Допамин D2-ийн донтолтууд нь донтолттой төстэй урамшуулал алдагдал болон тарган хархнуудад хор хөнөөлтэй хархнууд (2010)

Тайлбар: Энэхүү судалгаа нь амьтанд хязгааргүй нэвтрэх эрх олгоход байгалийн хүчтэй бэхжүүлэгч (маш их өдөөлттэй хоол хүнс) D2 рецептор буурахад хүргэж болохыг харуулж байна. Энэ уналт бараг бүх хархуудад ажиглагдаж байсан бөгөөд нэлээд хурдацтай явагджээ. "Өндөр амттай" хоолыг хасахад хархнууд ердийн чов идэхээс татгалзжээ. Хархнууд цахилгаан цочролыг "их тааламжтай" хүнсний хэрэглээтэй хослуулсаар байсан ч (боломжтой бол) үргэлжлүүлэн хийсээр байв.

• Бүрэн судалгаа

Nat Neurosci. 2010 Тавдугаар сар; 13(5): 635-641. Бичсэн онлайнаар 2010 Гуравдугаар 28. doi:  10.1038 / nn.2519

Товч

Таргалалтын хөгжил нь мэдрэлийн урамшууллын хариу урвалд аажмаар улам бүр доройтож буй хомсдол үүссэнтэй холбоотой болохыг олж мэдсэн. Кокаин эсвэл героинаар өдөөгдсөн шагналын гомеостазын ижил төстэй өөрчлөлт нь эмийн санамсаргүй байдлаас албадмал хэлбэрт шилжихэд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг гэж үздэг. Иймээс, өөх тостой биш, харин туранхай хархаар хооллох албадан хооллох зан чанарыг илрүүлсэн бөгөөд энэ нь өдөөгдсөн өдөөлтөөр таслагдахад тэсвэртэй хоол хүнс гэж тооцогддог. Мансууруулах бодист донтсон хүмүүст мэдэгдэж байсан шиг даралт ихтэй допамин D2 рецептор (D2Rs) хэт таргалалттай хархуудад буурчээ. Түүгээр ч барахгүй лентивирусаар дамжуулсан судалчлалын D2R нь донтолттой төстэй шагналын хомсдол, хурц өөх тос бүхий хоолонд удаан хугацаагаар нэвтрэх боломж бүхий хархнууд дотроос албадан хоол хүнс хайж эхлэх явцыг түргэсгэжээ. Эдгээр мэдээлэл нь тансаг хоол хүнс хэтрүүлэн хэрэглэснээр донтохтой төстэй мэдрэлийн мэдрэлийн хариу урвалыг тархины урамшууллын хэлхээнд өдөөж, албадмал хооллолтыг хөгжүүлэхэд хүргэдэг болохыг харуулж байна. Тиймээс нийтлэг гедоник механизм нь хэт таргалалт, мансууруулах бодисын донтолтыг өдөөж болно.

Оршил

Хооллоход таашаал, шагнал урамшуулал нөлөөлдөг бөгөөд хоол хүнсний шагнал авах нь хэрэглээг хүчтэй өдөөж чаддаг1, 2. Гэсэн хэдий ч таргалалтад нөлөөлдөг гедоник механизмууд нь сайн судлагдаагүй хэвээр байна. Лептиний төрөлхийн дутагдалтай гиперфагик хүмүүст тархины урамшууллын хэлхээний гол бүрэлдэхүүн хэсэг болох нурууны ба ховдлын стриатум дахь идэвхижил нь хоолны 3-ийн зургуудын хариуд мэдэгдэхүйц нэмэгдэж, лептин орлуулах эмчилгээ нь стриаталь идэвхжил, хоолонд дуртай "дуртай" байдлыг бууруулдаг. . Энэ нь стриатум нь хооллох зан үйлийн гедоник талуудад чухал ач холбогдолтой болохыг харуулж байна. Таргалалттай хүмүүст туранхай хяналттай харьцуулбал өндөр амттай хоолонд хариу үйлдэл үзүүлэхийн тулд стриатумыг идэвхжүүлэх нь бүдгэрч байгааг саяхан харуулав3. Түүнээс гадна нурууны стриатумын гипофункци ба удаан хугацааны жингийн өсөлт нь DRD4-ANKK2 генийн байршлын TaqIA аллелтай хүмүүст хамгийн тод илэрдэг бөгөөд энэ нь стриаталь D1R илэрхийлэл буурч, хувь хүмүүсээс бодисын хамаарлын эмгэгийг урьдчилан тогтоодог болохыг харуулж байна2, 4 Эдгээр болон үүнтэй төстэй ажиглалтууд нь шагнал урамшууллын алдагдал нь хэт таргалалт үүсэх эрсдэлт хүчин зүйл байж болох бөгөөд хэт таргалалттай хүмүүс урамшууллын хэт мэдрэг чанарыг нөхөхийн тулд амттай хоол хүнсийг албадан хэрэглэж болно гэсэн санал дэвшүүлэв5. Ялангуяа шагнал урамшууллын боловсруулалтын хомсдол нь таргалалтаас урьтаж, хоол хүнсэнд хэт их хэрэглэх нь шагналын дисфункцийг өдөөж улмаар хоолны дэглэмээс үүдэлтэй таргалалтад нөлөөлж байгаа эсэх нь тодорхойгүй байна.

Илүүдэл жинтэй, таргалалттай хүмүүсийн өвөрмөц шинж чанар нь эрүүл мэнд, нийгмийн сөрөг үр дагаврыг үл харгалзан хэт ихэсгэж байгаа явдал юм. Үнэн хэрэгтээ илүүдэл жинтэй олон хүн хоол хүнсээ хязгаарлах хүсэлтэй байгаагаа илэрхийлж байгаа боловч тэдний хэрэглээг хянахын тулд тэмцэж, эрчим хүчний хэрэгцээгээ даван туулж байна7, 8. Сөрөг үр дагаварт мэдрэмтгий биш хооллох зан үйлийн хөгжил нь хүний ​​хар тамхинд донтсон хүмүүст тохиолддог хар тамхины хэрэглээтэй төстэй бөгөөд сөрөг үр дагавартай ижил төстэй юм 9. Энд бид хархнууд дахь тархины урамшууллын системийн мэдрэмтгий байдалд өөх тос ихтэй хоолны дэглэмийг өргөжүүлэхэд үзүүлэх нөлөөг судалсан. Мөн хоолны дэглэмээс үүдэлтэй өсгийтэй эсийн дарангуйлал ба эрэлхийлж буй хоол хүнс үүсэх хоёрын хоорондын уялдаа холбоог судалсан. Эцэст нь бид эдгээр донтолт маягийн зан үйлийн хариу урвалын үед striatal D2R-ийн үүргийг судалсан.

Таргалалттай хархинд донтохтой төстэй шагналын дутагдал

Өөх тос ихтэй хоолны дэглэмийн хязгаарлагдмал буюу өргөтгөсөн нэвтрэлтийн үр нөлөөг шалгахын тулд бид Wistar эрэгтэй хархыг (300−350 гр) хажуугийн гипоталамус дахь хоёр туйлт өдөөгч электродоор бэлдэж, 10-14 хоногийн турш салангид туршилтаар сургасан. тогтвортой шагналын босго тогтоогдтол тархины өдөөлтийн урамшууллын одоогийн босго (BSR) журам4. BSR-ийн процедурт хархнууд өөрсдийгөө өдөөх электродоор дамжуулан урамшууллын цахилгаан өөрөө өдөөх хүчийг олж авахын тулд хүчтэй хариу үйлдэл үзүүлдэг бөгөөд өөрийгөө өдөөх зан төлөвийг хадгалдаг хамгийн бага сэрэл нь шагналын босго гэж нэрлэгддэг10. Шагналын босго нь суурь нөхцөлд удаан хугацаанд өөрчлөгдөөгүй хэвээр байгаа тул энэхүү журам нь тархины шагналын системийн хариу үйлдлийн мэдрэмжтэй байдлыг өгдөг. Тогтвортой BSR босго тогтоосны дараа (гурван дараалсан босго дээрх босго <10% -ийн хэлбэлзэл гэж тодорхойлсон), бид биеийн дундаж жингийн ялгаа, бүлгүүдийн хоорондох шагналын босго ямар ч ялгаагүй харханд гурван бүлэгт хуваарилав. Гурван бүлэгт хүн төрөлхтөнд хэрэглэхэд хялбар эрчим хүчээр баялаг хоолноос бүрдэх 'цайны газрын хэв маягийн хоолны дэглэмд ялгавартай хандах эрх олгожээ (Онлайн аргуудыг үзнэ үү). Хархнууд өдөрт 0 цаг (зөвхөн зажлууртай хархнууд; n = 9), 1 цаг (хязгаарлагдмал хандалттай хархнууд; n = 11), эсвэл 18-23 цаг (өргөтгөсөн хандалттай хархнууд; n = 11) өдрийн хоолны дэглэмд хамрагдах боломжтой байв. 40 хоног тасралтгүй. Цайны газрын хоолны дэглэм нь хархуудад хоолны дэглэмээс үүдэлтэй таргалалт үүсгэдэг болохыг мэддэг11. Бүх хархнууд мөн лабораторийн стандарт эмчилгээний жор руу нэвтрэх боломжтой байсан бөгөөд шагналын босго, жингийн өсөлт, илчлэгийн хэрэглээг бүхэлд нь тэмдэглэж авсан.

