DeltaFosB давидан ба чархҳоро танзим мекунад (2002)

ТАВСИФҲО: DeltaFosb як калиди молекулӣ мебошад, ки дар мағзи саривақтии доруҳои вобастагӣ, равғани баланд, қанд ва баландии чарх ҷамъ мешавад. Он майнаро тағйир медиҳад, то ҳассосиятро ба ҳар чизе, ки аз ҳад зиёд истеъмол мекунад, ба вуҷуд орад. Ин як омили транскрипсия аст, ки генҳоро фаъол ва хомӯш мекунад, ки сохтор ва иртиботро дар соҳаи мукофотонии мағзи сар иваз мекунад. Хулоса: Маълумотҳо монандии ҳайратангези байни нашъамандӣ ва давиши чархро нишон медиҳанд ва нақши муҳимро дар “ФосБ” дар танзими ҳам мукофоти табиӣ ва ҳам тавассути маводи мухаддир асоснок мекунанд..

Маҷаллаи Neuroscience, 15 сентябр 2002, 22 (18): 8133-8138;

Werme Мард, Мессер C, Олсон Л., Гилден Л., Торен П., Nestler EJ, Брене S.

+ Шарикони муаллиф

1. 1 шӯъбаҳои неврология ва

2. 2 физиология ва фармакология, Донишкадаи Каролинска, Стокголм, S-171 77 Шветсия ва

3. Шӯъбаи психиатрияи 3 ва Маркази неврологияи асосӣ, Донишгоҳи Маркази тиббии ҷанубу ғарбии Даллас, Техас 75390-9070

мавҳум

ΔФосБ як омили транскрипсия мебошад, ки пас аз халалёбии музмин дар майнаи мушаххас дар майна ҷамъ оварда мешавад. Масалан, истеъмоли такрории маводи мухаддир сатҳи Δ-ро зиёд мекунадФосБ дар стриатум. Дар таҳқиқоти мазкур, мо таъсири давиши чархи стихиявиро ҳамчун намуна барои рафтори табиии табии ба сатҳи Δ таҳлил кардемФосБ дар минтақаҳои стратиалӣ. Гузашта аз ин, мушҳо, ки дар натиҷаи oververexpress ΔФосБдар субпопуляцияҳои мушаххаси нейронҳои стриаталӣ барои омӯзиши нақши эҳтимолии Δ истифода мешудандФосБ дар бораи рафтори давида. Люис каламушҳо дода Озодӣ " дастрасӣ ба чархҳои давида барои 30 d фаро расид, ки ба ∼10 км / d мувофиқат мекунад ва сатҳи зиёдшавии Δ -ро нишон додФосБ дар accumbens ядро дар муқоиса бо каламушҳо дучор чархҳои қулфи. Мушҳое, ки аз ҳад зиёд фишурда мешаванд ΔФосБ ба таври интихобӣ дар нейронҳои стриаталии дорои стратиал ҳаракати рӯзмарраи онҳо дар муқоиса бо литтермҳои назоратӣ зиёд шуд, дар ҳоле ки мушонҳое, ки аз ҳад зиёданд ΔФосБ асосан дар нейронҳое, ки дорои стриаталӣ ҳастанд, нисбат ба назорат хеле камтар кор мекарданд. Маълумотҳои ин таҳқиқот нишон медиҳанд, ки ба монанди маводи мухаддир суиистифода, ихтиёрии давидан дараҷаи ΔФосБ дар пайраҳаҳои мукофоти мағзи сар. Гузашта аз ин, изофаи изтироб аз ΔФосБ дар баромади муайяни стриаталӣ аҳолии нейронӣ рафтори давраро меафзояд. Зеро кори қаблӣ нишон дод, ки ΔФосБ Изофабориҳо дар дохили ҳамон як аҳолии нейрон хусусиятҳои рӯҳбахши маводи мухаддирро сӯиистеъмол мекунад, натиҷаҳои тадқиқоти мазкур нишон медиҳад, киФосБ метавонад дар назорати ҳам мукофоти табиӣ ва ҳам тавассути маводи мухаддир роли калидӣ бозад.

гузашта Ҷудокунӣ Баъдӣ Ҷудокунӣ

Муқаддима

ΔФосБ ба оилаи Fos аз омилҳои транскрипсия тааллуқ дорад ва аз генофонди фосб тавассути паҳнкунии алтернативӣ гирифта шудааст. Бар хилофи дигар протеинҳои ба мисли Fos, ки нимашабаъ кӯтоҳанд, 35 ва 37 kDa изоформҳои ΔФосБ пас аз ҳароратсанҷи музмини мухталиф дар майна ба таври мушаххас дар майна ҷамъ меоянд, эҳтимол аз сабаби пойдории ин изофотҳо (Hope et al., 1994a; Chen ва дигарон, 1997; Nestler et al., 1999). Танзими ΔФосБ дар минтақаҳои стратиалӣ пас аз истеъмоли такрории маводи мухаддир сӯиистифода махсусан хуб омӯхта шудааст (Hope et al., 1994b; Морателла ва дигарон, 1996; Chen ва дигарон, 1997; Nestler et al., 1999). Роҳи допаминии mezolimbic дар мукофоти маводи мухаддир нақши марказӣ дорад (Koob iyo et al., 1998). Он дар минтақаи ventral tegramal midbrain сар мешавад ва дар қисми ventral striatum ба поён мерасад, ки ядрои accumbens номида мешавад. Идоракунии шадиди ҳар гуна доруҳои сӯиистифода муваққатан якчанд сафедаҳои оилавии Fos -ро дар аккомпентсияи ядро ва дар striatum кунҷора меорад. Ин сафедаҳо бо гудохтаи протеинҳои оилавӣ аз гетеродидерҳо иборатанд, ки сафедаҳои фаъолкунандаи протеин-1 (AP-1) -ро бо маҷмӯи кӯтоҳмуддат ташкил медиҳанд. Баръакс, пас аз табобати такрории маводи мухаддир, индуксионии ин маҳсулоти фаврии генетикӣ зуд коҳиш меёбад ва ба ҷои он, тадриҷан ҷамъшавии устувор ба вуҷуд меояд.ФосБ изофотҳо ΔФосБ heterodimerized асосан бо JunD ва каме камтар бо JunB (Hiroi et al., 1998; Перез-Отано ва дигарон, 1998) ба вуҷуд овардани комплексҳои дарозмуддати AP-1 дар минтақаҳои мушаххаси майна. Пешниҳод карда шудааст, ки ин комплексҳои дарозмуддати AP-1 баъзе таъсироти дарозмуддати маводи мухаддирро ба роҳҳои муздаш мағзи сар, ки вобастагиро дарбар мегирандNestler et al., 2001).

