(ሂውማን) ለፈንዳክ ዕጢዎች ባህሪ እና መዋቅራዊ ምላሾች (ፈንጅ) ለግብረ-ምጣኔ ሃላፊነት አስፈላጊነት (Fool B) እና የካልሲየም / ካልሜዲን-ጥገኛ ፕሮቲን Kinase II በኒውክሊየስ አክቲንስስ (2013)

በ "ኒውክሊየስ አክሰንስ" (ኤን.ኤ.ሲ) (ኒውክሊየስ አክሰንስ) (ኒከስ ክሬቲን) (ናሲ) ውስጥ የፀሐይ ንፅፅር (ፕሮቲን) ፐርሰንት / አል-ፈትሮዲን-ተከላካይ የሆነ ፕሮቲን ኪይነስ II (ካሜኪን) በካይኒን ወይም በሌሎች የስነልቦና መድሃኒቶች አደገኛ ዕፆች ውስጥ ይከሰታል. . ምንም እንኳ ΔFosB እና CaMKIIa ሁለቱም AMPA የ glutamate ተቀባይ ተቀባይ አገላለጽ እና በ NAC ውስጥ የሚቆጣጠሩት ቢሆንም, በኤን ሲ መካከለኛ ስፒል ሴልዮን (MSN) ላይ ያለው የዲንችላስቲክ ክር ማከድን እና ኮኬይንን ወደ ኮኬይን ማነቃነቅ (sensitization) ማዞር, እነዚህን ሞለኪውሎች መካከል ቀጥተኛ ግንኙነት አልተደረገም. እዚህ ላይ, ΔFosB በፕሮቲን-ማረጋጊያው Ser27 ላይ በኬሚካII ውስጥ በፒስፒላሎዝ የተቀመጠ ሲሆን, CaMKII ኮኬይን-ተኮር ክምችት ΔFosB በ rat nc ውስጥ የሚፈለግ.

በተቃራኒው, ΔFosB የኬሚካዊ የጂን ንቃተ-ሕዋስ በ vivo ውስጥ ለኮኬይ ኢንች (ኢንዛይነር) መኖሩ አስፈላጊ እንደሆነ እናረጋግጣለን.₁-የ MSN ን በ NAc ሼል ንዑስ ክፍል ውስጥ.

በተጨማሪም, በኤን ሲ ኤስ ኤም ኤስ ላይ የዱር ነጠብጣብ ቅልጥፍና እና የ ΔFosB ከመጠን በላይ ተጋላጭነት ባህሪው ለኮከኒን መጨመር ሁለቱም CaMK II ጥገኛ ናቸው.

ከሁሉም በላይ, በ NAC ውስጥ በ ΔFosB እና CaMKII ለመጀመሪያ ጊዜ መነሳት እናሳያለን የሰዎች የኮኬይን ሱሰኞችለወደፊቱ ለወደፊት ሕክምናው ሊደረስባቸው የሚችሉ ግምቶችን ይጠቁማል. እነዚህ መረጃዎች ΔFosB እና CaMKII በአደገኛ ኬኮች ላይ የአንጎል ሽልሽት ወዘተ ለመቆጣጠር ቁልፍ ዘዴ እንደ ሴል-ዓይነት እና አንጎል-ተኮር የሆነ አወንታዊ የምግብ አዘገጃጀት አካል ናቸው.

መግቢያ

ተጨማሪ ማስረጃዎች በጂን ልውውጥ ለውጦች የአደገኛ ዕፅ ሱሰኝነት ላይ የሚያደርሱትን አመለካከት ይደግፋል (ሮቦንና ናስለር, 2011). የእነዚህ ለውጦች አንድ ወሳኝ አስታራቂ ΔFosB, ፎos የቤተሰብ የዘመናት ማስረጃ (Nestler, 2008). በማንኛውም የአደገኛ መድሃኒት ዘመናዊ ስርዓተ-ነገር ስር ያሉ ዘመናዊ አሰራሮች ዘላቂ የሆነ የ ΔFosB ክምችት በኒውክሊየስ አክሰንስንስ (ኤን.ኤ.ሲ), ለችሎታ ባህሪያት ወሳኝ የሆነውን ህብረትን ያመጣል. Sኢንሳይክሽን የ D1 dopamine መቀበያዎችን የሚገልጽ የ NAC መካከለኛ ስፒል ኒውሮን (ኤም.ኤስ) ለየት ያለ ነው. በ D1-type NAC MSN ውስጥ የማይታየው የ ΔFosB ሎልተፊክ ተጓዦች እና ለኮኬይን እና ለሞምፊን የሚሰጡ መልሶችን ይደግፋሉ (Kelz እና ሌሎች, 1999; Zachariou et al, 2006), የኮኬይን የራስ እራስ አስተዳደርን ጨምሮ (ኮልቢ እና ሌሎች, 2003). በተጨማሪም, የ ΔFosB የጨዋታ ዝውውር የጂን ወይም የቫይራል እገዳ እነዚህ መድሃኒቶች ውጤታማ ሽፋንን ይቀንሳል (Zachariou et al, 2006), ይህም ዘላቂ የሆነ የአደገኛ መድሃኒት አስተዳደር (ኤክስኤፍኤስ) መኖሩን የሚያረጋግጥ ዘላቂ ለውጦች ወሳኝ አስታራቂ መሆኑን ያሳያል..

ያልተለመደው የ ΔFosB መረጋጋት (ከ Fos የቤተሰብ ፕሮቲኖች አንጻር አንጻር) የሁለቱም የውስጥ ሞለኪውል ንብረት ነው, ምክንያቱም በውጤታማነት FOSB (ኤፍ.ሲ.ኤስ.ካርሌ እና ሌሎች, 2007), እና ቁጥጥር የተደረገበት ሂደት. ΔFosB ፎስሎፕላሪዝም ነው በብልቃጥ ውስጥ ና Vivo ውስጥ በ Ser27, እና ይህ ተጨባጭ ሁኔታ ΔFosB, ~ 10 fold, በእሴድ ባህል እና በ NAc Vivo ውስጥ (Ulery-Reynolds et al, 2009). ምንም እንኳን Ser27-ΔFosB ለካልሲን kinase-2 በብልቃጥ ውስጥ (ኡ. ኡ. Et al., 2006), የእሱ ስልት Vivo ውስጥ ፎፎሎሪዝሊቲዝም አይታወቅም.

