ప్రోక్ నటల్ అజాద్ సైన్స్ USA. 2009 నవంబర్ 24; 106 (47): 20016 - 20020.
ప్రచురణ ఆన్లైన్ నవంబర్ 10 న. doi: 10.1073 / pnas.0908789106
PMCID: PMC2785284
పియట్రో కాటోన్,a,b,c,d,1,2 వాలెంటినా సబినో,a,b,c,d,1 మారిసా రాబర్టో,a,c,d మిచల్ బాజో,e లారా పోక్రోస్,a జెన్నిఫర్ బి. ఫ్రిహాఫ్,a,c,d,f ఎవా M. ఫెకెటే,a,c,d లూకా స్టీర్డో,g కెన్నర్ సి. రైస్,h డిమిత్రి ఇ. గ్రిగోరియాడిస్,i బ్రూనో కొంటి,d,e జార్జ్ ఎఫ్. కోబ్,a,c మరియు ఎరిక్ పి. జోరిల్లాa,c,d,2
వియుక్త
శరీర బరువును నియంత్రించడానికి ఆహారం తీసుకోవడం అనేది బలవంతపు ఆహారం నుండి లేమి యొక్క చక్రాలను కలిగి ఉంటుంది, ఇది బలవంతపు ఆహారాన్ని ప్రోత్సహిస్తుంది. ప్రస్తుత అధ్యయనం ప్రకారం, ఎలుకలు రుచికరమైన ఆహారానికి అడపాదడపా ప్రాప్యత నుండి ఉపసంహరించుకుంటాయి, పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతపై రుచికరమైన ఆహారాన్ని అతిగా తినడం మరియు కార్టికోట్రోపిన్-విడుదల కారకం- 1 (CRF) ద్వారా వర్గీకరించబడిన ఉపసంహరణ లాంటి స్థితి1) హైపోఫాగియా, తక్కువ రుచికరమైన ఆహారాన్ని పొందటానికి ప్రేరణ లోపాలు మరియు యాంజియోజెనిక్ లాంటి ప్రవర్తనతో సహా గ్రాహక విరోధి-రివర్సిబుల్ ప్రవర్తనలు. ఉపసంహరణతో పాటు పెరిగిన CRF వ్యక్తీకరణ మరియు CRF ఉన్నాయి1 అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో ఎలక్ట్రోఫిజియోలాజికల్ ప్రతిస్పందన. యాంటీ రివార్డ్ ఎక్స్‌ట్రాహైపోథాలమిక్ సిఆర్ఎఫ్-సిఆర్ఎఫ్ నియామకం చేయాలని మేము ప్రతిపాదించాము1 రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించుకునే వ్యవస్థలు, దుర్వినియోగమైన drugs షధాల నుండి సంయమనానికి సారూప్యత, రుచికరమైన ఆహారాన్ని బలవంతంగా ఎన్నుకోవడం, ఆరోగ్యకరమైన ప్రత్యామ్నాయాలను తక్కువ చికిత్స చేయటం మరియు రుచికరమైన ఆహారాన్ని తీసుకోవడం నిరోధించినప్పుడు ప్రతికూల భావోద్వేగ స్థితిని ప్రోత్సహిస్తుంది.
మాదకద్రవ్య వ్యసనం మాదిరిగానే es బకాయం మరియు తినే రుగ్మతల యొక్క రూపాలు దీర్ఘకాలిక సంయమనం యొక్క ప్రత్యామ్నాయ కాలాలతో (అనగా, “నిషేధించబడిన” రుచికరమైన ఆహారాన్ని నివారించడానికి ఆహారం తీసుకోవడం) మరియు పున pse స్థితి (అనగా, బలవంతపు, తరచుగా అనియంత్రిత, అధిక తినడం రుచికరమైన ఆహారాలు) ప్రతికూల పరిణామాలు ఉన్నప్పటికీ కొనసాగుతాయి (1). రుచికరమైన ఆహార పదార్థాల యొక్క సానుకూల ఉపబల లక్షణాలు బాగా తెలిసినప్పటికీ (2, 3), వారి ప్రతికూల ఉపబల లక్షణాలకు తక్కువ శ్రద్ధ ఇవ్వబడింది (4-6), అనగా వికారమైన ఉద్దీపనను తొలగించడం ద్వారా ఉత్పత్తి చేయబడిన ప్రవర్తనా ప్రతిస్పందన యొక్క పెరిగిన సంభావ్యత (ఉదా., ప్రతికూల భావోద్వేగ స్థితుల నుండి ఉపశమనం పొందటానికి రుచికరమైన ఆహారాన్ని తీసుకోవడం). దుర్వినియోగ drugs షధాల యొక్క విస్తృతమైన ఉపయోగం యొక్క అడపాదడపా చక్రాలు క్రమంగా "ప్రభావిత ఆధారపడటానికి" దారితీస్తాయి, ఇచ్చిన భావోద్వేగ సమితి పాయింట్‌ను అలాగే నిలిపివేసిన తరువాత ప్రతికూల భావోద్వేగ స్థితిని కొనసాగించడానికి అధిక మరియు / లేదా అంతకంటే ఎక్కువ రెగ్యులర్ పరిమాణంలో of షధం యొక్క అవసరాన్ని గమనించవచ్చు. drug షధ తీసుకోవడం (7, 8). ఇటువంటి ప్రభావవంతమైన ఉపసంహరణ వరుసగా use షధ వినియోగాన్ని కొనసాగించడం మరియు తిరిగి ప్రారంభించడం యొక్క ప్రతికూల ఉపబల లక్షణాల ద్వారా ఉపయోగాన్ని కొనసాగించవచ్చు మరియు పున pse స్థితిని ప్రేరేపిస్తుంది (7, 8).
ఎక్స్‌ట్రాహైపోథాలమిక్ కార్టికోట్రోపిన్-రిలీజింగ్ ఫ్యాక్టర్ (సిఆర్ఎఫ్) మెదడు ఒత్తిడి వ్యవస్థలు మాదకద్రవ్యాల వాడకం నుండి ఆధారపడటానికి పరివర్తనలో పాల్గొంటాయి, ఈ సమయంలో దుర్వినియోగమైన drugs షధాల తీసుకోవడం సానుకూల, ఉపబల యంత్రాంగాల కంటే ఈ ప్రతికూలత ద్వారా ఎక్కువగా ప్రేరేపించబడుతుంది. ఆల్కహాల్, నికోటిన్, కొకైన్, ఓపియేట్స్, యాంఫేటమిన్లు మరియు టెట్రాహైడ్రోకాన్నబినోల్ (సహా) యొక్క ప్రతి ప్రధాన దుర్వినియోగానికి ఉపసంహరణ సిండ్రోమ్‌లలో CRF ప్రేరణాత్మకంగా సంబంధిత పాత్ర పోషిస్తుంది.7, 8). సారూప్యత ద్వారా, drug షధ ఆధారపడటం నమూనాలలో కనిపించే మాదిరిగానే CRF వ్యవస్థ న్యూరోఅడాప్టేషన్లను ప్రేరేపించడానికి అడపాదడపా, అధిక రుచికరమైన ఆహారానికి విస్తృత ప్రాప్యత hyp హించబడింది.4, 5, 9).