Тадқиқотҳои рафторӣ нишон медиҳанд, ки чархҳо дар хояндаҳо фоидаоваранд. Ин фарзия ба таҷрибаҳо асос ёфтааст, ки нишон медиҳад, ки каламушҳо барои дастрасӣ ба чархҳои давидан фишор медиҳанд ва инчунин бартарии ҷои шартиро ба муҳите, ки бо оқибатҳои давиши чарх вобастаанд, таҳия мекунанд (Ивссен, 1993; Belke, 1997; Lett et al., 2000). Гузашта аз ин, каламушҳо, ки ҳамарӯза масофаҳои дарозро тай мекунанд, ҳангоми дастрасӣ ба чархҳои давида нишонаҳои ҷудошавиро нишон медиҳанд, ба монанди зиёд шудани хашм.Хоффман ва дигарон, 1987). Пурсишҳо дар байни давандагони боэътимоди инсонӣ ишора мекунанд, ки давидан барои бисёр шахсон рафтори печида аст (Руди ва Эсток, 1989; Чапман ва Де Кастро, 1990; Фурст ва Гермоне, 1993). Дар ҳақиқат, давидан бисёр меъёрҳоеро дар Дастури омории ташхисӣ нишон медиҳад (Ассотсиатсияи равонии амрикоӣ, 1994) барои ташхиси вобастагӣ.

Мақсади тадқиқоти мазкур аз санҷиши сатҳи Δ иборат будФосБ бо рафтори баракатдиҳии табии ба монанди давидан ва ба ҳадди фишори изтироб табдил ёфтани Δ тағир дода мешавадФосБдар минтақаҳои striatal метавонад рафтори давриро танзим кунад. Мо дар ин ҷо нишон медиҳем, ки ба монанди маводи мухаддир сӯиистеъмолкунӣ, ҳамлаи музмини давронӣ ΔФосБ дар accumbens ядро; Илова бар ин, аз ҳад зиёд фишори ΔФосБ дар ду зершабақаҳои гуногуни нейронҳои дурнамои striatal ба барандаи чарх таъсири баръакс дорад. Маълумотҳо монандии аҷибро байни нашъамандӣ ва чархзании чарх нишон медиҳанд ва нақши муҳимро барои Δ нишон медиҳандФосБ дар танзими ҳам подошҳои табиӣ ва ҳам тавассути маводи мухаддир.

Қисми қаблӣ Қисми оянда

МАВОД ВА УСУЛ

Ҳайвонот. Дар аввали таҷриба каламушҳои мардонаи Mewlgagaard, Скансвед, Дания), ки вазни 250 гм доштанд. Каламушҳо дастрасӣ доштанд Озодӣ " ба об, хӯрок ва чархҳои давидан. Онҳо дар 12 соат / даври торик буданд ва дар 10 AM чароғҳо фурӯзон буданд ва дар 10 PM Қафасҳо (43 × 22 × 20 см) чархи даврашакл бо диаметри 34 см мавҷуд буданд; аз ин рӯ, як инқилоб ба 1.07 м мувофиқат мекунад. Пас аз ҳафтаи 4 ихтиёрии чарх, каламушҳо бо роҳи декапитатсия кушта шуданд ва бофтаҳои барои пошхӯрии Ғарб гирифта шуданд ё бо мустаҳкам карда шуда, барои иммуногистохимия коркард ва дар situгибридизатсия.

Ду хатти мушҳои битрансгенӣ, ки ба таври ғайриоддӣ over overpresspress ΔФосБ ба таври интихобӣ дар минтақаҳои стратиалие, ки таҳти назорати генофонди тетрациклин истифода мешуданд (Chen ва дигарон, 1998). Дар як сатр, ки 11A номида шудааст, ΔФосБ танҳо дар нейронҳои дурнамои стриаталӣ, ки аз несепептидҳои динорфин пас аз хориҷ кардани доксициклин ифода меёбанд, ба таври беш аз ҳад зиёд фишурда мешаванд (Келз ва дигар, 1999). Дар сатри дигар, ки 11B номида мешавад, ΔФосБ асосан дар нейронҳои проексияи стриаталӣ, ки пас аз хориҷ кардани доксициклин нейропептиди нейропептидро ифода мекунанд, гарчанде ки баъзе ифодаҳо дар нейронҳои динорфин низ дида мешаванд. Назорати ва ΔФосБ-Мушонҳои фаврӣ-фишурдасозӣ дар ҳар як сатр литмитҳо мебошанд (11A ва 11B) ва ҳамон як сохти битрансгенӣ доранд, ки тавассути бартараф кардани доксициклин фаъол карда мешаванд. Ҳама мушҳо дар таркиби доксицикли тетрациклин дар миқдори 100 мкг / мл дар оби нӯшокӣ ҳомиладор шуданд ва ба воя расидаанд. Ҳамчун калонсолон, нисфи қитъаҳои дар натиҷа мавҷудбуда дар доксициклин (идоракунӣ) нигоҳ дошта мешуданд; нимаи дигараш аз доксициклин хориҷ карда шуданд (Δ)ФосБ overexpressers) барои таҷрибаҳои боқимонда. Пас аз шаш ҳафта пас аз хориҷ кардани доксициклин, дар он вақт ΔФосБ ибора ба ҳадди аксар маълум аст (Chen ва дигарон, 1998; Келз ва дигар, 1999), чархҳои давида барои ҳарду мушҳо дар тетрациклин (идоракунӣ) ва мушҳо дар лӯлаи об кушода шуданд (ΔФосБ overexpressers) ва давидан ихтиёрӣ оғоз ёфт. Барои он ки эҳтимолияти худи доксиклин ба рафтори чархдор таъсир расонад, мо чархи давиданро дар мушҳои C57BL / 6 (Чарлз дарё, Уппсала, Шветсия) таҳлил кардем, ки бо 100 мкг / мл доксициклин барои 6 ҳафта пеш аз иҷозати дастрас шудан ба чархҳои медавид. Сипас мушҳо дар қафас бо Озодӣ " дастрасӣ ба чархҳои медавад ва дар тӯли озмоиш дар тетрациклин боқӣ монданд. Гурӯҳи назоратӣ дар давоми тамоми озмоиш оби оддии нӯшокӣ мегирифт. Қафасҳои муш (22 × 16 × 14 см) дорои чархи даврашакл бо диаметри 12.4 см буданд; аз ин рӯ, як инқилоб ба 0.39 м мувофиқат мекунад. Маълумотҳои давриро ҳам аз каламушҳо ва ҳам мушҳо ҳар 30 дақиқа бо истифода аз нармафзори фармоишии компютер интихоб карда буданд.