ካልሲየም / ረጋዲዮዲን-ተከላካይ የሆነ ፕሮቲን ኪይነስ II (CaMKII) እጅግ በጣም የተገልጸው ሰርታይን / ቲሮኖኒን ኪኔዝ ሲሆን እሱም α እና ß Isoforms የሚባሉት ዲዮዶክሰራዊ እና ሆቴሮ-ሆኖኒዜሞች Vivo ውስጥ, እና ለበርካታ የንጽሕና አይነቶች አስፈላጊ ናቸው (ሊንማን እና ሌሎች, 2002; ኮሉምራን እና ብራውን, 2004). ሲሚኬይካ በከባድ አምፊቲሚን በኬካ ሼል ውስጥ በጥንቃቄ ተመርጧል (ሎቴስ እና ሌሎች, 2010) እና የኬሚካሌክ ኬሚካሉ እንቅስቃሴ በኬኬክ መከላከያ መድሃኒት (ማከሚያ) ላይ የባህሪ ማነቃቂያ ወደ አምፊሚንሎቴስ እና ሌሎች, 2008) እና ኮኬይን (Pierce እና ሌሎች, 1998), በዚህ NAC ክልል ውስጥ የሲኤም ማኪን በቫይረክሲዮክሳይድ መጨመር የመሬት መንሸራተቻነት ማነቃነቅን እና እራስን በማስተዳደር የአምፋጥሚንሎቴስ እና ሌሎች, 2010). CaMKIIα የአመጋገብ ስርዓት (የ AMPA) የ glutamate ተቀባይ ተቀባይ ንዑስ ክፍልPierce እና ሌሎች, 1998), የ CaMKIIα እንቅስቃሴ እንደመሆናቸው ከረዥም ጊዜ በፊት ከኤኤፒኤፍ ተቀባይ ተቀባይ ተግባራት ጋር ተያይዞ ሲነፃፀር እና በተመጣጣኝ የኑሮ ፕላስቲክ (ኒዮፕላፕቲክ)ማሊኖው እና ማሌንካ, 2002).

ይህ ስነ-ጽሁፍ በ ΔFosB እና CaMKII መካከል ያሉ ተመሳሳይነት ያላቸውን ሁለንተናዊ ትስስር ያሳያል: የሁለቱም የአደገኛ መድሃኒቶች ውጤት ባህሪያት እና አስፈላጊ ናቸው, ሁለቱም የነርቭ ሴል ዓይነቶች Vivo ውስጥ (ጆርዲን እና ሌሎች, 2003; ሚዛልና ሌሎች, 2010), እና ሁለቱም ቢያንስ አንዳንድ የጠባይ ውጤቶቻቸውን በአፒኤፍ ኤፒአይፕKelz እና ሌሎች, 1999; ማሊኖው እና ማሌንካ, 2002; Vialou እና ሌሎች, 2010). እነዚህ መመሳሰሎች ቢኖሩም, በ ΔFosB እና CaMKII መካከል ምንም ግንኙነት የለውም. እነሆ, እኛ ΔFosB እና CaMKII መካከል ወንፈል, ደንብ ለመመስረት, እና ሁለት ፕሮቲኖችን ኮኬይን በመስጠጥ እና ኮኬይን ምላሾችን ክልል ይቆጣጠራል ነው NAc ሼል ውስጥ D1-አይነት MSN-ተኮር ምግብ-ወደፊት ሉፕ እንዲመሰርቱ መሆኑን ለማሳየት Vivo ውስጥ.

መሄድ:

ቁስአካላት እና መንገዶች

ሙከራ 1: iTRAQ ፕሮቲሞላዊ ትንተና ከካ!ምስል 1A)

አዋቂዎች (8 ሳምንታት) ተባዕት አይጥክሶች ለሰባት ቀኖች አንድ ቀን በቀን አንድ ጊዜ ኮርፖሬሽኖች ወይም የጨው ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች አከፋፈሉ. የመጨረሻው መከተት ከጀመረ 20 ሰዓት በኋላ, NAC shell እና core ጥቃቅን ተያያዥነት ያላቸው (ምስል 1A) እና በቅዝቃዜ ቀርበዋል. የአይቲአይሲ ትንታኔዎች ቀደም ሲል እንደሚገለጹት ተፈጽመዋል (Ross et al, 2004; Davalos et al, 2010).

ስእል 1

በካይኒ ውስጥ የኬሚካይ ቁጥር (ኤንአይኤን) በኬኬን (ኤን ኤች)

ሙከራ 2: የኮኬይን ህክምና ከቆሸሸ በኋላ የፕሮቲን ለውጥ በሬክ ኤን ሲ ኮር እና በሼል መቀየር (ምስል 1B-D)

በአካለ ስንኩላን (8 ሳምንታት) ተባዕት አይጦች ውስጥ ለ 7 ቀናት በአንድ ጊዜ ውስጥ አንድ ሰው አንድ ጊዜ አንድ ጊዜ ኮኬይን ወይም የሳሊን መኪና ይጠቀማል. ኮኬይን አንድ ነጠላ መርፌ እንጣጥ ምላሾችን ( "ሥር የሰደደ" የተባለ) እና የጨው ጋር መታከም ሰዎች የተወሰነ ክፍል ( "አጣዳፊ" የተባለ) ኮኬይን ጋር ቀደም መታከም እነዚህ እንስሳት ውስጥ ተመዝግበው, እና እንጣጥ ምላሾችን ሳላይን ጋር ነበር (10 / ኪግ አይፒ MG) ብቻ በተቀቡ የቀሩት የጨው ዝርያ ያላቸው እንስሳት ("ሳሊሚ") ተብሎ ተመዝግቧል. የሎልሞተር እንቅስቃሴ መመርያዎች እንደተገለጹት ተከናውነዋል (ሂሮይ እና ሌሎች, 1997). በአጭሩ, በአዋቂ ወንድ አይጦች 18 ደቂቃ habituate ዘንድ, የጨው አንድ ነጠላ የአይ ፒ መርፌ የተሰጠው እና አንድ ተጨማሪ 24 ደቂቃ የሚሆን ክትትል ነበር pas ክፍት-መስክ ቀረጻ ሳጥኖች (በሳን ዲዬጎ መሣሪያዎች) "30 ×" 30 ውስጥ ይመደባሉ, እና አንድ ነበር የ 5 mg / kg ኮኬይን አንድ ወጥ IP ክትባት እና ለ 30 ደቂቃ ክትትል ያደርጋል.

