Cdk5 فاسفوریټیټونه د ډاپیمین D2 ریسیورټر او د برقی سټراینګ سنجول (2013)

تبصره: دا ښکاره کوي چې د Cdk5 د ډاپینین D2 رییکورډونو تنظیم تنظیموي. په حیرانتیا سره، د ژباړې فکتور Deltafosb د Cdk5 تولید هڅوي.

جیونگ جی، پارک YU، کیم ډی.، لی ایس، کاکاک Y، او ایل. (2013) پوزه یو ایکسومکس (ایکسینیمکس): ایکسکسیم. Doi: 8 / journal.pone.12

انتزاعي

د ډاپامین D2 رسیدونکی (DRD2) یو کلیدي ریپټر دی چې د ډومامینین تړل شوي دماغي فعالیتونه لکه موډ، انعام، او احساس منځګړوي. Cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) د پروین لارښوونکی سرینین / threonine kinase دی چې د هغه فعالیت د دماغ انعام سرک کې ضمیمه شوی. په دې څیړنه کې، موږ ومونده چې د DRD321 (DXNXXXXXX) د دریمې داخلي پایپ په سیرین 321 پاتې کیدو (S2) د Cdk2 یو نوی تنظیم تنظیم دی. د D3XXXX په S5 کې د Cdk5 پورې اړوند فاسفوریشن په vitro او د حجرو کلتور سیسټمونه.

موږ نور هم ولیدل چې د S321 فاسفوریټلشن د DRD2 د ژوندیستونکي هڅول شوي سطحې بیان مخه ونیوله او د GDP پروټین سره یې DRD2 ته کمه کړه. سربېره پر دې، د سټراټيټ CAMP لاره د هیتولوژیس سیسټم کې او د P35 ناتوټ جنبونو څخه ابتدايي نیورونالیز کلتورونو کې د ډی ډی ډیکسکسومکس کم کموالی فعالیت له کبله اغیزمن شوی. دا پایلې ښیي چې د S5 لخوا د Cdk321-منځګړ فاسفوریټلریشن د DRD2 فعالیت منعکس کوي، د ډاپامین سمبول کولو لپاره یو نوی تنظیم کونکي میکانیزم چمتو کوي.

ارقام

تجهیزات: جیونگ جی، پارک YU، کیم ډی.، لی ایس، کاکاک Y، او ایل. (2013) Cdk5 فاسفوریټیټونه د ډاپامین D2 رسیدونکی او د برقی سټینګینګ السته راوړي. پوسټ یو ایکس ایکس ایکس (ایکس این ایم ایکس): ایکسکسیم. Doi: 8 / journal.pone.12

اېډېټر: جیمز پورتر، د امریکا د متحده ایالاتو د شمالي ډوکو پوهنتون

ترلاسه شوي: می 20، 2013؛ منل شوی: نومبر نومبر 14، 2013؛ خپور شوی: د دسمبر په 31، 2013

د کاپی حق © 2013 جیونگ او ال. دا د خلاص لاس رسی مقاله ده چې د شرایطو الندې ویشل کیږي د Creative Commons Attribution License، کوم چې غیر محدود شوي استعمال، ویش، او په هره منځني کې بیا تولید، اجازه ورکوي چې اصلي لیکوال او سرچینه اعتبار کړي.

تمویل: دا کار د بسپنو لخوا (د NRF-2012RXNAXXAXAXA1A2 او NRF-2XXAXAXUMUMUMUMUMUMUM) لخوا د کوریا د حکومت (MSIP) څخه ملاتړ شوی او همدارنګه د کوریا د NRF لخوا اداره شوی د نړیوالې همکارۍ د پروګرام چوکاټ سره سم ملاتړ شوی (01012923XXXXNIXXA2012) او د کوریا دماین ریس ریس انسټیټیوټ (KBRI) د MSIP بنسټیز تحقیق پروګرام (1-4). SKP د شیزفرینیا او ډیپلوماس (NARSAD) د ځوان پلټونکي اکاډمۍ په اړه د تحقیق لپاره 1028200 او 2012 ملي ایتالف و. بسپنه ورکوونکو د مطالعې ډیزاین کې هیڅ رول نه درلود، د معلوماتو راغونډولو او تحلیل، د خپریدو پریکړه، یا د منبع سکرټ چمتو کول.

د سیالیو ګټې: لیکوالان اعالن کړي چې د سیالۍ ګټې شتون نلري.

پېژندنه

د ډاپامین سنګینګ د دماغ په بیلابیلو فعالیتونو کې شامل دي په شمول د موټرو همغږۍ، د موډ کنټرول او د انعام میکانیزمونه [1]. د برمته کولو په برخه کې د ډاپامین السلیک کولو یوه لویه برخه د سټراټيټ متوسط ​​سپینی نیورورسون (MSNs) لخوا په ډاګه کیږي چې د ډاپامین ریپټرونو انتخابي توضیح څرګندوي او د ډیپینینجیک انټرنیټ په اصل کې د حوزې ټیټ زون) VTA (او د پام وړ نریرا) SN) [2]. د ډاپامین ریپټرونه د پروټین-ملګری رسیدونکي (GPCR) دي چې د اوه ترانسپیمران ډومینونه لري او دوه فرعی ډولونه لري، D1-like او D2-like receptors، چې دا د ډاپامینین سمبول کې مثبت عملونه منځګړیتوب کوي [1]. د بیلګې په توګه، د ډاپینین D1-like receptors (D1، D5) د اینینیالییل سایټس فعال کول د G له لارېαs او د CAMP د داخلي کچې کچه لوړه کړي، مګر د ډاپامین D2-ورته رسیدونکي) D2، D3، D4 (د Adenylyl سایکل کلیک له الرې Gαi او د CAMP د داخلي کچې کمول [1], [3].

د ډاپامینین رییکورټرونو په مینځ کې، D2 ریسیور) DRD2 (د ډیرو مهمو رواني اختالفونو په روانوفیسولوژي کې شامل دي په شمول د شیزوفینیا او مخدره توکو روږدي [4]لکه داسې چې د ډیری انتي بیوکوټ درملو لږ تر لږه په ډیرو اندازو کې DRD2 هدف لري. دا هم معلومه ده چې د DRD2 فعالیت د څارویو ماډلونو کې د مخدره موادو د ناوړه ګټې اخیستنې د چلند پایلو سره په ښه توګه تړاو لري [5]. د انډیډیډ پیپرسینټینټ او د موډ سټیلیلیک اغېز هم د DRD2 یا د پی ډی ای، ERK او GSK3 لخوا منځته راغلی د ډیټرایټ انترالیلر السلیک کولو د حجری بیان کې بدلون سره تړاو لري. [1], [4], [6]. په دماغ کې د DRD2 لپاره د دغو مهمو رولونو سره سره، هغه بشپړ میکانیزمونه چې د ډیټ ډیینګکس ځانګړتیاو لپاره د حرکتون او پیچلیتوب معرفي کوي په بشپړ ډول نه پوهیږي.

د شواهدو د لیږد لین ښیې چې د پوتین ډیپلوماتیک تغیرات د DRD2 فعالیت په ښه کولو کې ښکیل دي. د DRD2 پراخه پراخه ګلیکوسیلین د عکس العمل په لیبل مطالعې کې وښودل شو [7]، او د DRD2 په دننه کې د ډوبفیلوډ بانډ جوړول هم د لیګ پلي کیدو لپاره یو مهم تعدیل په توګه پیژندل شوی [8]. برسیره پردې، د DRD2 د فاسفوریلشن سایټونه په پیل کې په نښه شوي وو په vitro د راډیسوسونو سره مرسته، د مختلفو قطعاتو له خوا تعقیب د مختلفو تنظیم کونکو لارښوونو لپاره لارې برابروي [9]. په حقیقت کې، پروټین کینیس سي C (PKC) د Intracellular کلسیم د DRD2 منځګړیتوب متحرک کول تنظیموي او د DRD2 تعامل د سایټوسیکلیټ پروټینز سره توپیر کوي. [10]. د GPCR kinase لخوا فاسفوریشن د 2 (GRK2) لخوا د DRD2 د ایونونسټ-حوصله شوي استحکام کولو طریقې تنظیموي. [11].

Cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) د پروین لارښوونکي سرین / threonine kinase دی چې د غوره فعال فعالیتونو د دماغ مشخص بیان له امله ترجیحاتي فعالیت لري، P35 او P39 [12]. Cdk5 په بیالبیلو نیروالولیک پروسو کې شامل دي په شمول د نیورولینګ مهاجرت او د محون الرښود، او د Cdk5 او P35 پوستکي چوپات د cortical layering کې د خرابۍ ښودنه کوي. [13]. په دې وروستیو کې، دا وښودل شو چې د ویواکسینومکس فاسفوریټلشن او Cdk1 لخوا Ephexin د ډینټریتیک سپی مورفیوجنسی تنظیموي [14]. برسېره پردې، Cdk5 د NMDA ریسیورور، NR2B، او NR2A-منځګړې NMDA سیسټمونو سطحې بیان کچه هم تنظیموي [15], [16]. دا د یادونې وړ ده چې د شواهدو ډیری ټوټه د Cdk5 او د ډاپامین سیسټم ترمنځ متضاد اړیکو ښودلې. Cdk5 فاسفوریټیټس ټریروسین هایدروکسیلس (TH)، د دې ثبات تنظیم کول، او په همدې توګه د ډاپینینجیک کورټیساسیس ساتل [17]. په پوسټینپټیک نیورونونو کې، کله چې د ډومینین او ساککلیک - AMP تنظیم شوی فاسفپروپټینین-75kD تنظیم شوی) DARPP-32 (د Cdk32 لخوا فاسفوریټل شوی، دا کولی شي د PKA فعالیت مخه ونیسي او پدې توګه د ډاپامین DRD5-منځګړیتوب PKCA سنګینګ [18]. په زړه پورې خبره، کله چې کوکاین، د ډاپامین ریپسرز یو غیر مستقیم اډونیزم، په کلینیکي توګه د بوټس، MRNA او Cdk5 د پروټین کچې کې مدیریت کیږي په منځنۍ سپینی نیورونونو کې زیاتوالي [19]. په ټولیز ډول، Cdk5 ښکاري چې د مخدره توکو په واسطه تحلیل synaptic موافقت کې ښکیل دي. پدې څیړنه کې، موږ د DRD2 او Cdk5 فعال فعالیت ښودلی چې نور یې د ډپیمامین سمبول کې د Cdk5 رول پراخوي.

