Урьд Сэтгэцийн эмгэг. 2018; 9: 81.
Нийтэлсэн онлайн байна 2018 Mar 12. doi: 10.3389 / fpsyt.2018.00081
PMCID: PMC5858605
PMID: 29593587
Минхо Ли,1,† Hyeyoung Чо,2,3,† Сэүн Хён Юн,2,4 Seon-Hee Иим,2 Сэүн-Мин Чо,2,3 Ji-Won Чун,5 Со-Хён Пэйк,5 Yae Eun Park,6,7 Dong Huey Cheon,7,8 Жи Еюн Ли,7 Jung-seok Choi,9 Дай-Жин Ким,5,* болон Yүн-Jun Чүн1,2,3,*
Товч
Ерөнхий мэдээлэл
Интернет болон онлайн тоглоомын донтуулдаг хэрэглээ нь Интернэтийн тоглоомын эмгэг (IGD) гэж нэрлэгддэг сэтгэцийн эмгэг юм. Өөрчлөгдсөн микроRNA (miRNA) илэрхийлэл нь сэтгэцийн тодорхой эмгэгтэй өвчтөнүүдийн цус, тархины эдэд илэрч, биомаркераар санал болгосон. Гэсэн хэдий ч ОУГБ-ын цусны miRNA профайлыг тайлагнах талаар мэдээлэл алга байна.
арга
IGD -тай холбоотой miRNA-ийг илрүүлэхийн тулд бид TaqMan Low Density miRNA массив ашиглан 51 дээжийн (25 IGD болон 26 хяналт) -ын miRNA экспрессийн горимуудыг шинжлэв. Баталгаажуулалтын хувьд бид тоон аргаар транскрипцын ПГУ-д 36 хараат бус дээж (20 IGD болон 16 хяналтуудтай) хийсэн.
үр дүн
Нээлт, бие даасан баталгаажуулалтаар бид гурван miRNA-г (Hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) тодорхойлсон. Бүх гурван miRNA хувирал бүхий хүмүүс нь IGD-ийн өөрчлөлттэй харьцуулахад илүү өндөр эрсдэлтэй байсан ба өөрчлөгдөөгүй miRNA-той байсан тоонуудаас хамаарч өөрчлөгдөж байсан ORS-ийн тунг нэмэгдүүлсэн. Гурван miRNA-ийн таамагласан зорилтот генууд мэдрэлийн замуудтай холбоотой байв. Бид баруун бүсийн гурван зорилтот генийн уургийн илэрхийлэлийг судалж, GABRB22 болон DPYSL95-ийн илэрхийлэл нь IGD бүлгэмд илүү өндөр байгааг баталсан.
Дүгнэлт
Hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, болон hsa-miR-652-3p-ийн илэрхийллүүд нь IGD-ийн өвчтөнүүдэд зохицуулалт муу байсан. Бидний үр дүн нь ОУЗБ-ын эмгэг физиологи гэдгийг ойлгоход тустай.
Оршил
Интернет болон интернетэд суурилсан тоглоомуудад донтуулдаг хэрэглээ нь Интернэтийн өргөн хүрээний интернетийн дэд бүтэц бүхий улс орнуудад нийгмийн үзэгдэл биш юм. Гэхдээ сэтгэл мэдрэлийн эмгэг нь Интернэтийн тоглоомын эмгэг (IGD) гэж нэрлэгддэг1-3). Эпидемиологийн тайлангийн мэдээллээс үзэхэд өсвөр насны хүүхдийн дундах тархалтын түвшин 0.8-ээс 26.7% хүртэл4). Тухайлбал, Өмнөд Солонгос, Хятад, Тайван, Хонконг, Сингапур зэрэг Азийн олон оронд өсвөр насныханд 10%4). ОУГБ нь танин мэдэхүй, сэтгэц-нийгмийн харилцаа, өдөр тутмын амьдралд үнэ цэнийн бууралтад холбоотой байдаг; Жишээ нь, эрдэм шинжилгээний буюу ажлын гүйцэтгэл буурч байна4-7). IGD нь III бүлгийн (цаашид судлах нөхцөл) хэсэгт сэтгэцийн сэтгэцийн оношлогоо, статистикийн гарын авлагын (DSM-V) тав дахь засвар8). Гэсэн хэдий ч клиник-нийгмийн хувьд чухал ач холбогдолтой хэдий ч IGD-ийн цаана байгаа молекул генетикийн механизмын талаар бага мэдээлэлтэй байдаг.
Сүүлийн үеийн томоохон хэмжээний ихэр судалгаа нь IGD-ийн генетикийн үндэслэлийг санал болгосон (9, 10). Vink et al. Нидерландын Twin Register дээр 5,247 монозготик болон диггоготины өсвөр насны ихрүүдтэй харьцуулахад интернэтийн хэрэглээ нь интернетийн хэрэглээний ялгаатай байдлыг судалж, 48% нь генетикийн хүчин зүйлсээр тайлбарласан9). Li et al. Хятадын өсвөр насны ихрүүдийн 825 хосууд ажиглагдаж, генетикийн хүчин зүйлүүд нь 58-66%10). Иймд невропотрансмаци, танин мэдэхүйн болон генийн допамин рецептор D2 генийн пенриморфизмDRD2), катехоламин-О-метилтрансферазын ген (COMT), серотонины дамжуулагч ген (5HTTLPR), ба cholinergic рецептор никотиник альфа 4 ген (CHRNA4) нь Интернет донтолтын хувьд ихээхэн хамааралтай гэж мэдээлсэн (11-13). Саяхан Ким болон бусад дараагийн үеийн дарааллын шинжилгээгээр нейротрансмиттерийн үйлдвэрлэл, үйл ажиллагаа, бодисын солилцоонд хамаарах 100-ийн нэр дэвшүүлсэн генүүдээс илүү тодорхойлогдсон хувилбарууд болон rs2229910 NTRK3 ген нь IGD-тай холбоотой (14).
