(ҲАЁМА) Ҷавобҳои рафтор ва сохторӣ ба хукуки музминро талаб кунед Липедро бо ғизо, ки бо ΔFosB ва Calcium / Calmodulin-Dependant Protein Quinase II дар Неллеус Accumens Shell (2013)

Омили транскриптсияи ΔFosB ва киназаи калтсий / протеини аз калинин ба сафодулин вобаста (II) (CaMKIIα) дар таъсири афзоянда ба кокаин ё дигар доруҳои психостимулянт оид ба сӯиистифода, ки дар он ду сафеда аксуламали ҳассос ба доруҳо миёнаравӣ мешаванд, дар аккумуляторҳои ядро ​​(NAc) ворид карда мешавад. . Гарчанде ки osFosB ва CaMKIIα ҳам ифода ва рецепторҳои AMPA глутаматро дар NAc танзим мекунанд, ташаккули сутунмӯҳра дар дендритӣ дар нейронҳои миёнаи spa NAc ва ҳассосияти локомотив ба кокаин, то имрӯз ягон робитаи мустақим байни ин молекулаҳо кашф нашудааст. Дар ин ҷо, мо нишон медиҳем, ки osFosB аз ҷониби CaMKIIα дар Ser27 протеин устувор карда мешавад ва CaMKII фосфордор аст. ки барои ҷамъшавии миёнарави кокос-и osFosB дар каламуш NAc лозим аст.

Баръакс, мо нишон медиҳем, ки osFosB ҳам барои индуксияи кокаин ифодаи генҳои CaMKIIα дар in vivo зарур ва кофӣ аст.₁-барномаҳои MSN-ҳо дар зерқисми NAc.

Ғайр аз ин, омезиши сутунмӯҳраҳои дендритӣ ба NAc MSNs ва баландшавии аксуламалнокии рафтор ба кокаин пас аз барзиёди фишори NAc аз ΔFosB ҳам ба CaMKII вобастаанд.

Муҳим он аст, ки мо бори аввал индуксияи ΔFB ва CaMKII -ро дар НМ нашъаманд кокаин инсон, пешниҳод кардани ҳадафҳои имконпазири дахолати табобати оянда. Ин маълумотҳо муайян мекунанд, ки ΔFosB ва CaMKII дар ҳалқаи мусбати хӯшаҳои мушаххаси бадан ҳуҷайра ва майнаи минтақа ҳамчун механизми калиди танзими гардиши мағзи сар дар посух ба кокаини музмин иштирок мекунанд.

Муқаддима

Афзудани далелҳо бар он назаранд, ки тағирот дар ифодаи ген ба механизмҳои нашъамандӣ саҳм мегузоранд (Робинсон ва Нестлер, 2011). Як миёнарави муҳими ин тағирот isFosB, омили транскриптсияи оила Fos (Nestler, 2008). Идоранамоии музмини қариб ҳама гуна маводи мухаддир сӯиистифодаи дарозмуддати ҷамъшавии ofFosB -ро дар аккомпенди ядроӣ (NAc), минтақаи лимбикро, ки барои рафтори мукофот муҳим аст, ба вуҷуд меорад. С.индуксия барои синфҳои нейронҳои миёнаи NAc spiny (MSN) хос аст, ки ретсепторҳои D1 допаминро ифода мекунанд. Барзиёдии изофаи фишори osFosB дар ин намуди D1 NAc MSNs аксуламалҳои локомотивӣ ва арзанда ба кокаин ва морфинро зиёд мекунад. (Келз ва дигар, 1999; Zachariou et al., 2006), аз ҷумла зиёд кардани худидоракунии кокаин (Colby et al., 2003). Ғайр аз ин, муҳосираи генетикӣ ё вирусии транскриптсияи ΔFosB таъсири рӯҳбаландкунандаи ин доруҳоро коҳиш медиҳад (Zachariou et al., 2006) бо истифодаи он шаҳодат медиҳад, ки индуксияи устувори osFosB миёнарави ҳалкунандаи тағиротҳои давомдор дар NAc аз ҷониби маъмурияти музмини дору мебошад..

Устувории ғайриоддии ΔFosB (нисбат ба дигар сафедаҳои оилаи Fos) ҳам моликияти дохилии молекула аст, бинобар он, ки доманаҳои дегрони дар FosB-и пуриқтидор мавҷудбуда (Carle et al., 2007), ва раванди танзимшаванда. ΔFosB фосфордор аст дар vitro ва дар вирус дар Ser27, ва ин аксуламал минбаъд ΔFosB, ~ 10-ро дар фарҳанги ҳуҷайра ва NAc ба эътидол меорад дар вирус (Ulery-Reynolds et al., 2009). Гарчанде ки Ser27-ΔFosB нишон дода шудааст, ки субстрат барои казеин киназ-2 аст дар vitro (Ulery et al., 2006), механизми он дар вирус фосфоризатсия номаълум боқӣ мемонад.

Киназаи II-и протеин вобаста ба калтсий ва калитулулин (CaMKII) як киназияи серин / треонин мебошад, ки α ва β изоформҳо гомо-гетеро-холоэнзимдерро ташкил медиҳанд дар вирус, ва барои шаклҳои гуногуни нейропластикӣ муҳим мебошанд (Лисман ва дигарон, 2002; Colbran ва Brown, 2004). CaMKIIα дар қабати NAc тавассути амфетаминҳои музмин интихобӣ интихоб карда мешавад (Лоэт ва дигарон, 2010), ва муҳосираи фармакологии фаъолияти CaMKII дар қабати NAc ҳассосияти рафторро ба амфетамин коҳиш медиҳад (Лоэт ва дигарон, 2008) ва кокаин (Пирс ва дигарон, 1998), дар ҳоле ки изтироби изтироби вирусии CaMKIIα дар ин зергрести NAc ҳассосияти локомотивро ба худидоракунии амфетамин афзун мекунад (Лоэт ва дигарон, 2010). CaMKIIα метавонад ба рафтори подош тавассути модулятсияи зерфунксияҳои ретсепторҳои AMPA глутамат таъсир расонад (Пирс ва дигарон, 1998), зеро фаъолияти CaMKIIα тӯли солҳои дароз бо функсияи ресепторҳои AMPA ва синапти-мавриди ҳадаф дар якчанд шаклҳои нейропластикӣ алоқаманд аст (Малинов ва Маленка, 2002).

Ин адабиёт якчанд монандии байни betweenFosB ва CaMKII-ро нишон медиҳад: ҳарду барои таъсири сершумори рафтори нашъамандӣ заруранд ва кифоя ҳастанд; дар вирус (Jourdain et al., 2003; Maze et al., 2010) ва ҳарду ҳадди аққал каме аз таъсири рафтори онҳо тавассути модулятории ретсепторҳои AMPA (Келз ва дигар, 1999; Малинов ва Маленка, 2002; Vialou et al., 2010). Бо вуҷуди ин параллелҳо, ягон робитаи функсионалӣ байни osFosB ва CaMKII маълум нест. Дар ин ҷо, мо байни ΔFosB ва CaMKII танзимоти мутақобила барпо мекунем ва нишон медиҳем, ки ин ду сафеда як ҳалқаи мушаххаси D1-ро дар қабати NAc ташкил медиҳанд, ки аз ҷониби кокаин ба амал омада, як қатор аксуламали кокаинро ба танзим медароранд. дар вирус.

Гузаштан ба:

Мавод ва усул

Озмоиш 1: iTRAQ Таҳлили протеомикии NAc Shell ва Core пас аз коркарди кокаин (Намунаи 1A)

Каламушҳои мардони калонсол (8 ҳафта) як маротиба дар як рӯз дар ҳафт рӯз як маротиба 20 мг / кг кокаин ё воситаи автомобилии шӯрро идора мекарданд. 24 соат пас аз тазриқи охирин, қабати NAc ва аслӣ microdissected шуданд (Намунаи 1A) ва дурахши яхкардашуда. iTRAQ таҳлилҳо тавре иҷро шуданд, ки қаблан тавсиф шуда буданд, анҷом дода шуданд (Росс ва дигарон, 2004; Давалос ва дигарон, 2010).

Тасвири 1

Индуксияи хоси CaMKII дар NAc аз кокаин

Таҷриба 2: миқдори тағирёбии сафеда дар миқдори NAc ва Shell пас аз коркарди кокаин (Тасвири 1B –D)

Каламушҳои калонсолон (ҳафтаи 8) як маротиба дар як рӯз дар камераҳои сабти локомотив 10 мг / кг кокаин ё автомобили шӯр ворид карда шуданд. Вокунишҳои локомотив ба тазриқи яккарата кокаин (5 мг / кг IP) дар он ҳайвонҳое, ки қаблан бо кокаин табобат карда буданд ("" музмин "номида мешаванд) ва як қисми онҳое, ки бо шӯр (" "шадид" ном мебаранд) ва аксуламалҳои локомотив ба намакин сабт карда шуданд. танҳо дар ҳайвонҳои боқимондаи муздноки шӯр (ба ном “шӯр” номида мешуд) қайд карда шуд. Таҳлили амалҳои локомотив ба тариқи зайл иҷро карда шуд (Hiroi et al., 1997). Хулоса, каламушҳои мардони калонсол дар 18 "× 24" PAS қуттиҳои сабти кушод (Сан-Диего Асбобҳо) дар муддати 30 барои ҷойгиршавӣ ҷойгир карда шуданд, ба онҳо як сӯзандоруи IP-и шӯр дода шуд ва барои иловаи 30 дақиқа назорат карда шуд сӯзандоруи ягонаи IP ба 5 мг / кг кокаин ва дар давоми 30 дақиқа назорат карда мешавад.

24 соат пас аз ин тазриқи ниҳоӣ, каламушҳо бе наркоз таслим карда шуданд, то ки таъсири анестетикро ба сатҳи сафедаҳои нейронӣ ва ҳолати фосфо роҳ надиҳанд. Майнаҳо дар матрицаи 1.2 мм (Braintree Scientific) бофтаҳои мақсаднок дар ингибиторҳои протеаз (Рош) ва фосфатаза (Sigma Aldrich) бо истифода аз шкалаи ченаки 14 барои NAc ва ноқили 12 боқимонда бофтаи мақсаднок дар шӯриши фосфати намаки фосфат хориҷ карда шуданд. бофтаи қабати NAc (Ниг. нигаред) Намунаи 1A) ва фавран дар болои ях хушк карда шуданд. Намунаҳо тавассути буферии тағирёфтаи RIPA тавассути ультрасадо сабук карда шуданд: 10 mM Tris, 150 mM хлориди натрий, 1 mM EDTA, 0.1% натрий dodecyl sulfate, 1% Triton X-100, 1% natrium deoksycholate, proteXH тавре ки дар боло. Пас аз илова кардани буфери Laemmli, сафедаҳо дар гелҳои градиенти 7.4 – 4% ҷудо карда шуд (Bliterion System, BioRad) ва blotting ғарбӣ бо истифодаи системаи Одиссея (Li-Cor) мувофиқи протоколҳои истеҳсолкунанда гузаронида шуд.

Озмоиш 3: миқдори тағирёбии сафеда дар миқдори калиди NAc ва Shell пас аз кашидани кокаин (Намунаи 1E)

Каламушҳои мардони калонсол (8 ҳафта) як маротиба дар як рӯз дар ҳафт рӯз як маротиба 10 мг / кг кокаин ё воситаи автомобилии шӯрро идора мекарданд. 14 рӯз пас аз тазриқи ниҳоӣ, ба ҳайвонот бо шӯр кардашуда тазриқи дигар шӯр карда шуд ("шӯр" номида мешавад) ва ба ҳайвоноте, ки бо кокаин табобат карда шудаанд, боз як тазриқи шӯр (бо назардошти кашидани рӯзи 14 ё "14d WD") ё тазриқи ягонаи кокаин дода шуд ( даъват ба "14d WD Chal" барои мушкил). Пас аз як соат пас аз тазриқи ниҳоӣ, ҳайвонҳо нопок шуданд ва blotting ғарбӣ тавре, ки анҷом дода шуд Тафсили 2.

Таҷриба 4: Миқдори тағирёбии сафедаҳо дар калорияҳои NAc ва Shell пас аз худидоракунии кокаин (Тасвири 2A – C)

Каламушҳо барои худидоракунии 0.5 мг / кг / инфузияи кокаин дар як соат дар зери ҷадвали таносуби 1 дар тӯли нӯҳ рӯз омӯхта шуданд. Пас аз нӯҳ ҷаласаҳои ибтидоӣ, каламушҳо ба ду гурӯҳ тақсим карда шуданд, ки аз ҷониби истеъмоли кокаин дар ду ҷаласаҳои охир мувозинат карданд. Як гурӯҳи каламушҳо ба худидоракунии кокаин (0.5 мг / кг / инфузия) дар ҷаласаҳои яксоата (дастрасии кӯтоҳ, ША) иҷозат дода шуда буданд, дар ҳоле ки гурӯҳи дигари каламушҳо кокаини худидоракунандаро дар ҷаласаҳои шашсоата (дастрасии дароз, LgA) ) дар тӯли даҳ рӯзи иловагӣ (ҷаласаҳои афзоиш).