Blotting ғарбӣ. Майнаҳо аз каламушҳои декапитатсия хориҷ карда шуданд ва дар буфери физиологии яхбардоршуда хунук шуданд. Панҷаҳо бо диаметри 2 мм барои интихоби матоъҳо аз accumbens ядро ва путаменаи каудати медиалӣ ва паҳлуии дар 1-мм-буридаи короналии мағзи сар дар сатҳи бренди 0.7-1.7 мм (Paxinos ва Watson, 1997). Намунаҳои майна дар 1% SDS яксон карда шуданд ва муайянкунии сафеда бо усули Лоудрӣ гузаронида шуд. Гомогенатҳое, ки дар байни 5 ва 50 мк протеин мавҷуданд, ба гельҳои SDS-полиакриламид бор карда шуданд ва мувофиқи тавсифот ба электрофорез дучор шуданд. Антиби харгӯш ба зидди Fos (1: 4000; MJ Iadarola, Институтҳои Миллии Тандурустӣ, Бетезда, MD) ё анти-FosB (N-terminal) антитело (1: 4000; Биотехнологияи Санта-Крус, Санта Крус, CA) истифода мешуд кашфи ΔФосБ. Протеинҳо бо истифода аз антиденоҳои пероксидаза-пайвастшудаи IgG (1: 2000; Vector Laboratories, Burlingame, CA) ва пас аз химилюминесентсия (DuPont NEN, Бостон, MA) муайян карда шуданд. Сатҳи масунияти ғайримунтазонӣ (IR) дар системаи таҳлили тасвир дар асоси Macintosh ҳисоб карда шуда, сатҳи сафедаҳо дар намунаҳои таҷрибавӣ бо дараҷаи назоратӣ муқоиса карда шуданд. Блутҳо бо сиёҳи амидо ранг карда шуда буданд, то тасдиқ ва интиқоли баробар аз гелҳоро тасдиқ карда шавад. Блокҳо инчунин барои сафедаи 68 kDa нейрофиламенти иммунизатсия карда шуда буданд, ки фарқияти гурӯҳҳои таҷрибавӣ ва назоратиро нишон надоданд (маълумот нишон дода нашудааст).

Иммунохогохимия Каламушҳои Lewis, ки дар тӯли як ҳафта 4 кор мекарданд ва назорат бо чархҳои қуфлшуда бо пентобарбитал ва бенуксон ба дохилиактерия бо 50 мл Ca²⁺-маҳлули ройгони Тирод (ҳарорати хона), аз ҷумла 0.1 мл гепарин. Пас аз он 250 мл fixative (4% параформальдегид ва 0.4% кислотаи пикрин дар 0.16 м PBS, рН 7.4, дар ҳарорати хонагӣ) ба амал омад. Мағзҳо тақсим карда шуда, дар муддати 1 соат дар дақиқӣ нигоҳ дошта шуданд ва баъдан дар криопротексия дар 0.1 м PBS бо 10% сахароза ва 0.1% азиди натрий дар тӯли 24 соат дар 4 ° C шуста шуданд. Мағзҳо ях баста буданд ва қисмҳои 14 мкм короналӣ дар сатҳи байни брегма 0.70 ва 1.70 мм ҷамъоварӣ карда шуданд. Қисматҳо се маротиба барои 10 дақиқа дар PBS пеш аз инкубатсияи шабона (4 ° C дар камераи намӣ) бо антителияи ибтидоии поликлоналии анти-FosB (N-terminal) (1: 500; Санта Круз Биотехнология) дар 0.3% Triton-PBS (150) шуста шуданд. мкл барои як бахш). Пас аз он се дағалӣ бо PBS дар давоми 10 дақиқа пеш аз инкубатсия дар давоми 1 соат дар ҳарорати хонагӣ бо антителаи биотилинатсионии зидди anti-харгӯш IgG (1: 200; Laboratories Vector) дар 0.3% Triton-PBS (150 мкл дар як бахш) пас аз он шуст. Се шустушӯи дигар дар PBS барои 10 дақиқа пеш аз илова шудани маҷмааи авидин-биотин иҷро карда шуд (мутаносибан 1: 100 ва 1: 100, дар 0.1 м PBS; 150 мкл дар як бахш). Пас аз се даќиќаи даќиќаи 10 даќиќа, комплекс пас аз 7 даќиќаи инкубатсия бо субстрат мувофиќи протоколи истењсолкунанда (Вектор лабораторияњо) тасаввур карда шуд. Баъдан бахшҳо се маротиба дар тӯли 5 дақиқа шуста шуданд.