ఫలితాలు
రుచికరమైన ఆహారం అందుబాటులో లేనప్పుడు అడపాదడపా, విస్తృతమైన ప్రాప్యత క్రమంగా తక్కువ ఇష్టపడే ఆహారాన్ని తక్కువగా తినడానికి దారితీస్తుంది మరియు పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతపై రుచికరమైన ఆహారాన్ని అతిగా తినడం (10-12). CRF అనే పరికల్పనను పరీక్షించడానికి1 వ్యవస్థలు ఈ దాణా అనుసరణలను మధ్యవర్తిత్వం చేస్తాయి, మగ విస్టార్ ఎలుకలు (n = 20) ప్రతి వారం ప్రతిరోజూ చౌ డైట్ యాడ్ లిబిటమ్ (చౌ / చౌ) ను అందించారు లేదా 5 రోజులు (సి ఫేజ్) కోసం చౌ యాడ్ లిబిటమ్‌ను అందించారు, తరువాత 2 రోజులు (పి ఫేజ్) (చౌ / పాలటబుల్) ) (చూడండి అంజీర్ ఆహారం షెడ్యూల్ కోసం మరియు అంజీర్ ఆహారం తీసుకోవడం మరియు శరీర బరువుపై ఆహారం షెడ్యూల్ యొక్క ప్రభావాల కోసం). 7 వారాల డైట్ సైక్లింగ్ తరువాత, ఎలుకలు నాన్-పెప్టైడ్ CRF ను అందుకున్నాయి1 లాటిన్-స్క్వేర్ డిజైన్‌లో గ్రాహక విరోధి R121919 (0, 5, 10, మరియు 20 mg / kg, sc)13). రుచికరమైన ఆహారం నుండి చౌకు లేదా చౌ నుండి రుచికరమైన ఆహారానికి మారడానికి ముందు చికిత్సలు 1 h ఇవ్వబడ్డాయి. R121919 మోతాదు-ఆధారిత రుచికరమైన ఆహారం తీసుకోవడం మరియు చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలలో చౌ ఆహారం తీసుకోవడం పెరిగింది (డైట్ ఫేజ్ × డైట్ షెడ్యూల్ × డ్రగ్ డోస్: F3,54 = 7.25, P <0.001), చౌ నియంత్రణలను తీసుకోకుండా. రుచికరమైన ఆహారం (పి దశ) కు పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతపై R121919 అధిక రుచికరమైన ఆహారం తీసుకోవడం తగ్గింది (అంజీర్A). స్వతంత్ర పరీక్షలలో, CRF1 గ్రాహక విరోధి చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలలో తక్కువ రుచికరమైన చౌ యొక్క తీసుకోవడం పెరిగిన ఆహారం (సి దశ) నుండి ఉపసంహరించబడింది (అంజీర్B). అందువల్ల, చౌ హైపోఫాగియా మరియు రుచికరమైన ఆహారాన్ని అతిగా తినడం ద్వారా, R121919 తీసుకోవడం సైక్లింగ్ యొక్క వ్యాప్తిని గుర్తించింది (మొదటి రుచికరమైన పి దశలో తీసుకోవడం మరియు చౌకి మొదటి ఉపసంహరణ మధ్య వ్యత్యాసం: డైట్ షెడ్యూల్ × డ్రగ్ డోస్: F3,54 = 7.25, P <0.001) (అంజీర్C). CRF-CRF యొక్క ప్రగతిశీల నియామకానికి మద్దతు ఇస్తుంది1 తీవ్రమైన డైట్ ఎఫెక్ట్ ద్వారా కాకుండా, డైట్ హిస్టరీ ద్వారా వ్యవస్థలు, R121919 ఆహారాన్ని ఒక్కసారి బహిర్గతం చేసిన తర్వాత రుచికరమైన ఆహారాన్ని తగ్గించలేదు లేదా రుచికరమైన ఆహారం నుండి మొదటి ఉపసంహరణ సమయంలో చౌ తీసుకోవడం పెంచలేదు (అంజీర్).
అడపాదడపా నుండి ఉపసంహరించుకోవడం, రుచికరమైన ఆహారానికి విస్తృత ప్రాప్యత కూడా ఆందోళన లాంటి ప్రవర్తనను పెంచుతుంది (11). CRF అనే పరికల్పనను పరీక్షించడానికి1 రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించుకునే ప్రతికూల భావోద్వేగ ప్రవర్తనా సంకేతాలలో గ్రాహకాలు పాల్గొంటాయి, ఎలుకలకు R121919 (0, 20 mg / kg, sc, 1-h ప్రీట్రీట్మెంట్) ఇవ్వబడ్డాయి మరియు ఎలివేటెడ్ ప్లస్-మేజ్ (14), రుచికరమైన ఆహారం నుండి చౌకు మారిన తర్వాత 5-9 h. వాహన-చికిత్స చేసిన చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలు చౌ-ఫెడ్ నియంత్రణల కంటే తక్కువ ఓపెన్ ఆర్మ్ సమయాన్ని ప్రదర్శించాయి, ఇది యాంజియోజెనిక్ లాంటి ప్రభావాన్ని ప్రతిబింబిస్తుంది, 7 వారాల డైట్ సైక్లింగ్ నుండి ఉపసంహరించుకునేటప్పుడు (అంజీర్A), రెండు ఉపసంహరణ చక్రాల తర్వాత ఇంకా చూడని ప్రభావం (అంజీర్). R121919 (20 mg / kg తో ప్రీట్రీట్మెంట్, రుచికరమైన ఆహారాన్ని అతిగా తినడం మరియు చౌ యొక్క తక్కువ చికిత్స రెండింటినీ మాడ్యులేట్ చేసిన మోతాదు) చౌ నియంత్రణలలో ప్లస్-చిట్టడవి ప్రవర్తనను మార్చని మోతాదులో చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకల ఓపెన్ ఆర్మ్ అన్వేషణలో తగ్గుదలని నిరోధించింది. డైట్ షెడ్యూల్ ose మోతాదు: F1,43 = 7.25, P <0.02; అంజీర్ఒక ఎడమ). R121919 పరిపాలన క్లోజ్డ్ ఆర్మ్ ఎంట్రీలుగా కొలిచిన సాధారణ కార్యాచరణను మార్చలేదు. అందువల్ల, R121919 అడపాదడపా నుండి ఉపసంహరించుకోవడంతో సంబంధం ఉన్న పెరిగిన ఆందోళన-వంటి ప్రవర్తనను నిరోధించింది, నియంత్రణల ప్రవర్తనను మార్చకుండా, రుచికరమైన ఆహారానికి విస్తృత ప్రాప్యత, CRF నియామకాన్ని సూచిస్తుంది1 వ్యవస్థలు.