Қисматҳои майна барои иммуногистохимия коркард карда шуданд тавре, ки тавсиф шудааст (Perrotti et al., 2004). Баъд аз зарари охирини маводи мухаддир ба мағзҳо 18-24 соат такмил дода шуд, ки дар натиҷа деградатсияи ҳама гуна протеини боқимонда бо дарозии FosB ба амал омад, то ки ҳамаи боқимондаҳои ғайримунтазамии ΔFosB инъикос ёбанд. Ин таназзулро blotting ғарбӣ тасдиқ карданд ва дар он ҷо ягон антигене, ки зидди терминали C-и FosB-и дарозмуддат, ки directedFosB-ро эътироф намекунад, қайд нашудааст (маълумот нишон дода нашудааст). Пас аз тақсим шудан ба қисмҳои 35 мкм, шумораи ниқобҳои иммунопозитиви ФосБ аз ҷониби нозирони кӯр дар ду бахш тавассути NAc ҳар як калам ҳисоб карда шуда, қимати миёнаи ҳар як 40 × майдон пас аз минтақа барои ҳар ҳайвон ҳисоб карда шуд. Ҳар як ҳайвон барои таҳлили оморӣ як мушоҳидаҳои инфиродӣ ҳисобида мешуд. Бо истифодаи Paxinos ва Watson минтақаҳои таваҷҷӯҳ муайян карда шуданд (Paxinos ва Watson, 2007).

Санҷиши дахлнопазирии CaMKIIα бо истифодаи системаи иҷозатномадиҳӣ, ки дар боло тавсиф шудааст, анҷом дода шудааст (Covington et al., 2009). Шиддатнокии интегралии CaMKII ва GAPDH бо нармафзори Одиссея муайян карда шуданд. Натиҷаҳо ҳамчун арзиши интегралии шиддатнокии мм оварда шудаанд² ва ҳамчун воситаи ± сем нишон дода шудаанд (n = 4 – 10 дар як гурӯҳ). Қиматҳо барои GAPDH барои муқаррар кардани шиддатнокии CaMKII барои ғафсӣ ва шароити бурида истифода шуданд.

Тасвири 2

Ҷалби CaMKII дар қабати NAc аз каламушҳои худидоракунанда ва вобастагиҳои кокаин

Озмоиш 5: миқдори сатҳи сафедаҳо дар инсонҳо аз кокаин вобастагӣ дорад (Намунаи 2D)

тартиб

Бофтаҳои постмортими мағзи сари инсон аз бонки майнаи худкушии Квебек ба даст оварда шуданд (Донишкадаи Донишгоҳи солимии равонӣ Дуглас, Монреал, Квебек, Канада). Нигоҳдории матоъ асосан тавре ки дар боло тавсиф шуда буд (Quirion et al., 1987). Хулоса, пас аз истихроҷ, мағзи сар ба ях тар дар қуттии Styrofoam ҷойгир карда шуда, ба иншооти банки майнаи Квебеки худкушӣ шитофт. Беморро фавран бо буридани сагитталӣ дар мобайни мағзи сар, устухонҳои мағзи сар ва мағзи сар ҷудо мекунанд. Зарфҳои хун, ғадуди пайналӣ, плексуси хороид, нисфи мағзи сари ва нимаи мағзи мағзи сар маъмулан аз нимкураи чап ҷудо карда мешаванд ва сипас пеш аз яхкунӣ ба иловаро ба қабати 1 см бурида мешаванд. Нимсолаи ниҳоии мағзи аввал қабати яхкунандаро ба қисмҳои ғафси 1cm бурида мепартоянд. Матоъҳо дар 2-метилбутан дар −40 ° C барои ~ 60 сек яхбандӣ мекунанд. Ҳамаи бофтаҳои яхкардашуда дар халтаҳои пластикӣ дар at80 ° C барои дарозмуддат нигоҳ дошта мешаванд. Минтақаҳои мушаххаси майна аз буридаи яхкардашудаи коронализатсия дар тахтаи пӯлоди зангногир бо яхҳои хушк дар атрофи ҳарорати муҳити зист ҷудо карда мешаванд. Blotting ғарбӣ тавре ки дар боло тавсиф карда шуд Тафсили 2.

Когорт

Гурӯҳ аз 37 мардҳо ва 3 занҳо иборат буд, ки синну солашон байни 15 - 66 буд. Ҳама субъектҳо бидуни вазъи тӯлонии агоналӣ ё бемории тӯлонии тиббӣ ногаҳон вафот карданд. Дар ҳар ду ҳолат, сабаби кушта шудани дафтари коронери Квебек муайян карда шуд ва экрани токсикологӣ бо намунаҳои матоъ барои гирифтани маълумот дар бораи дору ва истифодаи ғайриқонунии моддаҳо дар вақти марг гузаронида шуд. Гурӯҳи мавзӯъ аз 20 ашхос иборат буд, ки ба меъёрҳои SCID-I барои вобастагӣ аз кокаин ҷавобгӯ буданд. Гурӯҳи назоратӣ аз субъектҳои 20 иборат буд, ки таърихи вобастагии кокаин ва ташхиси асосии равонӣ надоранд. Ҳама предметҳо аз сабабҳои ногаҳонӣ фавтиданд, ки ба бофтаи мағзи сар таъсири мустақим надошт. Гурӯҳҳо барои синну соли миёнаи мавзӯъ, таъхири яхдон ва сатҳи рН мувофиқ буданд. Дар ҳама мавзӯъҳо, автоматикаи психологӣ тавре ки дар боло тавсиф карда шуда буданд (Dumais et al., 2005), ки ба мо имконият медиҳад, ки ба маълумоти муфассал оид ба таърихи психиатрӣ ва тиббӣ ва инчунин дигар маълумоти дахлдори клиникӣ ва иҷтимоиемографӣ дастрасӣ пайдо кунем. Хулоса, як саволдиҳандае, ки ботаҷриба буд, онро гузаронд Мусоҳибаи сохтории клиникӣ барои DSM-IV Ихтилоли равонӣ (SCID-I) бо як ё якчанд хабаркашони фавтида. Як ҳайати клиникҳо арзёбиҳои SCID-I, ҳисоботи парвандаҳо, қайдҳои коронер ва сабтҳои тиббиро барои гирифтани ташхиси психиатрии якдилона баррасӣ карданд.

Озмоиш 6: Хроматин Иммунопрепетсияи барои каламуш NAc (Тасвири 3A – C)

Каламушҳои мардони калонсол (8 ҳафта) як маротиба дар як рӯз дар ҳафт рӯз як маротиба 10 мг / кг кокаин ё воситаи автомобилии шӯрро идора мекарданд. 24 соат пас аз тазриқи охирин, қабати NAc ва аслӣ microdissected шуданд. Хроматин дар бораи иммунопрепетизатсия (ChIP) бо шкалаи дуҷонибаи NAc қабати ё ядро ​​аз ҳафт каламушҳо дар як гурӯҳ дар гурӯҳҳои умумии 14 (ҳайвоноти умумии 98, ҳавзҳои 7, ҳавзҳои намаки 7) ҷамъ карда шуд. Матоъҳо ба ҳам мепайвандад, шуста мешуданд ва дар −80 ° C то расидани хроматин тавассути sonication нигоҳ доштанд. Хроматинҳои часпида дар як шабонарӯз бо антителоҳо, ки қаблан ба маҳлулҳои магнитӣ пайванд карда шуда буданд (Dynabeads M-280, Invitrogen). Ҳамчун назорат IgG ғайримунтазо истифода мешуд. Пас аз пайвастагии баръакс ва тозакунии ДНК, qPCR барои чен кардани сатҳи ДНК-и CaMKIIα истифода шуд. Ин дастурҳо барои васеъ кардани минтақа иборат буданд, ки иборат аз пайдарпаии AP-1 иборат аз ~ 450 bp қабл аз оғози транскрипсия (Ба пеш: ACTGACTCAGGAAGAGGGATA; Баръакс: TGTGCTCCTCAGAATCCACAA).

Тасвири 3

Намуди ҳуҷайра ва минтақаи мушаххаси ΔFosB индуксияи CaMKIIα дар вирус

Озмоиш 7: Андозагирии транскриптсияи CaMKII ва изҳори сафедаҳо бо мушаххасоти ячейка ΔFosBНамунаи 3D)

Мушҳои битрансгении мард аз НСЕ-тТА (хати А) × ТетОп-ΔfosB (сатри 11) ва НСЕ-тТА (хати B) × TetOp-FLAG-ΔfosB (сатри 11) мушҳо (Chen ва дигарон, 1998; Келз ва дигар, 1999; Werme et al., 2002; Zachariou et al., 2006) дар 100 мкг / мл доксициклин таҳия карда шуданд ва барои пешгирӣ кардани ифодаи ΔFosB дар давоми рушд таҳия шудаанд. Литмҳо ҳангоми ширдиҳӣ тақсим карда шуданд: нисфи доксициклин боқӣ монданд ва нисфи онҳо ба об мубаддал шуданд ва ҳайвонот 8 то 11 ҳафта пас ҳангоми транскриптсияи ΔFosB максималӣ буданд (Келз ва дигар, 1999; McClung ва Nestler, 2003). Барои таҳлили транскриптӣ, мушҳо босуръат таназзул ёфта, мағзҳо тоза карда шуданд ва ба ях гузошта шуданд. Ҷудокунии NAc бо зарфе бо сӯзанаки 14 гирифтанд ва зуд дар болои ях хушк шуданд, то РНК истихроҷ карда шаванд. Ҷудокунии RNA, qPCR ва таҳлили маълумот тавре ки қаблан тавсиф шуда буданд (LaPlant et al., 2009). Хулоса, РНК бо реагенти TriZol (Invitrogen) ҷудо карда шуда, минбаъд бо маҷмӯаи RNAeasy аз Qiagen пок карда шуд ва бо Bioanalyzer Agilent сифат тафтиш карда шуд. Тарҷумаи баръакс бо истифодаи iScript (BioRad) анҷом дода шуд. qPCR бо ёрии системаи биосистемаҳои амалии 7900HT RT PCR бо нишондиҳандаҳои зерини давра гузаронида шуд: 10 дақ дар 95 ° C; Давраҳои 40 аз 95 ° C барои 1 дақиқа; 60 ° C барои 30 сония; 72 ° C барои 30 сония; гармидиҳии дараҷабандишуда ба 95 ° C барои тавлид кардани хатҳои диссоциация барои тасдиқи маҳсулоти ягонаи PCR. Таҳлили иммуногистохимиявии ифодаёбии сафедаҳои osFosB ва CaMKIIα тавре ки дар боло тавсиф шудаанд, гузаронида шуд Тафсили 4.

Таҷриба 8: Таъсири антагонистҳои Intra-NAc D1 ва D2 Антагонистҳо дар тағирёбии сафедаҳои кокаин (Расми 3H)

Каламушҳои мардони калонсол (8 ҳафта) як маротиба дар як рӯз барои ҳафт рӯз як маротиба 10 мг / кг кокаин ё мошини шӯр (IP "гурӯҳи") IP ворид карда шуданд. 30 дақиқа пеш аз ворид намудани кокаин, каламушҳо IP ё аз ҷониби антихристони D1 рецептории SCH 23390 (0.5 мг / кг, “гурӯҳи D1 Ant”) ё D2 ресепторҳои антагонистии этиклоприд (0.5 мг / кг, “D2 Ant”) идора карда мешаванд. , ё сӯзандоруи назорати шӯр ("гурӯҳи кокаин"). 24 соат пас аз тазриқи ниҳоӣ, ҳайвонҳо декапитатсия шуданд ва сафедаҳо аз ҷониби blotting ғарбӣ аз рӯи миқдор муайян карда шуданд Тафсили 2.

Таҷриба 9: Таъсири AAV-миёнаравӣ ΔFosB O overpressionpression on Protein (Тасвири 4 A – C)

Ҷарроҳии стереотаксикӣ дар каламушҳои мардони калонсол (8 ҳафта) барои AAV-GFP (протеини сабз) ё AAV-GFP-ΔFosB (сӯзандору)Maze et al., 2010). Барои ҳама ҷарроҳӣ сӯзанҳои ченаки 33 (Хэмилтон) кор карда шуданд, ки дар давоми он 0.5 мкл вируси тозашуда дар баландтарин дар тӯли як давраи 5 дақиқа тӯл кашида шудааст ва пас аз истироҳати иловагии 5 дақ. Ҳама масофаҳо нисбат ба Брегма чен карда мешаванд: 10 ° кунҷ, AP = + 1.7 мм, Lat = 2.5 мм, DV = −6.7 мм. 14 рӯз пас аз ҷарроҳӣ, ба ҳайвонот як камераи як IP сӯзандоруи 10 мг / кг кокаин дар камераҳои назоратии локомотивҳо барои арзёбии таъсироти рафтории vereFosB изтироб дода мешавад. 24 соат пас аз ин тазриқи ниҳоӣ, каламушҳо мутаносибан декапитапсия карда шуданд Тафсили 2, ва microdissection бофтаи таҳти роҳнамоии флуоресцентсияи микроскопӣ барои гирифтани бофтаи GFP-мусбати NAc гузаронида шуд. Пас аз он blotting ғарбӣ аз рӯи Тафсили 2.