ይህን የመጨረሻውን መርገጫ ተከትሎ ከዘጠኝ ሰዓታት በኋላ አይጦችን በኒኑሮኖን ፕሮቲን ደረጃዎች እና ፎስፎ-ኢተሞች ላይ ከማደንዘዣነት አኳያ የሚያስከትሉ ጉዳቶችን ለማስወገድ የማደንዘዣ መድሐኒቶች ተጨፍጭፈዋል. አንጎል በ "24 mm" ማትሪክስ (Braintree Scientific) ውስጥ በከፊል የተቆራረጠ ሲሆን የሴል ሴል ደግሞ ፕሮቲን (ሮክ) እና ፎስፓትተስ (ሲግ አዶልች) መከላከያዎችን የ 1.2 መለኪያ መለኪያዎችን በመጠቀም እና ለቀጣዩ የ 14 መለኪያ ቅርጽ የኬካ ሼል ቲሹ (ቲቢ) ምስል 1A) እና ወዲያውኑ በበረዶ ላይ እንዲቀዘቅዙ ያደርጋል. ናሙናዎች የተቀየረው RIPA ቋጥ ብርሃን sonication በ homogenized ነበር: 10 MM አንቲጳጥሪስ መሠረት, 150 ሚሜ ሶዲየም ክሎራይድ, 1 MM EDTA, 0.1% ሶዲየም dodecyl ሰልፌት, 1% ትሪቶን ኤክስ-100, 1% ሶዲየም deoxycholate, ፒኤች 7.4, protease እና phosphatase አጋቾቹ ከላይ እንደተጠቀሰው. የ Laemmli buffer ን ከተጨመሩ በኋላ ፕሮቲኖች በ 4-15% polyacrylamaide gradient gels (ክላሲየር ሲስተም, ባዮራድ) እና ምዕራባዊ መፍተል ተዘርግተው በአምራቹ ፕሮቶኮሎች መሰረት የ Odyssey System (Li-Cor) በመጠቀም ተካሂደዋል.

ሙከራ 3: የኮካ የታሸገውን የ "ፕሮቲን" መለዋወጥ በ "ሬክ ኤክስ ኮር" እና "ሼል" መቀየር (ምስል 1E)

አዋቂዎች (8 ሳምንታት) ተባዕት አይጥክሶች ለሰባት ቀኖች አንድ ቀን በቀን አንድ ጊዜ ኮርፖሬሽኖች ወይም የጨው ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች አከፋፈሉ. 10 ቀናት የመጨረሻ መርፌ በኋላ, የጨው ጋር መታከም እንስሳት (ይባላል ሌላ ሳላይን ማስገባትን ተሰጣቸው "የጨው), እና ኮኬይን ጋር መታከም እንስሳት ሌላ ሳላይን ማስገባትን (ይባላል 14 ቀን የመውጣት ወይም ተሰጣቸው" 14d WD ") ወይም ኮኬይን አንድ ነጠላ መርፌ ( ለስኬታማነት "14d WD Chal" የተባለ). በመጨረሻው የፍሳሽ መከላከያ (ኢንፌክሽን) ከተደረገ በኋላ አንድ ሰዓት ብቻ እንስሳት ተቆርጠዋል እና እንደ ምእራባዊው መንተባተብ የመሳሰሉት ሙከራ 2.

ሙከራ 4: ከኬንያ ራስ በራስ አስተዳደር (የኬኬን ራስን ማስተዳደር) ፕሮቲን መለዋወጥን መለወጥ (ምስል 2A-C)

ሪኮች ለዘጠኝ ቀናት በቋሚ ጥምርታ 0.5 መርሃግብር ውስጥ በአንድ ኮንትራት ውስጥ ኮኬይን ለማጥፋት ስልጠናዎችን ለማዘዝ ስልጠና የተሰጣቸው ናቸው. ከዘጠኝ የመነሻ አካላት በኋላ, ባለፉት ሁለት ጊዜዎች ውስጥ ኮኬይን (ዳኪን) መመገቡ በሁለት ቡድኖች ተከፋፍሏል. አንድ የአራት አይጦች በአንድ ኮንትራት ውስጥ ኮኬይን (1 mg / kg / infusion) በአንድ ራዕይ (አጭር መዳረሻ, ShA) እንዲያስተዳድሩ ተደርገዋል እና ሌላው የሌሎች አይጦች በ 6-ሰዓት ጊዜ ውስጥ ኮኬይን (ረጅም መዳረሻ, LgA ) ለአስር ተጨማሪ ቀናት (የእርምጃ ሴሎች).

የነርቭ ክፍሎችም እንደገለጹት ለበሽታ-ተመራፔሮፊቲ እና ሌሎች, 2004). ለአንዳንድ መድሃኒቶች ከተጋለጡ በኋላ ብሬዎች ፍፃሜያቸው ዘንጂ ነበር 18-24 ሰዓት ሲሆኑ ሙሉ በሙሉ ርዝመት ያለው የ FosB ፕሮቲን አረም ስለሚኖር ሁሉም የቀሩት የበሽታ መከላከያ ህዋሳት ΔFosB ያንጸባርቃሉ. ይህ የዲግሬሽን ሁኔታ በምዕራቡ ስርጭት ውስጥ የተረጋገጠ ሲሆን, ይህ ሙሉ በሙሉ ርዝመት ያለው የ FosB (ኤ.ፒ.ስ. 35 μm ክፍሎች ይቆራርጠው በኋላ, ΔFosB immunopositive ሴሎች ቁጥር እያንዳንዱ አይጥ ያለውን NAc በኩል ሁለት ክፍሎች ውስጥ አሳወረ ታዛቢ በ quantified ነበር, እና መስክ × 40 ለአንድ ማለት እሴቶች ከዚያም ለእያንዳንዱ እንስሳ ለ ክልል በ ይሰላል ነበር. እያንዳንዱ እንስሳ ለስታቲስቲክ ትንታኔ የግል ጥናት ተደርጎ ይቆጠር ነበር. የፍላጎት መስመሮች ፓሺኖስ እና ዋትሰን (ፓክስኖስ እና ዋትሰን, 2007).

