Basal Ganglia Dysfunction د موټرو په فزیکي فعالیتونو کې مرسته کوي (2016)

د انالین آنلاین 29 ډسمبر ایکسینمز

نور ښکاره کړئ

http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2016.12.001

مهمې پیښې

• موجوديت د فزیکي فعالیتونو سره تړاو لري

• د پیسو پواسطه کموالی د D2R پابند دی، کوم چې کیداې شي د دوی غیر فعالیت تشریح کړي

• د بیا رغول_i د IMSNs کې نښلول د موټرو چوپتیا فزيکي فعالیتونه خوندي کوي

• فزیکي فعالیتونو د وزن د زیاتوالي په پرتله ډیرې پایلې لري

لنډیز

موجوديت د فزیکي غیر فعالۍ سره تړلی دی، کوم چې د وزن لاسته راوړنې روغتیا پایلې لا زیاتې کوي. په هرصورت، هغه میکانیزم چې دا اتحادیه منځګړیتوب لري نامعلومه دي. موږ داسې اټکل کوو چې د ډاپامینین سمبول کې خسارې د موټی په فزیکي غیر فعالۍ کې مرسته کوي. د دې څیړنې لپاره، موږ د ډومینین سگنلین ډیری اړخونه په لوټ او موجودو چوپیو کې مقدارولي. موږ وموندله چې د D2-type receptor) D2R (په سټراټیم کې پابند دي، مګر د D1 ډول ریکټرور پابند یا ډاپامین کچې نه، په موجودو چوپیو کې کم شوی. په جینیکي توګه د درملو په منځ کې د ماښام سپینی نیورورونو څخه د D2R له منځه وړل د لیانو چوغیو کې د موټر فعالیت کمولو لپاره کافی وو، پداسې حال کې چې G_i په دغو نیورونو کې نښه کول په موجودو چوپونو کې فعالیت زیات کړ. د حیرانتیا سره سره، سره له دې چې د D2R کم چرګان لږ فعال وو، دوی د کنټرول پوچ په پرتله خورا غذايي موادو څخه ډیر وزن نه درلود. موږ نتیجه ورکړو چې د ډیټینټکس D2R سنګین کې د خسارې ضایع د موټی په فزیکي غیرفعالیت کې ونډه لري، مګر غیر فعالیت د موټری د الملونو په پرتله ډیرې پایلې دي.

ګرافیکي لنډیز

انځور انځورونه

عمده

موټری
دوپامین؛
فزیکي فعالیت؛
تمرین
D2؛
سټریټم؛
موجوديت
د وزن د بايللو

پېژندنه

موجوديت د فزیکي فعالیتونو سره تړاو لري (براونسن اوټ. ، 2005 او اکیکاکیس او نور. ، 2016)، کوم چې د II ډوله ډایبېټز او د زړه د ناروغۍ منفي روغتیایي اغیزه (د ریژینډ او نور. ، 2014 او شرما او نور. ، 2015). هغه میکانیزمونه چې دغه اتحادیه یې نده پېژندل شوې، یوه حقیقت د اغیزمنو مداخلو نشتوالی چې په فزیکي فعالیتونو کې د موجوديت په کچه کې بدلون راځي)اکیکاکیس او نور. ، 2016). په زړه پورې ده، موټری د توقیفیانو ډوپامین) DA (په نښه کولو کې بدلونونو سره تړاو لري چې پدې کې د موټری په حالت کې د انعام عوامل فرضیه)بلم او نور. ، 2011, کیني، ایکس این ایم ایکس او والک او حکمت، 2005). که څه هم د مخدره توکو ډیریدونکي ډیری په موټرو کې د اړیکو سره تړاو لري، ځینې مطالعاتو تحقیق کړی چې څنګه د ډوپینژیک بدلونونه د فزیکي غیر فعالۍ سره مرسته کوي. موږ داسې انګیرنه کوو چې د غاښونو DA سنګینګ په موټری کې اخته شوی او دا د فزیکي غیر فعالۍ سره مرسته کوي. د فزیکي غیر فعالیتونو بیولوژیکي لاملونه درک کول ممکن د فعالیتونو د زیاتولو لپاره اغېزمن مداخلې رامینځته کړي، او په دې توګه د روغتیا په وده کې، په انفرادي کسانو کې.

Striatal DA په کلک ډول په موټر کنترول کې ښکیل دی. دا د موټرسینسن د ناروغۍ په څیر د موټرو اختالفونو کې څرګنده ده، کوم چې په منځ کې د ډپینینجیک نیورونونو د مړینې مشخص شوی او د سټراټالټ DA ضایع کیدو المل کیږي)هورنیک ویژنز، 2010). د ډاټا د پروجیکشن نیورون دوه دوه نفوس چې د DA لخوا اصالح شوی د مستقیم او غیر مستقیم الره په منځ کې سپینی نیورونز (DMSNs او iMSNs) په نامه پیژندل کیږي)سکندرډر او کرچر، 1990, DeLong، 1990 او ګیرفین ات. ، 1990). DMSNs د G Express څرګندوي_sد D1 رسیدونکي) D1R (او د ګلوس پالیلیدس د مهمو نریرا او داخلي برخې ته پروژه، پداسې حال کې چې IMSNs G توضیح کوي_iد D2R پیژندل شوی او د نړیوال بانک پلیلید (بهرنۍ برخې ته پروژه) GPe (ګیرفین ات. ، 1990, لیو Moine او Bloch، 1995 او لیوی ایټ. ، 1993). د IMSNs څخه D2R د جینیکي راټیټولو، یا د IMSNs اپایزیکنیک هڅول، د حرکت د کمولو لپاره کافي دي)کرویټز اوټ. ، 2010 او لیموس او نور. ، 2016). د D2R د پیښو او موټرو تر منځ د اړیکو پر بنسټ، موږ داسې انګیرنه وکړه چې موجودو حیواناتو د IMSN محصول بدل کړی دی، چې نتیجه یې فزیکي غیر فعاله ده.

دلته، موږ د DA سیګنلین ډیری اړخونه په ډډ او غذایي موادو کې موجودو چوټو کې معاینه کړې. D2R پابندول په موجودو چوپیو کې کم شوی، پداسې حال کې چې د D1R د بسپنې او ویشلي درجې سطحې بدیل پاتې دي. د موټرو چوغندر د توقیف ځایونو په ډزو کې خنډونه هم ښودل شوي او حرکت یې کم کړی. په جینیکي توګه د IXNs څخه D2R له منځه وړل په لین چوک کې فعالیت کم کړی، په داسې حال کې چې G_i د IMSNs کې نښه کول په موجودو چوپونو کې فعالیت زیات کړ. دا پایلې معلوموي چې د IXNs کې D2R نښې نښانې کولی شي د فزیکي فعالیت دوه اړخیزه توګه اصالح کړي. وروسته بیا موږ وپوښتل چې ایا د ټيټ D2R سیسټم سره چولان د هغوی د ټیټ فعالیت له امله، د لوړې خوړو غذا په وزن کې د وزن زیان منونکي دي. د دې کولو لپاره، موږ د D2R کې د طبیعي تغیراتو په اړه د وزن ګټو معاینه کړې، او همدارنګه د چرګانو په منځ کې د انټرنېټ D2Rs د جینیکیک له منځه وړلو سره. که څه هم د D2R د ټیټې کچو سره چوغندر درلودل د فزیکي فعالیت ټیټه کچه درلوده، دوی وزن یې د D2R په واسطه د ګوزڼ په څیر سره وزن درلود. دا د فزيکي فعاليت او وزن لاسته راوړلو تر منځ د قوي تعامل اړيکو مخالف دي. موږ پایله کوو چې د D2R سنګینګ کې نیمګړتیاوې د موټی په فزیکي فعالیتونو کې ونډه لري مګر دا غیر فعالیت په ضروري ډول د وزن ګټلو المل ګرځي.