مواد او دودونه

انتيبايد

د خرگو ضد ضد سیرمس د پی ډی پیډیدیدونو په واسطه پورته شوی و چې د DRD321 (DXNXXXXXX) د دریمې داخلي پایپ د فاسفیو سیرین 321 (pS2) په شمول. فاسفوپو پیپایډیس، CNPDpSPAKPEK (PEPTRON)، د انفیکشن پاکولو (2، PIERCE) لپاره د پیپټینډ کانګریس شوي کالم جوړولو لپاره کارول شوی. د PS3 انټيبیو د تولیدونکي لارښوونې څخه وروسته د تثبیت پاکولو سیسټم رامینځته شو. پاک فاسفیو انټيبیډ په PBS کې د 20401٪ sodium azide او 321٪ gelatin سره زیرمه شوي. د مایکروسافټ ضد - Cdk0.1 انټيبیو) SC-0.1 (او د خرگو ضد ضد P5 انټيبیو) sc-249 (د لویدیځ بلوټینګ او سیونکسکسومکس / p35 د امونیوټیک کیمیا لپاره کارول شوي. د مایکروسافټ ضد GFP انټي بیوډ) سکینګ ایکس ایکس (د امونپروپیشن لپاره کارول شوی او د ډی ډي ډی ایکس اینومیکس-GFP لویدیځ بندیدل. د خرگو ضد ضد FLAG انټیبوډ (Sc-820)، د خرگو ضد ضد ضد انټي بیوډی (sc-5)، د مایکس ضد ضد GST انټي بیوډ (Sc-35)، او د مایکرو ضد ضد GAPDH انټيبیو (sc- 9996) د سانتا کروز بایو ټیکنالوژیو څخه اخیستل شوي.

حیوانات

p35 knockout mouse د جاپان کې د RIKEN دماین ساینس انسټیټوټ کې د ډاکټر کاتسووکو میکوشاiba څخه یو ډول ډالۍ و او د لومړنیو نیورون کلتور لپاره یې کار واخیست. د جین ټایپینګ لپاره د پریمر سیٹونه 5-GGTCTCCTCTTCTGTCAAGAAG، 5-GCTCTGCTAGACACATACTACTTTAC او 5- ټیکټیک GCACGAGACTAGT لکه څنګه چې مخکې بیان شوي [20]. د آی آر سي چوغزونه او د سپریګ ډالي چوپۍ د دماغ لیزاټ چمتو کولو لپاره کارول شوي. د څارويو ټول طرزالعمل د پوهنګ پوهنتون د ساينس او ​​ټيکنالوجي د بنسټيز څاروي د پاملرنې او کارولو کمېټې لخوا تصويب شو.

پلاسمید جوړونه

د انسان DRD2 په EGFP-N1 پلاسمید ویټور او د DRD2 دریم داخلي پایپ کې) د XDUMX-212 امینو اسید اسیدونه په شمول د 373 اضافی امینو اسید اسیدونه د DRD29 اوږد اسوفارف (په PFLAG-CMV-2 کې د پلاسمید ویټر کارول کې کارول شوي. د بشري Cdk2 په PCMV-HA پلاسمید ویټر کې داخل شو او د انسان p5 په PcDNA 35 پلاسمید ویټر کې داخل شو. د انسان Cdk3.1 د Cytomegalovirus (CMV) پرووموټر سره د انسان p5 سره په PcDNA 35 ویکټر کې داخل شو ترڅو د امونسکایټیم کیمیا لپاره د دوه اړخیز بیان جوړونه) Cdk3.1 / p5 (، د ریکورور داخلي کولو عاید لپاره [35S] -GTPγS بسته بندۍ، radioligand بسپنه شوې او CAMP انزیم ایموناسوسی.

په ویټرو کې د کانټیسټ امسا

IP تړل شوی په vitro د کمینیس عاید په توګه ترسره شوی. د ټول ماغز دماغ د 3 ML erythrocytes lysis buffer (ELN) (50 ایم Tris (pH 8.0)، 250 ایم NaCl، 5 ایم ایم ای ډی ای، 0.1٪ NP-40 لخوا د 20 لخوا د ډون کور کورینر ډک شوی و چې د ماغز دماغ لیکلو لپاره لیږل شوی و. . لینټس په 30 کې د 16,000 منبع، سونز شوی، او سنفرافیګ لپاره د بټ په واسطه ضبط شوي وو. g د 10 د لپاره. دا سپرنټینټ د ضد-خرگو ضد ضد - ایکس ایکسیمیکس انټيبیو سره خوندي شوي وو ترڅو د Cdk35 / P5 کمپنۍ ترالسه کړي. Cdk35 / P5 پیچلي او د GST فیوژن پروټین د اډینزین 35-triposphate سره مخلوط شوی، [γ-32P] (NEG-502H، PerkinElmer) او د کنینټ بفر کې نصب شوی (30 mm HEPES (pH 7.2)، 10 MM MGCl2، 0.2 MM DTT (د 1 H لپاره د خونې د حرارت درجه کې [18], [21]. ثابت Cdk5 / P25 پیچلی (14-516، Millipore) هم کارول شوی په vitro لکه څنګه چې پورته تشریح شوي د کمیسس عاید. د 2 × نمونې لیډر بفر د عکس العمل مخلوط ته اضافه شوي او په 100 ° C کې یی نصب شوي. دغه نمونه وروسته د SDS-PAGE تابع شوي و او وچ خیل جال د آورډوډیوژرافی لخوا ارزول شوی و.

د مایع کروماتورۍ (LC) -اساس سپیکترومیتری (ایم ایس) / د MS تحلیل

د LST-D2i3 پروټین د LC-MS / MS لخوا د IP تړل شوي تعقیب الندې تجزیه شوی په vitro د نازیانو عاید. موږ د X !! تندیم (نسخه ډیک-ایکس این ایکس ایکس-ایکسومکس) په کارولو د LC-MS / MS ډاټا پیپتیده پیژندنه ترسره کړه. د را راټولو هرې دوسیه لومړی ځل د MXXML بدل شوی و چې د پرو پروومومیک پایپ لین (TPP؛ نسخه 01) کاروي. MS / MS په بدل شوي mzxmls کې سکین شوي بیا د UNIProt مایټ پروټین د ترتیب ډیټابیس (د 2008_4.3 خپرولو په ګډون) د GST-D2010i07 ترتیب په شمول د X X Tandem په کارولو پلټنه کوي. زغم د 2 دا ته د مخکینر آئنز او 3 دا لپاره د ټوټو آئنونو لپاره ټاکل شوی و. د توسپسین لپاره د انزیم مشخصیت کارول کیده. د متغیر تعدیل انتخابونه د سیسټمین (3 دا)، د مییتونین اکسیډریشن (2 دا)، د هایدروالیس اسپرپرین (57.021 دا) او د سرین فاسفوریشنشن (15.995 Da) لپاره د کاربیمیدومیتیلینشن لپاره کارول شوي.

امونپروپیشن

امونپروپیشن د ELB لیزر بفر کې د سیل سایټونو په اړه ترسره شوی و. د GFP ضد انټي بیوډ د سایټونو کې اضافه شوي او د 3 H لپاره په 4 ° C کې تثبیت شوي. اموناکومپلکس د پروټین په واسطه پاک شوي - A ارااروز. دا پیسې د 30 ° C په اړه د 37 د کان لپاره د SDS نمونې د بار کولو بفر سره ضبط شوي، او د SDS-PAGE او لویدیز بلوټونو تابع شوي.

د GST پایښت لرونکې مرستې

د پاک شوي GST او GST-D10XXUMX 2 μg د چوپ دماغ لیسټ سره د 3 H لپاره 1.5 ° C کې راټول شوي. د ګلوټاتینیا (GSH) د 4 μL-منحل شوي Sepharose 30B موټرو) 4-17-0756، GE روغتیایی (د لیزر بفر سره برابر شوی او اضافی 01 H لپاره اضافه شوی. په 1 × د سینټرافیګریشن لخوا موټرو راټولولg او د لینس بفر سره د 4 وختونو سره راټول شوی [22], [23]. د لویدیځ بلوڅ کولو لخوا د Cdk5 او د P35 انټي بیوډ کارولو لخوا ارزول شوي تحقیقات شوي.

د امونسکای کیمیا

Transferected HEK 293 خلیجونه او د خلیجونو په واسطه تغذیه شوي درملو نیورون یوځل د فاسفیت سره نمینۍ (PBS) سره وسوځول شول او د 4 د کان لپاره په سرد 30٪ پارفرمالډیډیډ / PBS کې د ویستلو له الرې ټاکل شوي. ابتدايي انټيبيو په تړل شوي حل کې کمزوري شوه (2٪ د سيروم او 1٪ په پي بي بي کې Triton X-100). الکسفورور-ایکس این ایم ایکس - د مایکروس انټيبیو (اککسومکس، انټیتروجن) او الیکسفلوور-647-conjugated د خرگو ضد انټيبوډ (A20990، Invitrogen) د منډو انټي بیوډ په توګه کارول شوي. هایچسټ د نیوکلیو خوندیتوب لپاره کارول کیده. انځورونه د کوکوک مایکروسکوپی (اولمپس، FluoView-568) لخوا ترلاسه شوي.

