Regulasi kestabilan DeltaFosB dening fosforilasi (2006)

J Neurosci. 2006 May 10;26(19):5131-42.

Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ.

sumber

Departemen Psikiatri, Pusat Saraf Neuroscience, Pusat Kesehatan Southwestern Universitas Texas, Dallas, Texas 75390-9070, Amerika Serikat.

Abstract

Faktor transcription saka DeltaFosB (uga disebut FosB2 utawa FosB [short form]) yaiku mediator penting saka plastisitas jangka panjang sing ditimbulake ing otak kanthi paparan kronis kanggo sawetara jinis rangsangan psikoaktif, kalebu obat-obatan penyalahgunaan, stres, lan kejang elektroconvulsif . Fitur sing béda saka DeltaFosB yaiku, sing diprakirake, tetep ing otak kanggo wektu sing relatif suwe amarga ora ana rangsangan luwih lanjut. Mekanisme sing ndadeake stabilitas sing nyenengi, Nanging, durung dingerteni. Ing kene, kita nemtokake yen DeltaFosB minangka faktor transkripsi relatif stabil, kanthi umur setengah saka kira-kira 10 h ing kultur sel. Salajengipun, kita nedahaken bilih DeltaFosB minangka phosphoprotein ing otak lan phosphorylation saking residu serine ingkang dipun konservasi (Ser27) ing DeltaFosB nglindhungi saking degradasi proteasomal. Kita nyedhiyani pirang-pirang garis bukti sing ngandhakake yen fosforilasi iki dimediasi dening casein kinase 2. Temuan iki minangka bukti pisanan sing nyebabake phosphorylated lan nduduhake fosforilasi kasebut nyedhiyakake stabilitas, yaiku ing inti kemampuan kanggo mediate adaptasi sing langgeng ing otak.

Pambuka

Faktor transkripsi ΔFosB, uga ditetepake FosB2 utawa FosB [cendhak], minangka varian sambetan C terminus gen saka gen wiwitan fosb (Dobrazanski et al., 1991; Nakabeppu lan Nathans, 1991; Yen et al., 1991). Kaya FosB full-length, ΔFosB duweni domain dhasar sing mbobot DNA lan ritsleting leucine kang dumadi karo protein Jun kanggo mbentuk kompleks faktor transkripsi protein-1 (AP-1), sing ngatur ekspresi gen (Morgan lan Curran, 1995; Rylski lan Kaczmarek, 2004). Senadyan ora ana bagéan saka domain transactivation sing ditemokake ing terminal C saka FosB, ΔFosB minangka fungsi minangka aktivator transkriptor lan repressor ing sel-sel kultivar lan ing otakDobrazanski et al., 1991; Nakabeppu lan Nathans, 1991; Chen et al., 1997; McClung lan Nestler, 2003; Kumar et al., 2005).

ΔFosB didhèrèkaké kanggo tingkat dhuwur ing cara sing spesifik ing wilayah otak sawisé kronis, nanging ora akut, amarga akèh rangsangan psikoaktif, kalebu stres, lesi tartamtu, obat antipsikotik lan antidepresan, obat-obatan penyalahgunaan, lan ganjaran alam (Hope et al., 1994b; Hiroi lan Graybiel, 1996; Moratalla et al., 1996; Bing et al., 1997; Mandelzys et al., 1997; Kelz et al., 1999; Werme et al., 2002; Andersson et al., 2003; Colby et al., 2003; Peakman et al., 2003; Perrotti et al., 2004; Zachariou et al., 2006). Induksi saka ΔFosB wis gegandhengan langsung karo efek fungsional saka sawetara stimulus kasebut ing otak. Kekiyatan ΔFosB sanajan ora ana rangsangan tambahan mbedakake saka kabeh faktor transkripsi kulawarga Fos liyane, sing didhudhuk kanthi cepet kanggo nanggepi rangsangan akut, pembusukan bali menyang tingkat basal sajrone sawetara jam, lan sacara umum nuduhake desensitisasi sawise stimulasi kronisHope et al., 1992; Daunais et al., 1993; Persico et al., 1993; Hiroi lan Graybiel, 1996; Perrotti et al., 2004). Iki ndadekake ΔFosB minangka calon sing menarik kanggo ngatasi sawetara owah-owahan sing langgeng ing ekspresi gen sing ndandani adaptasi neuronal sing stabil sing disebabake dening rangsangan kronis.

Amarga ing ngarsane ΔFosB sing ana maneh amarga ora ana induksi luwih mRNA (Chen et al., 1995), kita mikirake yen, ora kaya FosB dawa lan kabeh protein kulawarga Fos liyane, sing ora stabil sacara permanen, ΔFosB bisa dadi faktor transkripsi sing stabil banget (Hope et al., 1994b; Chen et al., 1997; Nestler et al., 2001; McClung et al., 2004). Kajaba iku, analisis imunoblotting jaringan otak akut-meksa sing kronis nganjurake yen ΔFosB ngalami owah-owahan Mr (molekul massa) saka ~ 33 kDa ing kondisi akut nganti ~ 35-37 kDa nalika perawatan kronis (Hope et al., 1994a; Chen et al., 1995). Amarga ora ana bukti-bukti anané mRNA tambahan sing bisa nyandi kanggo macem-macem isoforms, kita luwih spekulasi yèn ΔFosB wis dimodifikasi sacara modis lan sing mbokmenawa nyumbang kanggo stabilitas sing ora normal. Saiki, ora ana analisis biokimia saka turnover utawa modifikasi posttranslational saka ΔFosB sing kacarita. Tujuan saka panliten iki yaiku kanggo nemtokake yen ΔFosB iku sawijining fosfroplin lan manawa fosforilasi nduweni peran minangka stabilitas.

Sadurunge bageanSabanjure Seksi

Bahan lan Metode

Jalur sel mamalia lan DNA mbangun.

Sel-sel PC12 (Clontech, Mountainview, CA) dikembangake ing DMEM glukosa glukosa (L-Gln) lan ditambah karo serum bovine fetal 5 (FBS), serum kuda 10 (saka Invitrogen, Carlsbad, CA) , 100 U / ml penisilin, lan 100 μg / ml streptomycin (loro saka Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Sèl HeLa (Manipulasi Budaya Tipe Amerika, Manassas, VA) diduweni ing DMEM glukosa dhuwur sing ngandung L-Gln lan ditambah karo 10% FBS, penisilin, lan streptomycin. Loro baris sel dipelihara ing 37 ° C ing 5% CO lembab2 atmosfer.

Kanggo transètsi transètsi karo DNA, sel PC12 utawa HeLa diasilake ing piring-piring enem lan dilapisi kolagen I kanggo sel PC12) supaya bisa nglumpukake 90-100% ing sabanjure lan banjur ditransfeksi kanthi nggunakake Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Ing sawetara eksperimen (waca Panganan. 1⇓⇓⇓⇓⇓-7), ΔFosB kasebut kanthi tegese ditulis ing sel PC12 liwat infeksi karo virus herpes simplex (HSV).

CDNA ΔFosB lan FosB dipikolehi saka pTetop-constructs (Chen et al., 1997), lan subcloned dadi vektor pcDNA3.1 (Invitrogen). Konstruktor pcDNA3.1-ΔFosB / FosB digunakake kanggo ekspresi ing sel mamalia lan minangka cithakan kanggo mutagenesis sing diarahake kanthi situs. Rekombinan HSV-ΔFosB wis disiapake kaya diterangake sadurunge (Neve et al., 1997), lan persiapan duwé titer saka ~ 1 × 108 pfu / ml.

Eksperimen pulsa-mengejar.

Kira-kira 24 h sawise infèksi / transfeksi, sel (PC12 utawa HeLa) ing piring enem uga dicampur loro nganti kaping telu kanthi ml 2 saka PBS lan diinkubasi ing 37 ° C kanggo ~ 1 h ing 2 ml saka CYS / Met-free DMEM (Invitrogen) ditambah karo 5% diolah FBS (Hyclone, Logan, UT) kanggo ngurangi pools intrasellular Met lan Cys. Ing pungkasan periode "kelaparan" iki, obat-obatan (yen sel-sel kudu diobati) ditambahake, lan sel-sel kasebut dicithak (pulsa) karo 12-25 μCi 35S Protein Labeling Mix (PerkinElmer, Wellesley, MA) kanggo ~ 1 h ing 37 ° C kanggo menehi label kabeh protein sing disintesis. Radiolabel kasebut banjur dibusak kanthi ngumbah sel loro nganti kaping telu kanthi ml 2 saka PBS, lan 35Protein sing dilabel S sing diterusake (chase) kanthi ngganti media kanthi medium "kadhemen" (non radio) sing ditambah karo 5% FBS lan panen sel ing macem-macem titik wektu. Pangobatan sel wis dikelola ing sajrone mburu. Kabeh tokoh eksperimen iki nuduhake jumlah dhisikan sing padha ing macem-macem protein kanggo ngoptimalake bandingake tingkat oyot.

Penyakit lan penyakit kejang elektroconvulsive.

Adult tikus golongan Sprague Dawley (200-300 g; Charles River Laboratories, Kingston, RI) diobati saben dina kanthi elektroconvulsive seizures (ECS) kanggo 7-9 d. ECS ditindakake minangka sadurunge diterangake (Hope et al., 1994a) nggunakake Ugo Basile (Comerio VA, Italia) Unit ECS kanthi setelan ing ngisor iki: frekuensi, pulsa 100 / s; pulsa karo, 0.5 ms; wektu kejut, 1.0 s; lan saiki, 75 mA. Sham kontrol kewan sing dianggep paralel kanthi nggunakake elektroda kuping tanpa arus listrik.

32 Lab metabolisme.

Kanggo ngetokake irisan otak, tikus dipenggal, otak disebar kanthi cepet, lan irisan cortikal frontal 300 μm disusun nganggo mikroslicer DSK (Ted Pella, Redding, CA). Irisan kasebut diinkubasi ing jero tabung plastik ing ml 2 saka CSF buas fosfat (ACSF) lan dikelola ing 30 ° C ing ngisor2/ CO2 dicampur (Hemmings et al., 1989). Irisan (loro irisan saben tabung) dicap kanthi 1.3 mCi kanggo 8-10 h ing ngarsane utawa ora ana asam oadaat (100 ng / ml). Ing pungkasan inkubasi iki, irisan-irisan wis dicuci ing sethithik kaping telu kanthi ACSF dingin lan banjur homogenisasi dening sonication ing 250 μl buffer radioimmunoprecipitation (RIPA) buffer [PBS, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1% (v / v ) IgEPal, 0.5% (w / v) natrium deoxycholate, 0.1% (w / v) SDS, 1 mm EDTA] ditambah sadurunge SDS nganti 0.6%, cocktail inhibitor protease kanggo sel mamalia (digunakake ing 5 μl / Sigma-Aldrich), kokain fosfatase I lan II (digunakake ing 1: 100; Sigma-Aldrich), 1 mm PMSF, lan 2% gliserol. Homogenates banjur direbus kanggo min 15 lan dibusak dening centrifugation ing 15,000 × g kanggo 15 min. Konsentrin protein ing supernatant asil ditaksir nggunakake protein protein BCA (Pierce, Holmdel, NJ).

Kanggo 32P labeling sel-sel kultivar, ~ 24 h sawise infeksi / transfeksi, sel dicampur loro nganti telu kanthi medium bebas fosfat lan diinkubasi ing medium iki kanggo ~ 1 h. Sawise periode kelaparan, 0.2-0.3 mCi 32PH3PO4 (PerkinElmer) ditambah ing saben sumur, lan sel dicithak kanggo 4-12 h gumantung jenis eksperimen (waca Fig 1-7 kanggo spesifikasi). Sel banjur dicampur telu karo PBS lan dilebur ing es kanggo 15 min karo 50 μl saka buffer RIPA sing ditambah. Lysates diklumpukake dening scraping lan dilewati 10 kaping liwat jarum 25 ga kanggo nyukur DNA, nggodhok kanggo 10 min, lan centrifuged ing 15,000 rpm kanggo 15-30 min ing 4 ° C. Lysates sing dibuwang (supernatants) ditransfer menyang tabung anyar lan protein protein BCA (Pierce) dilaksanakake. Kabeh tokoh eksperimen iki nuduhake jumlah protein total WT umum lan S27A ΔFosB kanggo ngoptimalake bandinge tingkat fosforilasi relatif.

Pengobatan budaya lan sel.