پایلې

د خوړو تحلیل موجوديت د جسماني فعالیتونو سره تړاو درلود

C57BL6 / J نارینه موږکان (3–4 میاشتې) د 8 اونیو لپاره معیاري چو (خواږه ، n = 8) یا د لوړ غوړ رژیم (چاقو ، n = 18) ته ورکړل شوي و (عکس S1الف). په اونۍ 2 کې پیل او د 18 اونۍ دوام ته دوام ورکول ، موټرو موږکانو د بدن وزن او غوړ ماسز د نري م mو په پرتله خورا لوړ درلود (p <0.0001؛ انځورونه 1A او S1ب). د ډلی ډلی په پام کې نه نیول شوی (عکس S1ج). موږ په 2 ورځو کې په هرو 18 اونیو کې په آزاده فیلډ کې د فعالیت کچه اندازه کړه (ایتوویژن N نولډس انفارمیشن ټیکنالوژی). غوړ موږکان د اونۍ د موږکانو په پرتله په اونۍ کې لږ فعالیت لري او د اونۍ په 4 کې دوام لري (مخ <18؛ انځورونه 1B او 1C). په اونۍ 18 کې ، موټرو موږکانو په حرکت کې لږ وخت تیر کړی (p = 0.005) ، لږ خوځښتونه یې درلودل (p = 0.0003) ، او د حرکت په وخت کې ورو رفتار درلود (p = 0.0002؛ 1 شکلD) د شیدو چرګانو سره تړاو لري. د پښو کولو او جذب کولو په برخه کې د پام وړ بدلون ندی بدل شوی (1 شکلډي). مکرو موږکانو د چanو موږکانو څخه هم لږه برخه واخیسته کله چې د کور پنجراو چلونکو ته لاسرسی وموند (p = 0.0005؛ 1 شکلE). موږ ازموینه وکړه چې د حرکت ضایعات د موجودي ګروپ کې د وزن زیاتوالي سره تړاو لري. که څه هم د وزن لاسته راوړل د غذايي خوړو د خوارځواکۍ د کلوریک سره سره تړلي و (1 شکلF)، دا د حرکت د کچې سره په پرانیستې ساحه کې یا د غذايي تودوخې خواړو په دوره کې د مصرف شوو انرژی سره تړاو نه درلود)انځورونه 1G او 1H). په زړه پورې خبره ده، دا ورته اړیکې په داسې حال کې ترسره کیږي کله چې موږ د تجربې په لومړۍ اونۍ کې د خواړو مینځلو پلټنه وکړه (انځورونه 1I-1K)، د دې ښودنه کوي چې د لوړ غذا خوړو خوړلو لومړنۍ کچه) مګر خو حرکت یا د انرژۍ مصرف نه (د وروستیو وزنونو اټکل و.

1 شکل.

د اوږدمهاله لوړ فایټ ډایټ فزیکي فعالیتونو ته راځي

(A) چوغندر یو لوړ غذا خوړونکی خواړه تغذیه کړل چې د ګوزڼ فډ معیشت څخه ډیر وزن یې د 2 په پیل کې او د اونۍ دوام لپاره 18) F_(18,252) = 62.43 ، مخ <0.0001).

(B او C ((B) د مثال په توګه د پرانیستې ساحې فعالیتونه په ګوته کوي، چې ښیي چې) C (موټرو چوغندر د لیانو چرګانو په پرتله د 4 په پیل کې د فزیکي فعالیت کچه کمه کړې او د 18 دوام ته دوام ورکوي) F_(10,140) = 4.83 ، مخ <0.0001).

(D) د 18 د اونیو وروسته د لوړ غوړ رژیم کې ، چاغوالي موږکانو د حرکت کولو وخت لږ کړی و (t₍₁₄₎ = 3.32 ، p = 0.005) ، د خوځښت فریکوینسي کمه (t₍₁₄₎ = 4.74 ، p = 0.0003) ، او د حرکت په حال کې سرعت کم شوی (t₍₁₄₎ = 4.69 ، p = 0.0002) د باران کنټرولونو پورې اړوند. غوړیو موږکانو هم د کرهنې کمولو لپاره لیوالتیا ښودلې (p = 0.07).

(E) کله چې په کور کې په چټک چلنده لاسرسي ته لاسرسی وموم، موږه چوغۍ درلوده لږ چرګ درلودل د ټیټ چوپ سره تړاو لري) t₍₁₄₎ = 4.55 ، p = 0.0005).

(F – H) د ټول وزن وزن د تجربې په جریان کې د (F) انرژي اخیستلو سره د پام وړ ارتباط رامینځته کړی (r = 0.74 ، p = 0.04) ، مګر نه (G) انرژي مصرف (r = 0.52 ، p = 0.19) نه (H) د خلاص ډګر سرعت (r = 0.19 ، p = 0.65).

(I – K) د ټول وزن زیاتوالي د لومړۍ اونۍ په جریان کې د (I) اوسط انرژي اخیستلو سره مهم تړاو رامینځته کړ (r = 0.88 ، p = 0.004) ، مګر نه (J) انرژي مصرف (r = −0.19 ، p = 0.66) ، او نه هم (K) د خلاص ډګر سرعت (r = 0.36 ، p = 0.38).

احصاييې شننه. (A & C) دوه اړخیزه بار بار - د انووا اقدامات اقدامات وروسته د بنجامیني- هچبربر د جعلي موندنې کچه سره د پوستکي ازموینې لخوا تعقیب شوي؛ (D او E) ناخبره زده کونکي ازموینې؛ (F-H) لینډر تاوان؛ ^*p <0.05 ، ^**p <0.01 ، ^***p <0.0001 مقابل لوری. (I – K) خطي فشار؛ ^***p <0.001 په پرتله د مچانو موږکان.

انځور انځورونه

د ډوډامین D2R پابندولو کې موجوديت د کمولو سره تړاو درلود

د فزیکي فعالیتونو پر بنسټ د میکانیزمونو پیژندلو لپاره، موږ د DA سیګنلین ډیری اړخونه په ډیری او موجودو چوپیو کې اندازه کړل. په rodents کې د پخوانیو راپورونو سره، د D2R-سایټ رسیدونکي پابندۍ (د autoradiography له الرې ³H-spiperone ، تردې دمه د D2R پابندۍ) د مچانو موږکانو سره نسبت د نري میوو سره ټیټ و (p <0.0001؛ انځورونه 2A او 2B) ، یوه موندنه چې په ټولو دریو سټراټیژیک فرعي برخو کې د پام وړ وه (dorsomedial: p = 0.004 do dorsolateral: p <0.0001؛ ventral: p <0.001؛ انځورونه S2A او S2B). په هرصورت ، د D2R پابندۍ د جانبي یا ضربتي ګروپ کې د بدن غوړ سره تړاو نلري (p> 0.55 د دواړو لپاره؛ 2 شکلC)، وړاندیز کوي چې، که څه هم د D2R بسپنه او غوړ ذخیره دواړه دواړه د لوړې خوړو غذا لخوا بدلېږي، دا متغیرات ممکن د یو بل سره ارتباط نه وي.

2 شکل.

د ډیرو غذايي موادو غایطه شوي د درملو ډوپامین D2R پابند

(A) د درملو D2R انځورونه چې په ذریعه یې اندازه شوي ³H- سپیپرونون آټراډيډيژندری.

(B) سټریټالټ D2R پابندول د ټیټ چوپ سره په موجودو پیښو کې کم شوي) t₍₂₅₎ = 5.02 ، مخ <0.0001).

