ਸਾਈਕਲਿਨ-ਨਿਰਭਰ ਕਿਨਾਜ਼ 5 ਦੀ ਵਧ ਰਹੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਕੋਕੀਨ-ਵਿਚੋਲੇ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸੰਕੇਤ (2005) ਦੇ ਤਿੱਖੇ ਹੋਣ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰਦੀ ਹੈ.

ਸਾਰ

ਕੋਕੇਨ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿੱਚ ਇਨਨੈਪਟਿਕ ਡੋਪਾਮਿਨ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੋਪਾਮੋਨੋਸਪੀਪੀਅਨ ਨਾਇਰੋਨਸ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਨਾਲ ਡੋਰਾਪਾਮੀਨ D1 ਰੀਐਕਟਰ ਤੋਂ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਤੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸੰਕੇਤ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (1). ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਗੰਭੀਰ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਕਈ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੋਂ ਚੱਲੀਆਂ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਕੋਕੀਨ ਦੀ ਆਦਤ ਵਿੱਚ ਨਿਊਰੋਨਲ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਸੰਚਾਰ ਕਰਨਾ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (2). Δਫਾਸਬੀ, ਅਜਿਹੇ ਨੁਸਖੇ ਦਾ ਕਾਰਕ ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (3), ਨੂੰ ਕੋਕੀਨ ਲਈ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (4, 5). ਇਸ ਲਈ, ਟੀਐਫਐਸ ਬੀ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਤੋਂ ਕੋਕੀਨ ਦੀ ਨਸ਼ਾ ਰਹਿਤ ਅਣੂ ਦੀ ਮਿਕਦਾਰ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ. ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਘਾਤਕ ਇਲਾਜ ਨੂੰ cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) ਅਤੇ ਇਸ ਦੇ ਐਕਟੀਵੇਟਰ p35 ਨੂੰ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿੱਚ ΔFosB () ਦੇ ਸ਼ਾਮਿਲ ਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਐਕਸਗਰੇਟ ਕਰਨ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ.6, 7).

ਸੀਡੀਕਐਕਸਯੂਐਂਐਕਸ ਸੀਰੀਕੇ / ਥਰੇਨੋਨ ਕਾਇਨਜ਼ ਦੇ ਸੀ ਡੀ ਕੇ ਪਰਿਵਾਰ ਦਾ ਮੈਂਬਰ ਹੈ. ਦੂਜੀਆਂ ਸੀ ਡੀ ਐਕਸ ਤੋਂ ਉਲਟ ਜੋ ਸੈਲ-ਚੱਕਰ ਦੇ ਵੱਡੇ ਪ੍ਰੈਗਨੈਂਟ ਦੇ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਹਨ, ਸੀਡੀਕੈਕਸ NUMX ਮੁੱਖ ਤੌਰ ਤੇ ਪੋਸਟਮਿਮਿਟਿਕ ਨਿਊਰੋਨਾਂ ਵਿਚ ਸਬਸਟਰੇਟਾਂ ਦੀ ਫਾਸੋਫੋਰੀਟੇਸ਼ਨ ਵਿਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ. (8). Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਦੀ neuronal ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਆਪਣੇ ਐਕਟੀਵੈਟਰ ਦੇ ਨਾਲ ਐਸੋਸੀਏਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਾਂ ਤਾਂ p35 ਜਾਂ p39, ਜੋ ਮੁੱਖ ਤੌਰ ਤੇ ਪੋਸਟਮਿਮਿਟਿਕ ਨਿਊਰੋਨਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ (8). ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ Cdk5 ਦੀ ਜ਼ਰੂਰੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੇ ਨਾਲ ਨਾਲ (9, 10), iਟੀ ਨੂੰ ਜਨਮ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਵਿੱਚ ਡੋਪਮੀਨਰਜੀ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ (11, 12). ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐਨਐੱਨਐੱਨਐੱਨਐਕਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿਚ ਸਟਰੈਟਾਮਮ ਵਿਚ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਰਿਲੀਜ਼ ਵਿਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਂਜੀਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਪ੍ਰੈਜ਼ੈਨੇਟਿਕ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਰੀਲਿਜ਼ ਦੇ ਇਕ ਰੈਗੂਲੇਟਰ (11). ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੀਡੀਕਐਕਸਯੂਐਂਐਕਸ ਐਕਸਪ੍ਰੋਸੋਰੀਟਿੰਗ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਫੋਸਫੋਰੀਟਿਟਿੰਗ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਅਤੇ ਸੀਏਪੀਪੀ-ਰੈਗੂਲੇਟਡ ਫਾਸਫੋਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਐਲੇਕਲਰ ਪੁੰਜ 5 ਕੇਡੀਏ (ਡੀ.ਏ.ਆਰ.ਪ. ਪੀ.-ਐਕਸਗਐੱਨਐਕਸ) ਦੇ ਥ੍ਰ-ਐਕਸਗਐਕਸ ਤੇ, ਜੋ ਕਿ ਡੀਏਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਨੂੰ ਸੀਏਮਏਪੀ-ਨਿਰਭਰ ਕੀਨੇਜ਼ (ਪੀਕੇ ਏ) (12).

ਇਨ੍ਹਾਂ ਅਨੁਮਾਨਾਂ ਤੋਂ ਪਤਾ ਲੱਗਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਅਤੇ ਪੀਐਕਸਯੂਐਂਐੱਨਐਕਸ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸੰਕੇਤ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮਾਂ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ ਦੇ ਨਾਲ ਨਾਲ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਕੋਕੀਨ ਦੀ ਲੁੱਟ ਵਿੱਚ ਹਨ. ਸਰੀਰਕ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸੰਕੇਤ ਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਂਗਐਕਸ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਹੋਰ ਅੱਗੇ ਸੰਬੋਧਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਦੋ ਟਰਾਂਸਜਨਿਕ ਮਾਊਸ ਲਾਈਨਾਂ ਬਣਾ ਲਈਆਂ ਜਿਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸੀ ਐੱਮ 10 ਐੱਕਸ.ਐੱਫ.ਐਨ ਜਾਂ ਪੀਐਕਸਯੂਐਂਐਂਐਂਗਐਕਸ ਖਾਸ ਤੌਰ ਤੇ ਪੋਰਟੇਬਲ ਐਕਸਪ੍ਰੋਡਰ ਦੇ ਕੰਟਰੋਲ ਹੇਠ ਨਾਈਰੋਨਸ ਵਿੱਚ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸਾਡੇ ਖੋਜਾਂ ਤੋਂ ਸੰਕੇਤ ਮਿਲਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸੀਡੀਕਐਕਸਡਐਕਸਐੱਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਪ-ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿਚ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐੱਨਐਕਸਐੱਨਐਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਸੀ ਪਰ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਨਐਂਗਐਕਸ ਦੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਪੱਧਰ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸ ਐਕਟੀਵਿਟੀ ਲਈ ਦਰ-ਸੀਮਾ ਹੈ ਅਸੀਂ ਇੱਥੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ ਸਬੂਤ ਹੈ ਕਿ ਸੀ ਐੱਕਸ ਐੱਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਵਧਦੀ ਹੋਈ ਹੈ, ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਓਵਰੈਕਸਪਰੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੀਕੇਏ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਅਤੇ ਕੋਸੀਨ-ਮਿਲਿਏਟਿਡ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਦੇ ਸੰਕਰਮਣ ਵੱਲ ਇਸ਼ਾਰਾ ਕਰਦਾ ਹੈ.

ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਢੰਗ

ਰੋਗਨਾਸ਼ਕ ਸੀਡੀਕੈਕਸ ਯੂਐਂਗਐਕਸ (ਸੀ-ਐਕਸਗਨਜੈਕਸ) ਅਤੇ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ (ਸੀ-ਐਕਸਗਨਜੈਕਸ) ਲਈ ਪੋਲੀਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਸਾਂਟਾ ਕਰੂਜ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ. ਐਰੋਕੇਸ਼ਨਜ਼ਨੇਸ (ਐਮਈਕੇ) ਐਕਸਗ x / ਐਕਸਯੂਐੱਨਐਕਸ, ਇਰੈਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸ / ਐਕਸਯੂਐੱਨਐਕਸ ਅਤੇ ਸੀਏਪੀਏਪੀ-ਪ੍ਰਤਿਕਿਰਿਆ ਤੱਤ-ਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਸੀ.ਆਰ.ਬੀ.) ਨੂੰ ਫੋਸਫੋਰੇਲੇਸ਼ਨ-ਆਨਪੈਂਡੈਂਟ ਅਤੇ -ਡਵਾਰਡ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਸੇਬ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ (ਬੇਵਰਲੀ, ਐੱਮ. ਏ.) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਫਾਸਫੋ-ਥ੍ਰੌਂਸ-ਐਕਸਗਂਕਸ ਡੀਏਆਰਪੀਪੀ 5 (13), ਫਾਸਫੋ-ਥਰ-ਐਕਸਜੈਕਡ DARPP-75 (12), ਕੁੱਲ DARPP-32 (12), ਅਤੇ ਸੀ-ਫੋਸ (14) ਨੂੰ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਲਈ ਐਂਟੀਬੌਲੋ ਸੀਗਮਾ ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ.

ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਜਾਨਵਰ ਪਹਿਲਾਂ ਅਸੀਂ ਮਾਉਸ p35 ਜੀਨ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਸੀ Cdk5r1, ਜਿਸ ਵਿੱਚ p35 ਪ੍ਰੋਟੀਨ encodes, ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਢਾਂਚੇ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ (15). P35 (Tgp35) ਦੇ ਨਯੂਰੋਨਲ ਓਵਰੈਕਸਪਰਸਨ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸੈਜਿਕ ਮਾਊਸ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ, 6-kb ਈਕੋRI-ਈਕੋ1.2-kb ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਖੇਤਰ ਵਾਲਾ RI ਟੁਕੜਾ ਇੱਕ pGEM9X (-) ਪਲਾਜਿਡ ਵਿੱਚ ਘਿਰਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ ਅਤੇ SV45 ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਇਕ 40-bp ਟੈਗ ਇਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਿਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ Kpnਮੈਨੂੰ ਪੌਲੀ (A⁺) ਇਸ਼ਾਰਾ (ਅੰਜੀਰ. 1A). ਟੈਗ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸ਼ਾਮਿਲ ਹੈ ਸਪੀਡਮੈਂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਜੈਨੋਟਾਈਪਿੰਗ ਲਈ ਸਾਈਟ 6-kb ਭਾਗ ਨੂੰ ਪਲਾਜਿਡ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਤੋਂ ਉਤਪੰਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਟਰਾਂਸਜੈਂਸੀ ਮਾਉਸ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਟਰਾਂਸਜੀਨ ਦੇ ਪਰਮਾਣੂ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ. 1.2-kb p35 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਨਿਯੰਤ੍ਰਣ ਅਧੀਨ ਟ੍ਰਾਂਸਜੀਨ ਦੇ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਡਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਜੈਨਿਕ ਮਾਊਸ (ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸ; ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ - / -) ਨੂੰ ਦੋ-ਪੜਾਅ ਦੇ ਪ੍ਰਜਨਨ ਦੀ ਰਣਨੀਤੀ ਦਾ ਇਸਤੇਮਾਲ ਕਰਕੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਦੁਆਰਾ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ 7X ਨੂੰ ਅੰਤਲੇ ਪੈਕਸੋਡ x- ਨੱਲ ਵਾਲੀ ਪਿੱਠਭੂਮੀ ਵਿਚ ਦੁਬਾਰਾ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ. ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਦੂਜੇ ਮਾਊਸ ਮਾੱਡਰਾਂ ਵਿੱਚ pxNUMX +/-, p35 - / -, Cdk35 +/-, ਅਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਡਐਕਸਐਕਸ (ਟੀ.ਜੀ.ਸੀ.ਡੀ.ਐਕਸ.ਏ.ਐੱਫ.ਐਨ. ਐਕਸ.) ਦੇ ਨਯੂਰੋਨਲ ਓਵਰੈਕਸਪਰਸਨ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸੈਜਿਕ ਮਾਊਸ (9, 16, 17). ਇਹਨਾਂ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਜੀਨਾਂਟਾਈਪ ਪੇਂਟ ਬਾਇਓਪਿਸੀਆਂ ਤੋਂ ਵੱਖਰੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਤੇ ਦੱਖਣੀ ਬਲੋਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਜਾਂ ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਚੂਹੇ ਨੂੰ ਇੱਕ 12-H ਰੌਸ਼ਨੀ / 12-H ਹਨੇਰੇ ਚੱਕਰ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ. ਲੈਬੋਰਟਰੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਦੇਖਭਾਲ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਬਾਰੇ ਨੈਸ਼ਨਲ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਆਫ ਹੈਲਥ ਦੇ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੀ ਤਾਮੀਲ ਵਿਚ ਸਾਰੇ ਦੇਖਭਾਲ ਦਿੱਤੀ ਗਈ.

  

ਚਿੱਤਰ 1.

P35 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਦੇਸਿਤ p35 ਦੇ ਨਯੂਰੋਨਲ ਓਵਰੈਕਸਪਸ਼ਨ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸੈਜਿਕ ਮਾਊਸ ਦਾ ਨਿਰਮਾਣ (ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸ). (A) ਟਰਾਂਸਜੈੱਨ ਦੀ ਉਸਾਰੀ ਨੂੰ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨੇ ਵਾਲੇ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗ ਐੱਲਿਲਸ ਦੇ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਢਾਂਚਿਆਂ ਨਾਲ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ. ਲਾਲ ਬਾਰ ਦਰਸ਼ਕ ਜੋਨੋਟਾਈਪਿੰਗ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ. ...

ਦੱਖਣੀ ਬਲੌਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪੂਛ ਬਾਇਓਪਸੀ ਤੋਂ ਕੱਢੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਨਾਲ ਪੱਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਈਕੋRI ਅਤੇ ਸਪੀਡਮੈਂ, ਇਕ 0.9% ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ 'ਤੇ electrophoresed, ਅਤੇ ਇੱਕ ਨਾਈਲੋਨ ਝਿੱਲੀ' ਤੇ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ. ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਢੰਗ ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ³²ਪੀ-ਲੇਬਲ ਦੀ ਪੜਤਾਲ 42 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗਰੇਡ ਵਿੱਚ ਰਾਤੋ ਰਾਤ. ਪੀਐਕਸਯੂਐਂਜੀਐੱਨਐਕਸਐਕਸ ਨਾਕਆਉਟ (ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ - / -) ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ NUM_X ਚੂਹੇ ਦੀ ਜੀਨਾਂਟਾਈਪਿੰਗ ਲਈ 485-bp ਪੜਤਾਲ ਪੀ ਸੀ ਆਰ ਦੁਆਰਾ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਪ੍ਰਾਕਲਾਂ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ: 35'-ACATCCTGCTGCCACGGTGAC-35 'ਅਤੇ 35'-CCACTGTAAAAGCAACAAGA-5'. ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਇਜ਼ਡ ਝਿੱਲੀ 3 × SSC / 5% ਐਸ ਡੀ ਐੱਸ ਤੇ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ ਦੋ ਵਾਰ ਅਤੇ 2 × SSX / 0.1% ਐਸਡੀਐਸ ਤੇ 42 ਲਈ X ਗੁਣਾ, 10 ਲਈ ਦੋ ਵਾਰ, ਅਤੇ ਐਕਸ-ਰੇ ਫਿਲਮ ਦੇ ਸਾਹਮਣੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ.

