Стриатална регулација ДелтаФосБ, ФосБ и цФос током кокаинске самоуправе и повлачења (КСНУМКС)

Ј Неуроцхем. Ауторски рукопис; доступно у ПМЦ-у 1. октобра 2011.
Објављено у коначном облику:
Коначно уређена верзија овог чланка издавача доступна је на Ј Неуроцхем
Погледајте друге чланке у ПМЦ-у цитат објављеном чланку.

Апстрактан

Хронична изложеност лековима изазива промене у профилима експресије гена за које се сматра да су у основи развоја зависности од дрога. Ова студија је испитивала регулацију Фос-фамилије транскрипционих фактора, посебно цФос, ФосБ и ΔФосБ, у стријаталним подрегионима током и после хроничне интравенске примене кокаина код пацова који су сами давали и држали јармове. Открили смо да цФос, ФосБ и ΔФосБ показују регионално и временски различите обрасце експресије, са већом акумулацијом ΔФосБ протеина у нуцлеус аццумбенс (НАц) љусци и језгру након хроничне примене кокаина, док је ΔФосБ повећан у цаудате-путамену (ЦПу) и даље слично било са акутном или хроничном применом. Насупрот томе, развила се толеранција на мРНА изазвану кокаином за ΔФосБ у сва 3 стријатална подрегија са хроничном применом. Толеранција се такође развила до експресије ФосБ, посебно у НАц љусци и ЦПу. Занимљиво је да је толеранција на индукцију цФос изазвана кокаином зависила од вољног управљања уносом кокаина у вентралним, али не и дорзалним стријаталним регионима, док је регулација ФосБ и ΔФосБ била слична код животиња које су саме давале кокаин и животиња у јарму. Према томе, неуроадаптације у ЦПу посредоване ΔФосБ могу се десити раније него што се раније мислило са почетком интравенске употребе кокаина и, заједно са већом акумулацијом ΔФосБ у НАц, могу допринети повећању понашања у потрази за кокаином повезаним са зависношћу.

Кључне речи: кокаин, само-администрирање, одвикавање, стриатум, Фос

увод

Поновљено излагање дрогама које изазивају зависност производи неуроадаптације у путевима награђивања мозга за које се сматра да су у основи развоја компулзивног узимања дрога и постојаности жудње и релапса понашања у потрази за дрогом у повлачењу. Многе од ових неуроадаптација су резултат индукције фактора транскрипције и накнадне регулације експресије гена, што може имати потенцијално дуготрајне ефекте на структуру и функцију неурона (Џанг ет ал. 2006). Фос фамилија транскрипционих фактора је од посебног интереса, јер чланови ове породице показују различите обрасце индукције у стријаталним регионима након акутне и хроничне изложености кокаину. Када се кокаин даје акутно на пасиван, неконтингентан начин (тј. интраперитонеалном (ИП) ињекцијом) он повећава цФос и ФосБ мРНА и протеине у дорзалној (каудат-путамен, ЦПу) и вентралној (нуцлеус аццумбенс, НАц) стриатум (Граибиел ет ал. 1990; Млади ет ал. 1991; Нада ет ал. 1992), док се толеранција на овај одговор јавља код хроничне пасивне администрације (Нада ет ал. 1992, 1994; Алибхаи ет ал. 2007). Насупрот томе, стријатални нивои ΔФосБ (35-37 кДа), стабилна скраћена варијанта спајања фосБ гена, су повишене након хроничне, али не и акутне пасивне изложености кокаину (Нада ет ал. 1994; Ние ет ал. 1995; Чен ет ал. 1995, 1997). Ове стабилне ΔФосБ изоформе могу хетеродимеризовати са различитим протеинима породице Јун од било цФос или ФосБ (Чен ет ал. 1995), а такође може формирати функционалне хомодимере са собом (Јориссен ет ал. 1997), што сугерише да диференцијално формирање комплекса протеина активатора-1 (АП-1) након хроничног кокаина може променити експресију гена на местима АП-1 на начин који се разликује од експресије гена произведене акутним излагањем кокаину (Нада, 1998; Келз и Нестлер, 2000). Диференцијалне промене у профилима експресије гена такође се јављају у зависности од тога да ли су повишења ΔФосБ краткорочна или дуготрајна, а ове промене могу довести до диференцијалне експресије понашања посредованог кокаином. (МцЦлунг и Нестлер, 2003). Хронична изложеност другим лековима укључујући амфетамин, морфијум, Δ9-ТХЦ, никотин, етанол и фенциклидин такође доводе до акумулације стабилних ΔФосБ изоформи у стријаталним регионима (МцЦлунг ет ал. 2004; Перротти ет ал. 2008). Штавише, недавни налази указују на негативну интеракцију између акумулације ΔФосБ и цФос изазваног амфетамином, што може објаснити толеранцију на индукцију цФос која се налази након хроничног излагања стимулансима (Рентхал ет ал. 2008). Заједно, ови налази су довели до хипотезе да стабилне ΔФосБ изоформе могу деловати као „молекуларни прекидач“ и олакшати прелазак са почетне употребе дрога на биолошка стања која су зависнија. (Нестлер ет ал. 2001; Нестлер, КСНУМКС).

Док је већина претходних студија користила поновљене пасивне третмане кокаином да би проучавала експресију протеина породице Фос, и постоји релативно мало примера ове регулације када се кокаин сам даје интравенозно (ИВ) неколико сати типично за обрасце злостављања код људи. Једна студија је открила да је цФос мРНА повишена у ЦПу након једне 30-минутне сесије само-администрирања кокаина код мишева (Кузмин и Јоханссон, 1999), док нису пронађене промјене у ЦПу пацова након било које субхроничне ( 3 дана) или хронична (6-12 недеља) самопримена кокаина (Даунаис ет ал. 1993, 1995). Након периода одвикавања, повећање цФос протеина у НАц изазвано кокаином је смањено код пацова са претходним ескалираним уносом кокаина (Бен-Шахар ет ал. 2004), док се повишени нивои цФос налазе у читавом стриатуму након излагања знаковима повезаним са кокаином (Неисевандер ет ал. 2000; Куфахл ет ал. 2009). За разлику од цФос, повећани нивои протеина ΔФосБ су се показали у читавом стријатуму након хроничне самопримјене кокаина, а ова акумулација може трајати најмање 1 дан након повлачења (Слика ет ал. 1997; Перотти ет ал. 2008). Међутим, нема извештаја који упоређују промене у реаговању више протеина Фос породице на такву интравенску примену кокаина са акутном или хроничном изложеношћу. Имајући у виду потенцијалне интеракције између ΔФосБ и цФос, способност формирања диференцијалног комплекса АП-1 да произведе различите ефекте на експресију гена и могући утицај ових разлика на понашање посредовано кокаином, такође је важно потврдити да су промене у експресија цФос, ФосБ и ΔФосБ која се јавља након неконтингентне администрације такође се налази када се кокаин добровољно примењује и да би се утврдило колико дуго ове промене могу да потрају након што је примена кокаина прекинута. Стога смо у овој студији упоредили ефекте хроничне ИВ примене кокаина на експресију ΔФосБ, ФосБ и цФос у стријаталним подрегионима током примене и повлачења кокаина. Упоредили смо регулацију пронађену са вољним само-администрирањем са регулацијом код животиња које су примале идентичну количину и временски образац кокаина кроз ненамерне инфузије након било акутног или хроничног излагања. С обзиром да су ФосБ и ΔФосБ варијанте истог фосБ гена, такође смо упоредили регулацију мРНА за ФосБ и ΔФосБ са регулацијом на нивоу протеина.