Зөвхөн хоолны дэглэм, эсвэл хязгаарлагдмал нэвтрэх бүлэгтэй харьцуулахад цайны газрын хоолны дэглэмийг өргөтгөх боломжтой хархуудад жин ихээхэн нэмэгдсэн (1a зураг). Жин нь зөвхөн chow зөвхөн хархтай харьцуулахад хязгаарлагдмал хандмал хархуудад өсөх хандлагатай байсан боловч энэ нөлөө нь статистик ач холбогдолтой хэмжээнд хүрээгүй байна. Өргөтгөсөн хүрээн дэх харшлын хэт таргалалт үүсэх нь тархины урамшууллын үйл ажиллагааны доройтол, нягтшилтай BSR-ийн босго хэмжээг тусгасантай нягт холбоотой байв (Зураг 1b). Гурван бүлгийн хооронд BSR-ийн хариу хүлээлтийн ялгаа ажиглагдаагүй тул (Нэмэлт зураг 1), зан үйлийн гүйцэтгэлийн дутагдал нь энэ ажиглалтанд нөлөөлдөггүй. Тархины шагналын үйл ажиллагааны ижил төстэй дутагдлууд нь харшилтай хүмүүсийн дунд тархсан кокаин эсвэл героин өөрөө захиргаа12, 13, 14. Ийнхүү өөх тос ихтэй хоолонд удаан хугацаагаар нэвтрэх нь таргалалтын чухал эх үүсвэр болох хэт таргалалтыг өдөөж, хэт таргалалт 1, 6-ийн хөгжилд хувь нэмэр оруулдаг тархины шагналын үйл ажиллагааны алдагдалд хүргэдэг.

Зураг 1: цайны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх боломжийн хэмжээтэй хархнуудын жингийн алдагдал, урамшууллын үр дүн.

(a) Зөвхөн чоу, хязгаарлагдмал хандалттай, өргөтгөсөн хандалтын харханд жингийн дундаж (± сем) өсөлт (хандалтын өдрийн харилцан үйлчлэл: F39,702 = 7.9, P <0.0001; * P <0.05 зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc test). (b) Шагналын босго босгоос дундаж (± сем) хувь өөрчлөгдсөн (хандалтын цаг хугацааны харилцан үйлчлэл: F78,1092 = 1.7, P <0.0005; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулбал дараахь тест).

Тэжээлийн төлөв байдлыг нарийвчлан судалж үзэхэд (Зураг 2) бид нийт илчлэгийн хэрэглээ нь зөвхөн chow болон хязгаарлагдмал нэвтрэх хархнууд хооронд ижил төстэй болохыг олж мэдсэн (Зураг 2a, d). Эсрэгээрээ, өргөтгөсөн хандалттай хархуудад нийт илчлэгийн хэмжээ хязгаарлагдмал хүртээмжтэй, ганцхан төрлийн хархнаас бараг хоёр дахин их байсан (2a зураг, г). Хязгаарлагдмал хандалттай ба човоор хийсэн хархнууд нь өдөр тутмын илчлэгийн хэмжээг ойролцоогоор ижил хэмжээгээр хадгалж байсан (2a-р зураг, d) боловч хязгаарлагдмал хандмал харх нь тэдний өдөр тутмын илчлэгийн зөвхөн ~ 33% -ийг chow-аас авсан (2b-р зураг, d). тэд зөгий шиг хооллох зан үйлийг боловсруулж, 66 цаг тутамд хоолны дэглэмд орох хоолны дэглэмийн өдөр тутмын илчлэгийн ~ 1% -ийг хэрэглэж байжээ 15 зураг (2d зураг). Өргөтгөсөн нэвтрэх хархнууд chow-аас авсан нийт илчлэгийнхээ багахан хэсгийг (~ 5%) олж авсан байна (Зураг 2b); тэд цайны газрын хоолны дэглэмийг бараг л хэрэглэдэг байсан (2d зураг). Хязгаарлагдмал ба өргөтгөсөн хүртээмжтэй бүлгүүдийн хоолны дэглэмд шилжих өөрчлөлт нь зөвхөн chow хархтай харьцуулахад өөх тосны хэмжээ ихээхэн нэмэгдсэн (2c ба 2-ийн нэмэлт зураг). Өмнөх тайлантай харьцуулахад 16-ийн дагуу өргөтгөсөн хүрэн хархуудад цайны газрын хоолны дэглэмийн хэрэглээ буурах хандлага ажиглагдаж байв. Энэ нь цаг хугацааны хувьд цайны газрын хоолны дэглэмийн нэг хэсэг болгон өгсөн хоол хүнсний тав тухтай байдлыг тэсвэрлэх чадварыг хөгжүүлэхэд нөлөөлж болно. Гэсэн хэдий ч эдгээр хархуудад цайны газрын хоолны дэглэмийг стандарт chow-ээс илүүд үздэг хэвээр байв (Нэмэлт зураг 3). Эдгээр тоо баримтаас харахад өөх тос багатай хоолны дэглэмийн хэрэглээг өргөжүүлэх, хязгаарлагдахгүй байх нь донтолт гэх мэт шагналын дутагдал, хэт идэж уух, гомеостатик энергийн тэнцвэр алдагдахад хүргэдэг. Үүний эсрэгээр, тансаг хоол хүнсээр хязгаарлагдмал хэрэглээ нь нүцгэн хэлбэрийн хэрэглээг бий болгодог боловч гомеостатик энергийн тэнцвэр, тархины шагналын үйл ажиллагааг алдагдуулдаггүй. Гэсэн хэдий ч дараалсан 40-аас дээш хоногийн хоолны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх нь их хэмжээний жин нэмэх, тархины урамшууллын үйл ажиллагааг тасалдуулж болзошгүй юм.

Зураг 2: цайны газрын хоолны дэглэмийг өргөтгөх боломж бүхий хархын хэрэглээний хэв маяг.

(а) Зөвхөн чоу, хязгаарлагдмал хандалттай, өргөтгөсөн хандалтын харханд хоногийн дундаж илчлэгийн хэрэглээ (нэвтрэх: F1,324 = 100.6, P <0.0001; цаг: F18,324 = 7.8, P <0.0001; нэвтрэх × хугацааны харилцан үйлчлэл: F18,324 = 4.6, P <0.0001; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc тест). (b) Чоугаас авах хоногийн дундаж илчлэгийн хэмжээ (± сем) (хандалт: F2,504 = 349.1, P <0.0001; цаг: F18,504 = 5.9, P <0.0001; нэвтрэх × хугацааны харилцан үйлчлэл: F36,504 = 3.52, P <0.0001; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc test). (в) Өөх тосоос авах хоногийн дундаж илчлэгийн хэмжээ (± сем) (хандалт: F2,486 = 118.7, P <0.0001; цаг: F18,486 = 8.8, P <0.0001; нэвтрэх × хугацааны харилцан үйлчлэл: F36,486 = 6.2, P <0.0001; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc test). (d) 40 хоногийн нэвтрэх хугацааны туршид нийт калорийн хэрэглээний дундаж болон (зөвхөн сем) хэрэглэсэн илчлэгийн харьцуулалт (нэвтрэх: F2,54 = 25.0, P <0.0001; илчлэгийн эх үүсвэр: F2,54 = 1235.2, P <0.0001; хандалтын × илчлэгийн эх үүсвэрийн харилцан үйлчлэл: F2,54 = 485.7, P <0.0001; *** P <0.001 нь зөвхөн chow бүлгийн нийт калоритай харьцуулбал ### P <0.001 ижил бүлэг харх, дараахь тест).

40-ийн дараа хархнууд таатай хоолонд орохыг зөвшөөрөхөө больсон боловч лабораторийн chow-д ad libitum хандалт хийсээр байв. Энэхүү албадан "тэвчээргүй байх" үеэр бид шагналын босго болон хэрэглээний хэрэглээг өдөр бүр үнэлэв. Шагналын босго дээрх өсөлт нь хоолны дэглэмд хамрагдахаа больсон үед өргөтгөсөн нэвтрэх хархнуудад дор хаяж 2 долоо хоног үргэлжилсэн (Зураг 3а). Энэ нь өөрөө удирддаг кокаинаас татгалздаг харханд мэдэгдэж байсан шагналын үйл ажиллагааны харьцангуй түр зуурын (~ 48 цаг) алдагдлаас ялгаатай юм13. Түүнчлэн энэхүү тэвчээргүй байх хугацаанд илчлэгийн хэрэглээ мэдэгдэхүйц буурч (Зураг 3б), биеийн жин (Зураг 3в) аажмаар буурч, хязгаарлагдмал хандалттай харх бага хэмжээгээр буурсан байна. өмнөх тайлангууд11, 15. 14 өдрийн турш цээрлэсний дараа хархнуудыг устгаж, электродын байршлыг крезил ягаан будгаар тодорхойлов (Зураг 3d).

Зураг 3: Цайны хоолны дэглэмд удаан хугацаагаар хамрагдсан хархуудад үл тэвчих үед урамшууллын дисфункци ба гипофаги.