(D-F) (D) درملو D1R پابندول (ټ₍₂₄₎ = 1.31 ، p = 0.20) ، (E) ټول ډوپامین مینځپانګه (DA؛ t)₍₁₃₎ = 0.85 ، p = 0.41) ، او (F) ټیروسین هایدروکسلایز (TH) کثافت (t)₍₁₄₎ = 0.48 ، p = 0.64) د خواړو ډلو ترمینځ توپیر نه درلود.

احصایوي تحلیل. مطلب د انفرادي موږکانو سره؛ n = 8–19 موږګ / ډله؛ د زده کونکي ټیسټ ازموینه (B او D – F) یا خطي فشار (C)؛ ^*p <0.01.

انځور انځورونه

موږ هڅه وکړه چې د D2R په پابندۍ کې د موټرو منځګړیتوب کمولو میکانیزم پیژني. د دې کولو لپاره، موږ په دې کې توپیرونه لیدلي DrD2 mRNA (د وضعیت هایبرډیشن په وسیله) او وموندله چې دا په ټولو دریو سټراټیژیک فرعي برخو کې بدلون موندلی (dorsomedial: p = 0.92؛ dorsolateral: p = 0.90؛ ventral: p = 0.34؛ عکس S2ج). موږ د لوی D2R پروټین کچه اندازه کولو لپاره لویدیز بلاټونه ترسره کړل او په 50- یا 70-kDa بینډونو کې یې هیڅ ډول بدلون نه دی یادولی ، فکر کاوه چې د D2R بیلابیل ګلایکوسلیشن ایالاتو نمایندګي وکړي (دواړه p> 0.95 ، انځورونه S2D او S2E ()جانسن او کینی، 2010). په پاى کې، موږ د ليبلو او موجودو چوپيو په برخه کې د ميټابوليک پيچلو مارکرونو ارزونه وکړه ترڅو وګورئ چې دا ښايي د D2R کې کمښت پورې اړه ولري که چيرې مخکې د راپور ورکړ شوي)ډن او نور. ، 2012). اوبیس موږګ لوړ روژه لرونکي کولیسټرول لري (p <0.0001) ، لیپټین (p <0.0001) ، ګلوکوز (p = 0.0002) ، انسولین (p = 0.001) ، او د مقاومت پراساس هوموزټیسټ موډل ارزونه (HOMA-IR) (p <0.001) ، مګر نه ټرای ګلیسریډس یا وړیا غوړ اسیدونه (انځورونه S1D-S1J). په هرصورت، دا فکتورونه د D2R سره په موجودو چوټو کې پابند شوي ندي) هغه معلومات چې نه ښودل شوي (.

D1R-like پابندۍ (د آورډوډيګرافی له لارې ³H-SCH23390 ، تر دې دمه D1R پابند شوی) د چاغوالي او نري موږک تر مینځ توپیر نه درلود (p = 0.20؛ 2 شکلډي). د سټراټیټ DA مینځپانګې کې هم کوم توپیر شتون نلري ، د سټراټیټل نسج پنچونو (لوړ کیفیت مایع کروماتګرافۍ (HPLC) له لارې اندازه شوی) p = 0.41؛ 2 شکلE) ، یا ټیروسین هایدروکسیلیس امونومو-لیبلینګ (p = 0.64؛ 2 شکلF). د موجودو چوپیو په ډیزاین کې د توپیر ډیری راپورونو په رڼا کې (کارلن او نور. ، 2013, ډیوس اوټ. ، 2008, ویسټیټ اوټ. ، 2012 او وانګ او نور. ، 2014) ، موږ نور د نفتو فلوکس مایکروډالیسیز په کارولو سره دې ټکي ته سپړنه وکړه (نوي موږکان ، n = 6 په هرې ډلې). موږ بیا یوځل د خروجي DA (p = 0.99) یا د دې دوه میتابولیتونو کې هیڅ توپیر نه دی لیدلی ، د 3,4،0.85-ډیهایډروکسایفینیلاسیټیک اسید (DOPAC) (p = 0.68) او hovovanillic اسید (HVA) (p = XNUMX ، عکس S3)، د دې میتود سره، دا وښوده چې دا موټی په دې تجربو کې د ایټالیا د ډی اېډریلیل ډي ای کې د کمولو سره تړاو نه درلود.

د موټرو اړوند د وریدونکو توغندیو ډکول د موبایل چوپتیا کې خنډ و

موږ د vivo الیکټرو فزیولوژی کې ترسره کړی ترڅو معاینه کړو چې د سټراټیټل D2R کمولو څرنګوالی ممکن د سټراټیټ نیورونال محصول بدل کړي ، او پدې توګه د خوځښت کمولو کې همکاري کوي. موږ د نري او ځنګلي موږګیو dorsomedial سټراټیټ څخه ثبت کړې (په هر ګروپ کې n = 3 موږک ، هسټولوژي په 3 شکلF). که څه هم چاقوونکي موږکان په عمومي ډول لږ حرکت کړی ، خو د اعدام شوي خوځښت سرعت د دې ډلو ترمینځ توپیر نه درلود (p = 0.55؛ 3 شکلA) ، موږ ته اجازه راکوي چې د خوځنده او چاقو موږکونو تر مینځ د حرکت اړوند ډزې پرتله کړو. د بیسال ملټي واحد سپکینګ نرخونه د جانبي او چاږمو موږکانو ترمینځ توپیر نه درلود (لیان ، 2.1 ± 0.4 Hz؛ موټرو ، 2.0 ± 0.7 Hz؛ p = 0.93). په هرصورت ، د حرکت فعال واحدونو پراخه کول (3 شکلب) په کاseي چاو کې د پام وړ ټیټ و (p <0.0001؛ 3 شکلج). دا زموږ د "خوځښت فعال" واحدونو احصایوي تعریف پورې اړه نلري ، ځکه چې موږ د خوځښت په مقابل کې د مچانو په مقابل کې د ټولو ثبت شوي واحدونو په اوسط غبرګون کې د خوځښت شاوخوا شاوخوا حرکت کم کړی (د ANOVA لخوا مخابرات ، 0.0002. XNUMX؛ انځورونه 3D او 3E). موږ پایله کوو چې په سټیتمیم کې د سپکولو شرح توپیر نه درلود، مګر د حرکت په شاوخوا کې د سپکو تنظیم د موجودو چوپیو په مینځ کې له مینځه وړل شوی.

3 شکل.

د سټیټیټ اړوند اړوند ډزې کول په سټیتیمم کې د موټرو په چوپړ کې له مینځه وړل شوي

(A) د موټرو او موجودو چوپیو په بهیر کې د غورځنګ پیښو ورته رفتار درلود.

(B) د وریځلو نیورونونو کې د حرکت فعاله او غیر ځواب ورکوونکي ډزو مثالونه.

(سي) د خوځښت فعال شوي نیورونونو پراخه کول په موټرو کې موږکانو کې ټیټ وو (p = 0.002).

(D) د ثبت شویو نیورونونو منځنۍ حرکت حرکت اړوند ډزو کول.

(E) د تحریک اړوند اړوند ډزو د خورا خوارځواکۍ وروسته) خورات • د حرکت حرکت، ایف_(1,171) = 14.77 ، مخ <0.0002).

(ف) د ریاضیات (له مخی فرانکینین او پیکسینوس، 1997) په جانبي او ځنډنۍ ثبتې موږکانو کې د الکترول صفونو ځای ښودنه (n = 3 هر یو).

احصاييې شننه. (C) د فشر فجر ټسټ. (D او E) دوه اړخیزه بار بار - انووا اقدامات.