Генийн хүчин зүйлсээс гадна neurobehavioral phenotypes нь microRNAs (miRNAs) ордоггүй кодчилох РНХуудаар эпигенетикийн хяналтанд байдаг гэдгийг сайн мэддэг (15, 16). miRNA нь жижиг бус нэг кодчилсон РНХ молекул (ойролцоогоор 20-23 нуклеотидын урттай), уураг кодчилох генийг мRNA-г доройтуулж, олон янзын өвчний эмгэг жамын процесст чухал үүрэг гүйцэтгэдэг.17). Нотлох аргууд нь хүний төв мэдрэлийн систем (ЦСТ) -д miRNAs нь элбэг байдаг бөгөөд төв мэдрэлийн системийг боловсруулах, боловсроход оролцдог зорилтот генүүдийн илэрхийлэлийн түвшинг нарийн тааруулах15). Сүүлийн үед хийгдсэн судалгаанууд miRNA илэрхийлэл нь сэтгэцийн эмгэгтэй өвчтөний тархины эдэд өөрчлөгдөж байгааг илрүүлсэн бөгөөд тэдгээрийн илэрхийлэл нь сэтгэцийн эмгэгийн хувьд биомаркер байж болохыг харуулж байна (15, 16, 18). Жишээлбэл, дараах мѳрѳндѳрний шинжилгээгээр Лопез нар. Methanotropic glutamate receptor-1202 генийн илэрхийлэлийг зохицуулдаг miR-4-ийн илэрхийлэл ба антепрепресантт үзүүлэх хариу урвалыг урьдчилан таамагласан нь сэтгэлзүйн голомтот өвчтөнүүдийн prefrontal cortex эдэд19). Биомаркер шинжилгээнд энэ арга нь тодорхой хязгаарлалттай байдаг тул скрининг хийхэд биопси хийх нь боломжгүй юм. MiRNA нь цус (цусны ийлдэс эсвэл ийлдсэнд) илрэх тул miRNA-ийн эргэлт нь мэдрэлийн мэдрэлийн эмгэгийн үед инвазив бус биомаркеруудаас давуу талтай байдаг. Гэсэн хэдий ч одоогоор одоогоор МНGD-ийн микрометрийн профайлыг судалж үзээгүй байна. МГRNA-ийн экспрессийн рчл лтийг сайн ойлгох нь ХБОН н х гжлийн механизмыг тодотгож, клиник орчуулга хийхэд тусална.
Энэхүү судалгаанд ОУГБ-ын холбогдох miRNA маркеруудыг тодорхойлохын тулд ОУГБ ба хяналтын бүлгүүдийн хоорондын ялгавартай сийвэн бүлэглэлийн мониторингуудыг ажиглаж, тэдгээрийн биологийн үр дагаврыг судлах зорилготой байв.
Материал, арга зүй
Судлах сэдэв
Бид 3,166-ийн өсвөр насныхныг (12-18 нас) DSM-V IGD-ийн оноо ашиглан судалсан. Тэдний дунд 251 (168 эрэгтэй, 83 эмэгтэй) DSG-V шалгуурын дагуу IGD гэж оношлогдсон8). 91 хувь хүмүүс (49 IGDs болон 42 хяналтууд) энэ судалгаанд зориулж зөвшөөрөл өгсөн. Тэдний дундаас 4 хүнийг хасах шалгуурын дагуу хассан. Эцэст нь, энэхүү судалгаанд 87 (45 IGD-ийн хичээлүүд болон 42-ийн эрүүлийг хамгаалах хүмүүс) хамрагдсан болно. 51 оролцогчид (25 IGD-ийн өвчтөнүүд болон 26-ийн хяналтууд) 2014-ээс 2016-ээс тогтоосон нээлт болохоор бүртгэгдсэн байна. Бусад 36 оролцогчид (20 IGD-ийн өвчтөнүүд болон 16-ийн хяналтууд) 2016-ийн хараат бус баталгаажуулалтын багцаар элссэн. Бүх оролцогчид Сөүлийн Мэригийн эмнэлэг (Сөүл, Өмнөд Солонгос), Сөүлийн Үндэсний Их Сургуулийн Борамае эмнэлэг (Сөүл, Өмнөд Солонгос) зэргээс БНСУ-ын иргэдийг хамруулав. Бүх оролцогчид нь сэдэлтэй ярилцлагад өртсөн сэтгэцийн эмгэг судлаач, кризотрения (K-SADS-PL) Солонгосын Kiddie-ийн хуваарь20). Бүх оролцогч Солонгосын Хүүхдийн төлөөх Wechsler Intelligence Scale-ийн Блок дизайн, толь бичгийн дэд бүтэц, 4th edition (K-WISC-IV)21). Барраттыг ялгаварлан гадуурхах түвшин (BIS) (Imp.22). Behavioral Inhibitor System (BInS) ба Behavioral Activation System (BAS) хэмжээсийг хэмжихдээ биетийн хэмжээсийг үнэлэх зорилгоор хэмжсэн.23). Онцгой шалгуурын шалгуур нь өнгөрсөн болон одоогийн голлох эмгэгүүд (жишээ нь, чихрийн шижин), мэдрэлийн эмгэг (жишээ нь, хурц түргэсшил, толгойн гэмтэл), сэтгэл мэдрэлийн эмгэг (тухайлбал, их хэмжээний сэтгэл гутрал, сэтгэлийн хямрал), сэтгэцийн эмгэг, , тамхи, каннабис, архи). Судалгааны сэдвүүдийн ерөнхий шинж чанаруудыг Хүснэгтэнд нэгтгэн харуулав Хүснэгт1.1. Энэхүү судалгааг БНСУ-ын Католик их сургуулийн Анагаах ухааны коллежийн институцын хяналтын зөвлөлөөр баталсан (MC16SISI0120). Бүх оролцогчид болон тэдний эцэг эхчүүдэд бичгээр зөвшөөрөл өгсөн.