የ CaMKIIα ኢንቫይረሪቫይዘሬሽን ቁጥሩን መፈፀም በተገለጸው ፍቃድ (Licor) አሠራር (Covington እና ሌሎች, 2009). የ CaMK II እና GAPDH የተዋሃዱ ጥረቶች በኦዲሴኪ ሶፍትዌር ተወስነዋል. ውጤቶች በአማካይ የተቀናጁ የብርታት ዋጋዎች ናቸው² እና እንደ ± sem (± sem) (n = በ 4-10 በቡድን). የ GAPDH እሴቶች ለካፒታል ቁመት እና ለትክክለኛ ሁኔታ የካሜማ ጥቃቅን ለመደበኛነት ጥቅም ላይ ውለዋል.

ስእል 2

በካሊካይ ራስ-የሚያስተዳድሩ ሪከስ እና የሰዎች ኮኬይን ሱሰኞች ውስጥ የ CaMKII ቅኝት

ሙከራ 5: በኮከን-ተጠባባቂ የሰው ልጆች ውስጥ ፕሮቲን ደረጃዎችን መለየት (ምስል 2D)

ሥነ ሥርዓት

የሰው ልጅ የአንጎል ቲሹዎች ከኬቤክ የራስ ማጥፋት ብሬን ባንክ የተገኙ ናቸው (የዳግላስ ሜንታል ሄልዝ ዩኒቨርሲቲ ተቋም, ሞንትሪያል, ኩቤክ, ካናዳ). የቲሹ ሕንፃ መትረፍ እንደ ተገለፀው ይቀጥላል (Quirion et al, 1987). አንድ ጊዜ ከተወጠረ በኋላ አእምሯችን በስትሮይድ ውስጥ በስታቲስቲክ ሳጥን ውስጥ እንዲቀመጥ ይደረጋል እና ወደ ኩቤክ የራስ ማጥፋት ብሬይን ባንክ ፋሲሊን በፍጥነት ይወሰዳል. ደም አጣብኞች በአንጎል, የአንጎል ቅጠል እና በሬነምሞል መካከል ባለው የሽቦ ቆዳ ይለያያሉ. የደም ስሮች, ፓይንካል ግሮሰሮች, ክሎሮይስ ፒልዩስ, ግማሽ ካምብል እና ግማሽ የአንጎል ክር አብዛኛውን ጊዜ ከግማሽ ክኒር ውስጥ ይከፈታሉ. የኋለኛው ግማሽ ሳምፕል ከመቅፋቱ በፊት በ 1 ሴሜ የቆሸሸ ቅልች ውስጥ በቅዝቃዜ ተቆርጧል. ፈሳሾች በ 1-methylbutane በ --- 2 ° C ለ ~ 40 ሰከንድ ይቀራል. ለረጅም ጊዜ በማጠራቀሚያ ውስጥ ሁሉም የበረዶ ሕብረ ሕዋሳት በፕላስቲክ ከጫካዎች በ'-NUMNUM ° C 'ውስጥ ተይዘዋል. የተወሰኑ የአንጎል ክልሎች ከቅዝቃዛው የብረት ኮርቻዎች ላይ በአየር ላይ ያለውን የሙቀት መጠን ለመቆጣጠር ዙሪያውን ከማይክሮኪድ አረብ ብረት የተሰራ ቀዝቃዛ ክፍል ይወጣሉ. የምዕራባው መንቀጥቀጥ የተከናወነው በተጠቀሰው መሰረት ነው ሙከራ 2.

የተመሳሳይ ሰዎች ስብስብ

ተመሳሳይ ቡድን በ 37 ወንድ እና በ 3 ሴት ክፍሎች ውስጥ የተገነባ ሲሆን በእድሜው ውስጥ ከዘጠኝ -NUMX -15 ዓመታት መካከል. ሁሉም ሰዎች በድንገተኛ ገጠመኝ ወይም ለረዥም ጊዜ የቆየ ህመም በድንገት ሞቱ. በእያንዳንዱ ሁኔታ የኩቤክ ኮርነር ቢሮ ሞት መኖሩን ታረጋግጣለች, እናም በሞት ጊዜ የመድሃኒት እና የአደገኛ ንጥረነገሮች መረጃን ለማግኘት በህዋስ ምርመራ ናሙናዎች ተካሂዷል. የቡድኑ ቡድን የሴኮልን ጥገኛ በተመለከተ የ SCID-I መመዘኛዎችን ያሟሉ የ 20 ግለሰቦች ነበሩ. የቁጥጥር ቡድን በካንሰር ጥገኛ እና በከፍተኛ የስነ-ልቦና ምርመራዎች ምክንያት ምንም ዓይነት የኪንች ጥገኛ አለመኖርን ያካተቱ የ 20 ህጎችን የያዘ ነበር. ሁሉም ሰዎች በአእምሮ ሕብረ ሕዋስ ላይ ቀጥተኛ ተጽዕኖ ባሳደረባቸው ምክንያቶች ምክንያት በድንገት ሞተዋል. በጥቅሶች, በማቀዝቀዣ መዘግየትና በፒ. በሁሉም የትምህርት ዓይነቶች, ሳይኮሎጂካል አፔርቲዎች ቀደም ሲል በተገለፀው መሰረት ይከናወናሉ.ዱማስ እና ሌሎች, 2005), የስነ-ልቦና እና የህክምና ታሪክን, እንዲሁም ሌሎች ተዛምዶ ክሊኒካዊ እና የህዝባዊ ካርታ መረጃዎችን እንድንመለከት ያስችለናል. በአጭሩ አንድ የሰለጠነ ቃለ-መጠይቅ ተካሂዷል ለ DSM-IV የተደራጀ ክሊኒካዊ ቃለ መጠይቅ የ AE ምሮ በሽታዎች (SCID-I) ከሟች አንድ ወይም ከዚያ በላይ ለሟች መረጃ ሰጪዎች. የቡድኑ ባለሙያዎች የሳይንስ-I ምርመራዎች, የጉዳይ ሪፖርቶች, የሰርከስ ማስታወሻዎች, እና የሕክምና መዛግብት ከኮሚኒየም የሳይሚያስነት ምርመራዎች ጋር ለማግኘት ይመረምራሉ.