Дар ҷойҳо гибридизатсия. Барои иммуногистохимияи омехта вадар situ таҷрибаҳои гибридизатсия, бахшҳои мағзи сар, ки барои иммуногистохимия коркард карда шуда буданд, фавран таҳти фишор қарор гирифтанддар situ гибридизатсия, ки моҳиятан амалӣ карда шуд (Serogogy et al., 1989; Dagerlind et al., 1992). Чилу ҳашт мер пробиди ДНК олигонуклеотид, ки барои динорфин хосанд (296 – 345) (Дугласс ва дигарон, 1989) ва энкефалин (235 – 282) (Zurawski et al., 1986) mRNAҳо бо радиоактивӣ бо нишонаҳои [α-³⁵S] dATP (DuPont NEN) дар 3 ′ -и онҳо бо истифодаи терминали дезоксинуклеотидитил (Invitrogen, San Diego, CA) ба фаъолияти мушаххаси ∼1 × 10 анҷом меёбад⁹ CPM / мг. Коктейли гибридизатсия 50% формамид, 4 × SSC (1 × SSC 0.15м NaCl ва 0.015 цитрат натрий, рН 7.0), маҳлули 1 × Денхардт, 1% саркозил, 0.02 мНа₃PO₄, pH 7.0, 10% сулфат декстран, 0.06 m dithiorereol ва 0.1 мг / мл қутти ҷосуси сперми ДНК. Ҳибридизатсия барои 18 соат дар як камераи намнокшуда дар 42 ° C анҷом дода шуд. Пас аз гибридизатсия, қисматҳо барои 20 дақиқа дар 1 × SSC дар 60 ° C чаҳор маротиба шуста шуданд. Пас аз он, қисматҳо дар оби автоклавӣ ба сония 10 сон шуста шуда, дар спирт дегидратсия карда шуданд ва ҳаво хушк карда шуданд. Дар ниҳоят, NTB2 эмулсияти суръати ҳастаӣ (иловашуда 1: 1 бо об; Kodak, Rochester, NY) бо ғӯтонда ба кор бурда шуд. Пас аз 2-4 ҳафтаи экспозитсия, слайдҳо бо D19 (Kodak) таҳия ва бо Unifix (Kodak) мустаҳкам карда шуданд.

Ҳисобҳои ҳуҷайраҳо барои мусбӣ ФосБ-IR ва ҳуҷайраҳои колосализатсияи FosB-IR ва dynorphin mRNA ё enkephalin mRNA дар каламушҳо пас аз 4 ҳафта пас аз давидан (n = 8) ва дар назорат ((n = 8) дар як слайд барои ҳар як ҳайвон иҷро карда шуд, аз ҷониби нозирони мустақил, ки ба тарҳи таҷрибавӣ нигоҳ накардаанд. Таҳлил дар сатҳи бренди 1.2 мм (Paxinos ва Watson, 1997).

Тартиби оморӣ. Барои таҳлили фарқияти ΔФосБ сатҳҳо байни назорат ва даванда дар таҷрибаҳои ғарбӣ ва иммуногистохимияи Ғарб, t озмоишҳо гузаронида шуданд. Таъсири изофабори pressionФосБ дар бораи рафтори давидан дар мушҳои трансгенӣ бо истифодаи ченаки такрории ANOVA бо ченакҳои такрорӣ, таҳлил дар дохили гурӯҳ ва таъсири гурӯҳ дар байни гурӯҳҳо таҳлил карда шуд (Статистикаи нусхаи 99; StatSoft, Tulsa, OK).

Қисми қаблӣ Қисми оянда

Натиҷаҳо

Низомномаи ΔФосБ дар ядро ба воситаи чарх давидан

Каламушҳои Люис, ки дар қафасҳо бо чархҳои даврӣ ҷойгир шудаанд, миқдори рӯзмарраи рӯзмарраи худро то рӯзҳои 13 афзоиш доданд, вақте ки онҳо дар 10.210 ± 590 м / д (ба ҳисоби миёна ± SEM) устувор шуданд. Ин сатҳ тақрибан дар тӯли рӯзҳои 32 нигоҳ дошта мешуд, вақте ки ҳайвонҳо барои таҳлили биохимиявӣ истифода мешуданд. Дар давоми охирин 4 д, каламушҳо 8.910 ± 900 м / дро тай карданд. Ин рафтори давутози дар каламушҳо Люис ба рафтори қаблан мушоҳидашуда монанд аст (Werme et al., 1999). Баъдтар, сатҳҳои ΔФосБ тавассути пуфкунии ғарбӣ дар аккомпендаҳои ядро ва путаменаи каудати миалӣ ва паҳлуӣ ҳангоми давидан таҳлил карда шуданд (n = 7) ва назорат (n = 7) каламушҳо. Чӣ тавре ки дар расм нишон дода шудааст 1, чархи давидан зиёд шуд ΔФосБ сатҳҳои 37 ва 35 kDa isoforms дар accumbens ядро (p <0.05). Баръакс, дар Δ тафовуте набудФосБ сатҳи байни давандагон ва назорат дар putamen medial ё паҳлуии паҳлӯ (маълумот нишон дода намешавад).

Бознигарии бузургтарини:

Ҳамчун ҳамчун Слайди PowerPoint сабт кунед

Намоиши 1.

Низомномаи ΔФосБ бо давидан чарх. Сатҳи 35-37 kDa изоформҳои ΔФосБ дар аккумбени ядро бо истифодаи blotting ғарбӣ дар каламушҳои назорат чен карда шуда буданд (C) ва дар каламушҳо, ки ҳафтаи 4 давиши ихтиёрии чархро гузаштаанд (R). боло, Намоянда хатҳои аз блоки. Маълумотҳо бо ифодаи миёна ± SEM ифода ёфтаанд (ҳарду гурӯҳ, n = 7). *p <0.05.