Хүснэгт 1
Судалгааны сэдвүүдийн ерөнхий шинж чанар.
| Discovery | Баталгаажуулалт | Нэгтгэсэн | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Control | IGD | P-хувь | Control | IGD | P-хувь | Control | IGD | P-хувь | |
| N | 26 | 25 | 16 | 20 | 42 | 45 | |||
| Нас (жил) | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 13 (12 - 17) | 13 (12 - 15) | 0.759 | 15 (13 - 18) | 14.5 (12 - 18) | 0.628 | 14 (12 - 18) | 14 (12 - 18) | 0.509 |
| Долоо хоногийн Интернет тоглоомын цаг (h) | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 5.25 (2 - 17) | 18 (6 - 46) | 1.27E-6a | 5.5 (2 - 23) | 8 (1 - 112) | 0.374 | 5.5 (2 - 23) | 14 (1 - 112) | 1.63E-5a |
| Єрхийн сарын орлого (сая вон) | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 5 (1 - 9) | 3 (1 - 9) | 0.588 | 4 (4 - 4) | 2 (2 - 2) | 1.000 | 5 (1 - 9) | 3 (1 - 9) | 0.460 |
| Боловсрол (жилээр) | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 8 (7 - 9) | 8 (7 - 9) | 0.584 | 12 (12 - 12) | 6 (6 - 13) | 0.305 | 8 (7 - 12) | 8 (6 - 13) | 0.269 |
| К-WISC: блок дизайн | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 10.5 (4 - 17) | 10 (4 - 16) | 0.544 | 10 (3 - 16) | 12.5 (4 - 15) | 0.125 | 10 (3 - 17) | 11 (4 - 16) | 0.598 |
| K-WISC: тайлбар толь | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 9 (5 - 17) | 7 (5 - 13) | 0.174 | 9.5 (8 - 15) | 11.5 (5 - 15) | 0.595 | 9 (5 - 17) | 9 (5 - 15) | 0.527 |
| KS | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 24 (17 - 36) | 37 (22 - 51) | 3.81E-6a | 29 (17 - 34) | 59 (22 - 108) | 1.2E-5a | 25 (17 - 36) | 40 (22 - 108) | 2.05E-10a |
| BIS | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 63 (35 - 75) | 67.5 (45 - 81) | 0.080 | 61 (45 - 79) | 63 (32 - 82) | 0.835 | 62 (35 - 79) | 65 (32 - 82) | 0.240 |
| BAS | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 31 (15 - 40) | 31 (13 - 51) | 0.558 | 36.5 (22 - 48) | 34 (27 - 52) | 1.000 | 32 (15 - 48) | 34 (13 - 52) | 0.637 |
| BInS | |||||||||
| Дундаж (хамгийн бага) | 18 (10 - 26) | 17.5 (13 - 27) | 0.642 | 18.5 (12 - 25) | 20 (13 - 21) | 0.138 | 18 (10 - 26) | 19 (13 - 27) | 0.302 |
IGD, Интернет тоглоомын өвчтөн; KS, Солонгосын интернетийн донтох байдал Тооцооллын цар хүрээ; BIS, Barratt Impulsivity Scale; BAS, зан төлөвийг идэвхжүүлэх систем; BInS, Behavioral Inhibition System; KRW, Солонгосын Won.
aP <0.05 (Манн-Уитни-Уилкоксон тест).
TaqMan Low density миНА массив (TLDA) туршилтууд
Захын цусыг оролцогч бүрээс цуглуулж, 4-ийн дотор лабораторид шилжүүлэхийн тулд цусны эсийн лизмийг багасгах. Сорьцыг өрөөний температурт 3,000 минутад 10 минутын туршид центрифугдүүлсэн байна. Дараа нь цусны эсийг бохирдуулалгүйгээр туйлын (плазмын давхарга) цуглуулсан. Микрагийн цацаргалтыг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу TaqMan miRNA ABC цэвэршүүлэх хэрэгсэл (Human Panel A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ашиглан гаргаж авсан. Товчоор хэлбэл, 50 μL сийвэнгийн дээж ба ABC буферийн 100 μL холилдсон байна. Гибридизацийн зорилтот өвөрмөц anti-miRNA соронзон бөмбөлгүүдийг бүхий нуклеотидын дараа миРНУ-ыг богиносгосон бол 100 μL электрусын буфер бүхий тооноос салгаж авсан. Шинээр илрүүлэх үе шатанд 381 сийвэнгийн дээж (51 IGDs болон 25 controls) -ийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу TaqMan miRNA ABC Цэвэршүүлэх Kit (Human Panel A, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) ашиглан шалгасан. Megaplex урвуу транскрипц болон өмнөх олшруулалтын урвалууд нь MegaplexPreAmp Primers Human Pool A болон TaqManPreAmp Master Mix (Thermo Fisher Scientific) ашиглан miRNA-ийн экспрессийн анализын хэмжээг нэмэгдүүлэх зорилгоор хийгдсэн. TLDA panel A v26 (Thermo Fisher Scientific) нь miRNA-ийн илэрхийлэлд үнэлэлт өгөхийн тулд ViiA2.0 бодит цагийн ПГУ систем (Thermo Fisher Scientific) дээр ажиллаж байсан. Түүхий өгөгдөлийг miRNA бүрт Ct утгыг тодорхойлохын тулд ExpressionSuite Software v7 (Thermo Fisher Scientific) ашиглан боловсруулсан болно.