Тасвири 4

ΔFosB барои индуксияи вобаста ба ретсепторҳои D1 вобаста ба CaMKIIα дар қабати NAc ҳам зарур ва ҳам кофӣ аст

Таҷриба 10: Таъсири аз ҳад зиёди фишори AAV-миёнаравӣ ба экспрессияи протеинҳои кокаин вобастаТасвири 4 D –F)

Тазриби стереотаксионии AAV-GFP ё AAV-GFP-unJDD мувофиқи Тафсили 8. 14 рӯз пас аз ҷарроҳӣ, ҳайвонот дар 10 мг / кг кокаин ё автомобили шӯршуда IP дар як рӯз як маротиба дар ҳафт рӯз дар камераҳои сабти локомотив ворид карда шуданд. Ҷавобҳои локомотив ба як сӯзандоруи кокаин (5 мг / кг IP) ё шӯр сабт шуданд. 24 соат пас аз ин тазриқи ниҳоӣ, каламушҳо декапаптизатсия карда шуданд, матоъ ҷамъоварӣ карда шуд ва блоки ғарбӣ тавре, ки дар Тафсили 9.

Озмоиш 11: Дар Витро Таҳлили протеини Kinase (Тасвири 5A –D)

Рекомбинант CaMKIIα ва ΔFosB аз ҳуҷайраҳои ҳашарот тоза карда шуданд (Brickey et al., 1990; Jorissen et al., 2007) ва таҳлили киназаҳои сафедаҳо гузаронида шуданд (Colbran, 1993), тавре ки қаблан тавсиф карда шуд. Хулоса, CaMKII дар болои ях бо 2.5 mµM (ё консентратсияи зикршуда) -и ΔFosB, 1 mM Ca ҷойгир буд²⁺, 40 mM Mg²⁺, 15 µM ​​sakinodulin ва 200 mM HEPES pH 7.5. Фосфоризатсия бо илова кардани 200 µM ​​ATP бо ва ё бе without оғоз шудааст.³²P] ATP ва иҷозат дод, ки 10 дақиқаро дар ҳарорати хонагӣ идома диҳад (Расми 5A & B.) ё 2 мин бар ях (Расми 5C & D). Маҳсулот бо роҳи blotting ғарбӣ ҳал карда шуд ((Расми 5A & B.) ё тавассути ҳисобкунии автоматограф ва ҳисобкунии сцинтиллятҳо (расми B – D).

Тасвири 5

ΔFosB зеризаминии қавӣ барои CaMKIIα аст

Озмоиш 12: Муайянкунии Ser27 ΔFosBНамунаи 5E)

Дар витр таҳлили киназҳо аз рӯи анҷом дода шуданд Тафсили 11, сафедаҳоро бо SDS-PAGE ҷудо карда, тасмаҳои мувофиқ ба ΔFosB бурида шуданд ва ба спектрометрияи массаи тандем гирифтанд. Вазифаҳои м / z-и қисмҳои дахлдори ион дар ҳама панелҳо дар болои қуллаҳои ион нишон дода шудаанд. Аз сабаби маҳдудияти ҷой на ҳама ионҳои порсӣ нишон дода шудаанд. Одатан, матн барои тамғакоғазҳои ион фрагмент бо ранги сиёҳ ранг карда мешаванд, ба шарте ки онҳо бевосита дар бораи мавҷудияти ҷойҳои фосфоризатсия тасдиқ ё тасдиқ кунанд, дар ин ҳолат онҳо бо ранги сурх қайд карда мешаванд. Далелҳо барои қисмҳои тақсимоти сутунмӯҳраҳо дар хати фосилавии фосфопептид бо макони муайяншудаи пасмондаи фосфоризатсия бо ранги сурх бо як нишонаи ҳарфи аминокислотаҳо нишон дода шудаанд. Тавсифи рақамии ионҳои тақсимшудаи мушоҳидашуда низ дар пайдарпаи пептидҳо ҳамчун b ва y ионҳо ишора карда мешавад. Дар болои ҳар як спектри массаи фрагмент омилҳои масштаб барои бахшҳои меҳвари m / z барои нишон додани ионҳои шиддатнокии камтар аз он нишон дода шудаанд. Ионҳои фрагментӣ, ки дар панели H нишон дода шудааст, мавҷудияти изоформ Ser27-ро тасдиқ мекунанд, аммо дар дохили омехтаи дигар изофотҳои фосфоритшуда дар сайтҳои Ser28, Ser31, Ser34 ва Thr37. Мавҷудияти ионҳои pa5, pa5-P, pb5 ва pb5-P фосфориатсияи боқимондаи Ser27-ро ба таври возеҳ тасдиқ мекунанд.

Озмоиш 13: Миқдори муайян кардани фосфоризатсияи Ser27 (Расми 5F)

Пептидҳои стандартӣ тарҳрезии шаклҳои фосфо ва ғайри-фосфои Ser27 osFosB буданд. Пас аз синтез ва тозакунӣ, ҳар як пептиди "вазнин" дар як буфери 50 / 50 ацетонитрил / об гудохта шуд ва барои таҳлили аминокислотаҳо барои муайян кардани консентратсияи мутлақ дар саҳни синтетикии пептид фиристода шуд. Пас аз он ҳар як пептиди "вазнин" бевосита ба 4000 QTRAP спектрометр (MS) ворид карда шуд, то энергияи бархӯрди беҳтар барои тақсимоти MS / MS ва гузариши аз ду то чор MRM муайян карда шавад. Пас аз он, пептидҳои "вазнин" -и вазнин ба LCMS дар 4000 QTRAP барои таъмини ҷудошавии пептидҳо дучор шуданд. Асбоб бо усули сетарафаи секарата, бо Q1 дар арзиши пешакии мушаххас m / z насб шудааст (Q1 скан нест) ва Q3 ба қимати мушаххаси m / z, ки ба як пораи мушаххаси он пептид мувофиқанд, насб карда шуд. Дар ҳолати MRM, як қатор аксуламалҳои ягона (гузариши пешакӣ / фрагментҳои ионҳои фрагмент, ки дар он энергияи бархӯрд барои беҳтар кардани шиддатнокии ионҳои фрагментҳо танзим шудааст) пайдарпай чен карда шуданд ва давр (маъмулан 1-2 сек) дар тӯли давр зада шуд тамоми вақти ҷудошавии HPLC. Гузариши MRM аз спектрҳои MS / MS аз пептидҳои мавҷуда муайян карда шуданд. Пас аз он, ду гузариши як пептид, ки ба ionҳои поршении шиддатнокиашон баланд мувофиқат мекунанд, интихоб карда шуданд ва энергияи бархӯрд бо мақсади баланд бардоштани қобилияти сигналии гузариши MRM бо истифодаи нармафзори автоматизатсия беҳтар карда шуд. Қуллаҳои пептидҳои стандартӣ ва намунаҳои osFosB, ки ба CaMKII дучор шудаанд ё ба назорат гирифта шудаанд, пас барои муайян кардани фаровонии мутлақи ҳар пептид дар реаксия муқоиса карда шуданд. Таҳлили маълумот дар бораи маълумоти LC-MRM бо истифодаи барномаи AB Multiquant 1.1 анҷом дода мешавад.

Таҷриба 14: Индуксияи ΔFosB дар CaMKII мушҳои шадид (Расми 5G & H)

Mice transgenic overpresspressing T286D CaMKII (Мэйфорд ва дигарон, 1996; Kourrich et al., 2012) ва литмитҳои навъи ваҳшӣ ҳангоми набудани доксициклин ба вуҷуд омадаанд, то ифодаи трансгенҳоро имконпазир кунанд. Барои мушҳои калонсолон 20 мг / кг кокаин ё IP шӯршуда дар як рӯз дар як маротиба дар 14 рӯз карда мешуд. 24 соат пас аз тазриқи ниҳоӣ, ҳайвонҳо декапитатсия шуданд ва иммуногистохимия ва миқдории ифодаи ΔFosB гузаронида шуданд Тафсили 4.

Таҷриба 15: Таъсири HSV-миёнаравӣ vereFBB Аз ҳадди фишороварӣ ва монеаи CaMKII ба Spine NAc Dendritic (Тасвири 6A –E)

Мушҳои мардони калонсол (ҳафтаи 8) ба таври ғайримуқаррарӣ дар NAc бо HSV-GFP, HSV-GFP-otFosB ворид карда шуданд (Olausson et al., 2006), HSV-GFPAC3I ё HSV-GFPAC3I-ΔFosB. Дар ин конструксияҳо AC3I, пептиди асоси CaMKII ба фаъолияти C-терминалҳои GFP пайваст карда мешавад. GFPAC3I аз ҷониби PCR бо истифода аз pMM400-вектори дорои Шаблон ҳамчун GFPAC3I ҳамчун қолаб бо дастурҳои зерин клон карда шуд: GFP-AC3I-F: 5 'CC GCTAGC GCCGCCACC ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGT XT; GFP-AC3I-R: 3 'CC TCCGGA TTACAGGCAGTCCACGGCCT 5' (clampBspEIstop). Маҳсулоти натиҷаи PCR ба векторҳои p3 + ва p1005 + -Δ FosB бо истифода аз сайтҳои NheI ва BspEI ворид карда шуданд. Сохтмон бо тартиби навбат тасдиқ карда шуд. Координатаҳои стереотаксикӣ инҳо буданд: 1005 ° кунҷ, AP = + 10 мм, Lat = + 1.6 мм, DV = −1.5 мм (Barrot et al. 4.4). Тақсимбандӣ ва тақсимоти майна мувофиқи он гузаронида шуд Тафсили 4.

Таҳлили сутунмӯҳраам тавре, ки тавсиф шудааст, анҷом дода шудааст (Кристофел ва дигарон, 2011). Хулоса, сегментҳои дендритикӣ 50-150 мкм аз Сома аз ҳуҷайраҳои сироятшудаи HSV, ки GFP-ро ифода мекунанд, ба таври тасодуфӣ интихоб карда шуданд. Тасвирҳо дар LSM 710 (Карл Зейс) барои таҳлили морфологӣ бо истифодаи NeuronStudio бо алгоритми рентгенӣ ба даст оварда шуданд. NeuronStudio spinesро ҳамчун лоғар, занбӯруғ ва ё ғусса тасниф мекунад, ки бар асоси арзишҳои зерин таносуб дорад: (1) таносуби ҷанба, (2) таносуби гардан ва диаметри сар (3). Пайкони гарданро ҳамчун лоғар ё занбӯр метавон тасниф кард ва онҳое, ки гардани он назаррас нестанд, ҳамчун ғубор гурӯҳбандӣ карда мешаванд. Майдончаҳои гардан ба мисли диаметри сар ҳамчун лоғар ё занбӯр нишон дода мешаванд.

Тасвири 6

Блокада шудани фаъолияти CaMKII оқибатҳои морфологӣ ва рафтории osFosB дар NAc-ро пешгирӣ мекунад

Таҷриба 16: Таъсири HSV-миёнаравӣ ΔFBB Аз ҳадди фишороварӣ ва монеаи CaMKII ба аксуламали кокаин (Расми 6F)

Мушҳои мард ба калонсолон мутобиқи вирус бо сӯзандору гузаронида шуданд Тафсили 15, ва вокунишҳои локомотив ба тазриқи як 5 мг / кг кокаин аз рӯи он чен карда шуд Тафсили 9. Маълумот дар бораи локомотив дар шакли шикастани чӯб дар тӯли 30 дақиқа пас аз ворид намудани кокаин ифода карда мешавад.

Маълумоти Иловагӣ

Ҳайвонот манзил

Каламушҳои мардонаи Спраги Доули (250 – 275 г; Чарлз Ривер Лаборатория) ҷуфт-хонагӣ буданд. Мушҳои мардонаи ҳаштҳафтаинаи C57BL / 6J (Лабораторияи Ҷексон) бо ҳадди аксар панҷ ҳайвон дар як қафас ҷойгир карда шуданд. Ҳайвонот дар давоми ≥1 ҳафта қабл аз амалиёти таҷрибавӣ ва дар утоқҳои таҳти назорати иқлим ҷойгир карда шуданд (23 – 25 ° C) дар 12 соат / даври торик (чароғҳои дар 7: 00 AM) бо дастрасӣ ба хӯрок ва об Озодӣ ". Таҷрибаҳо мутобиқи дастурҳои Ҷамъияти неврологӣ ва кумитаи институтсионалии нигоҳубин ва истифодаи ҳайвонот (IACUC) дар кӯҳи Синай гузаронида шуданд.

маводи мухаддир

Маводи мухаддир IP ворид карда шуда, дар шӯрии стерилизатсияшуда, аз ҷумла кокаин (5-20 мг / кг дар як 10 мкл барои мушҳо, барои 1 мл барои каламушҳо, NIDA) ва SCH 23390 ё гидрохлоридаи этиклоприд (0.5 мг / кг ба 1 мл, Tocris) . Барои ҷарроҳии стереотаксионӣ, мушҳо бо «коктейл» -и кетамин (100 мг / кг) ва ксилазин (10 мг / кг) (Генри Шейн) дар шӯрии хушкида анестезонида шуданд.

