DeltaFosB ба таври фаъол фаъолияти Cck promoter танзим мекунад (2010)

Беэътимод. 2010 May 6; 1329: 10-20.

Нашр шудааст дар сомонаи 2010 March 11. doi:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

Ҷон Ф. Энтвер, III,1 Меган Уолд,1 Мадисон Паддок,1 Элизабет Хоффман,1 Рэйчел Арей,2 Скотт Эдвардс,2 Спенсер,2 Эрик Ҷ. Нестлер,3 ва Colleen A. McClung2, *

Маълумоти муаллиф ► Маълумоти ҳуқуқи муаллиф ва литсензия ►

Нусхаи ниҳоии таҳриршудаи ин мақоларо дар ин ҷо дастрас кардан мумкин аст Беэътимод

Ба мақолаҳои дигар дар PMC нигаред класс мақолаи нашршуда.

Гузаштан ба:

мавҳум

Баъзе аз тағйироти муҳими биохимиявӣ, сохторӣ ва рафторӣ, ки бо таъсири мутаносибии муомилоти спирти эпидемия алоқаманданд, аз ҷониби омилҳои қавии трансплантатсионӣ ΔFOSB мубаддал мешаванд. Корҳои қаблӣ нишон доданд, ки ΔFOSB дар миқёси езфосферӣ дар ҳафтаи 2 ба зиёд шудани ифодаи ифодаи генҳои сершумор дар стриатом оварда мерасонад, ки аксарашон баъди ҳафтаи 8-и ΔFosB паст карда мешаванд. Ғайр аз ин, шумораи зиёди ин генҳо низ дар функсияҳои криптографии CREB бештар паҳн шудаанд. Аммо аз тадқиқоти мазкур маълум нест, ки оё ΔFosB кӯтоҳмуддат ин CRESро танзим мекунад. Дар ин ҷо мо мефаҳмем, ки ҳафтаҳои 2 аз ΔFOSB изофанависии CREB меафзояд, ки дар striatum, ки таъсири он аз ҷониби ҳафтаи 8. Индикатори барвақт бо афзоиши баланд бардоштани қобилияти CREB ба марҳилаҳои муайяни генетикии мақсадноки ин минтақаи ҷудоӣ алоқаманд аст. Бешак, як гене, ки мақсадҳои қаблии CREB-ро дар асоси гузоришҳое, cholecystokinin (Cck), аз ҷониби CREB таҳти назорати стратата таҳти назорат қарор дода нашуд. Барои таҳқиқи минбаъдаи танзими Cck Пас аз фишори ΔFOSB, мо тасдиқ менамоем, ки ΔFOSB кӯтоҳмуддатро ҳам баланд мекунад Cck фаъолиятҳои promoter ва ифодаи ген. Он ҳамчунин фаъолияти фаъолро дар сайти марбути CREB дар бар мегирад Cck мусоидаткунанда. Бо вуҷуди ин, дар ҳоле, ки сайти CRE барои ифодаи ибтидоии оддӣ зарур аст Cck, барои тамаркузи ΔFosB талаб карда намешавад Cck. Дар натиҷа, ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки дар ҳоле ки induction кӯтоҳмуддати ΔFosB экспертизаи CREB ва фаъолияташро дар пешгуфторони генинстикиро меафзояд, ин танҳо механизми ягонаест, ки дар ин шароитҳо ба танзим дароварда шудааст.

Калидвожаҳои: нусхабардорӣ, космос, фишор

Гузаштан ба:

МУЌАДДИМА

Таъсири муолиҷаи муомилоти ғайриқонунии маводи мухаддир боиси тағирёбии биохимиявӣ ва сохторӣ дар якчанд минтақаҳои майна мегардад. Ин дигаргуниҳо дар назар доранд, ки тағйирот дар намоишҳои генҳо дар системаи mesolimbic ҷалб карда шаванд. Ин система аз нопадидрангҳои dopaminergic, ки лоиҳаи минтақаи Вагностал (VTA) дар нимаи дуюми нилгунҳои миёнаҳол дар нуклоқҳои нуклеус (NAc) (стритатори вантӣ) ва як қатор минтақаҳои дигари мағзи иборат аст, иборат аст. Тағйирот дар фаъолияти ду омили таҳрирӣ, эффекти энергияи барҷастаи CAMP ва ΔFOSB (Фоссии оилавии фосфор), барои таъмири тағйироти биохимиявӣ, сохторӣ ва тарзи рафтори мушаххас, аз ҷониби Nestler, 2005).

CREB як омили трансплантавиро ифода мекунад, ки узви оилаи CREB / ATF мебошад. Homogenizers CREB ба вариантҳои як қатор CRE пайвастанд (созишномаи: TGACGTCA), ки дар ташаббускорони генҳои зиёд пайдо шудаанд. Фосфатори CREB (асосан дар 133 serin, гарчанде ки дигар сайтҳо муайян шудаанд) метавонанд аз якчанд такрори сигналҳо, аз он ҷумла зеризаминии допамини репертуарҳо (Cole et al., 1995). Дар фосфоринатсия дар санъати 133, CREB як протеини пайвасткунандаи энергияи CREB (CBP) ё сафедаҳои алоқамандро мефаҳмонад, Йоханнессен ва дигарон, 2004). Таъсири муташанниҷ ба маводи мухаддир ё психофизиологии зӯроварӣ боиси афзоиши мувозинати фаъолияти CREB дар нусхаи атомҳо мегардад (Барот ва дигарон, 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), тасаввуроти мутобиқшавӣ барои коҳиш додани хусусиятҳои мукофотии ин маводи мухаддир ва саҳм гузоштан ба ҳолати ногузирии истеъмоли маводи мухаддир (Nestler, 2005).

LМутобиқати мутобиқат ба маводи нашъадор аз ҷониби ΔFosB, як варианти хеле доимии FOSB (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Nestler, 2008). Қисми аъзоёни оилаҳои аъзоро бо аъзоёни оилаҳои ҷамоати ҷамоавӣ ҷиҳоз намуда, маҷмӯи фаъолнокии сафедаи 1 (AP-1) -ро ташкил медиҳанд. Маҷмӯаи криптографии AP-1 ба тағйирёбии элементҳои AP-1 (созишнома: TGACTCA) барои танзими кошифӣ Chinenov ва Kerppola, 2001). Ҳангоми таъсири манфии муомилоти ғайриқонунии маводи мухаддир боиси ба охир расидани мӯҳлати кӯтоҳмӯҳлати аъзоёни Фос-оила (инчунин афзоиши фаъолияти CREB), таъсири муолиҷаи такрорӣ ба ҷамъоварии ΔFosB хеле устувор аст (Hope et al., 1994; Perrotti et al., 2008), нишон медиҳад, ки ҳафтаҳо давом мекунад.

Чашмакҳои Би-transgenic ин ΔFosB ё CREB-ро дар нишондиҳандаи калонсолон нишон медиҳанд, ки бисёр ҳайвонҳои биохимиявӣ ва тарзи рафтор дар ҳайвонҳое, ки ба таври решаканӣ ба психотиммулментҳо ё дигар маводи мухаддир зӯроварӣ мезананд. А)ки дар ин ҳайвонҳои транзитӣ тағиротҳои генетикӣ муайян карда шудаанд, ки бо миқдори кӯтоҳ (ҳафтаҳои 2) зиёдшавии изолятсияи ΔFOSB, тағйироте, ки бо коҳиши мутобиқат дар мукофоти маводи мухаддир алоқаманданд. Тағирот дар таркиби генӣ ва аксуламали рафторӣ бо ΔFosB кӯтоҳмуддат ба онҳое, ки дар ҳайвонҳо дида шудаанд, ба миқдори зиёди ҳафриёти CREB барои ҳафтаҳои 2 ё 8 (McClung ва Nestler, 2003). Дар муқоиса бо фарогирии дарозмуддат (Ҳафтаи 8) ΔFosB ифодаи бисёре аз ин генҳои якхеларо коҳиш дода, ба афзоиши музди нашъамандӣ оварда мерасонад (Келз ва дигар, 1999; McClung ва Nestler, 2003).

Яке аз генҳо дар ин тадқиқотҳо муайян карда шудааст холисестокинин (Cck), невропепите, ки дар якчанд минтақаҳои майда, аз ҷумла стриат (Hokfelt et al., 1980). CCK метавонад интиқоли dopaminergicро тағйир диҳад (Vaccarino, 1992), мукофотпулӣ ва такмили маводи мухаддир (Josselyn et al., 1996; Йосселин ва дигарон, 1997; Хамилтон, ва дигарон, 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002), ва дар striatum аз тарафи кокаин музминиDing ва Mocchetti, 1992). Илова бар ин Cck Пешниҳодкунанда барои ҳам маҷмӯи CREB ва AP-1 ҷавобгӯ буд (Ҳунун ва Диксон, 1990; Deavall, et al., 2000; Ҳансен, 2001). Азбаски бисёре аз генҳо (аз он ҷумла Cck), ки ифодаи баландро нишон дод, пас аз он, ки CREB ва шарҳи кӯтоҳмуддати ΔFosB маълуманд, ки генҳои мақсадноки CREB шинохта ё гумонбар шудаандMcClung ва Nestler, 2003), мо мехостем муайян кунем, ки шарҳи мухтасари ΔFosB ба танзими ин генҳо оварда мерасонад (бо диққат Cck) тавассути танзими CREB ё тавассути механизмҳои мураккаби комплексии танзими ген.

