Formazzjoni tas-sinsla dendritika kkaġunata mill-kokaina fid-D1 u d-D2 dopamine li fihom ir-riċettur tan-newroni medji fini fin-nukleu accumbens (2006)

Proc Natl Acad Sci US A. Frar 28, 2006; 103 (9): 3399 – 3404.
Ippubblikat onlajn Frar 21, 2006. doi:  10.1073 / pnas.0511244103
PMCID: PMC1413917
Newroxjenza
Dan l-artikolu ġie ċitat minn artikli oħra fil-PMC.

Astratt

Tibdil ikkaġunat mill-psikostimulant ta 'l-ispini dendritiċi fuq newroni dopaminoceptive fin-nukleu accumbens (NAcc) ġie ipoteżat bħala rispons newronali adattiv li huwa marbut ma' mġiba dipendenti li ddum. Il-biċċa l-kbira tan-NAcc huwa magħmul minn żewġ subpopolazzjonijiet distinti ta 'newroni mdawra ta' daqs medju li jesprimu livelli għoljin ta 'dopamine D1 jew D2 riċetturi. Fl-istudju preżenti, analizzajna d-densità tad-dahar tas-sinsla dendritika wara kura kronika kokaina f'DNNXX distinti jew D1 li fihom ir-riċettur newroni ta 'daqs medju fin-NAcc. Dawn l-istudji għamlu użu minn ġrieden transġeniċi li esprimew EGFP taħt il-kontroll tal-promotur tad-D2 jew tad-D1 (Drd2-EGFP jew Drd1-EGFP). Wara l-ġranet ta '2 ta' trattament bil-kokaina u ġranet ta 'rtirar ta' 28, id-densità tas-sinsla tad-dahar żdiedet kemm fin-newroni pożittivi ta 'Drd2-EGFP u kemm Drd1-EGFP. Madankollu, iż-żieda fid-densità tas-sinsla tad-dahar kienet miżmuma biss fin-newroni pożittivi ta 'Drd2-EGFP 1 ġranet wara l-irtirar tal-mediċina. Notevolment, żjieda fl-espressjoni osFosB kienet ukoll osservata fin-newroni pożittivi għal Drd30-EGFP- u Drd1-EGFP wara ġranet 2 tal-irtirar tal-mediċina iżda biss fin-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP wara 1 ġranet tal-irtirar tal-mediċina. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li ż-żieda fid-densità tas-sinsla tad-dahar osservata wara kura kronika kokaina hija stabbli biss fin-newroni li fihom ir-riċettur D30 u li l-espressjoni osFosB hija assoċjata mal-formazzjoni u / jew il-manutenzjoni ta 'l-ispini dendritiċi f'D1 kif ukoll newroni li fihom ir-riċettur D1 f'Nacc.

Il-passaġġ dopaminerġiku mesolimbiku huwa magħmul minn newroni fiż-żona tegmentali ventrali li jdawru l-nukleu accumbens (NAcc), it-tubercle li jinxtamm, il-kortiċi prefrontali, u l-amygdala (1), billi newroni dopaminerġiċi nigrostriatali fin-sustantia nigra (pars compacta) jipprovdu projezzjoni axxendenti għal striatum dorsali (2). Il-psikostimulanti jgħollu l-konċentrazzjonijiet sinaptiċi ta ’dopamine fin-NAcc: kokaina, billi jimblukkaw l-assorbiment tad-dopamine mill-qasma sinaptika, u l-amfetamini, billi jippromwovu r-rilaxx tad-dopamine mit-terminali tan-nervituri (3-5). Amministrazzjoni ripetuta ta ’psikostimulanti tirriżulta f’risposti ta’ mġiba miżjuda (sensitizzazzjoni) għall-effetti stimulatorji akuti ta ’dawn il-mediċini (6-8). Ħafna mill-linji ta ’evidenza jissuġġerixxu li bidliet adattivi fis-sistema dopaminerġika taż-żona tegmentali ventrali - NAcc huma ċentrali għal tibdil fil-plastiċità li tiddependi fuq l-esperjenza li hija l-bażi ta’ mġiba kkaġunata mid-droga.

Minbarra d-dopamine, il-glutamate huwa meħtieġ għall-iżvilupp ta 'sensitizzazzjoni fl-imġiba b'reazzjoni għal psikostimulanti (9, 10). Newroni tal-moffa ta 'daqs medju (MSNs) fi striatum ventrali jirċievu projezzjonijiet ta' glutamaterġiċi eċitatorji minn kortiċi prefrontalali li jaħsbuhom mal-irjus tal-ispina dendritiċi. L-MSNs huma wkoll il-mira ewlenija għall-axons dopaminerġiċi li jaħsdu fuq għonq tas-sinsla tad-dahar (1, 11, 12). Għalhekk, l-ispini dendritiċi fl-MSNs jirrappreżentaw il-kompartiment ċellulari fejn trasmissjoni dopaminerġika u glutamaterġika huma inizjalment integrati.

Dopamine jaġixxi fuq żewġ subfamilji tar-riċetturi maġġuri, is-subfamilja D1 (sottotipi D1 u D5) u s-subfamilja D2 (D2, D3, u sottotipi D4) (13). Fi striatum dorsali, studji anatomiċi wrew li MSNs ta 'striatonigral fihom livelli għolja ta' riċetturi D1 (flimkien ma 'sustanza P u dynorphin), filwaqt li MSNs striatopallidi prinċipalment jesprimu riċetturi D2 (flimkien ma' enkephalin) (14-17). Il-projezzjonijiet minn NAcc huma aktar kumplessi milli fl-istrijatum dorsali, bil-qoxra u partijiet ċentrali tan-NAcc jipproġettaw lejn sottoreġjuni distinti tal-pallidum ventrali u għaż-żona teġentali ventrali u sustia nigra (18). Billi r-riċetturi D2 u l-enkephalin huma espressi ħafna fi projezzjonijiet lejn il-pallidum ventrali, ir-riċetturi D1 u s-sustanza P jinstabu mqassma ndaqs fi projezzjonijiet għall-pallidum ventrali u ż-żona tegmentali ventrali (\ t19). Studji ta 'agonisti u antagonisti selettivi għar-riċetturi D1 jew D2 urew li kemm ir-riċetturi D1 u D2 huma meħtieġa għal bidliet fl-imġiba li jiddependu fuq il-psikostimulant (20-25). Madankollu, ir-rwoli ta 'dawn ir-riċetturi jidhru differenti. Pereżempju, l-istimulazzjoni tar-riċetturi D1 tnaqqas it-tfittxija tal-kokaina indotta minn injezzjonijiet ta 'priming tal-kokaina u informazzjoni ambjentali marbuta mal-kokaina, filwaqt li l-istimulazzjoni tar-riċetturi D2 tiffaċilita l-istabbiliment mill-ġdid indott mill-kokaina (26-28).