انځور انځورونه

د IMSN د تولید محصولات د Obese چوپړ کې د فعالیتونو معیارونه

د ازموینه کولو لپاره چې ایا د IMSNs محصول کمول کولی شي په موجودو چوپونو کې حرکت زیات کړي، موږ د Cre-recombinase (Cre) پورې تړلې ستراتیژی کارولو لپاره یو موخې G_iد اصالح شوي کپیپ اپپسیډ ډیزاین ډیزر ریپټر لخوا په ځانګړي ډول د ډیزاینر مخدره توکو لخوا) KOR-DREADD (لخوا د موجودو چوپړ شویو IMSNs کې فعال شوي)4 شکلA). که څه هم د اډینزین 2A-Rceptor Cre (A2A-Cre) ماوس مخکې له دې چې د امونیسټینګ سره تایید شوی و ښودل شو ترڅو وښیي چې د کری څرګندونې د IMSNs د توقیف لپاره ځانګړي دي)کوی او نور. ، 2013 او لیموس او نور. ، 2016) ، موږ د سایټیو های برډیز کولو کې د دوه فلورسنټ سره د دې لاین اضافي اعتبار ترسره کړ. نږدې ټول نیورانونه (98.7 ± ± 0.6 1,301، د XNUMX،XNUMX شمیرل شوي نیورونونو) دواړه څرګند کړل کری او DrD2 mRNA ، پداسې حال کې چې خورا لږ (1.3٪ - 0.6٪) هم څرګند شوی کری or DrD2 MRNA، مګر دواړه نه، دا تاییدوي چې د اکینکسکس - کری کرښه په باوري توګه د IMSNs هدف کوي) عکس S4).

4 شکل.

DREADD-Mediated د IMSNs معرفي کول په موجودي چوپ کې د بیارغونې فزیکي فعالیت

) A (د KOR-DREADD بیان انځور، او پالنمات) له مخې فرانکینین او پیکسینوس، 1997) د آکسومکس - کریم چوغیس په ټولو KOR-DREADD کې د ویاللو انجکشن سایټ روښانه کول؛ ناڅاپي په ګوته شوي ځای کې د ویروس څرګندول د ګوتی شمیرې ښیي.

(B) موزيک چوپۍ نور هم لیږدول کیږي کله چې د سالمیت سره د DMSO (ټ₍₇₎ = 3.056 ، p = 0.02).

(C-G) د سالنګ د ادارې څخه وروسته، موجودي چوغیانو په (C) حرکتونو تعقیب کې غیر مهم بدلونونه ښودلي، (D) د اوسط حرکت موده، او (E) د حرکت حرکت، چې کله DMSO اداره کړي. (F) سالکار اداره د بیاوړتیا تعدد زیاتوي (ټ₍₇₎ = 3.116 ، p = 0.02) ، مګر (G) د غوړیدو فریکونسۍ کې د پام وړ بدلون ندی راوستی.

(H) د لیانو چوغیان نور هم لیږدول کیږي کله چې د سالمیت سره د DMSO (ټ₍₉₎ = 3.3 ، p = 0.01).

(I) سالب د وحشي ډوله موږکانو حرکت باندې تاثیر نکړ چې د KOR-DREADD څرګندونه یې نه کوله (p = 0.77).

احصایوي تحلیل. (B – I) د جوړه شوي زده کونکي ټیسټ ازموینې؛ مطلب د انفرادي موږکانو سره؛ n = 6–10 موږګ / ډله.

انځور انځورونه

د KOR-DREADD agonist سالوینورین - B (سالب) انجیکشن د موټرو موږکانو لخوا د سفر کولو واټن ډیر کړی چې د KOR-DREADD څرګندوي (p = 0.02؛ 4 شکلب). سالب د پالنې فریکوینسي هم زیاته کړې (p = 0.02؛ 4 شکلF) او د فریکونسۍ زیاتوالي په لور یو رجحان رامنځ ته کړ (ټ₍₇₎ = 1.64 ، p = 0.12) ، مګر د خوځیدو موده یا سرعت نه دی (انځورونه 4سي – 4E). د سالب انجیکشن هم په نري موږکانو کې حرکت ډیر کړی (p = 0.01؛ 4 شکلH) ، مګر په وحشي ډول موږکانو کې نه چې د KOR-DREADD څرګند نه کړي (p = 0.73؛ 4 شکلزه). موږ نتیجه ورکړو چې د IMSNs د محصول کمول د خوند او غوږو څارویو د خوځښت کچې ته د زیاتوالي لپاره کافي دي.

د D2R کچه د راتلونکو وزنونو لاسته راوړنو لپاره څارویان نه پیژني

په پاى کې، موږ دا معاينه کړې چې آيا د D2R سيګينګ کې پخوانۍ موجوده توپيرونه ښايي د انفرادي چوغام اټکل وکړي چې د غذا-حوصلې موټرو ته وړاندې کيږي. د دې پوښتنې په نښه کولو لپاره، موږ د کوچنیو پوټینرون جذب ټرافیژی) کوچني پیټ (سره سره ترسره کړ ¹⁸F-flypride د ډیټینټ د غذایی خوړو د خوړو د مخنیوی دمخه د D2R د شتون شتون معلومولو لپاره)5 شکلA). موږ د D2R د احتمالي احتمالي احتمالي توپیر په اړه د لوړ کچې توپیر یاد کړ، لکه څنګه چې نورو یې ښودلي)قسطنطنیس او نور. ، 2011). د D2R شتون کې انفرادي توپیرونه په خلاص فیلډ کې د حرکت سره مثبت تړاو درلود (p = 0.045؛ 5 شکلب) ، په حرکت کې د D2Rs رول سره مطابقت لري. د مایکرو PET سکین کولو تعقیب ، څاروي د 18 اونیو لپاره د لوړ غوړ رژیم کې ساتل شوي ، ترڅو ازموینه وکړي چې ایا د ټیټ D2R سره موږکان به د رژیم هڅول شوي وزن زیاتوالي لپاره ډیر زیانمن وي. په حیرانتیا سره ، موږ د مثبت د دې تجربې په اوږدو کې د لومړني D2R شتون او وزن اخیستنې تر مینځ اړیکې (p = 0.10؛ 5 شکلC). که څه هم دا اړیکه خورا مهم نه وه، دا د فرضیې په وړاندې بحث کوي چې د ټي D2R شتون یا کم فزیکي غیر فعالیت د حیواناتو وزن ډیر ګټور کوي. دا زموږ د موندنو سره هم سمون درلود چې نه یوازې د پرانیستې ساحې فعالیتونه، او په ټول تجربه کې د آزادو ساحو فعالیت نه دی، د وزن په ترلاسه کولو پورې تړاو لري)انځورونه 1F-1K).

5 شکل.

Basal D2R پابندول د راتلونکي وزن لاسته راوړلو اټکل نه و

(A) بېلګه D2R د سټریټیم او سینیربیمم په کارولو کې د کوچنیو پیټرو شتون شتون ¹⁸F-fallypride.

(B او C) (B) د قوي احتمالي باسیل خلاص میدان حرکت سره تړاو لري (r = 0.56 ، p = 0.045) ، او (C) د لوړ غوړ رژیم هڅول شوي وزن له زیاتوالي سره د مثبتو اړیکو په لور تمایل شوی (r = 0.50، p) = 0.10 ، n = 12–14 موږګ).

(D) استازي D2R آټراډيژندنې په ګوته کې د D2R له خورا مهم سره (اوپر) او IMSN-DrD2د غاړې چوکۍ (لاندې).

(E او F) (E) iMSN-DrD2د پوزې چوپړ په یوه پرانیستې سیمه کې فزیکي فعالیت کم کړی (ټ₍₈₎ = 2.99 ، p = 0.02) او (F) د کور پنجرو چلولو څرخونو کې (p = 0.01 ، n = 5–19 موږکان / ډله).