Гузаштан ба:

Натиҷаҳо

ΔFosB аз ҳад зиёд баландгӯӣ ба сатҳи CREB меафзояд

Мо парастиши ғарбӣ барои тафтиш кардани он, ки ΔFosB аз баланд бардоштани сатҳи баланди сафедаҳои CREB дар стриатумҳои мушҳо зиёд карда мешавад. Барои ин омӯзиш мо мушакҳои би-transgenic (line 11A), ки ҳам transgene NSE-TTA ва transgene TetOp-ΔFosBро истифода мебаранд. Дар сурати мавҷуд набудани диссисиклин, ин мушҳо нишондиҳандаи ΔFosB дар ҷунбаҳои мусбии динорфин дар стриатум (Келз ва дигар, 1999). Ин услуби ΔFOSB ба таври васеъ ҳуҷҷатгузорӣ шудааст ва имкон медиҳад, ки экспрессиосии махсуси минтақаро, ки ин тамоюлоти ΔFОBро дар ҳайвоноте, ки ба кокаин боқӣ монандHope et al., 1994; Келз ва дигар, 1999). Мо фаҳмидем, ки дар 11A миқдори зиёди ΔFosB, сатҳҳои сафедаи CREB пас аз ҳафтаи 2 хеле баланд карда шуд ва ин сатҳҳо баъд аз ҳафтаи 8 (Тасвири 1A, n = 8). Барои муайян кардани он, ки тағиротҳо дар сатҳи CREB бо изофаи shortFosB -и кӯтоҳмуддат дар системаи дигар такрор кардан мумкин аст, мо ΔFosB-ро дар ҳуҷайраҳои PC12 муваққатан баланд бардоштем ва фаҳмидем, ки сатҳи CREB дар муқоиса бо назорат ((p <0.05) хеле баланд шудааст)Тасвири 1B, n = 4). Натиҷаҳои мазкур нишон медиҳанд, ки ифодаи кӯтоҳмӯҳлати ΔFosB меъёри сафедаи CREB-ро баланд мекунад.

Тасвири 1

Тасвири 1

Сатҳи CREB бо баландии ΔFosB афзоиш меёбад. Таҳлили латофати ғадуди ғарбӣ аз лизатсияҳо (A) Стратегияи мушак аз мӯйҳои 11A аз ҳафтаҳо барои 2 ё 8 ё (B) Ҳуҷайраҳои PC12 overexpressing ΔFosB. Маълумот дар A дар муқоиса бо нишондиҳандаи нарх дар тағйир дих карда мешаванд ...

Ҳар ду ΔFOSB ва CREB пайвасткунандагони генҳои ҳадафи мушаххасро дар striatum пас аз кӯтоҳмуддати ΔFОB

Мо чип-ҳо (иммунопрофизикатсиякунӣ) чеки ҳуҷайраҳои стриаталиро барои муайян кардани он, ки оё ΔFosB ё CREB пайвастанро дар пешгуфторҳои алоҳидаи гендери омехта истифода мебурданд ва агар ин пайвастшавӣ зиёдтар аз ΔFOSB баландтар бошад. Мо дар инҷо таҳлил карда шудем БДНФ ва Cck пеш аз он, ки ҳар ду генҳо ба таври зудтар ΔFOSB экзаментизатсия, эксперименталии CREB, ё муолиҷаи музмини коксиMcClung ва Nestler, 2003). Мо инчунин таҳлил кардаем CDK5 ки ин як ҳадафи бевоситаи ΔFosB (Chen ва дигарон, 2000; Bibb et al., 2001; Кумар ва дигарон, 2005). Ниҳоят, мо дар андозагирӣ андозагирӣ кардем prodynorphin ки пеш аз он ки таҳқиқоти пешакӣ муайян кунанд, он метавонад ҳам аз ҷониби ΔFOSB ва CREB бо шароитҳои гуногун пайваст шавад (Andersson et al., 2001; Zachariou et al., 2006).

Таҳлили чипта аз рӯи стриатсия аз мӯйҳои 11A ΔFosB барои ҳафтаҳои 2 бо ёрии антибиотикҳо, ки CREB ё ΔFosB -ро эътироф мекунанд. Дар шароити муқаррарӣ, мо фаҳмидем, ки ΔFosB ба он пайваст мешавад CDK5 ва prodynorphin ки дар он ҷо ягон чизи ҷудокунанда вуҷуд надорад БДНФ or Cck пешбаранда (Љадвали 1). Илова бар ин, ΔFosB изофанависии ΔFOSB дар изофаи афзоиш ёфт CDK5 Аммо, дар ин маврид, prodynorphin мусоидаткунанда. Мо минбаъд низ CREB-ро дар ин ташаббускорҳо санҷида, муайян кардаем, ки CREB ба он пайваст мешавад CDK5, BDNF ва prodynorphin пешбаранда, вале на ба он Cck ки дар давоми якуним соат дар якҷоягӣ бо 2, БДНФ ва prodynorphin пешбаранда, вале на CDK5 мусоидаткунанда. Дар натиҷа, ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки ΔFosB ва CREB метавонанд ҳам ба якчанд намуди пешгӯиҳои генӣ пайваст шаванд prodynorphin ва CDK5Аммо, CREB ҳатман ба дигар пешвоиҳо хос аст БДНФ. Бояд қайд кард, ки дар ин давра, дар якҷоягӣ бо ΔFOSB оҳиста-оҳиста, дар ΔFOSB, ки дар баъзе пешомадҳо, ки бояд интишор карда мешуданд, ба назар мерасанд, балки ба CREB мутобиқаткунандагони мушаххас, ки бо ин оҳанги ΔFosB мутаносибан CREB-ро ба инобат гирифтаанд.

Љадвали 1

Љадвали 1

Барои пайваст кардани равғанҳои танзимкунандаи расмӣ ба пешвоёни гуногун дар функсияҳо ΔFosB барои ду ҳафта.

Корҳои қаблӣ нишон доданд, ки тағирот дар ифодаҳои геносе, ки аз тарафи дарозмӯҳлати ΔFosB дароз карда шудааст, бо тағйирёбии chromatin алоқаманд аст, аз ҷумла, acetylation histone H3, дар профилҳои алоҳидаи генетикӣ (Кумар ва дигарон, 2005). Барои муайян кардани он, ки ин тағйирот дар экспертизаи генҳо бо назардошти ΔFOSB кӯтоҳмуддат ҳисоб карда мешавад, мо муайян кардаем, ки маҳлулҳои acetylated histone H3 (тағйироти гологӣ бо хромотарии акредитатсионӣ алоқаманд аст), ё як гидрогени H3 (Lys9, тағйироти гологӣ, ки бо критикӣ алоқаманд аст хромбинати ғайрифаъол). Мо фаҳмидем, ки изофанависии ΔFosB барои ҳафтаҳои 2 ягон тағйироте дар маҳдудияти H3 acetylated дар ҳама гуна promeners ғаддам омӯхтааст (Љадвали 1). Мо дар якҷоягӣ бо гиперосфера ҳифзшуда H3 кам шуда будем prodynorphin пешбаранда, вале дар маҷмӯъ ҳеҷ гуна алоқамандӣ надорад Cck пешрафт ва дигаргунӣ дар алоқамандӣ надорад CDK5 ва БДНФ ки ин як механизми умумӣ нест, ки аз ҷониби ΔFOSB, дар муддати кӯтоҳ, ифодаи геноро танзим мекунад. Мо ҳайратовар будем, ки мо дар бораи тафтиши чиптаҳояшон фарқият надорем, ки ба афзоиши он таъсир мерасонад Cck Эъломияи МРНН дар масофаи 11A пас аз ҳафтаи 2-и ифодаи ΔFosB ва қарор кард, ки ин механизми минбаъдаро тафтиш кунад.

Фосилаи кӯтоҳмуддати Фосфор меафзояд Cck баён дар системаҳои гуногун

Хусусияти микроарррии мушакҳои B-transgenic 11A ΔFosB дар Стратегия мушоҳида ёфтааст, Cck сатҳҳои ороишӣ пас аз ҳафтаи 2 зиёдшавии изофӣ ва пас аз марҳилаҳои дарозтарини изҳори ΔFosB коҳиш меёбад (Тасвири 2A, n = 3). Мо ин таъсирро тасдиқ кардем Cck Истифодаи вақти воқеии PCR дар гурӯҳҳои алоҳидаи ҳайвонҳо дар ҳафтаҳои 2 ва 8 ва натиҷаҳои он дар ду марҳила нишон медиҳанд, ки ба таҳлили микроарра монанд аст (маълумот нишон дода нашудааст).

Тасвири 2

Тасвири 2

Миқдори кӯтоҳмуддат аз ΔFOSB меафзояд Cck ифодаи ген. (A) Cck Эъломияи mRNA дар стриатсия пас аз ΔFosB оҳиста дар масофаи 11A барои 1, 2, 4, ё 8. Таҳлили макроиқтисодӣ дар намунаҳои стриаталкӣ гузаронида шуд Cck сатҳҳо ...