Asam okada (OA; Sigma-Aldrich) dibubaraké ing etanol lan dipigunakaké ing konsentrasi akhir 100 ng / ml. 5,6-Dichloro-1-β-d-ribofuranosyl-benzimidazole (DRB; Biomol, Plymouth Meeting, PA) dibubaraké ing dimethyl sulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich) lan digunakake ing kultur sel ing konsentrasi akhir 50 μm. Spermine (Sigma-Aldrich) dibubrisake ing banyu lan digunakake ing konsentrasi akhir 200 μm. Calphostin-C (Biomol) dibubaraké ing DMSO lan dipigunakaké ing 0.2 μm, déné phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA; Promega, Madison, WI) dibubaraké ing DMSO lan dipigunakaké ing 0.1 μm. myristoylated-autocamtide-2-related peptide inhibitory (m-AIP; Biomol) dibubaraké ing banyu lan dipigunakaké ing konsentrasi akhir 1 lan 10 μm. Spektrum kinase inhibitor protein kinase H-7 lan H-8 (Biomol) dibubrisake ing banyu lan digunakake ing konsentrasi akhir 150 lan 200 μm, saben. MG132 (Calbiochem, San Diego, CA) lan epoxomicin (Peptida International, Louisville, KY) padha dibuwang ing DMSO lan digunakake ing konsentrasi akhir 12.5 lan 7.5 μm. Ing kabeh eksperimen, DMSO (kendaraan) ditambahake ing sel sing perlu kanggo njaga jumlah pancet DMSO sajrone perawatan. Kanggo 32Eksperimen laboratorium P, obat-obatan kasebut ditambahake langsung sadurunge label lan ditahan kanggo sisa periode labeling. Kanggo eksperimen pulse-chase, obat-obatan ditambahake nalika "kelaparan" Cys / Met, katahan liwat periode labeling, banjur ditambahake maneh ing medium mburu. Inhibitor proteasome didadikake saben 3-4 h sakwise ngasilake omzet sing cepet saka peptida kasebut.

ΔFosB immunoprecipitation, immunoblotting, lan autoradiography.

Kanggo immunoprecipitations, lysates diencerke 1: 5 karo RIPA kosong kanggo nggawa konsentrasi SDS mudhun kanggo 0.1% sadurunge dilakoni karo immunoprecipitation (IP). Kanggo matesi mbatalake ora spesifik, lysates pisanan dibusak dening immunoprecipitating karo nonGun IgG lan protein G-Sepharose (Sigma-Aldrich) paling sethithik 4 h. ΔFosB banjur disusupi saka lysates sing dienggo nggunakake antibodi poliklonal kambing sing ngenali epitope internal sing ana ing FosB lan ΔFosB (SC-48G; Santa Cruz Bioteknologi, Santa Cruz, CA) ing 0.5-1 IgG Ig per 10 μg protein lysate (50-300 μg protein total) ing volume total ml 0.5. IPs alon-alon dicampur ing 4 ° C ing rotor paling sethithik 8 h banjur 15 μl protein G-Sepharose ditambah lan IPs dicampur luwih sethithik liyane 4 h. IPs dibuwangi dening pemintalan ing 3000 × g kanggo 3-5 min ing 4 ° C, dikumbah kaping telu kanthi ml 0.5 saka RIPA polong seger lan kaping loro kanthi PBS sing ngemot 0.1% Tween 20. IPs banjur diresepake ing ml 0.5 saka PBS kadhemen, ditransfer, dibungkus ing tabung anyar, lan protein immunopencipitated banjur diilangi dening tambahan 15-25 μl 2 × ngurangi buffer sampel protein Laemmli. Protokol IP iki ngasilake udan spesifik lan efektif ing meh kabeh ΔFosB ing lysate. Protein-protèin immunoprecipitated padha tundhuk SDS-PAGE kanthi ngemot kabèh IP ing gel 12.5% Tris-HCl Criterion (Bio-Rad, Hercules, CA), banjur ditransfer menyang PVDF utawa nitrocellulose. Sawise ditransfer, membran diarani hawa lan 32P- lan 35Pita protein S-radio diamati dening autoradiography nggunakake film autoradiographic Kodak (Rochester, NY), uga kanthi phosphorimaging nggunakake Storm (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) PhosphorImager. Total (unphosphorylated lan phosphorylated) ΔFosB ing lysates sel utawa homogenates otak dideteksi dening immunoblotting saka protein imunoprecipitated (nggunakake membran padha digunakake kanggo ndeteksi 32Protein P-labeled), utawa jumlah protein lysate / homogenate ing SDS-PAGE lan ditransfer menyang PVDF utawa nitroselulosa. Membran pisanan diblok dening incubating karo 1% (w / v) susu tanpa lemak (Bio-Rad) ing PBS ditambah 0.1% (v / v) Tween 20 (Sigma) kanggo 1 h ing 25 ° C. Mèmbran kasebut banjur immunoblotted ing 4 ° C kanthi antibodi anti-FosB antiphase antiphase dhewe sing nyebabake asam amino 1-16 saka FosB / ΔFosB (digunakake ing 1: 10,000). Sawisé inkubasi utama, membran dikumbah kaping papat kanggo 5 min kanthi panyloker pemblokiran, banjur diinkubasi ing 25 ° C kanggo ~ 1 h kanthi anti-kelinci kambing IgG konjugasi kanggo peroksidase horseradish (digunakake ing 1: 5000 ing pemblokiran penyangga, saka vektor Laboratorium, Burlingame, CA). Membran banjur dicampur kaping telu kanggo 10 min kanthi pemblokiran buffer lan siji wektu kanggo 5 min karo PBS. Total pita protein ΔFosB dipirsani ing film MR Kodak kanthi nambah chemiluminescence (Pierce) lan / utawa kanthi deteksi fluoresensi nggunakake reagen ECL-Plus (Amersham Biosciences) lan Storm PhosphorImager.

Overexpression lan pemurnian ΔFosB rekombinan saka sel serangga.

ΔFosB didandani ing sel serangga Sf9 minangka terminal N-hexa-His-tagged protein (N-His (6) ΔFosB) nggunakake sistem ekspresi Bac-to-Bac Baculovirus (Invitrogen) lan ngurut instruksi pabrik kasebut. Saliyane, cDNA ΔFosB (residu 2-237) sing didagang dening label N-terminal afinitas MGHHHHHHAG didelok ing vektor pFASTBacTM1, sing digunakake kanggo ngasilake baculovirus rekombinan. Sf9 sel kasebut kena infèksi karo virus rekombinan, lan N-His (6) ΔFosB diresiki saka lysates sel dening sawetara langkah kromatografi kalebu kromatografi afinitas nggunakake kolom nikel (Qiagen, Valencia, CA), ijol anion nggunakake kolom mono-Q (Amersham Biosciences), lan ukuran khusus nggunakake kolom gel-filtrasi (Amersham Biosciences).

In vitro studi fosforilasi.

In vitro Reaksi fosforilasi kanggo wektu lan analisis stoikiometri dilakokaké ing volume 30 μl sing ngandung substrat 10 μm (ΔFosB N-His (6) utawa substrat kontrol positif), 250 μm ATP, lan 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, penyangga sing diwenehake dening pabrikan kinase, lan salah sawijining kinase: CK2 (20 ng / μl; Upstate, Charlottesville, VA), CaMKII (10 ng / μl; Upstate), PKC (1.6 ng / Calbiochem) utawa p70S6K (2.5 mU / μl; Upstate). Reaksi wektu wis dilakoni kanthi ngilangi aliquots 5 μl saka larutan reaksi ing titik-titik wektu sing ditetepake lan nambah volume 4 × kanggo ngurangi buffer sampel protein Laemmli. Parameter kinetik Michaelis-Menten kanggo reaksi CK2 ditemtokake miturut kondisi kondisi antaranasari empiris. Reaksi iki dilakokaké kanggo 15 min ing volume 10 μl sing ngandung 2 ng / μl enzyme, 250 μm ATP, 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, lan N-Him (6) ΔFosB konsentrasi saka 2.5-30 μm. Kabeh reaksi sing dilakoni ing 30 ° C ing banyu. Sawise SDS-PAGE lan pewarnaan gel karo Bio-Safe Coomassie (Bio-Rad), gel wis garing, lan 32Penggabungan P-fosfat diukur kanthi analisis phosphorimaging (lihat ngisor, Data kuantifikasi, perhitungan, lan statistik).

Asam fosfopeptida lan analisis asam phosphoamino.

Loro-lorone analisis kasebut ditindakake kaya sing dijelasake dening Ploegh lan Dunn (2000). Secara kontras, fragmen gel garing sing ana 32PΔ-labeled ΔFosB (salah siji saka in vitro reaksi utawa saka immunoprecipitates sel-sel berlabel metabolik), diisolasi, diresapi, dikumbah, lan kena kanggo pencernaan tryptic. Supernatant sing ngandung produk pencernaan tryptic yaiku lyophilized lan lyophilate dicampur kaping pirang-pirang lan resuspended ing 10 μl buffer electrophoresis, pH 1.9. Sampel (3 μl) katon ing plat kromatografi tipis selulosa (TLC) (Analtech, Newark, DE) lan dipisahake ing salah sawijining dimensi dening elektroforesis lan dimensi liyane kanthi mundhut TLC. Peta fosfopeptida sing diasilake diwiwiti kanthi autoradiography lan phosphorimaging. Kanggo analisis asam phosphoamino, 2 μl saka digests tryptic sing wis resuspended ing buffer electrophoresis lagi dibuwang dening hidrolisis HCl ing 105 ° C kanggo 25 min ing 3 m HCl ing N2 atmosfer. Reaksi iki mandheg dening pencairan kaping nem ing banyu, lan campuran kasebut diowahi. Ing lyophilate resuspended ing 5 μl buffer electrophoresis, pH 1.9, lan ditemokake ing plat TLC selulosa bebarengan karo phospho-Ser, -Thr, lan -Tyr standar. Elektroforesis dileksanakake luwih saka setengah saka plate TLC kanthi nggunakake buffer elektroforesis, pH 1.9, lan piring kasebut ditransfer menyang pH 3.5 buffer, lan elektroforesis dilakokaké rampung. Standar asam phosphoamino digambarake kanthi nyemprotake piring TLC kanthi solusi% ninhydrin 1 (v / v) ing aseton, lan 32Sampel asam amino p-labeled dipirsani dening autoradiography lan phosphorimaging.

siRNA-induced CK2α knock-down.

Kita nggunakake cara interferensi RNA kanggo selektif ngalahake tingkat CK2 (Di Maira et al., 2005). Sel-sel PC12 didelikake menyang kolagen I-dilapisi plate enem-well kanggo nggayuh ~70-80% patang dina sabanjure, nalika transiently ditransfeksi karo 20 nm (konsentrasi akhir) saka salah siRNA utawa siRNA sing ora ditujukan kanggo mRNA katalitik α subunit Tikus CK2, nggunakake 5 μl saka agen transfeksi SilentFectin (Bio-Rad) lan nderek instruksi pabrik. Kira-kira 24 h mengko, sel-sel ditransfèksi kanthi plasmid ΔFosB, kaya kasebut ing ndhuwur. Kira-kira 24 h mengko (~ 48 h sawise transfeksi siRNA), sel-sel 32P metabolic labeling utawa analisis pulsa-ngejar kaya sing kasebut ing ndhuwur. Dipuntedahaken papat siRNAs CK2α padha digunakake karo asil sing padha: 5'P-CAAACUAUAAUCGUACAUCUU3 ', 5'P-UCAAUCAU-GACAUUAUGCGUU3', 5'P-UAGUCAUAUAAAUCUUCCGUU3 ', 5'P-AAAUCCCUG ACAUCAUAUUUU3' (Dharmacon, Lafayette, CO). Minangka kontrol negatif, kita digunakake Silencer kontrol negatif #3 siRNA saka Ambion (Austin, TX). Jeblugan CK2 ngetokake mudhun kanthi imunoblotting nggunakake antibodi polikonal anti-CK2 (katalog # 06-873 saka Upstate) sewengi sajrone ngencerke 1: 1000. β-Tubulin digunakake minangka kontrol loading lan dideteksi karo antibodi monoklonal (katalog # 05-661 saka Upstate) sewengi sajrone pencairan 1: 20,000.

Situs-langsung mutagenesis.

Mutasi Ser27 kanggo Ala utawa Asp wis tuntas nggunakake kit Ganti mutagenesis Site-Directed Quick Change (Stratagene, La Jolla, CA) lan nderek instruksi pabrik. Kanggo ngenalake mutasi Ser27 ing mouse ΔFosB protein, pangguna mutagenesis kasebut digunakake. Ser27 kanggo Ala: (primer pérangan) 5'GCCGAAGGAGTCCACCGAAGCCAGGTACTGAGACTCGGCGGAGGG3 '. Ser27 kanggo Asp (primer nerusake) 5'CCCTCCGCCGAGTCTCAGTACCTGGATTCGGTGGACTCCTTCGGC3 '. Dasar mutated dicithak, lan codon Ser27 wis dicithak.

Bioinformatika.