(G) iMSN-DrD2د غاړې چوکۍ او DrD2د سپک شوي کنټرول کنټرول د لوړ غذا خوړو په وزن کې ورته وزن ترلاسه کړ (F_(5,70) = 1.417 ، مخ = 0.23؛ n = 6–10 موږګ / ډله).

(H – J) (H) د نورمال انرژي اخیستل (p = 0.60) ، (I) انرژي مصرف (p = 0.47) ، یا (J) RER (p = 0.17) کې د IMSN-D2R-KO ترمینځ هیڅ توپیر شتون نلري. د موږکانو او تزکرو کنټرولونه.

احصاييې شننه. (B او C) لینډر تاوان؛ (E، F، او H-J) د زده کونکو ازموینه نده؛ (G) دوه اړخیزه بار بار - انووا اقدامات، ^*p <0.05.

انځور انځورونه

د فعالیت د کچې او وزن لاسته راوړلو دمخه د پخوانیو موجود توپیرونو ترمنځ اړیکو ته د السرسی لپاره، موږ د جینیکیک مایک ماډل څخه ګټه پورته کړه چې هدف یې له منځه وړل دي. DrD2 د iMSNs څخه جین (iMSN-DrD2-KO) مګر د نورو حجرو ډولونو کې خوندي بیان ( ډوبس اوټ. ، 2016 او لیموس او نور. ، 2016). لکه څنګه چې مخکې راپور ورکړ شوی، iMSN-DrD2-KO موږګۍ په خلاصه فیلم کې د تغیر کونکو کنټرولونو څخه لږ حرکت کړی (p = 0.02؛ 5 شکلE) او په کور کې د کیج چلولو څرخونه (p = 0.01؛ 5 شکلF). د پورته تجربو سره موافق، IMSN-DrD2- KO موږګیو د هغوی تسکره کنترولونو څخه ډیر وزن نه ترلاسه کړی کله چې د لوړ غوړ رژیم کېښودل شي (p = 0.23؛ 5 شکلG). د دوی د انرژی کارولو سره ډیر نږدې نږدې معاینه کولو لپاره، موږ غیر مستقیم کالوریمیتری تجربو ترسره کولو لپاره د IMSN-DrD2- د مځکو کنټرول ته موږکان. موږ د انرژي مصرف (p = 0.60) ، د انرژي مصرف (p = 0.47) ، یا تنفسي تبادلې تناسب (RER) (د CO تناسب) کې د پام وړ توپیرونه ونه موندل.₂ تولید ته O₂ مصرف [VCO₂/ VO₂] ، p = 0.17) د IMSN-Drd2-KO موږکانو او د هغوی د تزکرو کنټرولونو تر مینځ ، پدې معنی چې د IMSN-Drd2-KO موږکانو په حرکت کې کمښت د انرژي کارولو بدلونونو کې ژباړه نه کوي (انځورونه 5H-5J). په پاى کې، موږ هغه حد ته معلومه کړه چې د D2R په وسيله کې د کوچني کمښت) لکه څنګه چې زموږ په موټرو چوپړ کې لیدل شوي (کېدای شي د حرکت او وزن ګټونکي تنظیم کړي. د دې کولو لپاره، موږ د مایکرو کرښه کارولې وه چې د 30٪ -40٪ په پاټینالین کې کمښت پایلې لري DrD2 MRNA (iMSN-Drd2-Het) ( لیموس او نور. ، 2016). دې موږګیو کم حرکت هم ښودلی ، په ګوته کوي چې د D2R یوه برخه نیمه ښکته کول د موټرو کسر تولید لپاره کافی دی (p = 0.04؛ عکس S5الف). د IMSN-Drd2-KO موږګیو ته ورته ، iMSN-Drd2-het موږګی د لوړ غوړ رژیم هڅول شوي وزن زیاتوالي لپاره ډیر حساس نه و (p = 0.89؛ عکس S5ب). موږ پایله کوو چې د D2R په تغیراتو کې بدلون د حرکت بدلون بدلولو لپاره کافی دی، مګر په ګوزڼ کې د کالوریک توازن یا بدن وزن نه.

د بحث

موجوديت د فزیکي فعالیتونو سره تړلی دی، چې اکثرا د وزن په ترلاسه کولو کې باور لري. برسیره پردې، د تغذیې زیاتیدل د موټی سره د خلکو د ټیټې کچې د کچې په کچې کې د ونډې اخیستنې احتمال دی)اکیکیکاکس او لینډ، 2006 او ویسټیرپرپ، ایکس این ایم ایکس)، که څه هم دا نظر ستونزمن دی چې نېغ په نېغه ازمايښت وکړي. په زړه پورې، هغه خلک چې د خوړو له لارې یا وزن له لاسه ورکوي (ډی بویر اټ ، 1986, ډی ګروټ اوټ. ، 1989, مارټین ایټ. ، 2007 او ریډمین ایټ. ، 2009) یا د باریټریکیک سرجری (برګلیند او نور. ، 2015, برګلیند او نور. ، 2016, بانډ او نور ، 2010 XNUMX.. او رامیرز - ماریرو او ال. ، 2014) د هغوی د فعالیت کچې زیاتوالی نه کوي، د عدم وزن وزن په مقابل کې د دوی د فعالیتونو المل ګرځي. دلته، موږ دا فرضيه وڅېړله چې دا غذا-حوصله شوي موټری د DA لیږد کې د خسارې له لارې فزیکي فعالیتونو المل ګرځي. د پخوانیو کارونو سره مطابقت، موږ وموندله چې د اوږدمهاله غذايي خوړو غذایې کمښت د D2R تړل شوي کمښت)حاجنل او نور ، 2008..., هوانګ او نور. ، 2006, ناریاناسوامي او نور. ، 2013, وین ډي ګیسن او نور. ، 2012 او وین ډي ګیسن او نور. ، 2013). موږ د موټرو چوپیو کې د سټراټيټ نیورونو د موټرو اړوند ډزو کې یو خساره لیدلی. د G سره د IMSNs منع کول_iد DREADD ژغورل شوي فعالیت په موجودو چوپیو کې وښودل، دا څرګندوي چې د اضافی تغذیې سره چوپات کولی شي معمولا حرکت وکړي کله چې د Basal Goglia تولید بحال شي. په حیرانتیا سره، مګر، نه د بې ځایه D2R اندازه یا نه فزیکي فعالیت د وزن سره د تړاو سره تړاو لري، یوه نقشه چې په ډیری تجربو کې لیدل کیږي. دا د چوپۍ په اړه د یوې څیړنې پر خلاف ده، کوم چې ممکن ډولونه یا تجربی توپیرونه منعکس کړي)مایکلایډز اوټ. ، 2012). موږ نتیجه ورکوو چې په D2R کې کمښت او وروسته د فزیکي غیر فعالۍ وړتیا د موټری پایلې دي، مګر په بالقوه توګه په چوپتیا کې د وزن زیاتوالي سره تړاو نه لري.