(а) Өөх тос ихтэй хоолны дэглэмээс татгалзах үеийн шагналын босго хэмжээ (± сем) -ийн дундаж хувь (хандалт: F2,112 = 3.7, P <0.05; цаг: F4,112 = 2.3, P> 0.05; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулбал дараахь тест). (б) Өөх тос ихтэй хоол хүнсэнд нэвтрэх сүүлийн өдөр (үндсэн үзүүлэлт) ба 14-ийн цээрлэх үед зөвхөн кальци хэрэглэх боломжтой дундаж илчлэгийн хэрэглээ (нэвтрэх: F2,168 = 41.7, P <0.0001 ; цаг: F6,168 = 65.6, P <0.0001; нэвтрэх × хугацааны харилцан үйлчлэл: F12,168 = 38.3, P <0.0001; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc тест). (в) Өөх тос ихтэй хоолны дэглэмд (суурь түвшинд) орсон сүүлийн өдөр болон 14-ийн өдрийн цээрлэлтээс татгалзах үед биеийн жинтэй харьцуулахад биеийн дундаж жингийн өөрчлөлт (± хагас) (хандалт: F1,126 = 37.2, P <0.0001; цаг: F7,126 = 3.1, P <0.01; нэвтрэх × хугацааны харилцан үйлчлэл: F7,126 = 40.9, P <0.0001; * P <0.05 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад, post hoc тест). (d) Зөвхөн Чоу (гурвалжин), хязгаарлагдмал хандалттай (дөрвөлжин) ба өргөтгөсөн нэвтрэх (тойрог) хархнуудын хажуугийн гипоталамус дахь BSR өдөөгч электродуудын байршлыг гистологийн аргаар сэргээн босгох.

Таргалалттай харх дахь Strialal D2R: шагналын хомсдол дахь үүрэг

Цаашид хоолны газрын хоолны дэглэмийг хэтрүүлэн хэрэглэх нь стриаталь D2R нягтралыг бууруулж, донтолттой төстэй урамшууллын хэт мэдрэг байдлыг бий болгоход хувь нэмэр оруулах таамаглалыг бид үргэлжлүүлэн судлав. Зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулбал өргөтгөсөн нэвтрэх хархнуудын биеийн жингийн статистикийн хувьд мэдэгдэхүйц нэмэгдэх хүртэл цайны газрын хоолны дэглэмд зөвхөн хязгаарлагдмал, нэвтрэх эрх нь хязгаарлагдмал, өргөтгөсөн хархнуудыг нэвтрүүлэхийг зөвшөөрөв (P <0.05 ; Зураг 4а). Хэт их гликозилжсан (~ 70 кДа) мембрантай D2R хэлбэрийн стриаталь илэрхийлэл нь өргөтгөсөн хандалтын харханд хязгаарлагдмал хандалттай эсвэл зөвхөн зажлууртай харьцуулахад бага байсан (Зураг 4б; Онлайн аргуудыг үзнэ үү). Биеийн жингийн дундаж (хөнгөн эсвэл хүнд) хуваагдлыг үндэслэн хандалтын бүлэг тус бүрт хархыг хоёр дэд бүлэгт хуваахад биеийн жин ба стриаталь D2R-ийн илэрхийлэл хооронд тодорхой урвуу хамаарал байгааг олж мэдсэн (Зураг 4а, в). D39R (Нэмэлт зураг. 51) 2-ийн гликозилацгүй боловсорч гүйцээгүй (~ 4 кДа) ба завсрын гликозилжуулсан цитоплазмын (~ 17 кДа) хэлбэрийн статистикийн хувьд мэдэгдэхүйц бууралт илрээгүй бөгөөд энэ нь өргөтгөсөн хандалтын хархууд дахь стриаталь D2R илэрхийлэл байж болзошгүйг харуулж байна. транскрипцийн дараах механизмаар зохицуулагддаг.

Зураг 4: Жин нэмэгдэх нь striatal D2R-ийн түвшинд урвуу хамааралтай байдаг.

(a) Зөвхөн зөөвөрлөгдсөн, нэвтрэх эрх нь хязгаарлагдмал, өргөтгөсөн хандалттай хархнуудыг биеийн жингийн дундаж хуваагдал дээр үндэслэн нэг нэвтрэх нөхцлөөр хоёр бүлэгт хуваав: хөнгөн (L) эсвэл хүнд (H). (б) Судлын цогцолборыг бүхэлд нь харх, D2R түвшингээс баруун бүслүүрээр хэмжсэн. Мембрантай холбоотой D2R туузыг 70 кДа-д шийдэж, уураг ачаалах хяналтыг доор харуулав (β-актин, 43 кДа). Бүрэн хэмжээний иммуноблотуудыг Нэмэлт Зураг 12-т харуулав. (C) Зөвхөн chow, хязгаарлагдмал, нэвтрэх боломжтой хархнуудын стриатум дахь харьцангуй D2R хэмжээг денситометрийн аргаар хэмжсэн (F2,6 = 5.2, P <0.05, үндсэн хандалтын үр нөлөө; * P <0.05 ба ** P <0.01 нь зөвхөн chow бүлэгтэй харьцуулахад).

Дараа нь цус харвалт D2R-ийн тархалтыг бууруулах үйл ажиллагааны тархины урамшууллын функцтэй уялдаатай эсэхийг шалгахын тулд бид D2R (Lenti-D2Rsh; Lenti-D5Rsh; Зураг) -ыг хөндлөнгөөс оролцуулах богино хэмжээний үсний хавчаарыг (RRNA) дамжуулж богино хэмжээний үсний хавчаараар өгөх вирусын векторыг боловсруулж, баталгаажуулав. 5 ба нэмэлт зураг 2). Lenti-D14Rsh-тай харьцуулсан хархнууд кафе хоолны дэглэмд орохыг зөвшөөрсний дараа даруй нэмэгдэж эхэлсэн бол харьцангуй богино хугацаанд хоосон лентивирусын вектор (Lenti-control) -аар эмчилсэн өргөтгөсөн нэвтрэх хархуудад шагналын босго өөрчлөгдөөгүй байв. цайны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх (6 d; зураг 6a). Хариуцлагын хоцрогдол нь хархуудын хоёуланд нь өөрчлөгдөөгүй бөгөөд энэ үр дүн нь даалгаврын гүйцэтгэлийн дутагдалд ордоггүй болохыг харуулж байна (Нэмэлт зураг 2). Шагналын босгыг Lenti-D6Rsh эсвэл Lenti-хяналттай харьцуулсан хархуудад мөн л ижил хугацаанд өөрчлөгдсөн байв (Зураг XNUMXb).

Бүх хархууд зөвхөн стандарт chow-д нэвтрэн орох үед нэмэлт 15 д-ийн үл тэвчих үед босго нь тогтмол байсаар байв (Нэмэлт зураг 7). Тиймээс цус харвалтын D2R-ийн уналт нь хоолны дэглэмээс үүдэлтэй шагналын гипофункцэд эмзэг байдлыг нэмэгдүүлдэг боловч тархины шагналын тогтолцооны суурь үйл ажиллагааг өөрчилөөгүй.

Зураг 5: Стратиатын D2R-ийн илэрхийлэлийг лентовирусаар зуучилсан.

(a) Lenti-D2Rsh-ийг хэт их илэрхийлсэн стриаталь бүсүүдийн график дүрслэл. Зүүн тархины хагас бөмбөрцгийн ногоон тойрог нь вирусын дусаахад чиглэсэн байршлыг илэрхийлдэг. Тархины баруун тархи дахь ногоон толбо нь Lenti-D2Rsh хархны тархинаас ногоон флюресцент уураг (GFP) будах иммунохимийн төлөөлөл юм. (б) Lenti-D2Rsh хархнуудын стриатум дахь буурсан D2R экспрессийн иммуноблот. Бүрэн хэмжээний иммуноблотуудыг Нэмэлт Зураг 13-д харуулав. (C) Ленти-контрол ба Ленти-Д2Рш хархнуудын стриатум дахь харьцангуй D2R хэмжээг денситометрийн аргаар хэмжсэн (* P <0.05 ). (d) Lenti-D2Rsh вектороор стриатум дахь глик эсийн халдвар илрээгүй байна. Ногоон будалт нь вирусын GFP; улаан бол астроцитын маркер glial fibrillary хүчиллэг уураг (GFAP); эсийн бөөмийг DAPI-ээр цэнхэр өнгөөр ​​тодруулдаг. Цагаан сумнууд нь глиозозын нутагшуулсан хэсгийг заадаг бөгөөд вирус тархсан хүрээлэн буй эдэд биш харин судсаар хучигдсан газарт л вирус тарьдаг. Энэ бүс нутагт ч гэсэн астроцитын аль нь ч GFP эерэг байдаггүй. Томруулсан зурган дээрх шар сумнууд нь илэрсэн ердийн GFP-сөрөг астроцитуудыг тодруулдаг. (e) Lenti-D2Rsh вектороор стриатум дахь мэдрэлийн эсийн халдварын өндөр түвшин. Ногоон будалт нь вирусын GFP; улаан бол NeuN мэдрэлийн эсийн цөмийн тэмдэг; эсийн бөөмийг DAPI-ээр цэнхэр өнгөөр ​​тодруулдаг. Томруулсан зурган дээрх шар сумнууд нь стриатум дахь GFP-эерэг ба NeuN-эерэг мэдрэлийн эсүүдийг тодруулдаг. (е) Lenti-D2Rsh хархнуудын судлын хөндийд вирусын халдвар авсан (GFP-эерэг) мэдрэлийн эсийн томруулсан дүрс, дунд зэргийн нуруутай мэдрэлийн эсийн морфологийн ердийн шинж чанарыг харуулсан болно.

Зураг 6: Өтгөн хатах D2R нь хархнуудтай цайны газрын хоолны дэглэмд орох эрхээ алдахад эмзэг байдлыг нэмэгдүүлдэг.