TLDA-д зориулсан өгөгдлийн шинжилгээ
Бид эхлээд miRNA тус бүрийн босго мөчлөгийг (Ct утга) хэмжсэн. Ct утга> 35 бүхий miRNA-г илрүүлэх боломжгүй гэж үзсэн тул дараагийн шинжилгээнээс хасав. Бүх Ct утгуудыг хүний плазмаар эргэлддэг хамгийн тогтвортой илэрхийлэгдсэн miRNA-уудын нэг miR-374b (ΔCt утга) -ын Ct утга болгон хэвийн болгосон.24). Үзүүлэнгийн лог2 атугай өөрчлөлтийн харьцаа (ΔΔCt утга) Био-дамжуулагч дахь HTqPCR багцын калибратороор тодорхойлсон хяналтын дээжүүдийн дундаж утгыг тооцоолсон25). MiRNA зорилт тус бүрийн харьцангуй тоон утга (RQ) нь 2 гэж тодорхойлогддог-ΔΔCt. Хоёр бүлгээр илэрхийлэгдэх ялгавартай таамаглалыг туршиж үзсэний дагуу бид туршилтанд ашиглах зууралтын туршилт гэх мэт шинж чанаруудыг олж авахын тулд орлуулах хувьсах анализ (SVA) -ийг хэрэглэсэн. Сва био-дамжуулагчийн багц26). a P-<0.05 гэсэн утгыг хоёр бүлгийн хооронд мэдэгдэхүйц ялгаатай гэж үзсэн.
Генийн Тоо Баяжуулах шинжилгээ
Генийн баяжуулах анализын хувьд бид ToppGene Suite дахь ToppFun-ийг ашигласан27) Gene Ontology (GO) -ийг ихээхэн баяжуулсан28) нөхцөл, зам, өвчин эмгэг. Энэ хандлагын хувьд бид 1,230 нэр дэвшигч мRNA-ийн таамагласан генийг ашигласан. Кепг, БиоКарта, Реактом, ГенМИПП, MSigDBin-ийн ТоппГений замуудын дагуу урьдчилан таамагласан зорилтот генийн чухал замуудыг олж илрүүлэхэд ашигладаг. Ашигтай баяжуулах нөхцөлийн ач холбогдлыг Bonferroni-тохируулсан аргаар тодорхойлов P-хувь.
Транзит урвуу Transcription PCR (qRT-PCR) Баталгаажуулалт ба давталт
QRT-PCR нь TaRMan MicroRNA Assay (miR-10b-15p, #5; miR-000390b-26p, #5; miR-000407b-29p, # 3p, 000413; miR-125b-5p, #000449; miR-200c-3p, #002300; miR-337-5p, #002156; miR-411-5p, #001610; miR-423-5p, #002340; miR-483 -5p, #002338, miR-652-3p, #002352) болон ViiA7 систем (Life Technologies) үйлдвэрлэгчийн протоколын дагуу. Нийт РНХ-ийн 10 нанограммууд нь анхны-эгнээний cDNA-ийн хувьд miRNA-тодорхойлогдсон праймеруудаар TaqMan MicroRNA Урвуу Transcription Kit (#4366596, Life Technologies), дараа нь TaqMan Probes-тэй хамт PCR-тэй хийгдсэн. MiRNA-ийн RQ-ийг 2 гэж тодорхойлсон-ΔCt, ΔCt нь дотоод дээжинд (мRR-374b-5p, #001319) эсрэгээр хэвийнжүүлсэн дээжний хувьд босоо мөчлөгийн ялгаа юм. ПГУ-ын бүх хариу урвалыг гурван удаа хийж байсан ба тэдгээрийн дундажийг дундажлаж байсан. Бид массив дээр үндэслэсэн анализын аргаар л miRNA бүрийг лог2 атугай өөрчлөлтийн харьцаа (ΔΔCt) тооцоолсон. Параметрийн бус Mann-Whitney-Wilcoxon тест нь miRNA-ийн илэрхийлэлийн түвшингийн зөрүүг хоёр бүлэгт P0.05-ийн үнэлгээ.
Барууны бүдэг байдлын шинжилгээ
Сийвэнгийн дээж тус бүр нь дээд 14 өндөр элбэг уурагууд (цомог, иммуноглобулин G, иммуноглобулин А, серотрферрин, haptoglobin, альфа-1 antitrypsin, фибриноген, альфа-2 макроглобин, альфа-1 хүчил гликопротейн, иммуноглобулин M, apolipoprotein AI , apolipoprotein A-II, C3, transthyretin зэрэг) баруун талыг задлан шинжилэхээс өмнө MARS-14 багана (4.6 × 50 мм, Agilent технологи, Санта Клара, CA). MARS-14 баганаас авсан unbound фракц нь Amicon Ultracel-3 төвөөс зугтах шүүлтүүр (3 kDa таслалтын) ашиглан төвлөрч, дараа нь уургийн агууламжийг бикарбонин хүчлийг ашиглан тодорхойлно. Хэмжээ нь (10-ээс 30 мкг) хяналтын IGD сийвэнгийн дээжийг 4-20% Mini-PROTEAN TGX гель (Bio-Rad, CA, USA) дээр салган авч поливинилиден дифлюдид мембран руу шилжүүлсэн. Дараа нь 190% -ийн өөх тосыг хуурай орчинд 25-ийн минутанд TBS-T (7.5 mM NaCl, 0.05 mM Tris-HCl, pH 20, 5% Tween 30) хаагдсан. Дараа нь мембрануудыг DPYSL2 (1: 500, Novus Biologicals, Littleton, CO, USA) эсрэг, антибиотикуудаар өсгөвөрлөн, GABRB2 (1: 1000, Abcam, Cambridge, MA, USA), CNR1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology , АНУ), DUSP4 (1: 500, MybioSource, Сан Диего, АНУ), болон PI15 (1: 500, MybioSource, San Diego, CA) (5: 4, Santa Cruz Biotechnology) буюу ямааны эсрэг туулай (1: 1,000, Cell Signaling, Beverly, MA, АНУ) ) нь 1 h-д зориулсан тасалгааны температурт тунадасны пероксидазын концентрацитай холилдсон. Дохиоллыг илрүүлэх шинжилгээг ECL урвалжаар (GE эрүүл мэндийн үйлчилгээ, Piscataway, NJ, USA) ашиглан хийсэн. TotalLab 1,000D анализийн програм хангамжийг ашиглан баруун бүсийн үр дүнг тооцоолсон. (Non-linear Dynamics, Их Британи, Ньюкасле-Тэйн). Дараа нь densitometry харьцааны утгыг тооцоолсон дээжийн нягтаршруулагчийн утгаыг өөр газар29). Нормативыг хянахын тулд 46 IGD-аас цуглуулсан ийлдсэн дээжийг туршилт бүрт хяналтын дээжийг ашигласан болно. Статистикийн ач холбогдолыг параметрийн Mann-Whitney-Wilcoxon-ийн туршилтын аргаар босго тогтоосон P0.05-ийн үнэлгээ.