Барои минбаъд омӯхтани қобилияти ΔFOSB ба танзим дароред Cck Эзоҳ, мо бо ҳуҷайраҳои PC12 истифода бурдем Cck-паксоза ва плазмикаи мураббаъ ва ё ΔFosB формулаи ифода ё миқдори баробарии pCDNA. Ҳарду ду (n = 5-9) ва се (n = 11-13) рӯзҳои ΔFosB баланд бардоштани даромади назаррас Cck-фаъолият Илова бар ин, се рӯз аз баландии ΔFOSB ба таври назаррас бештар ба натиҷа расид CckҲангоми ба ду рӯзи зиёд кардани ҳосилғундорӣТасвири 2B). Натиҷаи ΔFOSB намехост, ки сохтори проекти лучифак (протокол нишон дода нашавад) -ро нишон надиҳад. Дар доираи ҳеҷ шароитҳои табобат кам шудани он буд Cck-фаъолияти функсионалӣ. Натиҷаҳои мазкур нишон медиҳанд, ки ифодаи кӯтоҳмӯҳлати ΔFosB фаъолияти меафзояд Cck мусоидаткунанда ва баромадан аз механизми он, ки аз ҷониби дарозмуддати ΔFOSB ба таври пешқадами фишурда монеъ намешавад Cck изҳорот.

ΔFosB аз ҳад зиёд баландшавӣ дар маҳалли ҷудошавии CREB меафзояд Cck мусоидаткунанда

Таҳлилҳои мо пайдо намуданд Cck Эъломия пас аз кӯтоҳтарин ΔFosB ифода ёфтааст, вале санҷишҳои ЧИП пайдо шуданд, ки CREB ва ΔFosB ба он Cck мусоидаткунанда. Барои муайян кардани он, ки ягон тағйирот дар сафедаи ҷудошуда вуҷуд надорад Cck мусоидаткунандагони зеринро аз ΔFOSB бартараф кардан, мо ба воситаи сканерҳои электроэнергия (EMSA) бо скане, ки дорои сайте, Cck мусоидаткунанда. Истифодаи истихроҷи яроқи атомии ставка аз миқдори 11A ΔFOSB барои ҳафтаҳои 2, мо афзоишро дар маҳалли ҷойгиршавии CRE Cck пешбаранда (Тасвири 3 A, C, n = 4). Мутаассифона, миқдори 11A ΔFosB барои ҳафтаҳои 8 хеле баланд аст, ки ин Cck Эзоҳ, ҳамчунин дар ин сайт баланд бардоштани пайвастшавӣ (Тасвири 3B, C, n = 4). Дар муқоиса бо мо, дар якҷоягӣ ба як созмони CRE дар як консенсуси CRE дар функсияҳо ΔFosB барои ҳафтаҳои 2 таҳия карда шуда буд, ки дар натиҷа боқимондаҳои пуриқтидори CRE пайваст карда шуда буд, вале афзоиши қонеъгардонии пас аз ΔFOSB (Тасвири 3F, n = 4). Аз ин рӯ, сарфи назар аз он, ки сатҳи баланди CREBB баландшавии сатҳи умумии CREB-ро ба инобат гирифтааст, ин натиҷаҳо бо таҳлили Чиптаҳо мувофиқанд, ки пайдо шудани CREB-ро дар потенсиалҳо пас аз зӯроварии ΔFosB танҳо ба як генҳои алоҳида хос аст ва падидаи глобалӣ нест . Барои муайян кардани он, ки оё CREB баста шудааст Cck пешбарандаи таҳлили Элеменсии мо, мо бо антибиотики мушаххаси CREB дар асоси экспертизаҳои supershift иҷро шудем. Дар мувофиқа бо таҳқиқоти Чиптики мо, мо ягон қоидаи CREB-ро ба даст надод Cck Саволе, ки дар сайти CRE ҷойгир карда шудааст, дар санҷишҳои EMSA, дар ҳоле ки CREB ба таври ҷиддӣ пайваст ва ҷойгиршавии як созмони CRE (Тасвири 3D, E, n = 4). ДНК фаъолияти ҷисмониро дар Cck ки дар якчанд тадқиқотҳои пешбининамудаи параграфи ΔFosB, ки ба ҷойҳои AP-1 алоқаманд аст (Hope et al., 1994a, 1994b; Chen ва дигарон, 1995, Hiroi et al., 1998). Ҳамчунин, мо дар бораи стандарти ҳайвонҳои 11A пас аз ҳафтаи 8-и ΔFosB экспертизаи Чипиалиро иҷро менамоем ва ҳанӯз ҳам қобилияти CREB ё ΔFosB-ро манъ накардааст. Cck пешбаранда (маълумот нишон дода нашудааст). Ҳамин тавр, ифодаи ΔFosB ба афзоиши сафедае, ки дар он алоқаманд аст, меорад Cck пешбаранда пас аз ҳафтаи дуюм 2 ва 8; Бо вуҷуди ин, шахсияти ин омилҳо номаълум боқӣ мемонанд.

Тасвири 3

Тасвири 3

Протеин дар он Cck мусоидаткунанда. (A, B) Таҷҳизоти электроэнергияро бо истифода аз он истифода баред Cck Шабакаи CRE-монанд бо бофтаҳои стриаталӣ аз ҳайвонҳо ΔFosB барои ҳафтаҳои 2 (A) ё ҳафтаҳои 8 (B). Дар (A) рақобат бо рақибони аз ҳад зиёди номаълум ...

Дар сайти CRE ҷойгир карда шудааст Cck Пешниҳод барои фаъолнокии пешбарикунанда масъул нест

Азбаски мо ба афзоиши сафедаи эпидемия, ки бо истифодаи порчаи интерпретатсия ёфт шуда будем Cck ки дар он ҷо ҷойгиршавии CRE ҷойгир аст, аз ҷониби ΔFOSB бартараф карда шудааст, мо мехостем муайян кунем, ки оё ин сайт барои зиёд шудани Cck изҳори сипоскунӣ аз ΔFOSB. Барои санҷидани ин имконият, мо бо ҳуҷайраҳои PC12 бо a Cck-лучифакл plasmid, ки сайти CRE-монополияи худро мунтазам ё яке аз он дорои mutation дар сомонае, ки ягон кор бо CREB бекор мекунад. Ҷолиби диққат аст, ки тағйирёбии сайти CRE-маъмул асосан паст шудааст Cck фаъолияти promoter аз ҷониби 32% (Тасвири 4A, n = 9), аммо ба он таъсир нарасонд Cck эффекти промоутер бо изофаи ΔFosB (Тасвири 4B, n = 11-13). Ин нишон медиҳад, ки ҳарчанд Cck мусоидаткунанда барои сайти CRE-монополиро барои фаъолияти пурраи фосилавӣ тақозо менамояд, фаъолнокии пешрафтаи пешрафта, ки аз ҷониби ΔFosB баландтар аст, пайдарпаии CRE-ро талаб намекунад.

Тасвири 4

Тасвири 4

Дар Cck-зеро аз сомонаи CRE барои ин зарур нест Cck аз ҷониби ΔFosB. (A) Cck-фаъолияти лизингозӣ баъд аз якуним рӯз бо 2 пас аз интиқол бо муқаррарӣ муқаррар карда шуд Cck-люсифераза ё яке, ки дар он сайти CRE-монанд мутатсия шудааст. * p <0.05 (B) Cck-лучифа ...

cFos ба он мепайвандад Cck мусоидаткунанда

Таҳқиқоти пешакӣ муайян карданд cFos МRNA бо ифодаи ΔFosB кӯтоҳ меафзояд, вале баъд аз ифодаи ΔFosB, қобилияти муолиҷаи кокаин ба пайдоиши cFos дар стриатсия кам мешавад (McClung ва Nestler, 2003; Renthal et al., 2008). Бинобар ин, мумкин аст, ки cFos ба афзоиши он мусоидат мекунад Cck изҳороти кӯтоҳмуддати ΔFosB. Мо бо санҷишҳои ChIP бо мушаххаси антибиотик барои cFos ва андозаи cFos чудо карда шуд Cck профессер бо як василаи кӯтоҳмуддати ΔFosB. Ҳангоме ки мо ёфтем, ки cFos ба он пайваст мешавад Cck ки дар натиҷа,Тасвири 5, n = 5). Ин нишон медиҳад, ки азбаски cFos баста мешавад Cck мусоидаткунанда, он метавонад ба танзими умумӣ мусоидат намояд Cck вале он дар танзими он иштирок намекунад Cck мусоидаткунандаи ΔFosB.

Тасвири 5

Тасвири 5

cFos ба он мепайвандад Cck мусоидаткунанда. Тадқиқотҳои иммунопрозинатсионии хромогенӣ бо антиоди мушаххас барои cFos бо истифода аз бофтаҳои стриаталї аз ΔFOSB мушаххасоти функсияҳои функсионалӣ ё дар ҳафтаҳои 2-ро хориҷ карда мешаванд. Таҳлили воқеии PCR буд ...

Гузаштан ба:

МУНДАРИҶА

Ин тадқиқот аз рӯи натиҷаҳои қаблӣ нишон медиҳад, ки ΔFosB танзими гениро дар стрататсия танзим мекунад ва мо мефаҳмем, ки он тавассути механизмҳои гуногун пас аз ифодаи кӯтоҳмуддат амал мекунад. Мо нишон медиҳем, ки баъд аз 2 ҳафтаномаҳои зиёд, ΔFosB бевосита ба пешбарандагон дар генҳои алоҳида мефиристанд CDK5). Илова бар ин, он сатҳи баланди сафедаҳои CREBро афзоиш медиҳад, ки дар ҳуҷайраҳои репродуктивӣ, инчунин дар стриатсия мушоҳида мешавад, ки ба афзоиши қобилияти CREB пайвастан ба дигар мусоидаткунандагони генҳо (яъне dynorphine ва БДНФ). Дар омўзиши пештар, мо мефахмидем, ки ΔFOSB дар стриатсия чандин намуди генҳои тағйирёбандаеро, ки ҳангоми CREB хеле баланд аст, пайдо мекунанд ва ба ин гуна рафторҳои оптикӣ дар тадбирҳои кокаин бартарият меорандMcClung ва Nestler, 2003). Ҳамин тариқ, имрӯз ёфтани он, ки ΔFОБ ба қобилияти CREB кашида мешавад, инчунин ҳамчун CREB ба якчанд протсесси генҳои алоҳида, ба фаҳмонидани он ки чаро тағйироти генҳои табиии ин ду омилҳои трансплантатсияро дарбар мегиранд.