Антибиотикҳо

CaMKIIα (ҳамагӣ): 05 –532, 1: 5,000

CaMKII фосфо-Thr286: Promega V111A, 1: 1,000

ΔFosB (ҳамагӣ): Аломати ҳуҷайра 5G4, 1: 250

ΔFosB phospho-Ser27: Фосфосолютсияҳо, 1: 500

GluA1 (ҳамагӣ): Abcam, Ab31232, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser831: Миллипор N453, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser845: Химик Ab5849, 1: 2,000

GluA2: Милипор 07 – 598, 1: 2,000

NR2A: Сигма HPA004692, 1: 2,500

NR2B: Милипор Ab1557P, 1: 1,000

Таҳлилҳои оморӣ

Ҳама таҳлилҳои оморӣ бо истифода аз бастаи нармафзори Prism 6 (GraphPad) гузаронида шуданд. Тестҳои тестии донишҷӯён барои ҳама муқоисаи ҷуфтӣ (дар Натиҷаҳо нишон дода шудаанд, арзиши t дода шудааст) ва як роҳи ANOVA-ҳо барои ҳама муқоисаҳои сершумор истифода бурда шудаанд (дар боби натиҷаҳо, ки арзиши F нишон дода шудааст) истифода шудааст.

Гузаштан ба:

Натиҷаи

Кокаини музмини CaMKII-ро дар NAc Shell бармеангезад

Бисёр таҳқиқотҳо нишон доданд, ки MSNs дар ниҳонӣ ва NAc дорои аксуламалҳои гуногуни биохимиявӣ ва физиологӣ ба таъсири доимии мухаддироти сӯиистифода мебошанд (Куррих ва Томас, 2009; Лоэт ва дигарон, 2010) ва ин ду минтақа ба таври фарқкунанда рафторҳои ҷустуҷӯи нашъамандиро танзим мекунанд (Ito et al., 2004). Барои муайян кардани таъсири фарқкунандаи кокаин ба таркиби сафедаҳои қабати NAc ва ғ. аслӣ, мо якплекси изобарикии Tagobar (iTRAQ) ва спектроскопияи массаи тандемро (MS / MS) истифода бурдем. Каламушҳои мардони калонсол барои IP бо кокаин (20 мг / кг) ё намак рӯзона дар тӯли 7 сӯзандору карда шуданд; 24 соат пас аз тазриқи охирин, қабати NAc ва аслӣ microdissected шуданд (Намунаи 1A) ва дурахши яхкардашуда. Сафедаҳо дар ин намунаҳо баъдан бо истифодаи iTRAQ миқдорӣ карда шуданд. Ҳама чор изофаи CaMKII пас аз коркарди кокаин, ки ба қабати NAc дар муқоиса бо ядро ​​хосанд, афзоиши назаррасро нишон доданд. Якчанд фосфатазаҳои сафеда, аз ҷумла зеризаминҳои каталитики ва PP1 ва PP2A, ки қаблан бо субстратҳои гуногуни CaMKII дар системаҳои дигар пайваст буданд (Colbran, 2004), аз паи як намунаи монанд. Ин бозёфтҳо далелҳои нав ва беғаразонаеро пешкаш карданд, ки роҳи сигнализатсияи CaMKII аз ҷониби кокаин дар NAc ба таври мушаххас танзим карда мешавад.

Барои тасдиқи миқдори бештари ин бозёфтҳо, мо ба каламушҳо тавре, ки дар боло бо кокаин (бо вояи гуногун) ё шӯр ва чен кардани вокунишҳои локомотив ба кокаин (5 мг / кг) ё вояи шӯршавӣ чен карда шуд. Гӯшдории такрорӣ ба 10 мг / кг кокаин ба одати ҳассосияти локомотив оварда расонд (Намунаи 1B). Тадқиқотҳои минбаъда бо истифодаи ин режими возеҳӣ бо истифодаи blotting ғарбӣ нишон доданд, ки кокаини такрорӣ дар қабати NAc 24 соат пас аз тазриқи ниҳоӣ кокаинро ба таври интихобӣ ворид мекунад (Расми 1C ва D; p = 0.0019; F = 7.943; df = 29). Ғайр аз он, фосфоризатсияи каноникии CaMKII зербранти Ser831 аз рецептори GPAA1 аз AMPA дар қабати NAc ба таври назаррас афзоиш ёфт ва аслӣ (p = 0.0261; F = 4.208; df = 28), дар ҳоле ки CaMKIIα Thr286 худкори бутофосфоризатсия дошт тамоюли назаррас ба индуксия дар ҷилдиНамунаи 1D). Якчанд ретсепторҳои глутамати дигар бетаъсир буданд. Дар муқоиса бо ин ченакҳои CaMKII, ҳамон намунаҳои бофтаи индукси ΔFosB дар ҳарду (p = 0.0260; F = 4.189; df = 29) ва аслӣ (p = 0.0350; F = 3.807; df = 29) -и NAc нишон дода шуданд (Расми 1C ва D), бо хулосаҳои пешина мувофиқат мекунад (Perrotti et al., 2008).

Азбаски якчанд таҳқиқоти пешакии танзими кокаинии ретсепторҳои AMPA таҳлили ҳайвонот пас аз ~ 14 рӯзи хуруҷ аз кокаини музмин (нигаред ба муҳокима), мо ин таҳлилҳои биохимиявиро дар айни замон такрор кардем. Мо дарёфтем, ки 14 пас аз тазриқи ниҳоии кокаин, osFosB дар NAc баланд мешавад (p = 0.0288; F = 4.258; df = 22), дар ҳоле ки на CaMKII ва на фосфоризатсияи GluA1 Ser831 зиёд намешаванд (Намунаи 1E). Бо вуҷуди ин, 1 соат пас аз як 10 мг / кг вояи кокаин, сатҳҳои умумии CaMKII (p = 0.0330; F = 3.947; df = 26) ва GluA1 Ser831 (p = 0.0213; F = 4.509; df = 27) фосфоризатсия ба дараҷае шабеҳанд, ки баъд аз экспрессияи музмин музминии кокаин пайдо шуданд (Намунаи 1E). Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки нейронҳои қабати NAc дар тӯли муддати тӯлонӣ қатъ шуда, шояд тавассути тавассути премераи гении CaMKII пешниҳод карда шаванд (ниг. Муҳокима). Ғайр аз ин, далели он ки индуксияи "FosB" нисбат ба индуксияи CaMKII мавҷуд аст, аз мавҷудияти механизмҳои иловагӣ шаҳодат медиҳад, ки дар асоси хроматин ва ё дигар усулҳо дар танзими CaMKII, ки дар муҳокима оварда шудааст, "фишор" доранд.

Барои таҳкими минбаъдаи ин мушоҳидаҳо, мо моделҳои худидоракунии кокаинро, ки истеъмоли ихтиёрии маводи мухаддирро дар бар мегирад, омӯхтем. Ба каламушҳои мардони калонсол дастрасии кӯтоҳ ё дароз ба кокаин дода шуд; чуноне ки интизор мерафт (Аҳмад ва Koob, 1998), танҳо шартҳои дастрасии дарозмуддат боиси шиддат ёфтани худидоракунии маводи мухаддир гардиданд (Намунаи 2A). OsФосБ ба дараҷае ба он оварда шуд ва ғ. дастрасии кӯтоҳ ба кокаин дар ҳарду ниҳонӣ NAc (p = 0.0011; F = 11.12; df = 17) ва аслӣ (p = 0.0004; F = 13.86; df = 17). Баръакси ин, CaMKIIα дар қабати NAc танҳо бо дастрасии дароз ба кокаин ворид карда шуд (Расми 2B ва C; p = 0.0236; F = 4.957; df = 16). Муқоиса кардани истеъмоли миёнаи шабонарӯзии кокаин дар байни ҳайвоноти кӯтоҳмуддат (~ 12 мг / кг IV), ҳайвоноти ба дастрасӣ дастрас (~ 70 мг / кг IV) ва ҳайвонот дар таҷрибаҳо (10 мг / кг) ва пурсед, ки чаро охирин ба индуксияи мустаҳкамии ΔFB ва CaMKII мусоидат менамояд, дар ҳоле ки дастрасии кӯтоҳ вуҷуд надорад. Эҳтимол, ин ихтилоф аз фарқиятҳо дар сатҳи баландтарини кокаин (кокаин, ки таҳти идораи таҷриба ҳамчун як bolus дода мешавад, дар ҳоле ки кокаини худидоракунанда тавассути дозаҳои зиёди IV интиқол дода мешавад) ё аз фарқияти дарозшавии мухаддирот (7 рӯз барои таҷрибаомӯз маъмурият, 19 рӯз барои худидоракунӣ).

Сарфи назар аз адабиёти калон дар бораи onFosB ва CaMKII дар амали кокаин, омӯзиши ин сафедаҳо дар истифодабарандагони кокаин вуҷуд надорад. Дар ин ҷо мо далелҳои аввалини онро пешниҳод менамоем, ки сатҳҳои ΔFosB (p = 0.0316; t = 1.921; df = 34) ва CaMKII (p = 0.0444; t = 1.755; df = 32) дар NAc аз одамҳо вобаста ба кокаин афзудаанд (Намунаи 2D, Љадвали 1). Ин маълумотҳо шаҳодат медиҳанд, ки ташхиси мо дар ΔFosB ва CaMKII ба кокаин дар хояндаҳои NAc бемории вобастагии кокаин аз ҷиҳати клиникӣ мебошад.

Љадвали 1

Тавсифи намунаҳо аз шахсони вобастаи кокаин ва гурӯҳи мувофиқкардашуда

OsФосБ транскрипцияи CaMKII -ро ба таври интихобӣ дар D1-навъи MSNs аз NAc Shell танзим мекунад

Муайян кардани он, ки ҳам CaMKII ва ҳам osFosB аз кокаин дар хояндаҳои NAc ба танзим дароварда шудаанд, муайян намуд, ки оё osFosB метавонад транскрипсияи гении CaMKII-ро танзим кунад. Мо қаблан гузориш дода будем, ки CaMKIIα ҳамчун як ҳадафи имконпазир барои forFosB дар таҳлили холисона аз NAc (McClung ва Nestler, 2003), аммо ин бозёфт дар он таҳқиқот дигар тасдиқ нашудааст. Мо аввал ChIP (qChIP-ChIP ва пас аз миқдори PCR) муайян кардем, ки оё osFosB ба пешбарандаи ген CaMKIIα дар NAc каламушҳои мард калонсол алоқаманд аст ва ба таври ҳайратангез мушоҳида кардем, ки ин ҳосилкунӣ тавассути маъмурияти музминии кокаин дар ҷилд ( p = 0.0133; t = 2.901; df = 12), аммо аслӣ не, зершумор (Намунаи 3A). Барои фаҳмидани механизмҳои марбут ба ин фарқияти хоси субрегионалӣ дар ΔFosB барои промоутер CaMKIIα, мо qChIP -ро барои тавсиф кардани ҳолати тағирёбии гистон дар ин минтақаи геномӣ истифода бурдем. Таҳқиқоти қаблӣ нишон доданд, ки индуксияи кокси кокси ацетилатсияи H3 дар таблиғи CaMKIIα дар маҷмӯъ NAc муш (В. ва дигарон, 2010). Баръакси ин, мо дарёфтем, ки кокаин дар адвокатураи CaMKIIα ба таври интихобӣ дар ядрои NAc кам мешавадНамунаи 3B; p = 0.0213; t = 2.726; df = 10), бе ягон тағйирот дар ҷилд, бо тағиротҳои хроматинии махсуси зергрегионӣ, ки ба замми ΔFosB мувофиқанд. qChIP барои нишонаи репрессивӣ, лизини диметилдори X3 9 (H3K9me2), тамоюли коҳишро ҳам дар ҷадвалҳо ва ҳам зеризаминҳои асосӣ муайян кард (Намунаи 3C).

Барои муайян кардани он, ки ΔFosB транскрипсияи CaMKIIα -ро танзим мекунад дар вирус, мо ду хати битрансгении мушро истифода кардем, ки онҳо ducFosB-ро ба таври аз ҳад зиёд дар D1 ва ғ. MSX-ҳои навъи D2 ба тарзи маъмурияти доксициклин дар оби нӯшокӣ (Chen ва дигарон, 1998; Келз ва дигар, 1999; Werme et al., 2002). MFosB танҳо аз D1 навъи MSNs мушҳои мардони калонсол ба дараҷаи CaMKIIα mRNA дар NAc (p = 0.0337; t = 1.996; df = 13) зиёд шуданд, таъсире, ки дар мушкҳои аз ҳад зиёд фишурдани iceFosB бештар дар D2-type (DXNUMX) ба назар мерасадНамунаи 3D). Афзоиши CaMKIIα mRNA, ки бо ифодаи ΔFosB дар намуди MSNs D1 оварда шудааст, бо афзоиши яквақтаи сафедаи CaMKIIα дар ҳабҳои NAc (p = 0.0030; t = 3.578; df = 14) ва аслӣ (p = 0.0392; t) ҳамроҳӣ карда шуд. = 2.275; df = 14; Суратҳои 3E ва F). Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки ΔFosB қодир аст, ки изҳори генҳои CaMKIIα -ро дар намуди D1 навъи MSN дар ҳарду минтақа гузаронад, ҳарчанд Тасвири 3B пешниҳод менамояд, ки тағирёбии хроматин бо миёнаравии кокаин дар таблиғи CaMKIIα (масалан, камшавии ацетилизатсия) ба preventFosB аз нав ба танзим даровардани CaMKII дар субрегионали аслӣ пас аз кокаин пешгирӣ мекунад.