Situs potensial fosforilasi lan kinase kanggo ΔFosB digolki kanthi ngirim urutan protein mouse menyang database khusus kalebu ProSitehttp://www.expasy.org/prosite/), PredictProtein (Rost et al., 2004), lan NetPhosK (Blom et al., 2004).

Perkiraan data, perhitungan, lan statistik.

Jumlah protein sing ana ing membran PVDF utawa nitroselulosa diukur kanthi nggunakake Storm PhosphorImager lan piranti lunak ImageQuant (Amersham Biosciences / Molecular Dynamics). Ing kultur sel lan studi fosforilasi irisan irisan, nilai-nilai sing dipikolehi kanggo 32Protein P-label banjur dibagi dening nilai-nilai sing ditemokake kanggo total ΔFosB, lan ditulis minangka rasio. Ing in vitro studi fosforilasi, jumlah 32ΔFosB per-label saka ΔFosB (stoikiometry) wis dikalkulasake sadurunge diterangake (Sahin et al., 2004). Kabeh pangukuran dijupuk ing sawetara linearitas piranti sing digunakake. Parameter kinetik dikalkulasikan kanthi model Michaelis-Menten, ing ngendi V = VMax[S] / ([S]+KM) lan VMax = k2[ETotal]. Setengah urip (t1/2) saka ΔFosB lan FosB kira-kira saka plot pulsa-chase (nggunakake regression nonlinear sing paling pas titik data) lan cocog karo wektu ing jumlah protein sing isih ana ing 50% saka asline. Ing kabeh tokoh, asil sing dituduhake minangka perwakilan saka paling ora loro nganti telung eksperimen. Ing kabeh grafik, data sing dituduhake rata-rata ± SEM (3 ≤ n ≤ 16). Pinunjul statistik beda wis ditaksir nggunakake pasangan sing ora duwe pasangan t test, didandani kanggo pirang-pirang banding, lan asterisk nunjukake p ≤ 0.05.

Sadurunge bageanSabanjure Seksi

results

ΔFosB iku faktor transkripsi sing stabil banget

Senadyan kita wis spekulasi sadurunge ΔFosB minangka faktor transkripsi relatif stabilNestler et al., 2001), analisis langsung profil penggantos protein durung nganti saiki dilakoni. Kanggo ngatasi masalah iki, kita nglakoni eksperimen pulsa-chase nggunakake sel PC12, sing wis digunakake sacara ekstensif minangka garis sel sing kaya neuron, ing ngendi ΔFosB ditindakake liwat infeksi kanthi virus herpes simplex rekombinan (HSV-ΔFosB). Protein sing disintesis saiki diarani metabolik 35S-Met / Cys, lan pola degradasi saka 35ΔFosB S-labeled35S-ΔFosB) diawasi dening immunoprecipitating saka liset sel sing ditemokake ing macem-macem titik wektu sawise ngilangi asam amino sing diasilake radiolabel. Analisis saka immunoprecipitates dening SDS-PAGE lan autoradiography ngandhakake yen setengah saka ΔFosB ing sel PC12 yaiku ~ 10 h (Anjir. 1). Temuan kasebut nuduhake yen setengah saka ΔFosB luwih dhuwur tinimbang faktor transkripsi sing paling bisa ditindakake (pirembagan Diskusi), kalebu FosB lengkap, sing setengah urip ing kultur sel wis dilapurake dadi ~ 90 min (Dobrazanski et al., 1991; Carle et al. 2004). Kajaba iku, perlu diwenehi tandha yen degradasi ΔFosB ora cocog karo kurva decone eksponensial tingkat siji, nanging luwih apik tinimbang biphasic, mulai kanthi tingkat degradasi sing luwih alon. Iki nuduhaké anané luwih saka siji spesies ΔFosB lan / utawa luwih saka siji jalur degradasi.

Tokoh 1.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 1.

ΔFosB iku faktor transkripsi sing stabil banget. Umur setengah ΔFosB yaiku ~ 10 h ing kultur sel. ΔFosB dicakake ing sel PC12 kanthi infèksi karo HSV-ΔFosB utawa transfeksi transient karo plasmid sing ΔFosB, lan sel-sel kasebut bakal ditindakake eksperimen pulse-chase kaya sing dijelasake ing Bahan lan Metode. Hasil sing padha wis ditemtokake manawa cara sing digunakake kanggo ngungkapake ΔFosB. Gambar kasebut nuduhake dalan wektu (lan wakil autoradiogram) saka degradasi ΔFosB. Data sing digambarake yaiku rata-rata ± SEM saka paling ora ana data data 15 sing diwenehi saka paling ora limang eksperimen. Kanggo comparison, setengah-dilapurake setengah-umur FosB lengkap dituduhake.

ΔFosB yaiku phosphoprotein ing otak

Kita duwe hipotesis sing modifikasi posttranslational saka ΔFosB bisa nyumbang kanggo stabilitas sing nyedhiyakake. Amarga phosphorylation wis ditampilake kanggo ngowahi kegiatan transkripsi kanthi akeh cara, kalebu stabilitas (kanggo review, ndeleng Desterro et al., 2000; Whitmarsh lan Davis, 2000), kita nyinaoni ΔFosB minangka phosphoprotein. Kanggo ngrampungake, ekspresi ΔFosB diindenteni ing otak tikus nggunakake ECS kronis, pengobatan sing diarani ndorong tingkat dhuwur ΔFosB, utamane ing korteks frontal (Hope et al., 1994a). Siji dina sawise perawatan ECS pungkasan, nalika tingkat ΔFosB tetep dhuwur, irisan cortikal frontal tipis disiapake lan metabolik dilabeli karo 32P-orthophosphate. Sawijining potongan cetha ora ana radiolabel, lan iki digunakake kanggo ndeteksi tingkatan ΔFosB total. Sawise immunoprecipitation karo antibodi anti-FosB / ΔFosB spesifik lan pamisahan protèin immunopencipitated dening SDS-PAGE, phosphorylated 32PΔ-labeled ΔFosB dideteksi dening autoradiography, dene total ΔFosB dideteksi dening immunoblotting. Analisis iki ngungkapake yen ΔFosB wis fosforilasi ing otak, minangka bukti sing spesifik 32Pita label ~ ~ 35 kDa ditampilake ing conto otak sing diobati sacara kronis, nanging ora bisa dideteksi ing kontrol sing diperlokakeAnjir. 2A). Iki konsisten karo kasunyatan sing, tanpa anané stimulasi kronis, tingkat basal ΔFosB kurang entheng. Spesies reaksi immunoprecipitation dituduhake dening lack of signal ing endapan IgG nonimmune.

Tokoh 2.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 2.

ΔFosB yaiku phosphoprotein ing otak. A, ΔFosB wis fosforilasi ing otak. ΔFosB endogen didokumentasikake ing otak tikus dening perawatan ECS kronis kaya sing diterangake ing Bahan lan Metode. Irisan cortikal ngarep didol sacara metabolik karo 32PH3PO4 kanggo sawetara jam. Sawisé homogenisasi irisan, ΔFosB didol sacara immunopasi, lan fosforilasi ΔFosB (32P-ΔFosB) dideteksi dening autoradiography (panel ndhuwur). Total ΔFosB ing immunoprecipitates non-radioaktif dideteksi dening immunoblotting (panel ngisor). Minangka kontrol negatif, imunoprecipitate kéwan sing dianggep palsu lan IgG nonimun diperlokaké. B, Situs fosforilasi kandidat lan kinase kanthi skor prediksi sing cocog kanggo mouse Urutan protein ΔFosB diduweni dening analisis bioinformatik. Situs kandidat kanthi skor prediksi sing luwih dhuwur disorot ing urutan protein lan kadhaptar ing tabel. Dhokumèntal dhasar lan rèspondhèn DNA dhindhing DNA kanthi cetha ing urutan protein. C, D, Fosforilasi ΔFosB meningkat dening OA fosfatase Ser / Thr. C, 32Tingkat P-ΔFosB ing immunoprecipitates saka irisan cortical frontal sing ditulis ing absen (Ctr) utawa ngarsane 100 ng / ml OA (grafik lan panel ndhuwur) dideteksi dening autoradiography. Panel ngisor nuduhaké total ΔFosB sing dideteksi ing immunoprecipitates saka irisan ora dilabel kanthi immunoblotting. D, Sel PC12 kasebut infèksi karo HSV-ΔFosB utawa HSV-LacZ (vektor) lan dilabel sacara metabolik 32PH3PO4 ing anané (Ctr) utawa ngarsane 100 ng / ml OA. 32Tingkat P-ΔFosB ing immunoprecipitates dideteksi dening autoradiography (grafik, panel ndhuwur). Panel ngisor nuduhaké total ΔFosB sing dideteksi ing lysates sel dening immunoblotting.

Minangka langkah pisanan marang elucidating kinase lan sèl sing terlibat ing fosforilasi ΔFosB, kita bakal nemtokake urutan asam amino marang sawetara analisis bioinformatik. Iki ngandharake yen sanajan ΔFosB ora ngandhut situs kandidat fosforilasi Tyr, ora ana situs konsensus kinetik Ser / Thr, kalebu telung situs CaMKII, telung situs CK2, lan loro situs PKC kanthi skor prediksi phosphorylation bangetAnjir. 2B). Yen, kaya sing diprediksi liwat bioinformatika, ΔFosB mung dienggo fosforilasi ing sisa-sisa Ser utawa Thr, mula fosforilasi kasebut kudu dimodulasi sacara substansial karo aktivitas Fosfatase Ser / Thr. Kanggo nyoba hipotesis iki, kita menehi label irisan cortikal frontal kanthi 32P-orthophosphate ing ngarsane utawa ora ana OA, inhibitor protèin protein Ser / Thr. Minangka ditampilake ing Tokoh 2C, OA nyebabake peningkatan (~ 2.5-fold) gedhe ing 32P-ΔFosB. Uga nyebabake peningkatan cilik ing tingkat ΔFosB, sing konsisten karo laporan sadurungé ngubungaké efek karsinogenik OA kanggo kemampuan kanggo ngindhuksi sawetara gén awal sing cepet kayata protein Fos (Miller et al., 1998; Choe et al., 2004). Hasil net yaiku peningkatan sakabèhé pinunjul (~ 60%) ing tingkat ΔFosB fosforilasi.

Kita banjur nyelidiki manawa, ing sel PC12, sing luwih apik kanggo manipulasi eksperimen, ΔFosB nuduhake pola fosforilasi sing padha karo otak. Kita nyatake ΔFosB ing sel PC12 liwat infeksi karo HSV-ΔFosB lan metabolically labeled sel karo 32P-orthophosphate ing ngarsane utawa ora ana OA. Ekspresi lan imunoprecipulasi protein sing sukses saka sel sing terinfèksi HSV-ΔFosB dituduhake ing ngarsane loro ing immunoblot (Anjir. 2D, panel ngisor) lan autoradiograph (panel ndhuwur) saka pita ~35 kDa, ora ana ing sel sing wis diinfeksi vektor. Kaya sing ditemokake ing otak, OA nyebabake paningkatan cilik ing tingkat ΔFosB nanging sing luwih dhuwur (kurang luwih rong kali) ing 32P-ΔFosB, asil tambah positif (~ 50%) ing fosforilasi ΔFosB. Salajengipun, konsisten karo ramalan bioinformatik, perawatan sel PC12 kanthi inhibitor Tyr phosphatase ora nyebabake owah-owahan sing signifikan ing 32Tingkat P-ΔFosB (data ora ditampilake). Bebarengan, panemon iki ngungkapake yen ΔFosB didokumentasikake ing sisa Ser lan / utawa Thr ing otak lan ing sel PC12 lan dikonfirmasi iki minangka sistem kultur sel sing apik kanggo luwih sinau profil fosforilasi lan degradasi ΔFosB.