Кафолати CREB аз ҷониби ΔFosB шавқовар аст, зеро он нишон дод, ки маводи мухаддир аз сӯйистеъмолкунӣ тағйирёбандаҳои тағйирёбандаи дараҷаи 133-phosphorylated CREB (Матссон ва дигарон, 2005) ва баланд бардоштани критерияи CRE-mediated (Барот ва дигарон, 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), бе тағйир додани сатҳи умумии CREB. Мумкин аст, ки тағирот дар сатҳи CREB метавонад муваффақ шавад ва аз ин рӯ, ба осонӣ дар дигар таҳқиқотҳо ғарқ шуд. Дар дасти мо, мо дар санҷишҳои крагний дар CREB mRNA-ро мушоҳида кардем, вале ин ба таври назаррас (мушоҳидашудаи мушаххас) мебошад. Азбаски ҳарду 11A миқдори трансгенӣ ва ҳуҷайраҳои PC-12 нишонаи CREB-ро доранд, пас аз он ки ΔFosB кӯтоҳмӯҳлати кӯтоҳмӯҳлатро нишон медиҳанд, ин нишон медиҳад, ки CREB дар ҳақиқат аз ΔFosB (ё ҳадафи ΔFosB) тавлид меёбад, инчунин механизми дигари тавзеҳ додани тағйироти нашъаманд дар ген изҳорот.

Боварӣ ҳосил кард, ки на CREB ва на ΔFosB ба он алоқаманд нестанд Cck мусоидат менамояд Cck Эъломия ба таври аниқшаванда баъди ифодаи ΔFosB кӯтоҳ карда мешавад. Cck як нуриопедит фаровон аст, ки ҳам дар VTA ва NAc ифода шудааст (Hokfelt et al., 1980) ва эҳтимол дар аксуламалҳои рафтор ба маводи мухаддир зӯроварӣ (Josselyn et al., 1996; Йосселин ва дигарон, 1997; Хамилтон, ва дигарон, 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002). Дар санҷишҳои фарҳанги ҷисмонӣ, Cck Пешниҳодкунанда ба таври васеъ хусусият ва нишон дод, ки ба аъзоёни CREB ва AP-1 ҷавобгӯ бошад. Ҳансен, 2001). Ҳунун ва Диксон (1990) нишон дод, ки комплексҳои AP-1 метавонанд ба он пайваст шаванд Cck Сомонаи CRE-like дар vitro, ва баъдтар бо истифода аз ҳуҷайраҳои SK-N-MC neuroblastoma, нишон дода шуд, ки тағйирёбии сайти CRE-монанди коҳишдиҳии ҷавобгарии пешгирикунанда ба cFos / cJunRourke et al., 1999). Дар ҳақиқат, мо низ зиёд мешавем Cck фаъолиятҳои promoter (Тасвири 2) ва дар гирду атрофи унсурҳои CRE-монандиТасвири 3) бо изофанависии ΔFosB, узви оилаи дигари AP-1, вале мо ба ΔFОБ пайваст нестем. Cck мусоидаткунанда дар вирус or дар vitro, ҳатто дар баландии худ.

Корҳои зиёде барои CREB дар танзими нақши онҳо нишон доданд Cck фаъолиятҳои promoter. Дар бораи мо Cck Ҷойгиршавии CRE-маъмул дар тамоми анборҳо (Ҳансен, 2001), ва дар баъзе таҳқиқоти фарҳанги ҷисмонӣ ҳам, ҳам маҷмӯи CREB ва AP-1 ба ин сайт пайвастанд ва заруранд Cck фаъолиятҳои promoter (Ҳунун ва Диксон, 1990; Deavall, et al., 2000; Ҳансен, 2001). Илова бар ин, якчанд омўзгорони шинохта Cck Эъломия (аз ҷумла BFGF, PACAP, peptones ва depolarization) нишон доданд, ки тавассути CREB (Ҳанс, ва дигарон, 1999; Deavall, et al, 2000; Bernard, et al., 2001; Gevrey, et al., 2002; Ҳанс, ва дигарон, 2004). Мо Cck-кучифактеро иттилооти иттилоотии журналист барои нақши муҳими барномаи CRE-ки дар танзимот нақши муҳим мебозад Cck фаъолияти тавсеъовар, зеро муваффақияти ин сомона асосиро коҳиш медиҳад Cck фаъолиятҳои promoter ва Cck-iuciferase изҳороте, ки аз тарафи VP16-CREB ном дорад, шакли шакли фаъоли CREB мебошад, вақте ки ин сомона табдил ёфтааст (ношои нашуд). Ҳамин тариқ, мо фаҳмидем, ки CREB барои пайваст шудан ба он намерасад Cck мусоидаткунанда дар экспертизаи стриаталиро дар асоси ѐрии аввал ё ΔFosB кӯтоҳмуддат, вақте ки сатҳи CREB зиёд карда мешавад. Ин тааҷҷубовар аст, ки сатҳи баланди CREB яклухт омили ягона дар муайян кардани ҳаҷми маҳдудияти ин сомона вуҷуд надорад ва ин кор аз тарафи дигар дастгирӣ мешавад (Cha-Molstad, et al., 2004). Аз оне ки пешбарандаҳои дигар, қабл аз он, ки генҳои мақсадноки CREB муайян шудаанд БДНФ ва prodynorphin, ба КББ пайваст карда шудаем, мо боварӣ дорем, ки CREB ҳатман ба он мутобиқат намекунад Cck пешбаранда дар истихроҷи атомҳои стратакентӣ. Ғайр аз ин, истилоҳ Cck-фаъолиятро аз ҷониби ΔFOSB ба сайти CRE-монанди монанд, вобаста нест, ки ΔFOSB танзим намекунад Cck ки бо танзими мустақили ҳатмии CREB ба он Cck мусоидаткунанда.

Имкони мо барои ошкор кардани CREB интерфейси Cck пешбарандаи он мусоидат мекунад Renthal et al. (2009), ки бо усули ЧИП-ро истифода бурд, то ки тағйироти глобалӣ дар тағйироти глобалӣ дар фосфорлулятори CREB (PCREB) ва ΔFosB ба эффектики краксионии музмини критик пайваст карда шавад. Дар ин озмоишҳо, маҷмӯаҳои сафедаи ДН-ро бо ΔFosB ё PCREB антибиотикҳо ва баъд аз тамғагузории DNA, ки ба микроэлементҳои гибридизатсияшуда гибридизатсия карда шудаанд, immunoprecified. Гарчанде, ки аксарияти қаблии графикии CREB муайян карда шуда буданд (масалан, БДНФ, prodynorphin), Cck муайян карда нашудааст. Илова бар ин, он нишон дод, ки маҳдудкунии CREB ба як созмони консессионии CRE дар байни хатҳои чашмраси классикӣ фарқ мекунад (Cha-Molstad, et al., 2004). Ҳамаи таҳқиқоти қаблӣ, ки дар ҳамкорӣ бо CREB пайдо шуданд Cck мусоидаткунанда дар фарҳанги сотсиализатсия (на мағзи сар, ки аз он намунаҳои EMSA ва Чиптаҳо гирифта шудаанд) таҳия карда шудаанд. Дар ҳоле, ки EMSA метавонад иқтидори омилеро, ки ба пайдарпаии ДНК дахл дорад, арзёбӣ кунад, Тафтиши ШИП дар ин муомилаҳо ба назар гирифта мешавад дар вирус. Ғайр аз ин, бисёре аз маълумотҳо нишон медиҳанд, Cck фаъолиятҳои promoter ё CREB вобаста ба он Cck Прокопер аз ҳуҷайраҳое, ки аз тарафи омилҳо ба монанди peptones (Bernard et al., 2001), интиқолдиҳӣ (Ҳанс, ва дигарон, 2004), ё гуногунии фаъолкунандагони сақичҳои алоҳидаи инкассенталӣ, аз ҷумла CAMP ва ERK (Хансен ва дигарон, 1999). Дар таҷрибаҳои мо, танҳо "stimulus" истифода бурдани ΔFosB, ки барои тавлиди Cck изҳорот. Якҷоя замима мегардад, ки ин қобилияти CREB барои пайваст кардани (ва эҳтимолияти танзим) -ро дорад Cck Протатер ба намуди ҳуҷайра ва фаъолсозии роҳҳои мушаххаси алоҳида вобаста аст. Илова бар ин, Cck Элементҳои CRE-like like (ақаллан дар ҳуҷайраҳои PC12 ва дар striatum mouse) бевосита аз CREB ё ΔFosB ноил намешаванд. Доир ба ин масъала, ФосБ тасвир аз ҷониби CREB низ ба намуди чашмак ва намуди ҳавасмандгардонӣ хос аст. Омӯзиш аз ҷониби Андерсон Ал-. ошкор карда шуд, ки тазриқи секунҷаи критикии огонуклеотидҳо ба стриатор миқдор қисман қисман тамаркуз карда ФосБ пас аз идоракунии кокаин (Andersson et al., 2001). Бо вуҷуди ин, онҳо инчунин фаҳмиданд, ки қобилияти L-Dopa -ро ҳушдор медиҳанд ФосБ ки дар 6-OHDA-lesioned striatum ифода карда шудааст, ки ҳузури ҷинсии огонуклидидҳои гербро ба вуҷуд овард.

