Effett ta ’espressjoni eċċessiva ta’ osFosB fuq sinjalizzati b’mediċini tar-riċettur ta ’opjojdi u ta’ kannabinojdi fin-nukleu accumbens (2011)

Neurofarmoloġija. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Żakkariju V, Nestler EJ, Selley DE.

sors

Dipartiment tal-Farmakoloġija u Tossikoloġija u Istitut għall-Istudji tad-Droga u l-Alkoħol, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

Astratt

Il-fattur ta 'traskrizzjoni stabbli ΔFosB huwa indott fin-nukleu accumbens (NAc) minn espożizzjoni kronika għal diversi drogi ta' abbuż, u l-espressjoni transġenika ta 'ΔFosB fl-istriatum ittejjeb il-proprjetajiet ta' sodisfazzjon tal-morfina u l-kokainae. Madankollu, il-bażi mekkanistika għal dawn l-osservazzjonijiet mhix mifhuma kompletament. Aħna użajna mudell ta 'ġurdien bitransġeniku b'espressjoni inducibbli ta' ΔFosB in dopamine D(1) newroni strijatali li fihom riċettur/dynorphin biex jiddeterminaw l-effett tal-espressjoni ΔFosB fuq is-sinjalar tar-riċetturi tal-opjojdi u tal-kannabinojdi fin-NAc. Ir-riżultati wrew li l-attività tal-proteina G medjata minn opjojdi mu u l-inibizzjoni ta 'adenylyl cyclase ġew imtejba fin-NAc tal-ġrieden li esprimew ΔFosB. Bl-istess mod, l-inibizzjoni kappa tal-opjojdi ta' adenylyl cyclase ġiet imsaħħa fil-ġrieden li jesprimu ΔFosB. B'kuntrast, is-sinjalar medjat mir-riċettur tal-kannabinojdi ma kienx differenti bejn il-ġrieden li jesprimu żejjed ΔFosB u l-ġrieden tal-kontroll. TDawn is-sejbiet jissuġġerixxu li s-sinjalar tar-riċetturi tal-opjojdi u tal-kannabinojdi huma modulati b'mod differenzjat bl-espressjoni ta' ΔFosB, u jindikaw li l-espressjoni ta' ΔFosB tista' tipproduċi xi wħud mill-effetti tagħha permezz ta' sinjalazzjoni msaħħa tar-riċetturi tal-opjojdi mu u kappa fin-NAc.

keywords: Proteina G, adenylyl cyclase, striatum

1. Introduzzjoni

Riċetturi tal-opjojdi u CB tal-kannabinojdi₁ riċetturi (CB₁R) huma l-miri newrobijoloġiċi għal żewġ klassijiet ta’ drogi użati b’mod wiesa’ li jinkludu morfina, eroina u opjojdi bir-riċetta, u marijuana (Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC)), rispettivament. L-effetti akuti tal-opjojdi u l-kannabinojdi huma medjati minn riċetturi akkoppjati mal-proteini G li jattivaw primarjament G_{i / o} proteini u jipproduċu reazzjonijiet effettur downstream bħall-inibizzjoni ta’ adenylyl cyclase (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Il-mutur, it-tfixkil tal-memorja u l-effetti psikoattivi ta 'Δ⁹-THC huma prodotti minn CB₁R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), li huma mqassma ħafna fil-moħħ, b'livelli għoljin fil-gangli bażali, l-ippokampus u ċ-ċerebellum (Herkenham, et al., 1991). L-effetti analġeżiċi u ta’ sodisfazzjon tal-aktar drogi opioid klinikament rilevanti u abbużati huma medjati prinċipalment minn riċetturi mu opioid (MOR) (Matthes, et al., 1996), li huma arrikkit fis-sistema limbic u brainstem (Mansour, et al., 1994). Is-sistema mesolimbika, magħmula minn projezzjonijiet dopaminerġiċi miż-żona tegmentali ventrali (VTA) sa nucleus accumbens (NAc), għandha rwol importanti fl-effetti ta 'sodisfazzjon ta' opjojdi u kannabinojdi (Bozarth u Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), kif ukoll drogi oħra ta’ abbuż (Koob u Volkow, 2010). Barra minn hekk, is-sistemi opjojdi u kannabinojdi endoġeni huma involuti fl-effetti ta’ sodisfazzjon ta’ klassijiet multipli ta’ drogi psikoattivi (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Għalhekk, huwa importanti li jiġu spjegati mekkaniżmi li bihom l-opjojdi u CB₁Is-sinjalar R huma regolati fin-NAc.

Mistoqsija ċentrali fil-qasam tal-abbuż tad-droga kienet li jiġu identifikati proteini li jimmedjaw it-tranżizzjoni minn effetti akuti għal dawk fit-tul tad-drogi psikoattivi. Il-fattur ta’ traskrizzjoni AP-1 ΔFosB huwa partikolarment interessanti minħabba li huwa prodott varjant ta’ splice maqtugħin stabbli tal- fosb ġene li jakkumula wara espożizzjoni ripetuta għal drogi ta’ abbuż jew premjijiet naturali (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Sibna li ΔFosB jiġi indott fil-moħħ wara espożizzjoni ripetuta għall-morfina, Δ⁹-THC, kokaina jew etanol, b'kull droga tipproduċi mudell reġjonali uniku ta' espressjoni ta' ΔFosB (Perrotti, et al., 2008). Sejba konsistenti madwar il-mediċini kienet li ΔFosB kien indott ħafna fl-istriatum, fejn l-erba’ mediċini kollha indott ΔFosB fil-qalba NAc u kollha ħlief Δ⁹-THC indotta b'mod sinifikanti espressjoni fil-qoxra NAc u caudate-putamen.