CK2 nanging ora fosforilasi PKC utawa CaMKII ΔFosB in vitro

Minangka diterangake ing ndhuwur, analisis gugus asam amino ΔFosB ngumumake prediksi dhuwur kanggo situs-situs fosforilasi CK2, PKC, lan CaMKII. Kanggo nemtokake manawa kinase kasebut minangka fosforilasi ΔFosB, kita nindakake seri saka in vitro reaksi fosforilasi nggunakake kinase sing diresiki lan ΔFosB rekombinan dimurnèkaké. Minangka ditampilake ing Tokoh 3A, saka telung calon kinase, mung CK2 fosforilasi ΔFosB kanthi cara sing signifikan. Kajaba iku, sawetara Kinase liyane dites (eg, GSK3 lan p70S6K) nanging gagal ngasilake phosphorylate ΔFosB (data ora ditampilake). Karakterisasi tambahan saka reaksi CK2 kanthi analisis wektu ngungkapake yen kinase iki bisa ngikisake penggabungan ~ 0.5 mol fosfat per mole saka ΔFosB (Anjir. 3B). Kasunyatane yen CK2 bisa phosphorylate ΔFosB in vitro menyang stoikiometri sing akeh (~ 50%) minangka reaksi saka reaksi fisiologis. Kita banjur nyinaoni kinetika reaksi iki kanthi inkubasi CK2 ing ngarsane nambah jumlah ΔFosB diresiki, lan kita nemtokake phosphorylates CK2 ΔFosB karo Vmax saka 5.8 pmol · min-1 · Μg-1 saka enzim, a KM saka 18.4 μm, lan a kkucing saka 0.2 / s (Anjir. 3C). Nilai-nilai sing ditemokake kanggo parameter kinetik iki luwih ndhukung hubungan fisiologis reaksi kasebut. Kayata, ing KM saka CK2 kanggo DARPP32, salah sawijining subtipe sing paling misuwur, yaiku 3.4 μm, lan kkucing yaiku ~ 0.3 / s (Girault et al., 1989); ing KM kanggo ATP jangkoan saka ~ 10-40 μm (Cochet et al., 1983; Silva-Neto et al., 2002), lan kanggo kasein kisaran saka ~ 10-50 μm (Meggio et al., 1977; Pyerin et al., 1987). Saben data kasebut nuduhake yen ΔFosB minangka substrat bona fide kanggo CK2 in vitro.

Tokoh 3.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 3.

CK2 nanging ora fosforilasi PKC utawa CaMKII ΔFosB in vitro. Autoradiograph (panel ndhuwur) nuduhake produk phosphorylated, lan gel Coomassie (panel ngisor) nuduhake total ΔFosB sing ana ing reaksi kasebut. A, ΔFosB rekombinan diresapi in vitro phosphorylation dening macem-macem calon kinases (telu kang ditampilake). B, Analisis wektu lan stoikiometri nuduhake yen CK2 bisa phosphorylate ΔFosB in vitro karo stoikiometri ~50%. C, Analisis kinetis saka reaksi CK2 ngungkapake yen ΔFosB minangka bona fide in vitro substrate. Linearization reaksi dituduhake ing plot sing kaping pindho (ngisor), nanging parameter kinetik ditemokake saka kurva Michaelis-Menten (ndhuwur).

CK2 modulates fosforilasi lan stabilitas ΔFosB ing sel utuh

Kanggo netepake relevansi fisiologis saka phosphorylation-mediated CK2 saka ΔFosB, kita nindakake pemetaan fosfopeptida komparatif kanthi nggunakake in vitro fosforilasi lan PC12-cell-phosphorylated ΔFosB. Sawise SDS-PAGE lan elusi gel saka 32P-ΔFosB (saka in vitro reaksi utawa saka imunoprecipitate saka 32P-labeled cells), protein dicerna karo trypsin, lan phosphopeptides sing diasilake dadi rong dimensi. Analisis iki ngandharake yen fosfopeptide utama saka reaksi CK2 kronologis karo salah siji saka rong fosfopeptida utama saka ΔFosB fosforilasi ing sel PC12 (Anjir. 4A), yèn fosfopeptida saka asil PKC utawa CaMKII (ora ditampilake data) reaksi ora. Ana ΔFosB phosphopeptide sing saiki ana ing peta saka sel PC12, nanging amarga ora duwe kemampuan kinase sing wis dites kanggo ngasilake fosfopeptida sing padha in vitro, saiki kita ora ngerti yen phosphopeptide kapindho iki ngandhut situs fosforilasi sing béda karo fosfopeptide liya utawa manawa minangka peptida tryptic sing béda sing ngandhut situs fosforilasi sing padha.

Tokoh 4.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 4.

CK2 modulates fosforilasi lan stabilitas ΔFosB ing sel utuh. A, CK2 nanging ora PKC misale jeroné phosphorylate ΔFosB ing sel. Peta fosfopeptida rong dimensi saka ΔFosB sing difosforasi dening CK2 utawa PKC in vitro utawa kanthi sel PC12 utuh. Gambar panah nuduhake kembange peptida CK2-fosforilasi nanging ora kasebut PKC-fosforilasi karo salah sawijining fosfopeptida ΔFosB sing diduweni saka sel PC12. B, Fosforilasi ΔFosB ing sel PC12 tambah kanthi nambani sel kanthi spin activator CK2 (SP) lan ngurangi perawatan karo DRB inhibitor CK2. Contoné, fosforilasi ΔFosB ing sel PC12 ora kena kena perawatan karo salah siji aktivator PKC (PMA) utawa inhibitor spesifik PKC calphostin-C (Calph). A autoradiogram (panel ndhuwur) lan immunoblot (panel ngisor) dituduhake. C-F, Efek aktivitas CK2 ing stabilitas ΔFosB. Angka kasebut nuduhake wektu wektu (lan wakil autoradiogram) saka ΔFosB degradasi. Sel PC12 kanthi tliti ekspresi ΔFosB dipuntedahaken wonten ing eksperimen pulsa-chase ingkang dipunsebabaken nalika absen utawa wontenipun DRB inhibitor CK2C), spin activator CK2 (D), utawa inhibitor spektrum kinase sing amba saka H-8 (E), sing digunakake kanggo ngontrol efek spesifik saka DRB. F, Efek ngetokake subunit katalis CK2 ing stabilitas ΔFosB. Sel-sel PC12 ditransfeksi kanthi salah siRNA (Ctr) utawa penargetan siRNA tikus CK2α lan 24 h mengko transfected karo plasmid ΔFosB. Panel paling dhuwur nggambarake immunoblots saka lysates sel kabeh nuduhake efek saka siRNA CK2 ing CK2 lan tingkat protein ΔFosB. Immunoblot sing cocog kanggo β-tubulin dituduhake minangka kontrol loading.

Kanggo luwih nemokake relevansi fisiologis CK2 minangka ΔFosB kinase, kita bakal ngobati sel PC12 ΔFosB kanthi rong obat sing modulasi aktivitas CK2. Minangka ditampilake ing Tokoh 4B, Fosforilasi ΔFosB mudhun kanthi perawatan sel PC12 kanthi DRB inhibitor CK2-permeableMeggio et al., 1990; Szyszka et al., 1995), lan tambah kanthi perawatan karo spermine poliamina, sing dikenal dadi aktivator CK2 kuat (Cochet lan Chambaz, 1983; Meggio et al., 1983). Contone, perawatan saka sel PC12 karo inhibitor PKC calphostin-C (Kobayashi et al., 1989; Tamaoki et al., 1990) utawa pangaktif PKC PMA (Schmidt lan Hecker, 1975; Beh et al., 1989) ora ngasilake owah-owahan sing signifikan ing fosforilasi ΔFosB. Ing kasus PMA, tambah tipis (lan ora signifikan) ing 32P-ΔFosB bisa dianggep kanthi nambah total tingkat ΔFosB sing disebabake obat kasebut; nyatane, wis kacarita yen ester phorbol ngindhakake ekspresi protein kulawarga Fos, kayata FosB (Yoza et al., 1992; Suh et al., 2004). Salajengipun, perawatan sel kanthi sel inhibitor CaMKII sel-permeabel spesifik m-AIP (Ishida lan Fujisawa, 1995; Stevens et al., 1999) uga ora ngasilake fosforilasi ΔFosB (data ora ditampilake). Bebarengan, asil kasebut konsisten karo kita in vitro temuan lan nunjukake yen ing sel paling utuh, ΔFosB kamungkinan dadi phosphorylated dening CK2 nanging ora PKC utawa CaMKII. Kasunyatan bilih pamblokiran CK2 boten nyegah fosforilasi ΔFosB nedahaken wontenipun situs fosforilasi tambahan ing protein.

Sabanjure kita sinaoni manawa CK2 minangka peranan ing turnover saka ΔFosB lan kanthi mangkono stabilitas. Kanggo mbandhingake iki, kita nganakake eksperimen pulsa-chase kanthi nggunakake sel-PC12 ΔFosB sing dianggep kanthi inhibitor CK2 utawa aktivator CK2 sing digunakake ing studi fosforilasi. Minangka ditampilake ing Tokoh 4C, perawatan sel karo DRB inhibitor CK2 duweni pangaruh sing signifikan ing laju oyot saka ΔFosB, dibuktekake kanthi owah-owahan bentuk kurva degradasi, saka biphasic menyang kurva sing luwih cedhak karo pembusukan eksponensial. Kosok baline, anané spermin aktivator CK2 nyebabake penurunan signifikan ing tingkat degradasi ΔFosB, sing nyebabake akumulasi protèin sajrone jam pisanan nguber (Anjir. 4D).

Minangka kasus karo aktivator kinase lan inhibitor, spermine lan DRB bisa duwe efek metabolik ing njaba modulasi kegiatan CK2. Ing kasunyatan, DRB wis nampilake nyandhet faktor transkripsi IIH (TFIIH) -hubungake kinase (Yankulov et al., 1995), sing nyebabake inhibisi transkripsi-polimerase RNA-mediated RNA. Amarga efek kasebut bisa ndadekake efek stabilitas ΔFosB, kita nganalisis efek spektrum kinase inhibitor H-8 (Hidaka lan Kobayashi, 1992) ing ΔFosB omzet ing konsentrasi (200 μm) dikenal kanggo nyandhet kinase TFIIH sing digandhengake nanging ora CK2 (Yankulov et al., 1995). Minangka ditampilake ing Tokoh 4E, perawatan karo H-8 ora mengaruhi tingkat turnover saka ΔFosB. Hasil sing padha ditampa karo H-7, inhibitor spektrum kinase sing luwih luas, digunakake ing konsentrasi sing nyegah kinase sing duwé TFIIH nanging ora CK2 (data ora ditampilake). Data kasebut luwih ndhukung interpretasi sing ngurangi stabilitas ΔFosB sing disebabake dening DRB sing paling mungkin bisa dicegah saka inhibisi CK2.

Kanggo luwih ngetrapake peran CK2 ing turnover ΔFosB, kita nyelidhiki konsekuensi saka ngetok mudhun CK2 liwat siRNA. Kita nganakake eksperimen kasebut kanthi nggunakake sel PC12 sing pisanan ditransfèksi kanthi kontrol (ora ditargetkan) siRNA utawa siRNA sing target mRNA saka subunit katalitik tikus CK2 (CK2α) lan 24 h mengko transfected karo ΔFosB. Minangka ditampilake ing Tokoh 4F, transfeksi karo siRNA CK2α cekap lan mbebayani tingkat protein CK2α tanpa kena pengaruh tingkat ΔFosB (panel paling dhuwur). Analisis pulse-chase ngandhakake yen ngetokake CK2 ngasilake kenaikan signifikan ing tingkat ΔFosB minangka bukti sing luwih cepet saka degradasi protein. Kasunyatan sing nyandhetake aktivitas CK2 (kanthi liwat perawatan DRB utawa siRNA) nambah turnover saka ΔFosB lan mrodhuksi ngilangi komponen alon saka kurva biphasic, dene aktivasi CK2 nambah fase alon kurva, nyedhiyakake support sing kuat kanggo ing idea sing CK2 nduweni peran ing ngatur stabilitas ΔFosB.

CK2 phosphorylates ΔFosB on Ser27

Kanggo miwiti kanggo ngenali situs kasebut ing ΔFosB phosphorylated dening CK2, kita nganakake analisis asam fosfo-amino saka ΔFosB rekombinasi sing di fosforilasi dening CK2 in vitro lan ΔFosB phosphorylated ing PC12 sel. Eksperimen iki nyatakake yen, ing kasus kasebut, mung asam phospho-amino sing dideteksi yaiku phospho-Ser (Anjir. 5A). Temuan iki, bebarengan karo stoikiometri sing diduweni kanggo CK2 in vitro Reaksi fosforilasi (~ 50%) (Anjir. 3B) lan dumunung mung siji titik sing wigati ing peta fosfopeptide CK2 (Anjir. 4A), nyatake yen fosforilasi CK2 saka ΔFosB mung bisa diwatesi karo residine serine tunggal. Kesimpulan iki konsisten karo analisis situs konsensus fosforilasi (Anjir. 2B), kang mung prédhiksi siji serine calon, yaiku, Ser27, kanggo CK2. Analisis taksonomi ngandhakake yen Ser27 wis dikonservasi banget liwat evolusi ing antarane anggota kulawarga Fos (Anjir. 5B), sing menehi fungsi fisiologis sing wigati.

Tokoh 5.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 5.