Иммуногистохимия мавҷудияти Δ-ро ошкор сохтФосБ-ҳуҷайраҳои мусбат дар ядро аккредитатсияи назорат (n = 8) ва иҷрошаванда (n = 8) каламушҳо. Ҳисобҳои ΔФосБ-ҳуҷайраҳои мусбӣ дар ядро ва ҷилди афзоиши шумораи ҳуҷайраҳои ифодакунандаи Δ муайян кардандФосБ-IR дар асл (p <0.05), аммо пас аз давидан дар пӯсти ҳастаии атом нест (Расми XNUMX).2). Иммуногистохимияи омехта барои ΔФосБ-IR ва дар situ баъдан барои муайян кардани навъи ҳуҷайра дар ин минтақаи мағзи сар, ки дар он ҷо ΔФосБ тавассути давидан ба амал омадааст (расми 8).3). Дар ҳоле ки шумораи ҳуҷайраҳои ифодакунандаи ҳам dynorphin mRNA ва FosB-IR дар давандагон зиёдтар буданд (n = 8) нисбат ба назорат (n = 8) (ҷадвал)1), шумораи миёнаи ҳуҷайраҳо, ки ҳам энкефалин mRNA ва FosB-IR-ро дар даванда ифода мекарданд, нисбат ба назорат камтар буд (Ҷадвал 1). Ин таъсирҳо дар қисми асосии ин майнаи мағзи сар ба назар мерасиданд (Ҷадвал 1). Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки индуксияи ΔФосБ бо давидан пеш аз ҳама дар канори dynorphin-аз ядрои нейронҳои accumbens ядроҳо сар мезанад.

Бознигарии бузургтарини:

Ҳамчун ҳамчун Слайди PowerPoint сабт кунед

Намоиши 2.

Даври чарх ба шумораи Δ таъсир мерасонадФосБ-ҳуҷайраҳои мусбат дар ядро афзоиш меёбад.боло, Фотомикрографҳои намояндагии бахшҳои мағзи каламуш, ки афзоиши шумораи Δ-ро нишон медиҳандФосБ-ҳуҷайраҳои мусбӣ дар ядро ядрошуда ҳангоми даванда (давидан) бо назорат муқоиса карда шуданд (Ctr). асал, Андешаи комиссариати пешина.поёни, Диаграммаи сатри ҳисобҳои ячейкаҳо барои ΔФосБ-IR дар паҳлӯҳои medial ядро ва ҷилди ядро дар каламушҳои назоратӣ ва каламушҳо, ки 4 ҳафтаи ихтиёрии чархи давраро аз сар мегузаронанд, афзоиш меёбанд. Маълумотҳо бо ифодаи миёна ± SEM ифода ёфтаанд (ҳарду гурӯҳ, n = 8). *p <0.05.

Бознигарии бузургтарини:

Ҳамчун ҳамчун Слайди PowerPoint сабт кунед

Намоиши 3.

Хусусияти мобилии ΔФосБиндуксия бо давиши чарх. Фотомикрографҳои намояндаи бахшҳои мағзи каламуш аз ҳашт нафар, ки колокализатсияи Δ-ро нишон медиҳандФосБ-IR (ядрои доғдоршудаи қаҳваранг) ва dynorphin mRNA ()донаҳои сиёҳ) (a) ё ΔФосБ-IR ва enkephalin mRNA дар ядрои accumbens ядрои (b).

Ин ҷадвалро бинед:

Ҷадвали 1.

ΔФосБ дар ҳуҷайраҳои dynorphin ва enkephalin дар accumbens ядро

Таъсири ΔФосБ оид ба чарх

Омӯзиши нақши эҳтимолии ΔФосБ ҳангоми танзими давиши чарх, мо ду хати мушҳои битрансгениро истифода бурдем, ки онҳо ба таври номутаносиб oververexpress Δ будандФосБ дар доираи минтақаҳои стриаталии ҳайвоноти калонсол (Chen ва дигарон, 1998; Келз ва дигар, 1999). Хати битрансгении 11A метавонад ба таври ғайридавлатӣ oververexpress ΔФосБ танҳо дар дохили нейронҳои дорои динорфин дар стриатум (Келз ва дигар, 1999), дар сурате, ки хати битрансгении 11B метавонад ба таври ғайрисанҷатӣ over overpresspress Δ бошадФосБ асосан дар нейронҳое, ки энкефалин доранд, дар ин минтақа, бо баъзе ифодаҳо дар нейронҳои динорфин низ дида мешаванд (расми 15). 4). Ҳарду хатҳои мушҳо дар доксициклин ҳомиладор шуда ба воя расонида шуданд, то нигоҳ доранд ΔФосБибора хомӯш шуд (расми 15). 4) (Келз ва дигар, 1999), ва нисфи литтерҳо аз доксициклин ҳамчун калонсолон хориҷ карда шуданд, то ки Δ фаъол шавадФосБ изҳорот.

Бознигарии бузургтарини:

Ҳамчун ҳамчун Слайди PowerPoint сабт кунед

Намоиши 4.

Ифодаи ΔФосБ дар мушҳои 11B. Қисматҳои майна барои Δ таҳлил карда шудандФосБ-IR (ядрои қаҳваранг) дар минбаъда дар situ гибридизатсия барои dynorphin mRNA (A) ё энкефалин mRNA (B) (донаҳои сиёҳ). Ба ибораи афзалиятноки Δ диққат диҳедФосБ-IR дар ҳуҷайраҳои энкефалин-мусбат, аммо на дигорфин-мусбат. Аз 214 ΔФосБ-ҳуҷайраҳои мусбӣ, ки дар се муши 11B ҳисоб карда шудаанд, 73 ± 11% низ энкефалин мусбат буданд, ва 22 ± 6% низ динорфин мусбат буданд. Дар байни Δ тамғаи дукарата дида намешавадФосБ ва маркерҳои interneuron.