د استعمار داخلي کولو ارزونه

د 24 H د لیږد وروسته، حجرې د 1 μM quinpirole (Q102، Sigma) سره د 30 د ماین او 90 د 37 ° C لپاره درملنه شوي. Cellونه په 2 ML کې د سرد PBS او 200 μL aliquots کې د هر غبرګون لپاره کارول شوي و. د نشه يي توکو درمل د خونې په حرارت کې د 3 h لپاره په لاندې پاملرنو کې ترسره شوي؛ 3 nM [3H]-سپیپرونون (NET-565، PerkinElmer)، 3 μM سلیپید (895، TOCRIS)، 10 μM haloperidol (H1512، Sigma). هیدروفوبیک [3H] -سپایپرون کارول شوی و ترڅو د ټولو څرګند شوي ریلیپټرونو لیږد او د هایډروفیلیک سایډپیډ په کارولو کې د مقناطیسي ریسیورډ پابند ځای بدلولو لپاره کارول کیده [3H] -سپایپرون نښې نښانې. د مرمبر-تړل شوي ریکورټر سگنلونه د انترراسیلر ریپټر ارزښتونو د راټولولو له مخې د ټولو څرګند شوي ریزورور ارزښتونو څخه حساب شوي. حجرې په GF / B (Millipore) فلټر کې فلټر شوي او د 3 وختونه د مینځلو بفر سره واخیستل شول) 50 MM Tris-HCl (pH 7.4)، 100 MM NaCl (. فلټرونه وچ شوي وو او د ناڅاپي رادیو وړتیاوې د مایع سټینیلشن ضد کارولو سره اندازه شوې [24].

د حج د لمبر تیاری

د 100 ملی کې د موافقت حجرې د کلتوري برتنونو وروسته د لیږد وروسته وروسته د تودوخې وړ PBS سره واخیستل شول او په 1 ML HME بفر کې حاصل شوي) 25 ایم HEPES (pH 7.5)، 2 MM MGCl2، 1 ایم ایم ای ډي ای). د هایولوجیست شوي سایټونه د 500 × x سره د 15 د کانتینر کولو سره شوي او وروسته سپرنټینټونه 36,000 × g سره د 30 د کانتینر کولو وروسته و. په HME بفر کې بیاځل شوي ځنډونه د پیسو لپاره کارول شوي.

[35S] -GTPγS بسته بندي ارزونه

د حجمبر جریان نسبت د امني بسته کې د 1 μM quinpirole (Q102، Sigma) سره وړاندې کول (25 mm HEPES (pH 7.5)، 1.5 MM MGCl2، د 100 ملی NaCl، 1 ایم ایم ای ډی اې او 0.01 ملی GDP) د 10 د لپاره. [35S] -GTPγS (NET-030H، PerkinElmer) په 3 μL کې د 30 nM وروستیو تمرکز کې اضافه شوی او نور د 90 د ماین لپاره لیږدول شوی. د یخ سړه هوا باندی 170 μL (10 ملی Tris-HCl (pH 8.0)، 100 ایم NaCl، 10 MM MgCl2، او 0.1 mm GTP) د غبرګون مخه نیولو کې اضافه شوه. جبران د GF / B فلټر (Millipore) باندې فلټر شوي او د واینګ بفر سره 3 وخت وینځل (50 mm Tris-HCl (pH 7.4)، 100 MM NaCl). فلټرونه وچ شوي او ریډیټیکیتیا د scintillation counter په کارولو سره اندازه کیده [25], [26].

د ریډولولګنډ بائنسنی ارزونه

چمتو شوي حجري جریان د 0.01 nM سره راټول شوي وو [3H] سپسیپرون (NET-565، PerkinElmer) او د امین بسته کې د 102 د کان لپاره د Quinpirole (Q30، Sigma) تنفس زیاتول (25 mm HEPES (pH 7.5)، 1.5 MM MGCl2، 100 MM NaCl، 1 MM EDTA. جبران د GF / B فلټر (Millipore) باندې فلټر شوي او د واینګ بفر سره 3 وخت وینځل (50 mm Tris-HCl (pH 7.4)، 100 MM NaCl). دا غبرګون د GF / C فلټرونو له الرې د چټک فلټر کولو لخوا فسخه شو. د استعماري رادیو ګازوالی د مایع سټینیلشن ضد استعمالولو سره اندازه شوی [27]-[29].

CAMP انزیم اموناسوسی

Transferected HEK 293 حجرې د 10 μM روللوپرم (R6520، Sigma) سره د 1 h لپاره، او بیا د 0.1 μM فورسکولین سره (F6886، Sigma) سره د درملنې او د Quinpirole (Q102، Sigma) د 30 د ماینونو زیاتیدلو درملنه شوي. لومړني کرهنه شوي درملو نیورون د 10 μM رولپرم سره د 1 h لپاره درملنه شوي، او بیا د 1 H لپاره 1 μM ډاپینینین [22]. د حجرې سایټونه د 0.1 M HCl سره چمتو شوي او د CAMP کچه د CAMP انزیمون اموناسوسی کټ) د سپفیر بایوسینس (لخوا د تولیدونکي الرښود څخه پیژندل شوي.

لومړني کلتوري سټراټيټ نیورون

د سټریټالیټ سیمه د مایانو جنین دماغ څخه جلا شوی (E15). د نسکس نسج په 11095 ° C کې د 0.25 min لپاره د لږ اړین رسنیو) MEM () 4549، Invitrogen (په شمول 100٪ trypsin (T0.1-6، Sigma) او 37٪ DNase I کې جدا شوي. سیلونو په تخته کولو رسنیو کې بیا ځنډول شوي (MEM د 0.01 M HEPES (pH 7.4) او 10٪ (vol / vol) د سیروم سره (16050-122، GIBCO). نیورون د 7 ورځو لپاره ساتل شوي و په vitro (DIV 7) په MEM کې د B27 ضمیمه (17504-044، Invitrogen) سره مخکې له دې چې د CAMP انزیمون اموناسس کې تطبیق شي.

پایلې

Cdk5 د فاسفوریټس سیرین 321 د DRD2 دریمې داخلي لوپ په په vitro

د ناول Cdk5 فرعي پیژندلو لپاره، موږ د سیسټمیکټیک لټون ترسره کول (S / T) PX (K / H / R) د Cdk5 په توګه د پیژندنې موافقې ترتیبات [30] او د DRD2 پېژندل د کاندید فرعي په توګه. د موافقې ترتیب، د سیرین 321 په شمول، د DRD2 (DXNXXXXXX) د دریمې داخلي لوپ په منځ کې موقعیت لري چېرته چې بیلابیل تنظیمونکي میکانیزمونه په نښه شوي [3], [10], [11]. دا ترتیب په ارقام سره د DRD2 په زیرمو کې خوندي دی، د استوګنې فعاله فعالیت اهمیت لري)انځور 1A).

بټه

انځور 1. Cdk5 phosphorylates serine 321 د DD2 په دریم داخلي پایپ کې په ویټرو کې.

(A) د امینو اسید ترتیب ترتیب کول د ډیری ډیزاینډ DRD2 څخه د مختلفو نوعو (shaded) څخه ښکارندوی کوي. د Cdk5 فاسفوریګیشن ساحه د اسټرسک په واسطه ښودل شوي. (B) د IP تړل شوی په vitro د اسټینبینټینټ GST-D2XXXX او GST-D3i2 اتپټینټ پروټینز سره د کمیتیس عاید. د DDXXUMX / P3 کمپنۍ د مایکروس دماغ د استخباراتو څخه د p5 امونپریپسیډ په واسطه جذب شوی د کیینز غبرګون لپاره کارول کیده. د فاسفوریټیټ پروټینز یو ایټرایډيډيګراف د هموم جیل د کوومیسۍ روښانه نیل داغ سره ښودل شوی. آرروډیډ د GST-D35i35s سره راډیټیکیک سګنل ښکارندوی کوي او د پرانی تیر تیر راهیسې د P2 څخه راډیټیټیک السلیکونه څرګندوي. (C) د D3i35 د فاسفوریټل شوي پیپپیډ ټوټه MS / MS MSc. د نظریاتي ویشلو نمونه د سپریم څخه لاندې ښودل شوي. د ټولو ټوټو ایجادونو په منځ کې، وموندل شوي y- او بیتونه په اسټرالیا کې ښودل شوي. د6 او y7 آیسان په جدي توګه د سرینټ 321 د فاسفوریټلینشن نښه کوي. (D) په ویټرو کې د پاک شوي Cdk5 / GST-P25 پیچلي سره د کینیز عاید د GST-D2i3 او GST-D2i3 متقابلو پروټینونو په کارولو سره. د فاسفوریټیټ پروټینونه په آوروردیګراف کې، د کووماسي د روښانه نیل بندۍ سره ښودل شوي. اریروډیډ د GST-D2iXNUM سره سم راډیټیکیک سګنل څرګندوي او پرانی تیر تیرې د GST-p3 څخه راډیواتيکي نښې نښانې څرګندوي.