ਡਰੱਗ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਕੋਕੇਨ (ਸਿਗਮਾ) ਜਹਿਰੀ ਖਾਰੇ ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਹੋ ਗਿਆ ਸੀ. ਜਾਨਵਰਾਂ ਨੂੰ ਕੋਕੀਨ (15 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਕਿਲੋਗ੍ਰਾਮ) ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ 3 ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੀ ਉਮਰ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਖਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵੱਖਰੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਅੰਕ (15, 30, 60, ਅਤੇ 120 ਮਿਨੀ) 'ਤੇ ਕਤਲੇਆਮ ਕਰਕੇ ਮਾਰੇ ਗਏ ਸਨ. ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਪੀ.ਬੀ.ਐਸ. ਵਿਚ ਦਿਮਾਗ ਨੂੰ ਜਲਦੀ ਕੱਢ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਠੰਢਾ ਹੋ ਗਿਆ. ਫਿਰ ਸਟ੍ਰੈਟੇ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਉੱਤਰੀ ਜਾਂ ਪੱਛਮੀ ਧਾਗਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ. ਇਮਿਊਨੋਹਿਿਸਟੋਮਿਕਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਟੀਕਾ ਲਗਾਉਣ ਵਾਲੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਾਊਸ 2 ਹਲਕੇ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.

ਉੱਤਰੀ ਬਲੌਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੁੱਲ ਆਰਏਐਨਏ ਨੂੰ ਸਟਰੀਟ ਤੋਂ ਤਰੀਜ਼ੋਲ ਰੀਜੈੰਟ (ਇਨਵੀਟਰੋਜਨ ਲਾਈਫ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ, ਕਾਰਲਸੈਡ, ਸੀਏ) ਦੇ ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਵਰਣਿਤ ਕੀਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਉੱਤਰੀ ਬਲੌਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਅਧੀਨ18). C-fos mRNA ਦੀ ਪਛਾਣ ਲਈ, ਮਾਊਂਸ ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਸੀਡੀਐਨਏ ਦਾ ਇੱਕ 189-bp ਟੁਕੜਾ ਵਰਣਨ ਵਜੋਂ ਜਾਂਚ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (19). ਸੀਆਈ ਐੱਸ ਐੱਮ ਐੱਨ ਐੱਨ ਐੱਨ ਏ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਐਨਆਈਐਚ ਇਮੇਜ ਸੌਫਟਵੇਅਰ, ਵਰਜਨ 1.62 ਨਾਲ ਇੱਕ ਚਿੱਤਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬੈਂਡ ਦੀ ਆਪਟੀਕਲ ਘਣਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਦੁਆਰਾ ਮਿਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ.

ਪੱਛਮੀ ਬਲਾਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਟਿਸ਼ੂਜ਼ ਨੂੰ 1% SDS ਵਿੱਚ ਸੋਨਾ ਕਰਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਉਬਾਲਿਆ ਗਿਆ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਸੀ ਬੀਸੀਏ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪਰਲੇ (ਪੀਅਰਸ) ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ. ਐਂਟੀਸ / ਪੇਜ ਤੋਂ ਬਰਾਬਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵੱਖ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਨਾਈਟਰੋਕ੍ਰੈਲੁਲੋਜ ਜ਼ੀਰੋ ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ. ਇਹ ਝਿਮਨੀ 1 × PBS ਵਿੱਚ ਬਲਾਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 5 ਸਕਿਮ ਦੁੱਧ ਅਤੇ 0.05 ਟਵਿਨ ਐਕਸਗ xX ਅਤੇ 20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗਰੇਡ ਵਿੱਚ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨਾਲ ਅੰਡਿਆ ਦਾਇਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਪੈਰੋਕਸਿਡੇਜ਼-ਸੰਯੋਗਿਤ ਐਂਟੀ-ਮਾਊਸ ਜਾਂ ਖਰਗੋਸ਼ ਆਈਜੀਜੀ (ਸਿਗਮਾ) ਨਾਲ ਇਨਕਿਬੈਸ਼ਨ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 4 ਮਿੰਟ ਲਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਇਕ ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਕੈਮੀਲੀਮਾਈਸੈਂਸ (ਪੀਅਰਸ) ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਬੈਂਡ ਦੀ ਆਪਟੀਕਲ ਘਣਤਾ ਨੂੰ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਗਏ ਅਨੁਸਾਰ ਮਿਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ.

Cdk5 ਕਿਨਾਸ ਅਸਲੇ. Striatal lysates ਨੂੰ ਇੱਕ lysis ਬਫਰ 50 ਮਿਲੀਮੀਟਰ trīs ਰੱਖਦਾ ਦੇ ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ · ਐਚਸੀਐਲ, pH 7.4 / 50 ਮਿਲੀਮੀਟਰ NaCl / 5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ EDTA / 1% ਟ੍ਰਿਟੋਨ ਐਕਸ-100 / 1mMDTT / 1 ਮਿਲੀਮੀਟਰ phenylmethylsulfonyl ਫਲੋਰਾਈਡ / 1 μg / mL aprotinin / 1 μg / ਮਿਲ ਲਿਊਪਿਪਟਿਨ / ਫਾਸਫੇਟਸ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰਸ (ਫਾਸਫੈਟਸ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ I ਅਤੇ II, ਸਿਗਮਾ). Lysates ਨੂੰ ਐਂਟੀ-ਸੀਡੀਕ 5 (ਸੀ- 8) ਜਾਂ ਐਂਟੀ-ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ (ਸੀ-ਐਕਸਗੰੈਕਸ) ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਇਮੂਨੋਪਾਈਸਿਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. Cdk35 ਇਮੂਨੋਪਰੀਪੀਟੇਟਸ ਨੂੰ X72X μ ਗ੍ਰੰਥੀ (19 μg) ਦੇ ਨਾਲ 5 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗ੍ਰਾਫ (300 μg) ਦੇ ਨਾਲ lysate ਦੇ 300 μl (ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ 5 μg ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ) ਦੇ ਇਨਕਿਬੈਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਏ-ਐਗਰੋਸ ਮਣ ਦੇ 3 μl (4 ਲਿਸੇਸ ਬਫਰ ਵਿਚ% ਸਲਰੀ, ਸਾਂਤਾ ਕ੍ਰੂਜ਼ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੌਜੀ) 25 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗਰੇਡ ਤੋਂ 50 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ P3 ਦੀ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇਮੂਨੋਪ੍ਰੀਸਿਟੀਟ, ਉੱਪਰਲੇ ਵਰਣਨ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ lysate ਦੇ 4 μl (ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ 35 ਮਿਗ ਲਈ ਅਨੁਸਾਰੀ) ਨੂੰ ਐਂਟੀ-ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (500 μg) ਨਾਲ ਅੰਡੇ ਹੋਏ ਸੀ. ਇਮਯੋਨੋਪੀਰੀਪੀਟੀਟੇਸ਼ਨ ਬਿਲੀਸੈਸ ਬਫਰ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਧੋਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ 1 ਐਮਐਮ ਟ੍ਰਿਸ · ਐਚਐਲ, ਪੀਐਚ 35 / 3 ਐੱਮ ਐੱਮ ਐੱਮ ਐੱਮ ਐਲ ਦੁਆਰਾ ਮਿਲੀਆਂ ਕਨਨੇਸ ਬਫਰ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਧੋਤੇ ਗਏ ਸਨ₂/ 1 ਐਮਐਮ ਈਡੀਟੀਏ / ਐਕਸਗੇਨ ਐਮਐਮ ਈਜੀਟੀਏ / ਐਕਸਐਂਗਐਕਸ ਐੱਮ ਐੱਮ ਡੀ ਟੀ ਟੀ, ਕਿਨਾਸ ਬਫਰ ਦੇ 1 μl ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ. ਕਿਨਾਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ histone H1 ਸਬਸਰੇਟ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (18).