Mice 11A, ки overexpress ΔФосБ (доксициклин надорад) (n = 7) пайдо шуданд, ки масофаи ҳаррӯзаи кории худро дар тӯли ҳафтаи якуми 3 дар муқоиса бо идоракунии литтерматҳо (додаҳои доксициклин) афзоиш медиҳандn = 8), ки пас аз ҳафтаи 2 ҳафтаи даврро суръати даврии онҳоро нишон доданд (расми 8).5 A). Дар муқоисаҳои ҳайратангез, мушҳои 11B, ки аз ҳад зиёд фишурда шудаанд ΔФосБ (n = 7) дар тӯли ҳафтаҳои 2 ва 3 нисбат ба назорат аз литтерме (n = 6) (расми 15). 5 B). Барои таҳқиқ кардани он, ки худи доксицикл метавонад рафтори ҷориро тағйир диҳад, мо давиши чархи мушҳои C57BL / 6-ро бо ва бе доксициклин дар оби нӯшокиашон муқоиса кардем. Ягон фарқият байни гурӯҳҳо ёфт нашуд (маълумот нишон дода нашудааст).

Бознигарии бузургтарини:

Ҳамчун ҳамчун Слайди PowerPoint сабт кунед

Намоиши 5.

Таъсири ΔФосБ барзиёдии рафтори чарх дар мушҳои битрансгенӣ. A, Оби нӯшидан аз мушҳои битрансгенӣ ба барзиёдии ible дорандФосБ дар нейронҳои стриаталь dynorphin (об) ва афзоиш ёфтани давидан (масофа дар як рӯз) дар ҳафтаи аввали 3 дастрасӣ ба чархҳои давида. Баръакси он, литтерматияҳои аз ҷиҳати генетикӣ якхела бо доксициклин дар оби нӯшокии худ, ки аз ҳад зиёд намерасад ΔФосБ (dox) нишон дод, ки танҳо дар ҳафтаҳои аввали 2 ҳафта кор зиёд шудааст. B, Хатти дигари штамми битрансгении мушҳо, ки 11B номида шудааст ва бо барзиёдии барзиёди ΔФосБ пеш аз ҳама дар нейронҳои стриаталии энкефалин (об) дар тӯли ҳафтаҳои худ 2 ва 3 назар ба литтерматсияҳои генетикӣ шабеҳ, ки аз ҳад зиёд намерасад, ба таври назаррас камтар нишон доданд ΔФосБ (dox). # афзоишро дар масофа (масофа дар як ҳафта) дар дохили гурӯҳ нишон медиҳад. * фарқияти иҷро дар байни Δ -ро нишон медиҳадФосБбарзиёдоб) ва назорат (dox). Хатҳои амудӣ сарҳади байни ҳафтаҳои 1 ва 2, инчунин ҳафтаҳои 2 ва 3-ро нишон диҳед. Хатҳои уфуқӣ бо # аломати фарқияти омории байни даврҳои ҳафта дар дохили гурӯҳ тавсиф карда мешавад. Маълумотҳо ҳамчун миёна ифода карда мешаванд (11A dox,n = 8; Об 11A, n = 7; 11B dox, n = 6; Об 11B, n = 7).^# p <0.05;^## p <0.01;^### p <0.001; *p<0.05.

Қисми қаблӣ Қисми оянда

МУНДАРИҶА

Дар ин таҳқиқот, мо нишон медиҳем, ки ба монанди дучоршавӣ бо нашъамандӣ сӯиистифода кардан, чархи доимии давидан, рафтори табиии табии, ангеза ΔФосБ дар accumbens ядро, як қисми муҳими роҳҳои мукофотонидани мағзи сар. Мо инчунин нишон медиҳем, ки аз ҳад зиёд фишори ΔФосБ дар нейронҳои дриорфини ҳайвонҳои калонсол рафтори давидан зиёд мешавад, дар ҳоле ки ΔФосБ ифода пеш аз ҳама дар нейронҳои стриаталии энкефалин таъсири баръакс дорад. Ин додаҳо назари support -ро дастгирӣ мекунандФосБ ба таъсири дарозмуддати подошҳои табиӣ ва дору тавассути маводи мухаддир сахт танқид мекунад ва нақши муҳиммиФосБ дар танзими функсияи стриаталӣ.

Вокунишҳои монанд ба молекулӣ ба маводи мухаддир суиистифода ва давидан

Маводи нашъамандӣ чун гуногунии психостимуляторҳо, афюнҳо, машрубот, никотин ва фенсиклидин сатҳи сатҳҳои increase-ро баланд мекунандФосБ дар аккумуляторҳои ядроӣ (Hope et al., 1994b; Nye et al., 1995; Nye ва Nestler, 1996; Nestler et al., 1999), ва дар ин ҷо мо нишон медиҳем, ки рафтори музмини музмин ба чунин аксуламал натиҷа медиҳад. Кокаини музмин ва давидан мутобиқшавии иловагии иловагиро ба вуҷуд меорад, масалан, индуксияи dNorphin mRNA дар минтақаҳои алоҳидаи ститрум (Werme et al., 2000). Чӣ тавре ки қаблан зикр шуда буд барои кокаин (Hiroi et al., 1997), индуксияи ΔФосБ дар давидан назар ба тақсимоти ҷилди акумбҳои ядроӣ ядро мустаҳкамтар аст. Аммо, ΔФосБиндуксия бо давидан ба афзоиш додани ядро маҳдуд аст, дар ҳоле ки маводи мухаддир сӯиистеъмол сафедаро дар параметри каудат низ ба вуҷуд меорад. Таҳқиқоти қаблӣ нишон доданд, ки ΔФосБ танҳо дар нейронҳои проексияи стриатум ифода меёбад ва кокаин музмин меафзояд ΔФосБ асосан дар субпопулясияи нейронҳои лоиҳавӣ, ки dynorphin-ро ифода мекунанд (Морателла ва дигарон, 1996). Дар тадқиқоти мазкур, бо истифодаи иммуногистохимияи омехта вадар situ гибридизатсия дар ҳамон қитъаҳои бофтаи матн, мо нишон додем, ки чархи даванда низ ба ин оварда мерасонад ΔФосБ асосан дар дохили нейронҳои dynorphin.