L-anormalitajiet fl-imġiba assoċjati ma ’dipendenza fuq il-psikostimulanza huma ta’ ħajja twila ħafna. Għalhekk, kien hemm interess konsiderevoli fl-identifikazzjoni ta 'bidliet fit-tul ikkaġunati mill-mediċina fil-livell molekulari u strutturali fiċ-ċirkwiti newronali rregolati bid-dopamine u l-glutamate (29-32). Notevolment, l-esponiment fit-tul għall-kokaina jew l-amfetamina nstab li jżid in-numru ta ’punti ta’ fergħat dendritiċi u l-ispina ta ’MSNs fin-NAcc (33-35). Dawn il-bidliet strutturali urew li jippersistu sa for1 – 3.5 xhur wara l-aħħar espożizzjoni għall-mediċina (30, 35) u ġew issuġġeriti li jkunu sottostanti għal tibdil fit-tul fil-plastiċità sinattika assoċjata ma ’espożizzjoni psikostimulanti.

L-għan ta 'l-istudju preżenti kien li jeżamina alterazzjonijiet strutturali kkaġunati mill-kokaina ta' l-ispini dendritiċi f'subpopolazzjonijiet ta 'MSNs li jakkumulaw li jesprimu jew riċetturi D1 jew D2. F'dawn l-istudji, użajna ġrieden transġeniċi tal-kromożomi artifiċjali batterjali (BAC) li jesprimu EGFP taħt il-kontroll ta 'D1 (Drd1-EGFP) jew D2 (Drd2-EGFP) promotur tar-riċettur tad-dopamina (36). Ir-riżultati jindikaw li, għalkemm fil-bidu d-densità miżjuda tas-sinsla tad-dahar isseħħ f 'MSNs li fihom ir-riċettur D1 u MSNs li fihom ir-riċettur D2, id-densità mibdula tas-sinsla tad-dahar hija stabbli biss fin-newroni li fihom ir-riċettur ta' D1. Barra minn hekk, insibu bidliet simili fl-espressjoni tal-fattur ta 'traskrizzjoni osFosB, u nissuġġerixxu li ΔFosB jista' jkun involut fil-formazzjoni u / jew il-manutenzjoni ta 'l-ispini dendritiċi fid-D1 kif ukoll in-newroni li fihom ir-riċettur D2 fin-NAcc.

Riżultati

Analiżi ta 'MSNs fi Drd1-EGFP u Drd2-EGFP BAC Transġeniċi Ġrieden.

Il-mudell tal-projezzjoni ta 'MSNs minn striatum dorsali u ventrali fi ġrieden transġeniċi Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP BAC ġie kkaratterizzat permezz ta' analiżi tal-espressjoni GFP (36). L-espressjoni differenzjali ta ’GFP f’SMNs ta’ striatum dorsali tikkorrispondi ġeneralment ma ’dik ta’ riċetturi endoġeniċi D1 jew D2, rispettivament (\ t36). Analizzajna wkoll l-espressjoni differenzjali tal-GFP fin-NAcc fil-ġrieden Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP (Fig. 1a u, b). Għalkemm ≈58% tan-newroni fin-NAcc esprimew GFP fil-ġrieden Drd1-EGFP (Fig. 1a), ≈48% tan-newroni fin-NAcc esprimew GFP fil-ġrieden Drd-2-EGFP (Fig. 1b). L-MSNs jirrappreżentaw 90 – 95% tan-newroni kollha fin-NAcc (12, 37). Riċetturi D1 huma espressi biss f'SMNs, u riċetturi D2 huma espressi f'SMNs u f'intereuroni kolinerġiċi, li jirrappreżentaw 1 – 3% ta 'newroni striatali (37). Meta jitqiesu dawn il-fatturi, ir-riżultati jissuġġerixxu li, minimu, ≈10 – 15% tal-MSNs fin-NAcc x'aktarx jesprimu kemm ir-riċetturi D1 kif ukoll D2.

Fig. 1. 

Analiżi tal-MSNs fil-ġrieden Drd1-EGFP u Drd2-EGFP. (a u, b) Biċċiet tal-moħħ fissi minn NAcc ta ’Drd1-EGFP (a) jew Drd2-EGFP (b) Ġrieden transġeniċi BAC kienu immunostained għal GFP u NeuN (bħala indikatur newronali ġenerali). L-istampi amalgamati juru, bl-isfar, kolokalizzazzjoni ...

Analiżi ta 'Spini Dendritiċi fil-Ġrieden Drd1-EGFP u Drd2-EGFP.

L-espressjoni tal-GFP fil-ġrieden Drd1-EGFP u Drd2-EGFP kienet utli biex tebgħat il-korpi taċ-ċelloli newronali. Madankollu, is-sinjal GFP fid-dendrites u fl-ispini dendritiċi kien dgħajjef wisq biex jippermetti l-analiżi tagħhom wara immunostaining b'antikorpi anti-GFP. Kunsinna ballistika medjata mill-partiċelli ta ’kuluri fluworexxenti reċentement intużat biex tikketta popolazzjonijiet newronali b’mod mgħaġġel u effiċjenti (38). Newroni kollha jistgħu jiġu ttikkettati bl-użu ta 'din it-teknika, u l-metodu jidher li huwa komparabbli ma' tbajja ta 'Golgi-Cox. Sabiex tiġi analizzata l-morfoloġija dendritika tan-newroni fin-NAcc, flieli ta 'l-akkumba fissi ġew ittikkettjati bil-lipofiliku fluworexxenza taż-żebgħa 1,1′-diotadecyl-3,3,3 ′, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) bl-użu ta' pistola tal-ġene. Eżempju ta 'MSN imtebba' DiI huwa muri f ' Fig. 1c. Taħt il-kondizzjonijiet użati, aħna ġeneralment osservajna newroni ttikkettati mingħajr ebda dendriti li jikkoinċidu minn newroni oħra ttikkettjati. Fi tkabbir akbar, jistgħu jiġu osservati morfoloġija dendritika dettaljata, inklużi l-ispini dendritiċi (Fig. 1d).