ਇਮਿਊਨੋਹਿਸਟੋਕੋਮਿਸਟਰੀ ਚੂਹੇ ਨੂੰ ਐਵਰਟੀਨ (250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਕਿਲੋਗ੍ਰਾਮ, ਫਲੁਕਾ) ਦੇ ਆਈਪੀ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੁਆਰਾ ਅਨੀਸਟੀਟਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਐਕਸਗਐਕਸ ਐਮਐਮ ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ, ਪੀਐਚ ਐਕਸਐਂਗਐਕਸ ਦੇ ਨਾਲ ਟਰਾਂਸਪਾਈਡੇਲੀਅਨ ਦੁਆਰਾ ਪਾਰਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਟ੍ਰੈਕ ਟਿਸ਼ੂ ਫੇਂਟੇਜਿਵ (ਸਟ੍ਰੈਕ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀਆਂ, ਲਾ ਵਿਸਟਾ, ਈਈ) ਵਿਸਥਾਰਿਤ ਦਿਮਾਗ ਨੂੰ ਵੀ ਉਸੇ ਅਗਾਊਂ ਰਾਤ ਨੂੰ 0.1 ° C ਤੇ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਫਿਰ, ਪੈਰਾਫ਼ਿਨ ਵਿੱਚ ਦਿਮਾਗ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਿਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, 7.4-μm- ਮੋਟੀ ਕਾਰੋਨਲ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਐਬਸਿਨ-ਬਾਇਟਿਨ-ਪੈਰੋਕਸਿਡੇਜ਼ ਕੰਪਲੈਕਸ ਤਕਨੀਕ (ਵੈਕਟਰ ਲੈਬੋਰਟਰੀਜ਼) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇਮਰੀਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮੀਸਿਟੀ ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੀ. ਇਹ ਭਾਗ 37 ° C ਤੇ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ C-fos ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲਤਾ-ਸ਼ੁੱਧ ਪੋਲੀਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦੇ ਨਾਲ ਅੰਡੇ ਹੋਏ ਸਨ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦਾ ਮੁਢਲੇ ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਨੂੰ ਛੱਡਣ ਦੁਆਰਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.

ਨਤੀਜੇ

ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਨਿਊਰੋਨਲ ਓਵਰੈਕਸਪਸ਼ਨ ਨਾਲ ਟਰਾਂਜਜੇਨਿਕ ਮਾਊਸ ਦੀ ਉਤਪਤੀ P35 ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਨਯੂਰੋਨਲ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਗਈ ਟਰਾਂਸਜੈਨਨ ਵਿੱਚ 6-kb ਦਾ ਟੁਕੜਾ ਕਲੌਨ ਮਾਊਸ p35 ਜੀਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1.2-kb ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਅਤੇ pxNUMX ਦੀ ਪੂਰੀ ਕੋਡਿੰਗ ਕ੍ਰਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈਅੰਜੀਰ. 1 A). ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਜੈਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਦੱਖਣੀ ਬਲੌਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਜਾਂਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੀ ਜੋ ਪਿਨ - ਵੈਲਕਸ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਵਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਪੀਐਕਸਆਐਨਐਂਗਐਕਸ - / / ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਂਐਂਗਐਕਸ ਮਾਉਸ (2) ਨੂੰ ਵੱਖਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਅੰਜੀਰ. 1 A ਅਤੇ B). 1.2-kb p35 ਦੇ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦੇ ਨਿਯੰਤ੍ਰਣ ਅਧੀਨ ਟਰਾਂਸਗਨੀਏ ਐਕਸਪਸ਼ਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਡਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਜੀਨਿਕ ਮਾਉਸ (ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਆਈਐਸ; P35 - / -) ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿਚ ਸਿਰਫ pxNUMX ਐਕਸਪਰੈਸ਼ਨ ਸਿਰਫ ਟਰਾਂਸਜੈਨ ਤੋਂ ਚਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ. Tgp35 ਵਿੱਚ p35 ਐਕਸਕਸਿਊਸ; p35 - / - ਮਾਊਸ ਸਿਰਫ ਦਿਮਾਗ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 1C), ਜਿੱਥੇ ਕਿ ਸਥਾਨਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪੈਟਰਨ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਊਸ ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 1D). ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐੱਕਐਕਸ ਦੀ ਘਾਟ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਸੇਰਬ੍ਰਲ ਕਾਰਟੈਕਸ ਅਤੇ ਚੂਹੇ ਦੇ ਹਿਪਕੋਪੂਸ ਵਿੱਚ ਅਸਾਧਾਰਣ ਲੇਅਿੰਗ ਢਾਂਚੇ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (10). ਹਾਲਾਂਕਿ, Tgp35; p35 / / ਮਾਊਸ ਨੇ p35 / / - brain ਫੈਨਟੀਪੀਪ ਦੇ ਪੂਰੇ ਸੰਕਲਪ ਨੂੰ ਵਿਖਾਇਆ (ਅੰਜੀਰ. 1E). ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਸੰਕੇਤ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ 1.2-kb p35 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਨੇ ਐਂਡੋਜਨੇਸ p35 ਜੀਨ ਤੋਂ ਪੀਐਸਯੂਐਨਐੱਕਐਕਸ ਦੀ ਅਜਿਹੀ ਐਕਸਪਰੈਸ਼ਨ ਪਰੋਫਾਈਲ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਜੀਨ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕੀਤਾ ਹੈ.

PxNUMX ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੱਧਰ Cdk35 ਸਰਗਰਮੀ ਦੀ ਉਪ-ਨਿਯਮ ਲਈ ਰੇਟ-ਸੀਮਾ ਹੈ. ਅਸੀਂ XXX ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੀ ਉਮਰ ਵਿੱਚ p35 - / -, p5 +/-, ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ, ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਕਸ, ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਨਐਕਸਐਂਕਸ + +- ਅਤੇ ਟੀਜੀਸੀਡੀਕਐਕਸਐਂਐੱਨ ਐਕਸ ਮਾਈਸਜ਼ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਐਕਸਟਰੈਕ ਤੇ ਜੀਐਨਜ਼ ਐਕੋਡਿੰਗ ਪੀਐਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਅਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਂਗਐਕਸ ਦੇ ਜੀਨ-ਡੋਸੇਜ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ. ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐੱਫਐਕਸ ਅਤੇ ਸੀ ਡੀ ਐਕਸ ਐਕਸਏਨਐਂਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਜੀਨ ਦੇ ਮਾਤਰਾ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਤ ਹਨ,ਅੰਜੀਰ. 2 A ਅਤੇ B). Tgp35 ਮਾਉਸ ਨੇ ਵੰਨ-ਟਾਈਮ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੱਧਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ≈1.6 ਗੁਣਾ ਵਾਧਾ ਦਰਸਾਏ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸੀਡੀਕਐਕਸ XNUM ਪ੍ਰੋਏਨਨ ਪੱਧਰ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ ਦੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵੱਖ ਵੱਖ ਪੱਧਰਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਹੋਏ. TgCdk35 ਮਾਉਸ ਨੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਂਗਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਂਟੇਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੱਧਰ ਵਿਚ ਇਕ ≈5 ਗੁਣਾ ਵਾਧਾ ਦਰਸਾਇਆ ਹੈ ਜੋ ਵਾਈਲਡ-ਟਾਈਪ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਫਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵੱਖ ਵੱਖ ਪੱਧਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਹੋਏ. Cdk35 ਕਿਰਿਆ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਾਤਰਾ p5 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਪੜਤਾਲ ਕਰਨ ਲਈ, ਸੀਡੀਕੈਕਸ NUMX ਨੂੰ ਐਂਟੀ-ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਂਐਂਗਐਕਸ ਐਂਟੀਬੌਡੀ ਅਤੇ ਕਨਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਟਰੈਟਲ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਤੋਂ ਇਮੂੂਨਪ੍ਰੀਪੀਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਕਿਨਾਸ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ 'ਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਨਐਂਗਐਕਸ ਦੀ ਵੱਖ ਵੱਖ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐੱਕਐਕਸ ਨੂੰ ਐਂਟੀ-ਪੀਐਕਸਯੂਐਂਐਂਗਐਕਸ ਐਂਟੀਬੌਡੀ ਦੇ ਨਾਲ ਸਟਰੈਟਲ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਤੋਂ ਇਮੂੂਨਪ੍ਰੀਪੀਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਨੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ. Cdk1.9 ਸਰਗਰਮੀ p5 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਦੇ ਨਾਲ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਤ ਹੈ ਪਰ Cdk35 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਹੈ (ਅੰਜੀਰ. 2 C ਅਤੇ D). ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਪਤਾ ਲਗਦਾ ਹੈ ਕਿ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਲਈ ਇਕ ਰੇਟ-ਸੀਮਾਇੰਗ ਫੈਕਟਰ ਹੈ. ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਸਟਰੈਟਿਕ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸਿਗਨਲਿੰਗ 'ਤੇ ਵੱਧ ਰਹੀ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਨਜੀਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ Tgp35 ਮਾਉਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ.