Doi: 10.1371 / journal.pone.0084482.g001

د D5i2 فاسفوریټیټ لپاره د Cdk3 ظرفیت ارزولو لپاره، موږ د IP تړل ترسره کړ په vitro د مایکرو دماغ لیسټ څخه د فعال فعالینو ډایرکټر / P5 کمپنۍ کارولو کمیسون د P35 امونپروپیشن لخوا د پاک شوي ریټیننټینټ GST-D35i2 سره (د امینو اسید استوګنې 3-212) پروټین د سب سټیټ په توګه. موږ د پاک شوي GST-D373i2 او GST-D3i2 S3A پروټینونو کې د فاسفوریلشن السلیکونه لیدلي، مګر اشاره د GST-D297i2 S3A په کارولو سره د پام وړ کمه شوې وه)انځور 1B). په GST-D321i2 کې د سیرین 3 د فاسفوریټلشن تایید کولو لپاره، موږ د L-MS / MS په اړه د IP تړل شویو نمونو تجزیه ترسره کړه په vitro د LTQ XL ډله ایز سپرمومتوکری په کارولو سره د کمیسیس assays. په عین حال کې، د فاسفیو سیرین 321 پیپټسایډونو ډله ایز فاسفیو پیپایډسونه راټول شوي وو)انځور 1C). په پام کې نیولو سره د LC-MS / MS تحلیل په دوران کې د اړونده لاسته راوړنو معلوماتو نمونه کې نمونوی پروټینونه کشفوي [31]، دا ډاټا وړاندیز کوي چې د سیرین 321 استوګنځای د D5i2 سیمه کې د Cdk3 خورا فاسفوریاليشن سایټ دی. د Cdk321 لخوا د GST-D2i3 کې د سیرین 5 د مستقیم فاسفوریشن ثابتولو لپاره، په vitro د پاک شوي Cdk5 / GST-P25 کمپنۍ کارول د پاک کنسینټینټ GST-D2i3 پروټینونو سره کارول شوی. موږ په GST-D2i3 کې د پام فاسفوریشن سینګ پیژانده چې په GST-D2i3 S321A کې غیر حاضر و)انځور 1D). یوځای شوي، دا پایلې ښیي چې د D2i3 S321 پاتېیدل د Cdk5-منځګړ فاسفوریګریشن لپاره ترجیحی هدف دی.

Cdk5 د فاسفوریټیټ سیرین 321 د ډیرو ډیسیزولر لوپ په ډډونو کې د DRD2 کې

د سیرین 321 د فاسفوریټلینشن پیژندلو لپاره، موږ د فاسفیو سیرین 321 (pS321) لپاره ځانګړی انټي بیوډ لوړ کړ. د IP تړل شوي نمونې بیلګې په vitro د لویدیځ بلوټینګ لخوا د PS321 انټي بیوډ څخه کار اخیستل د نازیانو عاید ارزول شوی. بلوټونو د کیینس غبرګون کې یو ځانګړی بډ ښکاره کړی چې د GST-D2i3 پورې اړه لري)انځور 2A). په CDk321 کې د DRD2 لخوا د DRD5 لخوا د SIRine 293 احتمالي فاسفيفیلټ تصدیق کول، د HEK 2 حجرو څخه GFP د امینوپریپټیتټونو څخه ډیری DRD2-GFP او DRD321 S5A-GFP د HA-Cdk35 او P321 سره یا پرته له دې چې د GFP ضد کارولو څخه کار اخیستل کیږي تحلیل شوي د PS2 انټي بیوډس. د GFP ضد انټي بیوډ ځانګړتیاوې چې د DRD2 خورا زیات ګالیکوزیلینټ له امله پیژندل کیږي د DRD321-GFP په شتون کې لیدل کیږي، او د PS2 انټيبیو موندنه ورته ورته DRD5 یوازې د Cdk35 / PXNUMX سره د ګډ بیان سره اشاره کوي)انځور 2B) [7]. Cdk321، D5i2 (FLAG-D3i2) او د D3i2 (متغیر ډیکس D3i2 S3A) متقابل فارم لخوا د سیینین 321 د فاسفوریلشن نور تصدیق کول. FLAG-DXNXXXXXX او FLAG-DXNXXXXUMX S2A د HA-Cdk3 سره او یا د P2 سره په HEK 3 حجرو کې د SDS-Jill متحرک بدلون تایید لخوا تحلیل شوي. د پام وړ Cdk321-تړل شوي حرکت لیږد د FLAG-D5i35 لپاره لیدل شوی، مګر د FLAG-D293i5 S2 لپاره)انځور 2C). موږ د سرکسینومکس کې د ډیډونیسټ محرک په اړه د DRD2 د فاسفوریاليشن کچه ارزونه کړې. د HEK 321 حجرې چې د DRD293-GFP او Cdk2 / P5 کمپنۍ څرګندوي د Quinpirole لخوا جذب شوي، او د سیل سایټونو څخه GFP امونپریپټیتټس لخوا د لوېدیځ بلوټینټ ضد ضد او د PS35 انټي بیوډونو په کارولو سره تحلیل شوي. موږ وموندله چې د سيکسکسومکس کې د DRD321 کې Cdk5-منځګړ فاسفوریشن د ژوندیست تناسب لخوا اغیزمن شوی نه و، کوم چې د GRK- او PKC مصلحت فاسفوریشنونو څخه توپیر ښیې)انځور 2D) [32], [33]. په ګډه، دا پایلې ښیي چې Cdk5 د سیلولر چاپیریال کې د DRD321 د سرین 2 پاتې کیدو فاسفوریټیټ کولی شي.

بټه

انځور 2. Cdk5 فاسفوریټیټ سیرین 321 په دریم انټریلیل لوپ کې د DRD2 په حجرو کې.

Cdk5-د سیینین 321 منځګړی فاسفوریشن کول د PS321 انټي بیوډ کارولو تحلیل شوی. (A) د IP تړل شویو نمونو بیلګې په vitro د GST-D2i3 پروټینونو په کارولو سره د کمینیس عاید د لویدیځ بلوټینګ) WB (لخوا د اشاره انټي بیوډ سره تحلیل شوي. آرروډیډس د GST-D2XXXXs په ګوته کوي. (B) DRD3-GFP او DRD2 S2A-GFP د HEK-Cdk321 یا P5 سره یا د HEK 35 حجرو کې څرګند شوي. د GFP ضد ضد او د PS293 انټي بیوډونو په کارولو سره د لویدیځ بلوټینګ لخوا د GFP امونپراپسیټیسټونه تحلیل شوي. بریکٹ د DRD321 نښې نښانې او پرانیستې تیرې غاړې اشاره کوي چې د GFP امونپریپټیټس څخه غیر غیرمعمولي سگنل څرګندوي. د IP غبرګون لپاره د ټولو لیسټ د '٪ input' حجم دی. کمزورې پیژندل شوي Cdk2 نښې نښانې د سترګو لخوا ښودل شوي. (C) د جیل خوځښت اعتراف بدلوي. د HEK 5 حجرو لیږل شوي لکه څنګه چې اشاره وشوه د لویدیځ بلوڅ کولو لخوا تحلیل شوي. (D) انتقال شوي HEK 293 حجرې د Quinpirole او د GFP امونپریپټیتس ضد درملنې سره د لویدیځ د GFP ضد ضد او د PS293 انټي بیوډانو سره د لویدیځ ټلویزیوني تحقیق سره ترسره شوي. پرانیستی تیره برخه د GFP امونپریپټیټس څخه غیر غیرمعمولي سگنل څرګندوي.

Doi: 10.1371 / journal.pone.0084482.g002

Cdk5 / P35 کمپلیکس او ډیډکسکسکس په فزیکي توګه ایسوسی ایډ شوي دي

موږ د Cdk5 / P35 کمپلیکس او ډیډکسکسکسکس تر مینځ احتمالي فزیکي تعامل تحقیق کړی ځکه چې ډیری Cdk2 فرعی فرعي پیژندل شوي د فډاک ایکس این ایم ایکسکس / پی ایکس این ایم ایکس پیچ [23], [34], [35]. لومړی، د GST پواسطه تجربه ترسره شوه. خالص ریټینیکټینټ GST-D2i3 پروټین د چوغی دماغ لیسټ او د GST د بیرته راټیټ نیټې اخیستلو سره د لویدیځ بلوټینګ لپاره تحلیل شوي. لکه څنګه چې ښودل شوي انځور 3A، ډاونیزډ Cdk5 او P35 د پیرودلو نیټې کې پیژندل شوي، چې د DRD2 او Cdk5 / P35 کمپلیکس ترمنځ فزیکي تعامل څرګندوي)انځور 3A). برسيره پردې، HA-Cdk5 او P35 د HEK 293 حجرې څخه د GFP امونپریپټیتټسونو کې کشف شوي د DRD2-GFP او Cdk5 / P35 څرګندول)انځور 3B). برسیره پردې، موږ د امونیکټوکیمیکل تحلیلونه ترسره کړل او لیدل شوي چې DRD2-GFP، HA-Cdk5 او P35 د HEK 293 حجرو په مقابل ساحه کې د پام وړ سیمه ایز کولو نښې نښانې ښکاره کوي)انځور 3C، لوړې تختې). موږ همداراز د DRD2 او Cdk5 / P35 د همکارۍ کولو په اړه د نیورولونیک شرایطو کې هم تحقیق کړی. په ډیری وخت کې، DRD2-GFP همدارنګه د پام وړ سیمه اییزیزیزیز هم ښودلی چې د زهرجن Cdk5 او P35 سره د زراعت په واسطه د نیورون) DIV7 (کې، د DRD2 او Cdk5 / P35 تر منځ نور مالتړ فعال لینکونو کې)انځور 3C، لاندې پینلونه). پایلې ښیې چې DRD2 او Cdk5 / P35 کولی شي پیچلې بڼه ونیسي او پدې توګه د دې تصور مالتړ وکړي چې DRD2 د Cdk5 فیزولوژیکي فرعی دی.