үр дүн
Судалгааны сэдвүүд
Судалгаанд хамрагдагсдын хүн ам зүй, эмнэлзүйн онцлогийг Хүснэгтэнд харуулав Хүснэгт1.1. Солонгосын Интернэтийн Донтох Тооцооллын Хуваарийн дагуу ОУГБ ба хяналтын бүлгүүдийг харьцуулсанK-Скал) өөр газар тайлбарласанчлан (20, 30), ОУГБ-ын бүлэг хяналтын бүлэгт харьцангуй өндөр утгатай K-Scale утгыг үзүүлсэн (37 vs. 24, P = 3.81 × 10-6) (Хүснэгт (Table1) .1). IGD бүлгийн Интернэтийн тоглоомд долоо хоногт зарцуулсан дундаж хугацаа нь хяналтаас (18 vs. 5.25 h, P = 1.27 × 10-6). Хэдийгээр насны бүлгүүд, сарын өрхийн орлого, боловсролын үргэлжлэх хугацаа, блок дизайн, үг хэллэг нь K-WISC, BIS, BInS, BAS гэсэн хоёр үгийн хоорондын ялгаагүй байна.
Өөр өөрөөр илэрхийлсэн MRI болон Хяналтын хоорондхи miRNA-ууд
IGD-associated miRNA-уудыг олохын тулд бид хоёр үе шаттайгаар (нээлт, бие даасан баталгаажуулалт) хандсан. Судалгааны дизайн болон ерөнхий стратеги нь S1-ийн нэмэлт материалын Зураг дээр үзүүлэв. Нээлтийн үе шатанд 51 дээжүүдийн (25 IGDs болон 26 controls) миRNA массивыг ашиглан 384 miRNA агуулсан мRRNA массивыг ашиглан хийсэн. 10 miRNA-ийн илэрхийлэлийн түвшин нь ОУГБ болон хяналтын бүлгүүдийн хоорондын ялгаа ихтэй байна (Хүснэгт (Table2) .2). Эдгээр 10 miRNA-ийн харьцангуй илэрхийлэлийн түвшинг Зураг дээр харуулав Зураг1.1. Тэдгээрийн дундаас хоёр (hsa-miR-423-5p болон hsa-miR-483-5p) зохицуулалттай байсан ба найман (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-411-5p, болон hsa-miR-652-3p).
Хүснэгт 2
Өөрөөр хэлбэл микроННУ (miRNAs) болон өөрчлөлтийг өөрчилнө.
| миРНА | Discovery | Баталгаажуулалт | Нэгтгэсэн | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| P-хувь | Өөрчлөлт дахин | P-хувь | Өөрчлөлт дахин | P-хувь | Өөрчлөлт дахин | |
| hsa-miR-15b-5p | 0.033 | 0.829 | 0.694 | 1.119 | 0.381 | 0.947 |
| hsa-miR-26b-5pa | 0.008 | 0.871 | 0.049 | 0.841 | 0.013 | 0.857 |
| hsa-miR-29b-3p | 0.005 | 0.400 | 0.560 | 1.187 | 0.089 | 0.647 |
| hsa-miR-125b-5p | 0.021 | 0.582 | 0.290 | 0.950 | 0.069 | 0.723 |
| hsa-miR-200c-3pa | 0.011 | 0.336 | 0.003 | 0.542 | 2.93 × 10-5 | 0.415 |
| hsa-miR-337c-5p | 0.009 | 0.385 | 0.582 | 0.872 | 0.020 | 0.553 |
| hsa-miR-411-5p | 0.004 | 0.322 | 0.336 | 1.282 | 0.158 | 0.595 |
| hsa-miR-423-5p | 0.026 | 1.387 | 0.189 | 0.955 | 0.518 | 1.175 |
| hsa-miR-483-5p | 0.018 | 1.861 | 0.765 | 1.413 | 0.211 | 1.647 |
| hsa-miR-652-3pa | 0.019 | 0.715 | 0.049 | 0.877 | 0.011 | 0.782 |
aМиRNA-ийн нээлтүүд болон баталгаажуулалтын багцуудыг хоёуланг нь тууштай өөрчилж чадсан.
qRT-ПГУ-ын нэр дэвшигч мRNA-ийн баталгаажуулалт
10-ийн нэр дэвшигч м рНХ-ийг баталгаажуулахын тулд бид бие даасан баталгаажуулалтын багц (20 IGDs болон 16 хяналтуудтай) qRT-ПГУ-ыг (S1 Хүснэгт Хүснэгтэнд нэмэлт байдлаар) гүйцэтгэсэн. Эдгээр miRNA-ийн 3 (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p болон hsa-miR-652-3p) нь баталгаажуулалтын багцын IGD бүлгүүдэд (Table2) .2). Бусад гурван miRNA (hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-125b, болон hsa-miR-423-5p) нь мөн IGD бүлэгт багтахааргүй байсан. Дөрвөн MiRNA-ууд үлдсэн (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-411-5p, мөн hsa-miR-423-5p) нь баталгаажуулалтын багцад илэрдэг. Бид нээлтийн болон баталгаажуулалтын багцыг хослуулсан үед (нийт 45 IGD субьектууд болон 42 хяналтууд) нийлмэл байсан бол баталгаажуулсан гурван miRNAs нь тогтмол байсан (Хүснэгт (Table2) .2). Дэлгэрэнгүй мэдээлэл, хромосомын байршил, гүйцэтгэлийн дараалал болон эдгээр гурван магмануудын төв мэдрэлийн төвшингийн түвшинг S2 Хүснэгт Хүснэгтэнд үзүүлэв.