Експерименталне процедуре

Предмети и хирургија

Одрасли мужјаци Спрагуе-Давлеи пацова који су у почетку тежили приближно 250-300 г били су смештени у окружењу са контролисаном температуром и влажношћу у циклусу од 12 сати светло-мрак (светло укључено у 7:00). Животиње су храњене храном и водом по вољи у сваком тренутку са изузетком што су одржавани на 85% своје слободне тежине током храњења током тренинга притиска на полугу за пелете сахарозе (45 мг, БиоСерв). Обука притиска на полугу је спроведена у вентилисаним оперантским коморама (Мед Ассоциатес, Георгиа, ВТ) док нису испуњени критеријуми стицања (100 куглица по сесији за 3 узастопне сесије) према распореду појачања са фиксним односом 1 (ФР1). Животиње су потом храњене по вољи најмање 24 х пре операције. За операцију, пацовима је дат атропин (0.04 мг/кг, субкутано) да би олакшао дисање, а хронични стални катетер је убачен у десну југуларну вену под анестезијом натријум пентобарбиталом (50 мг/кг, ИП) према претходно објављеним процедурама (едвардс ет ал. КСНУМКСа). Након операције, пацовима је дата ињекција пеницилина (200,000 ИУ/кг, интрамускуларно) да би се спречила инфекција, а катетери су испирани дневно са 0.2 мл хепаринизованог (20 ИУ/мл) бактериостатског раствора соли који садржи гентамицин сулфат (0.33 мг/мл). Сви експериментални поступци спроведени су у складу са Националним институтом за здравље Водич за његу и употребу лабораторијских животиња, и одобрени су од стране Одбора за институционалну негу и употребу животиња Југозападног медицинског центра (ИАЦУЦ).

Апарат и процедуре за самоуправљање

Након 1 недеље опоравка од операције, животиње су подељене у више експерименталних група/време повлачења (Слика КСНУМКСА), и враћао се у коморе за оперантно тестирање на дневним сесијама као што је претходно описано (едвардс ет ал. КСНУМКСб). Пацови у нетретираној контролној групи били су смештени у самицама и са њима се свакодневно руковало у својим кућним кавезима без излагања окружењу за самопримену. Пацовима у групи која је узимала кокаин (ЦСА) је било дозвољено да добровољно сами дају кокаин (0.5 мг/кг/50 μл инфузије) према распореду појачања са фиксним односом 1 (ФР1) у дневним сесијама од 4 сата, спроведеним 6 дана /недеља, укупно 18 дана. Свака активна притисна полуга произвела је 2.5 с инфузију кокаина која је била повезана са паљењем сигналне лампице изнад активне полуге. Кућно светло је угашено током инфузије кокаина, а постојао је додатни временски период од 12.5 с након инфузије у коме је кућно светло остало искључено. Реаговање полуге током периода инфузије и временског ограничења је забележено, али није имало последице. Додатна неактивна полуга је била присутна у коморама, али реаговање на ову полугу је било без последица. Пацови у групи са хроничним јармом (ЦИ) су упарени са пацовима који су активно сами давали лек и примали су пасивне инфузије кокаина у количинама и временским обрасцима идентичним њиховим партнерима који су сами давали лек. Пацови у групи са акутним јармом (АИ) су такође били упарени са пацовима у групи са хроничним ЦСА, али су примали пасивне физиолошке инфузије уместо кокаина до последњег дана само-администрирања, када су примили једну сесију пасивне инфузије кокаина за прву време. Коначно, групи Салине СА било је дозвољено да сама примењује физиолошки раствор током целог периода да би се идентификовале потенцијалне промене везане за операцију, тестирање или друге експерименталне процедуре у поређењу са нетретираним контролама. Поређења између АИ и ЦИ група су коришћена за идентификацију промена у одзиву цФос, ФосБ или ΔФосБ са акутном и хроничном изложеношћу кокаину, док су ЦСА и ЦИ групе упоређене да би се идентификовале промене у експресији цФос, ФосБ или ΔФосБ које су биле посебно везано за награђивање у односу на фармаколошке ефекте кокаина. Ткиво из свих студијских група је сакупљено одмах након последње 4 х тест сесије да би се упоредила регулација цФос, ФосБ и ΔФосБ изазвана кокаином, а постојаност промена изазваних кокаином је одређена за неке студијске групе са ткивом прикупљеним 24 х или 3 седмица након завршне тестне сесије. Квантитативни вестерн блот и РТ-ПЦР процедуре су коришћене на дисекцијама стријаталних подрегиона да би се заобишли потенцијални проблеми у вези са унакрсном реактивношћу антитела и побољшала осетљивост за откривање промена.

Слика КСНУМКС  

(А) Временска линија која приказује режиме давања и одвикавања од кокаина (ВД). Пуне линије указују на интравенску примену инфузија кокаина (0.5 мг/кг/инфузију) код хроничних животиња које се самостално дају кокаином (ЦСА) и животиња са хроничним јармом (ЦИ) у укупном износу ...

Збирка ткива

Пацови су жртвовани микроталасним зрачењем усмереним на област главе (5 кВ, 1.5 с, Муримацхи Кикаи, Токио, Јапан). Мозгови су брзо сецирани и охлађени, а билатерални ударци ткива (14 гауге) љуске нуцлеус аццумбенс (НАц), НАц језгра и цаудате-путамен (ЦПу) су добијени из короналних резова од 1.5 мм на основу координата добијених из Пакинос и Ватсон (КСНУМКС, илустровано на Слика КСНУМКСБ). Узорци ткива су хомогенизовани соникацијом у пуферу за лизу који садржи инхибиторе протеазе и фосфатазе. Хомогенати су затим кувани 5 минута, стављени на лед, а затим су анализирани од стране Ловрија да би се одредиле концентрације протеина. Хомогенати су затим подељени у аликвоте у узорке од 20 μг и чувани на -80 ° Ц до употребе.