CK2 Phosphorylates ΔFosB on Ser27. A, Analisis asam phosphoamino saka CK2-fosforilasi (in vitro) lan ΔFosB-phosphorylated cell PC12 nuduhaké yèn ing kasus kasebut, fosolilasi utama yaiku serine. B, Analisis silang-spesies saka FosB / ΔFosB urutan asam amino ngandhakake konservasi dhuwur saka Ser27 antarane anggota kulawarga Fos saka manungsa nganti zebrafish (sorotan gelap). Nanging, residu asam ing posisi + 3, sing dibutuhake kanggo situs konsensus CK2, ora dikonsepake (sorotan cahya). C, Sel HeLa ditransfèksi kanthi tipe ΔFosB (WT) utawa ΔFosB kanthi mutasi titik kanggo ngganti Ser27 karo Ala (S27A). Sel padha metabolically dilabisi karo 32PH3PO4 lan dianggep kanthi kendaraan utawa spermin (SP) kanggo ngaktifake CK2. Autoradiogram (Panel paling dhuwur) lan immunoblot (panel ngisor) saka ΔFosB immunoprecipitates sing ditampilake. Immunoprecipitate sel-transfected sel (vektor) ditampilake.

Kanggo nemtokake yen Ser27 wis phosphorylated ing ΔFosB, kita mutated residue iki kanggo Ala, lan nganalisa konsekuensi ing status phosphorylation protein. Kanggo mbandhingake iki, kita nggunakake sel HeLa (sing bisa ditransfèksi kanthi efisiensi sing luwih dhuwur) kanggo mènèhi ekspresi mutasi WT utawa S27A ΔFosB. Kira-kira 24 h sawise transfeksi, sel kasebut metabolik dilabeli karo 32P-orthophosphate, lan lysate kabèh sel wis disiapake. Sawise immunoprecipitation lan SDS-PAGE, 32P-ΔFosB dideteksi dening autoradiography lan total ΔFosB dening immunoblotting. Minangka ditampilake ing Tokoh 5C (panel ngisor), ΔFosB ora dideteksi ing sel-sel transparan vektor, dene sel ditransfèksi kanthi mutasi WT utawa S27A ΔFosB kasil ngandhakake protein kasebut. Kita nemokake yen mutasi S27A nyebabake penurunan (~ 30%) sing signifikan ing 32P-ΔFosB tingkat (Anjir. 5C, panel ndhuwur lan grafik), sing nuduhake yen ing sel urip, ΔFosB didokumentasikake ing Ser27. Ing upaya kanggo nemtokake manawa ing sel Ser27 pancen fosforilasi dening CK2, kita mbandhingake kemampuan spin activator CK2 kanggo modulasi fosforilasi WT lan S27A ΔFosB. Kita wis weruh sadurunge ing sel PC12 (Anjir. 4B), perawatan sel HeLa kanthi spermine phosphorylation sing tambah akeh protein WT. Kasunyatan bilih efek iki secara signifikan bakal ilang dening mutasi S27A (Anjir. 5C) ndhukung interpretasi yen Ser27 ing ΔFosB minangka substrat fisiologis kanggo CK2.

Fosforilasi Ser27 ngatur stabilitas ΔFosB

Duwe netepake yen stabilitas ΔFosB mudhun nalika CK2 dibandhingake lan ditingkatake nalika CK2 diaktifake (Anjir. 4), lan fosforilasi CK2 ΔFosB ing Ser27 (Anjir. 5), kita mbadek yen nyegah phosphorylation saka situs iki ngirim destabilize protein. Eksperimen pulsa-chase conducted karo sel HeLa transiently mengekspresikan salah siji mutasi WT atau S27A ΔFosB mengungkap, sebagaimana diprediksi, mutasi S27A menghasilkan kenaikan signifikan pada laju degradasi ΔFosB, dan penurunan berkurangnya separuh-umur protein (Anjir. 6A). Kita banjur nyelidiki manawa mekanisme peraturan iki uga ana ing garis sel PC12 kaya neuron kaya. Eksperimen-eksperimen iki ngungkapake yen, kaya sing wis ditemokake ing sel HeLa, mutasi titik S27A nyebabake nyuda dramatis ing ΔFosB setengah urip ing sel PC12 (saka ~ 11 nganti ~ 4 h) (Anjir. 6B). Kasunyatan yèn destabilisasi iki padha karo sing disebabake dening pamblokiran utawa knock-down CK2 (Anjir. 4) nyedhiyakake dhukungan luwih lanjut kanggo gagasan sing fosforilasi CK2-mediated Ser27 ngatur stabilitas ΔFosB. Bukti tambahan kanggo peran regulasi saka fosforilasi Ser27 ing ΔFosB protein èlmuwan diduweni nggunakake SerPHNUMX phosphomimetic kanggo mutasi Asp (S27D). Mutasi S27D dianggep minangka fosfimimetris, amarga ngandhut gugus negatif (karboksil) ing asam amino 27 lan kanthi mangkono nuladhani fosforilasi Ser27. Minangka ditampilake ing Tokoh 6C, mutasi S27D nyebabake efek ngelawan saka mutasi S27A lan ngasilake protein luwih stabil tinimbang protein WT. Kajaba iku, efek ditampa sawise aktivasi CK2 (Anjir. 4D), mutasi S27D ngasilake akumulasi lan kanthi mangkono nambah tingkat ΔFosB sajrone jam mburine.

Tokoh 6.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 6.

Fosforilasi Ser27 ngatur stabilitas ΔFosB. A, C, Analisis Pulse-Chase nuduhake efek saka fosforilasi Ser27 ing tingkat omset ΔFosB. Profil degradasi lan kira-kira setengah urip tipe ΔFosB (WT), Ser27 kanggo Ala mutant (S27A), lan Serat phenomimetic kanggo Asp mutant (S27D) sing dituduhake. Temuan sing padha ditampa ing sel HeLa (A) lan sel PC12 (B, C).

Fosforilasi Ser27 nyetabilake ΔFosB kanthi nyegah degradasi proteasee

Kanggo miwiti njlèntrèhaké mekanisme kanthi fosforilasi Ser27 nyetabilaké ΔFosB, kita mriksani kemampuan inhibitor proteaseome MG132 (Palombella et al., 1994; Tsubuki et al., 1996) lan epoxomicin (Hanada et al., 1992; Kim et al., 1999) kanggo modulasi tingkat degradasi mutasi WT lan S27A ΔFosB. Eksperimen pulsa-chase dideleng nggunakake sel PC12 sing diinfeksi HSV rekombinan sing nyebutake WT utawa S27A ΔFosB lan diobati nganggo salah siji DMSO utawa salah siji saka rong inhibitor proteasome. Eksperimen iki ngungkapake yen sanajan tingkat degradasi protein WT relatif ora sensitif marang anané salah siji saka rong inhibitor proteaseum (Anjir. 7A), sing saka mutan S27A peka karo obatan kasebut (Anjir. 7B). Iki nuduhake yen, ora kaya protein WT, mutan S27A minangka target degradasi protease. Pancen, perawatan sel kanthi MG132 utawa epoxomicin sauntara bisa ngatasi efek mutasi S27A ing tingkat degradasi ΔFosB, dibuktekake kanthi nambah setengah-setengah mutan S27A saka ~ 4 nganti ~ 9 h kanggo MG132 lan ~ 12 h kanggo epoxomicin (Anjir. 7B). Bebarengan, panemon iki nuduhaké yèn fosforilasi ΔFosB ing Ser27 nglindhungi protein saka degradasi proteasomal lan mila penting kanggo stabilitas sing ora normal.

Tokoh 7.

Ndeleng versi sing luwih dhuwur:

Tokoh 7.

Fosforilasi Ser27 nyetabilake ΔFosB kanthi nyegah degradasi proteasee. A, B, Analisis pulsa-ngejar karo sel-PC12 sing terinfeksi HSV sing nuduhake profil degradasi lan kira-kira setengah urip tipe ΔFosBA) utawa S27A ΔFosB (B) ing anané utawa anané salah siji saka rong inhibitor proteasome [MG132 lan epoxomicin (Epoxo)]. Elinga nyatane manawa tamba ora duwe efek sing signifikan ing turnover jenis ΔFosB, dene perawatan saka sel kanthi inhibitor protease bisa ngasilake stabilisasi S27A ΔFosB. C, Model kanggo peran phosphorylation Ser27 ing kemampuan ΔFosB kanggo ngatasi plastisitas otak jangka panjang. Sawise diinduksi, bagean saka ΔFosB stabil ing otak dening phosphorylation-mediated CK2 saka S27. Iki nyebabake akumulasi, sing uga ngasilake owah-owahan long-term ing ekspresi gen. Owah-owahan stabil ing ekspresi gen iki nyedhiyakake adaptasi perilaku stabil. Kosok baline, dephosphorylation saka S27 dening Ser / Thr phosphatases PP1 lan / utawa PP2A asil ing destabilization saka protein lan Processing dening mesin proteasomal.

Sadurunge bageanSabanjure Seksi

Diskusi

Ing panliten iki, kita nuduhake yen ΔFosB nduweni umur setengah ~ ~ 10 h ing kultur sel, kang ndadekake stabil dibandhingake karo FosB lengkap lan faktor transkripsi sing bisa ditindakake, sing setengah urip ing kultur sel bisa dadi singkat minangka sawetara menit lan arang ngluwihi 3 h (Hann lan Eisenman, 1984; Dobrazanski et al., 1991; Roberts lan Whitelaw, 1999; Ferrara et al., 2003; Hirata et al., 2004). Kajaba iku, kita nemokake yen ΔFosB phosphorylated ing otak lan fosforilasi sawijining sensitif ing PP1 / PP2A inhibitor asam okadaic. Studi kultur sel kita nduduhake yen stabilitas ΔFosB dimodulasi déning CK2, kanthi aktivitas CK2 sing luwih dhuwur nyebabake stabilitas protein. Pungkasane, panemon kita nerangake yen fosforilasi CK2 ΔFosB ing terminine Serine (S27) sing paling konservasi (S27) lan nduduhake fosforilasi S27 nglindhungi ΔFosB saka degradasi protease. Mulane, kita nyalonake modhèl babagan fosforilasi ΔFosB ing S2 dening CKXNUMX minangka mekanisme regulasi kritis saka ΔFosBAnjir. 7C). Stabilisasi fosforilasi-mediated saka ΔFosB fungsional penting, amarga tingkat ΔFosB tambah ing wilayah otak tartamtu wis ditampilake langsung ngatur akeh gen neuronal ing vivo lan ngetrapake efek prilaku kuat ing model kewan saka sawetara gangguan neuriosyatrik (waca Pambuka).

Sanajan phosphorylation minangka cara sing cepet lan bisa diatur babagan transkripsi aktivitas transkripsi tartamtu, kayata CREB (protein respon cAMP respon) (Bohmann, 1990), modulasi degradasi faktor transkripsi nyedhiyakake wangun regulasi sing luwih kuat (kurang gampang dibatalake)Desterro et al., 2000). Faktor transkrip sing aktivitas fungsional diatur ing tingkat degradasi kalebu NFκB (Desterro et al., 2000), c-Myc (Sears et al., 1999), lan c-Fos (Ferrara et al., 2003antara liya. Ing sawetara kasus, fosforilasi minangka pengatur tombol stabilitas faktor transkripsi, kaya sing wis ditampilake kanggo c-Fos (Okazaki lan Sagata, 1995; Tsurumi et al., 1995), Fos-related antigen-1 (Fra-1) (Vial lan Marshall, 2003), Fra-2 (Manabe et al., 2001), c-Jun (Fuchs et al., 1996), JunB (Fuchs et al., 1997), ATF2 (Fuchs et al., 2000), lan p53 (Buschmann et al., 2001). Pasinaon kita tambahake ΔFosB kanggo daftar transkripsi iki kang aktivitas fungsional diatur miturut stabilitas fosforilasi.

CK2 minangka Ser / Thr kinase aktif ing endi wae lan duwe> 300 substrat sing dikatutake sing diidentifikasi nganti saiki lan kalebu ing proses biologis, kalebu pati sel lan kaslametan (Litchfield, 2003; Unger et al., 2004), respon kawat selular (Yanagawa et al., 1997; Kato et al., 2003), lan pambenahan DNA lan remodeling chromatin (Barz et al., 2003; Krohn et al., 2003). Luwih saka siji sapertane substrat putative saka CK2 yaiku protein sing melu regulasi ekspresi gen (Meggio lan Pinna, 2003). Jebule, CK2 wis dituduhake minangka kinase nuklir sing penting (Krek et al., 1992) (kanggo deleng, pirsani Yu et al., 2001) lan sesambungan karo domain bZIP saka sawetara faktor transkripsi (Yamaguchi et al., 1998). Fosforilasi-mediated CK2 uga wis ditampilake kanggo modulasi degradasi (nambah utawa ngurangi) saka akeh protein, kalebu IkB (Schwarz et al., 1996), PTEN (Torres lan Pulido, 2001), lensa connexin (Yin et al., 2000), protein kromatin sing disambungake HMG1 (Wisniewski et al., 1999), lan sawetara faktor transkripsi kayata HMGB (Stemmer et al., 2002), Myf-5 (Winter et al., 1997), lan c-Myc (Channavajhala lan Seldin, 2002). CK2 paling akeh ing otak (Alcazar et al., 1988; Girault et al., 1990), lan kegiatan kasebut wis disebabake ing akeh aspek fungsi otak, kalebu kalangsungan neuronal (Boehning et al., 2003), diferensiasi (Nuthall et al., 2004), fungsi saluran ion (Jones lan Yakel, 2003; Bildl et al., 2004), lan potentiation long-term lan plasticity neuronal (Diaz-Nido et al., 1992; Lieberman lan Mody, 1999; Reikhardt et al., 2003).