بټه

انځور 3. Cdk5 / P35 کولی شي پیچلې بڼه د DRD2 سره.

د A د GST-D2i3 پروتین پاکولو سره د چوغز د دماغ استخراج سره د A د GST د نسکورېدو احتمالونه د لوېديځو بلوڅونو تحلیلونو سره مخامخ شوي. 'مالا' د GST پروټینز پرته د کټ مټ کمښت څرګندوي. (B) د ډی ډي ډی ایکس اینکس او سیډاککسومکس / پی ایکس این ایم ایکس پیچ کمپ امونپروپسیشن. د GFP IP د لیږد شویو حجرو له لیکو څخه د لویدیځ بلوڅ کولو تحلیلونو سره مخامخ شوي. بریکٹ د DRD2 نښې نښانې او پرانیستې تیرې غاړې اشاره کوي چې د GFP امونپریپټیټس څخه غیر غیرمعمولي سگنل څرګندوي. د معلوماتو لپاره یو اضافه شوي بلوټ په سمه توګه ښودل شوي. (C) د ډی ډي ډي ایکسکسکس او سیډکسکسیمکس / p5 د امونیکټوکیمیکل تحلیلونه. د HEK 35 حجرې چې د DRD2-GFP او Cdk2 / P5 څرګندوي د CDk35 او د P293 انټي بیوز (لوړ پینل) سره ګرم شوي. DRD2-GFP یواځې د کرهنې په نیغه نیورونونو کې څرګند شوي او د Cdk5 او د P35 انټي بیوډونو) ټیټ پینل (سره ښایسته شوي. هایچسټ د نیوکلیو خوندیتوب لپاره کارول کیده. د پیمانه بار 5 μm دی. ټول انځورونه د کوکوک مایکروسکوپی (اولمپس، FluoView-35) څخه کار اخیستل شوي.

Doi: 10.1371 / journal.pone.0084482.g003

Cdk5- د منځګړیتوب فاسفوریشن د DRD2 د ریلسیور فعالیت پیلوي

دا راپور ورکړل شوی چې فاسفوریاليشن د GPCRs مهم عنصرونه لکه د G پروټین یوځای کول، د رسیدونکي داخلي کولو، انترراسیلر سیمه ایز کول، او د ماډل ورکوونکي پروټینونو سره انجمن بدلوي [9], [11], [24]. يود ګونسټ ایډز شوی ریکورټر داخلی کول د سنګین انتقال کولو یو مهم تنظیم دی. موږ د DRD5 داخلي کولو لپاره د Cdk2-منځګړتوب ماډل تحقیق کړی. د HEK 293 حجرې چې د DRD2-GFP او DRD2 S321A-GFP سره یا پرته له Cdk5 / P35 پرته د 1 μM quinpirole سره ایجاد شوي ترڅو د اډونیسټ-حوصله شوي DRD2 داخلي کولو)انځور 4A). [3H] د DRD2-GFP سپیپرونون نښانې څرګندوي چې حجرې په 30 د کان quinpirole درملنې کې د پام وړ کم شوي او په 90 min کې بیرته اخیستل شوي. په زړه پورې ده، [3H] د DRD2-GFP او سیډکسکسیمکس / P5 سپیپونون نښیونه د حجرو څرګندولو حجرو هم په 35 د کان quinpirole درملنې کې کم شوي مګر 30 په ما کې ندي اخیستل شوي)انځور 4A، دوهم برخه). له بلی خوا، [3H] د DRD2 S321A-GFP سپیپیرون سگنل څرګندوي چې حجرې په 30 min کې کم شوي او په 90 کې بیرته راوړل شوي، پرته له Cdk5 / P35 سره د ګډ بیان پرته. پخوانیو څیړنو ښودلې چې داخلي DRD2 بیرته د پلازما جھلی ته بیرته راګرځیدلی چې اوږدې اډونیزم محرک [11]. Tمېړه داسې ښکاري چې د DRD5 د Cdk2 منځګړیتوب فاسفوریشن د اډونیسټ-حوصله شوي DRD2 داخلي کولو څخه وروسته د بیا رغونې پروسه کې ښکیل دی.

بټه

انځور 4. Cdk5-منځګړی فاسفوریشن د DRD2 سطحی بیان او د سټرایټ سټینګریشن ته السرسی لری.

(A) DRD2 سطحي بیان د [3H] - سپیپرونون بسپنه شوې عاید. د لیږد شوي HEK293 حجرو د 1 μM quinpirole سره د اشاره شوي وخت او حاصل اخیستلو لپاره هڅول شوي، وروسته د 3 nM [3H] - د 3 h لپاره د سپیپرون درملنه. د راډیو وړتیا اندازه شوې او د سطحې سیګنالونه محاسبه شوي. د خط بارونه د مطلب معنی ± SE (n = 8؛ * p <0.05، ** p <0.01 One د ونیت پوسټ هاک ټیسټ سره ANOVA یو طرفه کول: ټول کالمونه د کنټرول کالم سره پرتله کول). (ب) [35S] -GTPγS بسته بندۍ. د حجرو جریان د لیږد شویو حجرو څخه چمتو شوي چې د نښه شوي لیږد څخه چمتو شوي. د زینګ چمتو کول د 1 μM quinpirole سره ضرب شوي او وروسته یی 3 nM [35S] -GTPγS د 90 دقیقو لپاره. د خط بارونه د مطلب معنی لري represent SE (n = 8؛ * p <0.05، ** p <0.01، *** p <0.001؛ د Bonferroni پوسټ هاک ټیسټ سره یو طرفه ANOVA: د کالمونو ټولې جوړې پرتله کول). (سي) کوینپیرول سیالي کول [3H] - سپیپرونون بسپنه شوې عاید. د لیږد شویو حجرو څخه د لیږلو تیارول د 0.01 nM سره وځنډول شول.3H] -piperone او د 30 دقیقو لپاره د کوینپیرول غلظت غلظت. غیر خطي فشار د ګراف پیډ لخوا ترلاسه شوی. د خطا بارونه د ± SE معنی په ګوته کوي (n = 3). (D) د لیږد شوي HEK 293 حجرو کې د CAMP انزایم امونوماساسونه. لیږد شوي حجرې د 10 h لپاره د 1 µM رولپرم سره چمتو شوي ، او بیا وروسته د 0.1 µM forskolin او د 30 دقیقو لپاره د کوینپیرول غلظت غلظت سره همکاري شوې. غیر خطي فشار د ګراف پیډ لخوا ترلاسه شوی. د غلطۍ بارونه د مطلب معنی ± SE (n = 4؛ ** p <0.01 two دوه ځلې) tټسټونه). (E) کلتوري سټراټيټ نیورونونه د وحشي ډول او P35 نريټرو جنینونو) DIV 7 (لخوا د 10 μM رولپرم سره د 1 د درملنې لپاره د 1 μM ډاپیمینین لخوا د 1 لپاره درملل شوي. تېروتنې د ± SE (n = 4؛ ** استازیتوب کوي.p<0.01؛ دوه ګونی tټسټونه).

Doi: 10.1371 / journal.pone.0084482.g004

موږ د CDk2-منځګړې فاسفوریشن سره تړلی DRD5 ته د ژوندیستونکي محاسبه شوي پروټین یوځای کولو احتمالي بدلون ارزونه وکړه [35S] -GTPγS بسته بندۍ [25], [26]. DRD2-GFP او DRD2 S321A-GFP د Cdk5 / P35 سره یا پرته د HEK 293 حجرو کې څرګند شوي. جینیمونه د 1 μM quinpirole سره چمتو او هڅول شوي او نور اجازه یې [35S] -GTPγS شاملول. DRD2-GFP او Cdk5 / P35 د حجرې جبران څرګندوي د پام وړ خراب شوي [35S] -GTPγS بسپنه د ټولو نورو حجرو سره پرتله کول (انځور 4B). دا پایلې ښیې چې د Cdk5-منځګړ فاسفوریشن د DRD2 په اډونسټ پیژندل شوي پروټین پابندول کموي.

سربيره پردې، د سپينوپيروالي سيالۍ [3H] - سپیپرونون پابندۍ امتحان ترسره شوي ترڅو د اډونیس والیت کې د ممکن احتمالي بدلون تحقیق وکړي د DRD2 په Cdk5-منځګړ فاسفوریشن کې. د [3H] سپیپرونین د Quinpirole د تمرکز د درملنې په مقابل کې د لیبیا څخه د لیږلو تیاری ته اندازه شوی. د کیینپیریلل سیالۍ او [3H] سپیپیرون په DRD2-GFP او DRD2 S321A-GFP کې ورته منطق جوړ کړیi ارزښتونه - د DRD9.789-GFP لپاره -2؛ -DDDXUMUM S9.691A-GFP لپاره، د دې ډاډه کول چې د DRD2 ته د لیګن تړاو تاثیر د CDK321-منځګړ فاسفوریlation لخوا په DRD2 کې نه اغیزمن کیږي)انځور 4C).