Вестерн Блотс

Узорци ткива су стављени на 12% полиакриламидне гелове за раздвајање електрофорезом у трис/глицин/натријум додецил сулфат пуферованом физиолошком раствору (ТГС; Био-Рад, Херцулес, ЦА). Након одвајања, узорци су пребачени електрофорезом (250 мА током 18 х) на поливинилиден флуоридне мембране (ПВДФ; Амерсхам, Писцатаваи, Њ) и затим блокирани у 3% немасног сувог млека и 1× Трис/Твеен пуферованог физиолошког раствора (ТТБС; Био; -Рад, Херкулес, Калифорнија) преко ноћи на 4°Ц. Мембране су затим инкубиране у 1:1000 разблажењу примарног Фра антитела (љубазно обезбеђено од Др. Мицхаел Иадарола, Национални институт за здравље, Бетхесда, МД) у 3% млека/1×ТТБС раствору преко ноћи на 4°Ц. Мембране су испране у 1×ТТБС (4 пута, по 15 минута) и инкубирани у 1×ТТБС који садржи 1:25000 разблаженог козјег анти-зечјег секундарног антитела коњугованог са пероксидазом рена (Био-Рад, Херцулес, ЦА) 1 х у соби температура. Мембране су поново испране и затим развијене коришћењем Пиерце Супер Сигнал Вест Дура (Тхермо Фисхер Сциентифиц Инц., Роцкфорд, ИЛ) хемилуминисцентне детекције на Хиперфилму (ЕЦЛ плус; Амерсхам). Локализација цФос, ФосБ и ΔФосБ протеинских трака је илустрована у Слика КСНУМКСЦ. Одлучили смо да испитамо само стабилно изражене облике ΔФосБ (тј. 35-37 кДа) у овој студији, јер се сматра да се ови облици акумулирају са хроничном употребом дрога и производе неуропластичност која лежи у основи зависности (Нестлер ет ал. 2001). Сцион Имаге (Фредерицк, МД) је коришћен за додељивање апсолутне имунореактивности тракама, а скенер је коришћен за снимање дигиталних слика филмова. Након детекције, мембране су скинуте и поново испитане на β-тубулин (1:200000, Целл Сигналинг, Данверс, МА). Нивои β-тубулина су коришћени као контрола оптерећења за нормализацију нивоа протеина повезаних са Фос-ом.

РТ-ПЦР

Квантитативни РТ-ПЦР (кРТ-ПЦР) је коришћен за одређивање промена ФосБ и ΔФосБ мРНА одмах и 24 сата након примене кокаина. Животиње су еутаназиране брзом декапитацијом и НАц језгро, НАц шкољка и ЦПу су изоловани како је описано (Грахам ет ал. 2007; Бацхтелл ет ал. 2008). Појединачни узорци су одмах хомогенизовани у РНА-СТАТ-60 (ИсоТек Диагностицс Инц, Фриендсвоод, ТКС) и замрзнути на сувом леду док се мРНА не екстрахује према упутствима произвођача. Укратко, хлороформ је додат у сваки узорак и водени слој је изолован након центрифугирања. Укупна мРНА је преципитирана са изопропанолом у присуству линеарног акриламида (Амбион, Аустин, ТКС). Узорци су центрифугирани, а екстраховане мРНА пелете су испране са 70% етанолом и ресуспендоване у ДЕПЦ води. Укупна мРНА је третирана ДНКазом (Амбион, Фостер Цити, ЦА) и реверзно транскрибована на цДНК са насумично одабраним хексамерима коришћењем Суперсцрипт ИИИ (Инвитроген, Царлсбад, ЦА). Прајмер секвенце коришћене за амплификацију ФосБ, ΔФосБ и глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназе (ГАПДХ) биле су 5′-ГТГАГАГАТТТГЦЦАГГГТЦ-3′ и 5′-АГАГАГААГЦЦГТЦАГГТТГ-3′,ГЦАГГГГАЦТГ-5′,ГЦАГГГГАГАТЦ -ГЦЦГАГГАЦТТГААЦТТЦАЦТЦГ-3 ′, и 5′-АГГТЦГГТГТГААЦГГАТТТГ-3′ и 5′-ТГТАГАЦЦАТГТАГТТГАГГТЦА-3′, респективно. Прагови циклуса (цТ) су израчунати из трипликатних реакција коришћењем другог деривата криве амплификације. ФосБ и ΔФосБ цТ вредности су нормализоване на вредности ГАПДХ цТ (ΔцТ) пошто ГАПДХ није био регулисан кокаином. Промене набора су израчунате коришћењем ΔΔцТ методе као што је претходно описано (приручник за Апплиед Биосистемс).

Статистичка анализа

Нивои сваког протеина су изражени као % промене у односу на нетретиране контроле за сваки регион мозга и временску тачку, а студијске групе су упоређене једносмерном анализом варијансе (АНОВА), са нивоом значајности постављеним на п < 0.05. Укупни ефекти су праћени пост-хоц поређењима коришћењем Фисхерс ЛСД тестова. Корелације између уноса кокаина и промена нивоа протеина процењене су линеарном регресијом.

Резултати

Животиње у ЦСА групи којима је било дозвољено да добровољно сами дају кокаин показале су стабилне обрасце само-администрирања кокаина до треће недеље СА (дани 13-18). Током последње недеље СА просечан дневни унос кокаина код ЦСА пацова и њихових ЦИ партнера био је 46.9 (±1.8) мг/кг/дан (распон: 37-60 мг/кг/дан). Последњег дана тестирања, ЦСА пацови у групи од 0 сати повлачења (ВД) сами су давали 44.5 (±2.5) мг/кг кокаина (опсег 25.5-57.5 мг/кг), а идентичну количину кокаина је примио њихов ЦИ и АИ партнери.

Диференцијална регулација ΔФосБ протеина у стријаталним подрегионима након акутног или хроничног кокаина

Диференцијална регулација протеина ΔФосБ пронађена је у стријаталним подрегионима одмах након 4 х интравенске примене кокаина (0 х ВД). У НАц љусци, само хронични кокаин је произвео значајно повећање у ЦСА и ЦИ групама (45-61%) у поређењу са нетретираним контролама (Слика КСНУМКСА, F4,60 = КСНУМКС, p = 0.005). У НАц језгру је пронађено значајно повећање ΔФосБ (41%) након акутног излагања у АИ групи (Слика КСНУМКСБ, F4,60 = КСНУМКС, p < 0.001), а још већа повећања (89-95%) су нађена након хроничног кокаина. За разлику од веће акумулације ΔФосБ у НАц са хроничном применом кокаина, ЦПу је показао сличан пораст ΔФосБ (86-102%) у акутним и хроничним групама кокаина (Слика КСНУМКСЦ, F4,78 = КСНУМКС, p < 0.001). Није било разлике у повећању ΔФосБ између ЦСА и ЦИ група у било којој стријаталној подрегији, што указује да је регулација била повезана са изложеношћу кокаину без обзира на вољну конзумацију кокаина. Регулација ΔФосБ је трајала најмање 24 х након хроничног кокаина у НАц љусци (F2,32 = КСНУМКС, p = 0.02), НАц језгро (F4,60 = КСНУМКС, p = 0.02), и ЦПу (F2,34 = КСНУМКС, p < 0.001), али се вратио на почетне нивое након 3 недеље. Слична повећања ΔФосБ су пронађена када су кокаинске групе упоређене са групом са сланим СА, осим што су мања повећања НАц љуске код АИ животиња постигла значај у поређењу са физиолошким СА, али не и са нетретираним контролама. Међутим, није било значајне регулације ΔФосБ код животиња које су самостално давале физиолошки раствор током тренинга у поређењу са нетретираним контролама, што указује да је регулација ΔФосБ била последица кокаина, а не резултат хируршких или тестних процедура.