Studji farmakoloġiċi wrew li l-ko-amministrazzjoni tad-dopamine D₁ riċettur (D₁R) l-antagonist SCH 23390 imblukkat l-induzzjoni ta’ ΔFosB fin-NAc u caudate-putamen wara amministrazzjoni intermittenti ta’ kokaina jew morfina, li tissuġġerixxi l-importanza potenzjali ta’ D₁Newroni li jesprimu R (Muller u Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). L-effett tal-induzzjoni ta' ΔFosB fuq imġieba medjata mid-droga ġie investigat bl-użu ta' ġrieden bitransġeniċi li jesprimu ΔFosB f'popolazzjonijiet newronali speċifiċi tan-NAc u l-istriatum dorsali (Chen, et al., 1998). Ġrieden li jesprimu ΔFosB f'dynorphin/D₁In-newroni R pożittivi fin-NAc u l-istriatum dorsali (linja 11A) juru reazzjonijiet mibdula għal drogi ta’ abbuż, notevolment sensittività mtejba għall-effetti ta’ sodisfazzjon tal-kokaina jew tal-morfina (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Dawn l-alterazzjonijiet seħħew fin-nuqqas ta 'bidliet fil-livelli ta' MOR jew diversi subunitajiet tal-proteini G. Madankollu, il-livelli tal-mRNA tad-dynorphin tnaqqsu fin-NAc tal-ġrieden li jesprimu ΔFosB (Zachariou, et al., 2006), li jissuġġerixxi li mira waħda ta 'ΔFosB hija ġene li jikkodifika peptide opjojdi endoġenu. L-induzzjoni ΔFosB tista 'wkoll tipproduċi bidliet fl-imġieba billi tirregola s-sinjalar tar-riċettur fin-NAc, iżda din il-possibbiltà ma ġietx investigata. Għalhekk, l-istudji preżenti użaw il-mudell tal-ġurdien bitransġeniċi biex jiddeterminaw jekk espressjoni żejda ta’ ΔFosB f’dynorphin/D₁R li fih newroni strijatali jibdel l-attività tal-proteina G medjata minn MOR u l-inibizzjoni ta 'adenylyl cyclase medjata minn MOR u KOR fin-NAc. L-effett ta 'ΔFosB fuq CB₁L-attività tal-proteina G medjata mill-R ġiet ukoll evalwata minħabba Δ⁹-L-amministrazzjoni tat-THC tinduċi ΔFosB fin-NAc (Perrotti, et al., 2008) u s-sistema endocannabinoid hija magħrufa li tirregola ċ-ċirkwiti tal-premju tal-moħħ (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), iżda l-effett ta 'ΔFosB fuq is-sistema endocannabinoid ma ġiex investigat.

2. Materjali u metodi

2.1. Reaġenti

[³⁵S]GTPγS (1250 Ci/mmol), [α-³²P]ATP (800 Ci/mmol) u [³H] cAMP (26.4 Ci/mmol) inxtraw minn PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, albumina tas-serum bovin, creatine phosphokinase, papaverine, imidazole u WIN-55212-2, inxtraw minn Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS inxtara minn Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO ġie pprovdut mill-Programm tal-Provvista tad-Droga tal-Istitut Nazzjonali dwar l-Abbuż tad-Droga (Rockville, MD). Il-fluwidu ta' tpetpet Econo-1 inkiseb minn Fisher Scientific (Norcross, GA). Il-fluwidu ta' tpetpet ta' Ecolite inkiseb minn ICN (Costa Mesa, CA). Il-kimiċi l-oħra kollha nkisbu minn Sigma Aldrich jew Fisher Scientific.

2.2. Ġrieden

Ġrieden bitransġeniċi maskili derivati minn NSE-tTA (linja A) × TetOp-ΔFosB (linja 11) ġew iġġenerati kif deskritt f'Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Ġrieden bitransġeniċi ġew ikkonċepiti u mkabbra fuq doxycycline (100 µg fl-ilma tax-xorb) biex irażżnu l-espressjoni tat-transġene. Fl-età ta '8 ġimgħat, doxycycline tħalla barra mill-ilma għal nofs il-ġrieden biex tippermetti l-espressjoni tat-transġene, filwaqt li l-ġrieden li kien fadal inżammu fuq doxycycline biex irażżan it-transġene. L-imħuħ inġabru 8 ġimgħat wara, iż-żmien li fih l-effetti tat-traskrizzjoni ta' ΔFosB huma massimi (McClung u Nestler, 2003). Intużat it-tieni linja transġenika tal-ġurdien li fiha Δc-Jun, antagonist negattiv dominanti ta' c-Jun, huwa espress f'D₁R/dynorphin u D₂Ċelloli R/enkephalin tal-istriatum, l-ippokampus u l-kortiċi parietali (Peakman, et al., 2003). C-Jun u proteini tal-familja ta' Jun relatati jiddimerizzaw mal-proteini tal-familja Fos u jingħaqdu mas-sit AP-1 tal-ġeni fil-mira biex jirregolaw it-traskrizzjoni. Madankollu, it-trunkazzjoni tal-N-terminal ta 'c-Jun (Δc-Jun) tagħmel il-kumpless traskrizzjoniment inattiv u kapaċi jostakola l-irbit tad-DNA ta' kumplessi AP-1 attivi. Ġrieden bitransġeniċi maskili derivati minn NSE-tTA (linja A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (linja E) ġew iġġenerati kif deskritt f'Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Ġrieden bitransġeniċi ġew ikkonċepiti u mkabbra fuq doxycycline (100 µg fl-ilma tax-xorb) biex irażżnu l-espressjoni tat-transġene. Il-frieħ ġew miftuma fi ġimgħat 3, ġenotipati, u separati fi gruppi, bin-nofs jinżammu fuq ilma li fih id-doxycycline u nofshom fuq ilma tax-xorb regolari biex jinduċu l-espressjoni FLAG-Δc-Jun. L-imħuħ inġabru 6 ġimgħat wara, iż-żmien li fih ġew imkejla l-livelli massimi ta’ FLAG-Δc-Jun (Peakman, et al., 2003). Il-proċeduri kollha tal-annimali twettqu skont il-Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju.

2.3. Preparazzjoni tal-membrana

L-imħuħ ġew maħżuna f'-80 ° C sal-jum tal-assaġġ. Qabel l-assaġġ, kull moħħ ġie mdewweb, u n-NAc ġie mqassam fuq is-silġ. Kull kampjun ġie omoġenizzat f'50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (buffer tal-membrana) b'20 strokes minn omoġenizzatur tal-ħġieġ f'4°C. L-omoġenat ġie ċentrifugat fi 48,000 × g f'4°C għal 10 minuti, sospiż mill-ġdid f'buffer tal-membrana, ċentrifugat mill-ġdid f'48,000 × g f'4°C għal 10 min u sospiż mill-ġdid f'50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (assay buffer). Il-livelli tal-proteini ġew determinati bil-metodu ta' Bradford (Bradford, 1976) bl-użu ta' albumina tas-serum bovin (BSA) bħala l-istandard.