Cdk5-منځګړی فاسفوریشن د DRD2-CAMP د سمبالولو لاری لارښوونه کوي

بیا، موږ تحقیق وکړ چې آیا د DDXXUMX لخوا د DRD2 ترمیم کول د لاندنیو سټراینګ الرو اغیزې اغیز کوي. موږ د ډیینزیلیل سایکلس لخوا د ډزسکولین-حوصله شوي CAMP تولید لپاره د DRD5 منځګړیتوب منعکس کړی چې د DRD2-GFP او DRD2 S2A-GFP څرګندوي چې د CAMP انزیم ایوناسوسی لخوا کارول کیږي. DRD321-د حجرو څرګندول د خوراکي توکو په اړه په کانینیریریل کې د CAMP کچه کموالی ښودلی. د یادونې وړ ده چې د Cdk2 / P5 شریکه وینا د CAMP د جوړونې تر ټولو زیات نمونه کمه کړې)انځور 4D، بڼې پینل). له بلې خوا، د ډیرو ډاینګکسکسکسکسکسکس GX کې د حجرو څرګندول، د CPk2 / p321 د بیان پرته د Quinpirole درملنې په ځواب کې د CAMP جوړښتونه په اغیزمنه ډول منع شوي وو)انځور 4D، ښی پینل). دا پایلې ښیې چې د DRD5 کې د Cdk2 منځګړی فاسفوریټلریشن د DRD2 د منع بند فعالیت د ټیم د CMAMP السلیک کولو الر پرانیست. د فزيومولوژيکي اړونده ترتيب کولو په اړه د لازياتو تاييد لپاره، موږ د P35 کې د نريټو جنينونو له کمښت څخه لومړني کره نيورونونه کارولي، چې د Cdk5 يو فعال کارګر. لومړني کرهنه شوي د درملو نیورون سره د 1 μM ډاپامینین سره چلند شوی او د CAMP انزیم ایموناسوسی لخوا تحلیل شوی. د P35 ناکټی چوغیانو څخه نیورون د نمونې ډوله نیورونونو په پرتله د CAMP کچه کمه کړه کله چې د ډاپیمین سره هڅول شوی)انځور 4E). Tیوځای سره نښلول، موږ نتیجه درلوده چې د DRD5 د Cdk2 منځګړیتوب فاسفوریټلشن د DRD2 لخوا د CAMP الره کې د مخنیوي ټیټ کې کمښت کې پایله کې.

د بحث

موږ DRD2 د Cdk5 د یوې نوي فرعي فرعي په توګه پیژانده. داسې ښکاري چې د فاسفوریلشن د DRD2 سطحې بیان کموي چې د DRD2 وروسته د ریکورور داخلي کولو برخلیک باندې اغیز وکړي ځکه چې د DRD2 G کمولi- د سمبالولو او د بریښنا د ټرانسپورټ لاره. لکه څنګه چې د فاسفوریاليشن پاتې کیدو S321 دواړه د DRD2 اوږدمهاله او لنډ ډول کې شتون لري، پدې څیړنه کې وړاندیز شوي میکانیزم کېدای شي د DRD2 په منځګړیتوب کې عمومي مقررات وي..

DRD2 په منځنیو سپینو نیورونونو کې نه یوازې د ډومینین ریپسیور فرعي ټیکټ په توګه پیژندل شوی بلکې د چاپیریال محرکاتو په ځواب کې د شتون په بدلون کې د هغې حساسیت لپاره پیژندل شوی. د DRD2 د Agonist-Induced Disensitization او بیا جوړونې کول په پراخه کچه مطالعه شوي [11], [24]. په ځانګړې توګه، یو شمېر مطالعې ښودلې چې د اوږدمهاله رواني پوټیمولین اغیزې اغیزې، لکه کوکاین او امفافامین، چې د ډیټراټیکل په مطابقت کې د ډپیمینډ سطحی سطح لوړوي، د DRD2 پوسټینپټیکي بدلونونو سره مل کیږي [36]. په واقعیت کې، د پخوانی کوکاین کاروونکي معلومه شوي چې د سټراټالیټ په ساحه کې د DRD2 کچه کمه کړې، او د نیچکس ګازو کې د DRD2 شتون) NACC (د چوپتیا او عنعناتو په اړه د مخدره موادو د موندلو او د تقویې کړنې سره منفي اړیکې ښیي. [37]-[39]. دا موندنې په ډاګه کوي چې د DRD2 فعالیت فعالیت د بېالبېلو محرکاتو په وړاندې غبرګون کې د تطبیق یا معاوضوي تنظیم خورا حساس دی چې په کې د مخدره موادو دوامداره مخنیوی شامل دي. زموږ پایلې ښیي چې د DRD321 دریمه داخلي پایپ کې S2 پاتې کیږي کیدی شي د Cdk5 لخوا فاسفوریټل شوی وي، کوم چې د CAMP الره کې د DRD2 د موټرو اغیزو کمیدل دي. دا تعامل د نویو تنظیم کونکي میکانیزم وړاندیز کوي چې د Dopaminoceptive نیورونونو کې د Cdk5 سره تړلی دی چې کیدای شي د DRD2 سطحی شتون پورې متحرک طبيعت سره اړیکه ولري.

دا باید په پام کې ونیول شي چې د Cdk5 د نیورولال چاپیریال د منځګړونکي انډولیو بدلونونو کې د کلیدي برخې پېژندل کیږي. د بیلګې په توګه، د لامیک سریک نیورونو کې د ډینټریکیک سپین ساختماني او فعالې بدلونونه د رواني پوهاوي ضد کشفاتو څخه یوه ده [40]. دا بدلونونه د مختلف انوولر بدلونونو سره په شمول د CAMP ځواب عنصر بسپنه پروتین (CREB) او ΔFOSB، د لیږد لیکونکي عوامل چې د زاړه کوکاین ادارې په غبرګون کې د اوږد مهاله مقرراتو ښودنه کوي. [41], [42]. په مهمه توګه، Cdk5 د ΔFosB نښه ده [19], او ډیری مهمې برخې چې د ډینډریتیک سپین ډینیککسونو کې ښکیل دي، لکه PSD-95، P21-فعال شوي کیین) PAK (، β-catenin، او سپینوفینین، د Cdk5 په توګه راپور شوي [43]-[46]. په عین حال کې، د Cdk5 فعالیت جینیکیک یا درملتونیکي تاوان د ډینټریتیک سپین مورفولوژي او د کوکین د چلند غبرګونونه په ګوته کوي، د Cdk5 لپاره د میولولیمیک ډپامینین سرکونو د مالیکولر او مورفولوژیکي بدلونونو لپاره د مهم رولونو محاکمه کول [47], [48]. زموږ پایلې ښیي چې DRD2 د Cdk5 یوه نوي نښه ده چې د ډاپامین سیسټم تطبیقولو بدلونونو کې د دوامداره مخدره توکو د خطرونو په غبرګون کې اضافي بصیرت چمتو کوي ځکه چې وروسته د IFOSB- د Cdk5 تنظیم کول د DRD2 د فاسفوریټلینشن کې د ټیکیک زیاتوالي سبب کیږي. . پردې برسیره، DRD2 د ډیرو سیلولر پروسو اغیزه کوي، په شمول د CAMP او MAP کینیسټ رې لارې او د لیرې بریښنا لیږدولو پیښو تنظیمول [42], [49]. په دې توګه، پدې څیړنه کې موندنې ښایي نه یوازې د CDk2 لخوا د DRD5 مستقیم مقررات ښکاره کړي بلکې د مخدره توکو پخوانۍ کشفولو لپاره د ډاپامین سیسټم تطبیق ځواب کې یو نوی ناورین چمتو کوي.

د لیکوال ونډې

منل شوي او تجربې ډیزاین شوې: JJ YUP DH SKP. د تجربو اجرا کول: JJ YUP DKK YK. د ارقامو تحلیل: JJ YUP DKK SL SL YALAL HL YSG DH SKP. ونډه اخیستونکي ریجنټ / توکي / تحلیل وسایل: YHS. کاغذ یادونه: JJ SKP.

