J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Aug 21.
Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fannu S, Hou X, Shaham Y, Hope BT.
Astratt
Il-metamfetamina u mediċini oħra jattivaw proporzjon żgħir tan-newroni kollha fil-moħħ. Preċedentement żviluppajna metodu ta 'issortjar ta' ċelloli attivat bil-fluworexxenza (FACS) biex tikkaratterizza alterazzjonijiet molekulari indotti b'mod selettiv fin-newroni attivati li jesprimu l-markatur tal-attività newrali Fos. Madankollu, dan il-metodu jeħtieġ li jinġabru kampjuni minn bosta firien. Aħna issa niddeskrivu metodu modifikat ibbażat fuq FACS biex jikkaratterizza alterazzjonijiet molekulari fin-newroni striatali dorsali li jesprimu Fos minn far wieħed bl-użu ta 'strateġija ta' pre-amplifikazzjoni multiplex.
L-immunoistokimika Fos u NeuN (markatur newronali) jindikaw li 5-6% tan-newroni ta 'striatum dorsali ġew attivati 90 min wara injezzjonijiet akuti ta' metamfetamina (5 mg / kg, ip) filwaqt li inqas minn 0.5% ta 'newroni ġew attivati minn injezzjonijiet ta' melħ.
Aħna użajna FACS biex jisseparaw in-newroni mmarkati NeuN fin-newroni Fos-pożittivi u Fos-negattivi u vvalutajna l-espressjoni tal-mRNA billi nużaw RT-qPCR minn inqas minn ħames newroni Fos-pożittivi. 3-20 indotta l-metamfetamina żżid iż-żidiet ta 'ġeni bikrija immedjati ta' l-ark, homer-2, c-fos, fosB, u l-isoformi tiegħu (ΔfosB u isoform ġdid ΔfosB-2) fin-newroni Fos-pożittivi imma mhux Fos-negattivi. L-induzzjoni mmedja tal-ġene bikrija tal-mRNA kienet 10 darbiet aktar baxxa jew assenti meta evalwata f'kampjuni mhux assortiti minn omoġenati ta 'striatum dorsali wieħed. Il-metodu modifikat tagħna jagħmilha fattibbli li jiġu studjati alterazzjonijiet molekulari uniċi fin-newroni attivati minn drogi jew cues assoċjati mad-droga f'mudelli kumplessi ta 'vizzju.
Il-metamfetamina u mediċini oħra jattivaw proporzjon żgħir tan-newroni kollha fil-moħħ. Aħna hawn nirrappurtaw metodu mtejjeb biex tikkaratterizza alterazzjonijiet molekulari indotti b'mod selettiv fin-newroni attivati li jesprimu l-markatur tal-attività newrali Fos. Aħna użajna FACS flimkien ma 'pre-amplifikazzjoni tal-PCR immirata biex tevalwa l-espressjoni tal-ġene indotta minn metamfetamina akuta minn ftit newroni li jesprimu 5 Fos minn striatum tal-far wieħed. 3-20 indotta metamfetamina żidiet ta 'ġeni minnufih immedjati (IEGs) fin-newroni Fos-pożittivi imma mhux Fos-negattivi. Amplifikazzjoni minn qabel tal-PCR immirata tagħmilha fattibbli li jiġu studjati alterazzjonijiet molekulari uniċi fin-newroni attivati minn drogi jew cues assoċjati mad-droga fil-mudelli kumplessi tal-vizzju.
Ippubblikat 2013. Dan l-artikolu huwa xogħol tal-Gvern Amerikan u jinsab fid-dominju pubbliku fl-Istati Uniti.
;