2.4. Agonist-Stimolat [³⁵S]GTPγS Irbit

Il-membrani ġew inkubati minn qabel għal 10 minuti fi 30 ° C b'adenosine deaminase (3 mU/ml) f'assay buffer. Membrani (5–10 µg proteina) imbagħad ġew inkubati għal 2 sigħat fi 30°C f'assay buffer li kien fih 0.1% (w/v) BSA, 0.1 nM [³⁵S]GTPγS, 30 µM GDP u adenosine deaminase (3 mU/ml) bi u mingħajr konċentrazzjonijiet xierqa ta 'DAMGO jew WIN55,212-2. L-irbit mhux speċifiku kien imkejjel b'20 µM GTPγS. L-inkubazzjoni ġiet mitmuma permezz ta 'filtrazzjoni permezz ta' filtri tal-fibra tal-ħġieġ GF/B, segwita minn 3 ħasliet bi 3 ml kiesaħ bis-silġ 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Ir-radjuattività marbuta ġiet iddeterminata permezz ta' spettrofotometrija ta' tpetpet likwida wara estrazzjoni matul il-lejl tal-filtri fil-fluwidu ta' tpetpet Econo-1.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membrani (5-25 µg proteina) ġew inkubati minn qabel b'adenosine deaminase kif deskritt hawn fuq, imbagħad inkubati għal 15-il minuta fi 30°C fil-preżenza jew in-nuqqas ta' 1µM forskolin, bi jew mingħajr DAMGO, U50,488H jew WIN55,212-2, f'assay buffer li jkun fih 50 µM ATP, [α-³²P]ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w/v) BSA, 50 µM AMP ċikliku, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM fosfokreatina, 20 unità/ml creatine phosphokinase u adenosine m dea /ml) f'volum finali ta' 3 µl. Taħt dawn il-kundizzjonijiet, totali [α-³²P]cAMP irkuprat kien ġeneralment inqas minn 1% tal-ammont totali ta' [α-³²P]ATP f'kull kampjun. Ir-reazzjoni ġiet mitmuma billi tagħli għal 3 min u [³²P] AMP ċikliku ġie iżolat bil-metodu ta 'kolonna doppja (Dowex u alumina) ta' Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) ġie miżjud ma 'kull tubu qabel il-kromatografija tal-kolonna bħala standard intern. Ir-radjuattività ġiet iddeterminata permezz ta 'spettrofotometrija ta' tpetpet likwida (effiċjenza ta '45% għal ³H) wara li 4.5 ml tal-eluat ġew maħlula f'14.5 ml ta 'fluwidu ta' tpetpett Ecolite.

2.6. Analiżi tad-data

Sakemm ma jkunx indikat mod ieħor, id-dejta hija rrappurtata bħala valuri medji ± SE ta '4-8 esperimenti separati, li kull wieħed minnhom sar fi tliet kopji. Net-stimulated [³⁵L-irbit ta' S]GTPγS huwa kkalkulat bħala rbit stimulat mill-agonist nieqes it-twaħħil bażali. L-attività netta ta 'adenylyl cyclase stimulata minn forskolin hija definita bħala attività stimulata minn forskolin - attività bażali (pmol/mg/min). Inibizzjoni perċentwali ta 'attività ta' adenylyl cyclase stimulata minn forskolin hija definita bħala (attività stimulata minn forskolin nett fin-nuqqas ta 'agonist - attività stimulata minn forskolin nett fil-preżenza ta' attività stimulata minn agonist / forskolin nett fin-nuqqas ta 'agonist) × 100. Kollha analiżi tat-twaħħil tal-kurva u statistika twettqu bl-użu ta 'Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Il-kurvi tal-effett tal-konċentrazzjoni ġew analizzati b'rigressjoni iterattiva mhux lineari biex tinkiseb EC₅₀ u E._mass valuri. Is-sinifikat statistiku tad-dejta dwar l-effett tal-konċentrazzjoni kienet determinata b'analiżi f'żewġ direzzjonijiet tal-varjanza (ANOVA), bl-użu tad-doża tal-agonist u l-induzzjoni tal-ġeni (mixgħul jew mitfi) bħala l-fatturi ewlenin. Sinifikat statistiku tal-valuri tal-kurva-fit (E_mass jew KE₅₀) ġie ddeterminat mit-test t ta' Student b'żewġ denbu mhux imqabbad, bl-użu tal-korrezzjoni ta' Welch jew it-trasformazzjoni tal-għerq kwadrat tad-dejta fejn meħtieġ biex tikkoreġi għal varjanzi mhux ugwali (skoperti bit-test F) fil-KE₅₀ valuri.

3. Riżultati

3.1. Effett tal-espressjoni ΔFosB fuq l-attivazzjoni tal-proteina G medjata mir-riċetturi tal-opjojdi u kannabinojdi

Biex tiddetermina jekk MOR- jew CB₁L-attivazzjoni tal-proteina G medjata mill-R ġiet mibdula b'espressjoni transġenika induċibbli ta' ΔFosB fin-NAc, stimulat mill-agonist [³⁵It-twaħħil ta 'S] GTPγS ġie eżaminat f'membrani iżolati ppreparati minn dan ir-reġjun ta' ġrieden bitransġeniċi li jesprimu b'mod kondizzjonali (ΔFosB mixgħul) jew ma jesprimux (ΔFosB mitfi) it-transġene ΔFosB. L-analogu tal-enkephalin selettiv MOR DAMGO intuża biex jattiva MOR u l-kannabinojdi aminoalkylindole WIN55,212-2 intuża biex jattiva CB₁R. Dawn il-ligands qabel intwerew li huma agonisti sħaħ f'MOR u CB₁R, rispettivament (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Ma kienx fattibbli li tiġi eżaminata l-attività tal-proteina G medjata minn KOR minħabba li s-sinjal huwa baxx wisq fil-moħħ tal-annimali gerriema (Childers, et al., 1998). Ir-riżultati wrew stimulazzjoni dipendenti fuq il-konċentrazzjoni tal-attività tal-proteina G kemm minn DAMGO kif ukoll minn WIN55,122-2 f'NAc minn ΔFosB mitfi u ΔFosB fuq il-ġrieden (Figura 1). Għal attività stimulata minn DAMGO (Figura 1A), ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tad-dejta tal-effett tal-konċentrazzjoni żvelat effetti ewlenin sinifikanti tal-istatus ΔFosB (p<0.0001, F=22.12, df=1) u konċentrazzjoni DAMGO (p<0.0001, F=29.65, df=5) bl-ebda interazzjoni sinifikanti (p=0.857, F=0.387, df=5). L-analiżi ta 'rigressjoni mhux lineari tal-kurvi tal-effett tal-konċentrazzjoni żvelat DAMGO E b'mod sinifikanti akbar_mass valur f'ΔFosB fuq il-ġrieden (E_mass = 73 ± 5.2% stimulazzjoni) relattiv għal ΔFosB off ġrieden (E_mass = 56 ± 4.1% stimulazzjoni; p<0.05 differenti minn ΔFosB fuq il-ġrieden bit-test t ta' Student). DAMGO EC₅₀ valuri ma kinux differenti bejn ġrieden ΔFosB on u ΔFosB off (302 ± 72 nM kontra 212 ± 56 nM, rispettivament, p = 0.346).

Effett tal-espressjoni ta' ΔFosB fuq [stimulat mill-agonisti³⁵S]GTPγS vinkolanti fin-NAc. Membrani minn ġrieden li jesprimu ΔFosB (ΔFosB mixgħul) jew kontroll (ΔFosB mitfi) ġew ttestjati kif deskritt f'Metodi bl-użu ta' konċentrazzjonijiet differenti ...