Aħna mbagħad użajna taħlita ta 'tikkettar DiI u immunohistokimika għal GFP jew fi ġrieden transġeniċi Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP, li saret possibbli bl-użu ta' konċentrazzjoni baxxa ta 'deterġent għal permeabilizzazzjoni tat-tessut (ara Metodi). Permezz ta 'tqabbil bir-reqqa tat-tebgħa DiI u l-espressjoni tal-GFP fil-ġisem taċ-ċelloli ta' l-MSNs, nistgħu nidentifikaw newroni Di-pożittivi jew GFP jew pożittivi DiI u GFP-negattivi fi Drd1-EGFP (Fig. 2a) jew Drd2-EGFP (Fig. 2b) ġrieden. Għall-istudji li ġejjin, analizzajna morfoloġija dendritika f’newroni pożittivi bid-DiI u l-GFP biss minn ġrieden Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP.

Fig. 2. 

Analiżi tal-ispini dendritiċi fil-ġrieden Drd1-EGFP u Drd2-EGFP. Newroni fin-NAcc ta ’kwalunkwe ġrieden Drd1-EGFP (a) jew ġrieden Drd2-EGFP (b) l-ewwel ġew ittikkettjati bid-DiI (aħmar) u mbagħad ġew soġġetti għal immunohistokimika bl-użu ta ’antikorp anti-GFP (EGFP, aħdar). Biss ...

Kura Kronika tal-Kokaina tirriżulta f 'Żieda fid-Densita' tas-sinsla tad-dahar fl-MSNs Akkumbali li Jesprimu Jew Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP.

Ġrieden Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP ġew injettati ripetutament bil-kokaina (30 mg / kg) jew salina għal erba 'ġimgħat konsekuttivi (ara Metodi). Jumejn (2WD) jew 30 jum (30WD) wara l-aħħar trattament tal-mediċina, l-imħuħ ġew ipproċessati għat-tikkettar DiI u l-immunohistokimika kif deskritt hawn fuq. Studju preċedenti rrapporta li l-kura kronika b’ampfetamina żiedet id-densità tas-sinsla tad-dahar fuq dendriti distali imma mhux prossimali ta ’MSNs fin-NAcc (35). Għalhekk aħna llimitat l-analiżi tagħna għal distal dendrites (jiġifieri, dawk b'fergħat tat-tieni jew tat-tielet ordni), inklużi r-reġjuni terminali. Meta ġie analizzat f'2WD, instab li d-densità tas-sinsla tad-dahar żdiedet fl-MSNs pożittivi għal Drd1-EGFP (128% tal-grupp ta 'melħ) (Fig. 3a u, c) u sa ċertu punt inqas fin-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP (115% tal-grupp ta ’melħ) (Fig. 3 b u, d). Wara 30WD, id-densità miżjuda tas-sinsla tad-dahar inżammet fin-newroni pożittivi għal Drd1-EGFP (118% tal-kontroll tal-melħ) (Fig. 3 a u, c) imma mhux fin-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP (Fig. 3 b u, d).

Fig. 3. 

Żidiet kroniċi kkaġunati mill-kokaina fid-densita 'tas-sinsla tad-dahar fi MSNs pożittivi għal Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP fin-NAcc. (a u, b) Drd1-EGFP (a) jew Drd2-EGFP (b) ġrieden kienu kkurati b'salina (Sal) jew kokaina (Coc, 30 mg / kg) għal 4 ġimgħat. Imħuħ tal-ġurdien 2WD jew 30WD ġew ipproċessati ...

Il-morfoloġija tal-ispina dendritika hija varjabbli f'termini tat-tul tagħhom u l-wisa 'tar-ras tad-dahar. Aħna għalhekk ikklassifikaw l-isporġenzi dendritiċi f'erba 'klassijiet tas-sinsla tad-dahar (stubby, faqqiegħ, irqiq, u filopodja) f'2WD mill-kokaina (dejta mhux murija). Id-densità tat-tip tal-faqqiegħ (119.7 ± 4.0%, P <0.01) u xewk irqiq (120.0 ± 3.4%, P <0.01) żdied bi trattament tal-kokaina f'MSNs pożittivi għal Drd1-EGFP, filwaqt li d-densità ta 'stubby (182.4 ± 21.6%, P <0.05) u l-ispina tal-faqqiegħ (122.5 ± 5.0%, P <0.01) żdied fl-MSNs pożittivi għal Drd2-EGFP. Ma kien hemm l-ebda żieda sinifikanti fix-xewk stubby fin-newroni pożittivi ta 'Drd1-EGFP jew ta' xewk irqiq fin-newroni pożittivi ta 'Drd2-EGFP.

Kokaina Kronika Tinduċi ionFosB Espressjoni fi Drd1-EGFP- jew Drd2-EGFP-MSNs Pożittivi fin-NAcc.

OsFosB huwa membru tal-familja Fos tal-fatturi tat-traskrizzjoni. Filwaqt li l-għoti akut tal-kokaina jinduċi induzzjoni rapida u temporanja ta 'diversi isoformi Fos fin-NAcc, espożizzjoni ripetuta għall-kokaina żżid il-livell ta' osFosB. Barra minn hekk, iż-żieda fl-espressjoni osFosB tippersisti fin-NAcc għal ġimgħat sa xhur wara t-twaqqif tal-espożizzjoni għall-mediċina u ġie ssuġġerit li tkun involuta f'regolazzjoni fit-tul tal-espressjoni tal-ġene, anke wara li t-teħid tad-droga jieqaf (29, 39, 40).