  

ਚਿੱਤਰ 2.

Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਉਪ-ਨਿਯਮ ਨੂੰ pxNUMX ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੱਧਰ ਦੀ ਦਰ-ਸੀਮਤ ਹੈ. (A) ਪੱਛਮੀ ਧੱਫੜ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਕ੍ਰਮਵਾਰ p35 ਅਤੇ Cdk5 ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ p35 ਅਤੇ Cdk5 ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਜੀਨ ਖੁਰਾਕ ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਹਨ. (B) P35 ਜਾਂ Cdk5 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ ਪੱਧਰ ...

ਡੀਏਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਦਾ ਕੋਆਰਸੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ, ਥ੍ਰੌਨ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਤੇ TgpxNUMX ਮਾਈਸ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ. DARPP-32 ਦੇ ਫੰਕਸ਼ਨ ਬਹੁਤੇ ਸਾਈਟਾਂ ਤੇ ਇਸ ਦੇ ਫਾਸਫੋਰਿਟਰੇਸ਼ਨ ਸਟੇਟ ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ (20). ਪੀ.ਕੇ.ਏ. ਫਾਸਫੋਰਰੀਟ DARPP-32 ਥ੍ਰੋ-ਐਕਸਗ xX ਤੇ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸੀ ਡੀ ਐਕਸ ਐਕਸਐਕਸ ਫਾਸਫੋਰਰੀਟ DARPP-34 ਥ੍ਰ੍ਰ -5 ਤੇ ਹੈ. ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਅਸੀਂ ਜੰਗਲੀ-ਟਾਈਪ ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ NUM_X ਚੂਹਿਆਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰੇਸ਼ਾਨ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਅਖਾੜਿਆਂ ਵਿਚ ਡੀ.ਏ.ਆਰ.ਪੀ. ਪੀ.-ਐਕਸਗੰਕਸ ਦੀ ਫਾਸਫਰੇਲਿਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ. ਫਾਸਫੋ-ਥ੍ਰੌਨ-ਐਕਸਗਂਕਸ ਡੀ.ਏ.ਆਰ.ਪੀ. ਪੀ .- 32 ਦਾ ਪੱਧਰ Tgp75 ਮਾਉਸ ਵਿਚ ਵੱਧ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 3A; 1.6 ± 0.2- ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁੱਲ ਤੋਂ ਉੱਪਰ). ਅਸੀਂ ਅੱਗੇ ਸਟ੍ਰੈੱਟਲ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸਿਗਨਲਿੰਗ 'ਤੇ ਵਧਾਈ ਗਈ ਸੀਡੀਕਐਕਸਡਐਕਸਐੱਨਐਕਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ. ਅਸੀਂ ਡੀਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗਨਜੈਕਸ ਦੀ ਫਾਸਫੋਰਿਟਨ ਸਟੇਟ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਕੋ-ਕਾਕੇਨ-ਪ੍ਰੇਰਤ ਪੀ.ਕੇ.ਏ. ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ Tgp5 ਮਾਊਸ ਵਿਚ ਦੇਖਿਆ. ਫੋਕਸ-ਥ੍ਰੌਨ-ਐਕਸਗਂਕਸ ਡੀਏਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗਂਜੇਕਸ ਦਾ ਪੱਧਰ ਕੋਕੀਨ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਚੂਹੇ ਵਿੱਚ 35 ਮਿੰਟ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 3B; 1.8 ± 0.2 ਗੁਣਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਉੱਪਰ). ਪਰ, DARPP-34 ਦੇ Thr-32 ਫਾਸਫੋਰਿਟਰੇਸ਼ਨ ਤੇ ਕੋਕੀਨ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਟੀਜੀਪੀਐਨਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸ (ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੇ 35 ± 1.2 ਗੁਣਾ) ਵਿੱਚ ਐਟਿਨੁਏਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੰਕੇਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ Cdk0.3 ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਾਧਾ ਨੇ ਕੋਕੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ PKA ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸੰਭਵ ਤੌਰ ਤੇ ਡੀਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਥ੍ਰ-ਐਕਸਗੰਕਸ (ਥ੍ਰ-ਐਕਸਗੰਕਸ 'ਤੇ)6, 12). ਇਹ ਵੀ ਸੰਭਵ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰੈਜ਼ਾਂਟੈਪਟਿਕ Cdk5 ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਘਟੀ ਹੋਈ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਰਿਹਾਈ ਵੱਲ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਘਟੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ. ਖਾਸ ਕਰਕੇ, ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਟੀਕੇ ਨੇ p35 ਅਤੇ Cdk5 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਨਾਲ ਨਾਲ ਕਨੀਜ਼ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ (ਅੰਜੀਰ. 3 C ਅਤੇ D). ਇਹ ਇੱਕ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਉਲਟ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਨੂੰ p35 ਅਤੇ Cdk5 ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (6).

  

ਚਿੱਤਰ 3.

Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਉਪ-ਨਿਯਮ ਫੋਸਫੋ-ਥ੍ਰੌਨ -75 DARPP-32 ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕੋਕੇਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ PKA ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ. (A) Immunoblot TGP32 ਮਾਊਸ ਤੋਂ ਘਾਤਕ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਵਿੱਚ Thr-75 (P-D32 Thr-75) ਤੇ DARPP-35 ਦੇ ਫਾਸਫੋਰਿਟਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾ ਰਿਹਾ ਹੈ. ਅੰਦਰ ...

Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਉਪ-ਨਿਯਮ ERK1 / 2 ਦੇ ਕੋਕੇਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ. ਹਾਲੀਆ ਸਬੂਤ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿੱਚ ਡੋਪਾਮਾਇਨ ਰੀਸੈਪਟਰ ਐਕਟੀਵੇਟ ਇਹ ਵੀ ਹੋਰ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਕੈਕੇਡਸ ਨੂੰ ਐਕਟੀਵੇਟ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ERK ਪਾਥਵੇ (21, 22), ਜਿਸ ਦੀ ਕੋਕੇਨ ਦੇ ਵਿਹਾਰਕ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਹੈ (23). ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੜਤਾਲ ਕੀਤੀ ਸੀ ਕਿ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਯੂਐਲਡੀਐਕਸ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਈ.ਆਰ.ਕੇ. ਪਾਥਵੇਅ ਦੇ ਕੋਕੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ. ERK ਪਾਥਵੇਅ ਨੂੰ ਕੋਕੀਨ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਜ਼ਹਿਰੀਲੀ ਕਿਸਮ ਦੀ ਮਾਊਸ ਤੋਂ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਕਿਉਂਕਿ ਮੀਰੈਕਸੋਐੱਨਐਕਸਐਕਸ / ਐਕਸਯੂ.ਐਨ.ਐਨ.ਐੱਕਸ ਤੇ ਸੈਕ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਅਤੇ ਸੈਂਟ-ਐਕਸਗੰਕਸ (ਬੇਸਿਕ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੇ 5 ± 1 ਗੁਣਾ) ਅਤੇ ERK2 ਦਾ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ. Thr-217 ਅਤੇ ਟਾਇਰ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਤੇ 221 (ERK1.5 ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ: 0.2 ± 1 ਗੁਣਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਉਪਰੋਕਤ) (ਅੰਜੀਰ. 4 A ਅਤੇ B). ਪਰ, ਕੋਕੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ MEK1 / 2 (ਬੇਸਿਕ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੇ 1.2 ± 0.2 ਗੁਣਾ) ਅਤੇ ERK1 / 2 (ERK2 ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ: 1.2 ± 0.2 ਗੁਣਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ) ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸਅੰਜੀਰ. 4 A ਅਤੇ B). ਇਸਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਫਾਸਫੋ-ਏਰਕਸ XXX / 1 ਦਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ Tgp2 ਮਾਊਸ (ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁੱਲ ਦੇ ਹੇਠਾਂ 35 ± 0.8- ਗੁਣਾ) ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਸੀ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਰੁਝਾਨ ਸਾਂਭ-ਸੰਭਾਲ ਪੱਖੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਨਹੀਂ ਸੀ. ਇਹ ਬਾਅਦ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਸੀ.ਡੀ.ਐਕਸ.ਐੱਕ.ਐਕਸ.ਐੱਨ.ਐੱਕ.ਐੱਨ.ਐੱਕ.ਐੱਨ.ਏ.ਐੱਨ.ਜੀ.ਐਕਸ-ਨਿਰਭਰ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਥ੍ਰ-ਐਕਸਗ xX ਤੇ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਕੈਟੈਲੀਟਿਕ ਸਰਗਰਮੀ ਘੱਟ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (24). ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਥ੍ਰ੍ਰੋਟ-ਐਕਸਐਂਗਐਕਸ ਤੇ MEK1 ਦੀ ਫਾਸੋਫੋਰੇਲੇਸ਼ਨ ਸਟੇਟ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਇਹ ਪਾਇਆ ਕਿ ਫਾਸਫੋ-ਥ੍ਰ੍ਰ-ਐਕਸਗ xX ਐਮਈਐਕਸਐਕਸਯੂਐਂਐੱਨਐੱਨ ਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐੱਫਐਕਸਂਐਕਸ ਮਾਉਸ (ਐੱਮ.ਅੰਜੀਰ. 4C; 1.3 ± 0.1- ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁੱਲ ਤੋਂ ਉੱਪਰ). ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੋਕੈਨ ਦੇ ਇਕਹਿਰੇ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ MEK1 ਦੀ ਫਾਸਫੋਰਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸਟੇਟ ਨੂੰ ਬਦਲਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਹ ਖੋਜ ਨਾਲ ਸੀਮਤ ਸੀ ਕਿ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਯੂਐਲਡਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਇਲਾਜ ਨਾਲ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 3D).

  

ਚਿੱਤਰ 4.

MEK5 / 1 ਦੇ Cdk2 ਦੀ ਵਿਚੋਲੇ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ, ERK1 / 2 ਦੇ ਕੋਕੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਐਟੈਨੁਏਸ਼ਨ ਵੱਲ ਖੜਦੀ ਹੈ. ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਕਿਸਮ ਦੇ (ਡਬਲਯੂ ਟੀ) ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ NUM_X ਮਾਈਸ 35 ਮਿਮੀ ਤੋਂ ਅਭਿਆਸ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਢੇ ਕੋਕੀਨ ਜਾਂ ਖਾਰੇ ਦੇ ਟੀਕੇ ਤੋਂ ਅਤੇ ਇਮੂਨਬਲਾਟਿੰਗ ਦੇ ਅਧੀਨ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ. ...

ਡੋਪਾਮਿਨ ਦਾ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ ਸੰਕੇਤ ਕਰਨਾ ਵੱਧ ਰਹੀ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸਐਕਟ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ. ਪੀਕੇ ਏ ਅਤੇ ਈ.ਆਰ.ਕੇ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਈ ਸਿਗਨਲ ਸੰਕਰਮਣ ਕਾਕੇਡਾਂ ਦੇ ਕੋਕੇਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸਰਗਰਮੀ, ਸਟਰ -133 ਵਿੱਚ ਫਾਸਫੋਰੇਲੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟਰਾਂਸਕੇਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਸੀ.ਆਰ.ਬੀ.22, 25). ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਪੀਕੇਏ ਅਤੇ ਈ.ਆਰ.ਕੇ. ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਕੈਸਕੇਡਾਂ 'ਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸ-ਐੱਕਸ 10 ਐਕਸ-ਮਿਡਏਏਟਿਡ ਅਹਬਿਸ਼ਿਟਰੀ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੈਰੀਬ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ' ਤੇ ਇਕਮੱਤ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਜੰਗਲੀ-ਟਾਈਪ ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐੱਫਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸ ਤੋਂ ਸੈਂਟ-ਐਕਸਗਐਕਸ 'ਤੇ ਸੀ.ਆਰ.ਬੀ. ਦੀ ਫਾਸਫੋਰਸਲਸ਼ਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਹੈ. ਫਾਸਫੋ-ਸੀ ਆਰ ਬੀ ਦਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ Tgp5 ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਸੀ (133 ± 35- ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੁੱਲ ਦਾ) (ਅੰਜੀਰ. 5). ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿਚ, ਫਾਸਫੋ-ਸੀ.ਆਰ.ਬੀ. ਦਾ ਪੱਧਰ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਸਟ੍ਰਾਂਟਮ ਵਿਚ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (1.5 ± 0.1 ਗੁਣਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ), ਪਰ ਕੋਕੀਨ ਨੂੰ ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐੱਫਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸ (35 ± 1.2- ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਗੁਣਾ) (ਅੰਜੀਰ. 5).

  

ਚਿੱਤਰ 5.

Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਉਪ-ਨਿਯਮ ਵਿੱਚ ਖਾਰਾ ਜਾਂ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਟੀਕੇ ਦੇ ਨਾਲ ਚੂਹੇ ਵਿੱਚ ਸੀ ਆਰ ਬੀ ਬੀ ਦੇ ਫੇਸਫੋਰੇਲੇਸ਼ਨ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ. ਦਿਲ-ਕਚਰੇ ਕੱਢਣ ਦੀ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ (ਡਬਲਯੂ ਟੀ) ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ -780 ਐਕਸ ਐਕਸਸ ਮਾਉਸ 133 ਤੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਟੀਕੇ ਦੇ ਬਾਅਦ ਅਤੇ ਇਮੂਨਬਲਾਟਿੰਗ ਦੇ ਅਧੀਨ ...