Слика КСНУМКС  

Регулација ΔФосБ одмах након примене кокаина и након 24 сата и 3 недеље ВД. Нивои ΔФосБ (35-37 кДа) су изражени као средња промена ± СЕМ процената у односу на нетретиране контроле у ​​кућном кавезу (контрола). Ткиво из физиолошког раствора ...

Толеранција на регулацију ФосБ протеина након хроничног кокаина

За разлику од регулације ΔФосБ, једнократно излагање 4 х интравенске примене кокаина довело је до знатно већег повећања ФосБ протеина у сва 3 стријатална подрегиона, али се значајна толеранција у овом одговору развила након хроничне примене кокаина. У НАц љусци, ФосБ се повећао (260%) одмах након 4 х акутне примене кокаина код АИ животиња, али су ова повећања смањена (на 142-146%) након хроничне примене у ЦИ и ЦСА групама (Слика КСНУМКСА, F4,77 = КСНУМКС, p < 0.001). Слично повећање ФосБ (295%) нађено је у ЦПу животиња АИ које је такође смањено (на 135-159%) након хроничне примене кокаина у ЦИ и ЦСА групама (Слика КСНУМКСЦ, F4,69 = КСНУМКС, p < 0.001). У НАц језгру, акутна примена кокаина је изазвала мање значајно повећање ФосБ (164%) код АИ животиња у поређењу са другим регионима мозга; међутим, ова повећања су и даље била већа од оних насталих након хроничне примене (109-112-%) у ЦИ и ЦСА групама (Слика КСНУМКСБ, F4,57 = КСНУМКС, p < 0.001). Као што је утврђено код ΔФосБ, регулација ФосБ након хроничног кокаина није модулисана вољном контролом уноса кокаина. Међутим, за разлику од ΔФосБ, повећање ФосБ протеина није успело да се задржи и у НАц љусци и у језгру након 24 х, иако су заостала повећања (38-52%) опстала у ЦПу (F2,32 = КСНУМКС, p < 0.05). На нивое ФосБ нису утицале хируршке процедуре или процедуре тестирања код животиња које су самостално давале физиолошки раствор.

Слика КСНУМКС  

Регулација ФосБ-а одмах након примене кокаина и 24 х и 3 недеље ВД. Нивои протеина ФосБ (46-50 кДа) изражени су као средња ± СЕМ процентна промена у односу на нетретиране контроле кућног кавеза (видети Слика КСНУМКС легенда за скраћенице) ...

Слабљење индукције мРНА ΔФосБ и ФосБ након хроничног кокаина

Акутна изложеност 4 х интравенске администрације кокаина довела је до сличних повећања (11-16 пута) у ΔФосБ мРНА у НАц љусци (F3,19 = КСНУМКС, p < 0.001), НАц језгро (F3,19 = КСНУМКС, p < 0.001, и ЦПу (F3,11 = КСНУМКС, p = 0.03) у поређењу са Салине СА контролама (0 х ВД, Слика КСНУМКСА). Међутим, овај одговор је био снажно потиснут у ЦИ и ЦСА групама након хроничне примене кокаина у НАц љусци (3-4 пута), НАц језгру (4 пута) и ЦПу (3 пута). Упркос чињеници да је акутна ИВ примена кокаина довела до већег повећања ФосБ протеина у односу на ΔФосБ, акутна примена кокаина је изазвала релативно ниже повећање мРНА за ФосБ (4-9 пута) него за ΔФосБ (11-16 пута) у сва 3 стријатална подрегиона (Слика КСНУМКСБ). Овај одговор је практично укинут након хроничног кокаина у НАц љусци (F3,19 = КСНУМКС, p < 0.001) и ЦПу (F3,11 = КСНУМКС, p < 0.05), иако су мала, али значајна повећања (2 пута) остала у ЦИ и ЦСА групама у НАц језгру (F3,19 = КСНУМКС, p < 0.001). Повећања ΔФосБ и ФосБ изазвана кокаином код АИ животиња нису задржана након 24 х ВД у поређењу са овом истом контролном групом са физиолошким раствором СА. Даља анализа односа ФосБ и ΔФосБ нивоа мРНА у временској тачки 0 х ВД показала је да примена кокаина значајно смањује релативну количину ФосБ до ΔФосБ мРНА у НАц љусци (F3,19 = КСНУМКС, p = 0.02), НАц језгро (F3,19 = КСНУМКС, p = 0.02), и ЦПу (F3,11 = КСНУМКС, p = 0.03) због већег формирања ΔФосБ изоформе, и без обзира на значајну толеранцију на одговор изазван кокаином у обе мРНК након хроничне примене (Слика КСНУМКСЦ). Није било значајне разлике у овим односима да ли се кокаин давао самостално или пасивно примао инфузијом у јарму, а релативни односи ФосБ:ΔФосБ су се вратили у нормалу у сва три региона мозга до временске тачке 24х ВД (подаци нису приказани).

Слика КСНУМКС  

Регулација мРНА за ФосБ и ΔФосБ одмах након примене кокаина и 24 х ВД. Квантитативни РТ-ПЦР транскрипта за ΔФосБ (А), ФосБ (Б) и однос ФосБ/ΔФосБ транскрипта (Ц) изражени су као средња вредност ± ...

Толеранција у вези са појачањем на цФос изазван кокаином у НАц

За разлику од регулације ФосБ генских производа који су представљали фармаколошки одговор на кокаин без обзира на пасивну или вољно давање, регулација цФос у НАц подрегионима је била под јаким утицајем контекста само-администрирања кокаина у поређењу са животињама које су примале кокаин путем пасивних инфузија. Изложеност кокаину је повећала нивое цФос протеина (109-126%) како у НАц љусци тако иу језгру са акутном или хроничном применом у АИ и ЦИ групама (Слика 5А-Б). Међутим, када су инфузије кокаина испоручене на начин који је контигентан код животиња које су давале само себи, овај одговор је смањен (на 55%) у НАц љусци (F4,60 = КСНУМКС, p < 0.001), и није успео да значајно повећа цФос у НАц језгру (F4,57 = КСНУМКС, p < 0.001). У ЦПу, толеранција на цФос изазвана кокаином развила се било уз хроничну пасивну или вољно давање кокаина (Слика КСНУМКСЦ), а индукција цФос код АИ животиња (164%) је смањена (на 45-57%) иу ЦИ и ЦСА групама (F4,67 = КСНУМКС, p < 0.001), слично развоју толеранције у индукцији ФосБ протеина у сва 3 стријатална подрегија. Дакле, толеранција на цФос изазвана кокаином настала је посебно у мезолимбичким регионима стриатума. У сва 3 стријатална региона, повећање цФос-а није пронађено код животиња које су самостално давале физиолошки раствор и није успело да се задржи после 24 х ВД.