Biex teżamina l-induzzjoni ta 'osFosB f'Nacc minn Drd1-EGFP jew Drd2-EGFP ġrieden wara trattament tal-kokaina, aħna analizzajna l-espressjoni FosB u GFP b'tikkettar doppju (Fig. 4 u, Tabella 1) L-antikorp anti-FosB jirrikonoxxi l-forom kollha ta ’FosB, imma aħna nassumu li ż-żieda fl-immunostain tirrappreżenta ΔFosB (ara Metodi għal aktar diskussjoni). Fil-ġrieden ittrattati bis-salina, 16% tan-newroni pożittivi minn Drd1-EGFP u 15% tan-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP esprimew l-immunoreattività ta 'FosB b'intensità relattivament dgħajfa (Fig. 4 a u, b u, Tabella 1). Trattament ripetut tal-kokaina segwit minn 2WD irriżulta f'żieda sinifikanti fin-numru ta 'newroni pożittivi għal Drd1-EGFP li koexpressaw ΔFosB (55% ta' newroni pożittivi għall-GFP) (Fig. 4c u, Tabella 1). Żieda iżgħar, iżda xorta sinjifikanti fl-espressjoni ta ’osFosB instabet fin-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP (25% tan-newroni pożittivi għall-GFP) (Fig. 4d u, Tabella 1). Bħal fil-każ tat-tibdil fid-densità tas-sinsla tad-dahar, l-espressjoni miżjuda ta 'ΔFosB inżammet fin-newroni pożittivi għal Drd1-EGFP (46% tan-newroni pożittivi għall-GFP) iżda mhux fin-newroni pożittivi għal Drd2-EGFP (15% tan-newroni pożittivi tal-GFP) wara 30WD (Fig. 4 e u, f u, Tabella 1). Innota li l - espressjoni miżjuda ta 'osFosB osservata f' Fig. 4f huwa preżenti fin-newroni negattivi ta ’Drd2-EGFP.

Fig. 4. 

Il-kokaina kronika tinduċi l-espressjoni ta 'inFosB fi Drd1-EGFP- jew DrD2-EGFP-MSNs pożittivi fin-NAcc. Drd1-EGFP (a, c, u e) jew Drd2-EGFP (b, d, u f) ġrieden kienu kkurati b'salina jew kokaina kronika kif deskritt f ' Fig. 3. 2WD (c u, d) jew 30WD (e u, ...
Tabella 1. 

Kwantifikazzjoni tan-newroni pożittivi għall-EGFP li jesprimu ΔFosB

Diskussjoni

Adattamenti li jibqgħu fit-tul fin-newrotrażmissjoni dopaminerġika huma maħsubin li huma l-bażi ta ’mġiba dipendenti assoċjata ma’ drogi psikostimulanti. B'mod partikolari, żjidiet ikkaġunati mill-psikostimulant fid-densità tas-sinsla dendritika ta 'MSNs fin-NAcc ġew ipoteżati biex ikunu marbuta mar-riorganizzazzjoni tal-konnettività sinaptika (30). In-NAcc huwa fil-biċċa l-kbira magħmul minn żewġ subpopolazzjonijiet distinti ta ’MSNs li jesprimu livelli għoljin ta’ riċetturi ta ’D1 jew D2 dopamine. Fl-istudju preżenti, aħna analizzajna d-densità tas-sinsla tad-dahar f'SMNs distinti ta 'D1 jew D2 li fihom ir-riċettur f'NACcc wara trattament kroniku kokaina. Ir-riżultati miksuba juru li, għalkemm fil-bidu d-densità miżjuda tas-sinsla tad-dahar isseħħ f 'MSNs li fihom ir-riċettur D1 u MSNs li fihom ir-riċettur D2, id-densità mibdula tas-sinsla tad-dahar hija stabbli biss fin-newroni li fihom ir-riċettur D1. Barra minn hekk, insibu mudell simili ta ’bidliet fl-espressjoni tal-fattur ta’ traskrizzjoni ΔFosB f ’MSNs li fihom ir-riċettur D1 u D2.

Dawn l-istudji għamlu użu minn ġrieden transġeniċi BAC li jesprimu GFP f'subpopolazzjonijiet speċifiċi ta ’MSNs taħt il-kontroll tal-promotur tad-D1 jew tad-D2. Barra minn hekk, żviluppajna metodu ta 'tikkettar doppju li kkombina l-immunohistokimika għall-GFP ma' tikkettar ballistiku ta 'newroni bl-użu ta' DiI. Studji preċedenti użaw il-metodu Golgi – Cox biex janalizzaw l-effett tal-psikostimulanti fuq id-densità tas-sinsla tad-dahar (34), u l-metodu DiI użat hawn taw riżultati li kienu komparattivament kwantitattivi. Aħna żviluppajna l-metodu ta 'tikkettar doppju għaliex it-tbajja ta' Golgi mhux kompatibbli mal-immunohistokimika. Immunostaining normalment jeħtieġ permeabilizzazzjoni tat-tessut b'deterġenti, proċess li tipikament iwassal għal solubilizzazzjoni ta ’żebgħat lipofiliċi mill-membrana (38). Madankollu, fl-istudji attwali tagħna, immunostaining tal-GFP ma kienx jeħtieġ konċentrazzjoni għolja ta 'deterġent għall-permeabilizzazzjoni tat-tessut u għalhekk jista' jintuża flimkien ma 'tikkettar lipofiliku taż-żebgħa. Il-metodu tagħna ta 'tikkettar doppju għandu jkun ġeneralment utli għal studji ta' bidliet strutturali fil-ispini dendritiċi, pereżempju meta użat għall-analiżi ta 'linji ta' ġrieden transġeniċi BAC fejn il-GFP huwa espress f'popolazzjonijiet speċifiċi ta 'newroni fil-kortiċi (36).

Għalkemm għadu kemmxejn kontroversjali, huwa maħsub li r-riċetturi D1 u D2 huma fil-biċċa l-kbira anatomikament segregati għan-newroni tal-projezzjoni striatali diretta (striatonigral) u indiretta (striatopallidal), rispettivament (17, 41). Il-karatterizzazzjoni inizjali tal-lokalizzazzjoni tal-GFP fil-ġrieden Drd1-EGFP u Drd2-EGFP kienet konsistenti ma ’din il-konklużjoni (36). Barra minn hekk, l-analiżi tagħna tan-numru ta 'newroni pożittivi għall-GFP f'Nacc minn Drd1-EGFP u Drd2-EGFP ġrieden hija konsistenti mal-konklużjoni li ≈50% ta' MSNs jesprimu biss riċetturi D1, li ≈35-40% jesprimu biss riċetturi D2, u li ≈10 – 15% jikkoeżressaw kemm ir-riċetturi D1 u D2. Dan il-valur ta 'koexpressjoni huwa simili għal dak implikat minn studji ta' striatum dorsali li kkombina analiżi ta 'garża-morsa ta' newroni striatali singoli b'tekniki RT-PCR biex jiġu iżolati u amplifikati mRNAs (≈17% koexpressjoni ta 'enkephalin u sustanza P) (42). Ta 'min jinnota li l-istudji attwali tagħna ma jindirizzawx il-kwistjoni ta' espressjoni ta 'riċetturi D3, D4, u D5, u lanqas ma jindirizzaw il-kwistjoni ta' livelli baxxi ta 'espressjoni ta' riċetturi D1 f'SMNs li jesprimu livelli għoljin ta 'riċetturi D2 jew viċi versa.