B'kuntrast mar-riżultati miksuba bl-agonist MOR DAMGO, ma ġew osservati l-ebda differenzi dipendenti fuq l-istatus ΔFosB fl-attivazzjoni tal-proteina G bl-agonist tal-kannabinojdi WIN55,212-2 (Figura 1B). ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tad-dejta tal-effett tal-konċentrazzjoni WIN55,212-2 żvelat effett ewlieni sinifikanti tal-konċentrazzjoni WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), iżda mhux tal-istatus ΔFosB (p = 0.172). , F = 1.90, df = 1) u ma kien hemm l-ebda interazzjoni (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Bl-istess mod, ma kien hemm l-ebda effett tal-istatus ΔFosB fuq WIN55,212-2 E_mass valuri (103 ± 6% kontra 108 ± 8% stimulazzjoni fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament, p = 0.813 bit-test t ta' Student) jew EC₅₀ valuri (103 ± 20 nM kontra 170 ± 23 nM fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament, p = 0.123).

Ibbażat fuq il-forma tal-kurvi u l-fatt li l-istudji preċedenti tagħna wrew kurvi bifażiċi WIN55,212-2 b'effett ta 'konċentrazzjoni fil-moħħ (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), il-kurvi WIN55,212-2 ġew analizzati wkoll bl-użu ta 'mudell ta' żewġ siti. Analiżi tad-dejta medja wriet titjib żgħir fit-tajjeb tal-adegwatezza bl-użu tal-mudell b'żewġ siti (R² = 0.933 u 0.914, somma ta 'kwadri = 3644 u 5463 fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament) meta mqabbla mal-mudell ta' sit wieħed (R² = 0.891 u 0.879, somma ta 'kwadri = 6561 u 6628 fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament). Madankollu, ma nstabet l-ebda differenzi sinifikanti bejn il-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija jew fl-E_mass jew KE₅₀ valuri tas-siti ta' qawwa għolja jew baxxa (Tabella Supplimentari 1), għalkemm kien hemm tendenza lejn KE aktar baxx₅₀ valur fis-sit ta’ qawwa għolja fil-ġrieden b’ΔFosB mixgħul (EC₅₀għolja = 28.0 ± 10.6 nM) meta mqabbla ma’ dawk b’ΔFosB mitfi (EC₅₀għolja = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Barra minn hekk, ma kien hemm l-ebda effett tal-istatus ΔFosB fuq bażi bażali [³⁵S] GTPγS twaħħil fil-membrani NAc (253 ± 14 kontra 226 ± 14 fmol/mg fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament, p = 0.188). Din id-dejta tindika li l-espressjoni transġenika induċibbli ta’ ΔFosB fin-NAc tal-ġrieden żiedet l-attivazzjoni tal-proteina G medjata minn MOR mingħajr ma affettwa b’mod sinifikanti CB₁Attività tal-proteina G medjata mill-R jew bażali.

3.2. Effett ta' ΔFosB fuq l-inibizzjoni medjata mir-riċetturi tal-opjojdi u tal-kannabinojdi ta' adenylyl cyclase

Biex tevalwa l-effett ta 'espressjoni transġenika inducibbli ta' ΔFosB fuq il-modulazzjoni tal-attività effettur downstream minn MOR u CB₁R, inibizzjoni ta '1 µM attività adenylyl cyclase stimulata minn forskolin ġiet eżaminata fil-membrani NAc. Minbarra MOR- u CB₁Inibizzjoni medjata mill-R tal-attività adenylyl cyclase, l-effetti tal-attività KOR ġew eżaminati wkoll bl-użu tal-agonist sħiħ selettiv tal-KOR U50,488 (Zhu, et al., 1997), minħabba li riżultati preċedenti wrew li dynorphin mRNA kien mira ta 'ΔFosB fil-mudell bitransġeniku (Zachariou, et al., 2006). Ir-riżultati wrew li DAMGO, U50,488 u WIN55,212-2 kull wieħed ipproduċew inibizzjoni dipendenti fuq il-konċentrazzjoni tal-attività adenylyl cyclase kemm f'ΔFosB off kif ukoll f'ΔFosB fuq il-ġrieden (Figura 2). ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tad-dejta tal-effett tal-konċentrazzjoni ta' DAMGO (Figura 2A) żvelat effetti ewlenin sinifikanti ta 'status ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) u konċentrazzjoni DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), iżda l-ebda interazzjoni sinifikanti (p = 0.441, F = 0.986). , df = 6). L-analiżi ta 'rigressjoni mhux lineari tal-kurvi tal-effett tal-konċentrazzjoni ta' DAMGO żvelat DAMGO EC b'mod sinifikanti aktar baxx₅₀ valur f'ΔFosB fuq ġrieden (101 ± 11 nM) meta mqabbel ma' ΔFosB off ġrieden (510 ± 182 nM, p <0.05 bit-test t tal-istudent). Madankollu, ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti f'DAMGO E_mass valuri (20.9 ± 1.26% kontra 19.8 ± 1.27% inibizzjoni fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament, p = 0.534).

Effett tal-espressjoni ta 'ΔFosB fuq l-inibizzjoni tal-attività ta' adenylyl cyclase fin-NAc. Membrani minn ġrieden li jesprimu ΔFosB (ΔFosB mixgħul) jew kontroll (ΔFosB mitfi) ġew ttestjati kif deskritt fil-Metodi fil-preżenza ta’ 1 µM ...

L-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase medjata minn KOR kienet ukoll differenti bħala funzjoni ta' espressjoni transġenika induċibbli ta' ΔFosB (Figura 2B). ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tad-dejta tal-effett tal-konċentrazzjoni U50,488 wriet effetti ewlenin sinifikanti tal-istatus ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) u konċentrazzjoni U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , mingħajr interazzjoni sinifikanti (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analiżi ta 'rigressjoni mhux lineari tal-kurvi tal-konċentrazzjoni-effett żvelat U50,488 E akbar_mass valur f'ΔFosB fuq il-ġrieden (18.3 ± 1.14% inibizzjoni) meta mqabbel ma' ΔFosB off ġrieden (12.5 ± 2.03% inibizzjoni; p < 0.05 differenti minn ΔFosB mixgħul bit-test t ta' Student), bl-ebda differenza sinifikanti f'U50,488 EC₅₀ valuri (310 ± 172 nM kontra 225 ± 48 nM fil-ġrieden ΔFosB mixgħula u mitfija, rispettivament, p = 0.324).

B'kuntrast ma 'l-effetti osservati ma' MOR u KOR, ma kien hemm l-ebda effett sinifikanti ta 'espressjoni ta' ΔFosB transġenika inducibbli fuq l-inibizzjoni ta 'adenylyl cyclase mill-agonist tal-kannabinojdi WIN55212-2 (Figura 2C). ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tad-dejta tal-effett tal-konċentrazzjoni WIN55,212-2 wriet effett sinifikanti tal-konċentrazzjoni tad-droga (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), iżda mhux tal-istatus ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) lanqas ma kien hemm interazzjoni sinifikanti (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Barra minn hekk, ma kien hemm l-ebda effett tal-istatus ΔFosB fuq l-attività adenylyl cyclase bażali jew stimulata minn forskolin fin-nuqqas ta 'kwalunkwe agonist. L-attività bażali adenylyl cyclase kienet 491 ± 35 pmol/mg/min f'ΔFosB fuq ġrieden meta mqabbla ma '546 ± 44 f'ΔFosB off ġrieden (p = 0.346 bit-test t ta' Student). Bl-istess mod, l-attività ta 'adenylyl cyclase fil-preżenza ta' 1 µM forskolin kienet 2244 ± 163 pmol/mg/min f'ΔFosB fuq ġrieden kontra 2372 ± 138 pmol/mg/min f'ΔFosB off ġrieden (p = 0.555).