Слика КСНУМКС  

Регулација цФос одмах након давања кокаина и 24 х ВД. Нивои протеина цФос (52-58 кДа) код контролних пацова (контрола, Салине СА), код пацова који су примали пасивни кокаин акутно (АИ) или хронично (ЦИ), и код пацова који су подвргнути ...

Однос између уноса кокаина, цФос и ΔФосБ у подрегионима стријатум

Пошто су количине кокаина које се самостално дају варирале код појединачних животиња и њихових партнера у јарму, упоредили смо количину уноса кокаина са индукцијом нивоа цФос, ФосБ и ΔФосБ протеина помоћу вишеструких анализа линеарне регресије (видети Додатна табела 1 за резултате свих потенцијалних корелација). Постојале су значајне корелације између уноса кокаина и нивоа цФос код пацова који су примили акутну примену кокаина путем пасивних инфузија, а ови односи су се разликовали у дорзалним и вентралним стријаталним подрегионима. У НАц језгру, индукција цФос одмах након 4 х акутне ИВ примене кокаина била је у снажној и негативној корелацији са уносом кокаина, док је сличан, али безначајан однос пронађен у НАц љусци (Сл. КСНУМКС). Насупрот томе, индукција цФос је била у позитивној корелацији са уносом кокаина у ЦПу. Није било значајне корелације између уноса кокаина (било активног или пасивног) и нивоа протеина ФосБ или ΔФосБ у било којој стријаталној подрегији. Међутим, постојала је јака позитивна корелација између нивоа цФос и ΔФосБ у НАц љусци 24 х након кокаина, али само код животиња које су примале кокаин путем вољног само-администрирања (Сл. КСНУМКС), и упркос чињеници да укупни нивои цФос нису промењени у 24 х ВД. Слични трендови (p < 0.07) за позитивне корелације између нивоа цФос и ΔФосБ протеина пронађене су одмах након 4 х самодавања кокаина у НАц језгру, иу ЦПу животиња које су први пут примале кокаин (АИ група).

Слика КСНУМКС  

Регионално-специфична корелација између уноса кокаина и цФос имунореактивности након акутног кокаина (АИ). Проценат повећања цФос имунореактивности је у негативној корелацији са уносом кокаина у завршној сесији у НАц језгру (А) и позитивно корелиран ...
Слика КСНУМКС  

Значајна корелација између цФос и ΔФосБ у НАц љусци код животиња које се самостално примењују. Проценат повећања цФос имунореактивности је у позитивној корелацији са ΔФосБ имунореактивношћу након 24 х ВД у самопримјењивању кокаина ...

Дискусија

У овој студији, испитали смо ефекте акутне и хроничне интравенске изложености кокаину или хроничне само-администрације на регулацију нивоа ΔФосБ, ФосБ и цФос у НАц љусци, НАц језгру и ЦПу стријаталним подрегионима. Претходне студије су доследно откривале да се ΔФосБ повећава само након поновљене изложености, а не након акутне примене кокаина употребом пасивних ИП ињекција кокаина (Нада ет ал. 1994, Ние ет ал. 1995; Чен ет ал. 1995). Слично томе, открили смо да је хронична интравенска изложеност кокаину повећала ΔФосБ у свим испитиваним стријаталним подрегионима, без обзира да ли је примењен на вољан или пасиван начин. Међутим, главна разлика у односу на претходне студије је да је акутна примена кокаина повећала нивое ΔФосБ протеина у НАц језгру и ЦПу, и приближила се значају у НАц љусци (p < 0.1). Једно могуће објашњење за ову разлику може бити доза и/или трајање изложености кокаину, пошто су пацови у АИ групи примали вишеструке ИВ инфузије кокаина током једне сесије од 4 сата што је резултирало укупним уносом кокаина који се кретао од 25.5 до 57.5 ​​мг/кг преко појединачне животиње, што далеко премашује дозе од 10-20 мг/кг које се обично користе са једном болус ИП ињекцијом (Нада ет ал. 1994; Ли ет ал. 2006). Поред тога, кокаин је даван директнијим путем интравенске администрације који производи више вршне нивое кокаина и допамина у мозгу који трају током сесије, док ови ефекти обично нестају у року од сат времена након ИП ињекције (Брадберри, КСНУМКС). Дакле, способност ΔФосБ да се акумулира након једне акутне изложености кокаину вероватно зависи и од јачине и од трајања кокаинског стимулуса који се користи у овој студији. У сваком случају, налаз да се ΔФосБ може акумулирати након једнократног излагања кокаину указује на то да би ΔФосБ могао да испољи своје ефекте брже него што се раније мислило, што је вероватно резултат почетне само-администрирања.

Занимљиво је да се количина акумулације ΔФосБ разликовала између дорзалних и вентралних стриаталних региона током хроничне администрације кокаина. У НАц језгру, количина ΔФосБ пронађена одмах након последњег дана хроничне примене (0 х ВД) била је више него двоструко већа од количине која је пронађена након акутне примене, а мања повећања ΔФосБ у НАц љусци су достигла значај тек након хроничне примене. , без обзира на то да ли је кокаин даван самостално или примљен путем пасивне инфузије. Повећања са хроничном применом кокаина вероватно одражавају акумулацију високо стабилног ΔФосБ протеина пошто су опстајали најмање 24 сата након последњег излагања. Насупрот томе, велика повећања количине ΔФосБ у ЦПу-у нису се разликовала са акутном или хроничном изложеношћу, потенцијално одражавајући плафон који је настала акутном изложеношћу у овом региону мозга. Међутим, чак и у ЦПу, акумулација ΔФосБ протеина је вероватно допринела сталном повећању нивоа ΔФосБ након хроничне изложености, пошто се развила значајна толеранција на мРНА изазвану кокаином за ΔФосБ у сва 3 региона мозга са хроничном применом.

Акутна примена ИВ кокаина такође је повећала нивое ФосБ протеина пуне дужине, са већим повећањем ЦПу и НАц љуске него НАц језгра. Међутим, мРНА за ФосБ је индукована скоро 10 пута у НАц љусци, а мање од 5 пута у ЦПу и НАц језгру. Развила се значајна толеранција на способност кокаина да индукује и мРНА и протеин за ФосБ уз хроничну администрацију, иако је нижа индукција ФосБ протеина остала и потенцијално би могла да се такмичи са ΔФосБ за партнере који се везују за АП-1. Релативни однос ФосБ/ΔФосБ мРНА такође је смањен акутном применом кокаина због релативно веће индукције ΔФосБ, у складу са претходним извештајима о употреби амфетамина (Алибхаи ет ал. 2007). За разлику од претходних налаза са поновљеним третманима амфетамином, смањење релативног односа ФосБ/ΔФосБ мРНА акутним кокаином остало је након хроничне примене, одражавајући релативно већу резидуалну индукцију ΔФосБ него ФосБ.