Bosta studji preċedenti eżaminaw il-lokalizzazzjoni newronali tal-espressjoni ta ’Fos indotta mill-psikostimulant u r-rwol tar-riċetturi D1 u D2 (43-45). Dawk l-istudji appoġġaw il-konklużjoni li l-induzzjoni ta 'Fos u osFosB hija medjata bl-attivazzjoni tar-riċetturi D1. Madankollu, il-lokalizzazzjoni ċellulari tal-espressjoni Fos hija influwenzata mill-kuntest ambjentali li fih jiġu amministrati drogi psikostimulanti (46, 47). Pereżempju, l-amfetamina jew il-kokaina mogħtija fil-gaġġa ta 'l-oriġini tinduċi l-ġeni bikrija immedjati (inkluż Fos) preferenzjalment f'ċelloli pożittivi tas-sustanza P li jikkexpressaw riċetturi D1. B'kuntrast ma 'dan, dawn il-mediċini jistgħu jinduċu l-espressjoni ta' Fos kemm fl-MSNs li fihom ir-riċettur D1 u D2 meta amministrati f'ambjent ġdid. Il-protokoll użat fl-istudji attwali tagħna ma kienx jinkludi tqabbil ta ’injezzjoni ta’ droga ma ’espożizzjoni għal ambjent ġdid. Madankollu, ma nistgħux neskludu xi tip ta 'stress li jiddependi fuq il-kuntest li huwa responsabbli għall-espressjoni ΔFosB fl-MSNs li fihom ir-riċettur D2.

Karatteristika notevoli tar-riżultati preżenti kienet il-mudell parallel ta ’żieda fid-densità tas-sinsla tad-dahar u espressjoni osFosB. Żieda fid-densità tas-sinsla tad-dahar u espressjoni ta 'osFosB inizjalment seħħew fl-MSNs li jesprimu Drd1-EGFP u Drd2-EGFP. Madankollu, dawn il-bidliet kienu stabbli biss fin-newroni li fihom ir-riċettur D1. Spjegazzjoni possibli għall-osservazzjoni li ż-żieda fid-densità tas-sinsla tad-dahar u l-espressjoni ta 'osFosB instabet temporanjament fin-newroni li fihom ir-riċettur D2 hija li dan seħħ fil-frazzjoni żgħira ta' MSNs li jikkexpressaw kemm ir-riċetturi D1 u D2 dopamine. Għalhekk, in-natura temporanja ta 'dawn iż-żidiet tista' tkun assoċjata ma 'effetti antagonistiċi ta' l-attivazzjoni tar-riċettur D2 fuq mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni dipendenti fuq D1 (48). Huwa ta 'interess li l-bidliet fid-densità tas-sinsla tad-dahar u l-espressjoni ta' osFosB kienu riversibbli, li jistgħu jirriflettu l-abbiltà tal-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni dipendenti fuq ir-riċettur D2 li jinfluwenzaw l-istabbiltà ta' osFosB.

L-osservazzjoni li hemm bidliet paralleli fl-espressjoni ta 'osFosB u d-densità tas-sinsla tad-dahar hija konsistenti ma' l-idea li ΔFosB huwa involut fil-formazzjoni inizjali u fil-manutenzjoni sussegwenti ta 'l-ispini dendritiċi fin-newroni li fihom ir-riċettur D1 fin-NAcc. L-espressjoni ta 'osFosB hija kkontrollata mill-mogħdija ta' sinjalazzjoni dipendenti fuq D1 / DARPP-32 / PP1 (MSNs) (49). Bosta studji wrew li ΔFosB għandu rwol importanti fl-azzjonijiet ta ’ppremjati u ta’ attivazzjoni tal-lokomotur tal-psikostimulanti (39), x'aktarx billi tinfluwenza l-espressjoni ta ’ġeni multipli li jinkludu riċetturi tan-newrotrasmettitur, proteini tas-sinjalar, u proteini involuti fir-regolazzjoni tal-morfoloġija newronali (50). Madankollu, il-mekkaniżmi molekulari speċifiċi involuti fil-formazzjoni tas-sinsla kkawżata mill-kokaina kronika mhumiex magħrufa bħalissa. L-istudji preċedenti tagħna wrew li l-infużjoni intraaccumbal ta ’l-inibitur ta’ Cdk5 roscovitine attenwat żidiet ikkawżati mill-kokaina fid-densità tas-sinsla tad-dahar (51). Barra minn hekk, Cdk5 huwa ġene fil-mira downstream għal ΔFosB u ġie implikat f'tibdiliet adattivi kompensatorji assoċjati mat-trattament kroniku tal-kokaina (52). Għalhekk, bidla fil-fosforilazzjoni dipendenti fuq Cdk5 hija mekkaniżmu plawżibbli li fuqu hija bbażata l-formazzjoni tas-sinsla indotta mill-kokaina u / jew l-istabbiltà tas-sinsla. PAK (53), β-catenin (54), PSD-95 (55), u spinofilina (56) huma substrati għal Cdk5 u huma kollha involuti fir-regolazzjoni tal-morfoġenesi tas-sinsla tad-dahar (57-60). Aktar karatterizzazzjoni ta 'dawn u substrati oħra ta' Cdk5 fl-ispina nisperaw li jitfa 'dawl fuq il-mekkaniżmi involuti fir-regolazzjoni tal-formazzjoni tas-sinsla mill-psikostimulanti.

Metodi

Annimali.

Ġrieden li jġorru EGFP transġene taħt il-kontroll tar-riċetturi D1 jew D2 dopamine ġew iġġenerati mill-proġett transġeniku Gensat BAC (36). Il-ġrieden transġeniċi użati f'dan l-istudju kienu 4 – 5 ġimgħat u kienu fuq sfond Svizzeru-Webster. Il-ġrieden inżammu f’12: 12-h ċiklu ta ’dawl / skur u nżammu fi gruppi ta’ 2 – 5 bl-ikel u l-ilma disponibbli ad libitum. Il-protokolli kollha tal-annimali kienu skont il-Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju u ġew approvati mill-Kumitat għall-Kura u l-Użu tal-Annimali Istituzzjonali ta 'Rockefeller.

Trattament tad-Droga.