(a) Цайны газрын хоолны дэглэмийг 2 хоног дараалан сунгасан Lenti-control ба Lenti-D14Rsh хархнуудын шагналын босго хэмжээнээс дундаж (± sem) хувь өөрчлөгдсөн (вирус: F1,156 = 5.9, P <0.05; цаг: F13,156 = 2.2, P <0.05; вирус × хугацааны харилцан үйлчлэл: F13,156 = 2.2, P <0.05; #P <0.05, харилцан үйлчлэлийн нөлөө). (б) Зөвхөн ченти хандалттай байсан Ленти-хяналт ба Ленти-Д2Рш хархнуудын шагналын босго хэмжээнээс дундаж (± сем) хувь өөрчлөгдсөн. (c) Зөвхөн 14 d chow-ийн үед хархуудын илчлэгийн дундаж (± сем) илчлэг буюу өргөтгөсөн хандалт (нэвтрэх: F2,28 = 135.6, *** P <0.0001). (d) Зөвхөн 14 d chow буюу өргөтгөсөн хандалтын үед жингийн дундаж (± sem) өсөлт (хандалт: F2,28 = 96.4, P <0.0001; *** P <0.001, хандалтын гол нөлөө).

Илчлэгийн хэмжээ (Зураг 6c) ба жингийн өсөлт (Зураг 6d) нь Lenti-D2Rsh болон Lenti-хяналтын бүлгүүдтэй зөвхөн chow эсвэл өргөтгөсөн нэвтрэх нөхцөлтэй ижил төстэй болохыг олж мэдсэн (Нэмэлт зураг. 8 ба 9). Ийнхүү striatal D2R-ийн цохилт нь амтат хоол хүнсийг чөлөөтэй ашиглах боломжтой үед цайны газрын хоолны дэглэм, нийт илчлэгийн хэмжээг аль алиныг нь өөрчилсөнгүй.

Хэт таргалалттай харханд идэх хоол: загатнах D2R-ийн үүрэг

Дараа нь хоолны газар руу нэвтрэх боломжийг өргөж авсан хархнуудад албадлагын шинжтэй идэш тэжээл гарч болзошгүй гэсэн таамаглалыг туршиж үзсэн бөгөөд стриаталь D2R дохиоллын дутагдал нь энэ үр дүнд нөлөөлж болзошгүй юм. Зөвхөн chow, хязгаарлалттай, нэвтрэх боломжтой хархнуудын шинэ бүлэглэлийг өргөтгөсөн хархнуудад жингийн статистикийн хувьд мэдэгдэхүйц өсөлт гарах хүртэл цайны газрын хоолны дэглэмд> 40 d хугацаанд нэвтрэхийг зөвшөөрсөн (P-0.05 зөвхөн chow хархнуудтай харьцуулахад өгөгдөл биш) харуулсан). Гурван бүлэгт багтдаг хархуудад хоолны дэглэмийг өдөрт 30 минутын хугацаанд 5-7 өдрийн турш тасалгааны тасалгаанд тогтвортой хүлээн авах хүртэл зөвшөөрсөн (өдөр тутмын хэрэглээний <10% хэлбэлзэл). Дараа нь нэвтрэх нөхцөл бүрийн хархнуудын тэн хагас нь хөлийн цочрол (шийтгэл хүлээлгэсэн бүлэг) хүргэхтэй хослуулан гэрэл (нөхцөлт өдөөлт) -д өртсөн бол бүлэг тус бүрийн үлдсэн хархнууд хөлийн цочролгүй (шийтгэлгүй бүлэг) ). Туршилтын өдөр бид дохионы гэрлийн нөлөөг дангаар нь хоол хүнсэнд хэрэглэхэд хэрхэн нөлөөлж байгааг судалсан (Зураг 7; Онлайн аргуудыг үзнэ үү). 30 минутын суурь хуралдааны үеэр илчлэгийн дундаж хэрэглээ нь өргөтгөсөн нэвтрэх хархнаас илүү зөвхөн чов болон хязгаарлагдмал хандалттай харханд илүү өндөр байгааг олж мэдсэн (Зураг 7а, б). Үүнээс үзэхэд завсарлагаатай 30 минутын завсарлагааны үеэр цорын ганц чау болон хязгаарлагдмал хандалттай хархнууд хоолонд дуртай хоолонд хавчдаг байсан нь эдгээр хархнууд өдөр тутмын илчлэгийнхээ ~ 40-50% -ийг хэрэглэдэг, ихэвчлэн ~ 100 ккал, эдгээр хуралдааны үеэр (Зураг 7а, б). Үүний эсрэгээр, өргөтгөсөн нэвтрэх хархнууд хоолонд дургүйцсэн хооллолтыг хөгжүүлэхэд тэсвэртэй мэт санагддаг, магадгүй тэдний хоолонд 40 хоног дараалан хязгааргүй нэвтрэх боломжтой байсан нь харьцангуй уян хатан бус хоолны дэглэмийг тогтоожээ. Туршилтын өдөр бид зөвхөн анхнаас нь авч үзсэн, хязгаарлагдмал хандалттай эсвэл нэвтрэх эрхийн бүлгээс ял шийтгэлгүй харханд хоол тэжээлийн хэрэглээнд дохионы гэрлийг дахин тоглуулах нь статистикийн хувьд чухал нөлөө үзүүлсэнгүй (Зураг 7а). Зөвхөн гэрэл дохио нь зөвхөн сэдэл зоригтой шинжгүй байв. Шийтгэгдсэн хархнуудын хувьд цочрол хосолсон дохионы гэрэл нь зөвхөн чов болон хязгаарлалттай нэвтрэх боломжтой хархнуудад тааламжтай хоол хүнсний хэрэглээг эрс бууруулсан байна. Гэсэн хэдий ч дохионы гэрэл нь өргөтгөсөн нэвтрэх хархнуудад тааламжтай хоол хүнс хэрэглэхэд ямар ч нөлөө үзүүлээгүй бөгөөд тэдний хэрэглээ нь бэрхшээлийг урьдчилан таамаглах байгаль орчныг хамгаалах шинж тэмдгүүдэд мэдрэмжгүй байгааг харуулж байна. Өргөтгөсөн нэвтрэх хархнуудын суурь эрчим хүчний хэрэглээ бусад бүлгүүдийнхээс бага байв. Гэсэн хэдий ч ижил төстэй хугацаанд човын хэрэглээ хамаагүй бага байсан (Зураг 7d), энэ нь бидний олж мэдсэн зүйлд саад болж буй "шалны эффект" -ийг илэрхийлэх магадлал багатай юм. Хамтдаа манай өгөгдөл нь хар тамхинд мансууруулах бодис хэрэглэх боломжийг өргөтгөсөн түүхтэй хархуудад ажиглагдаж байсан кокаин хэрэглэхтэй ижил төстэй байдлаар өргөтгөсөн хандалтын харханд үүсч болзошгүй гэсэн санааг дэмжиж байна18.

Зураг 7: Тансаг хоолонд шаардлагатай хариу үйлдэл.

(a) 30 минутын суурь хуралдаанууд болон туршилтын өдөр хархнууд хөлний хордлоготой урьд өмнө хослуулагдаагүй төвийг сахисан нөхцөлт өдөөлтөд өртсөн үед ял шийтгэлгүй хархуудад хоолны дэглэмийн дундаж (± сем) хэрэглээ. (нэвтрэх: F2,20 = 5.2, P <0.05; #P <0.05 нь зөвхөн цав хархтай харьцуулахад). (b) 30 минутын суурь хуралдаан болон туршилтын өдөр харшууд хөлний хордлоготой хавсарч байсан болзолт өдөөлтөд өртсөн үед шийтгэгдсэн хархуудад хоолны дэглэмийн дундаж (± сем) хэрэглээ (хандалт: F2,21 = 3.9 , P <0.05; дохио: F1,21 = 8.6, P <0.01; нэвтрэх × дохионы харилцан үйлчлэл: F2,21 = 4.7, P <0.05; * P <0.05, суурь хуралдааны үеийн хэрэглээтэй харьцуулбал, #P <0.05 зөвхөн чох харх). (c) 30 минутын суурь хуралдаанууд болон туршилтын өдөр Lenti-control, Lenti-D2Rsh хархнуудад хоолны дэглэмийн дундаж (± хагас) хоолны дэглэм, урьд өмнө цайны газрын хоолны дэглэмийг зөвхөн chow буюу өргөтгөсөн хандалттай байсан (тэмдэг: F1,26, 29.7 = 0.0001, P <0.05; * P <0.01, ** P <30 нь суурь хичээлийн үеийн хэрэглээтэй харьцуулахад, түр зуурын тест). (d) 2 минутын суурь хичээлүүд болон туршилтын өдөр Lenti-control, Lenti-D1,26Rsh хархнуудад урьд өмнө зөвхөн цайны газар хоолны дэглэм барьж байсан эсвэл өргөтгөсөн байсан човын хэрэглээний дундаж (± сем) хэмжээ (тэмдэг: F44.9 = 0.0001, P <0.05; * P <0.01, ** P <XNUMX нь суурь хичээлийн үеийн хэрэглээтэй харьцуулахад, түр зуурын тест).