అడపాదడపా నుండి ఉపసంహరించుకోవడం, రుచికరమైన ఆహారానికి విస్తృత ప్రాప్యత కూడా తక్కువ ప్రాధాన్యత కలిగిన ఆహారాన్ని పొందటానికి ప్రేరణ లోపాలకు దారితీస్తుంది, హైపోహెడోనిక్ లాంటి ప్రవర్తన యొక్క సంభావ్య సూచిక (10). సారూప్యంగా, ఉపబల యొక్క ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి షెడ్యూల్ క్రింద తక్కువ ప్రాధాన్యత కలిగిన గస్టేటరీ రీన్ఫోర్సర్‌ల కోసం ప్రతిస్పందించడం గతంలో మాదకద్రవ్యాల ఉపసంహరణ సమయంలో కనిపించే ప్రేరణ లోపాలను సూచించడానికి ఉపయోగించబడింది (15). CRF యొక్క ప్రమేయాన్ని నిర్ణయించడానికి1 గ్రాహకాలు, ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి షెడ్యూల్‌లో తక్కువ ప్రాధాన్యత కలిగిన చౌను పొందడానికి ఆహారం-సైక్లింగ్ ఎలుకల పనితీరుపై R121919 యొక్క ప్రభావాలను మేము పరీక్షించాము. మునుపటి ఫలితాలను ధృవీకరిస్తోంది (10), వాహన-చికిత్స చేసిన చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలు తక్కువ రుచికరమైన చౌను పొందటానికి పని చేయడానికి తక్కువ ప్రేరణను ప్రదర్శించాయి, ఇది తగ్గిన బ్రేక్‌పాయింట్ ద్వారా ప్రతిబింబిస్తుంది మరియు చౌ / చౌ ఎలుకలతో పోలిస్తే విడుదలయ్యే మొత్తం స్పందనలు తగ్గాయి (10) (అంజీర్). R121919 ప్రీట్రీట్మెంట్ (20 mg / kg, చౌ హైపోఫాగియాను పెంచడంలో, రుచికరమైన ఆహార హైపర్‌ఫేజియాను తగ్గించడంలో మరియు యాంజియోజెనిక్ లాంటి ప్రవర్తనను తగ్గించడంలో ప్రభావవంతమైన మోతాదు) చౌ నియంత్రణలలో పనికిరాని మోతాదులో ఆహారం-సైక్లింగ్ ఎలుకలలో ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి పనితీరులో లోపాలను ఎంపిక చేసింది. (బ్రేక్ పాయింట్: డైట్ షెడ్యూల్ × డ్రగ్: F1,15 = 8.17, P <0.02; మొత్తం స్పందనలు: డైట్ షెడ్యూల్ × డ్రగ్: F1,15 = 9.14, P <0.01; అంజీర్B, ఎడమ). పోస్ట్‌స్టెస్టివ్ సంతృప్తిని తగ్గించడం ద్వారా చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలలో R121919 పనితీరును సులభతరం చేసిన ప్రత్యామ్నాయ వ్యాఖ్యానానికి వ్యతిరేకంగా, R121919 5 నిమిషానికి ముందుగానే సెషన్‌లో స్పందించడంలో లోపాలను నిరోధించింది (డైట్ షెడ్యూల్ × డ్రగ్: F1,15 = 2.55, P <0.05) (అంజీర్బి రైట్). అందువలన, సి.ఆర్.ఎఫ్1 రిసెప్టర్ విరోధి ప్రగతిశీల-నిష్పత్తిలో ప్రేరేపిత లోటులను మందగించింది, తక్కువ ప్రాధాన్యత కలిగిన గస్టేటరీ రీన్ఫోర్సర్‌ల కోసం ప్రతిస్పందిస్తుంది, ఇది జంతువులలో అడపాదడపా, అధిక రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యత నుండి ఉపసంహరించబడుతుంది.
రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించుకోవడం ఒత్తిడి-సంబంధిత ఎక్స్‌ట్రాహైపోథాలమిక్ CRF వ్యవస్థను సక్రియం చేస్తుందనే పరికల్పనను పరీక్షించడానికి, అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో CRF mRNA మరియు పెప్టైడ్ స్థాయిలు వరుసగా పరిమాణాత్మక నిజ-సమయ PCR మరియు RIA చేత కొలుస్తారు. ఎలుకలు 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి లేదా నిరంతరం చౌ తినిపించాయి. అనస్థీషియా మరియు శిరచ్ఛేదం తరువాత, అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకం నుండి మెదడు గుద్దులు ఉపసంహరించుకునేటప్పుడు మరియు రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యతను పునరుద్ధరించిన తరువాత సేకరించబడతాయి. చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలలో రుచికరమైన ఆహారాన్ని ఉపసంహరించుకోవడం చౌ / చౌ ఎలుకలతో పోలిస్తే అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో CRF mRNA వ్యక్తీకరణలో ఐదు రెట్లు పెరిగింది (అంజీర్A). దీనికి విరుద్ధంగా, రుచికరమైన ఆహారానికి పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతతో CRF mRNA నియంత్రణ-స్థాయికి తిరిగి వచ్చింది (F2,19 = 6.97, P <0.01). చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలను ఒక్కసారి మాత్రమే సైక్లింగ్ చేసినప్పుడు అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో CRF mRNA వ్యక్తీకరణ మారలేదు (చౌ / చౌ వర్సెస్ చౌ / పాలటబుల్: 5.5 ± 2.2 వర్సెస్ 6.3 ± 1.7 ఎన్ఎస్), CRF- యొక్క ప్రగతిశీల నియామకానికి మద్దతు ఇస్తుంది. CRF1 ఆహారం యొక్క తీవ్రమైన ప్రభావం ద్వారా కాకుండా, ఆహార చరిత్ర ద్వారా వ్యవస్థలు. అదనంగా, CRF mRNA వ్యక్తీకరణ న్యూక్లియస్ అక్యూంబెన్స్, ప్రిఫ్రంటల్ కార్టెక్స్ లేదా ఇన్సులర్ కార్టెక్స్‌లో మారలేదు, ఇది ప్రాంతీయ విశిష్టతకు మద్దతు ఇస్తుంది (అంజీర్). ఆసక్తికరంగా, హైపోథాలమస్ యొక్క పారావెంట్రిక్యులర్ న్యూక్లియస్లో లేదా చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలలో అదే ఉపసంహరణ సమయ బిందువు వద్ద కార్టికోస్టెరాన్ ప్రసరించడంలో CRF mRNA వ్యక్తీకరణలో గణనీయమైన మార్పులు కనిపించలేదు.అత్తి పండ్లను. S6 మరియు S7), హైపోథాలమిక్ కాకుండా అమిగ్డాలర్‌లో మార్పులు అనే othes హను సూచిస్తూ, CRF ఒత్తిడి వ్యవస్థలు ప్రవర్తనా అనుసరణలను దాదాపుగా ఉపసంహరించుకుంటాయి. అంతేకాకుండా, జంతువుల అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో సిఆర్ఎఫ్ పెప్టైడ్ ఇమ్యునోరేయాక్టివిటీ రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించబడినది, చౌ-తినిపించిన జంతువుల కంటే 70% ఎక్కువ, కానీ రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యతతో చౌ-ఫెడ్ నియంత్రణ స్థాయిలకు తిరిగి వచ్చింది (F2,24 = 4.01, P <0.01) (అంజీర్B). అందువల్ల, రుచికరమైన ఆహారాన్ని ఉపసంహరించుకోవడం అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో ఒత్తిడి-సంబంధిత CRF పెప్టైడ్ వ్యవస్థను సక్రియం చేసింది, ఇది drug షధ మరియు ఇథనాల్ ఉపసంహరణ నమూనాలలో కనుగొన్న వాటికి సమానంగా ఉంటుంది (7, 8). అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో ఎక్స్‌ట్రాహైపోథాలమిక్ సిఆర్ఎఫ్ సిస్టమ్ యాక్టివేషన్ తగ్గినందున, ఇందులో సిఆర్ఎఫ్ క్రియాశీలత ఆందోళనతో ముడిపడి ఉంది (16), ప్రస్తుత ఫలితాలు కూడా సంయమనం యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తొలగించడం ద్వారా రుచికరమైన ఆహారం ప్రతికూల ఉపబల లక్షణాలను పొందవచ్చని సూచిస్తున్నాయి (17).
రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఎలుకలు ఉపసంహరించుకుంటాయనే పరికల్పనను పరీక్షించడానికి CRF కు పెరిగిన సున్నితత్వాన్ని చూపిస్తుంది1 అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో γ- అమినోబ్యూట్రిక్ యాసిడ్ (GABA) సిగ్నలింగ్ యొక్క విరోధి మాడ్యులేషన్, ఇది ఇథనాల్ ఉపసంహరణ సమయంలో సంభవిస్తుంది (18), స్లైస్ తయారీలో అమిగ్డాలా న్యూరాన్ల యొక్క కేంద్ర కేంద్రకం యొక్క GABAergic ప్రసారంపై R121919 ప్రభావాన్ని మేము పరిశీలించాము. మగ విస్టార్ ఎలుకలు (n = 14) 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి మరియు తక్కువ రుచికరమైన చౌకు మారిన తరువాత బలి ఇవ్వబడ్డాయి. అమిగ్డాలా సినాప్సెస్ యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో బేసల్ GABAergic ప్రసారం ఆహార చరిత్రకు సంబంధించి భిన్నంగా లేదు (n = 23 కణాలు) GABA- నిరోధక పోస్ట్‌నాప్టిక్ పొటెన్షియల్స్ (IPSP) ను ప్రేరేపించడానికి ఉపయోగించే అన్ని ఉద్దీపన తీవ్రతలలో. ఏదేమైనా, R20 (121919 μM) తో 1 min సూపర్ఫ్యూజన్ ప్రేరేపించబడిన GABA లో ఎక్కువ తగ్గింపును ప్రేరేపించిందిA-చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకల అమిగ్డాలా న్యూరాన్స్ యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో IPSP లు (M ± SEM: 30 ± 6%, n = 9 కణాలు) చౌ-ఫెడ్ నియంత్రణల కంటే (M ± SEM: 12 ± 6%, P <0.05, n = 11 కణాలు) (అంజీర్). 30 నిమిషాల వాష్అవుట్ వ్యవధి తరువాత, రెండు సమూహాల యొక్క IPSP లు ఇలాంటి, బేస్‌లైన్ లాంటి స్థాయిలకు తిరిగి వచ్చాయి. అందువల్ల, అమిగ్డాలా CRF-CRF యొక్క అధిక క్రియాశీలతకు అనుగుణంగా ఉంటుంది1 వ్యవస్థ మరియు ఇథనాల్ ఉపసంహరణ సమయంలో కనిపించే ప్రభావాలు (18), డైట్-సైక్లింగ్ ఎలుకలు CRF యొక్క నిరోధక ప్రభావాలకు పెరిగిన సున్నితత్వాన్ని చూపించాయి1 అమిగ్డాలా GABAergic ట్రాన్స్మిషన్ యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంపై గ్రాహక విరోధి.
చర్చా
సమిష్టి ఫలితాలు రుచికరమైన ఆహారానికి అడపాదడపా, విస్తారమైన ప్రాప్యత యొక్క చరిత్ర ఒత్తిడి-సంబంధిత ఎక్స్‌ట్రాహైపోథాలమిక్ CRF-CRF లో ప్రగతిశీల, ప్రేరణాత్మకంగా సంబంధిత న్యూరోఅడాప్టేషన్‌లకు దారితీస్తుందని క్రియాత్మక ఆధారాలను అందిస్తుంది.1 వ్యవస్థలు. ప్రత్యేకంగా, సెలెక్టివ్ CRF1 గ్రాహక విరోధి R121919 ఆహారం-సైక్లింగ్ ఎలుకలలో దాణా భేదం మరియు ఎంపికను ప్రభావితం చేస్తుంది, సాధారణ చౌ తీసుకోవడం పెరుగుతుంది మరియు పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతపై అధిక రుచికరమైన ఆహారాన్ని తీసుకోవడం తగ్గుతుంది. సి.ఆర్.ఎఫ్1 రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించుకునేటప్పుడు కనిపించే తక్కువ ప్రాధాన్యత కలిగిన చౌ కోసం ప్రతిస్పందించడంలో పెరిగిన ఆందోళన-వంటి ప్రవర్తన మరియు ప్రేరణ లోపాలను కూడా గ్రాహక విరోధి ఎంపిక చేసింది. రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యతను ఉపసంహరించుకోవడం వలన అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో CRF జన్యువు మరియు పెప్టైడ్ వ్యక్తీకరణ పెరిగింది, పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతతో తొలగించబడిన ప్రభావాలు. అదనంగా, డైట్-సైక్లింగ్ ఎలుకలు CRF యొక్క నిరోధక ప్రభావాలకు పెరిగిన సున్నితత్వాన్ని చూపించాయి1 అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో GABAergic ప్రసారంపై గ్రాహక విరోధి, అమిగ్డాలా CRF-CRF యొక్క అధిక క్రియాశీలతను మరింత సూచిస్తుంది1 వ్యవస్థ. పునరుద్ధరించిన ప్రాప్యతపై రుచికరమైన ఆహారాన్ని అతిగా తినడం వలన సిఆర్ఎఫ్ యొక్క పెరిగిన వ్యక్తీకరణ మరియు సిఆర్ఎఫ్కు ఎలక్ట్రోఫిజియోలాజికల్ సున్నితత్వం వంటివి చూడవచ్చు.1 అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో గ్రాహక దిగ్బంధనం. సిఆర్ఎఫ్1 రుచికరమైన ఆహార ప్రాప్తికి ముందు విరోధి ముందస్తు చికిత్స తద్వారా ప్రారంభంలో ఉన్న CRF-CRF ని వ్యతిరేకించటానికి అర్ధం1 ఉపసంహరణ యొక్క సిస్టమ్ అతిగా క్రియాశీలత. చికిత్స చేయని జంతువులలో కనిపించే అతిగా తినడం యొక్క సంక్షిప్త సమయ కోర్సు (10) ప్రస్తుత అధ్యయనంలో చూసినట్లుగా, రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యత తిరిగి పొందిన తర్వాత CRF పెప్టైడ్ యొక్క వ్యక్తీకరణ, విడుదల మరియు ప్రభావాలు సాధారణీకరించే సమయ కోర్సును ప్రతిబింబిస్తాయి. అందువల్ల, రుచికరమైన ఆహారాన్ని అడపాదడపా తినడం వల్ల రివార్డ్ వ్యతిరేక CRF-CRF నియామకంతో మెదడు రివార్డ్ సిస్టమ్స్లో అలోస్టాటిక్ మార్పును ప్రేరేపించవచ్చు.1 అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో వ్యవస్థలు.