3.3. Effett ta' ΔcJun fuq l-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase medjata mir-riċetturi tal-kannabinojdi

Minħabba li l-espressjoni transġenika induċibbli ta 'ΔFosB tejbet it-trasduzzjoni tas-sinjal inibitorju minn MOR u KOR għal adenylyl cyclase fin-NAc, kien ta' interess li jiġi determinat jekk inibitur negattiv dominanti ta 'traskrizzjoni medjata minn ΔFosB jimmodula s-sinjalar tar-riċettur tal-opjojdi b'mod oppost. Biex tindirizza din il-mistoqsija, l-inibizzjoni tal-attività adenylyl cyclase stimulata minn forskolin minn DAMGO u U50,488 ġiet eżaminata f'membrani ppreparati mill-NAc ta 'ġrieden bitransġeniċi li jesprimu ΔcJun b'mod kondizzjonali. Ir-riżultati ma wrew l-ebda effett sinifikanti tal-espressjoni ΔcJun fuq l-inibizzjoni tal-attività adenylyl cyclase minn MOR jew KOR (Figura 3). ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tal-kurvi tal-effett tal-konċentrazzjoni DAMGO wriet effett ewlieni sinifikanti tal-konċentrazzjoni DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), iżda mhux tal-istatus ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) u ma kien hemm l-ebda interazzjoni sinifikanti (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Bl-istess mod, ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti f'E_mass jew KE₅₀ valuri bejn ġrieden b'ΔcJun mixgħul (E_mass = 23.6 ± 2.6%; KE₅₀ = 304 ± 43 nM) jew ΔcJun off (E_mass = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; KE₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Riżultati simili dehru b'U50,488, b'tali mod li l-ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tal-kurvi tal-konċentrazzjoni-effett wriet effett sinifikanti ta 'konċentrazzjoni (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), iżda mhux ta' status ΔcJun (p = 0.127). , F= 2.391, df = 1) u ma kien hemm l-ebda interazzjoni sinifikanti (p = 0.978, F= 0.190, df = 6). Bl-istess mod, ma kien hemm l-ebda differenzi sinifikanti f'E_mass jew KE₅₀ valuri bejn ġrieden b'ΔcJun mixgħul (E_mass = 14.8 ± 2.9%; KE₅₀ = 211 ± 81 nM) jew mitfi (E_mass = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; KE₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Effett tal-espressjoni ΔcJun fuq l-inibizzjoni tal-attività adenylyl cyclase fin-NAc. Membrani minn ġrieden li jesprimu ΔcJun (ΔcJun mixgħul) jew kontroll (ΔcJun mitfi) ġew inkubati fil-preżenza ta 'DAMGO (A), U50,488H (B) jew WIN55,212-2 ...

L-espressjoni ta 'ΔcJun ukoll ma affettwatx b'mod sinifikanti l-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase fin-NAc mill-agonist tal-kannabinojdi. ANOVA f'żewġ direzzjonijiet tal-kurvi tal-effett tal-konċentrazzjoni WIN55,212-2 wera effett ewlieni sinifikanti tal-konċentrazzjoni WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), iżda mhux tal-ġenotip (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) u ma kien hemm l-ebda interazzjoni sinifikanti (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Bl-istess mod, ma kien hemm l-ebda differenzi sinifikanti f'WIN55,212-2 E_mass valuri (13.0 ± 2.3% u 13.6 ± 0.9% inibizzjoni fil-ġrieden ΔcJun on versus off, rispettivament, p = 0.821) u jew EC₅₀ valuri (208 ± 120 nM u 417 ± 130 nM fil-ġrieden ΔcJun on versus off, rispettivament, p = 0.270). Għalhekk, għalkemm kien hemm tendenza żgħira lejn qawwa mnaqqsa ta 'WIN55,212-2 fil-ġrieden li jesprimu ΔcJun, it-transġene ma biddilx b'mod sinifikanti l-inibizzjoni tal-kannabinojdi ta' adenylyl cyclase. Barra minn hekk, ma kien hemm l-ebda effett tal-istatus ΔcJun fuq l-attività adenylyl cyclase bażali jew stimulata minn forskolin. L-attività bażali adenylyl cyclase kienet 1095 ± 71 pmol/mg/min u 1007 ± 77 pmol/mg/min (p = 0.403) fil-ġrieden b'ΔcJun mixgħul jew mitfi, rispettivament. L-attività ta 'Adenylyl cyclase stimulata minn 1 µM forskolin kienet 4185 ± 293 pmol/mg/min kontra 4032 ± 273 pmol/mg/min (p = 0.706) fil-ġrieden b'ΔcJun mixgħul jew mitfi, rispettivament.

3.4. Diskussjoni

Ir-riżultati ta 'dan l-istudju żvelaw attivazzjoni mtejba tal-proteina G medjata minn MOR u inibizzjoni ta' adenylyl cyclase fin-NAc tal-ġrieden b'espressjoni transġenika induċibbli ta 'ΔFosB f'dynorphin/D₁R li fih newroni. L-inibizzjoni medjata minn KOR ta 'attività ta' adenylyl cyclase ġiet imsaħħa wkoll fin-NAc tal-ġrieden li jesprimu ΔFosB, li jissuġġerixxi li ΔFosB jirregola s-sistema opjojde endoġena fin-NAc. Id-DAMGO E_mass valur kien akbar għal MOR-stimulat [³⁵S]GTPγS vinkolanti, u l-KE tagħha₅₀ valur kien aktar baxx għall-inibizzjoni ta 'adenylyl cyclase, fil-ġrieden li jesprimu żejjed ΔFosB meta mqabbla ma' ġrieden ta 'kontroll. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu l-possibbiltà ta 'riżerva tar-riċettur għall-modulazzjoni tal-effetturi iżda mhux attivazzjoni tal-proteina G taħt il-kundizzjonijiet tal-assaġġ eżaminati. Is-sejba li l-inibizzjoni massima ta 'adenylyl cyclase mill-agonist KOR kienet affettwata mill-espressjoni ΔFosB tissuġġerixxi riżerva baxxa ta' riċettur għar-rispons medjat minn KOR, konsistenti mal-livelli baxxi ta 'siti ta' rbit KOR fil-moħħ tal-ġrieden (Unterwald, et al., 1991). B'kuntrast, CB₁L-attività tal-proteina G medjata mill-R u l-inibizzjoni ta 'adenylyl cyclase ma kinux affettwati mill-espressjoni ta' ΔFosB, jissuġġerixxi li s-sistemi opjojdi u kannabinojdi huma differenti fir-rispons tagħhom għal ΔFosB f'dawn in-newroni NAc.