Эцэст нь хэлэхэд, урьд өмнө нь зөвхөн цоохор хооллох боломжтой байсан эсвэл цайны газрын хоолны дэглэмийг өргөтгөсөн Ленти-контрол, Ленти-Д2Рш хархнуудад хоол хүнсэнд хэрэглэх ял шийтгэлтэй нөхцөлт өдөөлтийн үр нөлөөг бид судалж үзсэн (Зураг 6-ийн хархнууд). 30 минутын суурь хичээлийн үеэр амтат хоол хүнсний хэрэглээ нь дөрвөн бүлэгт адил өндөр (~ 40 ккал) байгааг тогтоосон (Зураг 7c). Нэмж дурдахад, агааржуулалтын хуралдаанууд болон туршилтын өдөр хархуудын дөрвөн бүлгийн хоорондох хоногийн нийт чооны хэрэглээ (гэрийн торонд) ойролцоо байсан (Нэмэлт зураг. 10). Цайны газрын хоолны дэглэмээс 14 хоногийн өмнө нэвтрэх нь хэтрүүлсэн хоол идэх зан үйлийг> 40 d хоолны газар руу нэвтрэх боломжийг өргөжүүлсэн харханд ажиглагдсантай ижил төстэй байдлаар хязгаарлахад хангалтгүй байв (Зураг 7а, б). Зэвүүн гэрлийн өдөөлт нь урьд өмнө зөвхөн човын хандалттай байсан Ленти-контрол болон Ленти-Д2Рш хархнуудад тааламжтай хоол хүнсний хэрэглээг тасалдуулсан (Зураг 7c). Үүнтэй адил хөнгөвчлөгдсөн нөхцөлт өдөөлт нь Lenti-хяналтын хархнуудад 14 хоногийн өмнө цайны газрын хоолны дэглэмийг өргөжүүлж байсан хоолонд дуртай хоолыг тасалдуулав. Эсрэгээр, хөнгөвчлөх нөхцөлт өдөөлт нь Lenti-D2Rsh хархнуудад 14 хоногийн өмнө цайны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх боломжийг өргөжүүлж байсан хоол хүнсний хэрэглээнд ямар ч нөлөө үзүүлээгүй (Зураг 7c). Туршилтын дараа 48 цагийн дараа бүртгэгдсэн үед BSR босго хэмжээ эдгээр хархуудад мэдэгдэхүйц өссөн хэвээр байгаа бол бусад гурван бүлэг хархуудад босго тогтвортой, өөрчлөгдөөгүй хэвээр байна

(Нэмэлт зураг 11). Lenti-D2Rsh-ийн өргөтгөсөн нэвтрэлтийн хархуудад тааламжтай хоол хүнс хэрэглэх нь өдөөгдсөн өөх тосны даралтыг эсэргүүцэх чадвар нь сонгодог агааржуулалтын процессын бууралтад хоёрдогч биш гэдгийг батлахын тулд бид бага зэргийн стандарт бус chow хэрэглээнд өдөөгдсөн өдөөгдсөн өдөөгч нөлөөллийг туршиж үзсэн. хархны бүх дөрвөн бүлэг. Ийнхүү тааламжтай хоол хүнс хэрэглэхээс ялгаатай нь 2 минутын суурь хуралдаануудад хархын бүх дөрвөн бүлгийг бага хэмжээний chow (~ 30 кКал) хэрэглэсэн болохыг олж мэдсэн (7d зураг). Энэ дөрвөн бүлэгт човины хэрэглээ тасалдсан. Харшилтай өдөөгдсөн өдөөлтөд өртсөнтэй төстэй хэмжээ (Зураг 7d). Эдгээр мэдээлэл нь хөрсний D2R-ийн уналт нь тансаг хоолыг албадан иддэг хоол хүнс гарч ирэхийг хурдасгасан болохыг харуулж байна, гэхдээ зөвхөн эртний түүхтэй хархуудад л тохиолддог. Түүнээс гадна, албадан хооллох нь зөвхөн BSR-ийн босго өндөртэй Lenti-D2Rsh хархуудад илэрсэн тул хоолны дэглэмээс үүдэлтэй урамшууллын гипофункц нь хоол хүнс хэрэглэх албадан ирэх зайлшгүй шаардлагатай зүйл байж болох юм.

хэлэлцүүлэг

Өөх тос багатай хоол хүнс хэрэглэхэд хялбар байдал нь таргалалт 19-ийн орчны эрсдэлт хүчин зүйл гэж тооцогддог. Өндөр тансаг цайны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх нь хэт их идэх, жин нэмэгдэхэд харх доторх BSR босгыг аажмаар дээшлүүлж өгдөг болохыг тогтоов. BSR-ийн босго дээрх нөлөөллийг тархины урамшууллын эргэлтийн хариу урвалыг аажмаар бууруулж, хоол хүнс хязгаарлалт, турах нь 20-ийг нэмэгдүүлж болохуйц тайлбарыг тайлбарлаж болох бөгөөд цочмог хэтрүүлэн хооллох нь хархаар BSR-д хариу өгөх замаар 21-ийг түр зуур бууруулдаг. Энэхүү олж илрэл нь хархыг судсаар хооллох хоолойгоор дамжуулан цуу хэтрүүлэн хэрэглэх, 21, ходоодны гажиг эсвэл судсаар хийсэн глюкагон судсаар хийсэн нь 22, 23, 24-ийг дуурайж, хажуугийн гипоталамик BSR-ийн хариу урвалыг бууруулдаг болохыг харуулж байна. сэрэл 25. Өмнөх ажил нь мөн харуулын хүчээр өөх тосыг intragastric Хоолойгоор дамжуулан давтан хийснээр жин нь нэмэгдэх хүртэл ~ 200 г-ийн нөлөөгөөр BSR-ийн хариу урвал буурч байгаа бөгөөд энэ нь биеийн жин хэвийн болох хүртэл үргэлжилдэг нөлөө юм 23. Хархнуудын эдгээр олдворуудын нэгэн адил хажуугийн гипоталамик BSR-д мууранд хариу урвал үзүүлэх нь satiation26-т урьдчилж хооллож байсан нь тархины шагналын үйл ажиллагаа болон бодисын солилцооны төлөв хоорондын харилцан үйлчлэл хадгалагдаж, улмаар хүмүүст ч тохиолдож болзошгүйг харуулж байна. Хүний хоолны газар хоолны дэглэмийг хялбархан ашиглах, үүнээс болж хэтрүүлэн хэрэглэх нь барууны нийгэм дэх таргалалтын тархалтын эсрэг байгаль орчны чухал хувь нэмэр гэж үздэг19. Хүний иддэг хоолны дэглэмийг илүүд үздэг илчлэг их хэмжээгээр нэмэгддэг хархуудад шагналын гипофункци үүсдэг бөгөөд жин нэмэгдэх тусам энэ нөлөө нь улам бүр доройтож байгааг бидний тоо баримт харуулж байна. Шагналын босго өндөртэй r20% -тай бүх хархууд нь BRI электродыг ~ 500 μm-ийн зайд босоо тэнхлэгт байрлуулсан байдаг. Энэ талбайн шагналтай холбоотой мэдрэлийн эсийн мэдрэмтгий чанарыг өөх тосноос гаргаж авсан лептин дааврын эмэнд мэдрэмтгий байдлаар хоол хүнсээр хязгаарлах замаар нэмэгдүүлдэг бөгөөд тархины энэ бүсийг хоол тэжээлийн чухал субстрат гэж үздэг. Хүнсний гедоникийг зохицуулдаг тархины хэлхээ нь ходоодны гажигшил 27 ба гэдэснээс үүссэн пострандиал хүчин зүйлийн пептид YY28-3 (PYY) 36-ийн тархалтыг илтгэдэг сүүлийн үеийн хүний ​​хийсэн судалгааны үр дүнд ханасан байдлыг урьдчилан таамагладаг постестестсив дохиогоор дарангуйлдаг. шагнал урамшуулалд оролцох. Үүнээс гадна шагналын систем нь илүүдэл жин нэмэхэд саад болдог. Сүүлийн үеийн мэдээллээр эрэлтийн лептин нь энергийн тэнцвэрийг хангах гол зохицуулагч нь тархины эд эсэд нэвтэрч, урамшууллын хэлхээний үйл ажиллагааг дарангуйлдаг болохыг харуулж байна29, 3, 27, 30.

Илүүдэл жинтэй хархнуудын шагналын алдагдал нь тархины урамшууллын хэлхээний мэдрэмжийг бууруулж, тааламжтай хоол хүнсээр хэт их өдөөхөд нь сөргөөр нөлөөлж болзошгүй юм. Ийм хоолны дэглэмээс үүдэлтэй урамшууллын гипофункци нь энэхүү сөрөг урамшууллын төлөв байдлаас зайлсхийх эсвэл багасгахын тулд өндөр урамшуулалтай 'өөх тос ихтэй хоол хүнс хэрэглэх сэдлийг нэмэгдүүлэх замаар таргалалтын хөгжилд хувь нэмэр оруулах болно6, 32. Энэ нь бидний өргөтгөсөн хандалтын явцад ажиглагдсан гипофаги байж болзошгүй юм. амтат хоолыг татан авч, зөвхөн тааламжгүй хоол идэх боломжтой үед харх, хязгаарлагдмал хандалттай харх бага хэмжээгээр Ийм хувилбар нь хүний ​​тархины дүрслэх судалгааны үр дүнд өндөр амттай хоолонд хариу үйлдэл үзүүлэхийн тулд стриатумыг бүдгэрүүлсэн идэвхжүүлэлт, ялангуяа генийн полиморфизм бүхий стриаталь D2R-ийн илэрхийлэл буурдаг гэж үздэг хүмүүст урт хугацааны жингийн өсөлттэй холбоотой байдаг. Таргалалттай хүмүүст ийм хэт мэдрэмтгий байдал нь хэт таргалалт үүсэхээс өмнө илэрч, зөвхөн генетикийн хүчин зүйлүүд ("шагналын хомсдлын хам шинж") -тэй холбоотой эсэх эсвэл хэт идэж уух нь шагнал боловсруулахад саад учруулж болзошгүй эсэх нь тодорхойгүй байна. Манай өгөгдөл нь өндөр энерги агуулсан хоолонд хүртээмжтэй хандах, хэт их бүдгэрүүлэх зэрэг нь мэдрэмжийг дээшлүүлдэг тул хэт таргалалтыг хөгжүүлэх чухал гедоник механизмыг төлөөлж болохыг харуулж байна. Таргалалттай хархуудад мэдээлэгдсэнтэй ижил төстэй шагналын дисфункцийг судсаар тарьсан кокаин эсвэл героины өөрөө удирдах эмчилгээнд нэвтрэх боломжийг өргөтгөсөн түүхтэй харханд ч илэрдэг боловч нэвтрэх эрх нь хязгаарлагдсан түүхэнд байдаггүй. 4, 12, 13. Түүнээс гадна Албадан мансууруулах бодис хайхад хялбар байх нь энэхүү эмийн урамшууллын дисфункциас үүдэлтэй буурсан урамшууллын тогтвортой байдлыг бууруулах оролдлогын үр дүнд бий болгохыг санал болгож байна14, 12, 32. Тиймээс таргалалт ба мансуурал донтох нь үндсэн гедоник механизмыг хуваалцаж болохыг харуулж байна.