Kura kronika tal-kokaina (30 mg / kg, kuljum) kienet irrappurtata li tipproduċi żieda robusta fid-densità tas-sinsla ta 'MSNs kemm fil-qalba kif ukoll fil-qoxra ta' NAcc mill-far, iżda doża iktar baxxa (15 mg / kg) żiedet id-densità tas-sinsla biss f ' il-qoxra (61). Aħna għalhekk użajna l-ogħla doża ta 'kokaina biex induċu modifika strutturali fiż-żewġ partijiet tan-NAcc. Ġrieden irċivew injezzjoni waħda (ip) ta '30 mg / kg kokaina-HCl (jew salina) kuljum għal ġranet konsekuttivi ta' 5, segwita minn ġranet ħielsa mill-injezzjoni ta '2, u din il-proċedura ġiet ripetuta għal ġimgħat konsekuttivi ta' 4. Injezzjonijiet saru fil-gaġġa tad-dar. 2WD jew 30WD, imħuħ tal-ġrieden ġew ipproċessati għat-tikkettar DiI u / jew l-immunohistokimika.

Tikkettar Ballistiku biż-Żebgħa Fluworexxenti DiI.

Il-ġrieden ġew anestetizzati b'80 mg / kg ta 'sodju pentobarbital u mtaqqba transkardjalment ma' 5 ml ta 'PBS, segwita minn perfużjoni mgħaġġla b'40 ml ta' 4% paraformaldehyde f'PBS (20 ml / min). L-imħuħ tneħħew malajr mill-kranju u ġew imwaħħla wara f'4% paraformaldehyde għal 10 min. Flieli tal-imħuħ (100 μm) kienu ttikkettati bi tqassim ballistiku ta 'żebgħa fluworexxenti DiI (Molecular Probes) kif deskritt f'rif. 38. Ġie żviluppat metodu kombinat ta 'tikkettar DiI –immunohistokimika b'konċentrazzjoni baxxa ta' deterġent. Sezzjonijiet bit-tikketta diI ġew permeabilizzati b'0.01% Triton X-100 f'PBS għal 15 min u mbagħad inkubati f'0.01% Triton X-100 u 10% fis-serum normali tal-mogħoż f'PBS għal 1 h biex jimminimizzaw l-ittikkettjar mhux speċifiku. Is-sezzjonijiet tat-tessut imbagħad ġew inkubati b'1% serum normali tal-mogħoż / 0.01% Triton X-100 u antikorp anti-GFP (Abcam, Cambridge, MA) għal 2 h f'temperatura tal-kamra, maħsula, u inkubati f 'dilwizzjoni 1: 1,000 ta' FITC- antikorp sekondarju konjugat (Molekulari Sondi). It-taqsimiet tqiegħdu fuq il-pjastri tal-mikroskopju u ġew mgħottija bil-mezz tal-immuntar. Il-metodu ta ’ttikkettar ballistiku ppermetta analiżi dettaljata ta’ l-istruttura tas-sinsla dendritika, u r-riżultati miksuba kienu komparabbli kwalitattivament u kwantitattivament ma ’studji preċedenti bl-użu tal-metodu ta’ mili ta ’Golgi-Cox f’biċċiet tal-moħħ tal-far (34). Madankollu, b'kuntrast ma 'studji preċedenti, rari osservajna żewġt ispina fin-newroni mtebbgħin DiI. Din id-differenza tista 'tkun ikkawżata mis-sensittività tal-metodi tat-tbajja' jew mill-varjabilità tal-ġrieden (dan l-istudju) kontra t-tessut tal-firien (34).

Immunohistokimika.

L-annimali kienu anestetizzati u mnaddfa kif deskritt hawn fuq. L-imħuħ tneħħew u nħażnu matul il-lejl f’4% paraformaldehyde f’4 ° C. L-imħuħ ġew ittrasferiti għal 30% sukrożju f'soluzzjoni PBS għall-krijoprotezzjoni. Taqsimiet koronali (12 μm) inqatgħu fuq microtome tal-iffriżar (Leica) u mbagħad ġew ipproċessati għall-immunohistokimika. Sezzjonijiet tal-imħuħ kienu mbagħad permeabilizzati f'0.3% Triton X-100 f'PBS għal 15 min u mlaħalħa darbtejn f'PBS. Is-sezzjonijiet kienu prekububati f’10% serum normali tal-mogħoż f’PBS għal 1 h f’37 ° C, esposti għal antikorpi primarji (dilwiti f’1% serum normali tal-mogħoż f’PBS) matul il-lejl f’4 ° C, u mbagħad imlaħalħa f’PBS u inkubati ma ’sekondarja antikorpi għal 1 h f’37 ° C. Intużaw l-antikorpi li ġejjin: fenek anti-pan-FosB (SC-48, 1: 500; Santa Cruz Bijoteknoloġija), ġrieden anti-NeuN (Chemicon), fniek anti-GFP, FITC-conjugated anti-fenek, Ig u anti-fenek. IgG konjugat kontra l-ġrieden (Molekulari Sondi). Għal tikkettjar triplu (osFosB, NeuN, u GFP), sezzjonijiet tal-moħħ l-ewwel ġew imlaqqma b'antikorp anti-pan FosB u antikorp anti-NeuN u mbagħad inkubati ma 'antikorpi sekondarji (IgG ta' kontra l-fenek konjugati b'Rodamine-IgG u anti-mouse IgG anti-mouse). ). Sezzjonijiet tal-moħħ b'tebba doppja ġew ipproċessati aktar għall-immunostaining tal-GFP bl-użu ta 'teknoloġija ta' tikkettar ta 'Zenon (Zenon Alexa Fluor 488, Molecular Probes). L-antikorp anti-pan-FosB tqajjem sat-tmiem N ta ’FosB u jirrikonoxxi ΔFosB u FosB ta’ tul sħiħ (62). Ibbażat fuq studji preċedenti li wrew li ΔFosB imma mhux FosB jew antiġeni oħra relatati mal-Fos huwa espress b'mod stabbli wara kura kronika kokaina, nassumu li ż-żidiet fit-tul fl-immunoreattività jirrappreżentaw espressjoni stabbli ta 'osFosB. Madankollu, l-identità tas-sinjal immunoreattiv FosB osservat fil-ġrieden ittrattati bis-salina mhux magħruf. Analiżi statistika f ' Tabella 1 uża l-Istudenti t test.

Analiżi tas-sinsla Dendritika.