ሙከራ 6: Chromatin Immunoprecipitation for the rat nc (ምስል 3A-C)

አዋቂዎች (8 ሳምንታት) ተባዕት አይጥክሶች ለሰባት ቀኖች አንድ ቀን በቀን አንድ ጊዜ ኮርፖሬሽኖች ወይም የጨው ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች አከፋፈሉ. የመጨረሻው መከተት ከጀመረ በኋላ 10 ሰዓት በኋላ, የ NAC ዛጎል እና ክሩ ጥቃቅን ተከላው. የ chromatin የበሽታ መከላከያ (ChIP) በጠቅላላው የሶስት ድብርት በጠቅላላው በጠቅላላው ሰባት ፆታዎች (በ 24 እንስሳት ጠቅላላ, በ 14 የኮኬይን ኩሬዎች, በ 98 የጨው መጠጥ ገንዳዎች) በጠቅላላው በጠቅላላው ሰባት ፆታዎች ይደባል ነበር. ቅጠሎች ከሰው ጋር ሲነፃፀሩ ክሮሞሲን እስከሚፈጥሩ እስከ -90 ° C ድረስ ተጣጥፈው የተቀመጡ ናቸው. ከዚህ በፊት ሜታ-ሜንደር (Dynabeads M-7, Invitrogen) ከሚባሉት ፀረ እንግዳ አካላት ጋር ክሬዲት ክሮማትታል በአንድ ቀን ውስጥ እንዲቆዩ ተደርጓል. ገዳይ ያልሆኑ ኢግጂ እንደ መቆጣጠሪያ ጥቅም ላይ ውሏል. በተሻለው የመቀላቀል እና የዲ ኤንኤ ማጣሪያ ከተደረገ በኋላ, qPCR ን የኬሚካኢላትን መርዛማ ዲ ኤን ኤ ለመለካት ጥቅም ላይ ውሏል. ማመሳከሪያዎች የተጠቆሙት ከጸሐፊ መጀመሪያ ጣቢያ (APXT) ጋር የ AP-7 ኮሙኒኬሽን ቅደም ተከተል የያዘውን ክልል ለማጠናከር ነው (ወደ ፊት: ACTGACTCAGGAAGAGGGATA; Reverse: TGTGCTCCTCAGAATCCACAA).

ስእል 3

የሕዋስ አይነት - እና የክልል-የተወሰነ ΔFosB የ CaMKIIα ን መተካት Vivo ውስጥ

ሙከራ 7: የ CaMKII ን ቅኝት እና የፕሮቲን ውስንነት በሴል-ዓይነት-ልዩ ኤፖሶርምስል 3D)

ወንድ ቢትራኖስጂ አይጦች ከ NSE-tTA (መስመር A) × TetOp-ΔfosB (መስመር 11) እና NSE-tTA (መስመር B) × TetOp-FLAG-ΔfosB (መስመር 11) አይጦች (ቼን እና ሌሎች, 1998; Kelz እና ሌሎች, 1999; Werme እና ሌሎች, 2002; Zachariou et al, 2006) በሚፈለገው ጊዜ የ ΔFosB አገላለጽን ለመግታት በ 100 μg / ml ዶክሲሲሊን መስመር ውስጥ ተወስደዋል. ቆንጆ በቆነ ይከፈል ነበር. ግማሽ ግማሽ በ Doxycycline ላይ ተገኝቷል, ግማሹም ወደ ውሃ ተለወጠ, እና እንስሳት ከ 8 ን ወደ 11 ሳምንታት ጊዜ ውስጥ የ ΔFosB የሽግግር ውጤቶች ሲሆኑ ይጠቀማሉ (Kelz እና ሌሎች, 1999; ማክከል እና ናሰልለ, 2003). ለዝግመተ ለውጥ ትንታኔዎች, አይጦች በፍጥነት ተቆርጠው, እና ንስጣቶች ተወግደው በረዶ ላይ ተደረጉ. የ NAC የተከፋፈሉ በ 14-gauge needle punch በመወሰድና አር ኤን ኤ ሲገለበጥ በደረቅ በረዶ ላይ ቀዝቃዛ ሆነ. አር ኤን ኤ ገለልተኛነት, qPCR, እና የውሂብ ትንታኔ ከዚህ ቀደም እንደተገለፀው ተከናውኗልLaPlant et al, 2009). በአጭሩ, አር ኤን ኤ በ TriZol ማጣሪያ (Invitrogen), ከ Qiagen ጋር በ RNAeasy ማይክሮ ኬሚካሎች እና ከ Agilent's Bioanalyzer ጋር ጥራቱን ለመፈተሽ ተመርጧል. የተገላቢጦሽ ግልባጭ IScript (BioRad) በመጠቀም ተከናውኗል. qPCR ከተጠቀሱት የዝርዝር መመዘኛዎች ጋር በሚተገበረው AYPYRST 7900HT RT PCR ስርዓት ተካሂዷል: 10 ደቂቃ በ 95 ° C; የ 40 ዘጠኝ በ 95 ° C ለ 1 ደቂቃዎች, ለ 60 ° C ለ 30 ሰከንድ, 72 ° C ለ 30 ሰከንድ, አንድን ነጠላ PCR ምርቶች ለማረጋገጫ የማጣቀሻ ኮርነቶችን ለማመንጨት በ 95 ° C የማጣራት ሙቀት. የ ΔFosB እና CaMKIIα ፕሮቲን ውህዶች የበሽታ-ምትኬቲክስ ትንታኔዎች ተከናውነዋል ሙከራ 4.

ሙከራ 8: የ Inra-NAC D1 እና D2 የዲፖመኔን ተቀባይ ተቀባይዎች ተጽእኖዎች በኮከን-ሚዲን ፕሮቲን ለውጦች (ምስል 3H)

የአዋቂዎች ዘጠኝ (8 ሳምንታት) ወንዶቹ እንጆሪዎች አንድ ቀን አንድ ቀን ለ 7 ቀናት አንድ ጊዜ ኮኬይን ወይም የጨው ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች ("ተሽከርካሪ" ቡድን) ተሰጠ. እያንዳንዱ ኮኬይድ ከመጀመሩ በፊት 10 min በፊት, አይጦች በ IPX ወይም የ D30 ተቀባይ ተቀባይ ጣቢያን SCH 1 (23390 mg / kg, "D0.5 Ant" ቡድን), ወይም የ D1 ተቀባይ ተቀባይ አንቲክሎፕረድን (2 mg / kg, "D0.5 Ant" ቡድን) , ወይም የጨው መከላከያ መርፌ ("ኮኬይን" ቡድን). በመጨረሻው የፍሳሽ መከላከያ (ኢንሹራንስ) ከተጠናቀቀ በኋላ 2 ሰዓት በኋላ እንስሳት ተቆርጠዋል እና በምዕራቡ ስር የሚባሉትን ፕሮቲኖች መጠን ይለካሉ ሙከራ 2.

