci. 2001, 2: 119-128. [PubMed]
30. Robinson TE, Kolb B. Neuropharmacology. 2004, 47: 33-46. [PubMed]
31. Kalivas PW Curr. Opin. Pharmacol. 2004, 4: 23-29. [PubMed]
32. Hyman SE, Malenka RC Nat. Rev. Neurosci. 2001, 2: 695-703. [PubMed]
33. Robinson TE, Kolb BJ Neurosci. 1997, 17: 8491-8497. [PubMed]
34. Robinson TE, Kolb B. Eur. J. Neurosci. 1999, 11: 1598-1604. [PubMed]
35. Li Y., Kolb B., Robinson TE Neuropsychopharmacology. 2003, 28: 1082-1085. [PubMed]
36. Gong S., Zheng C., Doughty ML, Losos K., Didkovsky N., Schambra UB, Nowak NJ, Joyner A., ​​Leblanc G., Hatten ME, sy al. Nature. 2003, 425: 917-925. [PubMed]
37. Zhou FM, Wilson CJ, Dani JAJ Neurobiol. 2002, 53: 590-605. [PubMed]
38. Grutzendler J., Tsai J., Gan WB. 2003, 30: 79-85. [PubMed]
39. Kelz MB, Chen J., Carlezon WA, Jr., Whisler K., Gilden L., Beckmann AM, Steffen C., Zhang YJ, Marotti L., Self DW, et al. Nature. 1999, 401: 272-276. [PubMed]
40. Nestler EJ Neuropharmacology. 2004, 47: 24-32. [PubMed]
41. Le Moine C., Bloch BJ Comp. Neurol. 1995, 355: 418-426. [PubMed]
42. Surmeier DJ, Song WJ, Yan ZJ Neurosci. 1996, 16: 6579-6591. [PubMed]
43. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M., Nestler EJJ Pharmacol. Exp. Ther. 1995, 275: 1671-1680. [PubMed]
44. Gerfen CR, Keefe KA, Gauda EBJ Neurosci. 1995, 15: 8167-8176. [PubMed]
45. Moratalla R., Elibol B., Vallejo M., Graybiel AM Neuron. 1996, 17: 147-156. [PubMed]
46. Badiani A., Oates MM, Andro HE, Watson SJ, Akil H., Robinson TE Behav. Atidoha. Res. 1999, 103: 203-209. [PubMed]
47. Uslaner J., Badiani A., Norton CS, Andro HE, Watson SJ, Akil H., Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2001, 13: 1977-1983. [PubMed]
48. Huff RM, Chio CL, Lajiness ME, Goodman LV Adv. Pharmacol. 1998, 42: 454-457. [PubMed]
49. Zachariou V., Sgambato-Faure V., Sasaki T., Svenningsson P., Berton O., Fienberg AA, Nairn AC, Greengard P., Nestler EJ Neuropsychopharmacology. 2005 Aug 3; 10.1038 / sj.npp.1300832.
50. McClung CA, Nestler EJ Nat. Neurosci. 2003, 6: 1208-1215. [PubMed]
51. SD Norrholm, Bibb JA, Nestler EJ, Ouimet CC, Taylor JR, Greengard P. Neuroscience. 2003, 116: 19-22. [PubMed]
52. Bibb JA, Chen J., Taylor JR, Svenningsson P., Nishi A., Snyder GL, Yan Z., Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, et al. Nature. 2001, 410: 376-380. [PubMed]
53. Nikolic M., Chou MM, Lu W., Mayer BJ, Tsai LH Nature. 1998, 395: 194-198. [PubMed]
54. Kesavapany S., Lau KF, McLoughlin DM, Brownlees J., Ackerley S., Leigh PN, Shaw CE, Miller CC Eur. J. Neurosci. 2001, 13: 241-247. [PubMed]
55. Morabito MA, Sheng M., Tsai LHJ Neurosci. 2004, 24: 865-876. [PubMed]
56. Futter M., Uematsu K., Bullock SA, Kim Y., Hemmings HC, Jr., Nishi A., Greengard P., Nairn AC Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005, 102: 3489-3494. [Gazety maimaim-poana PMC] [PubMed]
57. Hayashi ML, Choi SY, Rao BS, Jung HY, Lee HK, Zhang D., Chattarji S., Kirkwood A., Tonegawa S. Neuron. 2004, 42: 773-787. [PubMed]
58. Miangavy an'i S., Mosser E., Schuman EM Neuron. 2002, 35: 91-105. [PubMed]
59. Prange O., Murphy THJ Neurosci. 2001, 21: 9325-9333. [PubMed]
60. Feng J., Yan Z., Ferreira A., Tomizawa K., Liauw JA, Zhuo M., Allen PB, Ouimet CC, Greengard P. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000, 97: 9287-9292. [Gazety maimaim-poana PMC] [PubMed]
61. Li Y., Acerbo MJ, Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2004, 20: 1647-1654. [PubMed]
62. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S., Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. Eur. J. Neurosci. 2005, 21: 2817-2824. [PubMed]
63. Harris KM, Jensen FE, Tsao BJ Neurosci. 1992, 12: 2685-2705. [PubMed]
64. Vanderklish PW, Edelman GM Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002, 99: 1639-1644. [Gazety maimaim-poana PMC] [PubMed]