د D2R سگنلینګ او موټرو تر مینځ اړیکه په لومړي ځل په انسانانو کې پیژندل شوې وه او په پیل کې د نورو لخوا نقل شوې وه)ډي ویجر او نور. ، 2011, کیسیلر او نور. ، 2014, وولوکو ایټ. ، 2008 او وانګ او نور. ، 2001). په هرصورت، وروستي کار د دې موندنې په پوښتنې کې ویل کیږي)کاراګیګیو ایټال. ، 2015, کاسوګروو اوټ. ، 2015, ډن او نور. ، 2012, ګو او نور. ، 2014, کارلسن او نور. ، 2015, کارلسن او نور. ، 2016, سټیل ایټ. ، 2010 او توومین او نور. ، 2015). که څه هم اضافي څیړنې ته اړتیا لیدل کیږي چې د توپیرونو په اړه د کلینیکي مطالعاتو تر مینځ لیدل شوي، دوی ممکن د کلینیکي مطالعاتو او PET امیجونو پیچلتیاوې منعکس کړي. د بیلګې په توګه، د ریډلوډراډیډ، رادیو لیګند په ډیرو څیړنو کې کارول کیږي، کیدای شي د ډیرو DA لخوا بې ځایه کیدلی شي، او له دې امله پابندیدل کیدای شي د Basal DA سر په توپیرونو اغیزه وکړي (هورسټمین او نور. ، 2015). برسېره پردې، د D2R د کچو او موټرو تر مینځ اړیکه ممکن غیر نری رنګه وي، لکه د D2Rs کې بدلونونه ممکن په ناروغانو کې د موبایل مختلفو کچو سره واقع شي)هورسټمین او نور. ، 2015). بالاخره، فکتورونه لکه د خوب موده)Wiers ET al. ، 2016) او د کیفین مینځل (وولوکو ایټ. ، 2015) د D2R پابندۍ هم اغیزمن کولی شي، او په ډیری کلینیکي مطالعاتو کې راپور شوي یا کنټرول ندي. د توپیر دغه سرچینې د څارویو په مطالعاتو کې کمول کیدی شي، چې د D2R mRNA کې د کمولو یوه دوامداره انځور رنګ کوي)میټیس او ال. ، 2010 او جانګ او نور. ، 2015)، پروټین (اډمز او نور. ، 2015 او جانسن او کینی، 2010)، او د رسیدونکي پابندۍ (حاجنل او نور ، 2008..., هوانګ او نور. ، 2006, ناریاناسوامي او نور. ، 2013, وین ډي ګیسن او نور. ، 2012 او وین ډي ګیسن او نور. ، 2013) په موجودو غاړو کې. زموږ کار د راپورونو له مخې د ادبياتو دغه جسم پراخوي چې د DA سنګینال نورې اړخونه په موجودو چوپونو کې بدیل نه دي، حتی هغه کسان چې د D2Rs کمولو سره. برسیره پردې، د D2R کې زموږ لیدل شوي کمښت ورکړ شوی ³H-Spiperone، مګر په D2R پروټین کې هیڅ بدلون نه دی راغلی DrD2 MRNA، موږ باور لرو چې د D2R بدلونونه کیدای شي وروسته ترانسپورت بدلونونه شامل وي لکه د ریکورټر داخلي کولو. که څه هم زموږ معلوماتو وړاندیز کوي چې د D2R کمول د موټری په فزیکي فعالیت کې د کمولو لپاره کافی دی، فزیکي فعالیت د ډیری فکتورونو په واسطه اغیز لري چې جینیکیک او چاپیریال پکې شامل دي ( بومان او ال. ، 2012). موږ باور لرو چې D2R د یواځینی نیورولوژیکي بدلون دی چې د موټی په فزیکي فعالیتونو پورې اړه لري. د بیلګې په توګه، د هورمونونو د خپرېدو بدلونونه لکه ghrelin، leptin، او د ډاپینینجیک نیورونس په اړه انسولین عمل او ممکن فعالیت باندې اغیزه وکړي)موری او نور. ، 2014). په پای کې، که څه هم موږ په D1R کې بدلون ندی لیدلی، موږ نشو کولی په مستقیم ډول د نیورونونو نیورولیوالي ډزو کې بدلونونه سم کړو چې ممکن هم فزیکي فعالیت اغیزمنه کړي.

دا روښانه نده چې آیا د D2R شتون کې توپیر د افرادو لپاره وزن اخلي. د انسان سره DrD2 د Taq1A اتحادیې د D2R شتون او د موټی زیاتوالی کم کړی) بلم او نور. ، 1996, ترکا et او نور. ، 2013, نوبل اوټ. ، 1991, سټاټ او نور. ، 2008 او تامپسن او نور. ، 1997). برسېره پردې، د D2Rs د نړیوالو ړنګولو سره چوغندر ډیر لوړې خوړو خواړو وزن درلود، کوم چې فزیکي غیر فعالیت ته منسوب شوی)بییلر او نور. ، 2015). په مقابل کې، د انفرادي توپیر (طبیعی یا جنیالي پلوه حوصله شوي) د درملو D2R کې زموږ په مطالعې کې د فعالیت کچې سره تړاو لري، مګر نه د وزن لاسته راوړنې سره تړاو لري. زموږ په څیړنه کې یو مهم توپیر دا وو چې زموږ جینیاتي ماډل یوازې د D2R لخوا له IMSNs څخه لرې کړل. برسېره پردې، د خوړو د ترلاسه کولو او انرژۍ لګښتونو محتاط اندازه معلومه کړه چې د دې نیورونو په اړه د D2R تطبیق د انرژۍ توازن بدل نه کړ. لکه څنګه چې، د D2R فعالیت او د انرژۍ توازن تر منځ اړیکو ښودلی شي کیدای شي د D2Rs اغیزې په نورو حجرو کې لیدل کیږي. زموږ تجربې د دې پایلې ملاتړ کوي چې فزیکي فعالیت د موټری پایله ده مګر په وزن کې د بدلون سبب کولو لپاره بس نه دی.

د مخ پر ودې شواهدو سره سره د فزیکي فعالیتونو په وده کې د فزیکي فعالیت سره تړل کیږي او د نورو نورو عصبي ناروغیو خطر خطر کم شوی، په فزیکي فعالیتونو کې د فزیکي فعالیت کچه ټیټه ده)اکیکاکیس او نور. ، 2016). د فزیکي فعالیتونو د کچې د زیاتوالي لپاره د اغیزمنو مداخلو نشتوالی د انفرادي کسانو سره د فزیکي غیر فعالۍ په اساس د سیلولر او مالیکول میکانیزمونو د پوهیدو نشتوالی کې منعکس کیږي. دلته، موږ د Basal ganglia فعالیت کې بدلونونو فزیکي غیر فعالیت سره اړیکه نیسو، په انفرادي کسانو کې د فزیکي فعالیت نشتوالي لپاره بیولوژیکي توضیحات چمتو کول.

تجرباتي کړنلارې

مضامین او خواړه

په ټولو مطالعاتو کې ، موږکان په انفرادي ډول د معیاري شرایطو لاندې ځای په ځای شوي وو (د 12-hr ر /ا / تیاره دوره ، 21-22 ° C) ، خواړو او اوبو ته د لایټیم لاسرسي سره. موږکانو ته معیاري چای رژیم (5001 روډینټ رژیم 3.00. 29 kcal / g 13 56 انرژي له پروټین څخه ، 12492٪ د غوړ څخه ، او 5.24٪ د کاربوهایډریټ څخه Lab لابراتوار) یا د لوړ غوړ رژیم (D20 60 20 kcal / g سره چمتو شوي. XNUMX energy انرژي له پروټین څخه ترلاسه شوې ، XNUMX٪ له غوړ څخه ، او XNUMX٪ له کاربوهایډریټ څخه Research د څیړنې خواړو). ټولې کړنلارې د شکرې ، هضم او د پښتورګو ناروغیو په اړه د ملي انسټیټیوټ د څارویو پاملرنې او کارونې کمیټې لارښوونو سره سم ترسره شوي.