ሙከራ 9: የ AAV-Mediated ΔFosB ውጤቶች ተጽፎ በፕሮቲን ገላጭ () ፕሮፊክምስል 4 A-C)

AAV-GFP (አረንጓዴ ፍሎረሰንት ፕሮቲን) ወይም AAV-GFP-ΔFosB ()ሚዛልና ሌሎች, 2010). 33 የክብደት መርፌዎች (ሃሚልተን) ለሁሉም ቀዶ ጥገናዎች ተቀጥረው በሚሠሩበት ጊዜ, በተወሰኑ የ 0.5 μl የከፍተኛ ደረጃ ትንተና ቫይረስ በሁለት የጊዜ እሰከቶች ላይ በሁለት ኳንቲዱ ውስጥ ተካሂደዋል, በመቀጠልም ተጨማሪ የ 5 min የቅድመ-ማለቂያ እረፍት ጊዜ. ሁሉም ርቆታዎች የሚለካው ከበርግማ: 5 ° ማዕዘን, AP = + 10 ሚሜ, Lat = 1.7 mm, DV = -NUMNUMX ሚሜ ነው. ከቀዶ ጥገናው በኋላ በቀን 2.5 ቀናት ውስጥ, የ ΔFosB እጅግ በጣም ግርዛትን የሚያስከትለውን የባህሪይ ውጤት ለመለካት, ለመንቦራቶሪ ቁጥጥር መቆጣጠሪያ ክፍሎች አንድ እንስሳ ለ "6.7 mg / kg cocaine" የተሰጡ ናቸው. ይህ የመጨረሻ ሙከራ ከተደረገ በኋላ, ዘጠኝ ሰከንዶች ተገድለዋል ሙከራ 2, እና የቲሹ ማይክሮሴሊቴስ በጂ ኤፍ ኤ ፖታቲክ የ NAC ስፌት (gFP-positive NAc) ቲሹ እንዲገኝ በአሎግስቴሽንት አጉሊ መነጽር ምግቦች ስር ተከናውኗል. የምዕራባውያን መንተባተብ በወቅቱ ነበር ሙከራ 2.

ስእል 4

ΔFosB ለኮከኒ-ተማሚው D1 ተቀባዮች ጥገኛ የሆነው CaMKIIα ኢንሴኪንግ በ NAc shell

ሙከራ 10: የ AAV-Mediated ΔJunD ተጽእኖዎች በካይ-ጥገኛ ፕሮቲን መግለጫ ላይ ከልክ ያለፈ ተጽእኖ (ምስል 4 D-F)

የ "AAV-GFP" ወይም "AAV-GFP-ΔJunD" ስቴሪዮክሲክ መርፌ / ሽንኩርት ይሠራል ሙከራ 8. ከቀዶ ጥገናው በኋላ በቀን 14 ቀናት ውስጥ, በሎሚቶር መዝገብ ቤት ዎች ውስጥ ለሰባት ቀን በቀን አንድ ጊዜ እንስሳዎች በየቀኑ አንድ ጊዜ 10 mg / ኪ.ሜ ኮኬይን ወይም የጨው መኪና ተይዘው ይገዛሉ. ለአንድ ሰው አንድ ኮኬይን መርፌ (5 mg / kg IP) ወይም በሰሊን መዘግየት ላይ የሎሚዮተር ምላሽ ተመዝግቧል. ይህ የመጨረሻ ሙከራ ከተደረገበት ጊዜ ጀምሮ ዘጠኝ ሰከንዶች, አይጦች ተቆርጠው ይወጣሉ, ቲሹ ተሰብስቦ እና የምዕራቡ ጥፋቶች እንደ ሙከራ 9.

ሙከራ 11: በብልቃጥ ውስጥ ፕሮቲን Kinase Assays (ምስል 5A-D)

Recombinant CaMKIIα እና ΔFosB ከተባይ ነፍሳት ተነጥለዋል.Brickey እና ሌሎች, 1990; ጃረሪን እና ሌሎች, 2007), እና ፕሮቲን ኪይነስ ምርመራዎች ተከናውነዋል (ኮሎን, 1993), ቀደም ሲል እንደተገለፀው. በአጭሩ, CaMKII ΔFosB, 2.5 ኤም ኤም Ca በሚባለው የ 1 μM (ወይም አመላካችነት)²⁺, 40 ኤምኤም ሚኤግ²⁺, 15 μM ማስረጋጥ እና 200 mM HEPES pH 7.5. የፒዮፒዮሌሽን መርሃግብር በ ጂ- ጂ-³²P] ATP እና በክፍሉ የሙቀት መጠን ለ 10 ደቂቃ እንዲቀጥል ተፈቅዶለታል (ምስል 5 ሀ እና ቢ) ወይም 2 ደቂቃ በበረዶ ላይ (ምስል 5C እና ዲ). ምርቶች በምዕራብ ብጥብጥ የተስተካከሉ ናቸው (ምስል 5 ሀ እና ቢ) ወይም በ "ሬድራዲግሮም" እና "ስካቲሊጅ" መቁጠር (ምስል B-D).

ስእል 5

ΔFosB ለ CaMKIIa ኃይለኛ ማሸጊያ ነው

ሙከራ 12: የ Ser27 ΔFosB ፊፋፒፕሎሌሽን መለያ (ምስል 5E)