Чињеница да се нивои ΔФосБ повећавају чак и након акутног коришћења кокаина и дужина давања која су типичнија за интравенозну употребу дрога код људи има важне импликације на процес зависности. Према томе, ΔФосБ би могао да допринесе активности везивања АП-1 уз почетну употребу кокаина ако су се адекватне дозе давале самостално. Међутим, ΔФосБ би се такмичио и са ФосБ и са цФос за активност везивања АП-1, што би довело до експресије гена и неуропластичности која се разликује од хроничне примене када је ΔФосБ повишен са значајно смањеним цФос и ФосБ. Дакле, ΔФосБ може имати веће ефекте након хроничне примене кокаина због веће акумулације у вентралном стриатуму и смањене конкуренције за партнере који се везују за АП-1 иу дорзалном и у вентралном стриатуму. С обзиром на то да прекомерна експресија ΔФосБ специфична за стријаталне ћелије повећава мотивацију за кокаин (Цолби ет ал. 2003), тако брзо накупљање ΔФосБ са почетним излагањем кокаину могло би да продужи употребу кокаина у врло раним фазама процеса зависности. Штавише, тако истакнута и широко распрострањена експресија ΔФосБ у стриатуму са акутним излагањем би променила активност везивања АП-1 на начин који би могао да олакша формирање компулзивних навика кроз рано ангажовање дорзалних стријаталних кола (Белин и Еверитт, КСНУМКС).

Узимајући у обзир стабилност ΔФосБ изоформа, нивои ΔФосБ су остали значајно повишени 24 сата након последње сесије давања кокаина, у складу са претходним студијама које су користиле хроничну интравенску примену кокаина (Слика ет ал. 1997; Перотти ет ал. 2008). Друге студије које су користиле пасивну експерименталну администрацију ИП ињекција кокаина откриле су да акумулација ΔФосБ може да опстане током 1-2 недеље повлачења (Нада ет ал. 1994; Бренхоусе и Стеллар, КСНУМКС; Ли ет ал. 2006), иако нисмо пронашли доказе за ове промене 3 недеље након престанка давања кокаина. Заједно, ове студије сугеришу да акумулација ΔФосБ може опстати током релативно кратких периода повлачења (< 3 недеље) и директно допринети континуираној употреби кокаина, али не може директно да допринесе већој склоности ка рецидиву у продуженом повлачењу. Међутим, ΔФосБ имунореактивност је откривена у стријаталним неуронима који садрже Д1 рецептор након 30 дана одвикавања од поновљених кокаина код мишева (Ли ет ал. 2006). Такво ћелијско специфично узорковање може бити осетљивије на заосталу акумулацију ΔФосБ од анализе целог ткива која се користи у овој студији, или можда промене ΔФосБ само дуже трају код мишева него код пацова. Такође је могуће да ΔФосБ индукује каскаду транскрипционих догађаја који доводе до дуготрајних морфолошких промена као што је формирање дендритичне кичме у стријаталним неуронима који садрже Д1 (Ли ет ал. 2006; лавиринт ет ал. 2010). С тим у вези, неколико циљева ΔФосБ укључујући Цдк5 и НФκБ се повећава након хроничног кокаина, а ови фактори могу модификовати кола нуцлеус аццумбенс кроз промене у структури и/или функцији неурона (Анг ет ал. 2001; Бенавидес и Бибб, КСНУМКС; Нестлер, КСНУМКС). Стога је могуће да континуирана акумулација ΔФосБ током повлачења није неопходна за његов дуготрајан утицај на будуће узимање или тражење лекова, већ би уместо тога могла представљати „молекуларни прекидач“ који покреће вишеструке ћелијске процесе који олакшавају прелазак на више биолошка стања зависности (Нестлер ет ал. 2001).

Tсадашња студија је открила да акумулација ΔФосБ посредована кокаином није под утицајем вољне контроле уноса кокаина код животиња које су давале само себи у складу са претходним студијама које су користиле имунохистохемијске процедуре и вишеструке дроге за злоупотребу (Перотти ет ал. 2008; Слика ет ал. 1997). Ово указује да је повећање ΔФосБ и ФосБ изазвано кокаином вероватно повезано са фармаколошким одговором на кокаин или другим низводним догађајима сигнализације моноаминергичких рецептора. За разлику од ΔФосБ, открили смо да је на развој толеранције на цФос изазван кокаином значајно утицала вољна контрола над уносом кокаина у НАц, али не и у ЦПу. Према томе, толеранција на цФос изазван кокаином у НАц није успела да се јави код животиња које су пасивно примале кокаин хроничном инфузијом у јарму у поређењу са акутном инфузијом у јарму. Ови налази се значајно разликују од бројних извештаја о толеранцији на цФос изазван психостимулансима у НАц када се лекови дају пасивном ИП ињекцијом (Нада ет ал. 1994; Ние ет ал. 1995; Чен ет ал. 1995, 1997; Алибхаи ет ал. 2007). С обзиром на то да је толеранција на цФос код животиња које дају кокаин паралелна са неколико студија са поновљеним ИП ињекцијама, недостатак толеранције са хроничном интравенском применом у јарму може бити повезан са стресом повезаним са вишеструким и непредвидивим ињекцијама кокаина (Гоедерс 1997). Губитак толеранције у вентралном, а не дорзалном стријатуму био би у складу са селективним ефектом на лимбичка кола укључена у мотивационе и емоционалне одговоре. Поред тога, док се толеранција на индукцију цФос ипак јавила код животиња које су саме давале кокаин, остало је значајно повећање цФос протеина од ∼50% у НАц љусци одмах након њихове последње сесије само-администрирања, и тренд (p < 0.1) за цФос повећања се такође дешавају у језгру. Разлози за ову неслагање вероватно одражавају разлике између ИП ињекције и вишеструких ИВ инфузија током периода од 4 сата, као што је горе објашњено. Преостала индукција цФос у НАц након хроничне самопримјене кокаина је ново откриће које присиљава на преиспитивање његове улоге у процесу зависности, при чему би АП-1 комплекси који садрже цФос, ΔФосБ и ФосБ сви коегзистирали у одређеној мјери након хроничне изложености .