Senadyan bukti iki akeh kanggo peran CK2 ing angger-anggere fungsi neuronal, ora pati ngerti apa sing ngendhaleni aktivitase. CK2 dikira dadi aktif, kanthi angger kemampuan kanggo ngeposulasi substrat tartamtu sing gumantung banget marang owah-owahan ing lokalisasi intraselular (umpamane, sitosol vs inti)Ahmed lan Tawfic, 1994; Yu et al., 1999). Informasi iki ningkatake pitakonan penting babagan sinyal apa sing dibutuhake kanggo ngindhuksi akumulasi ΔFosB ing otak sawise stimulasi kronis (Anjir. 7C). Siji requirement wis diaktifake ulang saka fosB gene lan induksi saka ΔFosB mRNA (Chen et al., 1995). Data kita nuduhake yen fosforilasi CK2 saka ΔFosB kritis kanggo stabilitas, menehi saran yen sinyal liya bisa uga dibutuhake kanggo efek jangka panjang ΔFosB ing ekspresi gen, yaiku, sinyal sing ngrangsang fosforilasi protein dening CK2. Iki bisa mbahas aktifitas CK2 dening sawetara mekanisme sing ora dingerteni utawa translocation marang nukleus. Utawa, fosforilasi CK2 saka ΔFosB bisa dadi konstitutif, kayata kaya protein ΔFosB diterjemahake minangka respon kanggo saben rangsangan, bagean kasebut diwenehi fosforilasi lan kanthi mangkono dadi stabil, supaya kanthi stimulasi bola kasebut akumulasi ing tingkat sing dhuwur ing neuron sing kena pengaruh.

Temuan kasebut nuduhake yen CK2 lan S27 mbokmenawa ora mung kinase lan situs sing tanggung jawab kanggo fosforilasi ΔFosB, amarga ora ana inhibisi CK2 utawa mutasi S27A bisa nyegah fosforilasi ΔFosB. Miturut tandha sing padha, kasunyatan yen mutasi S27A nyebabake pangurangan% 30 ing phospho-ΔFosB argue yen S27 minangka situs fosforilasi utama ing protein. Nanging, kita nyelidiki situs kinase lan phosphorylation liyane ing ΔFosB. Wekasane, penting banget kanggo nganalisis fosforilasi S27 lan situs fosforilasi liyane ing ΔFosB ing otak ing vivo sawise macem-macem jinis stimulasi kronis, contone, liwat nggunakake spektrometri massa utawa antibodi phosphospecific.

Minangka kasebut ing ndhuwur, S27 ing ΔFosB diilhami banget ing saindhenging evolusi lan ing antarane protein kulawarga Fos liyane. Nanging, situs konsensus kanggo CK2 ora: kayata ing Tokoh 5B, mung FosB / ΔFosB (lan xenolog Zebrafish), nanging ora c-Fos utawa Fra-2, duwe residu asam ing + 3, penentu kunci fosforilasi CK2 (Marin et al., 1986; Meggio et al., 1994). Mangkono, lack of phosphorylation CK2 ing S27 bisa njelasake yen protein kulawarga Fos liyane ora stabil minangka ΔFosB. Nanging, iki ora njelasake yen FosB lengkap, sing nduweni situs konsensus CK2 minangka ΔFosB, ora stabil banget. Kita ora ngerti manawa FosB lengkap fosforilasi dening CK2 ing residu iki. Laporan mung FosB (Skinner et al., 1997) lan c-Fos (Okazaki lan Sagata, 1995; Chen et al., 1996) fosforilasi njlèntrèhaké situs ing tlatah C-terminal protèin iki, sing ora ana ing ΔFosB. Fosforilasi potensial FosB lengkap lan protein Fos keluarga liya dening CK2 mbutuhake penyelidikan langsung. Nanging, sanajan padha phosphorylated, protèin kulawarga Fos liyane dikenal ngandhut motif ing istilah C sing ngidhentifikasi protein kanggo degradasi kanthi cepetPapavassiliou et al., 1992; Jariel-Encontre et al., 1997; Acquaviva et al., 2002). Contone, wis ditampilake yen residu ~21 ana ing terminal C kabeh proton kulawarga Fos, nanging ora ana ing ΔFosB, minangka domain destabilizing kanggo c-Fos (Acquaviva et al., 2001). Kita nemokake yen senadyan urutan iki uga bisa nggayuh FosB lengkap (Carle et al., 2004), anané domain iki ing ΔFosB ora sacara sakabèhé nyathetaké stabilé. Luwih, kombinasi anané c terminus domain lan fosforilasi Ser27 iki misale jek nyatakake prabédan kira-kira kaping lima ing stabilitas antara ΔFosB lan FosB.

Senajan degradasi protein kulawarga Fos rumit lan ora dimangertèni kanthi lengkap, degradasi proteasomal misale jek dadi dalan utama (Salvat et al., 1999; Acquaviva et al., 2002; Ferrara et al., 2003). Data sing dituduhake ing kene, ing inhibitor proteasomal ora ngubah tingkat degradasi ΔFosB, argue yen, ora kaya protèin kulawarga Fos, ΔFosB nyegah proteasome 26S, lan iki minangka peran utama ing stabilitas. Mulane, kita nyaranake skema kanthi stabilitas ΔFosB ditingkatake amarga kombinasi rong faktor utama: (1) ora ana domain destabilizing C-terminal lan (2) fosforilasi S27 dening CK2.

Ing ringkesan, pangembangan saiki nyedhiyakake wawasan mekanistik babagan ΔFosB, minangka asil saka gen awal fosB, ora kaya kabeh anggota kulawarga Fos liyane, protein sing umume urip. Éwadéné protein Fos sanès sanèsipun dipunsebat dados panyengkuyung kopling rangsangan-transkripsi kanthi cepet nangingMorgan lan Curran, 1995), stabilitas relatif saka ΔFosB nyedhiyakake kemampuan kanggo nyegah owah-owahan transkription sing luwih cepet akibat stimulasi kronis. Iki ndhukung tampilan sing ΔFosB minangka fungsi saklar molekuler ing otak, kanthi otomatis ngowahi respon akut menyang adaptasi kronis. Identifikasi fosforilasi Ser27 minangka mekanisme pusat kanggo stabilitas ΔFosB mbuka dalan anyar kanggo pangembangan sarana kanggo ngatur fungsi ΔFosB lan kanthi mangkono modulasi efek jangka panjang marang plastisitas saraf lan perilaku.

Sadurunge bageanSabanjure Seksi

Cathetan sikil

  • Ditampa Nopember 21, 2005.
  • Revisi nampa Februari 21, 2006.
  • Ditampa April 2, 2006.
  • Karya iki didhukung dening National Alliance for Research on Schizophrenia lan Depression Young Investigator Award kanggo PGU, National Institute of Abuse Abuse (NIDA) National Research Service Award kanggo PGU, lan hibah saka National Institute of Mental Health lan NIDA kanggo EJN We thank Dr. James Bibb for help with the in vitro Fosforilasi, Dr. Ming-Hu Han kanggo bantuan kanthi nyiapake irisan-irisan otak sing digunakake kanggo panyelarasan metabolisme, lan Dr. Rachael Neve mbantu dheweke nganggo kemasan HSV rekombinan.
  • G. G. Rudenko alamat saiki: Institut Ilmu Life lan Departemen Farmakologi, Universitas Michigan, 210 Washtenaw Avenue # 3163A, Ann Arbor, MI 48109-2216.
  • Koresponden kudu ditangani karo Eric J. Nestler, 5323 Harry Hines Boulevard, Dallas, TX 75390-9070. Email: [email dilindhungi]

Sadurunge bagean

 

Cathetan Suku

  1. ↵

Acquaviva C, Brockly F, Ferrara P, Bossis G, Salvat C, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2001) Identifikasi motif tripeptida C-terminal sing ana ing kontrol degradasi proteaseomal kanthi cepet saka proto-oncoprotein c-Fos nalika transisi phase G (0) -to-S. Oncogene 20:7563-7572.

CrossRefMedline

  1. ↵

Acquaviva C, Bossis G, Ferrara P, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2002) Jalur kerentuhan kanggo protèin kulawarga Fos. Ann NY Acad Sci 973:426-434.

Medline

  1. ↵

Ahmed K, Tawfic S (1994) Mekanisme regulasi intraselular protein kinase CK2: peran asosiasi subnuklear-mediated. Cell Mol Biol Res 40:539-545.

Medline

  1. ↵

Alcazar A, Martin E, Lopez-Fando J, Salinas M (1988) Prosedur pemurnian lan sipat kasein kinase II sing luwih apik saka otak. Neurochem Res 13:829-836.

CrossRefMedline

  1. ↵

Andersson M, Westin JE, Cenci MA (2003) Wektu kekurangan immunoreaktivitas kaya DeltaFosB lan mRNA prodynorphin sawise nolak perawatan dopaminomimetik kronis. Eur J Neurosci 17:661-666.

CrossRefMedline

  1. ↵

Barz T, Ackermann K, Dubois G, Eils R, Pyerin W (2003) Layar ekspresi genome nuduhake peran global kanggo protein kinase CK2 ing remodeling chromatin. J Cell Sci 116:1563-1577.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Beh I, Schmidt R, Hecker E (1989) Loro isozim saka PKC sing ditemokake ing sel HL-60 nuduhake prabédan ing aktivasi dening phorbol ester TPA. FEBS Lett 249:264-266.

Medline

  1. ↵

Bildl W, Strassmaier T, Thurm H, Andersen J, Eble S, Oliver D, Knipper M, Mann M, Schulte U, Adelman JP, Fakler B (2004) Protein kinase CK2 disusun kanthi saluran kondensasi Ca (2 +) sing luwih cilik lan ngatur gating saluran. Neuron 43:847-858.

CrossRefMedline

  1. ↵

Bing G, Wang W, Qi Q, Feng Z, Hudson P, Jin L, Zhang W, Bing R, Hong JS (1997) Ekspresi jangka panjang antigen Fos yang terkait dengan ekspresi delta FosB yang terkait dengan kejang pada hippocampus tikus lan striatum. J Neurochem 68:272-279.

Medline

  1. ↵

Blom N, Sicheritz-Ponten T, Gupta R, Gammeltoft S, Brunak S (2004) Prediksi glycosylation pasca translasi lan fosforilasi protein saka urutan asam amino. Proteomics 4:1633-1649.

CrossRefMedline

  1. ↵

Boehning D, Moon C, Sharma S, Hurt KJ, Hester LD, Ronnett GV, Shugar D, Snyder SH (2003) Neurotransmission karbon monoksida diaktivasi dening fosforilasi CK2 heme oxygenase-2. Neuron 40:129-137.

CrossRefMedline

  1. ↵

Bohmann D (1990) Fosforilasi faktor transkripsi: hubungan antara transduksi sinyal lan pangaturan ekspresi gen. Sel kanker 2:337-344.

Medline

  1. ↵

Buschmann T, Potapova O, Bar-Shira A, Ivanov VN, Fuchs SY, Henderson S, Fried VA, Minamoto T, Alarcon-Vargas D, Pincus MR, Gaarde WA, Holbrook NJ, Shiloh Y, Ronai Z (2001) Jun NH2-terminal kinase phosphorylation saka p53 ing Thr-81 penting kanggo stabilisasi lan transcriptional p53 aktivitas minangka respon kanggo kaku. Mol Cell Biol 21:2743-2754.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Carle TL, Ulery PG, Nestler EJ (2004) Ora ana domain C-terminal kulawarga Fos sing diawetake nyumbang kanggo stabilitas unik deltaFosB. Soc Neurosci Abstr 30: 692.2.

  1. ↵

Channavajhala P, Seldin DC (2002) Interaksi fungsi protein kinase CK2 lan c-Myc ing limfomagenesis. Oncogene 21:5280-5288.

CrossRefMedline

  1. ↵

Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ (1995) Peraturan delta FosB lan FosB kaya protèin karo elektrokonvulsif lan perawatan kokain. Mol Pharmacol 48:880-889.