Азбаски маълумоти муши трансгеникии мо нишон дод, ки tionFosB индуксияи генофонди CaMKII ба MSN-ҳои D1 дар NAc хос аст, мо минбаъд муайян кардем, ки оё ба танзим даровардани кокаин вобаста ба CaMKII фаъолсозии рецепторҳои D1-ро талаб мекунад. Каламушҳои мардони калонсол мисли пештара кокаин ё намакини музмин идора карда мешуданд, аммо 30 дақиқа пеш аз ҳар як тазриқ, каламушҳо дар гурӯҳи кокаин ба IP тазриқи намак, D1 antagonist SCH 23390 (0.5 мг / кг) ё D2 antagonist etaglopride (0.5 мг / кг). 24 соат пас аз тазриқи охирини кокаин ҳайвонот таҳлил карда шуданд. Блотинги Ғарбӣ нишон дод, ки D1, аммо на D2, антагонист афзоиши кокаинро дар ΔFosB комилан бастааст (p <0.0001; F = 18.96; df = 18), тавре ки қаблан гузориш шуда буд (Nye et al., 1995), инчунин дар CaMKII (p = 0.0005; F = 10.99; df = 18; Расми 3G ва H). Ин маълумотҳо фарзияро дастгирӣ мекунанд, ки кокаин афзоиши миёнаравии генҳои CaMKII-ро бо миёнаравӣ ба мушаххас дар D1 навъи MSNs –и қабати NAc ҷалб мекунад. Дар таҳқиқоти оянда нишон додани таъсири мушаххаси ин навъи кокаин ба зуҳури CaMKII дар ин минтақаи майна муҳим аст, ки дар таҳқиқоти оянда муҳим аст.

ΔФосБ ҳам зарурӣ ва ҳам барои тавлиди кокаини CaMKII дар NAc Shell мебошад

Барои пурра кардани истифодаи мушҳои битрансгенӣ, мо минбаъд нақши ΔFosB дар миёнаравӣ кардани индуксияи кокаин аз CaMKIIα тавассути интиқоли генҳои вирусӣ бо миёнаравӣ дар каламушҳо омӯхтем. Мо ба таври дутарафа зарраҳои вирусии бо адено алоқаманд (AAV) -ро ба қабати NAc-и каламушҳои мардони калонсол ворид кардем (ки дар онҷо онҳо метавонад интихобан ҳадафнок бошанд) то ба oververexpress ΔFosB ва GFP ё GFP танҳо. Сипас ба ҳайвонот як тазриқи IP ба 10 мг / кг кокаин дода шуд. OsFosB / GFP ҳайвонотро аз ҳад зиёд фишурда мекунад, дар муқоиса бо ҳайвоноти танҳо GFP фишори баландтари локомотив нишон дода шудааст (Намунаи 4A). 24 соат пас аз ворид намудани ягонаи кокаин, бофтаҳои GFP-мусбати NAc аз ин ҳайвонҳо тавассути диссидсия дар зери манбаи нури флюоросентӣ хориҷ карда шуданд. Паҳн шудани ғарби ин бофтаи (Расми 4B ва C) Зиёдшавии ΔFosB ва инчунин афзоиши назарраси сафедаҳои CaMKIIα дар муқоиса бо ҳайвоноти GFP (p = 0.0070; t = 2.894; df = 30), ки ба индуксия бо маъмурияти музминии музмин мушоҳида мешавад, ошкор гардид. Ғайр аз он, CaMKIIα автофосфоризатсия дар Thr286 (нишондиҳандаи фаъолшавии фермент) бо ΔFosB изофабори (p = 0.0330; t = 2.243; df = 28), инчунин фосфоризатсияи субстрати CaMKII, Ser831 аз GluA1 (pf XBNXX; 0.0540; df = 2.012), боз тақлидкунандаи амалҳои кокаини музмин (Расми 1C ва D). Т.дар якҷоягӣ, ин маълумотҳо далели минбаъдаи гувоҳи онанд, ки ифодаи osFosB дар қабати NAc барои ҳассосияти локомотив ба кокаин ва барои индуксия ва фаъолкунии ин минтақа кофӣ аст.

Мо усули монандеро истифода бурдем, то муайян кунем, ки osFosB барои индуксияи миёнаравии кокаин дар қабати NAc низ лозим аст. AAV барои аз ҳад зиёд фишурдани протеини ихтисоршудаи JunD, ки ",JDD" ном дорад, истифода мешавад, ки танзимгари манфии фаъолкунии транскриптсияи ΔFosB мебошад (Winstanley ва дигарон, 2007) плюс танҳо GFP ё GFP. Ду ҳафта пас, вақте ки экспрессияи трансгендер ҳадди аксар аст, ба ҳайвонот дар давоми 10 рӯз кокаин (7 мг / кг) дода шуд ва барои посухҳои локомотив ба мушкили кокаин (5 мг / кг) 24 соат пас аз сӯзандории охирини музмин санҷида шуд (Намунаи 4D). ΔунД аз ҳад зиёд фишороварӣ ҳассосияти локомотивро ба кокаин пешгирӣ кард ва инчунин дар инсултсия ва фаъолсозии CaMKIIα дар қабати NAc пешгирӣ кард (Расми 4E ва F; p = 0.0437; F = 2.997; умумии df = 38), ки ба он ишора мекунад, ки фаъолияти транскриптсияи ΔFosB барои индуксияи миёнаравии кокаин аз CaMKIIα дар ин зергурӯҳ зарур аст. Ҷолиб аст, ки мо дарёфтем, ки ΔJD сатҳи ΔFosB-ро ҳам дар шароити шӯр ва ҳам кокаин (p = 0.0004; F = 8.110; df = 35) коҳиш дода, имконияти навро боло бурдааст, ки ΔFosB аз фаъолияти AP-1 барои сатҳи ифодаҳои худ вобаста аст.

CaMKII фосфоритҳои ΔFosB дар Ser27

Бо истифода аз дар vitro таҳлили киназаи сафедаҳо, мо муайян кардем, ки тозашудаи ΔFosB субстрати мустаҳкам барои CaMKIIα мебошад. Исоб аз Ӯ₆-ΔФосБ бо CaMKIIα ва ATP боиси тезу тунд гардидани ҳаракатнокии электрофоретикии ΔFosB (Намунаи 5A); якчанд гурӯҳҳои натиҷа ҷойҳои сершумори фосфоризатсияро пешниҳод карданд. Монанд дар vitro киназ бо истифодаи [γ-³²P] ATP воридшавии фосфати радиабелӣ ба бандҳои тағирёбандаро нишон дод (Намунаи 5B), фосфоризатсияи бевоситаи сафедаро нишон медиҳад. Мо як антиденои мушаххаси фосфо ба Ser27-и қаблан ΔFosB тавлид кардем (Ulery et al., 2006). Гарчанде ки ин антитела алайҳи экстрактҳои мағзи сар, ки дорои Ser27-phosphorylated ΔFosB мебошад, маълумоте намедиҳад (маълумот нишон дода нашудааст), мо тавонистем, ки дар дар vitro таҳлили киназ бо истифодаи CaMKII (Намунаи 5B). Таҳлили кинетикии фосфорияи CaMKII аз osFosB нишон медиҳад, ки он барои киназ як зерқимати қавӣ аст (Намунаи 5C), бо айби К_M аз 5.7 ± 2.0µM ва K_CAT аз 2.3 ± 0.3min^-1. Ин натиҷаҳоро бо бисёр хуб тавсиф кардан қиёс кардан мумкин аст дар вирус зеризаминии CaMKII (Colbran ва Brown, 2004). Ғайр аз он, мо муайян кардем, ки фосфоритҳои CaMKII ΔFosB бо стехиометрияи 2.27 ± 0.07 mol / mol (Намунаи 5D) ишора мекунад, ки дар ҳудуди ӯ ҳадди аққал се макони фосфоризатсия CaMKII мавҷуданд₆Протеини ФосБ, бо мувофиқаи Намунаи 5A.

Барои таҳқиқи ҷойҳои ҷудогонаи фосфоризатсия, мо MS-и намунаҳои аз намунаҳои мо таҳияшударо ба кор бурдем дар vitro киназ кушиш менамояд. Намунаи 5E ΔFosB фосфоризатсияро дар Ser27, ки қаблан тавсиф шуда буд ва дар якчанд сайтҳои иловагӣ нишон медиҳад (маълумот нишон дода намешавад). Бо назардошти тавсифи пешакии функсияи Ser27, мо дар ин сайт тавлид кардем, ки пептидҳои синтетикии нишондодашударо ба ҳолати фосфо ва ғайрифосфофии Ser27 тақсим карда, миқдори маълуми ин пептидҳоро ҳамчун стандарт дар таҳлили MRM-и osFosB пеш ва баъд аз он истифода бурданд. дар vitro фосфоризатсия аз ҷониби CaMKII. Миқдори минбаъда (Расми 5F) тасдиқ мекунад, ки Ser27 зеризаминии қавӣ барои CaMKII аст. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки дар байни пасмондаҳои бисёр фосфордор дар дохили ΔFosB, Ser27 як субстрат барои махсусан CaMKII аст.

CaMKII миёнаравии кокаини ҷамъшавии ofFosB дар Shell NAc

Азбаски CaMKII метавонад фосфорилат кунад osFosB дар vitro дар сайте, ки устувории онро ба таври назаррас афзоиш медиҳад дар vitro ва дар вирус (Ulery et al., 2006; Ulery-Reynolds et al., 2009), мо муайян кардем, ки оё фаъолияти CaMKII сатҳи osFosB дар NAc -ро назорат мекунад ё не дар вирус. Барои вокуниш ба ин савол, мо аввал хатти мушро аз фишори мутанти мустақили калтсионии CaMKIIα (T286D) дар минтақаҳои сершумори майна, аз ҷумла NAc (Мэйфорд ва дигарон, 1996; Kourrich et al., 2012). Мо дар давоми 20 рӯз як маротиба мутаносибан мардони калонсол ва ба литтермитҳои ваҳшӣ бо 14 мг / кг кокаин ё намак ворид кардем ва сипас як рӯз пас аз тазриқи ниҳоӣ ҳайвонотро таҳлил кардем. Мо дарёфтем, ки сатҳҳои базавии ΔFosB дар ҳайвоноти мутант дар қабати NAc (p = 0.0001; F = 9.207; df = 37) зиёд шуданд, аммо на (Расми 5G ва H). Тааҷҷубовар аст, ки индуксияи ба кокаин вобаста ба osFosB дар ҳайвонҳои мутант ҳам дар ниҳонӣ ва ҳам ядрои баста шуда буд ва ин ба он ишора мекунад, ки гарчанде CaMKII метавонад устувории ΔFosB-ро дар қабати NAc танзим кунад, он инчунин метавонад дар болооби ΔFosB дар шоҳроҳҳои кокаин дар ҳарду минтақаҳои NAc ҷойгир шавад. .

Фаъолияти CaMKII барои asticFFB-и ҳамаҷонибаи сохторӣ ва рафтор зарур аст

Индуксияи кокаин ба сутунмӯҳраҳои дендритӣ дар NAc MSNs яке аз мутобиқати беҳтарини мутобиқгардонидашуда тавассути маводи мухаддир дар ин минтақаи мағзи сар аст ва чунин индуксияи сутунмӯҳра бо посухҳои ҳассосшудаи рафторӣ ба маводи мухаддир алоқаманд аст (Робинсон ва Колб, 2004; Russo et al., 2010) ва барои интихобшудаи MSN-ҳои D1 гузориш доданд (Lee et al., 2006). Мо ба қарибӣ нишон додем, ки индуксияи кокаин дар сутунҳои NAc аз ΔFosB ва барномаи транскриптсияи поёни он вобаста аст (Maze et al., 2010). Гарчанде ки адабиёти васеъ дар бораи иштироки CaMKII дар морфологияи сутунмуҳраи сутунмӯҳра ва индуксия дар дигар минтақаҳои мағзи сар ва системаҳои таҷрибавӣ мавҷуданд (Jourdain et al., 2003; Пензес ва дигарон, 2008; Окамото ва дигарон, 2009), нақши он дар ташаккули сутунмӯҳраи NAc MSN омӯхта нашудааст. Аз ин рӯ, мо муайян кардем, ки оё фаъолияти CaMKII барои индуксияи миёнаравии ФосБ-и мушакҳои дендрритӣ бо истифодаи фишори изофаи HSV-и ингибитории CaMKII пептид AC3I ба GFP омехта шудааст ё не, ки ин конструксия қаблан нишон медод, ки фаъолияти CaMKII-ро манъ кунад дар вирус (Zhang et al., 2005; Klug et al., 2012). Оверкспрессияи вирусии ΔFosB дар пӯсти NAc-и мушҳои калонсол афзоиши назарраси зичии сутунмӯҳраи дендритии MSN (p <0.0001; F = 8.558; df = 59; Расми 6A ва B) тавре ки қаблан хабар дода шуда буд (Maze et al., 2010), ва ин афзоиш асосан аз намудҳои борик (p = 0.0027; F = 5.319; df = 59) ва боқимонда (p = 0.0378; F = 2.988; df = 59) намудҳои сутунмӯҳраам ба амал омадаанд (ҳарду ба ақидаи онҳо яраҳои нокифоя мебошанд) (Тасвири 6C –E). Ягон натиҷа ба нурҳои баркамол ва мушакпарвар ба мушоҳида нарасидааст. Аммо, вақте ки GFP-AC3I фишурда шуд, индуксияи «FosB spines» пурра бекор карда шуд (Тасвири 6A –E) ишора мекунад, ки фаъолияти CaMKII барои tionФосБ индуксияи spine дендритӣ дар қабати NAc лозим аст.