ОУГБ-ын Эрсдлийн 3 нитратыг нэгэн зэрэг өөрчлөх
Гурван miRNA-ийн хосолсон үр нөлөөг үнэлэхийн тулд бид дөрвөн дэд бүлгийн саад тотгор (ORS) -ийг ажигласан (0, 1, 2, эсвэл 3 miRNA өөрчлөлтүүд). МНRNA өөрчлөлтийг Хэсэг дэх "RQ"Материал, арга зүй"Яруу найрагч бүх гурван маркерууд нь IGD группт зохицуулагдаагүй учраас RR нь 1-ээс доош байсан miRNA нь өөрчилсөн. Судалгааны субъект бүрийн RQ утгын талаарх дэлгэрэнгүй мэдээллийг нэмэлт материал дээр S3 хүснэгтэд үзүүлэв. Дэд бүлгүүдийн хувьд odds-ийг Хяналтын Удирдлагын тоон харьцааны тоог харьцуулсан харьцаагаар тооцоолсон бол, ОН тус бүрийн дэд бүлгийн магадлалыг нь miRNA-ийн өөрчлөлтгүйгээр дэд бүлгийн хувьд эрс ялгаатай тооцоолно. Гурван рНХ-ийн өөрчлөлтийн хувь хүмүүс miRNA өөрчлөлтгүйгээр 22-ээс их (22, 95% CI 2.29-211.11) -аас өндөр эрсдэлтэй байна. OR-ээс 0-ээс 3-ээс өөрчлөгдсөн мРННХ-ийн тоо өссөн хандлагатай байна (r2 = 0.996) (Зураг (Зураг22).
Нэр дэвшигч орнуудын Зорилтот генийн чиглэл ба чиглэлийн дүн шинжилгээ
МГННХ-ийн гурван маркын функцуудад ойлголтыг олж авахын тулд IGD бүлгийн түвшинд мэдэгдэхүйц хэмжээгээр буурсан бөгөөд тэдний зорилтот генүүд miRWalk 2.0 мэдээллийн санг ашиглан урьдчилан таамагласан (31). 1,230-ийн генүүд нь доод шатны зорилтыг 4 алгоритмаар (miRWalk, miRanda, RNA22, Targetscan) ашиглан урьдчилан тооцоолсон байдаг.32-34) (S4-ийн нэмэлт материал дахь хүснэгт). ToppGene Suite дахь ToppFun-ийн тусламжтайгаар генийн баяжуулсан шинжилгээгээр эдгээр miRNA-ийн зорилтот генүүд нь "Axon guidance", "neurogenesis" гэх мэт мэдрэлийн хөгжлийн замуудтай ихээхэн холбоотой байсан (S5 Хүснэгт SXNUMX).
Төлөвлөсөн зорилтот генийг илэрхийлэх
Гурван miRNA-ийн доод урсгалын генийн дотроос 140 хоёр буюу түүнээс дээш miRNA-ийн хувьд нэгэн зэрэг урьдчилан таамаглаж байна (Хүснэгт S4 Нэмэлт материал). Генийн доод урсгалын генийн агууламж нь ХДХВ ба хяналтын бүлгүүдийн хооронд ялгаатай байгааг бид судлахын тулд бид 2 генийг сонгон авсанDUSP4 болон PI15), 3 miRNA болон бусад 3 генийн доод урсгалд тооцогддогGABRB2, DPYSL2Болон CNR1) нь 2 miRNA-д таамаглаж байгаа бөгөөд 28 IGDs болон 28-ийн туршилтын сийвэнгийн сорьцтой баруун толбыг хийсэн. Бид өөр бүлэгт зааснаар хамтлагийн эрч хүч, талбайн хэмжээг хэмжих замаар ОУЗБ болон хяналтын бүлгүүдийн хоорондох таван зорилтыг илэрхийлсэн байна.29). Тэдгээрийн дотор DPYSL2 (28 IGDs болон 28 controls) P = 0.0037) ба GABBR2 (27 IGD ба 28 хяналт, P = 0.0052) нь IGD бүлэгт мэдэгдэхүйц өндөр байв (Зураг (Зураг3) .3). Гэхдээ бид CNR1-ийн ялгаатай илэрхийллийг ажиглаж чадсангүй (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443) ба PI15 (P = 0.6346).
хэлэлцүүлэг
МННХ нь мэдрэлийн хөгжилд оролцдог гэж мэдээлсэн (35, 36), тархины miRNA-ийн ялгаа нь schizophrenia (сэтгэцийн эмгэг)37). Тиймээс микро РНХ-ийн эргэлтүүд нь IGD-ийн хувьд ашигтай биомаркер байж болох юм. МиРНУ-ыг эргэлтэд оруулах нь neuropsychiatric өвөрмөц эмгэгүүдийн хувьд биомаркерууд гэж санал болгосон.38-40); Гэсэн хэдий ч ОУДС-ийн хөгжлийн молекул механизм нь клиник болон нийгмийн ач холбогдолтой хэдий ч одоогоор тодорхойгүй хэвээр байна. Ялангуяа ОУГБ-тай холбоотой маномнуудыг судалж үзээгүй болно. Энэ судалгааны зорилго нь хоёрдогч байсан. Нэгдүгээрт, бид IGD-тай холбоотой сийвэн дэх miRNA-үүдийг илрүүлэхийг оролдлоо. Хоёрдугаарт, бид микрННУ-ын нэр дэвшигчдийн биологийн үр дагаврыг уургийн илэрхийлэл, доод зорилтот генүүдийн GO-ийг судлах замаар үнэлэв. МиRNA илэрхийллийн профайл болон голдуу баталгаажуулалтыг геномоор бүхэлд нь шалгах замаар бид гурван miRNA (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) ХДХВ-ийн халдвартай өвчтөнүүдэд хяналтаас хамаагүй бага байдаг. Хэдийгээр бусад долоон эерэг нэр дэвшигчдийн илэрхийллийн хэв маягийг баталгаажуулах явцад хуулбарлаагүй боловч энэ судалгаанд жижиг түүврийн хэмжээгээр буруу сөрөг байж магадгүй юм. Манай мэдлэгийн хувьд, энэ нь цусны ийлдэс судлалын профайл нь IGD-ийн хувьд ашигтай биомаркер байж болох боломжийн талаарх анхны тайлан юм. МИНГА-ын гурван маркын хослол нь ОУГБ-ын эрсдэлд өртөж болзошгүй хүмүүсийг эрт илрүүлэх хамгийн бага хэрэгсэл болж чаддаг.