ټرانسجنیک مشروط نخښه iMSN-DrD2-د کوچیانو چوپړان د چرګانو د تیریدو له الرې رامینځ ته شوي څرګندوي چې د کریم لخوا د اډینزین 2A ریزورور جین مقرره عناصر کارول کیږي)Adora2a() B6.FVB (Cg) -Tg (Adora2a-Cre) KG139GSAT / Mmucd؛ GENSAT؛ 036158-UCD DrD2 ناڅاپي ایتالکس بکسناکسسکسومکس (FVB) -DrD2^{Tm1.1Mubub / J}، JAX020631 (بیلارو او نور. ، 2011).

د بدن جوړښت او د انرژۍ مصرف محاسبه

د بدن جوړښت هرې اونۍ په کارولو سره اندازه کوله ¹H-NMR سپیکروسکوپی (EchoMRI-100H؛ اګو طبی سیسټمونه). د انرژی مصارفو د انرژۍ د توازن د حسابولو په کارولو سره پریکړه وشوه (ګو او نور. ، 2009 او راووسین او نور. ، 2013):

د انرژۍ لګښت = Metabolizableenergyintake- (Δfatmass + Δfat-freemass).

ریاضی جیکس بل کړئ

د آزادو ساحو فعالیت

د فینټو ټایر پنجرو (30 × 30 سانتي متره N نولډس IT) کې د خلاص ډګر ازمونې ترسره شوې ، او د ایتو ویژن ویډیو تحلیل سافټویر (نسخه 11؛ نولډس IT) د ازموینې په اوږدو کې د موږکانو تعقیب لپاره کارول شوی و.

کور کیج هلک چلول

د ویل چلول د ټیټ پروف وائرلیس چلولو ویلونو (میډ ایسوسی ایټس) په موږکانو د کور پنجرو کې په هر 72 اونیو کې د 3 ساعتونو لپاره د رژیم (خواړو هڅولو چاق لرونکي تجرباتو) یا په دوامداره توګه (iMSN- سره اندازه شوی.DrD2-KO تجربې).

د وینې اندازه

د قربانیانو څارویو څخه د Ocular vein وینه د 4-hr روژه وروسته وروسته د سیرم میټابولیز او هرمونز تحلیل لپاره کارول کیده.

د ډاپامین رییکورټ آورډریګرافی

ښیې هیمیسیکشنونه د سټراټا په سطح کې (−0.22 ، 0.14 ، 0.62 ، او له برګما څخه 1.18 ملي میتر ته چې د سټراټیټ بشپړ حد پوښښ ورکوي) په 12 ملي ملي برخو کې ځړول شوي و. سلایډونه په قوي بفر کې (20 ملي متره HEPES ، 154 ملي متر NCL ، او 0.1 ov بیوین سیرم البومین [BSA] p pH 7.4) په 20 دقیقو کې په 37 ° C کې زوړ او پرینټینګ شوي و. د D1R پابندۍ د 1.5 NM ټریټیم لیبل شوي SCH-23390 (Perkin-Elmer) او 100 nM ketanserin په 60 ass 37 2 C کې د 600 دقیقې لپاره د پراني بفر کې د سلایډونو incubating لخوا ارزول شوی. د D100R پابندۍ د 100 pM ټریټیم لیبل شوي سپایپرون (پرکین - ایلمر) او 37 nM کیټینسرین سره د 10 دقیقې لپاره په 4 ° C کې ارزول شوي سلایډونه ارزول شوي. د مناسب رادیو ګلیډ سره د غوړیدو په تعقیب ، سلایډونه د 10 دقیقو لپاره په واش بفر (154 ملي متر Tris-HCl ، 0 MM NaCl) کې د 7 دقیقو لپاره دوه ځله وینځل شول ، او بیا یې په اوبو کې غوړ کړل (1 ° C) او په شپه کې یې وچولو ته اجازه ورکړه. سلایډونه بیا د 11 (D2R پابند) یا XNUMX ورځو (DXNUMXR پابند) لپاره فاسفور - امیجنگ پلیټونو ته رسیدلي او د فاسفومایګر (سایکلون Per پرکین - ایلمر) په کارولو سره رامینځته شوي. د تحلیل لپاره ، د مطلوب ساحو تحلیل شوي او د مطلوب عکس تحلیل سافټویر (پرکین - ایلمر) په کارولو سره تحلیل شوي.

لویدیځ بلاک کول

لویدیځ بلوټونه د مایکروسافټ ضد D2DR انټيبیو (1: 500؛ سانتا کروز؛ سک-ایکس اینمکس) یا د مایکس ضد GAPDH انتيبیو سره incubated شوي (5303: 1؛ سانتا کروز؛ سک-1,000) او وروسته بیا د وزو ضد ضد IgG- HRP (32233: 1؛ سانتا کروز؛ سک-ایکسومیم). د کیمیاومینیننس سگنل د لوی کیمیلومینانسنس لویدیځ د چاودیدونکو توکو موندلو ریګینټونو کارول (Bio-Rad) او د کیمیدیک امیجنگ سیسټم سره لیدل شوی (بایو-ریډ) کارول شوی.

د Situ Hybridization کې

د سایټای هایدریزيشن (پرمختللی حجره تشخیص) لپاره د RNAscope ملټیکس فلورسنټ Assay کټ کارول شوی و. په لنډه توګه ، د فارمیلین مقرر شوې برخې په ایتانول کې د هایډریټ شوي کیدو وروسته د پروټیز ناسازګار کیدو وروسته. برخې بیا د RNAscope oligonucleotide پروبونو سره په مقابل کې ترکیب شوي DrD2. د تحقیقاتو د حفظ الصح کولو وروسته، سلایډونه د RNAscope پروتوکولونو مطابق د سلګونو امپلیفائر سره اختصاص شوي. بیا بیا د RNAscope واش بفر سره فلش شوي وو. په پای کې، د DAPI د رای ورکوونکو سره سم سلایډونه نصب شوي.

د بریښناليک تفتیش سره د لوړ فعالیت مایع د کروماتورۍ

د لاسي پواسطه د DA د موندلو لپاره پروسیجر شوي و چې د مستقیم پړاو لوړ فعالیت مائع کرومیټرافیټ سره د الکتریک کیمیکل موندنې سره) HPLC-EC (، لکه څنګه چې مخکې بیان شوي)کلیپټریک اوټ. ، 1986).

د تیروسین هیدروکسیلیز اموناتیسیک کیمیا

سلائیډ ایښودل شوي برخې په 10 neutral غیر جانبدار بفر شوي فارینین کې تنظیم شوې وې ، په 0.1 M TBS (pH 7.5) کې کلین شوي او د انټي باډي په لومړنۍ محلول کې غوړ شوي چې 3 normal نورمالي خره سیرم ، 0.3 T ټریټون X-100 ، او د خرگوش ضد ټایروسین هایدروکسلایز انټي باډي لري. (1: 1,000،152 Mill ملی پور؛ MAB23) په شپه کې په 3 ° C. په بله ورځ ، د نسج برخې په TBS کې کلکې شوې وې او د انټي باډي په دوهم محلول کې تثبیت شوي چې د 0.3 normal نورمالي خره سیرم ، 100 T ټریټون X-555 ، او د وزې ضد ربیب د الیکسا فلور 132 (ملی پور؛ AQXNUMXF) سره یوځای شوي. د هر ماؤس لپاره ، دوه سټراټیټ برخې تحلیل شوې ، پرته له څلور موږکانو (دوه HFD ، دوه چو) پرته چیرې چې یوازې یوه برخه د ټیسټ یا عکس کیفیت له امله تحلیل شوې.