MSNs individwali fin-NAcc intgħażlu għall-analiżi tas-sinsla tad-dahar ibbażata fuq bosta kriterji. (i) Ma kien hemm l-ebda sovrapożizzjoni minima jew l-ebda ma ’ċelloli ttikkettjati oħra biex jiġi żgurat li l-proċessi minn ċelloli differenti ma jiġux imfixkla. (ii) Mill-inqas tliet dendriti primarji kellhom ikunu viżibbli għaċ-ċelloli li għandhom jintużaw għall-analiżi. (iii) Ġew eżaminati dendriti distali (dendriti terminali jew viċin id-dendrite terminali). Dendriti miż-żewġ MSNs fil-qalba u l-qoxra tan-NAcc ġew analizzati. Għalkemm aħna osservajna MSNs spined spined (spiny type II), analizzajna biss MSNs densament spined (spiny type I). Biex tikkalkula d-densità tas-sinsla tad-dahar, it-tul ta 'dendrite (> 20 μm twil) ġie rintraċċat bl-użu ta' mikroskopju konfokali (Zeiss LSM 510) b'lenti ta 'immersjoni taż-żejt (× 40). L-istampi kollha tad-dendriti ttieħdu f'post differenti z livelli (0.5 –1 μm intervalli tal-fond) biex tiġi eżaminata l-morfoloġija ta ’l-ispini dendritiċi. Il-kejl kollu sar permezz ta 'softwer tal-analiżi tal-immaġni metamorfa (Universal Imaging, Downingtown, PA). L-analiżi statistika użat it-test Kolmogorov-Smirnov.

L-isporġenzi mid-dendriti ġew ikklassifikati f'erba 'tipi abbażi tat-tul tagħhom kif deskritt f'rifs. 63 u, 64. Sporġenzi tal-Klassi 1, imsejħa wkoll protuberanzi stubby, kienu <0.5 μm fit-tul, ma kellhomx ras tas-sinsla kbira, u ma jidhrux li għandhom għonq; klassi 2, jew xewk f'forma ta 'faqqiegħ, kienu twal bejn 0.5 u 1.25 μm u kienu kkaratterizzati minn għonq qasir u ras tas-sinsla kbira; klassi 3, jew xewk irqiq, kienu jvarjaw bejn 1.25 u 3.0 μm u kellhom għenuq ta 'l-ispina tawwali b'ras żgħar; il-klassi 4, jew estensjonijiet filopodjali, kienu sporġenzi twal filamentużi li ma kellhomx ras tas-sinsla li tidher.

Ringrazzjamenti

Dan ix-xogħol ġie appoġġjat mis-Servizz tas-Saħħa Pubblika ta ’l-Istati Uniti Grant DA10044 (lil PG u ACN) u mill-Fondazzjoni Simons, il-Fondazzjoni Peter J. Sharp, il-Fondazzjoni Picower, u l-FM Kirby Foundation.

Abbrevjazzjonijiet

  • NAcc
  • nukleu accumbens
  • MSN
  • newroni moffa ta 'daqs medju
  • BAC
  • kromożomi artifiċjali batterjali
  • Drd1
  • riċettur tad-dopamine D1 immexxi mill-promotur
  • Drd2
  • riċettur tad-dopamine D2 immexxi mill-promotur
  • DiI
  • 1,1′-diotadecyl-3,3,3 ′, 3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
  • 2WD
  • 2 ġranet wara l-aħħar trattament tal-mediċina
  • 30WD
  • 30 ġranet wara l-aħħar trattament tal-mediċina.

Noti f'qiegħ il-paġna

 

Dikjarazzjoni ta 'kunflitt ta' interess: Ma ġew iddikjarati l-ebda kunflitti.