ماخذونه

  1. 1. میسیل سی، نیش ایس آر، رابسنسن SW، جابر ایم، کارن ایم جی (1998) د ډپیمینین ریپټرز: د جوړښت څخه فعالیت ته. فزیوول ریو ایکس این ایم ایکس ایکس: ایکس اینم ایکس ایکس ایکس ایکس.
  2. 2. د حکمت حکمت (2002) د دماغ ثواب سرکری: د ناکراریو تشویقاتو بصیرت. نیورون 36: 229-240. Doi: 10.1016 / S0896-6273 (02) 00965-0
  3. مقالې وګورئ
  4. PubMed / NCBI
  5. د ګوګل عالم
  6. مقالې وګورئ
  7. PubMed / NCBI
  8. د ګوګل عالم
  9. مقالې وګورئ
  10. PubMed / NCBI
  11. د ګوګل عالم
  12. مقالې وګورئ
  13. PubMed / NCBI
  14. د ګوګل عالم
  15. مقالې وګورئ
  16. PubMed / NCBI
  17. د ګوګل عالم
  18. مقالې وګورئ
  19. PubMed / NCBI
  20. د ګوګل عالم
  21. مقالې وګورئ
  22. PubMed / NCBI
  23. د ګوګل عالم
  24. مقالې وګورئ
  25. PubMed / NCBI
  26. د ګوګل عالم
  27. مقالې وګورئ
  28. PubMed / NCBI
  29. د ګوګل عالم
  30. مقالې وګورئ
  31. PubMed / NCBI
  32. د ګوګل عالم
  33. مقالې وګورئ
  34. PubMed / NCBI
  35. د ګوګل عالم
  36. مقالې وګورئ
  37. PubMed / NCBI
  38. د ګوګل عالم
  39. مقالې وګورئ
  40. PubMed / NCBI
  41. د ګوګل عالم
  42. مقالې وګورئ
  43. PubMed / NCBI
  44. د ګوګل عالم
  45. مقالې وګورئ
  46. PubMed / NCBI
  47. د ګوګل عالم
  48. مقالې وګورئ
  49. PubMed / NCBI
  50. د ګوګل عالم
  51. مقالې وګورئ
  52. PubMed / NCBI
  53. د ګوګل عالم
  54. مقالې وګورئ
  55. PubMed / NCBI
  56. د ګوګل عالم
  57. مقالې وګورئ
  58. PubMed / NCBI
  59. د ګوګل عالم
  60. مقالې وګورئ
  61. PubMed / NCBI
  62. د ګوګل عالم
  63. مقالې وګورئ
  64. PubMed / NCBI
  65. د ګوګل عالم
  66. مقالې وګورئ
  67. PubMed / NCBI
  68. د ګوګل عالم
  69. مقالې وګورئ
  70. PubMed / NCBI
  71. د ګوګل عالم
  72. مقالې وګورئ
  73. PubMed / NCBI
  74. د ګوګل عالم
  75. مقالې وګورئ
  76. PubMed / NCBI
  77. د ګوګل عالم
  78. مقالې وګورئ
  79. PubMed / NCBI
  80. د ګوګل عالم
  81. مقالې وګورئ
  82. PubMed / NCBI
  83. د ګوګل عالم
  84. مقالې وګورئ
  85. PubMed / NCBI
  86. د ګوګل عالم
  87. مقالې وګورئ
  88. PubMed / NCBI
  89. د ګوګل عالم
  90. مقالې وګورئ
  91. PubMed / NCBI
  92. د ګوګل عالم
  93. مقالې وګورئ
  94. PubMed / NCBI
  95. د ګوګل عالم
  96. مقالې وګورئ
  97. PubMed / NCBI
  98. د ګوګل عالم
  99. مقالې وګورئ
  100. PubMed / NCBI
  101. د ګوګل عالم
  102. مقالې وګورئ
  103. PubMed / NCBI
  104. د ګوګل عالم
  105. مقالې وګورئ
  106. PubMed / NCBI
  107. د ګوګل عالم
  108. مقالې وګورئ
  109. PubMed / NCBI
  110. د ګوګل عالم
  111. مقالې وګورئ
  112. PubMed / NCBI
  113. د ګوګل عالم
  114. مقالې وګورئ
  115. PubMed / NCBI
  116. د ګوګل عالم
  117. مقالې وګورئ
  118. PubMed / NCBI
  119. د ګوګل عالم
  120. مقالې وګورئ
  121. PubMed / NCBI
  122. د ګوګل عالم
  123. مقالې وګورئ
  124. PubMed / NCBI
  125. د ګوګل عالم
  126. مقالې وګورئ
  127. PubMed / NCBI
  128. د ګوګل عالم
  129. مقالې وګورئ
  130. PubMed / NCBI
  131. د ګوګل عالم
  132. مقالې وګورئ
  133. PubMed / NCBI
  134. د ګوګل عالم
  135. مقالې وګورئ
  136. PubMed / NCBI
  137. د ګوګل عالم
  138. مقالې وګورئ
  139. PubMed / NCBI
  140. د ګوګل عالم
  141. مقالې وګورئ
  142. PubMed / NCBI
  143. د ګوګل عالم
  144. 3. نیو کای، سیمامان JK، تورامام - ډیوډسن ایچ (2004) د ډاپیمین ریزورټر سگنلینګ. د ج ضمیمه د لیږد لیږد ریس 24: 165-205. Doi: 10.1081 / LRST-200029981
  145. 4. امار ایس، شاټلیل جی، مین ایل، شمیر اې، ډان بی، او ایل. (2008) د schizophrenia pathophysiology کې د ډاپامین D2 رسیدونکي سگنلین اجزاء احتمالي ښکیلتیا. Int J Neuropsychopharmacol 11: 197-205. Doi: 10.1017 / S1461145707007948
  146. 5. کاین ایس بی، نیکوس ایس ایس، میلو نیک، پټیل ایس، برسټو ایل، او نور. (2002) د کاپین د خود اداره کې د ډاپامین D2-د رسیدونکي رول رول: د D2 ریپټر پوټینټ چوپ او د D2 ریزورور ضد مخالفینو سره مطالعات. J Neurosci 22: 2977-2988.
  147. 6. لی ایس، جیونگ ج، پارک یو یو، کاکاک Y، لی سای، او ایل. (2012) وال پیرود د پرو-ایکس این ایکس پروټین بیان په پیژندلو کې د ډپیمینین السلیک کولو ځای نیسي. پوسټ یو ایکس ایکسیم: ایکسکسیمکس. Doi: 4 / journal.pone.7
  148. 7. د فشبرن CS، الزرز ز، فوکس S (1995) د D2 ډپیمینین ریسیور د اوږد او لنډ معلوماتو لپاره بیلتونکو ګلیکوزیلینشن او انټرراسیلر قاچاق. J Biol Chem 270: 29819-29824. Doi: 10.1074 / jbc.270.50.29819
  149. 8. ریډر TA، Molina-Holgado E، لیما L، Boulianne S، Dewar KM (1992) ځانګړی [3] د نس ناستی د ډاپامین D2 رسیدونکي ته پابند دی: د ډوبلوډایډ او سلفهایدری ګروپ ډلو رول. نیروکشم رییس 17: 749-759. Doi: 10.1007 / BF00969008
  150. 9. اين آر جيي، اوډډ بي ايف، کارن م، ډينس ايم، برن ايم، او نور. (1994) د SXXUMX حجرو کې د انسان DXNXXL ډپیمین ریپټر فاسفوریشن او پایلټایولوشن. ج نیروکشم 2: 9-63. Doi: 1589 / j.1595-10.1046.x
  151. 10. لی ایم، بررمک JC، وانګ ZW، ژو QY (2000) د ډاپامین ډي ماډل (2) د فعالین پروټین لخوا د رسیدونکي راینګولو (ABP-280) لخوا. Mol Pharmacol 57: 446-452.
  152. 11. Cho D، Zheng M، Min Min، Ma Ma، Kurose H، et al. (2010) Agonist-insduced ایوسایټیسوسس او راسپټر فاسفوریشن د ډاپامین ډي (2) ریسیورز د بیا استحکام کولو منځګړیتوب کوي. Mol Endocrinol 24: 574-586. Doi: 10.1210 / me.2009-0369
  153. 12. سایه LH، Delalle I، Caviness VS Jr، Chae T، Harlow E (1994) p35 د سایکلین پورې تړاو لري 5 د نیالرال ځانګړي تنظیم کونکي Subunit دی. فطری 371: 419-423. Doi: 10.1038 / 371419XXXX
  154. 13. Dhavan R، Tsai LH (2001) د CDK5 یوه لسیزه. Nat Rev Mol Mol سیل Biol 2: 749-759. Doi: 10.1038 / 35096019
  155. 14. فو AK، Ip NY (2007) Cyclin-dependent kinase د 5 اړیکو خارج کونکي سنجونو لپاره د ډیټریتټیک د رڼا پراختیا په وخت کې سیټوسیکټینټ کارولو لپاره. د سیل اداری 1: 110-112. Doi: 10.4161 / Cam.1.2.4617
  156. 15. وانګ ج، لیو س، فو Y، وانګ JH، لو Y (2003) د Cdk5 فعالیت فعال د NMDA رسیدونکي مستقیم فاسفوریټلینټ لخوا د Hippocampal CA1 سیلاب مړینه راوړي. Nat Neurosci 6: 1039-1047. Doi: 10.1038 / nn1119
  157. 16. ژانګ س، ایډلمین ایل، لیو ج، کرندال جې، مورابتو ایم (2008) Cdk5 د ټیروسروسین ایکسینکسکسکسکسکسکس او د NMDA ریسیسرونو سطحي بیان تنظیموي. J Neurosci 1472: 2-28. Doi: 415 / Jneurosci.424-10.1523
  158. 17. Moy LY، Tsai LH (2004) Cyclin-dependent kinase 5 phosphorylates د tyrosine هایډسکسکسس Serine 31 او د هغې ثبات تنظیموي. J Biol Chem 279: 54487-54493. Doi: 10.1074 / jbc.m406636200
  159. 18. بی بی جے، سنیډ جی ایل، نیسي اے، یان ز ز، میجر لا، ای ایل. (1999) د DdPP-32 فاسفوریشن د Cdk5 لخوا لخوا په نیورونونو کې د ډاپامین سگنل کول modulates. فطری 402: 669-671.
  160. 19. بی بی ج اے، چین جین، ټیلر جی آر، سنیینګسنسن پی، نشی ای، او ایل. (2001) د کوکاین د اوږدې مودې اغیزې اغیزې د نیورونول پروټین Cdk5 لخوا تنظیمیږي. فطری 410: 376-380.