Мо баъдан ҳамон воситаҳои вирусиро истифода бурдем, то муайян кунем, ки оё фаъолияти CaMKII барои таъсири ΔFosB ба ҳассосияти рафторӣ ба кокаин зарур аст. 72 соат пас аз воридкунии вирусӣ ба қабати NAc, ба ҳайвонот як тазриқи якхелаи 5 мг / кг кокаин дода шуд ва фаъолияти локомотивии онҳо сабт карда шуд. Ҳамон тавре ки қаблан бо изофабори барзиёди AAV аз ΔFosB нишон дода шуд (Намунаи 4A), Аз ҳад зиёд фишори изтиробии HSV-и osFosB ҳассосияти локомотивро ба кокаин баланд бардошт (p = 0.0002; F = 8.823; df = 37; Расми 6F). Монанди индуксияи чароғҳои дендритӣ, ҷилавгирӣ аз таъсири CaMKII тавассути коэфрессионсияи GFP-AC3I, баландшавии ҳассосии миёнаравии ФосБ-ро ҳифз кардааст, ки ишора мекунад, ки фаъолияти CaMKII барои тағир додани индуксияҳои ΔFosB дар таъсироти рафтории кокаин зарур аст.

Гузаштан ба:

мубоҳиса

Тадқиқоти мазкур як механизми нав барои интиқоли ғизоро муайян менамояд, ки дар он кокаин ΔFosB дар NAc-ро ба амал меорад, ки транскрипсияи гении CaMKIIα -ро ба таври интихобӣ дар қабати NAc ба танзим медарорад.. Минбаъд CaMKIIα фосфорилатҳо меорад ва ΔFosB-ро ба эътидол оварда, ба зиёдшавии leadingFosB ва индуксияи минбаъдаи CaMKIIα (Расми 6G). Сатҳи афзоишёбии ду сафеда ҳангоми дучоршавӣ ба музмин ба кокаин пас дар роҳҳои муҳим барои аксуламалҳои ҳассосшудаи рафторӣ ба маводи мухаддир мусоидат мекунад. Ин як гипотезаи ҷолиб аст, зеро ҳам osFosB ва CaMKII ҳар як қаблан нишон дода шуда буданд, ки барои аксуламали рафторӣ ба кокаин заруранд. (Пирс ва дигарон, 1998; Peakman et al., 2003), ва мо ин бозёфтро барои ΔFosB дар қабати NAc махсус бо истифодаи усули вирусӣ такрор мекунем (Анҷир 4 ва Ва xNUMX).

Гарчанде ки изофабори трансгенгении "ФосБ дар намуди D1 MSNII метавонад индуксияи CaMKII дар ҳарду NAc ва ядрои ҳайвоноти кокаинро дар заминаи кокаин, ҷамъшавии ΔFosB эндогенӣ, ки дар ҳарду минтақаҳо рух медиҳанд, ба вуҷуд меорад. . Ин фарқият метавонад ба сатҳи баландтари osFosB, ки дар модели битрансгении мо ба амал омадааст, алоқаманд бошад, аммо он инчунин метавонад қобилияти кокаинро барои гуногун кардани промоутер CaMKIIα дар қабати ва ғ. MSNs-и аслӣ барои мусоидат ба ҳатмии ΔFosB дар қаблӣ ё истисно кардани он дар зерқисми охирин. Дар асл, маълумоти ChIP мо, ки deacetylation гистонҳоро бо миёнаравии кокаин дар таблиғи ген генаи CaMKIIα дар ядро ​​NAc ифшо мекунанд, иштироки эҳтимолии механизми хроматинро дастгирӣ мекунанд. Мувофиқи ин фарзия, ΔFFB аз ҳадди фишор дар D1 навъи MSNs тавонист, ки индуксияи CaMKIIα дар ядрои NAc ҳангоми мавҷуд набудани кокаин (Расми 3F) бо ишора ба он, ки мо тағиротҳои фаъоли таблиғгари CaMKIIα вуҷуд доранд, ки ин индуксияро ҳангоми экспрессияи музмини кокаин пешгирӣ мекунанд. Танзими манзараи хроматинӣ дар таблиғи CaMKII инчунин метавонад сабаби онро шарҳ диҳад, ки чаро CaMKII ба миқдори мушкили кокаин дар қабати NAc аз каламушҳои музмини музмини кокаин оварда шудааст (Намунаи 1E), аммо на ҳайвонҳои наркотик (Намунаи 1D). Ин метавонад таъсири эпигенетикии «генҳои пешгирӣ» -и ΔFosB (Робинсон ва Нестлер, 2011), ва мумкин аст як механизми молекулавии инкубатсияи ҳаваси кокаин бошад (Pickens et al., 2011). Аммо, барои он ки ин тағирёбии хроматин ба инкубатсияи ҳавасмандӣ вобаста карда шавад, он бояд бо мурури замон афзоиш меёфт. Муайян кардани ин ҳолат ҷолиб хоҳад буд ва омӯхтани оё генҳои дигар аз ҷониби кокаин «танзими вобастагии ба ФосБ вобаста, тобеи минтақа. Инчунин қайд кардан муҳим аст, ки ҳалқаи пешбурди интиқол, ки мо тавсиф кардем, ба ҷамъшавии беохири CaMKII ё ΔFosB оварда намерасонад.Намунаи 1E); Кушодани "тормоз" -и молекулӣ, ки барои ин масъул аст, ҳадафи муҳими таҳқиқоти оянда аст.

Функсияҳои маълуми ΔFosB ва CaMKII дар якчанд системаҳои таҷрибавӣ ва минтақаҳои мағзи сар дар бисёр сатҳҳо муттаҳид мешаванд (Расми 6F). Ҳарду молекула бо инкишофи сутунмӯҳраи дендритӣ зич алоқаманданд: CaMKII бо citoskeleton actin ҳамкорӣ мекунад (Окамото ва дигарон, 2009), андозаи сари сутунмӯҳро танзим мекунад (Matsuzaki et al., 2004) ва барои зиёдшавии аз ҷониби пластикӣ пайдошуда дар филоподия ва шумораи синапс дар фарҳангҳои буридаи гипотампалии органотипӣ ҳам зарур ва ҳам кофӣ мебошанд (Jourdain et al., 2003), wсалей osFosB барои зарурати ташаккули сутунмӯҳра аз ҷониби кокаин, ки аз ҷониби кокси дендритӣ дар NAc MSNs оварда шудааст, зарур ва кофӣ мебошадMaze et al., 2010). Ғайр аз он, ҳарду молекула бо танзими ретсепторҳои AMPA глутамат алоқаманданд. CaMKII сатҳи умумии зербиноҳои ретсепторҳои AMPA-ро танзим намекунад, балки ворид кардани ресепторҳои AMPA-ро ба синапс табдил медиҳад ва гузариши AMPA-ро тавассути фосфоритатсияи GluA1 дар Ser831 дар нейронҳои иппокампали пирамида дар фарҳанг ва дар вирус (баррасӣ дар (Малинов ва Маленка, 2002; Colbran ва Brown, 2004)). Чунин зиёдшавии қочоқи GluA1 ба синапс низ дар амали музмини кокаин ба амал омадааст ((Буддрау ва Волк, 2005). Ғайр аз он, аксуламали рафторӣ ба фаъолсозии ресепторҳои AMPA дар NAc тавассути overmesspression CaMKIIα дар ҳолати вобаста ба ресептор D1 (Singer et al., 2010). Изофаи дарозмуддати изофаи фишори D1 -и ΔFosB нишон дод, ки транскрипцияи GluA2-ро дар NAc (Келз ва дигар, 1999), ки аксуламали AMPA-ро тавассути миёнаравии GluA1 суст мекунад, дар ҳоле, ки мо дар ин ҷо нишон медиҳем, ки "изофаи фишори кӯтоҳмуддати" ФосБ ва инчунин таъсири кӯтоҳмуддати кокаин ба ин зербахш таъсире надорад (Намунаи 1). Бо вуҷуди ин, мо ба наздикӣ дарёфтем, ки кӯтоҳмуддати "ФосБ аз ҳад зиёд фишороварӣ AMPA аксуламали AMPA -ро дар намуди D1 дар MSNs дар NAc (Grueter et al., 2013). Ин маълумотҳо механизмҳои алоҳидаи муваққатиро нишон медиҳанд, ки метавонанд як қатор вақтҳо аз нейродаптатсия ба кокаинро ташкил диҳанд, ки ҷанбаҳои мухталифи прогрессияи вобастагиро то ҳол дуруст дарк накардаанд. Дар сатҳи рафтор ҳарду CaMKII ва ΔFosB барои ҳассосияти локомотив ба кокаин (ба боло нигаред) талаб карда мешаванд ва ҳарду барои худидоракунии устувори кокаин дар хояндаҳо талаб карда мешаванд (нигаред ба боло).Colby et al., 2003; В. ва дигарон, 2010) бо ишора ба он, ки ин ду сафеда барои ҳамоҳангсозии рафтори кӯтоҳмуддат ва дарозмуддат ба таъсири нашъамандӣ муҳим аст, гарчанде ки он тавассути механизмҳои каме фарқкунанда ҷой дорад. Тахминан, ΔFosB ва CaMKII чунин мутобиқсозии мураккаби рафторро тавассути тағирот дар функсияи NAc синаптит танзим мекунанд, гарчанде ки корҳои зиёдеро барои робитаи мустақими зуҳуроти синаптикӣ бо тағйири рафтор лозим аст.

Холоэнзим CaMKII ҳамзамон бо сафедаҳои мухталифи синапс алоқаманданд (Робисон ва дигарон, 2005), ки барои ба танзим даровардани ҳадафи он ба зичии postynaptic (PSD), падидае пешниҳод шудааст, ки барои пластикии синаптӣ муҳим аст. Хусусан, ҳамкории CaMKII бо зербанди GluN2B рецепторҳои навъи NMDA нишон дода шуд, ки ҳам танзимшавандаи ҳам пластикии синаптӣ ва ҳам омӯзишро нишон медиҳад (Халт ва дигарон, 2012). Дар ҳоле, ки пептиди AC3I домени autoinhibitory CaMKII -ро тақлид мекунад ва ба ҳамин тариқ ферментро каталитикиро аз кор мебарад, инчунин якчанд амали протеин ва протеинҳоро бозмедорад (Strack et al., 2000; Робисон ва дигарон, 2005). Ҳамин тариқ, таъсироти рафторӣ ва морфологии HSV-GFP-AC3I дар ин ҷо метавонанд тавассути коҳиш ёфтани фосфоризатсияи сафедаҳои ҳадафи CaMKII, тағирот дар ҳадафи CaMKII ё тағйири нақши сохтории CaMKII дар синапс рух диҳанд (Лисман ва дигарон, 2002).