Өргөтгөсөн D2R-ийн илэрхийлэл нь тааламжтай хоол хүнс хэтрүүлэн хэрэглэхэд мэдэгдэхүйц мэдрэлийн мэдрэлийн хариу урвал юм. Үнэн хэрэгтээ, striatal D2R нягтрал буурч байгаа нь илүүдэл жинтэй хувь хүмүүс 4, 34 ба мэрэгч амьтад 35, 36-д ажиглагддаг. Үүний эсрэгээр, хоолны дуршилгүй болсон хүмүүс стриатал D2R37-ийн хэмжээ ихэссэн бөгөөд бариатик (ходоодны давалтаар) мэс засал хийсний дараа таргалалттай хүмүүсийн жингийн алдагдал нь стриатал D2R нягтрал28-тай холбоотой юм. TaqIA A1 аллель гэж нэрлэгддэг генийн полиморфизм нь стриатал D2R нягтрал буурахад хүргэдэг бөгөөд энэ аллелийг агуулж буй хүмүүс хэт таргалалттай популяци4-т хэт их өртдөг. TaqIA allele нь архи, опиоид ба сэтгэц нөлөөт эмийг донтуулагч 38-ийн эмзэг байдлыг нэмэгдүүлдэг. Үрэвслийн генетик хүчин зүйлүүд эсвэл хэт их идсэний үр дүнд үүсдэг striatal D2R нягтрал буурах нь таргалалтын нейробиологийн механизмд нөлөөлдөг. Мембратай холбоотой D70R-ийг тусгасан гэж бодож байсан 2 kDa D2R изоформын стриатал түвшин нь зөвхөн chow, хязгаарлагдсан, өргөтгөсөн нэвтрэх бүлгүүдийн хархуудад биеийн жинтэй урвуу хамааралтай болохыг бид олж мэдсэн (Зураг 4). Дөрвөлжин хөргөгчинд (2-ийн зураг) хамгийн ихээр илэрдэг хөрс хуулалтын D5R-ийн илэрхийлэл нь цайны хоолны дэглэмд орсны дараа BSR-ийн босго хэмжээг даруй даруй нэмэгдүүлжээ. Стрриатал D2R-ийн илэрхийлэл буурах нь хэт тансаг хоол хүнсээр дамждаг хархуудад шагналын гипофункц үүсэхийг түргэсгэж, striatal D2R нягтрал дахь дутагдал нь хэт таргалалттай хүмүүст 4-ийн урамшууллын гипофункцийг нэмэгдүүлдэг болохыг харуулсан хүний ​​тархины зураглалын мэдээлэлтэй нийцэж байна.

Lenti-D2Rsh хархнуудын гурван шинж чанар нь бас анхаарах зүйл биш юм. Нэгдүгээрт, striatal D2R-ийн цохилт нь амттаны хоолны дэглэмийг өргөтгөх боломжийг нэмэгдүүлснээр BSR-ийн босго хэмжээг ихэсгэсэн боловч эдгээр хархуудад илчлэг ихтэй эсвэл жин нэмэгдэхэд ялгаа байхгүй байна. Энэ нь хархнууд нь цайны газрын хоолны дэглэмд зөвхөн 14 д нэвтрэх эрхтэй болохыг харуулж магадгүй юм; удаан хугацаагаар нэвтрэх нь цаг хугацааны явцад илүүдэл жинтэй хүмүүс D2R дохио4-ийн дутагдалтай хүмүүст илүүдэл жин нэмэгдэхэд хүргэж болзошгүй байсан. Гэсэн хэдий ч цайны газрын хоолны дэглэмийг зөвхөн 14 d-ээр хязгаарлах давуу тал нь өргөтгөсөн хандалттай цохилсон хархнууд нь BSR-ийн өндөр босгыг харуулсан цорын ганц бүлэг байсан бөгөөд энэ нь албадан хөгжихөд шагналын гипофункцийн боломжит үүргийг үнэлэх боломжийг бидэнд олгосон юм. хооллох (доороос үзнэ үү). Хоёрдугаарт, зөвхөн chow-д нэвтрэх боломжтой байсан хархуудад BSR босго тогтвортой, өөрчлөгдөөгүй байв. Энэ нь хөнгөлөлттэй D2R илэрхийлэл дангаараа шагналын хэт мэдрэг байдлыг өдөөхөд хангалтгүй байгааг харуулж байна; үүний оронд энэ нь буурсан шагналын мэдрэмжийг хурдасгахын тулд тааламжтай хоол хүнс хэт их хэрэглээтэй харьцаж байх шиг байна. Тиймээс тархины шагналын эргэлтийн бусад дасан зохицох хариу урвал нь цайны газрын хоолны дэглэмд нэвтрэх боломж өндөртэй хархуудад шагналын хэт мэдрэмтгий байдлыг өдөөж болно. Үүнийг анхаарч үзэхэд D2R агонист бромокриптин нь leptin39-ийн эргэлтийн түвшинг бууруулж, лептин нь хоол хүнс, хоол хүнсний найрлага дахь гетоник хариу урвалыг хянадаг striatal region-ыг дарангуйлж, хоол тэжээлийг дарангуйлдаг болохыг тэмдэглэж байна. Ийнхүү биеийн жин нэмэгдэж байгаатай холбогдуулан striatal D3R-ийг багасгах нь лептины дохиог нэмэгдүүлж, улмаар энэ адипокины тархины шагналын систем дэх дарангуйлах нөлөөг нэмэгдүүлдэг. Эцэст нь хэлэхэд бид лентивирусын векторуудаа dorsolateral striatum руу чиглүүлсэн болохыг тэмдэглэж байна. Энэ нь юун түрүүнд техникийн шалтгаанаас болсон, учир нь вирусыг судлын суваг руу хажуу тийш байрлуулах нь BSR-ийн босго хэмжээг тогтоох зорилгоор дотоод гипоталамусыг өдөөдөг электродыг байрлуулах боломжийг бидэнд олгосон юм. Тиймээс DRINUMXR-ийг striatum-ийн бусад хэсэгт цохиход чиглэсэн, ялангуяа доромеди болон ховдолын бүсэд (nucleus accumbens core and shell) тохиромжгүй хоол хүнс байхгүй байсан ч BSR-ийн босго хэмжээг өндөрсгөж магадгүй юм.

Нурууны хажуугийн стриатум нь өдөөлтөд хариу өгөх зуршлын хэлбэрийг сурахад ихээхэн хамааралтай байсан бөгөөд энэ нь ханалтын өмнө хооллох эсвэл хортой өдөөгчтэй хослуулах замаар үнэ цэнийн бууралтыг мэдрэх чадваргүй зан үйлийг хөгжүүлэхэд тусгалаа олсон байдаг40. Дорсолат стриатумыг голчлон чиглүүлснээр бид хархыг албадан хооллоход эмзэг байдлыг зохицуулдаг D2R-ийн популяцийг унагасан байж магадгүй юм. Стриаталь D2R-ийг албадлагын зан үйлийн үүрэг ролийн дагуу хүний ​​DRD2-ANKK1 генийн локусын TaqIA аллель нь стриаталь D2R нягтрал 5-ыг үүсгэдэг, амттай хоолонд хариу болгон стриаталь идэвхжүүлэлтийг бүдгэрүүлж, таргалалтад өртөмтгий байдлыг 4 нэмэгдүүлдэг. сөрөг үр дагавартай үйлдлээс зайлсхийж сурах хомсдол4. Сөрөг үр дүнд хүргэж болзошгүй зан авирыг дарангуйлах хяналтаа алдах нь нийгэм, эрүүл мэнд, санхүүгийн сөрөг үр дагаврыг үл харгалзан хэрэглээний зан үйл хэвээр үлддэг таргалалт ба мансуурах донтолтын аль алиных нь онцлог шинж юм. Мансууруулах бодис их хэмжээгээр хэрэглэж байсан түүхтэй харханд кокаин хэрэглэх нь уян хатан болж, сөрөг үр дагаврыг (хөлний цочрол) урьдчилан таамаглаж буй нөхцөлт өдөөлтийг тасалдуулахад тэсвэртэй болдог. Үүнтэй адил өөх тос ихтэй хоолонд урьд өмнө нэвтрэх боломжтой байсан хулгана нь хоолны дэглэм барьж үзээгүй хулгануудаас илүү тааламжтай хоол хүнс олж авахад таагүй орчинд (хурц гэрэлтэй) илүү их цаг зарцуулах болно. Цайны газрын хоолны дэглэмийг өргөтгөсөн хархнуудын идэш тэжээлийн хэрэглээ нь агааржуулагч нөхцөлт өдөөлттэй ижил төстэй мэдрэмжгүй болохыг олж мэдсэн. Энэ нөлөөнд стриаталь D41R-ийн үүрэг гүйцэтгэдэг тул хоолны өмнө хоолны дэглэмийг 18 хоногоор өргөжүүлж байсан боловч хяналтын бүлэгт хамрагдаагүй байсан D42R цоолборлох хархнаас албадлагын шинж чанартай хоол идэх нь тогтоогджээ. Мэдрэлийн судлын үүднээс авч үзвэл амттай хоолонд хүртээмжтэй хандах нь кортикостриаталь замд уян хатан байдлыг өдөөж улмаар амьтдыг албадлагын шинжтэй зан төлөвт илүү өртөмтгий болгож, стриаталь D2R дохионы алдагдал энэ үйл явцыг сайжруулж болзошгүй юм. Үнэндээ тарган хүмүүст стриаталь D2R нягтрал буурч байгаа нь зан төлөвийг дарангуйлах хяналтыг бий болгодог prefrontal ба orbitofrontal cortical14 дахь метаболизм буурсантай холбоотой юм.