  161. 20. اوششایم T، اوگاوا ایم، وییرنا، هیراسوا ایم، لینینیکر جی، او نور. (2001) د چلیدونکي پرمختللي کینیسټ 5 / P35 او رییلین / DXXUMX د synergistic مرستې د پرمختللي ماغز دماغ کې د سینټري نیورون موقعیت ته. Proc Natl Acad Sci USA 1: 98-2764. Doi: 2769 / PNN.10.1073
  162. 21. ماریابیو MA، شینګ ایم، سای LH (2004) Cyclin-dependent kinase 5 phosphorylates د نیورونونو کې د پوسټینپټیک کثافت پروټین PSD-95 د N-Terminal ډیزاین. J Neurosci 24: 865-876. Doi: 10.1523 / Jneurosci.4582-03.2004
  163. 22. پارک سک، Nguyen MD، Fischer A، لوقا MP، Affar el B، et al. (2005) پار-4 اړیکې ډاپامینین سگنلینګ او خپګان. سیل 122: 275-287. Doi: 10.1016 / j.cell.2005.05.031
  164. 23. نییترټر ایم، سمیټ ډي ایس، ایاللا ر، پینګ ج، کوا ج، ای ایل. (2000) NUDEL یو ناول Cdk5 سیسټم دی چې د LIS1 او سیتوپلاسمیک ډینین سره ملګری کوي. نیورون 28: 697-711. Doi: 10.1016 / S0896-6273 (00) 00147-1
  165. 24. کییم کلوم، ویلینزانو KJ، رابنسن ایس آر، یاو WD، باراک ایل ایس، او نور. (2001) د ډاپینین D2 او D3 رسیدونکي د G پروټین-ملګری ریکسیور کمینز او بیټا نیول کیدونکو لخوا توپیر قواعد. J Biol Chem 276: 37409-37414. Doi: 10.1074 / jbc.m106728200
  166. 25. والډوبر ایم، بوفیل کارټون ای ای، ملګینګ جی، فرییسوتوت ایم، نانوف سی (1998) د اکینینومین آینینزین او D1 ډپیمین رییکورډونه د سرینام او د کیمیایتیل شوی سرینام (NF2) لخوا توپیر نلري. Mol Pharmacol 037: 53-808.
  167. 26. بوفیل کارټون ای، کدوسیک او، یانگ ق، احور ایچ، فرییسوتوت ایم، او ایل. (2000) د D2-Dopamine receptor لپاره د Calmodulin تطبیق کول د G پروټین فعالولو سیسټم نیولو لخوا د رسیدونکي سمبول کول کموي. J Biol Chem 275: 32672-32680. Doi: 10.1074 / jbc.m002780200
  168. 27. د SJ لیست، Seeman P (1981) د ډاپامین قرارداد او د [3H] سپیپرپرون د سیرټوسنین ریزورور اجزاوو دماغونو سیمو ته د ننوتلو لپاره تړل کیږي. Proc Natl Acad Sci USA 78: 2620-2624. Doi: 10.1073 / PNN.78.4.2620
  169. 28. Gardner B، Strangrange PG (1998) د D2 (اوږده) دوپامین ریپټرز کې د اجنونست عمل: لینګنډ بائن کول او فعاله تاییدونه. Br J Pharmacol 124: 978-984. Doi: 10.1038 / sj.bjp.0701926
  170. 29. Seeman P، Tallerico T، Ko F (2003) د ډاپامین بې ځایه شوي ځایونه [3H] domperidone د ډاپامین D2 ریپټر د لوړ نفوس ځایونو څخه، مګر نه په [3H] ریسډوپراډ یا [3H] سپینوپرون په ایټولویک منځنۍ کې: د انسان د مثبت تغذیه جذب لپاره ټیموګراف. Synapse 49: 209-215. Doi: 10.1002 / syn.10232
  171. 30. Obenauer JC، Cantley LC، Yaffe MB (2003) Scansite 2.0: د لنډ سیسټمونو په کارولو سره د سیلیک سنګینګ خبرو اترو پراخو اټکل وړاندیز. نکلیک اسیدونه د ایکسینیم ایکس بیاکتنه: 31-3635. Doi: 3641 / nar / gkg10.1093
  172. 31. لیو H، Sadygov RG، یوټس ج. آر 3rd (2004) د شټولو نمونې لپاره د نمونې او په شاټینګ پروټومیکونو کې د نسبتي پروټین ډیری اندازې اټکل. د مقعد کیمیا ایکس ایم ایم ایکس: ایکس اینم ایکس ایکس ایکس ایکس. Doi: 76 / AC4193
  173. 32. اسو ک، هګا ټ، لامه ج، سایډ ډ (1999) د ډاپینین D2 رسیدونکي سایټریشن د G-protein-paired receptor د 2 یا 5 کمښت پورې اړه لري. یورو جی بایکام ایکسینیم ایکس: ایکس اینم ایکس ایکس ایکس ایکس. Doi: 260 / j.112-119.x
  174. 33. نامکنگ Y، Sibley DR (2004) پروټین کینیس C د D2 ډاپامین ریپټر په واسطه فاسفوریشن کول، بسپنه کول، او قاچاق منځته راوړي. J Biol Chem 279: 49533-49541. Doi: 10.1074 / jbc.m408319200
  175. 34. وانګ ایس ایس، لی آر ایچ، چنگ ایی، Yeung پی پی، چنګ سک، ای ایل. (2011) Cdk5- د اتافیلین B1 منځګړیتوب فاسفوریشن د پارکینسن د ناروغۍ په موډل کې د تعقیب شوي خودمختار لپاره اړین دی. Nat Nat Biol 13: 568-579. Doi: 10.1038 / Ncb2217
  176. 35. کیسایپني S، لؤ KF، مکلوټین ډیم، براونلیز ج، اکرلي ایس، او نور. (2001) p35 / cdk5 تړل او فاسفوریټس beta-catenin او beta-catenin / presenilin-1 تعامل تنظیموي. یورو جی نیروسسي 13: 241-247. Doi: 10.1046 / j.1460-9568.2001.01376.x
  177. 36. کوار MJ، ریزټ ایم سی، بوجا JW (1991) د کوکین د پیاوړي شتمنیو ډپلومین فلسفه. نوریسوسی 14 رجحانات: 299-302. Doi: 10.1016 / 0166-2236) 91 (90141-g
  178. 37. والک ND، فولر جی ایس، وولف ای پی، سکیلر ډي، شیو سی، او ایت. (1990) د پوستینپټیک دوپامین رییکورزونو په اړه د پخوانی کوکاین ناوړه ګټه اخیستنې اغیزې. د ام جی نفسیات 147: 719-724.
  179. 38. ډليلي JW، فریر ټیډ، بریچرډ ایل، روبنسن ای ایس، توبالالډ ډی، او نور. (2007) د ایکس ایکسیم ایکس / ایکس اینیم ایکس رییکورزونه د نفتو د راټولولو اټکل کوي د ټیټ ټیټ تناسب او کوکاین پیاوړتیا. ساينس 2: 3-315. Doi: 1267 / science.1270
  180. 39. نادر م.، مورگن ډي، ګیج ایچ ایچ، نادر شیل، کالونون ټیل، او ایل. (2006) PET د ډومینین D2 رسیدونکي امیجنگ په بندرونو کې د پخوانۍ کوکاین خود اداره کې. Nat Neurosci 9: 1050-1056. Doi: 10.1038 / nn1737
  181. 40. رابینسن ټی، کولب بی (1997) د نیوکلیو امبولانسونو او مخکې فرعی کوانتیکس نیورونونو کې متناقض ساختماني بدلونونه د پخوانۍ تجربې لخوا د امفافامین سره تولید شوی. J Neurosci 17: 8491-8497.
  182. 41. د رابینسن ټی، کولب بی (1999) د ډیټریټیسس او ډیټریټیک سپکونو بدلونونه د نیکیوس د ګوتو او لومړی فرعي کوانتیکس کې د امفافامین یا کوکین سره د بار بار درمل وروسته تعقیب شوي. یورو جی نیروسسي 11: 1598-1604. Doi: 10.1046 / j.1460-9568.1999.00576.x
  183. 42. McClung CA، Nestler EJ (2003) د جین د بیان مقرره او د کیکین انعام د CREB او DeltaFosB لخوا. Nat Neurosci 6: 1208-1215. Doi: 10.1038 / nn1143
  184. 43. فینگ جی، یان ز، فیررا اے، ټیمزوا ک، لیوو JA، او نور. (2000) سپینوفینین د ډینډریتیک ماینونو جوړښت او فعالیت تنظیموي. Proc Natl Acad Sci USA 97: 9287-9292. Doi: 10.1073 / PNN.97.16.9287
  185. 44. Prange O، Murphy TH (2001) د پوستینپټیک کثافت - 95 کلسترونو او د مستحقو تاکیدونکو اصولو سره د سینټري نیورونونو په پیل کې د موډولر لیږد. J Neurosci 21: 9325-9333.
  186. 45. مریس S، Mosser E، Schuman EM (2002) د ډیپلوماټیک چلولو beta-Catenin په نیورولینډ سپینونو کې د Synaptic جوړښت او فعالیت کې بدلونونو ته وده ورکوي. نیورون 35: 91-105. Doi: 10.1016 / S0896-6273 (02) 00764-x
  187. 46. Hayashi ML، Choi SY، Rao BS، Jung HY، Lee HK، et al. (2004) د سنټوپټ synaptic مورفولوژي بدله شوې او د یادونې وړ غالب منفي منفي پااک ټرانجنک چوغیو کې د یادولو وړ حافظه ټینګښت. نیورون 42: 773-787. Doi: 10.1016 / j.neuron.2004.05.003
  188. 47. بنیویډ ډری، Quinn JJ، Zhong P، Hawasli AH، DiLone RJ، et al. (2007) Cdk5 د کوکین انعام، هڅونې، او د سټراټيټ نیورون حوزې وړتیا تعدیلوي. J Neurosci 27: 12967-12976. Doi: 10.1523 / Jneurosci.4061-07.2007
  189. 48. مییرډ ډي، رچرډ ای، بینکویچ سای، حشیشی کی، کنسی جے ډ، ای ایل. (2008) د Cdk5 د سټراټالټ ډاډه کول د کوکاین، موټرو زده کړه، او د ډیتریت مورفولوژي ته د لوبوټر ځوابونه. Proc Natl Acad Sci USA 105: 18561-18566. Doi: 10.1073 / PNN.0806078105
  190. 49. Impey S، Obrietan K، طوفان DR (1999) نوي اړیکو جوړول: د نیورونولیک پلاسٹکیت کې د ERK / MAP کنینټ سیګنال رول. نیورون 23: 11-14. Doi: 10.1016 / S0896-6273 (00) 80747-3