ఈ ఫలితాలు కంపల్సివ్ తినడానికి మాత్రమే కాకుండా, సాధారణంగా ప్రేరణకు కూడా చిక్కులు కలిగిస్తాయి. హెడోనిక్ వ్యవస్థల యొక్క పదేపదే క్రియాశీలత మెదడులోని ప్రత్యర్థి లాంటి ప్రక్రియలను (అంటే, CRF నియామకం) ద్వారా బయటపడింది1 సర్క్యూట్రీ) రివార్డ్ ట్రాన్స్మిటర్ సిస్టమ్స్లో ఫంక్షన్ యొక్క సాధారణ నష్టానికి భిన్నంగా ఉంటాయి. సిస్టమ్ మధ్య న్యూరోఅడాప్టేషన్స్ (19) దుర్వినియోగం యొక్క అన్ని ప్రధాన drugs షధాలపై ఆధారపడటానికి పరివర్తన సమయంలో కూడా సంభవిస్తుంది (7, 8). ప్రస్తుత అధ్యయనంలో non షధ రహిత ఉద్దీపనలకు సాధారణీకరణ, కాలక్రమేణా హెడోనిక్ ఉద్దీపనల తీవ్రతలో పదేపదే వైరుధ్యాలను అనుభవించే వ్యక్తులలో ప్రేరణ ప్రక్రియలు కలవరపడతాయని సూచిస్తున్నాయి (20). అనుకూలంగా, ఇటువంటి ప్రక్రియలు శక్తి-దట్టమైన, అధిక-బహుమతి కలిగిన ఆహారాల వైపు ఆహారాన్ని కోరుకునే మరియు సంపూర్ణమైన ప్రవర్తనను మార్చవచ్చు, అదే సమయంలో తక్కువ శక్తితో కూడిన, తక్కువ-బహుమతి కలిగిన ఆహారాలను (లేదా ఆహారేతర) పొందటానికి ప్రయత్నాలను తగ్గించుకుంటాయి, అనుసరణ పరిణామాత్మకంగా ఉపయోగకరంగా ఉన్నప్పుడు ఖర్చులు (ఉదా., ప్రెడేటర్ ఎక్స్పోజర్, పరిమిత సమయం మరియు శక్తి వనరులు). నేటి వాతావరణంలో, అదే ప్రక్రియలు తక్కువ రుచికరమైన, కానీ ఎక్కువ పోషకమైన ప్రత్యామ్నాయాల వ్యయంతో es బకాయాన్ని ప్రోత్సహించే ఆహార పదార్థాలను తీసుకోవచ్చు.
అందువలన, CRF లో వ్యసనం లాంటి మార్పులు1 వ్యవస్థలు డ్రైవ్ చేయడంలో సహాయపడవచ్చు (i) శక్తి-దట్టమైన రుచికరమైన ఆహారాన్ని తీసుకోవడం, (ii) ఆరోగ్యకరమైన ప్రత్యామ్నాయాల అండర్కాన్సప్షన్, మరియు (iii) రుచికరమైన ఆహారానికి ప్రాప్యత నిరోధించబడినప్పుడు సంభవించే ప్రతికూల ప్రతికూల భావోద్వేగ స్థితి (4, 5, 10-12, 17). మానవ స్థితికి అనువదించబడిన, CRF వ్యవస్థ క్రియాశీలత స్థూలకాయం మరియు సంబంధిత తినే రుగ్మతలలో పున pse స్థితి తినడాన్ని ప్రోత్సహిస్తుంది, అలాగే రుచికరమైన ఆహారం నుండి చక్రీయ సంయమనం యొక్క ఇతర ప్రతికూల ప్రేరణ సీక్లే.
సామాగ్రి మరియు పద్ధతులు
విషయము.
మగ విస్టార్ ఎలుకలు (n = 155, 180-230 g, 45 రోజుల వయస్సు) చార్లెస్ నది నుండి పొందబడ్డాయి మరియు 19 h: 10.5 h రివర్స్ లైట్ సైకిల్ (8) లో వైర్-టాప్, ప్లాస్టిక్ బోనులలో (12 × 12 × 10 అంగుళాలు) వచ్చిన తరువాత ఒకే చోట ఉంచారు. : 00 h లైట్స్ ఆఫ్), తేమ- (60%) మరియు ఉష్ణోగ్రత-నియంత్రిత (22 ° C) వివేరియం. ఎలుకలకు మొక్కజొన్న-ఆధారిత ఎలుకల చౌ [హర్లాన్ టెక్లాడ్ LM-485 డైట్ 7012: 65% (kcal) కార్బోహైడ్రేట్, 13% కొవ్వు, 21% ప్రోటీన్, జీవక్రియ శక్తి 341 cal / 100 g] మరియు 1 వారానికి ముందు నీటి ప్రకటన లిబిటమ్ ప్రయోగాల ప్రారంభం. ప్రయోగశాల జంతువుల సంరక్షణ మరియు ఉపయోగం కోసం నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆఫ్ హెల్త్ గైడ్ (NIH ప్రచురణ సంఖ్య 85-23, సవరించిన 1996) మరియు “ప్రయోగశాల జంతు సంరక్షణ సూత్రాలు” (http://www.nap.edu/readingroom) కు కట్టుబడి ఉన్న ప్రయోగాత్మక విధానాలు .
డ్రగ్స్.
చెన్ మరియు ఇతరులలో వివరించిన విధంగా R121919 సంశ్లేషణ చేయబడింది. (21). R121919 అధిక అనుబంధం (Ki = 3.5 nM) సెలెక్టివ్ CRF1 అనేక ఇతర CRF కన్నా గొప్ప భౌతిక రసాయన లక్షణాలతో విరోధి1 విరోధులు (ఉదా., తగ్గిన లాగ్‌పి మరియు లాగ్‌డి, పెరిగిన నీటిలో కరిగే సామర్థ్యం) (13). పరీక్ష కోసం, R121919 మొదట 1 M HCl (తుది వాల్యూమ్ యొక్క 10%) లో కరిగించబడింది, తరువాత 20% (wt / vol) 2- హైడ్రాక్సిప్రొపైల్- cy- సైక్లోడెక్స్ట్రిన్ (సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్) యొక్క తుది వాహనానికి కరిగించబడుతుంది, వెనుక-టైట్రేటెడ్ NaOH నుండి pH 4.5 వరకు. R121919 ద్రావణం 2 mL / kg వాల్యూమ్‌లో sc (sc) గా ఇవ్వబడింది.
ప్రకటన లిబిటమ్ డైట్ ప్రత్యామ్నాయం.