Энэхүү судалгаанд тодорхойлсон miRNA-ууд neuropsychiatric олон төрлийн эмгэгүүдэд хамааралтай гэж мэдээлсэн. Шизофрения зэрэг цочмог сэтгэцийн эмгэгийн үед цусан дахь hsa-miR-200c-ийн илэрхийлэл41) болон их хэмжээний сэтгэлийн дарамт (42). miR-200c нийт гаж ургасан байдалтай харьцуулахад synaptic fractions -д илүү ихээр илэрч байна (43) мөн мэдрэлийн эсийн үхэлтэй холбоотой байх (44). Эдгээр өмнөх тайлангууд дээр үндэслэн miR-200c нь мэдрэлийн хөгжилд оролцож, түүний мэдрэлийн эмгэгтэй холбоотой мэдрэл мэдрэлийн эмгэгтэй холбоотой байж болно. Хэд хэдэн судалгаанууд miR-652 болон невропатик эмгэгийн эмгэгийн хоорондох холбоог санал болгосон. Бидний арга барилтай адил, шизофренийн цусны биомаркеруудыг тодорхойлох, Лай нар. Шизофренийн өвчтөнүүд болон хэвийн хяналт бүхий TLDA шинжилгээг хийж, шизофрени өвчтөнд hsa-miR-652-г агуулсан долоон miRNA-ууд ялгаатай болохыг тогтоожээ (45). Дараачийн судалгаагаар тэд miRNA экспресс өгөгдлийг ашиглан таамаглалын загварыг боловсруулж, шизофренийг хэвийн хяналтаас ялгаж чадсан юм.46). Hsa-miR-652-ийн өөрчилсөн илэрхийлэл архины хэрэглээнд ажиглагдсан (47). Hsa-miR-26b мэдрэлийн эсийн ялгарлын үед идэвхжсэн болохыг тогтоосон48). Perkins et al. HSA-miR-26b нь шизофрени өвчний өмнөх хэвтээ гадаргуугийн49).
Хэдийгээр эдгээр miRNA-ийн эмзэг байдлын илэрхийлэл болон IGD-ийн эмгэгийн хоорондын холбоог дэмжих шууд нотолгоо байхгүй боловч бид эдгээр miRNA-ийн эмгэгжилт нь бидний урьдчилан таамагласан генийн доод генүүдийн талаарх өмнөх олон янзын тайлангуудад тулгуурлан ХДХВ-ийн эмгэг физиологитай холбоотой байж болно . Жишээ нь: гурван miRNA-ийн доод урсгалын зарим генүүд GABRB2, CNR1, NRXN1Болон DPYSL2 мэдрэлийн мэдрэлийн эмгэгтэй холбоотой гэж мэдээлдэг. Гамма-аминообутатрийн хүчил (GABA) нь төв мэдрэлийн эсийн дарангуйлагч нейтротрансмертер юм. GABA рецепторын эмгэг өөрчлөлт нь донтолт, сэтгэлийн зовиур, сэтгэлийн хямрал гэх мэт мэдрэл мэдрэлийн эмгэгүүдэд нөлөөлдөг (50(IGD-ийн гол шинж чанарууд)8). GABA рецепторийн генетик полиморфизм нь архины донтох болон шизофренитэй холбоотой байдаг51, 52). Dihydropyrimidinase-like 2 (DPYSL2) нь collapsin хариу медиаторын уургийн гэр бүлийн гишүүн бөгөөд микролубуляци, synaptic signaling, axonal growth-ийн зохицуулалтанд үүрэг гүйцэтгэдэг. Үүний үр дүнд энэ молекулыг сэтгэцийн эмгэг судлалын биомаркер гэж санал болгосон (53, 54). Полиморфизмд DPYSL2 Ген нь согтууруулах ундааны хэрэглээний эмгэгтэй холбоотой гэж мэдээлсэн (55). Өмнөх тайлан болон бидний өгөгдөл нь GABRB2 болон DPYSL2-ийн хэт давтамжийг багасгахад чиглэгддэг miRNAs-ийн доод зорилтууд нь IGD зэрэг мэдрэл сэтгэцийн эмгэгийн эмгэг жам үед нөлөөлдөг болохыг харуулж байна. Канабиноид рецепторын төрөл 1 (CNR1) нь presinaptic heteroreceptor юм. Каннабиноидын дохиоллыг neurotransmitter release болон гаж нөлөөг өөрчилдөг нь мэдрэлийн мэдрэлийн янз бүрийн эмгэгтэй холбоотой байдаг56). Генетикийн полиморфизм CNR1 ген нь Кавказ дахь бодисын хамааралтай холбоотой байдаг (57). Хулгайн загварт CNR1-ийн антиоксидазын Hippocampus-ийг идэвхжүүлэх нь нийгмийн хэвийн үйл ажиллагаа, танин мэдэхүйн58). NRXN-ийн гэр бүлийн генетик өөрчлөлт нь донтолт гэх мэт мэдрэлийн системийн мэдрэлийн эмгэгүүдэд хамаардаг59).