Дарёфтани он мукофоти мухаддир ва мукофоти табиӣ ҳамон як мутобиқшавии молекуларо (индуксияи Δ) ба вуҷуд меорадФосБ) дар дохили як навъи ҳуҷайраи нейронӣ ишора мекунад, ки ҳардуи онҳо метавонанд тавассути ягон механизми умумӣ амал кунанд. Як механизми маъмули ба таври мувофиқ пешбинишуда афзоиши интиқоли допаминергикӣ ба аккомплексҳои ядроҳо мебошад. Истифодаи даврӣ ва шадиди доруҳои вобастагӣ аз сатҳи допаминии берун аз ҳуҷайра дар ин минтақаи мағзи сар (Озодшуда ва Ямамото, 1985; Di Chiara ва Imperato, 1988; Уилсон ва Марсден, 1995). Табобати такрорӣ бо Д.₁ допамин ретсепторҳои агонист (+/−) - 6-chloro-7,8-dihydroxy-1-phenyl-2,3,4,5-tetrahidro-1H-3-benzazepin hydrobromide танҳо ё якҷоя бо D₂ quinpirole ретсепторҳои агонист сатҳи сатҳи Δ-ро зиёд мекунадФосБ дар аккумуляторҳои ядроӣ ва стриатуми дорсалӣ (Nye et al., 1995). Маводи мухаддироти вобастагии рӯҳӣ ба монанди кокаин ва амфетамин, ки агонистҳои бавоситаи допамин мебошанд.ФосБ сатҳ дар минтақаҳои стриаталӣ (Ҷабер ва дигарон, 1995; Nye et al., 1995). Ғайр аз он, маъмурияти музминии антагонисти интиқолгари допаминии мушаххаси 1- [2- (bis [4-фторофенил] метокси) этил] -4- (3-гидрокси-3-фенилпропил) пиперазинил деканат, на серотинин- ва на серотинин- ингибиторҳои интихобкунандаи транспортер, индуктор мекунанд ΔФосБ дар ин минтақаҳои мағзи сар (Nye et al., 1995). Ин бозёфтҳо нишон медиҳанд, ки ҳавасмандкунии ΔФосБ дар стриатум пас аз табобатҳои гуногун ба допамин вобаста аст.

Таъсири муқобили ΔФосБ барзиёдии рафтори чархдор дар динорфини стриаталӣ ва нейронҳои энкефалин дар рафтори чарх

Мушҳои битрансгенӣ бо ΔФосБ Аз ҳад зиёд депрессия, ки бо хориҷ кардани доксициклин аз ҳайвонҳои калонсол бармеояд, ҳеҷ гуна аноралии инкишофро нишон намедиҳад. Дар мушон, ки дар он ΔФосБизофабориҳо барои нейронҳои стриаталии динорфин интихобӣ мебошанд, рафтори давидан дар давоми ҳафтаҳои аввали 3 давида ба ҷои ҳафтаҳои аввали 2, тавре ки барои литтерҳои назорат дида мешавад зиёд шуд. Дар муқоиса бо ишора, мушҳо аз ҳад зиёд фишурда мешаванд ΔФосБ пеш аз ҳама дар нейронҳои стриаталии энкефалин дар давоми ҳафтаҳои 2 ва 3 дар муқоиса бо литтермаҳои назораташон камтар кор мекарданд. Ҷолиб он аст, ки ду хатти мушҳои битрансгении дар ин ҷо омӯхташуда аксуламали гуногуни рафторро ба маводи мухаддир нишон медиҳанд. Дар ҳоле ки изофаи изтироб аз ΔФосБ дар нейронҳои dynorphin таъсири рӯҳбаландкунандаи кокаин ва морфин зиёд мешавад (Келз ва дигар, 1999; Nestler et al., 2001), барзиёдии ΔФосБ пеш аз ҳама, дар нейронҳои энкефалин таъсири рӯҳбаландкунандаи ин доруҳоро тағир намедиҳанд.

Таъсири баръакс ба рафтори давидан, ки дар ду хати муш мушоҳида шудааст, тавассути схемаи дифференсиалии ин ду субпопулясияи фарқкунандаи нейронҳои стриаталӣ шарҳ дода мешаванд. Зиёда аз 90% нейронҳои стриаталӣ нейронҳои проексияи миёнаи майса мебошанд, ки GABA-ро ҳамчун нейротрансмиттер истифода мебаранд. Тақрибан аз нисфи ин нейронҳо инчунин сатҳи баланди dynorphin ва модда P (ва то андозае D -ро ифода мекунанд) мебошанд.₁ ресептори допамин) (Gerfen et al., 1990; Le Moine et al., 1991) ва лоиҳа мустақим ба midbrain. Нисфи дигар сатҳи баланди энкефалинро (ва D) изҳор мекунанд₂ресептори допамин) (Gerfen et al., 1990; Le Moine et al., 1990) ва ба таври ғайримустақим ба мобайния тавассути globus pallidus ва ядрои субталамикӣ. Фаъолсозии шоҳроҳи мустақим локомотивро зиёд мекунад, дар ҳоле ки фаъолсозии роҳи ғайримустақим локомотивро коҳиш медиҳад. Ҳамин тавр, тағироти мутақобила дар рафтори давида, ки бо ду хати Δ намоиш дода шудаандФосБмушҳои зеризаминии фишурдасоз, ки дар ин таҷрибаҳо истифода шудаанд, метавонанд reflect -ро инъикос кунандФосБ- тағиротҳои ҳассос дар ҳаяҷонангии мустақим нисбат ба роҳи ғайримустақим. Дар баробари ин хатҳо, фикр кардан ҷолиб аст, ки камшавии чарх дар мушҳои аз ҳад зиёд мушоҳидашуда мушоҳида мешавад ΔФосБ пеш аз ҳама дар нейронҳои энкефалин метавонад бо он мувофиқат кунад, ки доруҳои насли аввал, ки фаъолнокии локомотивҳоро коҳиш медиҳанд,ФосБ интихобан дар доираи ин субпопулясияи нейронӣ (Ҳироӣ ва Грайбиел, 1996; Аткинс ва дигарон, 1999).