Маҳдудияти ҳалқаи пешниҳодшудаи ΔFosB-CaMKII ба қабати NAc аҳамияти махсус дорад, зеро кори охир чанд фарқияти физиологии байни қабати NAc ва ядро ​​дар ҷавоб ба маъмурияти кокаинро нишон дод, мафҳуме, ки аз ҷониби iTRAQ (Ҷадвали S1) тасдиқ карда шудааст. . MSNs дар ҷилдҳои NAc пас аз кокаинҳои музмин, ки дар тӯли ҳафтаҳо нигоҳ дошта мешаванд, депрессияро нишон медиҳанд, дар ҳоле ки MSNs аз ҳамон ҳайвонҳо гузариши муваққатиро нишон медиҳанд (1 –3 рӯз), қобилияти оташфишонӣ афзудааст, ки дар тӯли 2 ҳафта ба сатҳи базалӣ бармегардад (Куррих ва Томас, 2009). Ғайр аз он, сафедаҳои сераптаи синаптӣ дар қабати NAc ба таври гуногун танзим карда мешаванд ва ғ. аслии ҳайвонот, ки ба кокаинҳои музмин дучор шудаанд, аз ҷумла GluA2 (Knackstedt et al., 2010). Тавре ки амфетамин музмин CaMKIIα-ро ба таври махсус дар қабати NAc (Лоэт ва дигарон, 2010), тааҷҷубовар нест, ки мо бо кокаин чунин як таъсири монанд пайдо мекунем. Аммо, тавре ки ΔFosB ҳам дар ниҳонӣ NAc ва ҳам аз ҷониби кокаин музмин (Perrotti et al., 2008), ва азбаски мо нишон медиҳем, ки индуксияи CaMKIIα дар қабати ΔFosB вобастагӣ дорад, бозёфтҳои мо далелҳои нав дар бораи механизмҳои транскриптсионӣ дар таблиғи CaMKIIα дар байни ин ду минтақа, ки барои индуксияи интихобии CaMKIIα дар қабати масъуланд, пешниҳод мекунанд

Бисёре аз кори охирин ба муайян кардани фарқиятҳо дар байни D1- ва D2 NAc MSNs тамаркуз кардаанд. Гарчанде ки ҳам ретсепторҳои D1 ва D2 дар таъсирбахши баракати кокаин иштирок мекунанд (Худи, 2010), кори охир нишон медиҳад, ки фаъолсозии оптогенетикии намуди D1 навъи MSNs аксуламали рафториро ба кокаин меафзояд, дар ҳоле ки фаъолсозии навъи D2 MSN таъсири баръакс дорад (Lobo et al., 2010). Мувофиқи ин бозёфтҳо, мушҳои D1-ресептор дар нокомӣ дар ба даст овардани худидоракунии кокаин камбудӣ доранд (Caine ва дигарон, 2007), дар ҳоле ки knockouts D2 нестанд (Caine ва дигарон, 2002). Маъмурияти аконисти D1 бевосита ба NAc рафтори кокаинро дар парадигмаҳои барқароркунӣ таҳрик медиҳад (Худи, 2010). Ҷолиб аст, ки ин таъсир зиёдшавии аз D1-ресепторҳо дар фаъолияти CaMKII дар қабати NAc, талаб мекунад, аммо наAnderson et al., 2008), ин натиҷаест, ки бо ҳалқаи D1- ва хӯлаи хоси ΔFosB-CaMKII дар ин ҷо пешниҳод мешавад.

Мо қаблан хабар дода будем, ки Ser27 дар ΔFosB метавонад бо казеин киназ-2 (фосфоризатсия карда шавад) (Ulery et al., 2006), аммо, мо дар ин ҷо муайян мекунем, ки CaMKII фосфоритҳои ΔFosB дар ин ва дигар ҷойҳо бо кинетика ва стехиометрияи бузургтаранд ва метавонанд зуҳури баландтари M -ро такрор кунанд._r мушоҳидашуда барои ΔFosB (Намунаи 5A) бо таъсири кокаин дар вирус (Nestler, 2008). Мо аллакай медонем, ки фосфоризатсияи Ser27 устувории osFB ва фаъолияти транскриптиро (Ulery et al., 2006; Улер ва Nestler, 2007; Ulery-Reynolds et al., 2009). Корҳои оянда акнун ба муайянсозӣ ва оқибатҳои функсионалии мавзеъҳои нави фосфоризатсияи «ФосББ», ки дар таҳқиқоти мазкур нишон дода шудааст, тамаркуз хоҳад кард.

Давраи таҳвили пешакӣ, ки дар ин ҷо тавсиф шудааст, як механизми нави дурустро фароҳам меорад, ки тавассути он идораи такрории кокаин ба вайроншавии пешқадам дар NAc оварда мерасонад. Ҳамин тавр, ин роҳи биохимиявӣ метавонад як ҳадафи муҳим барои дахолати табобати минбаъда ба ихтилоли тобеият бошад. Азбаски CaMKII маъмул нест ва барои бисёр функсияҳои заминавии нейронӣ ва рафторӣ зарур аст, истифодаи бевоситаи ингибиторҳои CaMKII ҳамчун табобати нашъамандӣ пешгирӣ карда шудааст. Маълумотҳои мо нишон медиҳанд, ки ҳадафмандии ниҳонии механизми индуксияи CaMKII, ки ба як навъи алоҳида ва субрегионалии системаи гардиши мағзи сар хос аст, метавонад ҳадафи табобатиро таъмин кунад, ки аз пешгирии монеаи системавии CaMKII пешгирӣ кунад.

Гузаштан ба:

изњори сипос

Ин кор бо кӯмаки гранти Институти Миллии Нашъамандӣ (EJN), Маркази протеомикии NIDA-Yale DA018343 (AJR ва EJN) ва Фонди Ҳартвелл (AJR) дастгирӣ ёфтааст. Муаллифон ба Габби Рунденко барои тӯҳфаи саховатмандонаи ifiedFosB ва Роҷер Колбран барои тӯҳфаи саховатманди CaMKIIα изҳори ташаккур мекунанд.

Гузаштан ба:

Адабиёт

1. Аҳмад Шоҳ Гузариш аз истеъмоли маводи мухаддир аз меъёри аз ҳад зиёд: тағйир додани нуқтаи захираи. Илм. 1998; 282: 298-300. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
2. Андерсон С.М., маъруф KR, Садри-Вакили Г, Кумаресан V, Шмидт HD, Басс, CE, Terwilliger EF, Cha JH, Pierce RC. CaMKII: купруки биохимиявӣ, ки системаҳои допамин ва глутаматҳои accumbensро дар кокаин мепайвандад. Nat Neurosci. 2008; 11: 344 – 353. [Садо Ояндасоз]
3. Boudreau AC, Гург ME. Ҳассосияти рафторӣ ба кокаин бо зиёд шудани изҳори рӯизаминии ретсепторҳои AMPA дар аккумуляторҳои ядро ​​алоқаманд аст. J Neurosci. 2005; 25: 9144 – 9151. [Садо Ояндасоз]
4. Крики Д.А., Colbran RJ, Fong YL, Soderling TR. Ифода ва тавсифи алфа-зербахши Ca2 + / киназ II-и протеин вобаста ба сулодулин бо истифода аз системаи экспрессияи baculovirus. Biochem Biophys Res Commun. 1990; 173: 578 – 584. [Садо Ояндасоз]
5. Caine SB, Negus SS, Mello NK, Patel S, Bristow L, Kulagowski J, Vallone D, Saiardi A, Borrelli E. Нақши ретсепторҳои ба монанди D2 дар худидоракунии кокаин: таҳқиқот бо ресепторҳои D2 рецепторҳои мутант ва романҳои D2 ресептор антагонистҳо. J Neurosci. 2002; 22: 2977 – 2988. [Садо Ояндасоз]
6. Caine SB, Thomsen M, Gabriel KI, Berkowitz JS, Gold LH, Koob GF, Tonegawa S, Zhang J, Xu M. Набудани худидоракунии кокаин дар допамин D1 ресепторҳои нокифоя. J Neurosci. 2007; 27: 13140 – 13150. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
7. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Алибай Ин, Wilkinson MB, Кумар A, Нестлер EJ. Механизмҳо ва мутаносиботи механизмҳо барои беқурбшавии FosB: муайянкунии доменҳои домейнҳои FosB ва таъсири он барои суботи DeltaFosB. Евр Н. 2007; 25: 3009-3019. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
8. Чен Ҷ, Келз MB, Zeng G, Сакаи Н, Стффен C, Шокет ПЕ, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Ҳайвонотҳои трансгеникӣ бо намунаи ҳассос, намоиши генҳои ҳадаф дар мағзи. Mol Pharmacol. 1998; 54: 495-503. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
9. Кристофел Д.Д., Голден С.А., Думитриу Д., Робисон А.Ҷ., Янссен В.Г., Аҳн Х.Ф., Кришнан В, Рейс С.М., Хан М.Ҳ., Аблес Ҷ.Л., Эйш А.Ҷ., Дитс Д.М., Фергюсон Д, Нев Р.Л., Гренгард П, Ким Ю, Моррисон , Руссо С.Ҷ. Кинасаи IkappaB пластикӣ ва синтетикӣ ва рафтори фишори аз шикасти иҷтимоӣ ба амаломадаро танзим мекунад. J Neurosci. 2011; 31: 314 – 321. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
10. Colbran RJ. Ғайрифаъолкунии Ca2 + / киназияи сафедатин-вобаста аз протеин ба воситаи автофосфоризатсия. J Biol Chem. 1993; 268: 7163 – 7170. [Садо Ояндасоз]
11. Colbran RJ. Фосфатазаҳои сафеда ва пластикии синтетикӣ аз протеини киназ II вобаста аз калтсий / калидодулин. J Neurosci. 2004; 24: 8404 – 8409. [Садо Ояндасоз]
12. Colbran RJ, Браун AM. Фазои протеини киназ II вобаста ба калтсий / калидодулин ва пластикии синаптӣ. Curr Opin Neurobiol. 2004; 14: 318 – 327. [Садо Ояндасоз]
13. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Худидоракунии DW. Департаменти Департаменти Департаменти Striatal ҳуҷайраҳои классикӣ барои кокаин тақвият мебахшад. Нейроосес. 2003; 23: 2488-2493. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
14. Ковингтон HE, 3rd, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnishi YN, Berton O, Fass DM, Renthal W, Rush AJ, 3rd, Wu EY, Ghose S, Krishnan V, Russo SJ, Tamminga C, Haggarty SJ, Nestler Эҷ. Амалҳои антидепрессантии ингибиторҳои гистон дакетилаза. J Neurosci. 2009; 29: 11451 – 11460. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
15. Давалос А, Фернандес-Эрнандо С, Сова Г, Дерахшан Б, Лин МИ, Ли ҶИ, Чжао Ҳ, Луо Р, Колангело С, Сесса ВК. Протеомикаи миқдори сафедаҳои танзимшавандаи Caveolin-1: тавсифи полимераза i ва коэффициенти релиз / CAVIN-1 ДАР ҳуҷайраҳои эндотелӣ. Протеомикҳои Мол ҳуҷайра. 2010; 9: 2109 – 2124. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
16. Dumais A, Lesage AD, Alda M, Rouleau G, Dumont M, Chawky N, Roy M, Mann JJ, Benkelfat C, Turecki G. Омилҳои хавфи ба итмом расонидани худкушӣ дар депрессияи асосӣ: омӯзиши парвандаи рафтори импульсивӣ ва хашмгин дар мардон. Ам J психиатрия. 2005; 162: 2116 – 2124. [Садо Ояндасоз]
17. Груэтер Б.А., Робисон А.Ҷ., Нев Р.Л., Нестлер Е.Ҷ., Маленка Р.К. OsФосБ функсияи мустақим ва ғайримустақими ядро ​​ба таври дифференсиалӣ тақвият медиҳад. Proc Natl Acad Sci ИМА. 2013 дар матбуот. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
18. Halt AR, Dallapiazza RF, Zhou Y, Stein IS, Qian H, Juntti S, Wojcik S, Brose N, Silva AJ, Hell JW. Ҳангоми муттаҳидкунии хотира ҳатмии CaMKII ба GluN2B хеле муҳим аст. EMBO J. 2012; 31: 1203 – 1216. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
19. Hiroi N, Brown Brown, Jail Ha, CN, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ. Мушҳои мутанти FosB: аз даст додани индуксияи музмини кокаини сафедаҳои марбут ба Фос ва ҳассосияти баланд ба таъсири психомоторӣ ва таъсирбахши кокаин. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 1997; 94: 10397–10402. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
20. Ито Р, Роббинс TW, Everitt BJ. Назорати дифференсиалӣ ба рафтори ҷустуҷӯи кокаин аз рӯи ядро ​​ва снарядҳо. Nat Neurosci. 2004; 7: 389 – 397. [Садо Ояндасоз]
21. Jorissen HJ, Ulery PG, Henry L, Gourneni S, Nestler EJ, Rudenko G. Dimerization ва хосиятҳои ДНК-ҳатмии омили транскрипт DeltaFosB. Биохимия. 2007; 46: 8360 – 8372. [Садо Ояндасоз]
22. Jourdain P, Fukunaga K, Muller D. киназаи II-и калтсий / калинин ба протеин вобаста аст, ки ба рушди филоподия ва ба сутунмӯҳра вобаста аст. J Neurosci. 2003; 23: 10645 – 10649. [Садо Ояндасоз]
23. Келз MB, Чен Ҷ, Карлзон WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Бекман И AM, Steffen C, Zhang YJ, Маротти Л, Дневник DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Эзоҳ кардани омили transcript deltaFosB дар мағзи ҳассосият ба кокаин назорат мекунад. Nature. 1999; 401: 272-276. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
24. Klug JR, Mathur BN, Kash TL, Wang HD, Matthews RT, Робисон А.Ҷ., Андерсон ME, Deutch AY, Lovinger DM, Colbran RJ, Winder DG. Нафсонҳои генетикии CaMKII дар нейронҳои Дории Striatal Medium Spiny Synapses excitative функсионалиро коҳиш медиҳанд ва ҳаяҷонангези дохилиро беҳтар мекунанд. PLoS Яке. 2012; 7: e45323. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
25. Knackstedt LA, Moussawi K, Lalumiere R, Schwendt M, Klugmann M, Kalivas PW. Омӯзиши нобудшавӣ пас аз худидоракунии кокаин боиси пластикии глутаматтергиро барои ҷилавгирӣ аз талаби кокаин мегардонад. J Neurosci. 2010; 30: 7984 – 7992. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
26. Куррич С, Томас М.Ҷ. Нейронҳои шабеҳ, мутобиқсозии муқобил: таҷрибаи психостимулянт хосиятҳои оташфишониро дар accumbens ядрои муқовимат ба фарқ мекунад J Neurosci. 2009; 29: 12275 – 12283. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
27. Kourrich S, Klug JR, Mayford M, Thomas MJ. AMPAR-Таъсири мустақили alfaCaMKII мустаҳкамии ҳассосияти мукофоти кокаин мусоидат мекунад. J Neurosci. 2012; 32: 6578 – 6586. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
28. LaPlant Q, Chakravarty S, Vialou V, Mukherjee S, Koo JW, Kalahasti G, Bradbury KR, Taylor SV, Maze I, Kumar A, Graham A, Birnbaum SG, Krishnan V, Truong HT, Neve RL, Nestler EJ, Russo SJ . Нақши омили ҳастаии kappaB дар ҳассоси гормоналии миёнаравӣ дар ҳассосияти гормоналии миёнаравӣ дар мушҳои зан. Biol психиатрия. 2009; 65: 874 – 880. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
29. Ли КВ, Ким Ю, Ким А.М., Ҳелмин К, Наирн А.С., Гренгард П. Ташаккули сутунмӯҳраи дендрритикии кокс дар D1 ва D2 допамин-ретсепторҳои дорои нейронҳои торикии миёна дар аккомпукҳои ядроӣ. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 2006; 103: 3399-3404. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
30. Lisman J, Schulman H, Cline H. Асоси молекулавии CaMKII дар хотираи синаптӣ ва рафторӣ амал мекунад. Nat Rev Neurosci. 2002; 3: 175 – 190. [Садо Ояндасоз]
31. Лобо М.К., Ковингтон Х., 3rd, Chaudhury D, Friedman AK, Sun H, Damez-Werno D, Dietz DM, Zaman S, Koo JW, Kennedy PJ, Mouzon E, Mogri M, Neve RL, Deisseroth K, Han MH, Nestler Эҷ. Талафоти хоси ҳуҷайраи BDNF сигнализатсия назорати оптогенетикии мукофоти кокаинро тақлид мекунад. Илм. 2010; 330: 385 – 390. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
32. Либет JA, Baker LK, Guptaa T, Guillory AM, Vezina P. Боздоштани CaMKII дар қабати accumbens ядрои тақвиятёфтаи амфетаминро дар каламушҳои ҳассос коҳиш медиҳад. Neurosci Летт. 2008; 444: 157 – 160. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
33. Лоует Ҷ.А., Сингер Б.Ф., Бейкер Л.К., Вилке Г, Инамин Ҳ, Бубула Н, Александр Ҷ.К., Карлезон В.А., Ҷр, Нев Р.Л., Везина П. Барзиёдии изофаи алфа-Ca2 + / протеини синтези вобаста ба протеини киназ II дар қабати ядроӣ густариши вокуниш ба амфетаминро баланд мебардорад. J Neurosci. 2010; 30: 939 – 949. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
34. Малинов Р, Маленка Р. Қочоқи рецепторҳои AMPA ва пластикии синаптикӣ. Анну Rev Neurosci. 2002; 25: 103 – 126. [Садо Ояндасоз]
35. Мацузаки М., Хонкура Н., Эллис-Дэвис Г.К., Касаи Ҳ. Сохтори потенсиалии дарозмуддат дар сутунмӯҳраҳои дендритӣ. Табиат. 2004; 429: 761 – 766. [Садо Ояндасоз]
36. Mayford M, Bach ME, Huang YY, Wang L, Hawkins RD, Kandel ER. Назорати ташаккули хотира тавассути ифодаи танзимшавандаи трансгентаи CaMKII. Илм. 1996; 274: 1678 – 1683. [Садо Ояндасоз]
37. Мувофиқи он, Мушовир С., Рен Й, Сэмпарт С., Хред Ял, Гренгард П, Тараховский А, Шаарт А, Nestler EJ. Нақши асосӣ дар контексти methyltransferase G3a дар пластикаи кокаин ба вуҷуд меояд. Илм. 9; 2010: 327-213. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
38. McClung CA, Nestler EJ. Танзими ифодаҳои генӣ ва мукофоти кокаин аз ҷониби CREB ва DeltaFosB. Н.Н. Нососчи. 2003; 6: 1208-1215. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
39. Nestler EJ. Шарҳ. Механизмҳои таблиғотии алоқамандӣ: нақши DeltaFosB. Филос Тр R Soc Londra B Biol Sci. 2008; 363: 3245-3255. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
40. Nye HE, Hope BT, Келз MB, Iadarola M, Nestler EJ. Омўзиши ферментологии танзими хронометражии музмини мушакии FOS аз тарафи кокаин дар стриат ва атомҳои атроф. Ҷаббор Расул. 1995; 275: 1671-1680. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
41. Окамото К, Bosch M, Hayashi Y. Нақшҳои CaMKII ва F-актин дар пластикии сохтории сутунмӯҳраҳои дендритикӣ: шахсияти потенсиалии молекулавии теги синаптиӣ? Физиология (Bethesda) 2009; 24: 357 – 366. [Садо Ояндасоз]
42. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Тейлор JR. DeltaFosB дар аккаунти нуклеусҳо рафтори бароҳатии пурқувват ва ҳавасмандиро танзим мекунад. Нейроосес. 2006; 26: 9196-9204. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
43. Paxinos G, Watson C. Майнаи каламуш дар координатаҳои стереотаксикӣ. Нашри 6th. Амстердам; Бостон: Матбуоти академӣ / Elsevier; 2007.
44. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Думан C, Steffen C, Монтегги Л, Аллен Менд, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Эхтимол, ифодаи минтаќаи мушакии mutant dominant negativity c-Jun дар хитаи transgenic ҳассосият ба кокаинро коҳиш медиҳад. Беэътимод. 2003; 970: 73-86. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
45. Пенцес П, Каҳилл Мен, Ҷонс К.А., Сривастава Д.П. Сигналҳои конвергенти CaMK ва RacGEF сохтор ва функсияи дендритиро назорат мекунанд. Тамоюлҳои Cell Biol. 2008; 18: 405 – 413. [Садо Ояндасоз]
46. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Монтегги Л, Думан Ром, Nestler EJ. Нишон додани делтаФосБ дар сохторҳои ҷисмонӣ бо мукофотпулиҳо пас аз фишори музмин. Нейроосес. 2004; 24: 10594-10602. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
47. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Мартин Бр, Сим-Селли Л, Беҳелл РК, Худилли DW, Нестлер EJ. Намудҳои гуногуни DeltaFosB дар мағзи сар бо маводи мухаддир зӯроварӣ. Ҷойгиршавӣ. 2008; 62: 358-369. Бояд гуфт,Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
48. Пикенс CL, Airavaara M, Theberge F, Fanous S, Hope BT, Shaham Y. Нейробиологияи инкубатсияи дилхоҳ маводи мухаддир. Тамоюлҳои Neurosci. 2011; 34: 411 – 420. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
49. Пирс RC, Quick EA, Reeder DC, Morgan ZR, Kalivas PW. Паёмбарони дуюм бо калтсий миёнаравӣ ифодакунандаи ҳассосияти рафтор ба кокаинро тақмил медиҳанд. J Фармакол Exp Ther. 1998; 286: 1171 – 1176. [Садо Ояндасоз]
50. Quirion R, Robitaille Y, Martial J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C, Dalpe M. Автографияи рецепторҳои мағзи сари инсон бо истифодаи қисмҳои нимкураи ҳамаҷониба: усули умумӣ, ки арфактҳои матоъро кам мекунад. Синапс. 1987; 1: 446 – 454. [Садо Ояндасоз]
51. Робинсон ТЕ, Колб Б. Пластикии сохторӣ, ки бо таъсири маводи мухаддир тааллуқ доранд. Нейрофармакология. 2004; 47 (иловашуда 1): 33 – 46. [Садо Ояндасоз]
52. Робисон AJ, Nestler EJ. Механизмҳои транскриптсионалӣ ва эпигенетикии вобастагӣ. Nat Rev Neurosci. 2011; 12: 623 – 637. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
53. Робисон А.Ҷ., Басс М.А., Ҷиао Ю, Макмиллан Л.Б., Кармоди LC, Бартлетт РК, Колбран Р.Ҷ. Таъсири мутақобилаи бисёрҷонибаи протеини кинази II-и калсий / калокулулин бо протеинҳои зичии postsynaptic NR2B, densin-180 ва alfa-actinin-2. J Biol Chem. 2005; 280: 35329 – 35336. [Садо Ояндасоз]
54. Ross PL, Huang YN, Marchese JN, Williamson B, Parker K, Hattan S, Khainovski N, Pillai S, Dey S, Daniels S, Purkayastha S, Juhasz P, Martin S, Bartlet-Jones M, He F, Jacobson A, Pappin DJ. Миқдори мултиплексии протеин дар Saccharomyces cerevisiae бо истифода аз реагентҳои иштибоҳҳои аминокерактивӣ. Протеомикҳои Мол ҳуҷайра. 2004; 3: 1154 – 1169. [Садо Ояндасоз]
55. Russo SJ, Dietz DM, Dumitriu D, Morrison JH, Malenka RC, Nestler EJ. Синапси вобасташаванда: механизмҳои синаптикӣ ва пластикии сохторӣ дар аккобенҳои ядроӣ. Тамоюлҳои Neurosci. 2010; 33: 267 – 276. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
56. Худи DW. Дар: Ресепторҳои дофамин. Нев КА, муҳаррир. Ню Йорк: Humana Press; 2010. саҳ. 479 – 524.
57. Сурудхон BF, Лоэт Ҷ.А., Неве Рол, Везина П. Фазои интиқоли барзиёди вирусии аз алфа-калтсий / калинин ба протеини вобаста ба протеини киназа II дар қабати accumbens ба танзими дарозмуддати функсияи алфа-амино-3-hydroxyl-5 оварда мерасонад -метил-4-изоксазол-пропионат: Вобастагии допамин-1 ресептор ва протеини киназ А. Eur J Neurosci. 2010; 31: 1243 – 1251. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
58. Strack S, McNeill RB, Colbran RJ. Механизм ва танзими киназаи протеин вобаста ба калтсий / калокулулин ба зербанди NR2B аз ресепторҳои N-метил-D-аспартат нигаронида шудааст. J Biol Chem. 2000; 275: 23798 – 23806. [Садо Ояндасоз]
59. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Фосфоризатсияи DeltaFosB устувории онро дар vivo миёнаравӣ мекунад. Асабшиносӣ. 2009; 158: 369 – 372. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
60. Ulery PG, Nestler EJ. Танзими функсияи DeltaFosB функсияи функсияи Ser27. Евр Н. 2007; 25: 224-230. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
61. Уверси ПГ, Руденко G, Нестлер EJ. Танзими устувории DeltaFosB аз фосфор. Нейроосес. 2006; 26: 5131-5142. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
62. Vialou V ва дигарон. DeltaFosB дар гардишҳои мукофоти мағзи сар тобовариро ба стресс ва аксуламали антидепрессант мекунад. Nat Neurosci. 2010; 13: 745 – 752. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
63. Wang L, Lv Z, Hu Z, Sheng J, Hui B, Sun J, Ma L. Acetylation музмини кокси тавассути H3 ва фаъолкунии транскриптсияи CaMKIIalpha дар accumbens ядро ​​барои ҳавасмандгардонии тақвияти маводи мухаддир муҳим аст. Нейропсихофармакология. 2010; 35: 913 – 928. [Матолиби марбут ба PMC] [Садо Ояндасоз]
64. Werme M, Мелер, C, Олсон Л, Гильде Л, Торен P, Нестлер EJ, Бренне С. Дече ФосБ танзим кардани чархаро танзим мекунад. Нейроосес. 2002; 22: 8133-8138. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
65. Winstedley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Руссо SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Департаменти DeltaFosB дар критикии орбиофреал tolerance ба ихтилоли рагҳои кокаин вобаста аст. Нейроосес. 2007; 27: 10497-10507. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
66. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Келз MB, Шоу Лигманман, Berton O, Сим-Селли ЛJ, Дилеоне RJ, Кумар А, Нестлер EJ. Нақши асосӣ барои DeltaFosB дар нуктаиус амал мекунад дар морфин. Н.Н. Нососчи. 2006; 9: 205-211. Бояд гуфт,Садо Ояндасоз]
67. Чанг Р, Хуо М.С., Ву Ю, Ян Ю, Груэтер СЕ, Ни Г, Прейс ЭЕ, Ҷр, Тиел В, Гуатимосим С, Сур LS, Маду EC, Шаҳ А.Н., Вишниветская Т.А., Аткинсон Ҷ.Б, Гуревич В.В., Салама Г, Ледерер Ҷ.Ҷ., Колбен Р.Ҷ., Андерсон МЕ. Инибсияи Calmodulin kinase II аз бемориҳои сохтории қалб муҳофизат мекунад. Nat Med. 2005; 11: 409 – 417. [Садо Ояндасоз]