అలవాటుపడిన తరువాత, ఎలుకలను మునుపటి 3-4 రోజుల నుండి ఆహారం తీసుకోవడం, శరీర బరువు మరియు ఫీడ్ సామర్థ్యం కోసం సరిపోయే రెండు గ్రూపులుగా విభజించారు. ఒక సమూహానికి వారానికి 7 రోజులు (చౌ / చౌ) ఒక చౌ డైట్ (“చౌ”) అందించబడింది, మరియు రెండవ సమూహం ప్రతి వారం 5 రోజులకు చౌ యాడ్ లిబిటమ్‌ను అందించింది, తరువాత 2 రోజుల ప్రకటన లిబిటమ్ యాక్సెస్‌ను అత్యంత రుచికరమైనది , చాక్లెట్ రుచి, అధిక-సుక్రోజ్ ఆహారం (“రుచికరమైన”; చౌ / రుచికరమైన). రుచికరమైన ఆహారం పోషక సంపూర్ణమైన, చాక్లెట్-రుచిగల, అధిక-సుక్రోజ్ (50% కిలో కేలరీలు), AIN-76A- ఆధారిత ఆహారం, ఇది మాక్రోన్యూట్రియెంట్ నిష్పత్తిలో మరియు చౌ డైట్ తో శక్తి సాంద్రతతో పోల్చవచ్చు [టెస్ట్ డైట్; చాక్లెట్-రుచిగల ఫార్ములా 5TUL: 66.8% (kcal) కార్బోహైడ్రేట్, 12.7% కొవ్వు, 20.5% ప్రోటీన్, జీవక్రియ శక్తి 3.48 kcal / g; 45-mg ఖచ్చితమైన ఆహార గుళికలుగా దాని ప్రాధాన్యతను పెంచడానికి రూపొందించబడింది (22, 23)]. సంక్షిప్తత కోసం, ప్రతి వారం మొదటి 5 రోజులు (చౌ మాత్రమే) మరియు చివరి 2 రోజులు (ప్రయోగాత్మక సమూహం ప్రకారం చౌ లేదా రుచికరమైనవి) అన్ని ప్రయోగాలలో C మరియు P దశలుగా సూచిస్తారు. ఆహారాలు ఏకకాలంలో అందుబాటులో లేవు. చౌ డైట్ హర్లాన్ టెక్లాడ్ LM-485 డైట్ 7012 [65% (kcal) కార్బోహైడ్రేట్, 13% కొవ్వు, 21% ప్రోటీన్, జీవక్రియ శక్తి 341 cal / 100 g] లేదా 5TUM 4- నుండి 5-g % (kcal) కార్బోహైడ్రేట్, 65.5% కొవ్వు, 10.4% ప్రోటీన్, జీవక్రియ శక్తి 24.1 cal / 330 g; TestDiet]. మునుపటి అధ్యయనాల మాదిరిగానే, హర్లాన్ టెక్లాడ్ LM-100 చౌను దాణా మరియు ఎలివేటెడ్ ప్లస్-మేజ్ ప్రయోగాలలో ఉపయోగించారు (11), టెస్ట్ డైట్ 5TUM చౌ (10) ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి, CRF mRNA, CRF పెప్టైడ్ కంటెంట్, కార్టికోస్టెరాన్ RIA మరియు ఎలక్ట్రోఫిజియోలాజికల్ ప్రయోగాలలో ఉపయోగించబడింది.
గతంలో ప్రచురించినట్లు (10), సాపేక్ష ఆహార ప్రాధాన్యతలు, రెండవ ఆహారానికి సంబంధించి మొదటి ఆహారం యొక్క రోజువారీ తీసుకోవడం (కిలో కేలరీలు) గా లెక్కించబడ్డాయి, ఇవి క్రిందివి: 5TUL చాక్లెట్ డైట్ (చక్కెర పాలటబుల్ డైట్) వర్సెస్ హర్లాన్ LM-485 చౌ (M ± SEM ప్రాధాన్యత 90.7 ± 3.6%) మరియు 5TUL చాక్లెట్ డైట్ (చక్కెర పాలటబుల్ డైట్) వర్సెస్ 5TUM చౌ డైట్ (M ± SEM ప్రాధాన్యత 91.2 ± 3.7%).
ఎలివేటెడ్ ప్లస్-మేజ్.
కాటోన్ మరియు ఇతరులలో వివరించిన విధంగా ఎలివేటెడ్ ప్లస్-మేజ్ పరీక్ష జరిగింది. (24). చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలు కనీసం 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి మరియు తరువాత వాహనం లేదా 20 mg / kg R121919 (−1 h, sc) తో ముందే చికిత్స చేయబడ్డాయి మరియు రుచికరమైన ఆహారం నుండి చౌ (P) కు మారిన తరువాత 5-9 h ను పరీక్షించారు. Phase C దశ). చౌ / చౌ నియంత్రణ ఎలుకలను మధ్య-విషయాల రూపకల్పనలో ఏకకాలంలో పరీక్షించారు (n = 47). పరీక్ష సమయం వరకు చౌ డైట్ యాడ్ లిబిటమ్ అందుబాటులో ఉంది. మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
ఆహారం కోసం ఉపబల ప్రోగ్రెసివ్-రేషియో షెడ్యూల్.
కాటన్ మరియు ఇతరులలో వివరించిన విధంగా ఆహారం కోసం ఉపబల యొక్క ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి షెడ్యూల్ జరిగింది. (10). జంతువులు ప్రయోగం అంతటా తమ ఇంటి బోనుల్లో ప్రకటన లిబిటమ్ A / I చౌ (5 గ్రా ఎక్స్‌ట్రూడెడ్ గుళికలు) ను అందుకున్నాయి. ఆహార ఉపబలకాలు 45-mg చౌ-ప్రెసిషన్ గుళికలు, వెలికితీసిన హోమ్ కేజ్ చౌ డైట్‌తో సమానంగా ఉంటాయి. 14 నిమిషానికి సబ్జెక్టులు నిష్పత్తిని పూర్తి చేయనప్పుడు సెషన్‌లు ముగిశాయి, చివరిగా పూర్తయిన నిష్పత్తి బ్రేక్‌పాయింట్‌గా నిర్వచించబడింది. చౌ / పాలటబుల్ ఎలుకలు కనీసం 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి మరియు తరువాత రుచికరమైన ఆహారం నుండి చౌ (P → C దశ) కు మారిన సమయంలో R121919 (−1 h, sc) తో ముందే చికిత్స చేయబడ్డాయి. చౌ / చౌ నియంత్రణ ఎలుకలను మధ్య-విషయాల రూపకల్పనలో ఏకకాలంలో పరీక్షించారు (n = 17). R121919 (0, 20 mg / kg శరీర బరువు, sc) యొక్క మోతాదులను రెండు-ఆహార చక్రాలలో అంతటా, సమతుల్య రూపకల్పనలో ఇవ్వబడింది. మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
క్వాంటిటేటివ్ రియల్ టైమ్ పిసిఆర్.