کوچني پیټ

چوپۍ سره انجیل شوی ¹⁸F-fallypride د 2.5 ± 0.34 mCi / nmol د ځانګړي فعالیت سره د 130 μL حجم کې د رګ له لارې پداسې حال کې چې isoflurane انستیزیا لاندې وي. د مایکرو پیټ سکین د 2 ساعت لپاره ترسره شوی ، چې په جریان کې 25 فریمونه د تحلیل لپاره ترلاسه شوي. د وخت فعالیت منحل د ¹⁸د ګټو په ساحو کې F-flypride (ROIs) د AFNI سافټویر لخوا کارول شوي (https://afni.nimh.nih.gov/afni) او متحرک پیرامیټونه د څلور ډیزاین ماډل سره په مناسبه توګه د MATLAB سکرپٹ په کارولو سره مناسب و) د سیريبیلم سره چې د حوالې نسج په توګه کارول کیده (د D2R د پابندۍ وړتیا د معلومولو لپاره)لمرټما او هوم، ایکس این ایم ایکس).

د Vivo الیکټوفیسولوژی کې

ریکارډونه د بریښنایی صف څخه رامینځته شوي چې 32 ټیفلیون لیپت ټینګسټن مایکروییرونه (35 ملي میتره قطر) په یو طرفه د ډورسمیډیال سټریټم کې نصب شوي (مخکیني / پوستیر [A / P]: +0.8 med مینځنۍ / پسنی [M / L]: +1.5 do ډورسل / وینټرل [D / V]: bre2.6 ملي میتر فی برګما) ، او د سوداګریزو سافټویر سره پروسس شوی (آفلاین سارټر او نیورو ایکسپلورر P پلیکسن).

د سټراټيکسیک وییرل ویکټور انجیکشن

موږکانو د لنډ وخت لپاره د isofluran نمایش له لارې انستیتیز کړی و. یوځل ژور انستیتیک شو ، یوځل چینه د مینځنۍ کرښې په اوږدو کې جوړه شوې وه ، ټوپک افشا شوی و ، او دوه اړخیز کرینوتومي جوړه شوې وه (A / P: +0.5؛ M / L: bre 1.5 ملی ګرامه په برنامه کې). ویروس ویکتور چې د مخنیوي KOR-DREADD (Syn-DIO-hKORD-IRES-mCit-WPRE؛ 0.5 μL) درلودونکی په دوه اړخيزه توګه dorsomedial سټریټم کې D (V / V ، .2.8 ملي میتر د سر له پورتنۍ برخې) ته اچول شوی او د څرګندولو اجازه یې ورکړل شوې د تجربې نه 9 اونۍ دمخه.

ن-نیٹ فلوکس میروډالیزیزیز او ډاپامین شننه

د موږکانو د فوټبال سټراټیټم کې د بیسل بیروني حجرې DA ، DOPAC ، او HVA اندازه کول د نه خالص فاکس مایکروډالیسیز طریقې لخوا ترسره شوي. یو طرفه 2-ملي پروبونه (18-kDa جھلی کټ آف) د نمونې راټولولو دمخه د 1 ساعتونو لپاره په 1 μL / دقیقې کې د مصنوعي سیربروسپینل مایع (ACSF) په دوامداره خوشبوالي سره د کینول امپلانټینټ وروسته 4 اونۍ په سټرایټیکسي ډول ځای پرځای شوی و (وګورئ. اضافي ضمیمه کړنلارې). د خلیج DA کچو اندازه کولو لپاره د خالص فلوکس تجربه د ډایالیسس تفتیش له لارې په ACSF کې د DA شپږ بیلابیل غلظت (0، 2.5، 5، 10، 20، او 40 nM) تصادفي سره بشپړ شوی. د DA هر غلظت د 30 دقیقو لپاره کم شوی و ، او بیا د 2 × 10-min نمونې د 2.5 MM HCl جمع 100 MD EDTA 1 μL کې راټول شوي ترڅو د catecholamine تخریب مخه ونیسي او په −80 ° C کې منجمد شي. د نیورو کیمیکل تحلیلونو لپاره ، د هایپرومیټریک کشف کولو لپاره ملحدیتي HPLC سیسټم کارول شوی (HPLC-EC؛ BASi LC-4C) یوازې موږکان چې د سمې پلټنې ځای په ځای کول پکې په شننه کې شامل شوي (عکس S3E).

Statistics

احصایوي تحلیل د ګراف پیډ پریزم (نسخه 6.07 Gra ګراف پیډ سافټویر) په کارولو سره ترسره شوی. غیر لدې چې ویل شوي ، د دوه پوړیو زده کونکو ټیسټ ټیسټونه کارول شوي. که نه نو دوه جوړه جوړه جوړه شوي ټیسټونه ، یو طرفه تکراري تدابیر ANOVA یا دوه لارې تکراري ګامونه ANOVA کارول شوي کله چې مناسبه وي او لکه څنګه چې ویل شوي. ANOVAs وروسته د پوسټ هاک پرتله کولو لپاره t آزموینې تعقیب شوي. پایلې د پا <0.05 په الفا کې د پام وړ ګ wereل شوې وې ، یا د الجفا سره چې د بیجامني - هچبرګ غلط موندنې نرخ (FDR) سمون لخوا ټاکل شوی ، چیرې چې مناسب وي.

د لیکوال ونډې

DMF ، KD ، TJO ، MS ، AK ، IPSGRVAA ، MR ، KDH او AVK ، تجربې ډیزاین کړې. DMF ، KD ، TJO ، MS ، او AVK د چلند تجربې ترسره او تحلیل کړې. آی پي د لویدیز بلاټینګ تجربې ترسره کړې. DMF ، او AVK د vivo الیکټروفیسولوژیک ډیټا کې ترسره او تحلیل کړي. DMF ، J.-SL ، JG ، او AVK د مایکرو PET تجربې ترسره او تحلیل کړې. DMF ، KD ، TJO ، او AVK پاusه لیکلې. ټولو لیکوالانو په پایلو بحث وکړ او په پاusه یې تبصره وکړه.

کوروداني د

دا کار د NIH د Intramural Research Research، د شکر او هضم ملي ملي انسجام (NIDDK) لخوا ملاتړ شوی. موږ غواړو د مایک میټابولیزیز کور څخه د NIDDK په اړه د سیرم میټابولیز او هرمونز، اندریس بووننو ارزولو لپاره د ډاپامین مایکډالیزیز تجربو ډیزاین کولو کې د مرستې سره، او د ډاکټر جوادیت والټر، ډاکټر کریسین ډپری، او ډاکټر کلیریلیلیلیل د HPLC سره د مرستې لپاره ارزونه وکړو. د ډاپامین نسج منځپانګې تحلیل. موږ همداراز د ډاکټر سکاټینګ څخه د لابراتوار تجهیزاتو او مرسته کولو لپاره د بسپنې مطالعاتو څخه مننه کوو. د AVK لابراتوار، مارک ریتمان، او نک ریبا د غړو تجربو په اړه د انټرنیټ ډیزاین لپاره او د نسباتو د محتاط مطالعې سره هم مننه.

ضمیمه معلومات

لاسوند S1. ضمیمه تجربه لرونکي کړنالرې او انځورونه S1-S5.

د پی ډی اف فایلونو سره مرسته

غوراوي

لاسوند S2. مقالې او اضافي ضمیمه معلومات.

د پی ډی اف فایلونو سره مرسته

غوراوي

ماخذونه

اډمز او نور. ، 2015
WK Adams، JL Sussman، S. Kaur، AM D'Souza، TJ Kiffer، CA Winstanley
اوږد مهاله، د غنمو په لوړه غذا کې د لوړې خوړو غذا اخیستل د تغیر کنترول او د حوزې د غاړې درملو کمښت D2 رسیدونکي سگنلین - دوه د روږدي کسانو زیان منونکي
یورو J. نیوراسسي.، 42 (2015)، پی پی 3095-3104
CrossRef

چټک لینکونه