Азбаски CREB ва ΔFOSB ба таври ғайримустақим танзим карда мешаванд Cck ки дар якҷоягӣ бо навъҳои гуногуни эффективҳо, ки ба ΔFosB (Цанкова ва дигарон, 2004; Кумар ва дигарон, 2005; Renthal et al., 2008), мо асосан фикр кардем, ки ΔFOSB ба таври ғайримустақим бо тағйирёбии функсияи хроматин тағйир додани фаъолияти фаъолкунандагонро тағйир медиҳад. Бо вуҷуди ин, дар функсияҳо ΔFosB барои ҳафтаҳои 2-ро диққат дода, дар санаи H3 acetylation Cck пешбаранда (Љадвали 1). Ин аз ҷониби маълумоти чипи Chip-и дастгирӣ карда мешавад Renthal et al. (2009), ки дар ислоҳи H3 acetylated ягон тағйирот дар бораи Cck пешбаранда дар фосфаҳо ба кокаин музминан. Аз он вақт Cck профессор дар Стратегия фаъол аст, ҳеҷ гуна интизорӣ ё мушоҳидашавии H3 histone reproduced reproduced reproduced. Аз ин лиҳоз, мо низ аз тағйирёбии ΔFosB дар H3 acetylated acetylated БДНФ (ки ин нишондиҳандаи баландтарини CREB-ро баланд мебардорад) ё дар CDK5 ва prodynorphin (мусоидат ба афзоиши ΔFosB) нишон дод. Азбаски якчанд модификатсияҳои тағйироти histone, ки бо тағйирот дар фаъолиятҳои пешбаранда фаъолият мекунанд Rando ва Chang, 2009), эҳтимолияти дигар тағйир додани хромотин, ки бо энергияи ин генҳо алоқаманданд. Њар як таѓйирёбии хроматикї, ки аксаран пешгўии сатњи фаъолкунандањои пешбарикунандаро дар давраи фаъолкунии генетикаи алоњида таѓйир медињад. Дар кори оянда, он диққат додан ба дигар дигаргуниҳои эҳтимолӣ дар сохтори крримин дар атрофи назар аст Cck пешбарандаи фахрии ΔFosB. Ҷолибан, Кокаин музмин (эҳтимолан тавассути ΔFosB induction) нишон дод, ки ифодаи sirtuin 1 ва 2, синфи III-и диагетилазҳо, ки ба тағйирёбии физиология, реаксияи ERK ва ҷавобҳои рафторӣ ба кокаин (ба назар мерасад)Renthal et al., 2009). Нишон додани дизейтилаз histone ба қобилияти ҳамоҳангсозии изҳори шумораи калони генҳо тавассути Тағйироти глобалӣ дар сохтори хроматин.

Яке аз номзадҳои имконпазир дар ҷалб Cck танзими пас аз ΔFosB бартараф кардани аъзои AP-1 аъзои оилаи CFos буд. Эъломияи CFOS аз ҷониби CREB танзим мешавад (Шен ва дигарон, 1990; Impey et al., 2004), ва cFos баландсифаткунӣ (мутобиқат бо изофакори шарики cJun шарики худ) меафзояд Cck фаъолиятҳои promoter (Rourke et al., 1999). Бинобар ин, сатҳи баланди CREB аз сабаби баландшавии ΔFОБ-ро кӯтоҳтар карда метавонад, ки сатҳҳои cFOS зиёд шуда, боиси зиёд шудани пайвастшави ба Cck Сомонаи CRE-like. cfos mRNA дар мушакҳо баъд аз ду ҳафта аз ΔFOSB бартараф карда шудааст (McClung ва Nestler, 2003) ва дар функсияҳое, ки ба кокси музмин ва ё дарозмуддати ΔFОБ фишор меорандRenthal et al., 2008). Дар ин ҷо мо мефаҳмем, ки cFos бевосита ба он пайваст мешавад Cck Аммо, дар ин маврид, Ин нишон медиҳад, ки дар ҳоле ки cFos ба танзим даровардан мумкин аст Cck Дар маҷмӯъ, тағйир додани маҳдудияти cFos эҳтимолияти механизме мебошад, ки ба он ΔFОБ танзим карда мешавад Cck изҳорот. Аммо имконпазир аст, ки ΔFOSB метавонад тағйирёбии баъди баъди таркиби cFos (масалан, фосфорро тағйир диҳад) ё нишон додани ифодаи шарики мувозинатӣ (масалан, cJun) ё сафедаҳои фаъолкунанда. Бо вуҷуди он, ки сайти CRE-монополияи маъмулӣ (ки пештар нишон дод, ки макони бастабандӣ барои комплексҳои AP-1 нишон дода шудааст, нигаред Ҳунун ва Диксон, 1990) барои зиёд шудани талаб карда намешавад Cck Фаъолияти потенсиалӣ бо эффексивии ΔFosB (чуноне, ки дар озмоиши гензияи мо арзёбӣ шудааст), он сабаби он аст, ки омилҳои дигари трансгенӣ низ аз ҷониби ΔFosB танзим мешаванд.

Дар Cck фраксияи promoter, ки дар озмоишҳои генофизикии мо истифодашудаи экрани информатсия дар майдони ҷудошудаи Sp1 муҳофизат карда шудаанд ва E-қуттиҳо (аз тарафи Ҳанс, 2002 дида мешавад). Махсусан, пайдарпаии E-box барои нишон додани омилҳои репродуктивии бисёрҷонибаро нишон дода шудааст (аз тарафи баррасии Forrest ва McNamara, 2004). Истифодаи ҳуҷайраҳои PC12, мо дидем, ки тағйирёбии E-коғаз коҳиш меёбад Cck ки дар он иштирокчиёни Ҷанги Бузурги Ватанӣ иштирок намуданд. Ҷолиб аст, ки: Cck-кишофеее, ки дорои ҳамгунсозиҳо дар сайти CRE ва E-box дорои ягонаи базавӣ ошкор карда намешавад ва ба ΔFOSB excerexpression (нозироти нопурра) беэътино аст. Дигар омили муҳими ΔFOSB дар бораи Cck призидент ATFs, шаклҳои муайяни он маълуманд, ки дар стриатом аз таъсири психотиммулании музминиGreen et al., 2008). Бо вуҷуди ин, мо барои тамаркузи ΔFosB ин ATF (далелҳо нишон дода нашудаанд) ва ҳеҷ гуна далелҳоро пайдо накарданд, ва ATF-ро нахоҳанд кард, ки ба сайти CRE-монанди mutable Cck мусоидаткунанда.

Як истинод аз ин таҳқиқот ин аст, ки мо бо истифодаи ΔFOSB ба таври васеъ системаи дуҷонибаро истифода мебарем ва аз ин рӯ, бояд дар расмҳои парадигма ва идоракунии кокаин музмини консервативӣ консервативӣ бошад. Бо вуҷуди ин, фариштаҳои 11A имконияти беҳамто доранд, ки ба таъсири мушаххаси ΔFOSB дар стриатсия нигаронида шудааст, зеро экспресссия ба ин минтақаи мағдуд маҳдуд аст (Chen ва дигарон, 1998), дар ҳоле, ки идоракунии кокаин тағйироти гуногуни минтақаҳои дигари мағзие медиҳад, ки он гоҳ ба таври ғайримустақим ба striatum таъсир мерасонад. Ғайр аз ин, якчанд тадқиқотҳо дар мисоли мушакҳои 11A дар муқоиса бо ҳайвоноти ғайримуқаррарӣ, ки бо коксори музмин (хроникӣ)Келз ва дигар, 1999; McClung ва Nestler, 2003; Renthal et al., 2009). Ҳамчунин, Бибб ва дигарон. (2001) хабар дод, Cdk5 mRNA ва эффекти сафеда дар ҳамин ҳамин 11A ҳангоми муқоиса бо либосҳои муолиҷавӣ, муомилаҳои ғайриҷангии transgenic, инчунин тағйироти монанд дар ҳадафҳои CDK5, p35 ва DARPP-32.

Дар охир, мо мефаҳмем, ки шарҳи мухтасари ΔFosB ба тавлиди genҳо дар стриатсия тавассути механизмҳои гуногун меоварад. Инҳо дохилкунандагони бевосита алоқаманданд, тавлиди сафедаи CREB ва фаъол, тағйир додани хроматин, илова ба роҳҳо ҳанӯз муайян нестанд.

Гузаштан ба:

PROCEDURES EXPERIMENTAL

Ҳайвонот

Ҳайвоноти ҳайвонҳои би-transgenic 11A (NSE-tTA x TetOP-ΔFosB) дар ин омӯзиш истифода шудаанд ва дар Келз ва дигар, 1999. Барои фишурдани ΔFosB, мӯйҳо аз тексикиклинҳо байни ҳафтаҳои 3 ва 6 аз синну сол хориҷ карда шуданд, дар ҳоле, ки мушакҳо дар дссисycline нигоҳ дошта мешуданд. Ҳамаи мушҳо гурӯҳеро ташкил медоданд ва дар 12: 12 давраҳои сабук / торик, чароғҳои дар 7 маншаклшуда ва чароғҳои дар 7 ад lib дастрасӣ ба озуқаворӣ ва об. Ҳамаи таҷрибаҳои мобилӣ бо риояи протоколҳо, ки аз ҷониби парвариши ҳайвонот ва истифодаи клиникии Донишгоҳи Техас дар маркази тиббӣ дар Даллас тасдиқ шудаанд, буданд.