Abstract

  1. ↵

Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Antigèn sing ana hubungane karo Fos kronis: varian stabil ΔFosB sing diakibataké ing otak kanthi pangobatan kronis. J Neurosci 17:4933-4941.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Chen RH, Juo PC, Curran T, Blenis J (1996) Fosforilasi c-Fos ing terminal C nambah kegiatan ganti wujud. Oncogene 12:1493-1502.

Medline

  1. ↵

Choe ES, Parelkar NK, Kim JY, Cho HW, Kang HS, Mao L, Wang JQ (2004) Inhibitor asam fosfatase 1 / 2A asam okadaik nambahake fosforilasi CREB lan Elk-1 lan ekspresi c-fos ing striatum tikus ing vivo. J Neurochem 89:383-390.

CrossRefMedline

  1. ↵

Cocok C, Chambaz EM (1983) Fosforilasi protein poliamina-mediated: target sing bisa kanggo aksi poliol intraseluler. Mol Cell Endocrinol 30:247-266.

CrossRefMedline

  1. ↵

Cocok C, Feige JJ, Chambaz EM (1983) Sifat katalitik lan molekul saka katalisin casein kinase G banget diresiki saka jaringan paru-paru sapi. Biochim Biophys Acta 743:1-12.

Medline

  1. ↵

Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, DW Self (2003) Overprongensi tipe-tipe sel Striatal saka DeltaFosB nambah insentif kanggo kokain. J Neurosci 23:2488-2493.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Daunais JB, Roberts DC, McGinty JF (1993) Cocaine ndandani awak mundhak preprodynorphin, nanging ora c-fos, mRNA ing tikus striatum. NeuroReport 4:543-546.

Medline

  1. ↵

Desterro JM, Rodriguez MS, Hay RT (2000) Regulasi saka faktor transkripsi dening degradasi protein. Cell Mol Life Sci 57:1207-1219.

CrossRefMedline

  1. ↵

Diaz-Nido J, Armas-Portela R, Avila J (1992) Tambah ing kegiatan tipe sitoplasmik casein kinase II, bareng karo neurite outgrowth sawise pamblokiran sintesis DNA ing neuroblastoma NIA-103. J Neurochem 58:1820-1828.

Medline

  1. ↵

Di Maira G, Salvi M, Arrigoni G, Marin O, Sarno S, Brustolon F, Pinna LA, Ruzzene M (2005) Phosphorylates protein kinase CK2 lan upregulates Akt / PKB. Beda Pati Cell 12:668-677.

CrossRefMedline

  1. ↵

Dobrazanski P, Noguchi T, Kovary K, Rizzo CA, Lazo PS, Bravo R (1991) Loro-lorone produk saka fosB gene, FosB lan wujud cendhak, FosB / SF, yaiku aktivator transkrip ing fibroblas. Mol Cell Biol 11:5470-5478.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Ferrara P, Andermarcher E, Bossis G, Acquaviva C, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2003) Panentu struktural sing tanggung jawab kanggo degradasi protein protein c-Fos beda-beda miturut kondisi ekspresi. Oncogene 22:1461-1474.

CrossRefMedline

  1. ↵

Fuchs SY, Dolan L, Davis RJ, Ronai Z (1996) Penargetan fosforilasi gumantung k-Jun ubiquitination dening Jun N-kinase. Oncogene 13:1531-1535.

Medline

  1. ↵

Fuchs SY, Xie B, Adler V, Fried VA, Davis RJ, Ronai Z (1997) c-Jun NH2-terminal kinase target ing ubiquitination saka sing gegandhengan transkripsi faktor. J Biol Chem 272:32163-32168.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Fuchs SY, Tappin I, Ronai Z (2000) Stabilitas saka faktor transkripsi ATF2 diatur dening fosforilasi lan dephosphorylation. J Biol Chem 275:12560-12564.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Girault JA, Hemmings HC Jr, Williams KR, Nairn AC, Greengard P (1989) Phosphorylation of DARPP-32, fosfoprotein dopamine- lan cAMP, dening casein kinase II. J Biol Chem 264:21748-21759.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Girault JA, Hemmings HC Jr, Zorn SH, Gustafson EL, Greengard P (1990) Karakterisasi ing otak mamalia saka DARPP-32 serine kinase identik karo casein kinase II. J Neurochem 55:1772-1783.

Medline

  1. ↵

Hanada M, Sugawara K, Kaneta K, Toda S, Nishiyama Y, Tomita K, Yamamoto H, Konishi M, Oki T (1992) Epoxomicin, agen antitumor anyar saka mikroba asal. J Antibiot (Tokyo) 45:1746-1752.

Medline

  1. ↵

Hann SR, Eisenman RN (1984) Protein dikodekan dening c-myc manusia oncogene: ekspresi diferensial ing sel neoplastik. Mol Cell Biol 4:2486-2497.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Hemmings HC Jr, Girault JA, Williams KR, LoPresti MB, Greengard P (1989) ARPP-21, fosfoprotein AMP-diatur siklis (Mr = 21,000) sing dipercoyo ing dopamine-innervated area otak. Urutan asam amino ing situs kasebut phosphorylated dening AMP siklik ing sel utuh lan studi kinetik saka fosforilasi ing vitro. J Biol Chem 264:7726-7733.

  1. ↵

Hidaka H, ​​Kobayashi R (1992) Farmakologi inhibitor protein kinase. Annul Rev Pharmacol Toxicol 32:377-397.

CrossRefMedline

  1. ↵

Hirata H, Bessho Y, Kokubu H, Masamizu Y, Yamada S, Lewis J, Kageyama R (2004) Kekuwatan protein Hes7 penting banget kanggo jam segmentasi. Nat Genet 36:750-754.

CrossRefMedline

  1. ↵

Hiroi N, Graybiel AM (1996) Pangobatan neuroleptik atipikal lan khas ndadekake program-program transkripsi ekspresi faktor ing striatum. J Comp Neurol 374:70-83.

CrossRefMedline

  1. ↵

Pangarep B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ (1992) Regulasi ekspresi gen awal lan AP-1 ngiket ing nukleus tikus sing diakoni dening kokain kronis. Proc Natl Acad Sci USA 89:5764-5768.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Hope BT, Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ (1994a) Penyakit elektroconvulsive kejang (ECS) ngasilake komplek AP-1 ing otak kanthi komposisi lan ciri sing diowahi. J Neurosci 14:4318-4328.

Abstract

  1. ↵

Hope BT, Nye HE, Kelz MB, DW DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ (1994b) Induksi komplek AP-1 sing dumadi saka protèin kaya Fosok ing otak kanthi kokain kronis lan pangobatan kronis liya. Neuron 13:1235-1244.

CrossRefMedline

  1. ↵

Ishida A, Fujisawa H (1995) Stabilisasi protein kinase II gumantung kalmodulin liwat domain autoinhibitory. J Biol Chem 270:2163-2170.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Jariel-Encontre I, Salvat C, Steff AM, Pariat M, Acquaviva C, Furstoss O, Piechaczyk M (1997) Mekanisme kompleks kanggo c-fos lan degradasi c-jun. Mol Biol Rep 24:51-56.

CrossRefMedline

  1. ↵

Jones S, Yakel JL (2003) Casein kinase ii (protein kinase ck2) ngatur fungsi saluran receptor serotonin 5-ht (3) ing sel 108-15. Neuroscience 119:629-634.

CrossRefMedline

  1. ↵

Kato T Jr, Delhase M, Hoffmann A, Karin M (2003) CK2 minangka KinappaB kinase C-terminal sing tanggung jawab kanggo aktivasi NF-kappaB nalika nampi UV. Mol Cell 12:829-839.

CrossRefMedline

  1. ↵

Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ (1999) Expression saka deltaFosB faktor transkripsi ing otak ngontrol sensitivitas kanggo kokain. Nature 401:272-276.

CrossRefMedline

  1. ↵

Kim KB, Myung J, Sin N, Crews CM (1999) Inhibisi Proteasome dening produk alami epoxomicin lan dihydroeponemycin: pemahaman menyang spesifik lan potency. Bioorg Med Chem Lett 9:3335-3340.

CrossRefMedline

  1. ↵

Kobayashi E, Nakano H, Morimoto M, Tamaoki T (1989) Calphostin C (UCN-1028C), senyawa mikroba novel, minangka inhibitor protein kinase C. Biokim Biophys Res Commun 159:548-553.

CrossRefMedline

  1. ↵

Krek W, Maridor G, Nigg EA (1992) Kasein kinase II minangka enzim sing akeh banget. J Cell Biol 116:43-55.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Krohn NM, Stemmer C, Fojan P, Grim R, Grasser KD (2003) Phosphorylates protein protein kinase CK2 protein domain kelompok mobilitas dhuwur SSRP1, ndadekake pangenalan DNA rusak UV. J Biol Chem 278:12710-12715.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DEH, Truong HT, Russo SJ, LaPlant Q, Whistler K, Neve RL, Self DW, Nestler EJ (2005) Remodeling kromatin minangka mekanisme kunci sing ndasari kelenturan kokain ing striatum. Neuron 48:303-314.

CrossRefMedline

  1. ↵

Lieberman DN, Mody I (1999) Casein kinase-II ngatur fungsi saluran NMDA ing neuron hippocampal. Nat Neurosci 2:125-132.

CrossRefMedline

  1. ↵

Litchfield DW (2003) Protein kinase CK2: struktur, aturan lan peran ing pancet seluler babagan urip lan pati. Biochem J 369:1-15.

CrossRefMedline

  1. ↵

Manabe T, Kuramoto N, Nakamichi N, Aramachi K, Baba K, Hirai T, Yoneyama M, Yoneda Y (2001) Degradasi protein c-Fos sing dikepengini dening N-methyl-dasam-aspartic ing fraksi nuklir saka hippocampus murine. Brain Res 905:34-43.

Medline

  1. ↵

Mandelzys A, Gruda MA, Bravo R, Morgan JI (1997) Ora ana antigen sing ana hubungane karo 37 kDa lan aktivitas DNA-mengikat AP-1 ing otak tikus asam fosB yang diolah asam. J Neurosci 17:5407-5415.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Marin O, Meggio F, Marchiori F, Borin G, Pinna LA (1986) Kelompok situs casein kinase-2 (TS) saka sitosol ati tikus. Sinau karo subtipe peptida model. Eur J Biochem 160:239-244.

  1. ↵

McClung CA, Nestler EJ (2003) Regulasi ekspresi gene lan ganjaran kokain dening CREB lan DeltaFosB. Nat Neurosci 6:1208-1215.

CrossRefMedline

  1. ↵

McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ (2004) DeltaFosB: minangka pamindhahan molekuler kanggo adaptasi jangka panjang ing otak. Brain Res Mol Brain Res 132:146-154.

Medline

  1. ↵

Meggio F, Pinna LA (2003) Siji-ewu-lan-siji substrat protein kinase CK2? FASEB J 17:349-368.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Meggio F, Donella-Deana A, Pinna LA, Moret V (1977) Fosforilasi fraksi kasein kanthi ati tikus 'phosvitin kinase.'. FEBS Lett 75:192-196.

Medline

  1. ↵

Meggio F, Brunati AM, Pinna LA (1983) Autofosphorylation saka tipe 2 kasein kinase TS ing loro alpha- lan beta-subunit. Pengaruh beda efekor. FEBS Lett 160:203-208.

CrossRefMedline

  1. ↵

Meggio F, Shugar D, Pinna LA (1990) Turunan Ribofuranosyl-benzimidazole minangka inhibitor kasein kinase-2 dan kasein kinase-1. Eur J Biochem 187:89-94.

Medline

  1. ↵

Meggio F, Marin O, Pinna LA (1994) Kekhususan substrat protein kinase CK2. Cell Mol Biol Res 40:401-409.

Medline

  1. ↵

Miller C, Zhang M, He Y, Zhao J, Pelletier JP, Martel-Pelletier J, Di Battista JA (1998) Transkripsi induksi gen siklooxygenase-2 dening inhibisi asam okada saka aktivitas fosfatase ing kondomit manusia: ko-stimulasi protein AP-1 lan CRE nuklir. J Cell Biochem 69:392-413.

CrossRefMedline

  1. ↵

Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) Perubahan tingkat jaringan ing ekspresi protein Fos-Jun sing induktif ing striatum sajrone perawatan lan mundur. Neuron 17:147-156.

CrossRefMedline

  1. ↵

Morgan JI, Curran T (1995) Gen-gen awal: sepuluh taun. Trends Neurosci 18:66-67.

CrossRefMedline

  1. ↵

Nakabeppu Y, Nathans D (1991) A wangun FosB sing ditindakake kanthi alami sing nyegah kegiatan transkripsi Fos / Jun. Cell 64:751-759.