በብልቃጥ ውስጥ kinase assays የተከናወነው በየተወሰነ ጊዜ ነበር ሙከራ 11, ፕሮቲኖች በ SDS-PAGE ተለያይተው, እና ከ ΔFosB ጋር የሚዛመዱ ባሮች ተቆራረጡ እና ለትልቅ የጠፍጣጥ መብዛት. በሁሉም የፓነሎች ላይ የሚገኙት የ ion ቁርጥራጮች በ <m / z> ምደባዎች ion ጫፎች ላይ ይለጠፋሉ. በቦታ ገደቦች ምክንያት ሁሉም የመለያ ቁራጭ አይኖች አይደሉም. በአጠቃላይ ለፍላጎት ion መሰየሚያዎች ጽሑፍ የፍሎረፕሎሪያን ወሳኝ ቦታዎችን ቀጥታ ሲያረጋግጡ ወይም መረጃን ሲያክሉ ካልሆነ በስተቀር በጥቁር ቀለም የተጻፈ ነው. ከአንዴ አሚኖ አዴድ ፊደላት ጋር በቀይ የተጠቆመውን የፎክስፒፕቲድ ቆጠራ በሚታወቅበት የፎክስፒፕቲድ ቆጠራ ውስጥ የጀርባ አጥንት የመነጣጠል ምርቶች እንደ ማስረጃ ተቀርፀዋል. የተመለከቱትን ቁርጥራጮች ሒሳብ ዝርዝር መግለጫው በ peptide ቅደም ተከተል እንደ b እና y ions ምልክት ይደረግባቸዋል. በእያንዳንዱ ክፍልፋይ ግዙፍ ስብስብ ጫፍ ላይ የሚታየውን ዝቅተኛ ኢንፍራይንስ ቁርጥራጮች ለማሳየት በ <m / z ዘንዶ ያሉት የአጉሊ መነፅር ምክንያቶች ናቸው. በፓነል ኤንኤ የታዩትን የሴል ዪንስ ions በ Ser27, Ser28, Ser31 እና Thr34 በጣቢያው ውስጥ ባሉ ሌሎች በ phosphorylated isoformዎች ድብልቅ ውስጥ የ Ser37 phosphorylated isoform መገኘቱን ያረጋግጣል. የ PA5, pa5-P, pb5, እና pb5-P ions መኖራቸውን በተለየ ሁኔታ የ Ser27 ቅልቅል የፒዮፒዮሌሽንን ትክክለኛነት ያረጋግጣሉ.

ሙከራ 13: የ Ser27 phosphorylation ብዛት (ምስል 5F)

መደበኛ የሆኑ peptides የ phospho እና phospho ያልሆኑ phospho ቅጾች SerxNUMX ΔFosB በማስመሰል የተቀረጹ ናቸው. ከተለመደው እና ከንጽህና በኋላ እያንዳንዱ "ከባድ" ፈሳሽ ፖይቲፕቲክ በ 27 / 50 acetonitrile / water buffer ውስጥ ተሰብስቦ እና በአሚኖ አሲድ ትንተና ላይ ተወስዶ በ synthetic peptide stock solution ላይ ሙሉ ፍሰትን ለመወሰን ተልኮ ነበር. እያንዳንዱ "ከባድ" peptide በቀጥታ ወደ የ 50 QTRAP የ mass spectrometer (ኤምኤስ) በቀጥታ ይላካሉ ለ MS / MS ጥረዛ እና ከሁለት እስከ አራት የ MRM ሽግግሮች የተሻለው የግጭት ኃይል ለመወሰን. ቀጥሎም በ "4000 QTRAP" ላይ የ "ጠበን" የተባለ peptides በ "4000 QTRAP" ላይ የተቀመጠው የፀረ-ተለያይ ተካሂዶ እንዲኖር ተደርጓል. መሣሪያው በሶስት-አራቴ-ቢል ሁነታ ተኬድ ነበር, Q1 በተወሰነው የትራፊክ m / z እሴት ላይ (Q1 ቅኝት አይደለም) እና Q3 ወደ አንድ የተወሰነ የ peptide ፍርግርግ ጋር ወደሚዛመድ የ m / z መጠን ተወስኖል. በ MRM ሞዴል ውስጥ ተከታታይ ነጠላ ልምዶች (የፍላጎት ኢነርጂው የፍላጎት ፍንጣቂዎችን ከፍተኛነት ለመለካት በተቃራኒው የተስተካከለ) ተከታታይ ነጠላ ልውውጦች (ቅኝቶች / ቁርጥራጭ ion ሽግግሮች) ተስተካክለው በቅደም ተከተል ተወስደዋል, እና ዑደት (በተለምዶ 1-2 ሰከንድ) የ HPLC መለያየት ሙሉው ጊዜ. የ MRM ሽግግሮች የተቀመጡት ቀድሞውኑ የፒፕቲክ ክፍሎችን ከ MS / MS ሲስተም ነው. ሁለት ከፍተኛ ሽግግሮችን በከፍተኛ ደረጃ (ፔፕቲድ) እና በከፍተኛ ፍንጣ ፈርት ቁርጥራጭ (ዑደት) ጋር የተያያዙ ሁለት ሽግግሮች ተመርጠዋል, እና የግጭት ኃይል የተሻሻለ አውቶማቲክ ሶፍትዌርን በመጠቀም የ MRM ሽግግሮች ከፍተኛ ጥረቶችን ለማሻሻል. ለካሚካይ (ኤን ኤፍ) እና ለቁጥቁል ተዳማሪ (ኤ.ኤስ.ኤስ.) የተጋለጡ ናሙናዎች በተመረጡበት ጊዜ የእያንዲንደ ፔፕቲክ ቅርጽ እጅግ በጣም ብዙ ሆኗል. በ LC-MRM ውሂብ ዳታ ጥናት ትንተና AB Multiquant 1.1 ሶፍትዌር በመጠቀም ይሰራል.

ሙከራ 14: የ ΔFosB ውህደት በካሚክ II እጅግ የሚጨምረው እርጥበት (ምስል 5G እና H)

ዝውውር አይክሎችን በመተንተን T286D CaMKII (ሜይፎርድ እና ሌሎች, 1996; Kourrich እና ሌሎች, 2012) እና የዱር ኣርብቶማቲክስ (ፕሮቲን) ፀጉር (transgene expression) ለመፍቀድ በ Doxycycline አለመኖር የተነሳ ነው. የ 20 mg / kg ኮኬይን ወይም የጨው አአፒን ለ 14 ቀናት በየቀኑ አንድ ጎልማሳ አይጦች ይፈፀሙ. በመጨረሻው የፍሳሽ መከላከያ (ኢንሹራንስ) ከተጠናቀቀ በኋላ እንስሳቱ ተወስነዋል. ሙከራ 4.

