Fadok JP, Darvas M, Dickerson TMK, Palmiter RD
(2010). PLOS ONE 5 (9): e12751. doi: 10.1371 / jurnal.pone.0012751
Jonathan P. Fadok1,2, Мартин Дарвас2, Tavis MK Dickerson2, Ричард Д. Палмитер2
Барномаи баъдидипломии 1 дар нейробиология ва рафтор, Донишгоҳи Вашингтон, Сиэттл, Вашингтон, Иёлоти Муттаҳидаи Амрико,
Шӯъбаи биохимия ва Институти тиббии Howard Hughes, Донишгоҳи Вашингтон, Сиэттл, Вашингтон, Иёлоти Муттаҳидаи Амрико
Допамин нейротрансмиттер (DA) барои омӯхтан дар шароити тарси Павлован муҳим аст парадигмае, ки бо зарбаи ҳароснок (FPS) маълум аст. Мушҳое, ки қобилияти синтез кардани DA надоранд, алоқамандии ҳавасмандкунӣ ва пойафзоли тарсоварро намедонанд. Пештар, мо нишон додем, ки барқароркунии синтези DA дар нейронҳои минтақаи тегентралии ventral (VTA) барои барқарор кардани FPS кифоя аст. Дар ин ҷо, мо як усули интихобшудаи барқароркунии вирусиро истифода бурдем, то муайян созем, ки кадом минтақаҳои мезокортиколимбии мағзи сар аз VTA сигнал мегиранд, ки аз VTA барои FPS талаб карда мешавад. Мо нишон медиҳем, ки барқароркунии синтези DA ҳам амигдала (BLA) ва ҳам accumbens ядрои (NAc) барои хотираи дарозмуддати FPS лозим аст. Ин маълумотҳо аҳамияти ҳалкунандаро дар бораи схемаи ба допамин вобаста, ки дар ташаккули хотираи марбут ба тарс фаро гирифта шудаанд, таъмин мекунанд.
Муқаддима
DA аз ҷониби нейронҳо дар ядроҳои дискретӣ дар мағзи сар, аз ҷумла гипоталамус, лампаи олфакторӣ ва мотораи ventral [1] синтез карда шудааст. Нейронҳои DA дар VTA лоиҳаи мобайни ventral ба майдони майнаи майнаи бадан, ки барои хунуккунии тарс муҳиманд, аз қабили қабати пешоб, гиппокампус, амигдала ва NAc [1], [2], [3]. Мутобиқ бо нақши DA дар хунуккунии тарс, сатҳи сӯхтани нейронҳои DA аз ҷониби ҳавасмандкунӣ ба вуҷуд оварда мешавад ва инчунин суроғаҳое, ки натиҷаҳои пешрафтро пешгӯӣ мекунанд [4], [5], [6]. Ғайр аз он, дар посух ба ҳавасҳои даҳшатнок ё ҳолатҳои стресс, сатҳи DA дар якчанд минтақаи лимбикии майна афзоиш меёбад [7], [8], [9], [10] ва манипулясияҳои фармакологӣ ва генетикии функсияи DA метавонанд омӯзишро дар парадигмаҳои хунуккунии тарсу ҳарос [11], [12], [13], [14] халалдор кунанд.
Дар ҳавои тарси Павловян, як ҳавасмандкунии бетараф ба монанди нур, бо як ҳавасмандкунии ғайриварзишавандаи пешгирӣ, ба монанди пойафзол ҷуфт карда мешавад. Пас аз омӯзиш, муаррифии ҳавасмандкунии шартӣ танҳо посухҳои тарсро ба вуҷуд меорад [3]. FPS як парадигмаи кондитсионерии тарси Павловӣ аст, ки дар он омӯзиш тавассути афзоиши эҳтиёҷот дар вокуниш ба акустики [15] арзёбӣ карда мешавад. Мо қаблан нишон додем, ки нейронҳои DA дар VTA барои омӯзиш дар парадигмаи FPS [12] кофӣ мебошанд. Ғайр аз ин, мо нишон додем, ки DA дар BLA барои тавлиди хотираи кӯтоҳмуддат (STM) кофӣ аст, аммо хотираи дарозмуддат (LTM) -и ассосиатсияи кю-шок мебошад. Аз ҳадафҳои боқимондаи нейронҳои VTA DA, NAc калонтарин innervationро ба даст меорад ва бинобар ин макони беҳтарин барои ташаккули LTM барои FPS [2] буд.
Адабиёти калон нақши DA-ро дар доираи NAc барои равандҳои ассотсиатсионии омӯзишӣ дар парадигмаҳои мукофотӣ [16] дастгирӣ мекунад. Ҳоло маълум нест, ки оё DA дар NAc барои омӯзиш дар шароити тарси Павлован муҳим аст ё не. Бо вуҷуди ин, таҳқиқотҳо нишон доданд, ки сатҳи DA дар NAc дар ҷавоб ба тарсу ҳарос ва пешгӯиҳои пешгӯишуда афзоиш меёбад [10]. Ғайр аз ин, NAc аз ҷониби BLA [16], [17], як ядрое, ки барои хунуккунии тарсу ҳарос муҳим аст, хидмат мекунад ва DA функсияи нейрониро ҳам дар NAc ва BLA [18], [19], [20], [21] осон мекунад ]. Аз ин рӯ, имкон дорад, ки алоқаи байни BLA ва NAc ва сигнали DA дар ҳарду ин минтақа барои хунук кардани тарси Павлов талаб карда шавад.
Барои муайян кардани он, ки оё DA дар NAc ва BLA барои LTM дар хунуккунии тарси Павлов ба вуҷуд омадааст, мо аз модели допаминии нокифоя (DD) истифода кардем, ки қобилияти синтез кардани DA аз сабаби гузоштани як loxP-паҳлавии транскриптсияи / тарҷумаро надорад. кассета дар генофонди гидроксилаза (Thfs) ген [22]. Дар ҳузури Creombombase, сигнали DA метавонад ба таври интихобӣ ба минтақаҳои мушаххас тавассути азнавбарқароркунии алфасси Thfs аллои барҳам хӯрда шавад. Мо вируси ретрогрессивии қочоқшаванда, ки Cre рекомбиназаро барои интихобан барқарор кардани DA ё ба NAc ё ҳам NAc ва BLA истифода мекардем, истифода бурдем. Натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки DA дар NAc ва BLA барои таъсиси LTM барои FPS кифоя аст.
Натиҷаи
Барқарорсозии TH дар Mice-и наҷотёфта
Барои муайян кардани он, ки дар майнаи майнаи DA барои ташаккули LTM барои FPS лозим аст, функсияи DA дар мушҳои DD тавассути сӯзандоруи CAV2-Cre рекомбиназ барқарор карда шуд. Ин вирус ба таври интихобӣ нейронҳоро сироят мекунад ва ба қадри кофӣ аз макони тазриқ интиқол мешавад [23]. Агар ба ядрои мақсадноки нейронҳои DA дар мушҳои ДД ворид карда шавад, ин вирус ба DA нейронҳои мобайнои ventral фурӯхта мешавад ва дар он кассета шинондашудаи генетикиро азхуд менамояд ва ҳамин тариқ ген генро фаъол мекунад, истеҳсоли Т-ро барқарор мекунад ва истеҳсоли DA-ро танҳо ба ҳадафҳои интихобшуда [22]. Мо ин техникаро дар ду гурӯҳи мушҳои алоҳида истифода бурдем. Азбаски NAc ҳадафи калонтарини нейронҳои DA VTA [2] мебошад, мо фарз кардем, ки ин ядро барои ташаккули LTM барои FPS муҳим буда метавонад; аз ин рӯ, тазриқи дуҷонибаи CAV2-Cre ба NAc дар як насл ворид карда шуданд. Мо инчунин фарзияи он, ки DA метавонад дар якчанд ҳадафҳои VTA барои LTM талаб карда шавад, озмудем. Барои санҷидани ин, сӯзандораҳои дуҷониба ба ҳам мушҳои NAc ва BLA аз DD DD сохта шуданд.
Иммуногистохимия барои тасдиқи барқароркунии вазифаи TH дар мушҳои ба вирус воридшаванда истифода бурда шуд (Расми 1). Чӣ тавре ки интизор мерафт, дар NAc мушҳои назорат, ки бо ҳамлу нақли DA (DAT) ҳамоҳанг шудааст, сигнал барои ТТ буд (Расми 1A – D). TH инчунин дар BLA мушҳои назоратӣ низ ошкор карда шуд (Расми 1E); бо вуҷуди ин, масунияти ғайрирасмӣ DAT дар BLA хеле паст буд ва аз ин рӯ нишон дода намешавад. Иммуногистохимия инчунин дар бофтаи мағзи сар аз мушҳои ғайри сӯзандору гузаронида шуд (Расми 1 F – J). Дар NAc ягон сигнали ошкоршавандаи TH мавҷуд набуд (Расми 1F, G), аммо рангкунии DAT мавҷуд буд (Расми 1H, I). BLA -и мушҳои DD низ аз ранг кардани TH маҳрум буданд (Расми 1J).
Тасвири 1
Барқарорсозии интихобии ТТ дар мушҳои аз наҷотёфта наҷотёфта.
Иммуногистохимия аз мушҳои DD-и сӯзондашудаи NAc нишон дод, ки TH ба андозаи зиёди NAc барқарор карда шудааст (Расми 1K – N). Дар мушҳои DD-и NAc-ваксина барои сӯзишворӣ дида намешавад (Расми 1O). Наҷоти дубора ба NAc ва BLA ба сигнали қатъии TH дар NAc (Расми 1P – S) ва сигнали пурқуввати TH дар BLA оварда расонд (Расми 1T). Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки тазриқи вирусии CAV2-Cre дар барқароркунии изҳори TH-и мушаххас ба минтақаҳои мағзи сар сӯзандору самаранок буд.
Барои тасдиқи он, ки наҷотдиҳии вирусии TH ба барқароршавии DA дар мушҳои DD воридшуда оварда расонид, мо миқдори DA, metabolia DA ва norepinefrine -ро бо истифодаи хроматографияи моеъи баланд (HPLC; Ҷадвали 1) муайян кардем. Барои ин таҷриба, мо дар NAc ё амигдала наҷот гирифтем, то муайян кунем, ки оё наҷотдиҳии ТМ дар як ҳадафи пешбинишудаи DA ба сатҳи DA дар минтақаи дигар, на воридшаванда таъсир мерасонад. Мо дарёфтем, ки мушҳои пардаи допаминии тамомшуда дар NAc ва 0.51% сатҳи назорат дар амигдала 1.39% -ро доштанд. Мушҳои DD-и наҷотбахши NAc сатҳи DA доштанд, ки 34.0% назорат дар NAc буданд; аммо сатҳи DA дар амигдала бо сатҳи DD –и тазриқнашуда (1.57%) якхела буданд. Мичҳои ДД-и наҷотёфта дар амигдала сатҳи DA доштанд, ки 38.4% назорат буданд, аммо сатҳҳои DA дар NAc бо сатҳҳои наҷотнашудаи DD (0.46%) яксон буданд. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки наҷотдиҳии бо роҳи миёнаравии вирусии TH ба сатҳи баландтари DA дар минтақаҳои мақсадноки сӯзишвори мушҳои DD оварда мерасонад.
Ғайр аз он, ворид кардани вирус ба NAc ё амигдала ба баланд шудани сатҳи DA дар ҳадафи дигар оварда натавонист. Дар ниҳоят, азбаски TH дар нейронҳои норадренергии мушҳои DD [24], [25] ифода ёфтааст, мо миқдори ками TH-ро, ки дар IHC -и BLA дар мушҳои DD дида мешавад, ба аксонҳои норадренергикӣ ҳифз кардем. Мавҷудияти норепинефрин дар BLA мушҳои наҷотёфтаи DD бо HPLC тасдиқ карда нашуданд (Ҷадвали 1).
Љадвали 1
Теъдоди метаболитҳои DA, NE ва DA HPLC.
Допамин дар NAc ва BLA барои хотираи дарозмуддат лозим аст
Ҳайратангези тарс як шакли кондитсионерии Павловист, ки дар он ангезаи шартӣ дар аксуламали акустикии ҳайратангез афзоиш меёбад [15]. Барои таъмини он, ки барқарорсозии интихобии DA танҳо ба NAc ё танҳо ба NAc ва BLA ба худи аксуламали вокуниши акустикӣ халал нарасонад, барои назорат хатҳои вокуниши ҳайратангез тавлид карда шуданд ва мушҳои DD наҷот ёфтанд (Расми 2А). Таҳлили ченакҳои дуҷонибаи такрории дисперсия (RM ANOVA) таъсири назарраси шиддатнокии садоро (F(4,172) = 37.1, p<0.01) нишон дод, аммо ягон гурӯҳ аз рӯи таъсири мутақобилаи табобат. Мушкилоти функсияи DA инчунин метавонад фарқиятро дар дарвозаи сенсомоторӣ ба вуҷуд орад, ки метавонад FPS-ро вайрон кунад [15], [26]. Барои таҳлили дарвозаи сенсомоторӣ, ҳама мушҳо дар парадигмаи ингибицияи пеш аз пулс (PPI) дар сатҳҳои гуногун санҷида шуданд (Расми 2B). Таъсири назарраси шиддати пеш аз импулс вуҷуд дошт (RM ANOVA F (2,86) = 57.79, p <0.01), аммо ягон гурӯҳ аз рӯи таъсири муолиҷа вуҷуд надошт. Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки наҷотдиҳии интихобии сигнализатсияи DA ба NAC ё NAc ва BLA, ки дар натиҷаи амалҳои таҷрибавии мо ба вуҷуд омадааст, аксуламали вокуниши акустикӣ ё дарвозаи сенсомоторро тағир надодааст. Тасвири 2 Барқарорсозии DA ба ҳам NAc ва ҳам BLA барои LTM кифоя аст. барои FPS. Мушҳо ба парадигмаи кондитсионерии тарс дучор шуданд (Расми 2C). Дар давоми омӯзиш ба мушҳо 30 озмоиш гузаронида шуд, ки дар онҳо сигнали нури 10 сония бо зарбаи сабук (0.5 сония, 0.2 мА) пайваст карда шуд. Хотираи кӯтоҳмуддат (STM) 10 дақиқа пас аз омӯзиш санҷида шуд ва LTM пас аз 24 соат санҷида шуд. Дар байни гурӯҳҳо пеш аз кондитсионер фарқияти назаррас вуҷуд надошт. Пас аз омӯзиш, STM дар мушҳои DD бо барқароршавӣ ба NAc ва BLA пурра барқарор карда шуд. STM дар мушҳои DD-и NAc тазриқшуда вайрон карда шуд, аммо ин таъсир ба аҳамият нарасид; аммо, онҳо нисбат ба мушҳои назоратӣ ба таври назаррас камтар LTM доштанд (p<0.05; Бонферрони пас аз санҷиш). LTM ба сатҳи назорат дар мушҳои DD, ки ба таври дуҷониба ҳам ба NAc ва BLA ворид карда шудаанд, барқарор карда шуд. Дар байни гурӯҳҳо дар аксуламали рафтор ба зарбаи пой тафовути назаррас вуҷуд надошт (Тасвири 2D). Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки DA дар NAc ва BLA барои осон кардани LTM барои FPS кифоя аст.
мубоҳиса
Фикр шудааст, ки DA муттаҳидсозӣ ва ташаккули LTM-ро дар минтақаҳои калидии лимбии мағзи сар ба монанди амигдала, Н.А. ва ҳиппокампус [27], [28], [29] мусоидат мекунад ва таҳқиқоти қаблӣ барои DA дар ҳавои тарсондани Павлов пешниҳод кардаанд [ 13]. Пештар, мо нишон додем, ки DA барои мӯътадил кардани пайгирии хотира дар парадигмаи FPS муҳим аст [12]. Ғайр аз он, барқароркунии функсияи DA дар ноҳияи мезокортиколимбии аз VTA ба вуҷуд омада барои барқароркунии STM ва LTM барои FPS кифоя буд, аммо барқароршавӣ дар BLA танҳо STM [12] -ро барқарор мекард. Аммо, сайтҳои амалиёти DA, ки барои ташаккули LTM дар ин намуди таълим лозиманд, номаълум буданд. Дар ин ҷо мо нишон медиҳем, ки барқароркунии синтези DA ба NAc ва BLA барои LTM барои FPS кифоя аст. Мо инчунин дарёфтем, ки барқароркунии TH ба нейронҳои DA, ки ба NAc тарҳрезӣ мешаванд, дар наҷот додани STM ба монанди барқароркунии BLA [12] ё барқарорсозӣ ҳам BLA ва NAc самаранок набуд. Аз ин бармеояд, ки NAc метавонад барои ташаккули LTM назар ба STM муҳимтар бошад.
Яке аз далелҳои эҳтимолии барқароркунии вирусӣ ин аст, ки нейронҳои DA метавонанд ба зиёда аз як ҳадаф пешгӯии гаравро фиристанд. Ҳамин тариқ, сӯзонидани вирус ба NAc метавонад TH -ро барқарор кунад ва ба ин васила Д.А.-ро ба BLA барқарор кунад. Натиҷаҳои иммуногистохимияи мо нишон медиҳанд, ки нейронҳои DA-ро, ки NAc-ро дохил мекунанд, аз аҳолии фарқкунанда аз онҳое, ки BLA мебошанд, зеро ворид кардани вирус дар як минтақаи мағзи сар, танҳо боқӣ дар он минтақа. Натиҷаҳои HPLC ин далелро тақвият медиҳанд, зеро сатҳи DA дар мушҳои ДД-и NAc-и наҷотёфта ва дар амигдала баланд намешавад. Ин бозёфтҳо бо таҳқиқоти сершуморе мувофиқанд, ки гетерогенияи нейронҳои DA-ро дар асоси ҳадафи проексионалӣ [30], [31], [32], [33] омӯхтанд.
Таҷҳизот ва механизмҳое, ки ба зарурати DA дар ҳам NAc ва BLA барои хунуккунии тарси Павлов халал мерасонанд, ҳал намешаванд. Ҷолибан, BLA пешгӯиҳоро ба NAc [16], [34] мефиристад ва ин синапсҳо метавонанд потенсиали дарозмуддатро, ки таносуби калидии хониш ва хотираро доранд [35] гузаранд. Ғайр аз он, DA LTP-ро дар BLA ва NAc [18], [21] мусоидат мекунад. Ҳамин тариқ, дар вақти тарси Павлован имконпазир аст, ки DA дар BLA фаъолияти ҳуҷайраи глутаматержии пирамидиро [19], [20], [36], аз ҷумла он ҳуҷайраҳои ба NAc [34] пешбинишударо мусоидат кунад, дар ҳоле ки DA дар NAc мусоидат мекунад LTP аз BLA ба синапсҳои NAc, ки ба эҷоди LTM мусоидат мекунад. Муайян намудани вақти аниқи рӯйдодҳои аз ҷониби DA вобаста дар BLA ва NAc барои FPS фаҳмиши моро дар бораи ин раванд тақвият мебахшад.
Мавод ва усул
Этикаи Этикӣ
Ҳама мушҳо мувофиқи дастурҳои аз ҷониби Институти Миллии Саломатӣ муқарраршуда табобат карда шуданд ва тартибот бо мушҳо аз ҷониби Кумитаи Институти Институти Нигоҳубин ва Истифодаи Ҳайвонот (2183-02) тасдиқ карда шуданд.
Ҳайвонот ва табобатҳо
Мушҳои ДД тавре ки тавсиф шудаанд [22] тавлид шуданд. Хулоса, мушҳо DD (Thfs / fs; DbhTh / +) ду аллелези фаъолшудаи тирозин гидроксилазаи (Th) аллеллҳоро мегузаронанд, ки метавонанд тавассути Cre recombinase фаъол карда шаванд. Мышаҳои ДД як допамин act-гидроксилаза (Dbh) аллеле доранд ва як Dbh аллеле бо воридкунии мақсадноки ген ген, ки барои истеҳсоли муқаррарии норепинефрин [24], [25] имкон медиҳад. Ҳайвоноти назоратӣ ҳадди аққал як Th allele ва як Dbh аллоро солим нигоҳ медоранд. Мушҳои мардона ва занона дар байни синну соли 2 - 6 моҳ аз озмоишҳои рафторӣ гузаштанд. Ҳама мушҳо дар зери сикли 12 12 (рӯшноӣ: торик) дар муҳити аз ҳарорат назоратшаванда бо хӯрок ҷойгир карда шуданд (5LJ5; Фазаҳои PMI, Сент-Луис, MO) ва обе, ки аз лихитум дастрас аст. Тамоми таҷрибаҳои рафторӣ дар давраи сиклии нур гузаронида шуданд. Азбаски мушҳои ДД сахт гипофаг мебошанд, онҳо ҳамарӯза (ба таври дохилӣ ба таври худкор) бо 3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-Dopa) дар 50 мг / кг дар ҳаҷми 33 мкл / г, аз тақрибан баъди рӯзи таваллуд сӯзандору гузаронида шуданд 10 [25]. Пас аз тазриқи вирусӣ, мушҳои DD бо тазриқи ҳамарӯзаи L-Dopa нигоҳ дошта шуданд, то онҳо бидуни табобати минбаъдаи L-Dopa ғизо хӯранд.
Инъексияи вирусӣ
Isoflurane (1.5 – 5%) - мушҳои анестезионидашуда ба асбоби стереотаксикӣ гузошта шудаанд (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Барои барқарор кардани функсияи генофонди дар ядрои танҳо афзоишёбанда, вируси рекомбинантии CAV2-Cre (ки дар зарраҳои 2.1 × 1012 қайд шудааст / мл) дутарафа ворид карда шуд (координатҳо дар мм: 1.7 пеш аз Брегма, 0.75 паҳлӯ ба 4.75 вентралӣ ба Брегма; 0.5 мкл / нимкура) ба DD ва мушҳои назоратӣ. Барои барқароркунии дубораи DA ба NAc ва BLA, вируси CAV2-Cre тавре, ки дар боло зикр шудааст, ба дуҷониба ба NAc ворид карда шуд ва BLA (координатҳо дар мм: 1.5 аз паси Брегма, 3.25 паҳлӯ ба мобайн, 5 ventral ба Bregma; 0.5 µl) / нимкура) дар DD ва мушҳои назоратӣ. Шарҳи муфассали ин вектори вирусӣ нашр шудааст [22]. Вирусҳо дар тӯли як 10-дақиқа бо истифодаи сӯзанаки 32-дастгоҳи сӯзандору (Hamilton, Reno, NV), ки ба насоси микро инфузия пайваст карда шудаанд (WPI, Sarasota, FL) ворид карда шуданд. Мушҳои назоратӣ аз NAc ва гурӯҳҳои наҷотдиҳии дукарата ба як гурӯҳ ҷамъ оварда шуда буданд ва дар ягон параметрҳои рафтор фарқ надоштанд.
асбоб
Камераҳои ба ларза афтодаро (SR-Lab, San Diego Instruments, Сан Диего, Калифорния) барои чен кардани монеаи пешгирӣ, посухҳои ногаҳонӣ ва ларзиши ҳаросангез, тавре ки тавсиф шудааст [12] истифода шуд. Амплитудаи баландтарини вокуниш барои ҳисоб кардани ҷилавгирӣ аз обшавии пешакӣ, посухҳои ногаҳонӣ, ларзиши шадид ва реаксияи шок истифода мешуд. Сатҳи садо тавассути хонандаи сатҳи садо (RadioShack, Fort Worth, TX) санҷида шуд. Воҳиди калибрченкунӣ барои таъмин намудани тамомияти хондани посухҳои стартӣ истифода шудааст (Сан Диего Асбобҳо, Сан Диего, Калифорния). Як нури 8 ватт ба девори пушти қуттии оғӯш насб карда шуд, то ҳамчун як издиҳом истифода шавад.
Хатти вокуниши стартӣ
Пас аз як давраи истиқоматии 5, ҳайвонҳо бо як қатор озмоишҳои дараҷаи афзояндаи набзи садо пешниҳод шуданд: аз сифр, ки дар он садо набуд, то 10 дБ бо ITI аз 105 сек. Ҳамаи импулсҳои садоӣ 30 msec буданд.
Боздори пеш аз набзи
PPI мувофиқи андозае [12] чен карда шуд. Ба таври мухтасар, пас аз давраи одатсозӣ, мушҳо бо 5, 40-msec, 120-dB, озмоишҳои танҳо набзи пешниҳод карда шуданд. Пас аз он, ба мушҳо озмоишҳои 50 ё ҳар ду озмоиши ҷарроҳӣ, яке аз се озмоишҳои prepulse (5, 10 ва 15-dB болотар аз паси замина) ё озмоиши нулӣ, ки дар он ягон ангезиши акустикӣ вуҷуд надошт, пешниҳод карда шуд. Боздори inpulation барои ҳар як сатҳи prepulse бо истифодаи формулаи зерин ҳисоб карда шуд:% inhibition = [(аксуламали миёнаи старт дар мурофиаи prepulse / аксуламали миёнаи старт дар озмоиши танҳо набзи) × 100].
Тарсу ҳарос
Ҳама мушҳо бо истифода аз парадигмаи 3-рӯзаи FPS, тавре ки [12] тавсиф шудааст, озмоиш карда шуданд. Ба таври мухтасар, дар ибтидо, ба мушҳо силсилаи озмоиши тасодуфии фармоишии 20 дода шуд, ки дар байни шартҳои кью ва нос ҷудо карда шуд. Рӯзи 2, мушҳо ба ҳам пайвастани 30 (2 min ITI) -и нури кюи 10-сек бо пойафзоли 0.2-mA, 0.5-sec гирифтанд. Сипас мушҳо дар қафасҳои хонаи худ барои 10 дақиқа қабл аз озмоиши хотираи кӯтоҳмуддат ҷойгир карда шуданд. Рӯзи 3, LTM арзёбӣ карда шуд. Формулаи зерин барои ҳисоб кардани ногаҳонии тарсу ҳарос истифода шудааст:% потенциал = [(миёнаи ҷавобҳо дар бораи озмоишҳои кью / Миёнаи посухҳо ба озмоишҳои беэътибор-1) × 100].
Иммунохогохимия
Матни мағзи сари муш барои таҳлили гистологӣ бо истифодаи усулҳои стандартӣ, тавре ки [12] тавсиф шудааст, омода шудааст. Қисмҳои озод шинокунандаи марҷон (30 мкм) бо антителаҳои харгӯш ба зидди харгӯшкунанда (1 2000, Millipore) ва антителаҳои зидди зидди DAT (1 1000, Милипор) иммунизатсия карда шуданд. Антиденоҳои дуюмдараҷа буданд ё Cy2- ё Cy3-пайванданд (1 200, Ҷексон ИммуноРесект). Аксҳо бо микроскопи амудии дурахшон (Nikon) гирифта шудаанд.
Хроматографияи моеъи баландсифат
Мушҳо бо Бутаназия (250 мг / кг) эвтанизатсия карда шуданд, ва баъд мағзҳо тоза карда шуданд ва дар плитаи мармари яхбанди ях ҷойгир карда шуданд. Бо истифода аз матритсаи мағзи сари муш (Activational Systems, Warrren, MI), иловаро ғафси 1-mm тавассути NAc ё amgdala гирифта шуданд. Пас аз пунбаҳои бофтаи (диаметри 1-мм) гирифтанд, ба қубурҳои микроцентрифуги 1.7 mL ҷойгир карда шуданд ва зуд дар нитрогени моеъ яхкарда шуданд. Намунаҳо дар −80 ° C то вақти ташхис ба лабораторияи асосии нейрохимия (Маркази Донишгоҳи Венербилт оид ба таҳқиқоти неврологияи молекулавӣ) барои таҳлил фиристода шуданд.
Таҳлилҳои оморӣ
Таҳлили оморӣ бо истифодаи нармафзори GraphPad Prism (La Jolla, Калифорния) гузаронида шуд.
тасдиыот
Мо ба Ларри Звейфел барои шарҳҳои муфид дар дастнавис, Гленда Фроелик ва Алберт Квинтана барои кӯмак оид ба гистология ва Валери Уол барои нигоҳ доштани колонияи мушак ташаккур мегӯем. Мо инчунин ба доктор Мигел Чиллон (Шӯъбаи Истеҳсоли Вектории CBATEG дар Донишгоҳи Автономии Барселона) барои CAV2 изҳори сипос менамоем.
Далелҳо
Муносибатҳои рақобаткунандагон: Муаллифон изҳор намуданд, ки ҳеҷ манфиати рақобат вуҷуд надорад.
Маблағгузорӣ: Ин тафтишот қисман аз ҷониби Институти тиббии Ховард Хьюз, Хадамоти тандурустии ҷамъиятӣ, Ҷоизаи хидмати миллии тадқиқотӣ, T32 GM07270, аз Институти Миллии Тибҳои Умумиҷаҳонӣ ва Институти Миллии Тибби Грант 4 R25 GM 058501- дастгирӣ карда шуд 05. Маблағгузорон дар тарҳрезии омӯзиш, ҷамъоварӣ ва таҳлили маълумот, қарор дар бораи нашр ё омода кардани дастнавис нақше надоштанд.
Адабиёт
1. Bjorklund A, Даннетт SB. Системаҳои нейронии допамин дар майна: навсозӣ. Тамоюлҳои Neurosci. 2007; 30: 194 – 202. [PubMed]
2. Майдонҳо HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Нейронҳои минтақаи тегенталии вентралӣ дар рафтори иштиҳо ва мустаҳкамкунии мусбат. Анну Rev Neurosci. 2007; 30: 289 – 316. [PubMed]
3. Марен С. Нейробиологияи хунуккунии тарси Павлов. Анну Rev Neurosci. 2001; 24: 897 – 931. [PubMed]
4. Brischoux F, Chakraborty S, Brierley DI, Ungless MA. Даъвати фасикии нейронҳои допаминӣ дар VTA ventral бо stimul noxious. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 2009; 106: 4894-4899. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
5. Guarraci FA, Kapp BS. Тавсифи электрофизиологии минтақаи нейронҳои допаминергияи вентральии ventral ҳангоми хунуккунии дифференсиалии тарс дар харгӯш. Беҳтар мағзи сари. 1999; 99: 169 – 179. [PubMed]
6. Joshua M, Adler A, Mitelman R, Vaadia E, Bergman H. Midbrain neurons dopaminergic and interneurons striatal cholinergic interneurons фарқияти байни мукофотҳо ва ҳодисаҳои авфиро дар давраҳои мухталифи озмоиши классикии эҳтимолии классикӣ рамз мекунанд. J Neurosci. 2008; 28: 11673 – 11684. [PubMed]
7. Abercrombie ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. Таъсири дифференсиалии стресс ба ҳангоми vivo допамин дар партофтан дар striatum, accumbens ядрои ва кортиалияи frontal medial. J Нейрохим. 1989; 52: 1655 – 1658. [PubMed]
8. Инглис ФМ, Могдаддам Б. Инноверсияи допаминергияи амигдала ба стресс хеле ҷавоб медиҳад. J Нейрохим. 1999; 72: 1088 – 1094. [PubMed]
9. Kalivas PW, Duffy P. Фаъолкунии интихобии интиқоли допамин дар қабати ядро бо фишор афзоиш меёбад. Майнаи Res. 1995; 675: 325 – 328. [PubMed]
10. Pezze MA, Heidbreder CA, Feldon J, Murphy CA. Ҷавоби интихобии ядроҳо дофамин ва ядро ба ядрои авзои тағйири контексти ва дискретӣ афзоиш медиҳад. Асабшиносӣ. 2001; 108: 91 – 102. [PubMed]
11. де Oliveira AR, Reimer AE, Brandao ML. Механизмҳои ресептори допамин D2 дар ифодаи тарси шартӣ. Фармакол Биохимии Behav. 2006; 84: 102 – 111. [PubMed]
12. Fadok JP, Dickerson TM, Palmiter RD. Допамин барои хунуккунии тарсу вобастагӣ лозим аст. J Neurosci. 2009; 29: 11089 – 11097. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
13. Pezze MA, Feldon J. Mesolimbic Роҳҳои dopaminergic дар шароити хунуккунӣ. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301 – 320. [PubMed]
14. Пнонусами R, Нисим Х.А., Барад М. Блоки системавии ретсепторҳои ба мисли D2 монанд ба допамин ба нестшавии тарсидашуда дар мушҳо мусоидат мекунад. Мемонед ёд гиред. 2005; 12: 399 – 406. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
15. Кох М. Нейробиологияи старт. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107 – 128. [PubMed]
16. Sesack SR, Грейс АА. Шабакаи мукофоти Cortico-Basal Ganglia: микросхемаҳои. Нейропсихофармакология. 2010; 35: 27 – 47. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
17. McGaugh JL. Амигдала зич кардани хотираи таҷрибаҳои эҳсосотиро тақвият медиҳад. Анну Rev Neurosci. 2004; 27: 1 – 28. [PubMed]
18. Биссер С, Хумо Ю, Лути А. Допамин дарвоқеъ LTP дар амигдалтаи паҳлӯ тавассути қатъ кардани ҷилавгирӣ аз хӯрдани дарвоза мекушояд. Nat Neurosci. 2003; 6: 587 – 592. [PubMed]
19. Kroner S, Rosenkranz JA, Grace AA, Barrionuevo G. Dopamine excitability of neurons amolgala basolateral amigdala in vitro модул мекунад. J Нейрофизиол. 2005; 93: 1598 – 1610. [PubMed]
20. Маровский А, Янагава Ю, Обата К, Фогт КЕ. Як зеркассаи махсуси интертеуронҳо мусоидат намудан ба допаминергияи функсияи амигдала миёнаравӣ мекунанд. Нейрон. 2005; 48: 1025 – 1037. [PubMed]
21. Гург ME, Sun X, Mangiavacchi S, Chao SZ. Стимуляторҳои психомоторӣ ва пластикии нейронӣ. Нейрофармакология. 2004; 47 (иловашуда 1): 61 – 79. [PubMed]
22. Хнаско Т.С., Перес Ф.А., Скоурас А.Д., Столл Е.А., Гейл С.Д. ва дигарон. Таъмини барқароркунии рекомбиназии миёнаравии допаминаи нитростриатал дар мушҳои нокофии допамин гипофагия ва брадикинезияро бозмедорад. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 2006; 103: 8858-8863. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
23. Soudais C, Laplace-Builhe C, Kissa K, Kremer EJ. Интиқоли афзалиятноки нейронҳо аз ҷониби векторҳои аденовируси канин ва интиқоли самарабахши онҳо дар vivo. FASEB J. 2001; 15: 2283 – 2285. [PubMed]
24. Сззипка М.С., Рейней М.А., Ким Д.С., Алайник В.А., Марк БТ ва дигарон. Рафтори ғизо дар мушҳои норасоии допамин. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 1999; 96: 12138-12143. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
25. Чжоу QY, Палмитер РД. Мышаҳои норасоии допамин ба таври шадид гипоактивӣ, адизикӣ ва аффикалӣ мебошанд. Ҳуҷайра. 1995; 83: 1197 – 1209. [PubMed]
26. Swerdlow NR, Braff DL, Geyer MA. Моделҳои ҳайвоноти дарвозаи носози сенсорҳои нокифоя: чизҳое ки медонем, чиро медонем, ки медонем ва умедворем, ки ба зудӣ хоҳем фаҳмид. Behav Фармакол. 2000; 11: 185 – 204. [PubMed]
27. LaLumiere ҶТ, Nawar EM, McGaugh JL. Модуляцияи мустаҳкамкунии хотира бо қабати амигдала ё ядрои accumbens ядрой фаъолсозии ретсепторҳои допаминро дар ҳарду минтақа талаб мекунад. Мемонед ёд гиред. 2005; 12: 296 – 301. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
28. Manago F, Castellano C, Oliverio A, Mele A, De Leonibus E. Нақши рецепторҳои допамин субтипҳо, D1 ва D2-монанд, дар дохили субрегҳои ядро афзоиш меёбанд, аслӣ ва қаблӣ, дар консолидатсияи хотираҳо дар канорагирӣ аз як монеа вазифа. Мемонед ёд гиред. 2009; 16: 46 – 52. [PubMed]
29. Rossato JI, Bevilaqua LR, Izquierdo I, Medina JH, Cammarota M. Допамин суботи нигаҳдории хотираи дарозмуддатро назорат мекунад. Илм. 2009; 325: 1017 – 1020. [PubMed]
30. Lammel S, Hetzel A, Hackel O, Jones I, Liss B, et al. Хусусиятҳои беназири нейронҳои mesoprefrontal дар дохили системаи допаминии дукаминаи мезокортиколимбии дугона. Нейрон. 2008; 57: 760 – 773. [PubMed]
31. Форд CP, Марк GP, Williams JT. Хусусиятҳо ва ҷилавгирӣ аз опиоидҳои нейронҳои допаминии mezolimbic вобаста аз макони мавриди ҳадаф фарқ мекунанд. J Neurosci. 2006; 26: 2788 – 2797. [PubMed]
32. Марголис Э.Б., Лок Ҳ, Чефер VI, Шиппенберг Т.С., Хҷелмстад GO ва дигарон. Опиоидҳои каппа ба таври интихобӣ нейронҳои допаминергияи ба сӯи кортекс пешбининашударо назорат мекунанд. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 2006; 103: 2938-2942. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
33. Марголис Э.Б, Митчелл Ҷ.М., Ишикава Ҷ., Ҳелмстад Г.О., Филдз Ҳ.Л. Нейронҳои миёнафраи допамин: ҳадафи пешбинӣ давомнокии эҳтимолии амал ва монеаи ретсепторҳои допамин D (2) -ро муайян мекунанд. J Neurosci. 2008; 28: 8908 – 8913. [PubMed]
34. McGaugh JL, McIntyre CK, Ҳокимият AE. Модуляцияи муттаҳидсозии хотираи амигдала: ҳамкорӣ бо дигар системаҳои мағзи сар. Neurobiol ёд Мем. 2002; 78: 539 – 552. [PubMed]
35. Попеску AT, Saghyan AA, Pare D. Мусоидат ба вобастагии пластикии кортикостриатал аз ҷониби амигдала. Proc Natl Acad Sci ИМА A. 2007; 104: 341-346. [Мақолаи ройгони PMC] [PubMed]
36. Розенкранз Ҷ.А., Грейс А.А. Модулясияи миёнарави допаминии потенсиалҳои амигдалаи бӯи ҳосилшуда ҳангоми хунуккунии павловианӣ. Табиат. 2002; 417: 282 – 287. [PubMed]
;