Referenzi

1. Totterdell S., Smith ADJ Chem. Neuroanat. 1989; 2: 285 – 298. [PubMed]
2. Smith Y., Bevan MD, Shink E., Bolam JP Newroxjenza. 1998; 86: 353 – 387. [PubMed]
3. Heikkila RE, Orlansky H., Cohen G. Biochem. Pharmacol. 1975; 24: 847 – 852. [PubMed]
4. Ritz MC, Lamb RJ, Goldberg SR, Kuhar MJ Science. 1987; 237: 1219 – 1223. [PubMed]
5. Nestler EJ Trends Pharmacol. Sci. 2004; 25: 210 – 218. [PubMed]
6. Kalivas PW, Stewart J. Brain Res. Rev 1991; 16: 223 – 244. [PubMed]
7. Pierce RC, Kalivas PW Brain Res. Rev 1997; 25: 192 – 216. [PubMed]
8. Robinson TE, Berridge KC Annu. Rev. Psychol. 2003; 54: 25 – 53. [PubMed]
9. Wolf ME, Khansa MR Brain Res. 1991; 562: 164 – 168. [PubMed]
10. Vanderschuren LJ, Kalivas PW Psikofarmakoloġija. 2000; 151: 99 – 120. [PubMed]
11. Sesack SR, Pickel VMJ Comp. Neurol. 1992; 320: 145 – 160. [PubMed]
12. Smith AD, Bolam JP Trends Neurosci. 1990; 13: 259 – 265. [PubMed]
13. Sibley DR, Monsma FJ, Jr. Trends Pharmacol. Sci. 1992; 13: 61 – 69. [PubMed]
14. Beckstead RM, Newroxjenza Cruz CJ. 1986; 19: 147 – 158. [PubMed]
16. Gerfen CR, Young WS, III Brain Res. 1988; 460: 161 – 167. [PubMed]
16. Gerfen CR Xejriet Neurosci. 2000; 23: S64 – S70. [PubMed]
17. Gerfen CR, Engber TM, Mahan LC, Susel Z., Chase TN, Monsma FJ, Jr., Sibley DR Science. 1990; 250: 1429 – 1432. [PubMed]
18. Zahm DS Neurosci. Biobehav. Rev 2000; 24: 85 – 105. [PubMed]
19. Lu X.-Y., Ghasemzadeh MB, Newroxjenza Pali Kalivas. 1998; 82: 767 – 780. [PubMed]
20. Koob GF, Le HT, Creese I. Neurosci. Lett. 1987; 79: 315 – 320. [PubMed]
21. Woolverton WL, Virus RM Pharmacol. Biochem. Behav. 1989; 32: 691 – 697. [PubMed]
22. Bergman J., Kamien JB, Spealman RD Behav. Pharmacol. 1990; 1: 355 – 363. [PubMed]
23. MP Epping-Jordan, Markou A., Koob GF Brain Res. 1998; 784: 105 – 115. [PubMed]
24. Caine SB, Negus SS, Mello NK, Bergman JJ Pharmacol. Exp. Hemm. 1999; 291: 353 – 360. [PubMed]
25. De Vries TJ, Cools AR, Shippenberg TS NeuroReport. 1998; 9: 1763 – 1768. [PubMed]
26. Self DW, Barnhart WJ, Lehman DA, Nestler EJ Science. 1996; 271: 1586 – 1589. [PubMed]
27. Khroyan TV, Barrett-Larimore RL, Rowlett JK, Spealman RDJ Pharmacol. Exp. Hemm. 2000; 294: 680 – 687. [PubMed]
28. Alleweireldt AT, Weber SM, Kirschner KF, Bullock BL, Neisewander JL Psychopharmacology. 2002; 159: 284 – 293. [PubMed]
29. Nestler EJ Nat. Rev Neurosci. 2001; 2: 119 – 128. [PubMed]
30. Robinson TE, Kolb B. Neuropharmacology. 2004; 47: 33 – 46. [PubMed]
31. Kalivas PW Curr. Opinjoni. Pharmacol. 2004; 4: 23 – 29. [PubMed]
32. Hyman SE, Malenka RC Nat. Rev Neurosci. 2001; 2: 695 – 703. [PubMed]
33. Robinson TE, Kolb BJ Neurosci. 1997; 17: 8491 – 8497. [PubMed]
34. Robinson TE, Kolb B. Eur. J. Neurosci. 1999; 11: 1598 – 1604. [PubMed]
35. Li Y., Kolb B., Robinson TE Neuropsychopharmacology. 2003; 28: 1082 – 1085. [PubMed]
36. Gong S., Zheng C., Doughty ML, Losos K., Didkovsky N., Schambra UB, Nowak NJ, Joyner A., ​​Leblanc G., Hatten ME, et al. Natura. 2003; 425: 917 – 925. [PubMed]
37. Zhou FM, Wilson CJ, Dani JAJ Neurobiol. 2002; 53: 590 – 605. [PubMed]
38. Grutzendler J., Tsai J., Gan WB Metodi. 2003; 30: 79 – 85. [PubMed]
39. Kelz MB, Chen J., Carlezon WA, Jr., Whisler K., Gilden L., Beckmann AM, Steffen C., Zhang YJ, Marotti L., Self DW, et al. Natura. 1999; 401: 272 – 276. [PubMed]
40. Newest Farmakoloġija. 2004; 47: 24 – 32. [PubMed]
41. Le Moine C., Bloch BJ Comp. Neurol. 1995; 355: 418 – 426. [PubMed]
42. Surmeier DJ, Kanzunetta WJ, Yan ZJ Neurosci. 1996; 16: 6579 – 6591. [PubMed]
43. Nye HE, Tama BT, Kelz MB, Iadarola M., Nestler EJJ Pharmacol. Exp. Hemm. 1995; 275: 1671 – 1680. [PubMed]
44. Gerfen CR, Keefe KA, Gauda EBJ Neurosci. 1995; 15: 8167 – 8176. [PubMed]
45. Moratalla R., Elibol B., Vallejo M., Graybiel AM Neuron. 1996; 17: 147 – 156. [PubMed]
46. Badiani A., Oates MM, Jum HE, Watson SJ, Akil H., Robinson TE Behav. Moħħ. Riż. 1999; 103: 203 – 209. [PubMed]
47. Uslaner J., Badiani A., Norton CS, Jum HE, Watson SJ, Akil H., Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2001; 13: 1977 – 1983. [PubMed]
48. Huff RM, Chio CL, Lajiness ME, Goodman LV Adv. Pharmacol. 1998; 42: 454 – 457. [PubMed]
49. Zachariou V., Sgambato-Faure V., Sasaki T., Svenningsson P., Berton O., Fienberg AA, Nairn AC, Greengard P., Nestler EJ Neuropsychopharmacology. 2005 Awissu 3; 10.1038 / sj.npp.1300832.
50. McClung CA, Nestler EJ Nat. Neurosci. 2003; 6: 1208 – 1215. [PubMed]
51. Norrholm SD, Bibb JA, Nestler EJ, Ouimet CC, Taylor JR, Greengard P. Neuroscience. 2003; 116: 19 – 22. [PubMed]
52. Bibb JA, Chen J., Taylor JR, Svenningsson P., Nishi A., Snyder GL, Yan Z., Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC et al. Natura. 2001; 410: 376 – 380. [PubMed]
53. Nikolic M., Chou MM, Lu W., Mayer BJ, Tsai LH Nature. 1998; 395: 194 – 198. [PubMed]
54. Kesavapany S., Lau KF, McLoughlin DM, Brownlees J., Ackerley S., Leigh PN, Shaw CE, Miller CC Eur. J. Neurosci. 2001; 13: 241 – 247. [PubMed]
55. Morabito MA, Sheng M., Tsai LHJ Neurosci. 2004; 24: 865 – 876. [PubMed]
56. Futter M., Uematsu K., Bullock SA, Kim Y., Hemmings HC, Jr., Nishi A., Greengard P., Nairn AC Proc. Natl. Acad. Sci. L-ISTATI UNITI. 2005; 102: 3489 – 3494. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]
57. Hayashi ML, Choi SY, Rao BS, Jung HY, Lee HK, Zhang D., Chattarji S., Kirkwood A., Tonegawa S. Neuron. 2004; 42: 773 – 787. [PubMed]
58. Murase S., Mosser E., Schuman EM Neuron. 2002; 35: 91 – 105. [PubMed]
59. Prange O., Murphy THJ Neurosci. 2001; 21: 9325 – 9333. [PubMed]
60. Feng J., Yan Z., Ferreira A., Tomizawa K., Liauw JA, Zhuo M., Allen PB, Ouimet CC, Greengard P. Proc. Natl. Acad. Sci. L-ISTATI UNITI. 2000; 97: 9287 – 9292. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]
61. Li Y., Acerbo MJ, Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2004; 20: 1647 – 1654. [PubMed]
62. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S., Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. Eur. J. Neurosci. 2005; 21: 2817 – 2824. [PubMed]
63. Harris KM, Jensen FE, Tsao BJ Neurosci. 1992; 12: 2685 – 2705. [PubMed]
64. Vanderklish PW, Edelman GM Proc. Natl. Acad. Sci. L-ISTATI UNITI. 2002; 99: 1639 – 1644. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]