L-effett ta 'ΔFosB fuq is-sinjalar medjat mir-riċetturi tal-opjojdi huwa konsistenti mar-rapport preċedenti tagħna li l-espressjoni ta' ΔFosB fl-istriatum bidlet l-effetti akuti u kroniċi tal-morfina (Zachariou, et al., 2006). Sejba waħda ta' dak l-istudju kienet li ġrieden b'espressjoni transġenika ta' ΔFosB fid-dynorphin/D₁In-newroni strijatali R kienu aktar sensittivi għall-kondizzjonament tal-morfina fil-post milli l-kontrolli. Barra minn hekk, dan l-effett kien imitat minn espressjoni medjata b'mod virali ta 'ΔFosB b'injezzjoni speċifika għas-sit fin-NAc. Dawn l-osservazzjonijiet huma konsistenti mar-riżultati attwali li juru sinjalar MOR imtejjeb fin-NAc.

Preċedentement identifikajna l-kodifikazzjoni tal-ġene dynorphin bħala mira ta 'ΔFosB, u ppropona li dynorphin imnaqqas ikun konsistenti ma' proprjetajiet ta 'sodisfazzjon imtejba tal-morfina fil-ġrieden bitransġeniċi ΔFosB (Zachariou, et al., 2006). Ir-riżultati preżenti juru li l-inibizzjoni medjata minn KOR ta 'adenylyl cyclase fin-NAc hija msaħħa fil-ġrieden li jesprimu ΔFosB, li jistgħu jirriflettu żieda kumpensatorja fis-sensittività KOR wara dynorphin imnaqqas. Studji preċedenti wrew li KOR kien regolat 'il fuq f'ċerti reġjuni tal-moħħ ta' ġrieden knockout prodynorphin, inkluż NAc (Clarke, et al., 2003).

B'kuntrast ma' ΔFosB, l-espressjoni transġenika inducibbli ta 'ΔcJun, il-mutant maqtugħ negattiv dominanti tas-sieħeb li torbot ΔFosB cJun, ma bidlitx l-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase minn agonisti MOR jew KOR. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-livelli bażali ta 'espressjoni ta' ΔFosB, li huma relattivament baxxi, m'għandhomx rwol sinifikanti fiż-żamma tas-sinjalar tar-riċetturi tal-opjojdi f'dan il-livell ta 'transduzzjoni tas-sinjali fin-NAc. Il-fatt li l-effett ta’ sodisfazzjon kondizzjonat tal-morfina naqas bl-espressjoni ΔcJun fl-istudju preċedenti tagħna (Zachariou, et al., 2006) jissuġġerixxi jew li l-induzzjoni tal-morfina ta 'ΔFosB matul il-proċedura ta' kondizzjonament hija importanti fir-regolazzjoni tar-risponsi ta 'mġieba għall-mediċina jew li l-effetti traskrizzjonijiet ta' ΔFosB minbarra dawk li jaffettwaw is-sinjalar prossimali minn riċetturi tal-opjojdi jistgħu jinfluwenzaw il-premju tal-opjojdi. Fi kwalunkwe każ, ir-riżultati tal-istudju preżenti juru biċ-ċar li, meta l-espressjoni ta' ΔFosB tkun elevata 'l fuq mil-livelli bażali fid-dynorphin striatal/D₁Neuroni li jesprimu R, hemm żieda qawwija fl-akkoppjar ta 'MOR u KOR għall-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase fin-NAc.

Il-mekkaniżmi li bihom is-sinjalar medjat minn MOR u KOR jissaħħaħ permezz ta' espressjoni żejda ta' ΔFosB mhumiex ċari, iżda qabel urejna li l-livelli MOR, evalwati minn [³L-irbit ta' H]naloxone, mhumiex differenti fin-NAc ta' ΔFosB ġrieden mixgħula kontra off (Zachariou, et al., 2006). L-istess studju sab li Gα_iIl-livelli ta 'proteina 1 u 2 ma ġewx affettwati f'dan ir-reġjun mill-espressjoni ta' ΔFosB. Madankollu, analiżi preċedenti tal-firxa tal-espressjoni tal-ġeni wrew li Gα_o L-mRNA kien regolat 'il fuq fin-NAc ta' ΔFosB fuq il-ġrieden (McClung u Nestler, 2003). Ikun ta 'interess fi studji futuri li jiġi eżaminat b'mod komprensiv l-effett tal-espressjoni transġenika ΔFosB fuq l-espressjoni tas-subunità tal-proteina G fil-livell tal-proteina kif ukoll fuq l-espressjoni ta' ħafna proteini modulatorji tal-proteina G.

Huwa interessanti li l-espressjoni ΔFosB ma saħħitx CB₁Sinjali medjat mill-R fin-NAc. Huwa possibbli li l-alterazzjonijiet fis-CB₁Is-sinjalar R iseħħ f'popolazzjoni diskreta ta 'newroni li hija mgħottija fil-preparazzjoni kollha tan-NAc. Per eżempju, amministrazzjoni ta 'Δ⁹– THC indotta b'mod sinifikanti ΔFosB fil-qalba, iżda mhux fil-qoxra, tan-NAc (Perrotti, et al., 2008). Jientabilħaqq, intwera li l-isfida b'Δ⁹-THC wara amministrazzjoni ripetuta ta' Δ⁹-THC żied ir-rilaxx tad-dopamina fil-qalba tan-NAc, iżda naqqas ir-rilaxx fil-qoxra (Cadoni, et al., 2008). Huwa wkoll importanti li wieħed jinnota li l-linja 11A ta 'ġrieden bitransġeniċi jesprimu ΔFosB biss f'dynorphin/D₁R pożittiv newroni tax-xewka medji ta 'l-istriatum, iżda CB₁R huma espressi kemm f'dynorphin/D₁R u enkephalin/D₂Neuroni strijatali R pożittivi (Hohmann u Herkenham, 2000), kif ukoll fuq it-terminali tal-afferenti kortikali (Robbe, et al., 2001). L-espressjoni tar-regolatur negattiv dominanti tat-traskrizzjoni medjata minn ΔFosB, ΔcJun, ukoll ma kellha l-ebda effett sinifikanti fuq is-sinjalar tar-riċetturi tal-kannabinojdi, għalkemm ΔcJun huwa espress b'mod induċibbli fiż-żewġ D₁ u D₂-li fihom popolazzjonijiet ta’ newroni tax-xewka medji f’dawn il-ġrieden (Peakman, et al., 2003). Huwa possibbli, madankollu, li l-espressjoni bażali ΔFosB hija baxxa biżżejjed li ΔcJun ma jaffettwax is-sinjalar tar-riċettur, kif issuġġerit mir-riżultati b'MOR u KOR. Huwa wkoll possibbli li CB₁Is-sinjalar R huwa mtejjeb b'mod modest bl-espressjoni bażali ΔFosB, b'tali mod li żieda ulterjuri fl-espressjoni ΔFosB jew imblukkar l-azzjonijiet tagħha b'ΔcJun kellhom biss effetti ħfief li ma laħqux il-livell ta 'sinifikat statistiku. Appoġġ indirett għal din l-interpretazzjoni jista 'jidher billi jitqabbel WIN55,212-2 EC₅₀ valuri bejn ġrieden li jesprimu ΔcJun kontra ΔFosB. Il-proporzjon tal-WIN55,212-2 EC₅₀ valur għall-inibizzjoni ta' adenylyl cyclase fil-ġrieden b'espressjoni indotta ta' ΔcJun għall-EC tagħha₅₀ valur għall-attivazzjoni tal-proteina G fil-ġrieden b'espressjoni indotta ta 'ΔFosB kien 4.0, filwaqt li l-istess proporzjon fil-ġrieden mingħajr induzzjoni ta' kwalunkwe transġene kien 1.2.