Гузоришгарон ва плазмомҳои изофӣ

Чандрасонаӣ (WT) Cck Мутахассиси-лучифераза бо илова кардани тақрибан 200 bp PCR ба варақаи pGL3-Promo (Promega) таҳия шудааст. Ин қисм аз DNA аз геномикии генетикӣ (primers: 5 'TATCCTCATTCACTGGGACGC 3', ва 5 'TACCTTTGGGGGGAAATCG 3' дар поён) ва дар аввал ба веб PGEM-T вирус (Promega, # A1360) гирифта шудааст. Параграфи мусоидаткунанда сипас ба сайтҳои маҳдудкунии Kpn1 / Xho1 маҳдудияти pGL3-лук.

Барои эҷоди mutation point CRE дар ин Cck промоутер, як праймер мутагеникӣ, ки бар зидди сайти қаблан гузоришшудаи CRE равона шудааст (примераи ҳиссиёт: 5'CGTGTCCTGCTGGACTGAGCTCGCACTGGTATAACA 3 ', antisense primer: 5'CTGTTACCCAGTGCGCGCTGAGTCCAGCAGGACACG 3') дар якҷоягӣ бо истифода аз тағирёбии дастури Stagen тағйир ёфт . Ин сайти гузоришшуда ба CRE-ро (ACTGCGTCAGC) ба ACTGAGCTCC табдил медиҳад. Ҳама плазмидҳои хабарнигор бо секвенсияи ДНК тасдиқ карда шуданд. Плазмиди ифодаи osFosB дорои пайдарпаии пурраи ΔFosB мебошад, ки ба сайти бисёркаратаи pCDNA 3.1 гузошта шудааст ва қаблан тавсиф шудааст (Улер ва Nestler, 2007).

Фарҳанги ҷисмонӣ ва гузаргоҳҳои DNA

Ҳуҷайраҳои феохромоситаи каламуш (PC12) дар миқёси миёнаи E-12-и Eagle, ки бо 10% зардоби асп, 5% зардоби гови ҳомила ва 1% пенисиллин / стрептомицин дар 37 ° C ва 5% CO илова карда шудаанд, нигоҳ дошта шуданд.2. Ҳуҷайраҳо тавассути электропоратсия бо истифодаи электропоратор BTX 360 (350В, 0 ом ва 850 мкФ) дар 800 мкл фосфати Дулбекко намакро дар кюветаҳои фосилаи 4 мм бо 10 мкг гузоришгар ва 5 мкг ибораи сохташуда гузаронданд. Плазмидаҳои вектории холӣ (pCDNA) барои ба эътидол овардани миқдори умумии ДНК истифода шуданд. Пас аз трансфексия, ҳуҷайраҳо дар муддати муайяншуда дар зарфҳои бо коллаген молидашуда 35 мм парвариш карда шуданд.

Таҳқиқоти

Пас аз ду ё се рӯз пас аз трансфексия, ҳуҷайраҳоро 3 маротиба дар намаки буферии фулфатии Дулбекко шуста (бо истифодаи 25 мм глицилгликин, 15 мм MgSO4, 4 mM EGTA, 1% Triton X-100, pH 7.8, 1 mM DTT), тавассути сентрифуркунӣ ҷамъоварӣ ва тоза карда шуданд. 30 μL аз лизат бо 140 м ллиффенсатсия (25 mM glycylglycine, 15 mM MgSO4, 4 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 1 мм калий калий, 1 mM coenzyme A, pH 7.8). Фаъолияти Luminescence бо истифода аз флеш-800 fluorescence microplate reader пас аз пошидани автоматӣ аз 40 μL 1 mM luciferin ба хуби. Фаъолияти луиффентизатӣ ба миқдори умумии сафеда, ки аз ҷониби экспертизаи протеинии BioRad муқаррар шудааст, муқаррар карда шуд.

Санҷиши фишори электроэнергия

Нишондиҳандаҳо аз донаҳои дуҷонибаи стриат аз фисади якҷоягии 11A (ки дар он ҷо дар давоми ҳафтаи XIXXXXXXXXXXXXMcClung ва Nestler, 2003) мувофиқи тартибе омода карда шуданд Huang ва Walters (1996). 32Нишондиҳандаҳои P-дуҷонидаи oligonucleotide бо истифода аз протоколи прототии Promega Gel Transparency (#E3300) ва схемаҳо бо истифодаи Roche Quick Spin Columns таҳия карда шуданд. Сатҳи CRE ва AP-1 схемаҳо аз Promega (#E328A ва E320B, мутаносибан) ва Cck Сатҳи CRE (Cck-CRE маъно дорад: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGGGGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGCGA;

Равишҳои ҷудошуда ва электрофорис бо истифода аз тағирёбии системаи прототии Promega Joint Shift Assay (#E3300) анҷом дода шуданд. CPU-и 50,000-и санҷидашуда бо экспертизаи атомии 10 мг дар якҷоягӣ муттаҳид карда шуд. Пеш аз ҷорӣ намудани сенарияҳои радиоактивӣ ДНК ё зиддимикробӣ иштирок карда шуданд. Барои таҷрибаҳои болопӯш, 2 микротетаи CREB (Upstate Biotechnology # 06-083) истифода бурда шуд. Реаксияҳо дар 4% jel polyacrylamide electrophoresed, хушк ва ба филми (бо истифода аз экранҳои шиддатнок барои соатҳои 1 ба рӯзҳои 2) буданд.

Иммунобиҳо

Барои ҳуҷайраҳои PC12, зарринҳои 35 мм ҳуҷайраҳои трансфексияшударо дар намаки фосфати буферии Дулбекко шуста ва лизатҳоро дар буфери лизиси RIPA (50 mM Tris pH 7.4, 5 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% дезоксихолат, 1 % Triton X-100, 0.1% dodecyl sulfate натрий) дорои ингибиторҳои протеаза. Пас аз sonication, клиринг ва таҳлили сафедаи Брэдфорд, лизатҳо пурра денатурат шуданд ва 50 мкг аз ҳар як намуна дар 10% гелҳои полиакриламиди SDS электрофорез карда шуд. Сафедаҳо ба мембранаи PVDF интиқол дода шуданд, дар тӯли 1 соат дар шири хушки чарбии 3% равған дар намаки буферии Трис, ки дорои 0.1% Tween-20 (шири TBS-T) буд, баста шуданд ва шабона дар 4 ° C бо антителаҳои ибтидоӣ (CREB-) санҷида шуданд Биотехнологияи Upstate # 06-083, ки дар соати 1: 1,000 истифода шудааст; GAPDH- Sigma # G8795, ки бо истифода аз 1: 80,000) дар шири TBS-T шинонда шудааст. Пас аз шустушӯи сершумор дар TBS-T, блотҳо дар ҳарорати хонагӣ бо истифода аз антителаҳои дуввумин ишқолшудаи фосфатазаи пайвастшуда (Сигма) дар шири TBS-T 1: 5,000 ҷӯшонида шуданд. Пас аз шустани сершумор дар намаки бо буферии Tris, аксуламали ранг мувофиқи дастурҳои BioRad (# 170-6432) иҷро карда шуд. Мембранаҳоро дар як шабонарӯз хушк карданд, дар сканери ҳамвор скан карданд ва денситометрия бо истифода аз ImageJ анҷом доданд (ба поён нигаред).

Барои экспертизаҳои вазнин, тадқиқоти ғарбии ғарбӣ ҳамчуноне, ки пештар нашр шуданд, сурат гирифтанд (Hope et al., 1994). Тоза аз марҷаи decapitated, ҷойгир оид ба ях карда ва дар матритсаи мағзи дар ғафсии 1 mm ҷудо карда шуд. Баъд аз пунктҳои пӯстӣ гирифта шуда, дар -80 ° C то истифода бурда мешавад. Дор, дар яхбандӣ дар яхбандии детерапия, ки ҳам фосфат ва сафедаҳо (Roche, Sigma) мавҷуданд. Баъд аз sonication, намунаҳо дар оби ҷӯшон безарар шудаанд ва дар 15,000xg барои дақиқаҳои 15 марказонида шудаанд; Пас аз он, Миқдори консентратсияи сафеда бо истифода аз санҷиши Bradford (Био-Род) муайян карда шуд. Санҷишҳо дар як 10% акриамидиди / bisacrylamide ҷарроҳӣ шудаанд, ба мембранаи PVDF интиқол дода шудаанд, ки дар шири 5% ширхӯрда шуда, бо антибиотикҳои ибтидоӣ (Anti-CREB, Upstate, Lake Placid, NY) пайвастанд. Блокҳо баъд аз истифода бо системаи кимиёвӣ (Пирс) диданд. Ҳамаи намунаҳо ба GAPDH (Fitzgerald, Concord, MA) муқаррар карда шуданд. Меъёрҳои стандартӣ барои таъмини он ки мо дар доираи силсилаи лампаи тафтишот амал карда истодаем.

Таҳлили дендитометрӣ

Барои таҳлили компютерҳои PC12, таҳлили диаспорометрия бо ImageJ бо калибровтизатсия анҷом дода шуд. Сигналҳои миёна аз ҳар як андоза ҷудо карда шуда, таносуби CREB ба сигнали GAPDH барои ҳар як намуна ҳисоб карда шуд. Барои антибиотикҳо ва таҳлили EMSA, Scion Image 1.62c бо тақсимоти замина истифода мешуд.