ఎలుకలు (n = 20) రెండు వారాల పాటు ఆహారం-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి, మత్తుమందు మరియు శిరచ్ఛేదం చేయబడ్డాయి (ప్రతి వారపు చక్రంలో 7 మరియు 5 రోజులు). మెదడు మాతృకలో మెదడులను త్వరగా తొలగించి, కరోనల్‌గా ముక్కలు చేశారు, మరియు అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకం, న్యూక్లియస్ అక్యుంబెన్స్, ఇన్సులర్ కార్టెక్స్ మరియు ప్రిఫ్రంటల్ కార్టెక్స్ గుద్దులు మంచు-శీతల దశలో సేకరించబడ్డాయి. జంతువుల కణజాలాల నుండి RNA వెలికితీత కోసం ప్రామాణిక ప్రోటోకాల్ ఉపయోగించి ప్రతి మెదడు పంచ్ నుండి మొత్తం RNA తయారు చేయబడింది. మొత్తం RNA (7 μg) తయారీదారు సూచనల మేరకు ఒలిగో (dT) 1 సమక్షంలో రివర్స్ ట్రాన్స్క్రిప్ట్ చేయబడింది. పరిమాణాత్మక RT-PCR ప్రతిచర్యలు 20 μM ప్రైమర్‌లు మరియు 20 mM MgCl ఉపయోగించి 0.5-μL వాల్యూమ్‌లో జరిగాయి.2. ఫలితాలను రెండవ-ఉత్పన్న పద్ధతుల ద్వారా విశ్లేషించారు మరియు ఏకపక్ష యూనిట్లలో వ్యక్తీకరించారు, రిఫరెన్స్ జన్యువు, సైపా యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిలకు సాధారణీకరించబడింది. ఇచ్చిన క్రమం కోసం అన్ని RT-PCR ప్రతిచర్యలు ఒకే పరుగులో నిర్వహించబడ్డాయి. మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
పెప్టైడ్ యాసిడ్ సంగ్రహణ మరియు CRF RIA.
ఎలుకలు (n = 25) కనీసం 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి, రెండు ఆహార పరిస్థితులలో (ప్రతి వారపు చక్రం యొక్క రోజులు 5 మరియు 7) మత్తుమందు మరియు శిరచ్ఛేదం చేయబడ్డాయి. మెదడు మాతృకలో మెదడులను త్వరగా తొలగించి, కరోనల్‌గా ముక్కలు చేస్తారు, మరియు అమిగ్డాలా గుద్దులు యొక్క కేంద్ర కేంద్రకం మంచు-శీతల దశలో సేకరించబడింది. పెప్టైడ్ ఆమ్లం వెలికితీత ఇప్పటికే ఏర్పాటు చేసిన విధానాన్ని అనుసరించింది (25). కణజాలం CRF- లాంటి రోగనిరోధక శక్తిని జొరిల్లా మరియు ఇతరుల నుండి స్వీకరించబడిన సున్నితమైన మరియు నిర్దిష్ట ఘన-దశ RIA తో లెక్కించారు. (26). మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
కార్టికోస్టెరాన్ RIA.
ఎలుకలు (n = 12) కనీసం 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడ్డాయి, మరియు రెండు ఆహార పరిస్థితులలో (ప్రతి వారపు చక్రంలో 5 మరియు 7 రోజులు) తోక రక్తం నమూనా చేయబడింది. తయారీదారుల సూచనల ప్రకారం (MP బయోమెడికల్స్, ఇంక్.) వాణిజ్యపరంగా లభించే RIA కిట్‌తో కార్టికోస్టెరాన్ లాంటి రోగనిరోధక శక్తి యొక్క ప్లాస్మా స్థాయిలు నిర్ణయించబడ్డాయి (MP బయోమెడికల్స్, ఇంక్.) (26). మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
ఎలక్ట్రోఫిజియోలాజికల్ స్టడీస్
స్లైస్ తయారీ.
అమిగ్డాలా ముక్కల కేంద్ర కేంద్రకం గతంలో వివరించిన విధంగా తయారు చేయబడింది (27, 28) ఎలుకల నుండి (n = 7 / సమూహం) కనీసం 7 వారాల పాటు డైట్-సైక్లింగ్ చేయబడి, మత్తుమందు మరియు 2-3 h ను రుచికరమైన ఆహారం నుండి ఉపసంహరించుకున్న తరువాత. మెదడులను వేగంగా తొలగించి, మంచు-చల్లటి కృత్రిమ సెరెబ్రోస్పానియల్ ఫ్లూయిడ్ (ఎసిఎస్ఎఫ్) లో 95% O తో వాయువు ఉంచారు2 మరియు 5% CO2. ముక్కలు కత్తిరించబడ్డాయి, సుమారు 30 నిమిషం ఇంటర్ఫేస్ కాన్ఫిగరేషన్‌లో పొదిగేవి, మరియు పూర్తిగా మునిగిపోయాయి మరియు వెచ్చని, వాయువు గల ACSF తో నిరంతరం సూపర్ఫ్యూజ్ చేయబడతాయి. సూపర్‌ఫ్యూసేట్‌లో తెలిసిన సాంద్రతలను పొందటానికి స్టాక్ సొల్యూషన్స్ నుండి డ్రగ్స్‌ను ఎసిఎస్‌ఎఫ్‌కు చేర్చారు. ఉపయోగించిన 2-4 mL / min సూపర్ఫ్యూజన్ రేట్ల వద్ద, concent షధ సాంద్రతలు 90 నిమిషంలో రిజర్వాయర్ గా ration త యొక్క 2% కి చేరుతాయి.
ఎలెక్ట్రో.
అమిగ్డాలా న్యూరాన్ల యొక్క కేంద్ర కేంద్రకాన్ని నిరంతర వోల్టేజ్- లేదా ప్రస్తుత-బిగింపు మోడ్ ఉపయోగించి పదునైన మైక్రోపిపెట్లతో రికార్డ్ చేసాము. మేము చాలా న్యూరాన్‌లను వాటి విశ్రాంతి పొర సంభావ్యత దగ్గర ఉంచాము. ప్రియాంప్లిఫైయర్‌తో డేటా పొందబడింది మరియు పిక్లాంప్ సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించి తరువాత విశ్లేషణ కోసం నిల్వ చేయబడింది. C షధశాస్త్రపరంగా వేరుచేయబడిన GABAA రిసెప్టర్-మెడియేటెడ్ ఇన్హిబిటరీ పోస్ట్‌నాప్టిక్ పొటెన్షియల్స్ (GABAA-IPSP లు) గ్లూటామేట్ రిసెప్టర్ బ్లాకర్స్ CNQX మరియు APV మరియు GABA లను సూపర్ఫ్యూజ్ చేస్తున్నప్పుడు బైపోలార్ స్టిమ్యులేటింగ్ ఎలక్ట్రోడ్ ద్వారా అమిగ్డాలా యొక్క కేంద్ర కేంద్రకంలో స్థానికంగా ప్రేరేపించడం ద్వారా ప్రేరేపించబడ్డాయి.B రిసెప్టర్ బ్లాకర్ CGP 55845A. ప్రతి సెల్ కోసం ప్రతిస్పందన పారామితులను నిర్ణయించడానికి, మేము ఇన్పుట్-అవుట్పుట్ ప్రోటోకాల్ను ప్రదర్శించాము. గరిష్ట వ్యాప్తిని వెలికితీసేందుకు అవసరమైన వోల్టేజ్ వరకు ఐపిఎస్పిని వెలికితీసేందుకు అవసరమైన థ్రెషోల్డ్ కరెంట్ నుండి ప్రారంభమయ్యే ప్రవాహాల శ్రేణి వర్తించబడింది. మేము సమాన దశల యొక్క మూడు ఉద్దీపన తీవ్రతలను (ప్రవేశ, సగం-గరిష్ట మరియు గరిష్ట) 1-3 as గా సాధారణీకరించాము. వోల్టేజ్-కరెంట్ (VI) వక్రతలను ఉత్పత్తి చేయడానికి ప్రస్తుత దశలను (200-pA ఇంక్రిమెంట్లు, 750-ms వ్యవధి) హైపర్పోలరైజింగ్ మరియు డిపోలరైజింగ్ కూడా వర్తింపజేయబడింది. క్లాంప్‌ఫిట్ సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించడం ద్వారా మేము ప్రేరేపించిన IPSP యాంప్లిట్యూడ్‌లు మరియు VI ప్రతిస్పందనలను లెక్కించాము. సెలెక్టివ్ సిఆర్‌ఎఫ్‌తో సూపర్ఫ్యూజన్ ముందు అన్ని చర్యలు తీసుకున్నారు1 రిసెప్టర్ విరోధి R121919 (1 μM), దాని సూపర్ఫ్యూజన్ (20 నిమి) సమయంలో, మరియు తరువాత వాష్అవుట్ (30 నిమి). మరిన్ని వివరాల కోసం, చూడండి SI టెక్స్ట్.
గణాంకాలు.
సమూహ పోలికలు విద్యార్థులని ఉపయోగించాయి t-టెట్స్ (రెండు-సమూహ పోలికలు) లేదా వైవిధ్యం యొక్క విశ్లేషణ (ANOVA) (కనీసం మూడు-సమూహ పోలికలు), రెండోది సాధారణ ప్రధాన ప్రభావ విశ్లేషణ లేదా ముఖ్యమైన ఓమ్నిబస్ ప్రభావాల తర్వాత న్యూమాన్-కీల్స్ పోలికల ద్వారా వివరించబడుతుంది (P <0.05). దాణా ప్రయోగం నుండి డేటాను డైట్ షెడ్యూల్‌తో మూడు-మార్గం మిశ్రమ ANOVA లు మధ్య-విషయాల కారకంగా మరియు మోతాదు మరియు డైట్ దశను విషయ-కారకాలుగా విశ్లేషించారు. ఎలివేటెడ్ ప్లస్-మేజ్ ప్రయోగం నుండి డేటాను డైట్ షెడ్యూల్ మరియు మోతాదుతో రెండు-మార్గం ANOVA లు విశ్లేషించాయి. ఉపబల ప్రయోగం యొక్క ప్రగతిశీల-నిష్పత్తి షెడ్యూల్ కోసం, బ్రేక్ పాయింట్ మరియు మొత్తం ప్రతిస్పందనలను డైట్ షెడ్యూల్‌తో రెండు-మార్గం మిశ్రమ ANOVA లు మధ్య-విషయాల కారకంగా మరియు మోతాదులో-కారకాల కారకంగా విశ్లేషించబడ్డాయి. మొదటి 5 నిమిషంలో ప్రతిస్పందించే సమయ-కోర్సును మూడు-మార్గం మిశ్రమ ANOVA లు డైట్ షెడ్యూల్‌తో మధ్య-విషయాల కారకంగా మరియు మోతాదు మరియు సమయాన్ని విషయ-కారకాలుగా విశ్లేషించారు. ఎలెక్ట్రోఫిజియోలాజికల్ అధ్యయనాల నుండి డేటాను ANOVA లేదా విషయాల మధ్య ANOVA తో పదేపదే చర్యలతో విశ్లేషించారు. కార్టికోస్టెరాన్ RIA నుండి డేటా, ఇక్కడ రెండు-మార్గం మిశ్రమ ANOVA ద్వారా డైట్ షెడ్యూల్‌తో మధ్య-విషయ కారకంగా మరియు డైట్ దశను విషయ-కారకంగా విశ్లేషించారు. ఉపయోగించిన గణాంక ప్యాకేజీలు ఇన్‌స్టాట్ 3.0, ప్రిజం 4.0 (గ్రాప్‌ప్యాడ్), సిస్టాట్ 11.0, మరియు ఎస్పీఎస్ఎస్ 11.5 (ఎస్పీఎస్ఎస్).
రసీదులు.
సంపాదకీయ సహాయం కోసం మైక్ ఆరెండ్స్, పరిపాలనా సహాయం కోసం మేరీ గిచుహి మరియు సాంకేతిక సహాయం చేసినందుకు బాబ్ లింట్జ్, జీనెట్ హెల్ఫెర్స్, స్టెఫానీ డెలా క్రజ్ మరియు మోలీ బ్రెన్నాన్ లకు ధన్యవాదాలు. ఈ పనికి నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆఫ్ డయాబెటిస్ అండ్ డైజెస్టివ్ అండ్ కిడ్నీ డిసీజెస్ గ్రాంట్స్ DK70118, DK26741 మరియు P30DK56336 మద్దతు ఇచ్చాయి; మాదకద్రవ్యాల దుర్వినియోగంపై నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ గ్రాంట్ DA023680; నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆన్ ఆల్కహాల్ దుర్వినియోగం మరియు మద్య వ్యసనం AA016731 మరియు AA015566; నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆఫ్ న్యూరోలాజికల్ డిజార్డర్స్ అండ్ స్ట్రోక్ గ్రాంట్ IT32NS061847-01A2; నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆన్ ఏజింగ్ గ్రాంట్ AG028040; నేషనల్ హార్ట్, లంగ్ అండ్ బ్లడ్ ఇన్స్టిట్యూట్ గ్రాంట్ HL088083; ఎల్లిసన్ మెడికల్ ఫౌండేషన్; మరియు పియర్సన్ సెంటర్ ఫర్ ఆల్కహాలిజం అండ్ అడిక్షన్ రీసెర్చ్. ఈ పనిలో కొంత భాగాన్ని మాదకద్రవ్యాల దుర్వినియోగంపై నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ మరియు నేషనల్ ఇన్స్టిట్యూట్ ఆన్ ఆల్కహాల్ దుర్వినియోగం మరియు మద్య వ్యసనం యొక్క ఇంట్రామ్యూరల్ రీసెర్చ్ ప్రోగ్రామ్స్ మద్దతు ఇచ్చాయి. ఇది స్క్రిప్స్ రీసెర్చ్ ఇన్స్టిట్యూట్ నుండి వచ్చిన మాన్యుస్క్రిప్ట్ నంబర్ 19807.
ఫుట్నోట్స్
రచయితలు ఆసక్తి కలయికను ప్రకటించరు.
ఈ వ్యాసం PNAS ప్రత్యక్ష సమర్పణ.
ఈ వ్యాసంలో ఆన్‌లైన్‌లో సహాయక సమాచారం ఉంది www.pnas.org/cgi/content/full/0908789106/DCSupplemental.
ప్రస్తావనలు
;