Inkella, il-kannabinojdi jistgħu jinduċu espressjoni ta' ΔFosB mingħajr ebda effett dirett fuq CB₁Sinjali R. F'dan ix-xenarju, il-kannabinojdi jistgħu jimmodulaw ir-rispons għall-effetti psikoattivi ta 'drogi oħra permezz ta' regolazzjoni traskrizzjoni medjata minn ΔFosB. In fatt, amministrazzjoni ta 'Δ⁹-THC jipproduċi cross-sensitization għall-opjojdi u l-amfetamina (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), konsistenti ma’ din l-ipoteżi. Barra minn hekk, l-amministrazzjoni ripetuta tal-agonist tal-kannabinojdi CP55,940 kienet irrappurtata li żżid l-attivazzjoni tal-proteina G medjata minn MOR fin-NAc, b'mod simili għall-ġrieden li jesprimu b'mod induċibbli ΔFosB fl-istudju preżenti (Vigano, et al., 2005). L-effett tal-espressjoni ΔFosB fuq Δ⁹-L-imgieba medjata mit-THC ma ġietx evalwata, iżda r-riżultati preżenti ma jipprekludux interazzjoni. Ir-riżultati ta 'dan u l-istudju preċedenti tagħna (Zachariou, et al., 2006) juru alterazzjonijiet indotti minn ΔFosB f'MOR u KOR/dynorphin fl-istriatum. L-effetti ta 'sodisfazzjon ta' Δ⁹-THC, kif imkejjel mill-preferenza tal-post, huma aboliti fil-ġrieden nulli MOR, filwaqt li t-tħassir ta 'KOR attenwat Δ⁹-THC post stmerrija u żvelat Δ⁹-Preferenza tal-post THC (Ghozland, et al., 2002). Bl-istess mod, stmerrija tal-post kundizzjonata għal Δ⁹-THC huwa nieqes f'knockout pro-dynorphin meta mqabbel mal-ġrieden tat-tip selvaġġ (Zimmer, et al., 2001). Din id-dejta tissuġġerixxi li Δ⁹-THC jista 'jkun aktar ta' sodisfazzjon wara l-induzzjoni ta 'ΔFosB u l-induzzjoni konsegwenti ta' sinjalazzjoni MOR bi tnaqqis fl-espressjoni tad-dynorphin.

Fil-qosory, ir-riżultati ta 'dan l-istudju wrew li l-espressjoni ta' ΔFosB f'D₁In-newroni strijatali pożittivi R/dynorphin tejbu s-sinjalar medjat minn MOR- u KOR fil-livell ta 'inibizzjoni medjata mill-proteina G tal-attività ta' adenylyl cyclase fin-NAc. Din is-sejba hija konsistenti ma' studji li wrew rwol għas-sistema opjojde endoġena fil-premju (Trigo, et al., 2010), u tipprovdi mekkaniżmu potenzjali għal effetti medjati minn ΔFosB fuq il-premju. B'kuntrast, CB₁Is-sinjalar medjat mill-R fin-NAc ma kienx affettwat b'mod sinifikanti mill-espressjoni ta' ΔFosB strijatali taħt il-kundizzjonijiet eżaminati, għalkemm aktar studji huma ġġustifikati biex jiddeterminaw l-effett tal-induzzjoni ta 'ΔFosB fuq is-sistema endokannabinojde.

Punti ewlenin tar-Riċerka

Is-sinjalar MOR huwa msaħħaħ fin-nukleu accumbens tal-ġrieden li jesprimu ΔFosB
L-inibizzjoni KOR ta 'adenylyl cyclase hija msaħħa wkoll fil-ġrieden li jesprimu ΔFosB
L-espressjoni ta 'ΔFosB ma tbiddilx CB₁Sinjali R fin-nukleu accumbens

Materjal Supplimentari

01

Ikklikkja hawn biex tara.^{(45K, pdf)}

Ringrazzjamenti

L-awturi jirringrazzjaw lil Hengjun He, Jordan Cox u Aaron Tomarchio għall-assistenza teknika mal-[³⁵S]GTPγS assays tal-irbit. Dan l-istudju kien appoġġjat minn Għotjiet USPHS DA014277 (LJS), DA10770 (DES) u P01 DA08227 (EJN).

Noti f'qiegħ il-paġna

Ċaħda tal-Pubblikatur: Dan huwa fajl PDF ta 'manuskritt mhux editjat li ġie aċċettat għall-pubblikazzjoni. Bħala servizz lill-klijenti tagħna qed nipprovdu din il-verżjoni bikrija tal-manuskritt. Il-manuskritt ser jgħaddi minn kopji ta 'kitba, issettjar ta' tipi, u reviżjoni tal-prova li tirriżulta qabel ma jiġi ppubblikat fil-forma finali tiegħu. Jekk jogħġbok innota li matul il-proċess tal-produzzjoni jistgħu jinstabu żbalji li jistgħu jaffettwaw il-kontenut, u r-rinunzji legali kollha li japplikaw għall-ġurnal għandhom x'jaqsmu.