CrossRefMedline

  1. ↵

Nestler EJ, Barrot M, Self DW (2001) Delta FosB: owah-owahan molekul terus-terusan kanggo kecanduan. Proc Natl Acad Sci USA 98:11042-11046.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Neve RL, Howe JR, Hong S, Kalb RG (1997) Pengenalan subunit reseptor glutamat 1 menyang neuron motor in vitro lan vivo nggunakake virus herpes simplex rekombinan. Neuroscience 79:435-447.

CrossRefMedline

  1. ↵

Nuthall HN, Joachim K, Stifani S (2004) Fosforilasi serine 239 saka Groucho / TLE1 dening protein kinase CK2 penting kanggo inhibisi diferensiasi neuronal. Mol Cell Biol 24:8395-8407.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Okazaki K, Sagata N (1995) Jalur kinase Mos / MAP nyegah c-Fos dening phosphorylation lan tambahan kegiatan ganti ing sel NIH 3T3. EMBO J 14:5048-5059.

Medline

  1. ↵

Palombella VJ, Rando OJ, Goldberg AL, Maniatis T (1994) Jalur ubiquitin-proteasome dibutuhake kanggo ngolah protein prekursor NF-kappa B1 lan aktivasi NF-kappa B. Cell 78:773-785.

CrossRefMedline

  1. ↵

Papavassiliou AG, Treier M, Chavrier C, Bohmann D (1992) Degradasi target c-Fos, nanging ora v-Fos, kanthi sinyal gumantung fosforilasi ing c-Jun. Ilmu 258:1941-1944.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E (2003) Ekspresi spesifik wilayah utek saka mutan negatif dominan saka c-Jun ing tikus transgenik ngurangi sensitivitas kanggo kokain. Brain Res 970:73-86.

CrossRefMedline

  1. ↵

Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ (2004) Induksi saka DeltaFosB ing struktur otak sing menehi ganjaran sawise kaku nemen. J Neurosci 24:10594-10602.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Persico AM, Schindler CW, O'Hara BF, Brannock MT, Uhl GR (1993) Ekspresi faktor transkripsi otak: efek saka amphetamine akut lan kronis lan stres injeksi. Brain Res Mol Brain Res 20:91-100.

Medline

  1. ↵

Ploegh HL, Dunn BM (2000) Modifikasi pasca translasi: fosforilasi lan fosfatase. Ing: Protokol saiki ing ilmu protein (Dunn BM, ed.) Pp. 13.01-13.02. New York: Wiley and Sons.

  1. ↵

Pyerin W, Burow E, Michaely K, Kubler D, Kinzel V (1987) Sifat katalitik lan molekul sing paling dimurnikan phosvitin / casein kinase tipe II saka sel epiteli ing manungsa (HLA) lan hubungan karo ecto protein kinase. Biol Chem Hopey Seyler 368:215-227.

Medline

  1. ↵

Reikhardt BA, Kulikova OG, Borisova GY, Aleksandrova IY, Sapronov NS (2003) Status sistem protein kinase CK2-HMG14 ing umur amnesia sing ana ing tikus. Neurosci Behav Physiol 33:799-804.

Medline

  1. ↵

Roberts BJ, Whitelaw ML (1999) Degradasi reseptor domain dioksin homolog helix-loop-helix / Per-ARNT-Sim dhasar liwat path ubiquitin / protease. J Biol Chem 274:36351-36356.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Rost B, Yachdav G, Liu J (2004) Server PredictProtein. Nucleic Acids Res 32:W321-W326.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Rylski M, Kaczmarek L (2004) Target AP-1 ing otak. Ngarep Biosci 9:8-23.

CrossRefMedline

  1. ↵

Sahin B, Kansy JW, Nairn AC, Spychala J, Ealick SE, Fienberg AA, Greene RW, Bibb JA (2004) Karakterisasi molekul saka adenosin kinase rekombinant mouse lan evaluasi minangka target fosforilasi protein. Eur J Biochem 271:3547-3555.

Medline

  1. ↵

Salvat C, Aquaviva C, Jariel-Encontre I, Ferrara P, Pariat M, Steff AM, Carillo S, Piechaczyk M (1999) Apa ana sawetara jalur proteolitik sing nyumbang kanggo degradasi protein c-Fos, c-Jun lan p53 ing vivo? Mol Biol Rep 26:45-51.

CrossRefMedline

  1. ↵

Schmidt R, Hecker E (1975) Autoksidasi ester phorbol ing kahanan panyimpenan normal. Res resiko kanker 35:1375-1377.

FREE Full Text

  1. ↵

Schwarz EM, Van Antwerp D, Verma IM (1996) Fosforilasi konstitusi saka IkappaBalpha dening casein kinase II ana sing luwih disengaja ing serine 293: requirement for degradation of free IkappaBalpha. Mol Cell Biol 16:3554-3559.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Sears R, Leone G, DeGregori J, Nevins JR (1999) Ras nambah stabilitas protein Myc. Mol Cell 3:169-179.

CrossRefMedline

  1. ↵

Silva-Neto MA, Fialho E, Paes MC, Oliveira PL, Masuda H (2002) Fosforilasi bebas nukleotida siklik saka vitellin dening casein kinase II diresapi saka Rhodnius oliytus oosit. Biokim Mol Biol 32:847-857.

CrossRefMedline

  1. ↵

Skinner M, Qu S, Moore C, Wisdom R (1997) Transkripsi aktivasi lan transformasi dening protein FosB mbutuhake fosforilasi domain aktivasi terminal carboxyl. Mol Cell Biol 17:2372-2380.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Stemmer C, Schwander A, Bauw G, Fojan P, Grasser KD (2002) Protein kinase CK2 macem-macem fosforilasi protein kelompok mobilitas kromosom B jroning B (HMGB) modulasi stabilitas lan interaksi DNA. J Biol Chem 277:1092-1098.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Stevens I, Derua R, Rondelez E, Waelkens E, Merlevede W, Goris J (1999) Identifikasi cyk, kinase B2 siklik, minangka protein kinase II kalsium / kalmodulin lan perané sajroning mateng Xenopus laevis oocyte. Exp Res Res 252:303-318.

CrossRefMedline

  1. ↵

Suh HW, Choi SS, Lee JK, Lee HK, Han EJ, Lee J (2004) Regulasi c-fos lan ekspresi gen c-jun dening lipopolysaccharide lan sitokin ing astrocytes budayawan utama: efek jalur PKA lan PKC. Arch Pharm Res 27:396-401.

Medline

  1. ↵

Szyszka R, Boguszewska A, Grankowski N, Ballesta JP (1995) Fosforilasi diferensial protein asam ribosom saka sel ragi dening loro kinase protein endogen: kasein kinase-2 lan kinase 60S. Acta Biochim Pol 42:357-362.

Medline

  1. ↵

Tamaoki T, Takahashi I, Kobayashi E, Nakano H, Akinaga S, Suzuki K (1990) Calfostin (UCN1028) lan senyawa kalphostin, kelas inhibitor tartamtu lan kuat ing protein kinase C. Adv Kaping kalih Rasul Phosphoprotein Res 24:497-501.

Medline

  1. ↵

Torres J, Pulido R (2001) PTEN tumor suppressor di fosforilasi dening kinase protein CK2 ing terminal C. Implikasi kanggo stabilitas PTEN kanggo degradasi-mediasi proteasome. J Biol Chem 276:993-998.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Tsubuki S, Saito Y, Tomioka M, Ito H, Kawashima S (1996) Inhibisi diferensial saka kalpain lan aktivitas proteasome dening peptidyl aldehydes di-leucine lan tri-leucine. J Biochem (Tokyo) 119:572-576.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Tsurumi C, Ishida N, Tamura T, Kakizuka A, Nishida E, Okumura E, Kishimoto T, Inagaki M, Okazaki K, Sagata N (1995) Degradasi c-Fos dening proteasome 26S dipercepat dening c-Jun lan kinase protein sawetara. Mol Cell Biol 15:5682-5687.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

GM Unger, Davis AT, Slaton JW, Ahmed K (2004) Protein kinase CK2 minangka regulator saka urip sel: implikasi kanggo terapi kanker. Target Kanker Narkoba 4:77-84.

CrossRefMedline

  1. ↵

Vial E, Marshall CJ (2003) Kegiatan kinase ERK-MAB nglindhungi anggota kulawarga FOS FRA-1 marang degradasi proteasomal ing sel karsinoma usus. J Cell Sci 116:4957-4963.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S (2002) ΔFosB ngaturake roda mlaku. J Neurosci 22:8133-8138.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

AJ Whitmarsh, Davis RJ (2000) Fungsi fungsional transkripsi dening fosforilasi. Cell Mol Life Sci 57:1172-1183.

CrossRefMedline

  1. ↵

Mangsa B, Kautzner I, Issinger OG, Arnold HH (1997) Loro situs fosforilasi CK2 protein kinase sing penting kanggo aktivitas Myf-5. Biol Chem 378:1445-1456.

Medline

  1. ↵

Wisniewski JR, Szewczuk Z, Petry I, Schwanbeck R, Renner U (1999) Fosforilasi konstanta pada buntut asam dari gugus-gugus mobilitas tinggi protein 1 oleh casein kinase II mengubah kesesuaian, stabilitas, dan spesifikasi mengikat DNA. J Biol Chem 274:20116-20122.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Yamaguchi Y, Wada T, Suzuki F, Takagi T, Hasegawa J, Handa H (1998) Casein kinase II berinteraksi karo domain bZIP saka sawetara faktor transkripsi. Nucleic Acids Res 26:3854-3861.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Yanagawa T, Yuki K, Yoshida H, Bannai S, Ishii T (1997) Fosforilasi protein tekanan A170 dening kasein kinase II ing macrophages. Biokim Biophys Res Commun 241:157-163.

CrossRefMedline

  1. ↵

Yankulov K, Yamashita K, Roy R, Egly JM, Bentley DL (1995) Inhibitor elongation transcriptional 5,6-dichloro-1-beta-d-pranatolilbenzimidazole nyebabake faktor transkripsi IIH sing ana hubungane karo kinase protein. J Biol Chem 270:23922-23925.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Yen J, Kawicaksanan RM, Tratner I, Verma IM (1991) Wangun singkatan alternatif FosB minangka regulator negatif kanggo aktivasi transklusi lan transformasi dening protèin Fos. Proc Natl Acad Sci USA 88:5077-5081.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Yin X, PT Jedrzejewski, Jiang JX (2000) Fosforilasi Casein kinase II lensa connexin 45.6 lan melu degradasi. J Biol Chem 275:6850-6856.

Abstrak / FREE Full Text

  1. ↵

Yoza BK, Brooks JW, Mizel SB (1992) Induksi komponen transek AP-1 sajrone aktivasi T-sel dening interleukin 1 lan ester phorbol. Beda Cell Pertandhingan 3:677-684.

Abstract

  1. ↵

Yu S, Wang H, Davis A, Ahmed K (2001) Akibat saka CK2 menehi sinyal kanggo matrik nuklir. Biochem Cell Mol 227:67-71.

CrossRefMedline

  1. ↵

Yu S, Davis AT, Guo C, Hijau JE, Ahmed K (1999) Penargetan diferensial protein kinase CK2 menyang matriks nuklir marang overexpression transient saka sawijining subunit. J Cell Biochem 74:127-134.

CrossRefMedline

  1. ↵

Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, MP Cassidy, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ (2006) ΔFosB: peran penting kanggo ΔFosB ing aksin inti ing aksi morfin. Nat Neurosci 9:205-211.

CrossRefMedline

Artikel sing nyathet artikel iki

  • Responsif Tingkah laku lan Struktural kanggo Cocaine Nemen Nggawe Loop Feedforward Nglelebakake {Delta} Protein Kinase II FosB lan Calcium / Calmodulin-dependen ing Nucleus Shell Accumbens Jurnal Neuroscience, 6 March 2013, 33(10):4295-4307
  • Overexpression Striatal saka {Delta} FosB Ngasilake Gerakan Tumindak Levodopa-Nimbulaké Kronis Jurnal Neuroscience, 26 Bisa 2010, 30(21):7335-7343
  • Abstract
  • Tèks Penuh
  • Tèks Penuh (PDF)
  • Abstract
  • Tèks Penuh
  • Tèks Penuh (PDF)
  • Abstract
  • Tèks Penuh
  • Tèks Penuh (PDF)
  • Abstract
  • Tèks Penuh
  • Tèks Penuh (PDF)
  • Mekanisme transkripional saka kecanduan: peran {Delta} FosB Transaksi filosofis saka Royal Society B: Ilmu Biologi, 12 Oktober 2008, 363(1507):3245-3255
  • Kekuwatan kanggo reinstatement perilaku methamphetamine-seeking ing glial cell-derived neurotrophic factor mutant mice Jurnal FASEB, 1 July 2007, 21(9):1994-2004
  • Protein-1 Transkripsi Faktor ing Epithelium Pernapasan Karsinogenesis Riset Kanker Molekuler, 1 February 2007, 5(2):109-120