Тодруулбал, тааламжтай хоол хүнсийг албадан хоолонд хэрэглэх нь зөвхөн цайны газрын хоолны дэглэмд урьд өмнө нэвтэрч байсан хяналттай хархуудад биш, харин ижил хугацаанд кафены хоолны дэглэмд нэвтрэхийг хориглосон хархуудад ч биш, бас эвдэрсэн хархуудад ч илэрсэн. chow-зөвхөн нэвтрэх. Урьдчилан өргөтгөсөн хандалттай хараалтын болон бусад бүлгүүдийн хоорондох гол ялгаа нь тэдний BSR-ийн босгыг тогтмол өсгөсөн байв. Энэ нь шагналын гипофункцийн нийтлэг нейробиологийн гарал үүсэл, түр зуурын давхцал боловч бие даасан үзэгдэл болох албадан хоол идэхтэй холбоотой үүсдэг. Эсвэл хоолны дэглэмээс үүдэлтэй урамшууллын гипофункц нь сөрөг арматурын субстрат болж үйлчилдэг бөгөөд энэ нь албадан хооллолт 14, 32, 33 зэрэг хөгжлийг хөнгөвчилдөг. Ямар ч байсан ямар ч механизм байдаггүй нь бидний олж мэдсэнээр тааламжтай хоолонд донтохтой төстэй хариу урвал нь таргалалттай хархуудад үүсч болох бөгөөд striatal D2R дохионы дутагдал нь энэ зан үйлийн хөгжилд эмзэг байдлыг нэмэгдүүлдэг болохыг харуулж байна.

Дүгнэж хэлэхэд, тааламжтай, энерги ихтэй хоол хүнс хэт их хэрэглэснээр тархины шагналын системийг хэт их өдөөх нь шагналын хэт мэдрэг байдал, албадан хоол идэх чадварыг нэмэгдүүлдэг болохыг бид олж мэдсэн. Хэт таргалалттай хархуудад эдгээр буруу чиглэсэн хариу үйлдэл нь striatal D2R дохиоллын хоол тэжээлийн дутагдалаас үүдэлтэй байж магадгүй юм. Мансууруулах бодисыг хэтрүүлэн хэрэглэх нь D2R-ийн нягтралыг бууруулж, шагналын гипофункцийг өдөөж, мансууруулах бодис хэрэглэдэг албадлагын хэлбэрийг бий болгодог. Тиймээс бидний олж мэдсэн зүйлүүд тархи, мансууруулах бодис донтох нь тархины урамшууллын хэлхээнд ижил төстэй мэдрэлийн системийн хариу урвалаас үүдэлтэй болохыг харуулж буй өмнөх 4, 19, 42, 45, 46, 47.

арга

Хархнууд.

Туршилтын эхэн үед 300-350 г жинтэй эр Wistar хархуудыг Чарльз голоос олж авав. Ирсэний дараа хархнууд нь 12 цаг гэрэлтэй, харанхуй эргэлт дээр тогтмол температурт тус тусад нь байрлуулсан (2200 цаг дээр асдаг). Туршилтын хугацаанд хархуудад стандарт лабораторийн лабораторийн chow болон усыг нэвтрэхийг зөвшөөрөв. Бүх процедурыг Флоридагийн Скриппс мужийн амьтны асрамж, ашиглалтын хороо баталж, амьтдыг арчлах зарчмуудын талаар Эрүүл мэндийн үндэсний хүрээлэнгээс гаргасан удирдамжийн дагуу хархыг эмчилжээ.

Мэс заслын журам.

BSR-ийг өдөөх электродуудтай бэлдсэн хархыг эхлээд 1-3% изофлураны хүчилтөрөгчөөр амьсгалж, стереоаксик хүрээ (Kopf) -д байрлуулна. Bipolar BSR электродууд (11 мм урт) хойд талын гипоталамус руу (антеропостериор, үүлнээс g0.5 мм; дунд зэргээс, дунд шугамаас ± 1.7 мм; дурсовентрал, DN-ээс 8.3 мм; зүсэлт барийг interaural шугамаас дээш 5 мм-ээр тохируулав. ) 47. Вирусын тарилгыг хүлээн авсан хархуудыг мөн striatum дээрээс байрлуулсан хоёр талын гарын авлага (23 хэмжигч, 14 мм урт) (anteroposterior, bregma-ээс 2.8 мм; дунд шугамаас ± 3.1 мм; dorsoventral, ura2.4 mm) 48-ээр дүүргэж, дүүргэсэн. 14-мм-ийн хэв маягаар. Зэвэрдэггүй ган гавлын дөрвөн эрэг, шүдний нийлэг нь электрод, каннулийг байрандаа байрлуулсан байв. Мэс заслын дараа шархыг 12 цаг тутамд 5 цаг тутамд нэг удаа антибиотикоор эмчилдэг. Хархнууд 7-10 d-ийг мэс заслаас эдгэрэхийг зөвшөөрч, дараа нь BSR босго журамд сургасан.

BSR журам.

Хархнууд өөр газар 10, 14-той адил төстэй дискримент туршилтын одоогийн-босго горимын дагуу хариу арга хэмжээ авахаар сургасан. Товчхон хэлбэл, BSR-ийн одоогийн түвшинүүд нь 5-μA алхам дахь ээлжлэн буурах ба дээшлэх цувралууд дээр өөрчлөгдсөн байв. Шалгалтын туршид ээлжлэн буурах / өсөх дөрвөн цувралыг танилцуулсан болно. Цуврал тус бүрийн босго нь таван туршилтын гурваас гурваас доош нь харвалтад хариу үйлдэл үзүүлсэн хоёр дараалсан одоогийн эрчим ба дунджаар хоёр удаа дараалсан гүйдлийн хоорондох харьцаа нь таван туршилтын гурваас дээшхи хугацаанд хариу ирээгүй байна. Хуралдааны ерөнхий босгыг дөрвөн бие даасан цувралын босгуудын дундаж гэж тодорхойлсон. Туршилтын хэсэг бүр ойролцоогоор 30 минутын хугацаатай байв. Тогтвортой BSR босго хэмжээг 10-ийн дараалсан өдрийн босго онуудад ≤5% -ийн өөрчлөлт гэж тодорхойлсон бөгөөд энэ нь ихэвчлэн 10 – 14 d сургалтын дараа тогтоогдсон байдаг. Тестийн хуралдаан бүрийн хариултын хоцрогдол нь эерэг хариу гарсан бүх туршилтуудын дундаж хариу хоцрогдол гэж тодорхойлогдсон.

Вирусын баглаа боодол, хүргэлт.

Богино үсний хавчаар РНХ-г pRNAT-U6.2 / Lenti векторын систем (GenScript) ашиглан хүргэж, үндсэн илэрхийлэл болгосон. Вирусын тоосонцорыг үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу бэлтгэсэн. Товчхондоо HEK 293FT эсийг shRNA оруулгатай вектороор (5′-GGATCCCGCGCAGCAGTCGAGCTTTCTTCAAGAGAGAAAGCTCGACTGCTGCGCTTTTTTCCAACTCGAG-3 ′) эсвэл хоосон вектороор нэмж, hira 72-ийг оруулаад (hira) Дараа нь супернатант цуглуулж, хэт центрифугаци (24г, Бекман Коултер SW 76,755 TI ротор., 32 мин, 90 ° C) -аар баяжуулж, вирусын титрийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу флюресцентаар идэвхжүүлсэн эсийн ангиллаар тодорхойлов. Вирусыг ялган авч, гэрлийн хамгаалалттай хайрцагт -4 ° C температурт ашиглах хүртэл хадгалсан.

Тогтвортой BSR-ийн босго хэмжээтэй хархнууд тархины тархи тус бүрт гурван байрлалд вирусын тарилга (тарилгын тутамд 2 мкл, 1 мкл мин − 1, 1 мин, тарилгын хооронд нийт зургаан тарилга) хүлээн авсан. BSR-ийн босго үнэлгээг дахин эхлэхээс өмнө хархыг дор хаяж 2-3 d интрастиаталь тарилга хийлгэхийг зөвшөөрсөн. Өдөр бүр BSR-ийн босго үнэлгээ нь хархыг цайны газрын хоолны дэглэмд оруулахаас өмнө вирусын тарилга хийсний дараа 33 d-ийн турш үргэлжилж байв. Эдгээр 2 d-ийн үеэр Lenti-control ба Lenti-D2Rsh харх хооронд BSR босго зөрүү байсангүй (өгөгдөл харуулаагүй).

Immunoblotting.