Иммунопрозия (ChP)

Тафтиши чипиҳо бо усулҳои азхуд карда шуд Tsankova et al. (2004) ва Кумар ва дигарон (2005). Хулоса, намунаҳои стриаталии дуҷониба аз мушҳои 11A, ки дар дохили доксициклин ва ё берун аз он нигоҳ дошта мешаванд, бо 1% формальдегид салиб бастанд ва алоқаманд бо глицин хомӯш карда шуд (консентратсияи ниҳоии 0.125 М). Ин намунаҳо аз тамоми иловаро дар мағзи сар буданд, ки дар сатҳи нуклеус бо кортекс хориҷ карда шудаанд. Хроматин тақрибан аз 0.2 то 1 кб тавассути sonication тарошида шуда, бо маҳтобҳои Protein G тоза карда шуд (Thermo Scientific # 22852) ва намунаҳои вуруди дар -80 ° C яхкардашуда. Барои ҳар як боришот аз 60 то 100 мкг хроматин истифода шудааст. 5-10 мкг аз ҳар як антителияи ибтидоӣ истифода шудааст (CREB: Биотехнологияи Upstate # 06-863, ΔFosB: Санта Круз Биотехнология # SC-48x, acetylated H3: Biotechnology Upstate # 06-599, methylated H3 (LYS9): Technology Signaling Technology, cFos: Биотехнологияи Санта Круз # SC-7202x). Маҷмӯаҳои антитело-хроматин мувофиқи дастури истеҳсолот бо протеини G плюс маҳлули иммуноприситатсия карда шуданд (Thermo Scientific # 22852). Пас аз алоқамандии баръакси намунаҳои вуруд ва таҳшиншуда, ҳар як намуна ба PCR миқдорӣ (qPCR) гирифтанд. Истифодаи ҳамаи ин антитело барои ChIP ба таври васеъ тасдиқ карда шудааст (Цанкова ва дигарон, 2004; Кумар ва дигарон, 2005; Renthal et al., 2009).

Сатҳи сафедае, ки дар ҳар як ҳавасмандгардонии генҳои фоизҳо бо роҳи муайян кардани ҳаҷми DNA-и алоқаманд аз ҷониби QPCR (Biosystems (API Applied Biotechs (ABI) Prism 7700, Foster City, CA) муайян карда шудааст. Дохилшавӣ ё умумияти DNA (ғайримутанокислотативӣ) ва ДНН immunoprecipitated дар се маротиба дар ҳузури SYBR Green (Biosystems Applied Biosstems, CA) васеъ карда шуд. Нархи Ct аз ҳар як мисол бо истифода аз нармафзори диски диссертат 1.1 гирифта шуд. Теъдоди нисбии DNA-ҳои шаблон бо усули ΔΔCt иҷро шуд (Цанкова ва дигарон, 2004). Primers истифода шудааст: Пешниҳоди BDNF 4: CTTCTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5 promoter: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; GTGCCCCGCTCTTGTTATTA Cck promoter: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG Пешниҳодҳои профилор: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

Таҳлили оморӣ

Ҳама маълумот ҳамчун воситаи хатои миёнаи стандартӣ пешниҳод карда мешавад. Тафовути оморӣ тавассути ду озмоиши t-tailed Student (p <0.05) муайян карда шуд. Ҳангоми муқоисаи сершумор, арзишҳои p бо истифода аз ислоҳи Bonferroni танзим карда шуданд.

Гузаштан ба:

изњори сипос

Мо мехоҳем, ки Велентал ва Арвин Кумар барои муҳокимаҳои муфид кӯмак кунанд. Мо инчунин ба NIDA барои маблағгузории ин озмоишҳо миннатдор хоҳем буд.

Гузаштан ба:

Далелҳо

Радди ношир: Ин як равияи PDF-ро дар дастури ғайричашмдошт, ки барои нашр омода карда шудааст, мебошад. Чун хидматрасонии мизоҷони мо мо ин нусхаи аввали тарҷумаро таъмин мекунем. Маълумотнома нусхабардорӣ, таснифот ва баррасии далеле, ки пеш аз он дар шакли интихоби ниҳоии худ нашр мешавад, сурат мегирад. Лутфан қайд кунед, ки дар давоми хатогии равандҳои истеҳсолот ошкор карда мешаванд, ки метавонанд мӯҳтавои ва таъсироти ҳуқуқии қонуниро, ки ба маҷалла дахл доранд, ба кор баранд.

Шартҳои гурӯҳбандӣ:

Бахши: # 1 Биология ва Molecular Biology Systems Nervous

Гузаштан ба:

Адабиёт

  1. Андерсон М, Конради C, Cenci MA. Элементҳои элементи CAMP барои ифодаи генетикӣ вобаста ба допамин вобастаанд, вале дар таркиби допамен-диминатсионалии статиат лозим нестанд. Нейроосес. 2001; 21: 9930-43. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  2. Barrot M, Olivier JD, Perrotti LI, DiLeone RJ, Berton O, Eisch AJ, Impey S, Storm DR, Neve RL, Yin JC, Zachariou V, Nestler EJ. Фаъолияти CREB дар нусхабардорӣ пӯшонидани пӯсти аксуламали рафторӣ ба ҳассосияти эмотсионалӣ. Просмотр Н.С.С. ИМА 2002; 99: 11435-40. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  3. Beinfeld MC, Коннолли КJ, Пирс РК. Табобати бемории кокаин афзуд, cholecystokinin (CCK) дар пӯсти неппентии пӯшида, уқубатҳои резинӣ, таъсирпазир аст, ки дар каламушҳо, ки ба кокаин хос аст. Нейрохимем. 2002; 81: 1021-7. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  4. Bernard C, Sutter A, Vinson C, Ратино C, Chayvialle J, Корри-Буссата М. Пептонес stimulates холестистоксин генетикӣ ба воситаи геминосин омехтаи элементҳои эпофосфат оммавии даврӣ. Endocrinology. 2001; 142: 721-9. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  5. Bibb JA, Chen J, Тейлор JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Ян З, Sagawa ZK, Ouimet CC, Нйн AC, Nestler EJ, Greengard P. Таъсири муолиҷаи давомдор ба кокаин аз тарафи сафедаи атфоли Cdk5 танзим карда мешавад. Nature. 2001; 410: 376-80. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  6. Cha-Molstad H, Келлер ДМ, Yochum GS, Impey S, Goodman RH. Мувофиқи намуди ҷудонашавандаи омилҳои транспепсияи CREB ба унсурҳои CAMP-ҷавоб. Просмотр Н.С.С. ИМА 2004; 101: 13572-7. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  7. Чен Ҷ, Ней Х., Келс MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Танзими равғанҳои FosB ва FosB-и монанди тавассути электродвлюзивӣ ва табобати кокаин. Mol Pharmacol. 1995; 48: 880-9. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  8. Чен Ҷ, Келз MB, Zeng G, Сакаи Н, Стффен C, Шокет ПЕ, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Ҳайвонотҳои трансгеникӣ бо намунаи ҳассос, намоиши генҳои ҳадаф дар мағзи. Mol Pharmacol. 1998; 54: 495-503. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  9. Чен Ҷ, Zhang Y, Келз MB, Стффен C, Ант ES, Зенг Л, Нестлер EJ. Инкишоф додани kinase-dependence kinase 5 дар hippocampus бо дастгоҳҳои музмини музмини музмини музмин: нақши ΔFosB. Нейроосес. 2000; 20: 8965-71. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  10. Chinenov Y, Kerppola TK. Муносибатҳои наздиктарини шаклҳои гуногунро дарбар гиред: Амалҳои Fos-Jun, ки ба хусусияти танзимкунандаи қоидавайронкунӣ муроҷиат мекунанд. Oncogene. 2001; 20: 2438-52. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  11. Cole RL, Konradi C, Douglass J, Hyman SE. Мутобиқати неуроналӣ ба амфетамин ва допамин: механизмҳои молекулавии танзими генийорфин дар стриатум rat. Неурон. 1995; 14: 813-23. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  12. Дағал DG, Raychowdhury R, ​​Dockray GJ, Dimaline R. Назорати ксенафкании CCK аз ҷониби PACAP дар ҳуҷайраҳои STC-1. Дислотаи фосси органикӣ физиологи фосфор. 2000; 279: G605-12. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  13. Ding XZ, Mocchetti I. Танзими Dopaminergic аз холестстокини МRNA дар стриатун rat. Брейвик 1992; 12: 77-83. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  14. Насли С, McNamara С. ои оилавии омилҳои трансплантавї ва ташаккули варидњои табларза. Арчестронияи Тромос Vasc Biol. 2004; 24: 2014-20. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  15. Gevrey JC, Cordier-Bussat M, Нелом-Гейллард E, Chayvialle JA, Abello J. Талаботи амплитудаи AMP-ва калий-вобаста ба протеин, ки барои фаъол гардонидани генетикаи генатистокин аз тарафи гидрографи сафеда заруранд. Б.И. Чим. 2002; 277: 22407-13. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  16. Green TA, Alibhai IN, Unterberg S, Neve RL, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ. Бартараф намудани омилҳои фаъолгардонии трансплантатсионӣ (ATF) ATF2, ATF3 ва ATF4 дар аккосҳои атмосферӣ ва танзими онҳо рафтори эмотсионалӣ. Нейроосес. 2008; 28: 2025-32. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  17. Hamilton ME, Redondo JL, Freeman AS. Зарур аст, ки допамин ва cholecystokinin дар атомҳои резинӣ дар ҷавоби маъмури муолиҷаи маводи мухаддир фаъол бошанд. Ҷойгиршавӣ. 2000; 38: 238-42. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  18. Хансен ТВ, Рехфелд ҶФ, Нилсен ФК. Киназаи сафедаи бо митоген фаъолшуда ва киназ сафеда Роҳҳои сигнализатсия транскрипсияи холецистокининро тавассути фаъолкунии сафедаи аденозини 3 ′, 5′-монофосфати аксуламали пайвасткунандаи сафеда ҳавасманд мекунанд. Мол Эндокринол. 1999; 13: 466-75. [Садо Ояндасоз]
  19. Ҳанс TV, Nielsen FC. Низомнома дар бораи геносссторини генетикаи эндокринӣ. Scand J Клин Лаб 2001; 234: 61-7. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  20. Телефонҳои ҳунар Қуттиҳои генетикӣ: гиёҳҳои профилактикӣ, омилҳои транспланикӣ ва роҳҳои ишорашуда. Peptides. 2001; 22: 1201-11. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  21. Ҳанс TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. KCl ва forskolin синегистан ба таври гигиенистоксин генезстокини генофониро бо роҳи пайвастшавии коэффитсионии CREB ва координатори CBP якбора танзим мекунад. Нейрохимем. 2004; 89: 15-23. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  22. Haun RS, Dixon JE. Як воҳиди фармоишӣ барои ифодаи ифлос кардани пневматистокин ген, як пайдарпаии пайдарпаӣ ба элементҳои X-XIX-и энергияи c-phos. Б.И. Чим. 296; 1990: 265-15455. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  23. Hiroi N, Marek GJ, Браун JR, Ё Ҳ, Суддо Ф, Вайдя В. В., Думан Ри, Greenberg ME, Нестлер EJ. Нақши асосӣ дар бораи генокони фос дар амалҳои molecular, cellular and behavioral chronic electroconvulsive. Нейроосчи 1998. 1998; 18: 6952-62. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  24. Hokfelt T, Rehfeld JF, Skirboll L, Ивемарк B, Goldstein M, Маркей К. Далелҳо барои ҳамбастагии допамин ва CCK дар маҳалҳои нимно-лимфикӣ. Nature. 1980; 285: 476-8. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  25. Умед БТ, КЛЗ MB, Duman RS, Nestler EJ. Таҷҳизоти музмини эпидемияи эпидемия (ECS) ба ифодаи комплексии дарозмуддати AP-1 дар мағзи бо таркиб ва хусусиятҳои тағйирёфта натиҷа медиҳад. Нейроосес. 1994; 14: 4318-28. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  26. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Бастани як маҷмӯи дарозмӯҳлати AP-1, ки дар таркибҳои фосфатҳои таркиби фосфорӣ бо мағзи кокси музмин ва дигар табобати музмини ҷудошуда ташкил шудааст. Неурон. 1994; 13: 1235-44. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  27. Huang KX, Walters JR. Танзими Dopaminergic омори криптографии AP-1 фаъолияти ҷории ҷисмонӣ дар стриат / странатсия. Неуродиён. 1996; 75: 757-75. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  28. Impey S, McCorkle SR, Cha-Molstad H, Dwyer JM, Yochum GS, Boss JM, McWeeney S, Dunn JJ, Mandel G, Goodman RH. Муайянкунии танзими CREB: таҳлили генофонди минтақаҳои танзимкунандаи факс. Cell. 2004; 119: 1041-54. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  29. Йоханнессен М, Долганди Парламент, Moens U. Кадом ба CREB бармегардад? Сатҳи Cell. 2004; 16: 1211-27. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  30. Йосселин С., Vaccarino FJ. Таъсири манфии CCK (A) ва зиддимонопазирии CCK (B) оид ба рушди фаъолияти шаффоф дар чисмҳо. Behav Pharmacol. 1996; 7: 505-512. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  31. Josselyn SA, De Cristofaro A, Vaccarino FJ. Далелҳо оид ба ҷалби CCC (A) ҷалбкунӣ дар қабули фаъолияти шореҳие, ки аз ҷониби кокаин дар чоҳҳо истеҳсол шудааст. Беэътимод. 1997; 763: 93-102. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  32. Келс MB, Чен Ҷ, Карлзон WA, Jr., Whisler K, Gilden L, Бекман И AM, Steffen C, Zhang YJ, Маротти Л, Худтан DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR , Nestler EJ. Эзоҳ кардани омили transcript deltaFosB дар мағзи ҳассосият ба кокаин назорат мекунад. Nature. 1999; 401: 272-6. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  33. Кумар A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Руссо SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Тағйири хроматин як механизми асосии механизми асосии Кокаин ба вуҷуд меояд, ки дар Стратегия мавҷуд аст. Неурон. 2005; 48: 303-14. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  34. Маттсон BJ, Босерт Ҷ.М, Simmons DE, Нозаки Н, Нагкарар D, Кротон ҶД, Ҳооп БТ. Фосфоринопазири косметикии CREB-ро дар атомҳои коэксив дар саноати кокаин ҳассосгардида тавассути фаъолгардонии васеъшавии кинофестивали алоқаи сигнали алоқаманд имконпазир месозад, аммо кино протеин А. А. Нейрочем. 2005; 95: 1481-94. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  35. McClung CA, Nestler EJ. Танзими ифодаҳои генӣ ва мукофоти кокаин аз ҷониби CREB ва DeltaFosB. Н.Н. Нососчи. 2003; 6: 1208-15. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  36. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: гузариши molecular барои мутобиқсозии дарозмуддат дар мағзи. Брейвик 2004; 132: 146-54. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  37. Nestler EJ, Кальс MB, Чен ҶС. ΔFosB: Миёнарав молекулаи пластикии дарозмуддат ва рафтории рафтор. Беэътимод. 1999; 835: 10-17. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  38. Nestler EJ. Оё марбут ба маводи мухаддир умумӣ аст? Н.Н. Нососчи. 2005; 8: 1445-9. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  39. Nestler EJ. Механизмҳои таблиғотии алоқамандӣ: нақши DeltaFosB. Филос Тр R Soc Londra B Biol Sci. 2008; 363: 3245-55. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  40. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Мартин Бр, Сим-Селли Л, Беҳелл РК, Худилли DW, Нестлер EJ. Намудҳои гуногуни DeltaFosB дар мағзи сар бо маводи мухаддир зӯроварӣ. Ҷойгиршавӣ. 2008; 62: 358-69. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  41. Rando OJ, Chang ХХ. Намунаҳои васеи сохтори крромин. Анн Рев Бойчем. 2009; 78: 245-71. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  42. Ихтиёрӣ, Вильям Л., Карле Ли, Мазер I, Логант И, 3rd, Truong HT, Алибай I, Кумар A, Монтгомери РЛ, Олсон EN, Нестлер EJ. Delta FosB пас аз заҳролудшавии амфетамин ба генофобикаи эпидемиологии генотипҳо табдил меёбад. Нейроосес. 2008; 28: 7344-9. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  43. Кумул В, Кумар A, Xiao G, Вилкинсон М, Лоуингтон, 3rd, Мазер I, Сикдер Д, Робинсон AJ, Лапплант Q, Дитс ДМ, Руссо SJ, Vialou V, Чакраварти С, Кодадек ТJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Таҳлили фарогирии танзими штатогенӣ аз ҷониби кокаин барои сируинҳо нақши муҳим мебозад. Неурон. 2009; 62: 335-48. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
  44. Rotzinger S, Буш Д., Vaccarino FJ. Моделҳои Cholecystokinin функсияи функсияи допамини mesolimbic: танзими рафтори ҳавасмандгардонӣ. Фармакол Токикол. 2002; 91: 404-13. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  45. Rourke IJ, Ҳенсен TV, Нерлов C, Рюлфилд JF, Нелссен ФК. Ҳамкории самарабахши байни E-box encodered ва унсурҳои ҷавобгарии CAMP / TPA дар православияи геносстокин. ФБР Летт. 1999; 448: 15-8. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  46. Shaw-Lutchman TZ, Barrot M, Wallace T, Gilden L, Zachariou V, Impey S, Duman RS, Storm D, Nestler EJ. Хароҷоти минтақавӣ ва мобилӣ дар космосҳои CRE-mediated дар давоми морфин аз нитроксоне-боришот. Нейроосес. 2002; 22: 3663-3672. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  47. Shaw-Lutchman TZ, Impey S, Storm D, Nestler EJ. Танзими критикии CRE-ро дар мағзи мот бо амфетамин. Ҷойгиршавӣ. 2003; 48: 10-7. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  48. Шэнг, МакФадден Г, Гринберг, ME. Deparization of membrane and calcium induce c-fos transcription via fosforylation of factor factor transcription CREB. Неурон. 1990; 4: 571-82. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  49. Tsankova NM, Кумар A, Нестлер EJ. Ҳолатҳои тағйирёбии минтақаҳои генетикӣ дар hippocampus rat пас аз фалаҷҳои эпидемиологии шадид ва музмини. Нейроосес. 2004; 24: 5603-10. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  50. Ulery PG, Nestler EJ. Танзими функсияи DeltaFosB функсияи функсияи Ser27. Евр Н. 2007; 25: 224-30. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  51. Варкарино FJ. Nucleus аксуламали dopamin-CCK-ро дар мукофоти психостимулан ва рафтори марбут ба он муттаҳид месозад. Neurosci Biobehav Rev. 1992; 18: 207-14. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
  52. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ. ΔFosB: Нақши муҳими ΔFosB дар нусхабардории амал дар морфин. Табиии Neurosci. 2006; 9: 205-11. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]