С обзиром на недавне доказе да је цФос директно наниже регулисан акумулацијом ΔФосБ у дорзалном стриатуму (Рентхал ет ал. 2008), занимљиво је да је цФос изазван кокаином у ЦПу био упоредо са повећањем ΔФосБ са акутном изложеношћу кокаину. Једна могућност је да се акумулација ΔФосБ акутном администрацијом јавља прекасно у 4-часовној сесији да би утицала на индукцију цФос, док његово присуство 24 х након кокаина код хронично лечених животиња омета индукцију цФос-а са накнадним излагањем кокаину. Ова идеја је у складу са трендом (п = 0.067) за умерену позитивну корелацију између нивоа цФос и ΔФосБ у ЦПу са акутном применом кокаина (0 х ВД). Ова идеја је такође у складу са снажном позитивном корелацијом између индукције цФос и уноса кокаина у ЦПу животиња са акутним јармом. Ови налази сугеришу да, слично ΔФосБ, цФос одговор може одражавати дозу кокаина која је примљена. Међутим, у НАц-у, већа акумулација ΔФосБ са хроничном применом кокаина у јарму не може објаснити недостатак толеранције у цФос одговору код ових животиња. Штавише, иако је толеранција на индукцију цФос била очигледна код животиња које су давале само себи, јака позитивна корелација између нивоа резидуалног цФос и ΔФосБ у НАц љусци након 24 х повлачења не подржава негативну интеракцију између цФос и ΔФосБ у вентралном стријатуму. Друга разлика у односу на ЦПу податке је у томе што је цФос у НАц језгру био у негативној, а не позитивној корелацији са уносом кокаина непосредно након акутне примене кокаина, што би могло да одражава тахифилаксију унутар сесије која се јавља са већом изложеношћу дози у вентралном стријатуму.

Све у свему, налази из ове студије показују да цФос, ФосБ и ΔФосБ подлежу различитим регионалним обрасцима експресије након акутне и хроничне интравенске примене кокаина. Ови обрасци експресије су јединствено зависни и од трајања и од количине изложености лековима, а толеранција на цФос изазвана кокаином је у великој мери зависна од вољног давања кокаина. Резултати такође показују да се ΔФосБ може акумулирати и код акутне и код хроничне примене кокаина интравенском ињекцијом, подржавајући идеју да акумулација ΔФосБ може бити важна у раним процесима који промовишу повећано понашање у потрази за кокаином и доприносе развоју зависности од кокаина. На крају, биће важно разумети како ΔФосБ може индиректно да утиче на упорну жудњу за дрогом у одвикавању преко релативно краткорочних утицаја на експресију гена током употребе кокаина и раних периода одвикавања. Напори да се идентификују различити низводни циљеви и њихови ефекти на морфологију и/или функцију неурона ће на крају разјаснити улогу ΔФосБ и других антигена повезаних са Фос у изражавању понашања зависности.

Додатни материјал

Супп Табела С1

Додатна табела 1. Укупни резултати корелације за линеарне регресионе анализе. Три лева панела садрже корелације између уноса кокаина и нивоа цФос (горњи панел), ФосБ (средњи панел) или ΔФосБ (доњи панел). Десна три панела садрже корелације између цФос и ΔФосБ (горњи панел), цФос и ФосБ (средњи панел) и ФосБ и ΔФосБ (доњи панел). Релативни региони мозга и временске тачке ВД приказане су за сваку појединачну анализу, заједно са одговарајућим р- и п-вредностима. *п<0.05, T0.1>п>0.05.

priznanja

Аутори изјављују да нема сукоба интереса у вези са овим радом. Овај рад је подржан од стране НИХ грантова ДА 10460 и ДА 08227, као и од стране професора Веслеи Гиллиланд у биомедицинским истраживањима.

Коришћене скраћенице

  • Процесори
  • цаудате-путамен
  • НАц
  • језгра аццумбенс
  • AY
  • акутни јарам
  • CY
  • хронични јарам
  • ЦСА
  • самопримену кокаина
  • WD
  • повлачење
  • IV
  • интравенски
  • IP
  • интраперитонеално.