Хархнууд ойролцоогоор 1 цагийн дараа цайны газрын хоолны дэглэмд орж, тархи хурдан арилдаг байв. ~ 1-2 мм-ийн зузаантай тархины хэсгүүдийг тархины титэм матриц (1-мм-ийн зүсэлтийн интервал; Хуванцар нэг) -ийг мөсөн блок дээр байрлуулж, нугасны striatum (bregma: ~ 2.2-ээс −0.26 мм) -ийн эд эсийг авсан. Залгиурын эдийн цохилтыг хурдан цуглуулж, түргэн хөлдөөж, ашиглах хүртэл −80 ° C температурт хадгална. Бие даасан дээжийг мөсөн дээр гэсгээж, хүртээмжтэй бүлгийн хамаарлын бүлгийн хуванцар (усан сан дахь 7-10-ийн хархнууд) дээр үндэслэн хөрсний эд эсийн тэнцүү хэмжээг цуглуулсан. Натрийн ортованадат, фосфатаза коктейлийн дарангуйлагч 500 ба 1 (Sigma-Aldrich), лейпептин, пепстатин агуулсан 2 мкл мөсний хүйтэн RIPA буфер (Thermo Scientific) -д дахин боловсруулагдсан. Нэхмэл лизатууд нь 10 минутын турш дээжийн буферт буцалгаж, 4% –20% эсвэл 10% Tris-glycine SDS (Invitrogen) гель рүү ачсан. Уураг нь нитроцеллюлозын мембран руу шилжиж, 1 цаг ~ ~ 23 – 25 ° C-т (тослоггүй хуурай сүү, 5% арван хоёр-0.2 хувь, рН 20), өдөртөө 7.4 ° C-т анхдагч эсрэгбие рүү өсгөв. Блокны уусмалд дараахь анхны эсрэгбиемүүдийг шингэлсэн: D4R хулганы моноклональ (Санта Круз, 2: 1) эсвэл β-актин хулганы моноклональ (Санта Круз, 100: 1). Химилюминесцент ECL урвалжийг тунхууны пероксидазаар холбосон хоёрдогч эсрэгбиемүүд (Amersham, 200: 1) өсгөвөрлөсний дараа нэмж оруулав. Насанд хүрэгчдийн мембрантай холбоотой хэлбэр D2,000DR (~ 2 кДа) 70, 17 нь уураг ачаалах хяналтанд (β-actin; 49 kDa) зохицуулж, NIH Image J програм хангамжийг ашиглан нягтометрээр хэмжигдэв.

Иммунохимийн шинжилгээ.

Хархнууд нь PBS (pH 4) дахь 7.6% параформальдегидтэй мэдээ алдуулж, транскардиаль аргаар боловсруулсан. Тархийг арилгаж, шөнийн турш постикс хийж, сахарозд (PBS дэх 30% уусмал, рН 7.4) дор хаяж 72 цаг хадгална. Хөлдөөсөн эдийн хэсгүүдийг (30 μm зузаантай) микротомиос цуглуулж, хаасан (3% BSA, 5% ямааны ийлдэс ба PBS дэх 0.3% Triton X-100) нь 1 цаг ~ ~ 23 – 25 ° C байна. Дараах анхдагч эсрэгбиемүүдийг блокийн уусмалд нэмж, 4 ° C-д нэг өдрийн турш өсгөвөрлөсөн: тахианы поликлоныг GFP (Abcam, 1: 1,000); туулайны моноклональ нь GFAP (Милипоре, 1: 1,000); хулганы моноклонал хэлбэртэй NeuN (Millipore, 1: 1,000). Хэсгийг ~ 23 – 25 ° C: тахианы эсрэг - 488-nm будаг (Жэксон ImmunoResearch, 1: 1,000), туулайн эсрэг-594-nm будгаар (Invitrogen, 1: 1,000) ), мөн хулганы эсрэг - 594-nm будаг (Invitrogen, 1: 1000). Хэсгүүд нь DAPI (Vector Labs) агуулсан Vectashield холбох хэрэгслээр суурилагдсан бөгөөд хучигдсан байв. Зургийг Olympus BX61 флюресцент микроскоп (× 2 зорилго) эсвэл Olympus confocal микроскоп (× 10 ба × 100 зорилтууд) ашиглан авсан.

Хооллох журам.

Хүнсний бүтээгдэхүүнийг сул ор дэрний материалаар бохирдуулахгүйн тулд хархыг цаасан ор дэрний цагаан хэрэглэл (альфа дэвсгэр; Хоньчинд зориулсан тусгай бичиг) тус тусад нь байрлуулсан байв. Цайны хоолны дэглэм нь хархуудад бэлэн болохоосоо өмнө тус тусад нь жинлэсэн гахайн мах, хиам, бяслаг, фунт бялуу, царцсан, шоколад зэргээс бүрдсэн байв. Цайны газрын хоолны дэглэмийн бүтээгдэхүүнийг жижиг төмөр хүлээн авалтанд нийлүүлсэн. Хоол тэжээлийн бүх хоол, түүний дотор лабораторийн стандарт шинжилгээг хооллох ажил дууссаны дараа дахин жинлэв. Төрөл бүрийн макронутриентуудаас авсан илчлэгийн хэмжээг үйлдвэрлэгчээс өгсөн тэжээлийн мэдээллийг ашиглан тооцоолсон.

Хоол тэжээлийн зан үйлийг дарангуйлдаг.

Тэжээлийн процедур нь BSR туршилтанд ашигласан хэмжээтэй ижил хэмжээтэй дуу чимээ багатай үйл ажиллагааны танхимуудад явагдсан. Хархыг мэс заслын өрөөнд байрлуулж, 30 минутын турш цайны газрын хоолны дэглэм эсвэл чоуг үзэх боломжтой байв. Хүнсний бүтээгдэхүүнийг жижиг төмөр саванд хийсэн. Бүх хоолыг хархны хэвийн хооллох үед хийдэг байсан хооллолтын өмнө ба дараа жигнэсэн. Чоугийн хэрэглээг хархуудын гэрийн торонд байрлуулсан холимог найрлагатай ижил төстэй 45 мг-ийн үрлэн үрлэн хэрэглээг үнэлэв. Дараа нь хархнуудад цайны газрын хоолны дэглэмийг өдөрт 30 минутын турш тогтвортой хооллох хүртлээ (өдөр тутмын хэрэглээний <10% хэлбэлзэл гэж тодорхойлсон) 5-7 г шаардагдана. Энэхүү суурь хугацаанд амтат хоол хүнсний хэрэглээг тогтворжуулсны дараа нэвтрэх нөхцөл тус бүрт хархыг шийтгэх (хөлний цочрол авсан хүмүүс) ба шийтгэлгүй (хөлийн цочрол аваагүй) гэсэн хоёр бүлэгт хуваарилав. Дараа нь хархнууд урьд өмнө нь амттай хоолоор үйлчлүүлж байсан нэг өрөөнд тасралтгүй дөрвөн удаа агааржуулалт хийлгэсэн. 30 минутын агааржуулалтын үеэр дохионы гэрлийг (нөхцөлт өдөөгч) 10 минутын турш идэвхжүүлж, 10 минутын турш унтрааж, дараа нь 10 минутын турш буцааж асаажээ. Шийтгэгдсэн хархнууд зөвхөн дохионы гэрлийг танилцуулах үеэр хөлний цочрол авсан (0.5 мА 1.0 секундын турш; ~ 10 минутын зайтай 1 сэрэл). Шийтгэгдээгүй хархнуудад дохионы гэрлийг мөн ийм байдлаар бэлэглэсэн боловч хөлийн цочролгүй хүргэв. Туршилтын өдөр, эцсийн агааржуулалтын хуралдааны маргааш, шийтгэгдсэн бүлгүүдийн хархнууд хөлний үе үе цочролд орсон (нийт таван өдөөлт) дохионы гэрлийг 5 минутын турш идэвхжүүлсэн. Шийтгэгдээгүй хархнууд хөлийн цочролгүй байсан тул дохионы гэрэлд дахин өртөв. 5 минутын шийтгэлийн хугацаа дууссаны дараа нөхцөлт өдөөлтийг үе үе идэвхжүүлж (30 минутын дохио асааж, 10 минутын дохио асааж, 10 минутын дохио асааж) бүх хоолонд 10 минутын турш хоолонд нэвтрэхийг зөвшөөрөв.

Статистикийн дүн шинжилгээ.

Урамшууллын суурь босго хэмжээг сэдэв тус бүрт цайны газрын хоолны дэглэмд орохоос өмнө 5 d-ийн дундаж босго утгыг тодорхойлсон. Шагналын босгыг суурь босго утгаас хувиар өөрчлөгдсөн байдлаар илэрхийлсэн. Шагналын үндсэн босго хэмжээ, жингийн өсөлт, илчлэгийн хэрэглээ, өөх тосноос авах илчлэгийн хэрэглээний өгөгдлийг хоёр хүчин зүйлээр, зөрчлийг давтан хэмжих шинжилгээ, хандах хандалттай (зөвхөн chow, хязгаарлагдсан нэвтрэх эсвэл өргөтгөсөн нэвтрэх боломж), илчлэгийн эх үүсвэр ( стандарт chow эсвэл цайны газрын хоолны дэглэм), вирус (Lenti-хяналт эсвэл Lenti-D2Rsh) ба cue (хосоор нь эсвэл шийтгэлгүй хослуулсан) нь субьект хоорондын хүчин зүйл, цаг хугацааны хувьд субьект хоорондын хүчин зүйл юм. Шаардлагатай тохиолдолд өөрчлөлтийн шинжилгээний үндсэн үр нөлөөг Бонферроний дараахь hoc тестийн дагуу дахин судлав. Бүх статистик дүн шинжилгээг GraphPad Prism програм ашиглан хийсэн.

Ашигласан материал

Ашигласан материал

Харилцаа холбоо:

· Пол Ж Кенни ([имэйлээр хамгаалагдсан])