Генҳои мақсаднок аз ҷониби Δ танзим карда мешавандФосБ

Таъсири ΔФосБ оид ба функсияи нейронӣ тавассути танзими генҳои дигар миёнаравӣ мекунанд. Агар ба назар гирем, ки бисёр генҳо дар минтақаҳои таблиғотии худ сайтҳои ризоияти комплексӣ барои AP-1 доранд, эҳтимол аст, ки амали ΔФосБ оид ба нейронҳо таъсири мураккабро ба генҳои сершумор дар бар мегирад. То имрӯз танҳо шумораи ками онҳо муайян карда шудаанд. Воҳиди ресепторҳои глутаматии AMPA 2 (GluR2) аз тарафи Δ танзим карда мешавад.ФосБ дар аккумуляторҳои ядроӣ, натиҷае, ки дар striatum кунҷковӣ дида намешавад (Келз ва дигар, 1999). Киназе, ки ба сиклини аз XLUMX (Cdk5) вобаста аст, ҳам дар аккумуляторҳои ядро ва ҳам striatum dorsal танзим карда мешавад (Bibb et al., 2001). Ин таъсирҳоро тавассути сайтҳои AP-1, ки дар минтақаҳои таблиғоти ин генҳо мавҷуданд, миёнаравӣ кардан мумкин аст (Brene et al., 2000; Chen ва дигарон, 2000). Интизор меравад, ки танзими GluR2 ҳассосияти электрикии нейронҳои стриаталиро тавассути тағир додани ҳассосияти ретсепторҳои AMPA иваз мекунанд. Танзими Cdk5 метавонад ҳаяҷонангии ин нейронҳоро тавассути роҳи ҳамроҳшавии допамин ва фосфопротеин-32 танзимшаванда, ки дар нейронҳои стихиявии миёнаи стималӣ бой шудааст, тағир дода метавонад (Brene et al., 1994; Bibb et al., 1999). Аммо, кори минбаъда барои муайян кардани роҳҳои аниқи молекулавӣ лозим аст, ки тавассути онҳо ΔФосБ, тавассути тағирот дар ифодаи дигар генҳо, ҳолати функсионалии нейронҳои стриаталӣ ва энкефалинро иваз мекунад.

Хулоса

Бозёфтҳое, ки мутобиқшавии молекулавии якхела дар аккомпанияҳои ядро дар ҳолатҳои мукофоти табиӣ ва доруҳо ба амал омадаанд, нишон медиҳанд, ки механизмҳои умумии нейробиологӣ метавонанд ҳарду намуди рафтори мукофотонандаро назорат кунанд. Як монандии аслии байни ин рафторҳо табиати печида аст. ΔФосБ бо ҳар ду рафтори омилҳо сарфароз мегардад ва ҳарду рафтори вақте ки мустақилона дар нейронҳои стриаталии динорфин аз ҳад зиёд фишурда мешаванд, тақвият медиҳад. Шояд ΔФосБ, вақте ки дар ин нейронҳо ифода ёфтааст, як гардиши асабро, ки ба рафтори ҳатмӣ вобаста аст, ҳассос мекунад. Гарчанде ки баҳсомез ҳастанд, дониши афзоянда дар бораи ΔФосБ пешниҳод менамояд, ки он ё роҳи гуногуни молекулавӣ, ки онро танзим мекунад, метавонад як ҳадафи муносиб барои рушди табобати фармакологӣ барои як қатор ихтилолҳо бошад. Мисолҳои инҳо метавонанд рафтори маҷбурӣ бошанд, аз он ҷумла на танҳо нашъамандӣ, балки ихтилоли хӯрокхӯрӣ, қиморбозии патологӣ, машқи аз ҳад зиёд ва ҳатто бемории обсессивӣ-маҷбурӣ.

Қисми қаблӣ Қисми оянда

Далелҳо

Гирифтани Январ 29, 2002.
Нашрия моҳи июн 11, 2002 гирифта шуд.
Июн 12, 2002 -ро қабул кард.

Ин кор аз ҷониби Шӯрои Тадқиқоти Шветсия (03185, 11642 ва 04762) дастгирӣ карда шуд, Centrum för idrottsforskning (CIF 86 / 01), Институти Миллии Истифодаи Нашъамандӣ ва Институти миллӣ оид ба пиронсолӣ. Мо ба Карин Пернольд ва Карин Лундстремер барои кӯмаки аълои техникӣ ташаккур мегӯем.
Мукотиба бояд ба Стефан Брене, Шӯъбаи неврология, Донишкадаи Каролинска, Стокголм, S-171 77 Шветсия муроҷиат карда шавад. Почтаи электронӣ: [почтаи электронӣ ҳифз карда шудааст].

Қисми қаблӣ

АДАБИЁТ

Ӣ
1. Ассотсиатсияи равонӣ ба Амрико

(1994) Дастури ташхисӣ ва омории мушкилоти равонӣ, Ed 4. (Психиатрияи Амрико, Вашингтон, ДС).

Ӣ
1. Аткинс Ҷ.Б,
2. Члан-Фурнӣ Ҷ,
3. Н.Х.,
4. Ҳироти Н,
5. Карлзон В. В.,
6. Nestler EJ

(1999) Индуксияи мушаххаси ΔFosB тавассути маъмурияти такрории маъмулӣ ва доруҳои антипикотикӣ. Синапси 33: 118 – 128.

Садо зуд