МРАХН-ийн гурван нэр дэвшигчийн биологийн үр дагаврыг илүү шууд утгаар нь судлахын тулд тэдний доод зорилтот генийн уургийн илэрхийлэлийг судалсан. Сийвэнгийн дээжийн хязгаарлагдмал байдал нь 140 нийтлэг нэр дэвшигчийн (2 буюу түүнээс илүү miRNA урсгалын доор урьдчилан таамагласан) 5 зорилтууд (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4, PI15) баруун талаас нь авч үзсэн бөгөөд GABRB2 ба DPYSL2 нь ОУГБ-ын бүлгүүдэд нэлээд өндөр байв. Өмнөх тайлан болон бидний өгөгдөл GABRB2 болон DPYSL2-ийн хэт давтамжийг багасгахад чиглэсэн миРНУ-уудаас доош чиглэсэн зорилтууд нь IGD зэрэг мэдрэлийн системийн эмгэгийн эмгэг жам үед нөлөөлж болохыг харуулж байна. Мэдрэлийн хөгжлийн үр дүн болон мэдрэлийн хөгжлийн замналыг судлах аргууд нь miRNA тэмдгийн невробиологийн нөлөөллийг дэмждэг. Өөр нэг сонирхолтой дүгнэлт бол miRNAs-ийг нэгэн зэрэг өөрчлөхөд үзүүлэх сериал нөлөө юм. 3 мРНХ-ыг бүхэлд нь доошлуулах эмчилгээ хийлгэсэн хүмүүс 22-ыг удаашралтай бус өвчнөөс өндөр эрсдэлтэй гэж үзсэн бөгөөд OR-ээс тун хамааралтай байдлаар нэмэгдсэн. Хэдийгээр CI нь эдгээр гурван өөрчлөлтийг хийсэн боловч хязгаарлагдмал түүврийн хэмжээ нь өргөн байсан боловч тодорхой эерэг корреляци (r2 = 0.996) нь гурван миРНХ-ийн синергист нөлөөг дэмждэг.
Хэдийгээр бид бүх IgGD-хамааралт miRNA маркерууд болон хүмүүсийг илрүүлсэн боловч miRNA өөрчлөлгүй 22-ээс өндөр эрсдэлтэй байсан боловч энэ судалгаанд хэд хэдэн хязгаарлалтууд байдаг. Нэгдүгээрт, жижиг түүврийн хэмжээ нь бусад чухал ач холбогдолтой miRNA маркерууд алдагдах магадлалыг нэмэгдүүлсэн. Хоёрдугаарт, манай өгөгдөл нь сийвэнгийн miRNA-ийн профайлууд нь шалтгаан, үр нөлөө аль нь болохыг тодруулахад хангалтгүй учраас бид эдгээр инвазив бус маркеруудын биологийн үүргийг эмнэлзүйн нөхцөлд баталгаажуулж чадахгүй. МННХ-ийн цаашдын генийн шинжилгээ болон тархины эд эсээс хүний тархины эдийг ашиглан тэдний генийн шинжилгээг илүү шууд хариулт өгөх боломжтой. Тоглоомын эмгэгтэй амьтны загвартай тархины эдийн шинжилгээг хийхэд тустай болно. Гуравдугаарт, сийвэнгийн сорьцын хязгаарлагдмал байдалтай байсан учраас бид зөвхөн доод 5 нэр дэвшигч молекулыг судалсан. IGD-ийн молекулын механизмыг илүү гүнзгийрүүлэн судлахын тулд илүү том түүвэр бүхий зорилтот чиглэлийг судлах нь зүйтэй.
Дүгнэж хэлэхэд, miRNA-ийн экспрессив профиль ба бие даасан баталгаажуулалтаар геномын өргөнөөр илрүүлэх замаар бид IGD-associated miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) гэсэн гурван илрэлийг олж илрүүлсэн. Тэдний доод генийн ихэнхийг мэдрэл мэдрэлийн эмгэгийн янз бүрийн эмгэгүүдэд хамруулдаг гэж мэдээлдэг бөгөөд эдгээр генийн өөрчлөлтийн илэрхийлэлд туршилтыг баталгаажуулах нь энэ судалгаанд тодорхойлсон miRNA-ийн нөлөөллийг дэмжиж байгаа юм. Гурав дахь сөрөг нөлөөнд өртсөн хувь хүмүүс нь ОУГБ-ын эрсдэл өндөртэй болохыг тогтоосон. Мэдэгдэж буй эмнэлзүйн болон хүрээлэн буй орчны эрсдэлт хүчин зүйлс, оношлогооны шалгууртай холбоотойгоор бидний олсон ололт амжилт нь ОУГБ-ын эрсдэл өндөртэй хүмүүст туслахын тулд эртнээс оролцож болно.
Ёс зүйн тайлбар
Энэхүү судалгааг БНСУ-ын Католик их сургуулийн Анагаах ухааны коллежийн институцын хяналтын зөвлөлөөр баталсан (MC16SISI0120). Бүх оролцогчид болон тэдний эцэг эхчүүдэд бичгээр зөвшөөрөл өгсөн.
Зохиогчдын оруулсан хувь нэмэр
ML, HC нь энэ баримт бичигт адил тэгш хувь нэмэр оруулсан. ML, D-JK, болон Y-JC загварыг боловсруулсан. SJ, S-MC, YP, DC, болон JL туршилт, өгөгдөл үүсгэсэн. J-WC, S-HP, J-SC, D-JK цусны дээж, клиник мэдээллийг цуглуулсан. ML, HC, S-HY, болон Y-JC анализ хийсэн. ML, HC, S-HY, болон Y-JC гар бичмэлийг тайлбарласан. Y-JC уг төслийг удирдаж байсан.
Сонирхлын зөрчлийн тухай мэдэгдэл
Судлаачид судалгааг сонирхлын зөрчилдөөн гэж ойлгож болох арилжааны болон санхүүгийн харилцааг байхгүй үед явуулсан гэж мэдэгдэж байсан.
Хөл тэмдэглэл
Санхүүжилт. Энэ ажлыг ШУА-ийн Яам, МХХТ ба Ирээдүйн төлөвлөлтийн (NRF-2015M3C7A1064778) санхүүжүүлсэн Солонгосын Үндэсний Судалгааны Сан (NRF) дамжуулан Тархины Судалгааны Хөтөлбөрөөс санхүүжүүлсэн.
Нэмэлт материал
Энэ нийтлэлийн нэмэлт материалыг интернетээс олж болно http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.
Ашигласан материал
;