Референце

  • Алибхаи ИН, Греен ТА, Потасхкин ЈА, Нестлер ЕЈ. Регулатива о фосБ ΔфосБ Експресија мРНА: Ин виво и ин витро студије. Браин Рес. 2007;1143:22–33. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Анг Е, Цхен Ј, Загоурас П, Магна Х, Холланд Ј, Сцхаеффер Е, Нестлер ЕЈ. Индукција нуклеарног фактора-κБ у нуцлеус аццумбенс хроничном применом кокаина. Ј Неуроцхем. 2001;79:221–224. [ЦроссРеф]
  • Бацхтелл РК, Цхои КХ, Симмонс ДЛ, Фалцон Е, Монтеггиа ЛМ, Неве ЛН, Селф ДВ. Улога експресије ГлуР1 у неуронима нуцлеус аццумбенс у сензибилизацији на кокаин и понашању у потрази за кокаином. Еур Ј Неуросци. 2008;27:2229–2240. [ЦроссРеф]
  • Белин Д, Еверитт БЈ. Навике тражења кокаина зависе од допамин-зависне серијске повезаности која повезује вентралу са дорзалним стриатумом. Неурон. КСНУМКС: КСНУМКС: КСНУМКС – КСНУМКС. [ЦроссРеф]
  • Бенавидес ДР, Бибб ЈА. Улога Цдк5 у злоупотреби дрога и пластичности. Анн НИ Ацад Сци УСА. 2004;1025:335–344. [ЦроссРеф]
  • Бен-Схахар О, Ахмед СХ, Кооб ГФ, Етенберг А. Прелазак са контролисане на компулзивну употребу дрога повезан је са губитком сензибилизације. Браин Рес. 2004;995:46–54. [ЦроссРеф]
  • Брадберри ЦВ. Динамика екстрацелуларног допамина у акутном и хроничном деловању кокаина. Неуросциентист. 2002;8:315–322. [ЦроссРеф]
  • Бренхаус ХЦ, Стеллар ЈР. ц-Фос и ΔФосБ су различито измењени у различитим подрегионима љуске нуцлеус аццумбенс код пацова осетљивих на кокаин. Бехав Неуросци. 2006;137:773–780. [ЦроссРеф]
  • Цхен Ј, Ние ХЕ, Келз МБ, Хирои Н, Накабеппу И, Хопе БТ, Нестлер ЕЈ. Регулација ΔФосБ и протеина сличних ФосБ електроконвулзивним нападима и третманима кокаином. Мол Пхармацол. 1995;48:880–889. [ЦроссРеф]
  • Цхен Ј, Келз МБ, Хопе БТ, Накабеппу И, Нестлер ЕЈ. Хронични Фос-сродни антигени: стабилне варијанте ΔФосБ изазване у мозгу хроничним третманима. Ј Неуросци. 1997;17:4933–4941. [ЦроссРеф]
  • Цолби ЦР, Вхислер К, Стеффен Ц, Нестлер ЕЈ, Селф ДВ. Прекомерна експресија ΔФосБ, специфична за тип стријаталних ћелија, повећава подстицај за кокаин. Ј Неуросци. 2003;23:2488–2493. [ЦроссРеф]
  • Едвардс С, Вхислер КН, Фуллер ДЦ, Орсулак ПЈ, Селф ДВ. Промене у вези са зависношћу код Д1 и Д2 бихејвиоралне реакције рецептора допамина након хроничне самопримјене кокаина. Неуропсицхопхарм. 2007а;32:354–366. [ЦроссРеф]
  • Едвардс С, Грахам ДЛ, Бацхтелл РК, Селф ДВ. Регион-специфична толеранција на цАМП-зависну фосфорилацију протеина регулисану кокаином након хроничне само-администрације. Еур Ј Неуросци. 2007б;25:2201–2213. [ЦроссРеф]
  • Гоедерс НЕ. Неуроендокрина улога у појачању кокаином. Псицхонеуроендоцринол. 1997;22:237–259. [ЦроссРеф]
  • Граибиел АМ, Мораталла Р, Робертсон ХА. Амфетамин и кокаин индукују активацију ц-фос гена специфичну за лек у одељцима матрикса стриозома и лимбичким поделама стриатума. Проц Натл Ацад Сци УСА. 1990;87:6912–6916. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Грахам ДЛ, Едвардс С, Бацхтелл РК, ДиЛеоне РЈ, Риос М, Селф ДВ. Динамичка активност БДНФ у нуцлеус аццумбенс са употребом кокаина повећава само-администрацију и релапс. Нат Неуросци. КСНУМКС: КСНУМКС: КСНУМКС – КСНУМКС. [ЦроссРеф]
  • Хопе Б, Кософски Б, Химан СЕ, Нестлер ЕЈ. Регулација непосредне ране експресије гена и везивања АП-1 у нуцлеус аццумбенс пацова хроничним кокаином. Проц Натл Ацад Сци УСА. 1992;89:5764–5768. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Хопе БТ, Ние ХЕ, Келз МБ, Селф ДВ, Иадарола МЈ, Накабеппу И, Думан РС, Нестлер ЕЈ. Индукција дуготрајног АП-КСНУМКС комплекса састављеног од измењених Фос-протеина у мозгу хроничним кокаином и другим хроничним третманима. Неурон. КСНУМКС: КСНУМКС: КСНУМКС – КСНУМКС. [ЦроссРеф]
  • Хопе БТ. Кокаин и комплекс фактора транскрипције АП-1. Анн НИ Ацад Сци. 1998;844:1–6. [ЦроссРеф]
  • Јориссен ХЈММ, Улери ПГ, Хенри Л, Гоурнени С, Нестлер ЕЈ, Руденко Г. Димеризатион анд ДНК-биндинг пропертиес оф тхе транскриптион фацтор ΔФосБ. Биохемија. 2007;46:8360–8372. [ЦроссРеф]
  • Келз МБ, Цхен Ј, Царлезон ВА, Јр, ет ал. Експресија фактора транскрипције ΔФосБ у мозгу контролише осетљивост на кокаин. Природа. 1999;401:272–276. [ЦроссРеф]
  • Куфахл ПР, Завала АР, Сингх А, Тхиел КЈ, Дицкеи ЕД, Јоице ЈН, Неисевандер ЈЛ. Експресија ц-Фос повезана са поновним успостављањем понашања у потрази за кокаином условљеним сигналима који су условљени одговором. Синапсе. 2009;63:823–835. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Лее К, Ким И, Ким АМ, Хелмин К, Наирн АЦ, Греенгард П. Формирање дендритичне кичме изазване кокаином у средње бодљастим неуронима који садрже Д1 и Д2 допамин рецептор у нуцлеус аццумбенс. Проц Натл Ацад Сци УСА. 2006;103:3399–3404. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Мазе И, Цовингтон ХЕ, ИИИ, Диетз ДМ, ЛаПлант К, Рентхал В, Руссо СЈ, Мецханиц М, Моузон Е, Неве РЛ, Хаггарти СЈ, Рен ИХ, Сампатх СЦ, Хурд ИЛ, Греенгард П, Тараковски А, Сцхаефер А, Нестлер ЕЈ. Суштинска улога хистон метилтрансферазе Г9а у пластичности изазваној кокаином. Наука. 2010;327:213–216. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • МцЦлунг ЦА, Улери ПГ, Перротти ЛИ, Зацхариоу В, Бертон О, Нестлер ЕЈ. ΔФосБ: молекуларни прекидач за дуготрајну адаптацију у мозгу. Мол Браин Рес. 2004;132:146–154. [ЦроссРеф]
  • Неисевандер ЈЛ, Бакер ДА, Фуцхс РА, Тран-Нгуиен ЛТЛ, Палмер А, Марсхалл ЈФ. Експресија фос протеина и понашање у потрази за кокаином код пацова након излагања окружењу за самодавање кокаина. Ј Неуросци. 2000;20:798–805. [ЦроссРеф]
  • Нестлер ЕЈ, Баррот М, Селф ДВ. ΔФосБ: Трајни молекуларни прекидач за зависност. Проц Натл Ацад Сци УСА. 2001;98:11042–11046. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Нестлер ЕЈ. Транскрипциони механизми зависности: улога ΔФосБ. Пхил Транс Р Соц Б. 2008;363:3245–3255. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Ние ХЕ, Хопе БТ, Келз МБ, Иадарола М, Нестлер ЕЈ. Фармаколошке студије регулације кроничне индукције антигена повезане са ФОС кокаином у стриатуму и нуцлеус аццумбенс. Ј Пхармацол Екп. КСНУМКС: КСНУМКС: КСНУМКС – КСНУМКС. [ЦроссРеф]
  • Перротти ЛИ, Хадеисхи И, Улери ПГ, Баррот М, Монтеггиа Л, Думан РС, Нестлер ЕЈ. Индукција ΔФосБ у можданим структурама везаним за награду након хроничног стреса. Ј Неуросци. 2004;24:10594–10602. [ЦроссРеф]
  • Перротти ЛИ, Веавер РР, Робисон Б, ет ал. Различити обрасци индукције ΔФосБ у мозгу уз помоћ дрога. Синапсе. 2008;62:358–369. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Пакинос Г, Ватсон ГЦ. Мозак пацова у стереотаксичким координатама. 4. Нев Иорк: Ацадемиц Пресс; 1998.
  • Пицх ЕМ, Паглиуси СР, Тессари М, Талабот-Аиер Д, ван Хуијсдуијнен РХ, Цхиамулера Ц. Уобичајени неуронски супстрати за својства зависности никотина и кокаина. Наука. 1997;275:83–86. [ЦроссРеф]
  • Рентхал В, Царле ТЛ, Мазе И, ет ал. ΔФосБ посредује епигенетску десензибилизацију ц-фос ген након хроничне изложености амфетамину. Ј Неуросци. 2008;28:7344–7349. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Валлаце ДЛ, Виалоу В, Риос Л, ет ал. Утицај ДелтаФосБ у нуцлеус аццумбенс на природно понашање везано за награду. 2008;28:10272–10277. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Иоунг СТ, Поррино Љ, Иадарола МЈ. Кокаин индукује стријаталне ц-Фос-имунореактивне протеине преко допаминергичког Д1 рецептори. Проц Натл Ацад Сци УСА. 1991;88:1291–1295. [ПМЦ бесплатан чланак] [ЦроссРеф]
  • Зханг Ј, Зханг Л, Јиао Х, Зханг К, Зханг Д, Лоу Д, Катз ЈЛ, Ксу М. ц-Фос олакшава стицање и изумирање упорних промјена изазваних кокаином. Ј Неуросци. КСНУМКС: КСНУМКС: КСНУМКС – КСНУМКС. [ЦроссРеф]