ਸੈਂਟ- 133 ਤੇ ਕਰਬੀਬ ਦਾ ਫਾਸੋਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ, ਸੀ-ਫੋਸ ਜੀਨ ਸਮੇਤ ਕੁਝ ਖਾਸ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸੀਏਪੀਏਪੀ ਪ੍ਰਤੀਕਣ ਤੱਤ ਦੁਆਰਾ ਇਸ ਦੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿ੍ਰਅਲ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ (26). ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਕੋਕੀਨ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਅਤੇ Tgp35 ਮਾਊਸ ਦੇ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿੱਚ ਸੀ-ਫੋਸ ਲਗਾਉਣ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ. ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਮਾਵਾਂ ਵਿੱਚ, ਕੋ-ਕੋਨ ਦੇ ਟੀਕੇ ਦੇ ਬਾਅਦ 1.8 ਮਿੰਟ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਐਮਆਰਐਨਏ ਦੇ ਪੱਧਰ ਦਾ ਚੋਟੀ ਦਾ ਮੁੱਲ ਵੱਧ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (0.2 ± 30 ਗੁਣਾ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੋਂ ਉਪਰੋਕਤ), ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 120 ਮਿਣ ਕੇ ਮੂਲ ਪੱਧਰ ਤੇ ਵਾਪਸ ਆ ਗਿਆ (ਅੰਜੀਰ. 6 A ਅਤੇ B). ਪਰ, ਸੀ-ਫੋਸ ਐਮਆਰਐਨਏ ਦੇ ਪੱਧਰ ਟੀ.ਜੀ.ਪੀ.ਐਕਸ.ਏ.ਐੱਫ.ਵੀ.ਕਸ ਮਾਊਸ ਵਿਚ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਵਾਲੀਆਂ ਚੂਹਿਆਂ ਨਾਲੋਂ ≈30 ਘੱਟ ਸੀ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵੀ 35 ਮਿਨੀਅੰਜੀਰ. 6 A ਅਤੇ B). Tgp35 ਮਾਊਸ ਵਿੱਚ ਸੀ-ਫੋਸ ਦੀ ਘੱਟ ਸ਼ਾਮਲਤਾ ਨੂੰ ਇਮੂਨੋਹੀਸਟੋਕੋਮਿਸਟਿਸ ਦੁਆਰਾ ਹੋਰ ਅੱਗੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 6 C-F). ਕੋਕੇਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਨੇ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਦੇ ਡੋਰੋਸੋਮਡੀਅਲ-ਡਰੋਸੋਸੇਂਸਲੇਟ ਹਿੱਸੇ ਵਿਚ ਸੀ-ਫੋਸ ਇਮਯੋਨੋਰਐਕਟੀਟੀਟੀ ਵਧਾ ਦਿੱਤੀ ਅਤੇ ਕਮਜ਼ੋਰੀ ਵਾਲੇ ਪਾਸੇ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿਚ, ਜੰਗਲੀ-ਟਾਈਪ ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ NUM_X ਮਾਉਸ ਦੋਹਾਂ ਵਿਚ. ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸੀ-ਫੋਸ-ਇਮਿਊਨਪੋਜ਼ਿਟਿਵ ਸੈਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਕੋਕੇਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਵਾਧਾ ਖਾਸ ਤੌਰ ਤੇ Tgp35 ਮਾਉਸ ਦੇ ਸਟ੍ਰਾਂਟਮ ਵਿੱਚ ਐਂਟਿਨੁਏਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਅੰਜੀਰ. 6G). ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਸੰਕੇਤ ਮਿਲਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ ਸੰਕੇਤ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਟਰਲਟ ਡੋਪਾਮਾਈਨ ਦੇ ਕੋਕੀਨ-ਵਿਚੋਲੇ ਦੀ ਵਾਧਾ ਟੀ.ਜੀ.ਪੀ.ਕੇ.

  

ਚਿੱਤਰ 6.

Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਉਪ-ਨਿਯਮ ਸਟਰੈਟਲ ਸੀ-ਫੋਸ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਕਮੀ ਅਤੇ ਕੋਕੇਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਇਸਦੇ ਘੱਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਹਨ. (A) ਕੋਕੀਨ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ (ਡਬਲਯੂ. ਟੀ.) ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਐਕਸ (ਟੀਜੀ) ਮਾਊਸ ਵਿਚ ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਇੰਡਕੈੱਕਸ਼ਨ ਦਾ ਸਮਾਂ ਕੋਰਸ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਉਤਰੀ ਬਲਾਚ. ...

ਚਰਚਾ

Cdk5 ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਐਕਟੀਵੇਟਰ p35 ਨੂੰ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਗੰਭੀਰ ਸੰਪਰਕ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯਮਤ ਹਨ (6). ਅਸੀਂ ਇੱਥੇ ਸਬੂਤ ਪੇਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ Cdk5 ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਸੀਡੀਕਐਕਸ ਐਕਸ ਐਕਸ ਅਪ ​​ਨਿਯਮਤ ਕਰਨ ਦੀ ਬਜਾਏ pxNUMX ਅਪ-ਨਿਯਮ ਦੇ ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਸਟਰੈਟਲ ਨਿਊਰੋਨਸ ਵਿੱਚ ਕੋਕੇਨ-ਮਿਲਿਏਟਿਡ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸਿਗਨਲ ਕਰਨ ਤੋਂ ਰੋਕਦੀ ਹੈ. ਸਟ੍ਰੈਂਟਲ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸਿਗਨਲਿੰਗ, ਦੋ ਟ੍ਰਾਂਸਜੈਨਿਕ ਮਾਊਸ ਰੇਖਾਵਾਂ, ਟੀਜੀਸੀਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਅਤੇ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐੱਫਐੱਨ ਐਕਸ ਮਾਸਿਜ਼ ਉੱਤੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਜਾਂ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ-ਨਿਯਮਤ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ. ਸਾਨੂੰ ਪਤਾ ਲੱਗਾ ਹੈ ਕਿ ਸੀ ਐੱਕੇ ਟੀ ਐੱਕਸਐਨਐਕਸਐੱਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪੈਨਸਿਕੌਨਐਂਗ ਐਕਸਏਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਧ ਗਈ ਸੀ ਪਰ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਜੀਐੱਨਐੱਨ ਐਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰ ਨਾਲ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ ਸੀ. ਸਾਡੀ ਪਿਛਲੀ ਰਿਪੋਰਟ ਵਿੱਚ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ TgCdxXXX ਮਧੂਜਤ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਵਿੱਚ Cdk5 ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਮਾਊਂਸ ਵਿਚਲੀ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਸੀ ਜਦੋਂ ਕਾਰਜਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਂਐੱਕਐਕਸ ਇਮੂਨੋਪਰੀਸਿਟੀਟਜ਼17), ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹੋਏ ਕਿ ਸੀ ਐੱਮ 10 ਐੱਕਸ ਟੀ ਐੱਨ ਐੱਕਸਐੱਨ ਐੱਕਸ ਓਵਰੈਕਸਪਰੇਸ਼ਨ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਮੋਨੋਮੈਰਿਕ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐੱਨਐੱਨ ਐਕਸਐੱਨ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਜੇ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਂਗਐਕਸ ਦਾ ਪੱਧਰ ਉੱਚਾ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ. ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ pxNUMX ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਪੱਧਰ Cdk5 ਸਰਗਰਮੀ ਲਈ ਇੱਕ ਰੇਟ-ਸੀਮਾਈਜ਼ਿੰਗ ਫੈਕਟਰ ਹੈ.

ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਤੀਬਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐੱਨਐਂਗ ਐਕਸ ਮਾਈਸ ਨੇ ਕ੍ਰੈਬ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਦੋਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਘੱਟ ਪ੍ਰੇਰਣਾ ਦਿਖਾਈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇਹ ਸੰਕੇਤ ਮਿਲਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੋਕੀਨ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵੱਧ ਰਹੀ ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਰੋਕੀ ਜਾ ਰਹੀ ਸੀ. TGP35 ਮਾਉਸ ਵਿੱਚ ਕੋਕੇਨ-ਮਿਡਏਏਟਿਡ ਡੋਪਾਮਿਨ ਸੰਕੇਤ ਦੇਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਸੰਭਾਵਤ ਤੌਰ ਤੇ DARPP-5, PKA, ਅਤੇ ERK ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਬਹੁ ਸੰਕੇਤ ਕੈਸਕੇਡਾਂ ਦੇ Cdk35 ਦੁਆਰਾ ਮਿਧਿਆ ਗਿਆ ਰੋਕ ਦੇ ਰਾਹੀਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ. ਕੋਕੇਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਨੇ ਡਾਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਦੀ ਪੀਕੇ ਏ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਥਰ-ਐਕਸਗਾਨੈਕਸ ਵਿੱਚ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੀਆਂ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਟੀਜੀਪੀਐਨਐਕਸਐਂਐੱਫਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸ ਵਿੱਚ ਐਂਟਿਨੁਏਟ ਹੋ ਗਈ. ਡੀਆਰਪੀਪੀ- 5 ਦੇ Thr-32 ਦੇ ਪੀ ਕੇ ਏ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਫਾਸਫੇਟਸ 32 (PP34) ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ CREB ਦੇ Ser-35 ਦੀ ਡੀਫੋਫੋਰੇਲੇਸ਼ਨ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੈ.27). ਇਸ ਪ੍ਰਕਾਰ, ਪੀਪੀਐਕਸਯੂਐਲਡਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਡੀ.ਏ.ਆਰ.ਪੀ.ਪੀ.-ਐਕਸਗ xX / ਪੀਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸ ਪਥ ਵੇਅ ਦੁਆਰਾ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸਯੂਐਂਐਕਸਐਕਸ ਮਾਉਸ ਵਿਚ ਨਹੀਂ ਉਤਾਰਿਆ ਜਾਵੇਗਾ.

ਕੋਕੋਈਨ-ਫੁਸਲਾ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ERK1 / 2 ਨੂੰ ਵੀ ਟੀਜੀਪੀਐਕਸ NUM_X ਮਾਉਸ ਵਿੱਚ ਐਂਟਿਨੁਏਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਕਈ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਢੰਗ ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਰਾਹੀਂ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਨੂੰ ਕੋਕੀਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ERK35 / 5 ਰੋਕਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਪਹਿਲਾਂ, ਡੀਆਰਪੀਪੀ- 1 ਦੇ Thr-2 ਦੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸ-ਐਂਸਟੈਂਸਡ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਪੀਕੇ ਏ ਨੂੰ ਇੰਨਹੇਿਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਕਿਸੇ ਪੀਕੇ ਏ-ਮੀਡੀਏਟਿਡ MEK5 / 32 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਾਅਦ ਵਿਚ ਰੋਕਿਆ ਜਾ ਸਕੇ ਜੋ ਕਿ ERK75 / 1 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ. ਹਾਲ ਹੀ ਵਿਚ ਇਕ ਅਧਿਐਨ ਵਿਚ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਡੀਆਰਪੀਪੀ-ਐਕਸਗੰਕਸ ਦੀ ਥ੍ਰੋ ਐਕਸ -78 ਐਕਸ ਦੇ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਐਰਕੇਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ / ਐਕਸਯੂਐਂਐੱਨਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਕੋਕੇਨ-ਵਿਚੋਲਗੀਰ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿਚ ਐਮਈਕੇ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਅਸਿੱਧੇ ਨਿਯਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਸਟਰਲਾਈਟ-ਐਂਕਰੀਡ ਫਾਸਫੇਟਸ, ਇਕ ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਦੇ ਨਿਯਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ. ਫੋਰਸਫੇਟਜ ਜੋ ਸਿੱਧਾ ERK2 / 1 ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ (28). ਇਸ ਸੰਭਾਵਨਾ ਲਈ ਸਹਿਯੋਗ ਲੱਭਣ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਮੈਕ-ਐਕਸਿਊਡ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੇ MEK1 / 2 ਤੇ Ser-217 ਅਤੇ Ser-221 ਨੂੰ Tgp35 ਮਾਉਸ ਵਿੱਚ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ. ਇਕ ਹੋਰ ਸੰਭਾਵੀ ਰਾਹ, ਐੱਸ. ਐਕਸੈਕਸ ਐਕਸ ਦੇ ਐਮਕੇਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਦੇ ਸੀਡੀਕਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ-ਐਂਸਟੈਂਸਡ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇਸਦੇ ਕੈਟੈਲੀਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿਚ ਕਮੀ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਚ ਨਿਕਲਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ERK5 / 1 ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਰੋਕਥਾਮ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰਦਾ ਹੈ.24).

ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿਚ ਸੀਡੀਕਐਕਸਡਐਕਸਐਕਸਐਕ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਜਾਨਵਰਾਂ ਵਿਚ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਇਲਾਜ ਦੇ ਵਿਹਾਰਕ ਪ੍ਰਭਾਵ (6). ਅੰਤਿਮ ਰੂਪ ਨਾਲ ਇਹ ਮੰਨਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ Cdk5 ਦੀ ਕਾਰਜ-ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੁਹਾਈ ਤੋਂ ਕੋਕੀਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਮੁਕਾਬਲਾ ਕਰਨ ਲਈ neuronal adaptation ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦੀ ਹੈ. (6), ਸਾਨੂੰ ਪਤਾ ਲੱਗਾ ਕਿ DARPP-5 ਅਤੇ MEK32 ਦੇ Cdk1- ਵਿਚੋਲੇ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਨੇ ERK1 / 2 ਦੇ ਕੋਕੇਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਇਆ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਕ੍ਰੈਰੀਬ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੇ ਘੱਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅਤੇ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿਚ ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਪੈਦਾ ਹੋਏ. ਸਾਡੇ ਖੋਜਾਂ ਨੇ ਇਸ ਵਿਚਾਰ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕੀਤਾ ਹੈ ਕਿ pxNUMX ਅਪ-ਨਿਯਮ ਦੇ ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਯੂਐਂਐੱਨਐਕਸਐਕਸ ਦੀ ਵਧ ਰਹੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨਾਲ, ਕੋਕੀਨ ਦੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਟ੍ਰੈਟੀਅਮ ਵਿਚ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਇਹ ਕ੍ਰੈਡਬ ਅਤੇ ਸੀ-ਫੋਜ਼ ਜਿਹੇ ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰਾਂ ਦੀਆਂ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੁਆਰਾ ਵਾਪਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਇਸ ਪ੍ਰਕਾਰ, ਸੀਡੀ ਐਕਸਐਕਸਐਨਐਕਸਐਕਸਐਕਸਐਕਸ ਐਕਟੀਵੇਟਰ ਪੀਐਕਸਯੂਐਨਐਕਸ, ਸੀਡੀਐਕਸਐਕਸਡਐਕਸਐੱਨਐਕਸਐਕਐਕਟ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਉੱਤੇ ਇਸ ਦੇ ਰੇਟ-ਸੀਮਿਤ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਨਿਊਕੋਨਲ ਫੋਨਾਂ ਵਿਚ ਲੰਮੇ ਸਮੇਂ ਤਕ ਚੱਲਣ ਵਾਲੀਆਂ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਵਿਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿਚ ਕੋਕੀਨ ਦੀ ਆਦਤ ਹੈ..

ਰਸੀਦ

ਸੂਚਨਾ

ਹਵਾਲੇ