Referenzi

Bozarth MA, Wise RA. L-oqsma tar-riċetturi tal-opiate anatomikament distinti jimmedjaw il-premju u d-dipendenza fiżika. Xjenza. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Metodu rapidu u sensittiv għall-kwantifikazzjoni ta' kwantitajiet ta' mikrogrammi ta' proteina li juża l-prinċipju ta' rbit ta' proteina-żebgħa. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Delta kronika⁹-trattament ta 'tetrahydrocannabinol jipproduċi telf dipendenti fuq il-ħin ta' proteini G attivati mir-riċettur tal-kannabinojdi fil-moħħ. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Effikaċja tal-agonist tar-riċettur tal-kannabinojdi biex tistimula [³⁵L-irbit ta 'S]GTPγS ma' membrani ċerebellari tal-firien jikkorrelata ma 'tnaqqis indott minn agonisti fl-affinità tal-PGD. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Sensitizzazzjoni tal-imġieba wara espożizzjoni ripetuta għal Delta 9-tetrahydrocannabinol u cross-sensitization bil-morfina. Psikofarmakoloġija (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Sensitizzazzjoni tal-imġieba għal delta 9-tetrahydrocannabinol u cross-sensitization mal-morfina: bidliet differenzjali fil-qoxra accumbal u trażmissjoni tad-dopamina tal-qalba. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Annimali transġeniċi b'espressjoni tal-ġeni inducibbli u mmirata fil-moħħ. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. It-tieni messaġġiera akkoppjata mar-riċettur tal-opjojdi. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opjojdi u inibizzjoni tar-riċettur tal-kannabinojdi ta 'adenylyl cyclase fil-moħħ. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Istimulazzjoni tar-riċettur tal-opjojdi Kappa ta' [³⁵S]GTPγS vinkolanti fil-moħħ tal-fniek tal-Indi: Nuqqas ta' evidenza għall-kappa₂-attivazzjoni selettiva tal-proteini G. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Ir-regolazzjoni selettiva tar-reġjun tar-riċetturi mikro-, delta- u kappa-opjojdi iżda mhux riċetturi 1 bħal riċetturi ta 'l-opjojdi fl-imħuħ ta' ġrieden knockout ta 'enkephalin u dynorphin. Newroxjenza. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Espressjoni eċċessiva ta ’DeltaFosB speċifika għal tip ta’ ċellula striatali ttejjeb l-inċentiv għall-kokaina. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Sistema ta 'sinjalazzjoni endocannabinoid u premju tal-moħħ: enfasi fuq dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. L-effetti motivazzjonali tal-kannabinojdi huma medjati minn riċetturi mu-opioid u kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Karatterizzazzjoni u lokalizzazzjoni ta 'riċetturi tal-kannabinojdi fil-moħħ tal-firien: studju awtoradjografiku kwantitattiv in vitro. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Lokalizzazzjoni ta 'mRNA tar-riċettur tal-kannabinojdi CB(1) f'sottopopolazzjonijiet newronali ta' striatum tal-firien: studju ta 'ibridizzazzjoni in situ b'tikketta doppja. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Unjoni Internazzjonali tal-Farmakoloġija. XXVII. Klassifikazzjoni tar-riċetturi tal-kannabinojdi. Reviżjoni Farmakoloġika. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Imblokk tal-effetti tal-marijuana affumikata mill-antagonist selettiv tar-riċettur tal-kannabinojdi CB1 SR141716. Arch. Psikjatrija Ġen. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen Ċ, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. L-espressjoni tal-fattur ta ’traskrizzjoni deltaFosB fil-moħħ tikkontrolla s-sensittività għall-kokaina. Natura. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Newroċirkwit tal-vizzju. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Trattament kroniku b'Delta(9)-tetrahydrocannabinol itejjeb ir-rispons lokomotorju għall-amfetamina u l-eroina. Implikazzjonijiet għall-vulnerabbiltà għall-vizzju tad-droga. Neurofarmoloġija. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Involviment tas-sistema endocannabinoid fil-vizzju tad-droga. Xejriet Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Espressjoni mRNA tar-riċettur mu-Opioid fis-CNS tal-firien: paragun mal-irbit tar-riċettur mu. Moħħ Riż. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Telf ta 'analġeżija indotta mill-morfina, effett ta' premju u sintomi ta 'rtirar fil-ġrieden li m'għandhomx il-ġene tar-riċettur µ-opjojdi. Natura. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Ir-regolazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni u l-premju tal-kokaina minn CREB u DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: swiċċ molekulari għal adattament fit-tul fil-moħħ. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. Riċetturi tad-dopamina D1 jimmodulaw l-induzzjoni ta 'deltaFosB fl-istriatum tal-far wara l-għoti ta' morfina intermittenti. J. Pharmacol. Exp. Hemm. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Reviżjoni. Mekkaniżmi traskrizzjoni ta ’vizzju: rwol ta’ DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: medjatur molekulari ta ’plastiċità newrali u ta’ mġiba fit-tul. Moħħ Riż. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Tama BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Studji farmakoloġiċi tar-regolazzjoni ta ’l-induzzjoni ta’ antiġen kroniku relatat ma ’l-FOS mill-kokaina fl-istriatum u n-nukleu accumbens. J. Pharmacol. Exp. Hemm. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Espressjoni induttiva speċifika għar-reġjun tal-moħħ ta 'mutant negattiv dominanti ta' c-Jun fil-ġrieden transġeniċi tnaqqas is-sensittività għall-kokaina. Moħħ Riż. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Mudelli distinti ta 'induzzjoni ta' DeltaFosB fil-moħħ minn drogi ta 'abbuż. Synapse. 2008;62: 358-369. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalizzazzjoni u mekkaniżmi ta 'azzjoni ta' riċetturi tal-kannabinojdi fis-sinapsi glutamaterġiċi tan-nukleu tal-ġurdien accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu stimulat mir-riċettur tal-opjojdi [³⁵S]GTPγS twaħħil fit-talamus tal-firien u linji ta' ċelluli kkultivati: Mekkaniżmi ta' trasduzzjoni tas-sinjali li huma sottostanti għall-effikaċja tal-agonista. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Is-sistema opjojde endoġena: sottostrat komuni fil-vizzju tad-droga. Alkoħol tad-Droga Jiddependi. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Lokalizzazzjoni newroanatomika tar-riċetturi tal-opjojdi κ1 u κ2 fil-moħħ tal-firien u tal-fniek tal-Indi. Moħħ Riż. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. L-imblokk tar-riċetturi tal-opiate tan-nukleu accumbens inaqqas il-premju tal-eroina ġol-vini fil-far. Psikofarmakoloġija (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Mekkaniżmi molekulari involuti fl-interazzjoni asimmetrika bejn is-sistemi kannabinojdi u opjojdi. Psikofarmakoloġija (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, MP Cassidy, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Rwol essenzjali għal DeltaFosB fin-nukleu jakkumula fl-azzjoni tal-morfina. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Żewġ siti tal-moħħ għall-premju tal-kannabinojdi. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. L-attivazzjoni tar-riċettur tal-opjojdi kappa uman kklonat minn agonisti ssaħħaħ l-irbit ta '[35S]GTPγS mal-membrani: determinazzjoni tal-potenzi u l-effikaċja tal-ligands. J. Pharmacol. Exp. Hemm. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Assenza ta 'effetti disforiċi tad-delta -9-tetrahydrocannabinol fil-ġrieden defiċjenti ta' dynorphin. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Żieda fil-mortalità, l-ipoattività u l-ipoalġesja fil-ġrieden knockout tar-riċetturi tal-kannabinojdi CB1. Proc. Natl. Acad. Sci. L-Istati Uniti 1999;96: 5780-5785. [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed]