Реаксияи грелини (GHS-R1A) зиддимикробиҳои морфинро ҳис мекунад ва сатҳи пептитати окситиҳоро дар минтақаҳои мукофотӣ дар мушҳо (2015)

Дар акси ҳол, аксуламалҳои даврии мухаддироти нармафзор ба таври автоматӣ ба системаи допамини mesolimbic таъсир мерасонанд, сектори муҳими асосии муколамаи мукофоти ҷисми (Nestler, 2005). Ин таъсирот ба ақида, ақаллан дар қисмати таҳияи маводи нашъадор (Wise, 2004) пешниҳод карда шуданд. Маҳбусӣ дар асбобҳои тиббӣ ба шахс ва инчунин ҷомеа ва дахолати фармакологию эпидемиологӣ оварда мерасонад, ки ин мушкилоти асосии солимии ҷамъиятиро таъмин мекунанд (Koob ва Le Moal, 2001). Бо возеҳ намудани системаҳои огоҳкунӣ, ки ба қобилияти муомилоти маводи мухаддир барои фаъол кардани системаи допамини mesolimbic, стратегияи табиии табобат барои ихтилоли истифодаи маводи мухаддир муайян карда мешавад.

Тадқиқотҳо нишон медиҳанд, ки механизмҳои умумии невобиологӣ истеъмол ва истеъмоли маводи мухаддир ва маводи мухаддирро (Morganstern et al., 2011) танзим мекунанд ва пешниҳод мекунанд, ки нақши пептикҳои ғизоии таносули ғизоӣ-генетикӣ, ба монанди ghrelin мукофоти мукофотро дар бар мегирад. Аввалан, он нишон дод, ки греллин барои озод кардани ҳарду hormone (Туимо ва дигарон, 1999) ва дар шиша (Tschop et al., 2000) заҳролуд мекунад. То он вақт маълум аст, ки ghrelin истеъмоли озуқавориро афзоиш медиҳад, гуруснагӣ ва ҳамчунин ҳашаротро афзоиш медиҳад тавассути ноҳияҳои гипоталамикӣ (барои баррасӣ нигаред Egecioglu et al. (2011)). Илова бар гипоталамус, ретсепторҳои грелин (GHS-R1A) дар соҳаҳои марбут ба мукофот, ба монанди амигдала, стриатум, кортекси префронталӣ, минтақаи вентралӣ (VTA) ва гиппокампус (барои баррасӣ нигаред Энгел ва Джерлхаг (2014)) ифода ёфтааст, ки нақши физиологии грелин аз доираи танзими хомеостази энергетикӣ фаро мегирад. Дар ҳақиқат, пептиди орексигенӣ грелин ҳамчун як фаъолкунандаи системаи допамини mesolimbic ва инчунин танзимгари мукофот, ҳавасмандгардонӣ ва истеъмоли машрубот, никотин, амфетамин ва кокаин дар мушҳо нишон дода шудааст (барои баррасӣ нигаред Engel and Jerlhag (2014)).

Opioids, ба монанди дигар маводи мухаддир муомила, системаи допамини mesolimbicро фаъол мекунад, ки боиси тар нашудани допамин тавассути ки дар натиљаи эффекти њуљљатњои тригонометрї (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) ва дар VTA, бо сабаби кам кардани GABA -пайвандии нопокҳои допамин (Ҷонсон ва шимол, 1992). Илова бар ин, ресепторҳои κ-оптидидҳо фаъолияти фаъолияти допамини mesolimbic-ро танзим мекунанд (Шаҳрер ва дигарон, 2005, Spanagel et al., 1992). Нишондиҳандаҳои такрорӣ ба опозитҳо тағйироти мутобиқшавӣ аз якчанд нейрофизаторҳо, аз ҷумла пептитийҳои оптиоӣ, майдонҳои мукофотпазирӣ, ки ба рушди таҳқир (De Vries ва Shippenberg, 2002) мусоидат мекунанд. Дар каламушҳо фармакологияи эфирии GHS-R1A озодкунии таркиби допамении омехтаи мушакҳо, инчунин рафтори стереотипиро (Сусткова Фисерова ва дигарон, 2014) нишон медиҳанд. Мақсади қисми якуми силсилаи санҷишҳо ба таҳқиқи таъсири шадиди таъсири муқобили GHS-R1A antagonist, JMV2959, ба қобилияти морфин барои эффектҳои локомотивӣ, допаменти аккосӣ ва ба ҷои фарогирии макон дар фунт. Мақсади қисми дуюми ин тадқиқот ба арзёбии таъсири JMV2959 ё табобати греллин дар сатҳи пептитати этили (Met-enkephalin-Arg⁶Phe⁷ (MEAP), dynorphin B (DynB) ва Ли-энфалалин-Арг⁶ (LeuArg)) дар минтақаҳои марбут ба мукофотпазирӣ, аз ҷумла аммиакал, стриатор, кортеппа, витамин ва hippocampus.

Насли калонсолоне, ки мардони синтези пасандриявии синну солии NMRI (8-12 ҳафта ва 25-40 вазни бадан, Чарлз дарё, Sulzfeld, Олмон) истифода шуданд. Дар мухтасар, ҳамаи мушҳо гурӯҳе буданд, ки дар 12 / 12 давраҳои рӯшноӣ / торикӣ (чароғҳо дар ҳафт соат) нигоҳ дошта мешаванд. Об ва хӯрока хӯрдан (Ченаки оддии Ҳеллан Тотл, Норфол, Англия) дода шуд ad libitum, ба истиснои ҳолатҳое, ки таҷрибаҳои таҷрибавӣ доранд. Чорчӯбҳои нав барои ҳар як озмоиши оддии рафтор ва инчунин барои таҳлили пептитати этилити истифода шудаанд. Тадқиқотҳо аз ҷониби Кумитаи Этикии Шветсия оид ба чорводории чорводорӣ дар Гетстербург тасдиқ карда шуданд. Ҳамаи талошҳо барои кам кардани марги чорво ва кам кардани шумораи ҳайвонот истифода мешуданд. Ҳамаи ҳайвонҳо иҷозат дода шуданд, ки ҳадди ақал як ҳафта пеш аз оғози таҷрибаҳо мутобиқат кунанд.

Пеш аз омўзиши таҷрибаи корӣ ба воситаи мошин (0.9% sodium chloride solution) таркиб ёфтааст. Равғани рентгенӣ бо калий 20 mg / кг 10 min. Ин миқдор аз як вояи паст (10 мг / кг, ip) интихоб карда шуд, ки дар фунтсияи мо (stimulating data) намоиш дода нашудааст. Миқдори интихобшуда (6 мг / кг, ip) аз JMV2959 (ки дар Донишкадаи Би Биомолелес Max Maxuson (IBMM), UMR5247, CNRS, Montpellier 1 ва 2 Universities, Фаронса), GHS-R1A antagonist синтез муайян карда шудааст. на фишор ба фаъолияти лотерея, озодкунии допамини аккос ва имтиёз дар ҷои дар фунт (Jerlhag et al., 2009). JMV2959 дар мошин (0.9% ҳалли сулфиди натрий) ва ҳар як бегоҳ дақиқа пеш аз морфин ё бепарволӣ барои таҳлили сатҳи пептитати оптитики оптикӣ идора карда шуд. Миқдори интихобшудаи JMV2959 рафтори умумии мушакҳо дар ҳама гуна озмоишҳо таъсир нарасонид. Барои санҷишҳои рафтори JMV2959 аз тариқи тадқиқоти муосир нишон дода шудааст, ки вируси ягонаи JMV2959 мукофоти музмини доруворӣ (барои баррасии дидгоҳҳои Engel ва Jerlage (2014) оварда шудааст. JMV2959 дар муддати панҷ рӯзи минбаъда барои таҳлили пептитати оптикитиро барои тақвияти имконияти ошкор кардани таъсири манфии суборометалӣ идора карда шуд. Илова бар ин, бо тазриқи такрорӣ шумо бартараф кардани эҳтимолияти фишори фишори шадиди вирусӣ дар пепидҳо аз пешгирӣ мекунед. Хром гармидиҳӣ (Bronma, Шветсия) дар 0.9% хлориди натрийро бофта ва вояи интихобшудаи греллин (0.33 мг / кг, ip) пештар нишон дода шуд, ки дар функсияҳо (Jerlhag, 2008) оварда шудааст. Тарҳи ҳамаҷониба барои ҳамаи мушкилоти маводи мухаддир истифода шудааст.

Тадқиқоти пешакӣ нишон доданд, ки морфин боиси ҳавасмандгардонии лоторея дар хояндаҳо (виз ва бозгаштаро, 1987) меорад. Фаъолияти локомотив дар ҳашт овози заиф, вентилятсия ва фишурдашудаи локомотивҳо (420 × 420 × 200 мм, Кунсбакка Магт-Техер, Шопанд, Шветсия) ба қайд гирифта шудааст. Панҷум аз панҷ қатор чӯбҳои фотоэффектӣ, дар сатҳи ошёнаҳои коғаз, ташаккули фотоколл имконият медиҳад, ки системаҳои компютериро ба қайд гиранд, ки функсияро аз функсияҳо гузаронанд. Фаъолияти локомотивӣ ҳамчун миқдори ҷамъшудаи наворҳои нави photocell дар давраи давраи 60 қатъ карда шуд. Дар ҳамаи озмоишҳо мушакҳо ба қуттии фишори равонӣ имконият доданд, ки як соат пеш аз мушкилоти маводи мухаддир истифода баранд. Дар байни ягон гуруҳҳои табобатӣ ягон маълумоте вуҷуд надошт (тафсилот нишон дода нашудааст).

Дар силсилаи якуми таҷрибаи таъсири JMV2959 (6 мг / кг, ip) оид ба морфинӣ (20 мг / кг, ip) ҳавасмандкунии лотофораро тафтиш карда шуд. JMV2959 пеш аз морфин 20 идора карда шуд ва бақайдгирии фаъолият баъди даҳ дақиқа баъд аз табобати охирон оғоз ёфт. Ҳар як фосилаи як омехтаи табобат (автомобил / воситаҳои нақлиёт, JMV2959 / воситаҳои нақлиёт, морфин / мошин ё JMV2959 / морфин; n= 8 як омехтаи табобат) ва танҳо ба як таҷрибаи озмоишӣ гирифтор шуд.

Барои арзёбии таъсири JMV2959 дар натиҷаи таъсири боэътимоди морфин дар ҷавони нав, санҷиши имтиёз дар ҷои аввал дар филтрҳо (Jerlhag, 2008) гузаронида шуд. Дар кӯтоҳ, як дастгоҳи дуюми плостикии CPP, бо равшании 45 lx ва секунҷаҳои гуногуни визуалӣ ва зӯроварӣ истифода шуданд. Яке аз деворҳои сиёҳ ва сафед ва бо қабати торикии торикӣ муайян карда шуд, дар ҳоле, ки дигар қабати болоии чӯбдаст ва деворҳои чӯб чӯбдаст. Тартиб иборат аз пешакӣ (рӯзи 1), критерия (рӯзҳои 2-5), ва баъдтар (рӯзи 6) иборат буд. Дар шароити пешазинтихобот функсияҳо бо ранг ба воситаи пластикӣ рехта шудаанд ва дар палатаи бо дастрасии озод ба ҳар ду қисм дар давоми дақиқаи 20 барои муайян кардани ҷои аввал (ё тараф) интихоб карда шуданд. Шартдиҳӣ (20 дар як сессия) бо истифода аз расмҳои биологие, ки дар он маффин (20 мг / кг) бо қитъаи камтарини дилхоҳ ва воситаҳои нақлиёт бо муҳаққи бартарии ҷуфт карда шуд. Ҳамаи мушҳо ҳар як миқдори миффин ва ҳаракати воситаҳои нақлиётро ҳар рӯз ба даст гирифтанд ва тазоҳурот аз тарҳрезии субҳу шом дар тарҳрезии тавозун тағйир ёфтанд. Ҳангоми пас аз фосила муш (n= 16) бо JMV2959 (6 мг / кг, ip) ё ҳаҷми баробари ҳалли мусофирон ва сипас 20 баъдтар дар мобайнии байни ду қисмат ҷойгир карда шуда, дастрасии озод ба ҳар ду қисм барои 20 min (фароҳам овардани гурӯҳҳои табобатии зерин; Морф-Уэр ва Морф-JMV2959).

Ихтиёрӣ дар ҷои ҳодиса ҳамчун фарқияти% -и вақти умумии дар дорухона алоқамандяъне. на камтар аз таркиби) мӯҳтавои пас аз пӯшиш ва ҷаласаи қаблӣ.

Бо назардошти он, ки JMV2959 stimulating morphine induced-locomotor ва бартарии ҷои дар шароити дар муш, ки таъсири JMV2959 (6 мг / кг, ip) оид ба морфинӣ (20 мг / кг, IP) озодкунии допамини аккумулятор истифода бурда шуд дар вирус микробиализатсия дар физикаи озодона ҳаракат мекунад. Барои андозагирии сатҳҳои допамини иловагӣ, мушакҳо бо як микроотиви сислетӣ, ки дар атомҳои нуклеус ҷойгиранд, якбора якҷоя карда шудаанд. Аз ин лиҳоз, мушакҳо бо isofluran (Isofluran Baxter, Univentor 400 Anesthesia Unit, Univentor Ldt, Zejtun, Malta), дар чаҳорчӯбаи стереотикаи (Девел Копф, Тувунга, CA, ИМА) hypothermia. Xylocene adrenalin (5 μg / ml; Pfizer Inic; Ню-Йорк, ИМА) ҳамчун анестетасити маҳаллӣ ва carprofen (ipadum / xNUMX mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, Шветсия) барои истифода бурдани ҳар гуна эҳтимолият истифода шудааст. Лучаи сарпӯшшуда ошкор карда шуд ва як сӯрох барои тафтишот ва яке аз варақаҳои чархишкардашуда баста шуд. Тафтишот ба таври ҷудогона ба тарафи рост ё тарафи рости майна иваз карда шуд. Коэффитсиенти 5 мм дар муқоиса бо bregma, ± 1.5 lateral ба миёномада ва 0.7 дар поён аз рӯи сатҳи майнаи барои атомҳои nucleus (Franklin and Paxinos, 4.7) истифода шудааст. Масоҳати ошкоршудаи мембрана (1997 kDa бо od / id 20,000 / 310 μm, HOSPAL, Gambro, Лунд, Шветсия) аз 220 мм буд. Ҳамаи сегментҳои ҷарроҳӣ ду рӯз пеш аз озмоиш гузаронида шуданд. Баъди анҷом ёфтани ҷарроҳӣ дар моҳҳои тестӣ (Макронон III) дар қафаси инфиродӣ нигоҳ дошта мешуданд.

Дар санаи санҷиш санҷиш ба насоси микропрофизатсия (U-864 Syringe Pump, AgnThós AB) ва бо ҳалли Ringer бо суръати 1.5 μl / min такмил дода шуд. Пас аз як соат одат кардан ба микроградиализатсия, намунаҳои сафедкунӣ ҳар як 20 min ҷамъоварӣ карда шуданд. Дараҷаи допамина асосан чун миқдори се намунаи пай дар пайи пеш аз якуми маводи мухаддир / воситаҳои нақлиёт муайян карда шуд, ва афзоиши допамин аккопӣ ҳамчун афзоиши фоиз аз базаи ҳисобкардашуда ҳисоб карда шуд. Баъди намунаҳои ибтидоӣ (-40 min то 0 min), мушакҳо бо JMV2959 ё воситаҳои нақлиёти автомобилӣ (дар 0 min) ҷуброн карда шуданд, ки он бо миффин ё воситаҳои нақлиёти автомобилӣ (дар 20 min) буд. Баъд аз ин идораҳои мухаддир 8 адад иловаи минералии 20 ҷамъ шуданд. Ҷамъоварии гурӯҳҳои табобатӣ (n= 8 дар ҳар як гурӯҳ): автомобилӣ (автомобил), мошин-мӯрфин (Veh-Morph), JMV2959-мошин (JMV2959-Veh) ва JMV2959-морфин (JMV2959-Морф) таъсис дода шуданд.

Сатҳи допаменҳо дар селекторҳо бо HPLC бо муайянкунии электрохимиявӣ муайян карда шуданд. A Pump (Gyncotec P580A; Kovalent AB, V. Frölunda, Шветсия), сутуни мубодилаи оҳан (2.0 × 100 мм, Скандинавис ГенТек, Кангсбакка, Шветсия) ва як детектор (Антиген Лейден, Zoeterwoude , Нидерландия) бо ҳуҷайраи VT-3 (Antec Leyden) истифода бурданд. Мазмуни мобилӣ (pH 03), ки аз сентрони калий 5.6, микроби литр 10 mM, 200% EDTA, 200% MeOH, ки бо истифода аз филтр 10 μm мембрана (GH Polypro; Лаблаб Галлман Гемман; Лунд, Шветсия). Марҳилаи мобилӣ бо суръати ҳосилшудаи 30 м / дақиқа мегузарад, ки degrorer (Kovalent AB) дода шудааст ва таҳлил дар + 0.2 V оксид карда шуд.

Баъди таҷрибаҳои микробиализисҳо анҷом ёфтанд, мушакҳо қатъ карда шуданд ва сензурҳо бо ранги сафедии 6BX барои осон кардани маҳалчигии тафтишот такмил дода шуданд. Гандумҳо дар дастгоҳи vibroslice (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, UK) ва қисмҳои 50 μм буриданд. Ҷойгиршавии тафтишот бо мушоҳидаи маҷмӯӣ бо истифода аз микроскопи сабук муайян карда шуд. Мавқеи дақиқи таҳқиқот тасдиқ шуд ​​(Франклин ва Пахинос, 1997) ва танҳо мушакҳо бо ҷойгиркунии дуруст дар таҳлили оморӣ истифода шуданд.

Таъсири муолиҷаи JMV2959 дар сатҳҳои MEAP, DynB ва LeuArg дар соҳаҳои марбут ба мукофотҳо тафтиш карда шудаанд. Фариштаҳо бо JMV2959 (6 мг / кг, ip, n= 8) ё ҳаҷми баробари воситаи нақлиёт (ip, n= 8) барои панҷ рӯзи оянда. 20 min-ро пас аз насб кардани охирин мушакҳо қурбонӣ карда, девҳо аз ин мушҳо ҷамъ шудаанд. Фариштаҳои алоҳида бо греллин (0.33 мг / кг, ip, n= 8) ё ҳаҷми баробари воситаи нақлиёт (ip, n= 8) барои панҷ рӯзи оянда. Дар давоми панҷ дақиқа баъд аз насб кардани охирин мушакҳо қурбонӣ карда шуд ва деворҳо аз ин мушҳо ҷамъ шуданд. Киштиҳои амғадела, стриатор, кептитаҳо, VTA ва hippocampus зуд пошида шуданд ва фавран ба яхбандии хушк кашида шуда, пас аз коркарди минбаъда - 80 ° C нигоҳ дошта мешаванд.

Просессорҳои генеогенезӣ ва пептитатӣ тартиботи стандартӣ, ки пештар дар тафсилот тавсиф шудаанд (Nylander et al., 1997). Дар кӯтоҳ, (95 ° C) кислотаи антикӣ (1 M) ба намунаҳои яхкардашуда илова карда шуд. Тайёркуниҳо дар як ванна об (95 ° C) барои минералҳои 5, дар яхбандӣ сард шуданд ва баъд бо Branson Sonifier (Danbury, CT, USA). Дар таркиби 95 ° C дар 5 ° C ва 15 × дар Минаногенге дар 4 ° C барқарор карда шудg дар маркази Бекман GS-15R centrifuge (Fullerton, CA, ИМА). Эзоҳҳо мувофиқи тартиби пештар тартиб додашуда (Nylander et al., 1997) тоза карда шуданд. Ду фраксияҳо ҷамъоварӣ шуданд: ҳиссаи III (Leu-Arg ва MEAP) ва фраксияи V (DynB). Санҷишҳо дар як маркази санҷишӣ (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA USA) ва дар таркиби (-20 ° C) то таҳлили пептитаҳо нигоҳ дошта шудаанд.

Дараҷаи immunoreactive (IR) сатҳи ДМБ, LeuArg ва MEAP таҳлил карда шуданд, ки радио канализатсияҳо таъсис ёфтаанд ва протоколҳо дар ҷузъиёти дигар ҷойгир шудаанд (Nylander et al., 1997). Дар санҷиши DynBB, гепатити зидди равған IgG (GARGG; Bachem, Bubendorf, Швейтсария) барои ҷудо кардани peptide озод ва антибиотик истифода шудааст. Antiserum Dynamics (113 +) дар охири охирини 1: 600000 истифода шуд. Re-reactivity with Dynasty бузург 100% ва бо DynB (1-29) 1% буд. Ҳарду аксуламал бо дигар пептитидҳои оптикӣ мушоҳида карда шуданд. Дар таҳқиқоти LeuArg ва MEAP, барои ҷудо кардани пептитаҳо озод ва антибиотик пайваст карда шудааст. Барои муқоисаи LeuArg antiserum (91: 6D +, 1: 60000), миқдори реаксия аз 0.01% барои Leu-enkephalin ва MEAP, 0.02% барои DynB, 0.04% барои DynA, ва 0.08% барои alpha-neoendorfin. Насосии MEAP: 90: 3D (II) дар натиҷаҳои ниҳоии 1: 160 000 истифода шуд. Бар зидди реаксия бо Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg⁶, Met-enkephalin-Arg⁶Гли⁷Ле⁸, Лю-Аннфалал ва Ли-энфалалин-Арг⁶ <0.1% буд

Таъсири асосии муолиҷаи муолиҷа дар фаъолияти ферментерӣ дар функсия баъди идоракунии системаҳои морфин (20 мг / кг) ва JMV2959 (6 мг / кг) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 барои Veh-Veh, JMV2959-Veh, JMV2959-Морф ва n= 7 барои Vehm-Morph). Чӣ тавре ки дар он нишон дода шудааст Тасвири 1A, таҳлили poshoc нишон дод, ки пеш аз табобат бо як мутаносиби JMV2959 (P<0.001) ҳавасмандгардонии локомотории морфинро ба таври назаррас коҳиш дод (P<0.01 Вех – Вех vs Уолл-Морф). Миқдори интихобшудаи JMV2959 ба фаъолияти потомолет нисбат ба табобати воситаҳои нақлиёт таъсири манфӣ надоштP> 0.05). Дар функсияҳои муши паррондашуда ва мушҳои JMV2959-morhpine,P> 0.05).

  

Тасвири 1

GHS-R1A antagonist JMV2959 stimulates the morphine-stimulated lymphomotor, release dopamine accumbal and preference place in the mouse. (A) Морфин ба сабаби заҳролудшавии лотерея (20 мг / кг) аз як воҳиди яквақтаи JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7-8 дар ҳар як гурӯҳ; **P<0.01, ***P<0.001 ANOVA яктарафа ва пас аз санҷиши Post-hoc Bonferroni). (B) Афзалияти ҷойгоҳи ҳолати морфин (20 мг / кг ip) (CPP) тавассути тазриқи шадиди ягонаи JMV2959 (6 мг / кг ip) дар мушҳо суст карда шуд (n= 8 дар ҳар як гурӯҳ, *P<0.05, t-озмоиши ҷуфтшуда). (C) Аввалан мо таъсири назарраси морфинро нишон додем (20 мг / кг ip) барои афзоиши допамин нисбат ба табобати автомобил (фосилаи вақт 40-180 дақ (P<0.001), Вех – Вех vs Уолл-Морф). Чуноне, ки дар (C) пешакӣ бо JMV2959 (6 м mg / кг) нишон дода шудааст, афзоиши морфин ба афзоиши допамини муқоиса бо муолиҷаи нақлиёти автомобилӣ дар вақти муайяншудаи 40-100 ва 140-180 min (^##P<0.01, ^###P <0.001, JMV2959-Morph дар муқоиса бо табобати Veh – Morph). Миқдори интихобшудаи JMV2959 дар муқоиса бо табобати мошин дар ҳама гуна фосилаи вақт ба рехтани допамини аксулбалӣ таъсири назаррас надошт (P> 0.05, Вех-Вех vs Ҷумхурии Тоҷикистон. JMV2959 кам карда шуд, вале пурра қатъ карда нашуд, маффин ба таркиби допамини допамен дар вақти фосилавӣ 2959-60 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph дар муқоиса бо табобати Veh – Morph). Тирҳо нуқтаҳои вақти тазриқи JMV2959, мошин ва морфинро нишон медиҳанд. Маълумот бо ANOVA дуҷониба таҳлил карда шуда, пас аз санҷиши Post-hoc Bonferroni (n= 8 дар ҳар як гурӯҳ). Мошин (Майдони), Уил-Морф (ранг), JMV2959-Vehicle (Triangle), JMV2959-Морф (доира). Ҳамаи арзишҳо маънои "SEM" -ро ифода мекунанд.

Дидани акс Image | View Hi-Res Image | Download PowerPoint Slide

Аввалин шартҳои морфинӣ (МНХММ / ММДМ) (ММФМН) (Морф-Уил) preference ҷойгир аст, ки аз ҷониби як муолиҷаи шадиди шамолаки JMV20 (2959 мг / кг) (Морф-ҶмVXНUMX) дар рӯзи баъди пошхӯрӣ (P= 0.025, n= 8 дар ҳар як гурӯҳ; Тасвири 1$ B).

Сатҳи микроэдиализатсияи аккумулятори Допамен дар функсия таъсири асосии табобатиро ошкор намуд (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), вақт F(11,308) = 7.05, P<0.0001) ва табобат × ҳамкории вақт (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (Тасвири 1C; n= 8 дар ҳар як гурӯҳ). Морфин озодкунии допамини паҳншавии воситаҳои нақлиёне, ки дар муддати вақт 40-180 (P<0.001). Чӣ тавре ки дар Тасвири 1C ин таъсир бо пеш аз табобат бо JMV2959 дар фосилаи вақт 40-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) ва 160-180 дақиқа (P<0.001). JMV2959 коҳиш дод, аммо пурра маҳдуд нашуд, морфинро аз допамини аккумбалӣ ба вуҷуд овард, зеро байни табобати автомобил ва табобати JMV2959-морфин дар фосилаи вақти 60-80 фарқият вуҷуд дошт (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) ва 160 дақ (P<0.05). Миқдори интихобшудаи JMV2959 дар муқоиса бо табобати мошин дар ҳама гуна фосилаи вақт ба рехтани допамини аксулбалӣ таъсири назаррас надошт (P> 0.05).

Таҳқиқоти мазкур фарзияи минбаъдаро дар бораи нақши физиологии пептиди орексигении танзими мукофотро дар бар мегирад. Дар ҳақиқат, мо нишон додем, ки маъмурияти канории як антагонисти GHS-R1A қобилияти морфинро барои ба вуҷуд овардани ҳавасмандгардонии локомотив афзоиш медиҳад, сатҳи допаминро дар NAc афзоиш медиҳад ва афзалияти ҷои шартиро дар мушҳо баланд мекунад. Мо инчунин дарёфтем, ки зер-музмин JMV2959, аммо грелин нест, табобат сатҳи матоъҳои бофтаи MEAP-ро дар VTA, DynB дар гиппокампус ва LeuArg дар стриатум афзоиш дод, ки далели аввалини он аст, ки қобилияти сигнализатсияи грелин барои танзими тақвият метавонад пептидҳои опиоидро дар бар гирад. .

Маълумотҳои дар ин ҷо овардашуда нишон медиҳанд, ки зиддияти GHS-R1A ба қобилияти морфин барои фаъол сохтани системаи допамини mesolimbic дар мушҳо таъсир мерасонад. Мутобиқи бозёфтҳо, нишон медиҳанд, ки JMV2959 қобилияти морфинро барои баланд бардоштани сатҳи ҳуҷайраҳои допамини аксбалбалӣ ва боиси рафтори стереотипӣ дар каламушҳо мекунад (Сусткова-Фисерова ва дигарон, 2014). Бо дастгирӣ, маъмурияти марказии грелин нуқтаи рахнашавандаро афзоиш медиҳад, аммо шумораи прессҳои фишангии фаъолро дар ҷадвали тақвияти таносуби тақвият дар каламушҳо худидоракунии героин, (Maric et al., 2012). Мубоҳисае, ки сигнали грелин ба вобастагии нашъамандӣ асос ёфтааст, бозёфтҳо нишон медиҳанд, ки JMV2959 истеъмолро коҳиш медиҳад ва инчунин ангезаи истеъмоли машрубот дар каламушҳо ва амфетамин, кокаин ва никотин аз ҷониби антагонизмҳои GHS-R1A дар хояндаҳо баста мешаванд ( барои баррасӣ нигаред Engel and Jerlhag (2014)) ва полиморфизмҳо дар генҳои марбут ба грелин бо истеъмоли машрубот, тамокукашӣ ва амфетамин алоқаманданд (барои баррасӣ нигаред Engel and Jerlhag (2014)).

Бозёфтҳои ҳозира бо зиёдшавии сатҳи пептидҳои опиоид дар striatum, VTA ва гиппокампус пас аз табобати суб-музмини JMV2959 бори аввал таъсири мутақобилаи байни пептидҳои опиоид ва сигнализатсияи грелинро нишон медиҳанд. Обиоидҳои эндогенӣ ба таъсирҳои рӯҳбаландкунанда на танҳо аз афюнҳо, балки дигар маводи мухаддир оид ба сӯиистифода ва фоидаи табиӣ, ва дар равандҳои мутобиқшавӣ пас аз гирифторшавӣ ба маводи мухаддир дида мешаванд (Триго ва дигарон, 2010, Ван Ри ва дигарон, 2000). Дар ҳақиқат, фаъолияти системаи допаминии mezolimbic бо опиоидҳои эндогенӣ дар сатҳи VTA ва NAc (Хирос ва дигарон., 2005, Spanagel et al, 1992) танзим карда мешаванд ва амалҳо мустақим ё ғайримустақим нишон дода шудаанд. тавассути модуляторҳои дигар интиқолдиҳандаҳо (Charbogne et al., 2014).

Мо дар ин ҷо дарёфтем, ки табобати зер-музмин JMV2959 сатҳи MEAP-ро дар ВТА зиёд кард. MEAP танҳо аз проенкефалин гирифта шудааст ва ҳамчун аломати пептидҳои проенкефалин, ки асосан рецепторҳои δ-опиоидро фаъол мекунанд, истифода шудааст. Мо фарз мекунем, ки сатҳи зиёдшудаи MEAP эндогенӣ дар VTA пас аз табобати JMV2959 метавонад қобилияти морфинро барои коҳиш додани GABA-ибратбахши нейронҳои дезаминҳои допаминҳо (Ҷонсон ва Шимолӣ, 1992), ки метавонад ба коҳиш ёфтани таъсироти морфинӣ, ки пас аз дидан мумкин аст, пешгирӣ кунад. JMV2959. Дастгирифта, GHS-R1A дар интернатураҳои GABAergic дар VTA ҷойгир карда мешаванд (Abizaid et al. 2006). Ғайр аз он, таҳқиқоти қаблӣ нишон доданд, ки инфузияи дохили VTA аз JMV2959, тавассути механизмҳои номаълум, аттенуатсияҳои мукофоти ангезандаи грелин (Jerlhag et al., 2011) ва инчунин истеъмоли сахароза дар таркиби грелин дар миёнаравӣ (Skibicka et al, 2011) пешниҳод мекунанд, ки барои танзими мукофотҳо ventral tegramal GHS-R1A муҳиманд. Дастгирии чунин ихтилоф хулосаҳое мебошанд, ки дигар пептидҳои танзими гуруснагӣ, ба монанди галанин ва орексин, хусусиятҳои фоиданок доштани морфин мебошанд тавассути механизмҳои маҳаллӣ дар дохили VTA (Narita et al. 2006, Richardson and Aston-Jones, 2012).

Дар стриатум мо дарёфтем, ки зер-музмин JMV2959 сатҳи ирри LeuArg-ро баланд бардошта, ба он ишора мекунад, ки қобилияти JMV2959 барои ба даст овардани афзалият ба ҷои морфин, ки тавассути шароити морфин вобаста аст, рехтани допамин ва ҳавасмандгардонии локомотив, ҳадди ақал қисман аз такмили афзоянда вобаста аст δ- фаъолияти ресепторҳои опиоид. Сатҳи зиёдшудаи LeuArg метавонад аз табдил ёфтани ферментативии пептидҳои динорфин ба энкефалинҳо ё барориши мустаҳкамшудаи Dyn дар NAc ҳамчун аксуламал ба зиёдшавии допамин ва пас аз он таназзул дар LeuArg. Ҳарчанд таҳқиқоти қаблӣ нишон доданд, ки фаъолияти системаи допаминии mezolimbic танзим карда мешавад тавассути Рецепторҳои амрикоӣ дар NA (Spanagel et al. 1992) ва ретсепторҳои ҳосилкардашуда ба реополяторҳо мусоидат мекунанд ва рентгенҳоеро, ки дар таркиби онҳо мавҷуданд, дар бар мегирад ва ба онҳо таъсир мерасонад, ки онҳо дар НА (Нерӯ ва диг., XNUMN), Нормандияро ба кор меоранд. нишон диҳед, ки JMV2005 сатҳи Ir DynB-ро дар striatum тағир медиҳад. Аз ин рӯ, таҳқиқоти минбаъда оид ба пептидҳои продинорфин барои муайян кардани робитаи байни антагонизми GHS-R2959A ва динорфинҳо кафолат дода мешаванд.

Дар таҳқиқоти мазкур, инчунин нишон додем, ки табобати JMV2959 сатҳи ҳипокампал DynB-ро ба таври назаррас баланд мекунад. Грелин зичии хотираро ва инчунин ташаккули сутунмӯҳра афзоиш медиҳад, потенсиали дарозмуддатро тавлид мекунад ва осоншавии хотираро фароҳам меорад тавассути hippocampal GHS-R1A дар хояндаҳо (Carlini et al. 2010, Diano et al., 2006). Ғайр аз он, мушҳои GHS-R1A хотираи фазоии беҳтарро дар озмоиши лабиринти Моррис ва хотираи вайроншудаи контексти парадигма дар муқоиса бо мушҳои навъи ваҳшӣ нишон медиҳанд (Албарран-Зеклер ва дигарон, 2012). Пептидҳои динорфин, аз ҷумла DynB, дар гиппокампус фаровон мебошанд ва онҳо эҳтимолияти дарозмуддатро ба эътидол меоранд (Чавкин ва дигарон, 1985, Вагнер ва дигарон, 1993) ва инчунин омӯхтани фазоии фазо дар каламушҳо (Сандин ва дигарон, 1998). Аз ин рӯ, мо фарз дорем, ки antagonist GHR-R1A метавонад хотираи мукофотро бо роҳи манъ кардани потенсиали дарозмуддати иппокампал беҳтар кунад тавассути фаъолсозии DynB. Дар маҷмӯъ, ин маълумот механизми потенсиалии навро фароҳам меорад, ки тавассути он JMV2959 тавассути Пептидҳои опиоид метавонад тақвиятро тағир диҳанд. Бо вуҷуди ин, ретсепторҳои опиоид дар майна ба таври васеъ паҳн карда мешаванд, ки ба он ишора мекунад, ки дигар соҳаҳое, ки ба ин таҳқиқот дохил карда нашудаанд, метавонанд дар мукофоти тавассути морфин танзимшудаи GHS-R1A иштирок кунанд. Масалан, истеъмоли ғизо тавассути ангеза ва фишордиҳӣ барои сахароза тавассути маъмурияти марказӣ ё дохили дохили гипоталамикии як антагонисти ретсепторҳои опсиоидҳо (Ромеро-Пико ва дигарон, 2013) кам карда мешавад. Бо вуҷуди ин, нақши пептидҳои опиоид дар дигар соҳаҳо дар таҳқиқоти оянда бояд равшан карда шавад.

Лигандҳои эндогении м-ретсепторҳо, эндоморфинҳо ва бета-эндорфин дар ин ҷо таҳлил карда нашудаанд, бинобар ин мо таъсири эҳтимолии JMV2959-ро ба ин пептидҳо истисно карда наметавонем. Дар ҳақиқат, хосиятҳои барҷастаи морфин ба ретсепторҳои мк-опиоидҳо дар ВТА ва инчунин NAc (Хирос ва дигарон, 2005, Ҷонсон ва Шимолӣ, 1992, Murakawa et al. 2004, Yoshida et al., 1999) дохил мешаванд. Бо вуҷуди ин, як антагонисти м-ретсептор истеъмоли ғрелинро ба бор меоранд (Налеид ва дигарон, 2005) ва инчунин ангезиши локомотивҳои англрин ва ангезиши допамин (Jerlhag et al., 2011), ки қобилияти GHSR- Антагонисти 1A барои танзими мустаҳкамкунӣ м-ретсепторҳоро дар бар намегирад. Аз тарафи дигар, JMV2959 пептидҳои опиоидро, ки аз проенкефалин ва продинорфин ҳосил шуда буданд, нишон дод, ки онҳо метавонанд ба таъсире, ки аз ҷониби антагонистҳои GHSR-1A оварда шудаанд, иштирок кунанд.

Ҳангоме ки таҳқиқоти қаблӣ нишон доданд, ки маъмурияти системавии грелин боиси подош (Jerlhag, 2008) мегардад ва инчунин хосиятҳои фоиданоки доруҳои вобастаро баланд мебардорад (барои баррасӣ нигаред ба Энгель ва Jerlhag (2014)), мо дар ин ҷо нишон медиҳем, ки табобати зергрелини грелин тағйир наёфт сатҳи сатҳҳои бофтаи опиоидҳои пептидҳо дар ҳама соҳаҳои марбут ба мукофоти омӯхташуда. Идоракунии системавии грелин ифодаи c-fosро дар минтақаҳои гипоталамикӣ фаъол мекунад, аммо на дар минтақаҳои мезолимбӣ ва иппокампалӣ (Пирник ва дигарон, 2011) ва пайвастани флуоресцентсия бо нишон додани грелин танҳо ба нейронҳои танзимкунандаи хӯрокаи гипоталамус маҳдуд аст (Schaeffer et al, 2013) ). Якҷоя бо бозёфтҳое, ки грелинро, ки аз микроэлементҳои гипоталамус хориҷ карда шудаанд, дар минтақаҳои амиқтари пас аз идораи грелини перифералӣ ошкор кардан имконнопазир аст (Фурн ва дигарон, 2011, Гроусел ва дигарон, 2008, Sakata et al. 2009) ), эҳтимолияти фаъол кардани системаи мукофотонии грелинро баланд мебардорад тавассути механизмҳои бавосита новобаста аз опиоидҳои эндогенӣ. Рафъи допамин аз ҷониби грелин, ки тавассути гамбулин ворид карда шудааст, сигнали болоии орексигении гипоталамикиро талаб мекунад (Коне ва диг., 2014), маъмурияти ғрелини периферӣ истеъмоли машруботро дар мушҳо тағир намедиҳад (Лион ва дигарон, 2008) ва безараргардонии грелини периферӣ спиртро ба бор намеорад. -Мукофоти фоидаовар дар истеъмоли мушҳо ё машруботи спиртӣ дар каламушҳо (Jerlhag et al., дар матбуот). Эҳтимолияти зиёдкунии маъмурияти субронархии грелин, сатҳи сатҳҳои бофтаи опсиоидҳои пептидҳоро бояд ба назар гирад, аммо ин бояд дар таҳқиқоти оянда ба таври муфассал таҳқиқ карда шавад.

Қобилияти маводи мухаддир ба вобастагӣ ба ҳавасмандкунӣ, рехтани допамин ва ба вуҷуд овардани афзалияти ҷои мувофиқ бо зичии мустаҳкамкунии доруҳои вобастагӣ зич алоқаманд аст ва ин параметрҳо қисми ҷараёни вобастагиро ташкил медиҳанд (Wise, 2004). Бо дарназардошти он ки мо дар ин ҷо дарёфтем, ки JMV2959 ин параметрҳои мукофотро дар мушҳо тақвият медиҳад, мо гумон мекунем, ки GHS-R1A метавонад дар ҷараёни нашъамандӣ нақши муҳим дошта бошад ва опиоидҳои эндогенӣ дар ин равандҳо иштирок мекунанд. Ин маълумотҳо дар маҷмӯъ нишон медиҳанд, ки антагонистҳои GHS-R1A ҳамчун табобати вобастагӣ аз маводи мухаддир бояд муайян карда шаванд.

JE ва EJ бо грантҳои Шӯрои Тадқиқотии Шветсия (Грант №. 2011-4646, 2009-2782 ва 2011-4819), бунёди мағзи сари Шветсия, LUA / ALF (Гранти № 148251) аз беморхонаи Донишгоҳи Сахлгренска, Алкогол дастгирӣ карда мешавад Шӯрои таҳқиқотии монополияи фурӯши алкоголияи Шветсия ва пояҳои Адлербертско, Фредрик ва Ингрид Тюринг, Торе Нилссон, Ленгманска, Торстен ва Рагнар Сёдерберг, Вилҳелм ва Мартина Лундгрен, НовоНордиск, Кнут ва Алис Уолленберг, Магнус Бергвалл, Ане, Андерберг, Ане, Андерс, Верб, Андерс, Уенс, Андерс, Уенс, Андерс, Уенс, Андерс ва Анебс , Ҷамъияти тиббии Шветсия, Ҷамъияти таҳқиқоти тиббии Шветсия ва Бунёди тадқиқоти психиатрияи Гетеборг. Шӯрои тадқиқоти алкоголизми монополияи фурӯши машруботи спиртӣ ва Шӯрои тадқиқотии Шветсия (K2012-61X-22090-01-3) IN дастгирӣ мекунад. Манбаъҳои маблағгузорӣ дар тарҳрезии таҳқиқот, ҷамъоварӣ, таҳлил ва тафсири маълумот, навиштани гузориш ва қарор оид ба интишори маълумот нақше доштанд.