ሙከራ 15: የ HSV-Mediated ΔFosB ተጽእኖዎች ከመጠን በላይ መገልበጥ እና CaMKII Inhibition በ NAC Dendritic Spines (ምስል 6A-E)

የአዋቂዎች ተባዕት አይጦች (8 ሳምንታት) ኤች.ሲ.ቪ. -GFP, HSV-GFP-ΔFosBኦላዩሰን እና ሌሎች, 2006), HSV-GFPAC3I, ወይም HSV-GFPAC3I-ΔFosB. በዚህ ግንባታ ውስጥ የ CaMKII እንቅስቃሴን በ peptide ላይ የተመረኮዘ AC3I, ለ GFP-C-terminus ይጠቃለላል. GFPAC3I PFPM400-Vectorን በመጠቀም GFPAC3I ን ያካተተ ከዚህ በታች ከሚከተሉት አንጓዎች ጋር አብነት በመጠቀም ተመርቷል. GFP-AC3I-R: 5 'CC TCCGGA TTACAGGCAGTCCACGGCCT 3' (ክሊፕ ፕላስ አፕቶፕ). የተፈለገው PCR ምርት የ NheI እና BspEI ጣቢያዎችን በመጠቀም በ p3 + እና p5 + -Δ FosB ቬኬተሮች ውስጥ ገብቷል. ግንባታው በቅደም ተከተል ተረጋግጧል. ስቴሪዮትሲክ መጋጠሚያዎች: 3 ° ማዕዘን, AP = + 1005 ሚሜ, ላቲ = + 1005 ሚሜ, DV = -10 ሚሜ (ባሮቶ እና ሌሎች, 1.6). ሽርሽር እና የአዕምሮ ሽፋን እንደ መነሻ ተደርጓል ሙከራ 4.

የጡንት ምርመራ የተብራራው እንደሚከተለው ነው-ክሪስቶፈር እና ሌሎች, 2011). በ A ነስቱ, ከዲማው 50-150 μm የዝቅተኛ ክፍፍሎች ከ A ጠቃላይ በኤች A ይ ቪ ከተበከሉ ሴሎች ውስጥ GFP በተመረጡበት መንገድ ተመርጠው ነበር. ምስሎች በሬቫስትስቲክ አልጎሪዝም አማካኝነት NeuronStudio ን በመጠቀም ለሥነ-መለኮታዊ ትንታኔ ግራፍ ልኬት LSM 710 (Carl Zeiss) ተገኝተዋል. NeuronStudio በሚከተሉት እሴቶች ላይ በመመርኮዝ ስስ, እንጉዳይ, ወይም እንጉዳይ ይመደባል (1) ምጥጥነ ገጽታ, (2) ወደ አንገት ሬሾ እና የ (3) የዲጂታል ርዝመት. በአንገት ላይ የተጣበቁ አጣቂዎች እንደ ቀጭን ወይም እንጉዳይ ተብለው ሊመደቡ ይችላሉ, እና አንገተኛ ጉሮ የማይመቸውን እንደ ደረቅ አፈር ሊመደቡ ይችላሉ. በአንገታቸው ላይ የተጣበቁ አጣቂዎች በዲፕሎማው ዲያሜትር ላይ ተመስርተው እንደ ስስና ወይም እንጉዳይ የተሰጣቸው ናቸው.

ስእል 6

የ CaMKII እንቅስቃሴን ማገድ የ ΔFosB የ morphology እና የባህርይ ውጤቶች በኤን.ሲ.

ሙከራ 16: የ HSV-Mediated ΔFosB ተጽእኖዎች የከፊል ተጽእኖ እና CaMKII I ንብራት በካ!ምስል 6F)

የጎልማሳ ተባዮች ቫይረሶች በቫይረሶች ተተክለዋል ሙከራ 15, እና በአንድ የ 5 mg / kg ኮኬይን መጫዎቻ ላይ የተገጠመውን የመኪና ሞተር (ኮርኒን) መጠቀማቸውን ተከታትሏል ሙከራ 9. ከኮኬይ መርጃው በኋላ የሉልሞተር መረጃዎች ከሞላው ከሶሰሰሰሰሰሰ 90 ሰከንዶች በኋላ.

ተጭማሪ መረጃ

የእንስሳት መኖሪያ ቤት

ወንድ Sprague Dawley rats (250-275 ጂ, ቻርለስ ወንዝ ላቦራቶሪስ) በቤት ውስጥ መጠለያዎች ነበሩ. ስምንት ሳምንታት የቆየ C57BL / 6J የወንዶች አይጥ (ዘ ሜክለል ላቦራቶሪ) በቡድን ውስጥ ከአንድ እስከ አምስት የሚደርሱ እንስሶች በሆዱ ውስጥ ተይዘው ነበር. ሁሉም እንስሳት የሙቀቱ ማራዘሚያዎች ከመሆናቸው በፊት በ እንስሳት ተቋም ውስጥ ¹xXX ሺህ / ሣምንቱን በ "1-23 ° C" (25-12 ° C) በ "7 hr light / dark cycle" (በ 00: XNUMX AM ላይ አብራ) እና ውሃ ማስታወቂያ ነፃነት. ሙከራዎች የተካሄዱት በሲና ተራራ ላይ የማህበሩ የነርቭ ሳይንስና ተቋማት የእንስሳት እንክብካቤ እና አጠቃቀም ኮሚቴ (IACUC) መመሪያዎችን ነበር.

እጾች

መድሃኒቶች (አይፒ) ​​በኬሚሊስ ውስጥ ተጨምረዋል, ኮኬይን (5-20 mg / kg በኩላሊት ለክንዶች, NIDA በ 10 ሚሜ, ለ NIDA) እና ለ SCH 1 ወይም ለሲቲሊፖሮድ ሃይድሮክሎሬድ (23390 mg / kg በ 0.5 ml, Tocci) . ለስቴሮቶሲክ ቀዶ ጥገና, አይጦች በኬሚን (ኮርኬሚን) (1 mg / kg) እና በ xylazine (100 mg / kg) (ሄንሪ ዊንሲን) በኬሚካል ሳልታ ውስጥ አልነበሩም.

ፀረ

CaMKIIα (ጠቅላላ): - Upstate 05-532, 1: 5,000

CaMKII phospho-Thr286: Promega V111A, 1: 1,000

ΔFosB (ጠቅላላ): የእጅ ምልክት ማሳያ 5G4, 1: 250

ΔFosB phospho-Ser27: Phosphosolutions, 1: 500

GluA1 (ጠቅላላ): Abcam, Ab31232, 1: 1,000

GluA1 phoso-Ser831: Millipore N453, 1: 1,000

GluA1 phoso-Ser845: Chemicon Ab5849, 1: 2,000

GluA2: Millipore 07-598, 1: 2,000

NR2A: Sigma HPA004692, 1: 2,500

NR2B: Millipore Ab1557P, 1: 1,000

ስታትስቲክስ ትንታኔዎች

ሁሉም ስታትስቲካዊ ትንታኔዎች የተካሄዱት በ Prism 6 ሶፍትዌር ጥቅል (ግራፕድድ) ነው. የተማሪ የቲ-ሙከራዎች በሁሉም የሁለት ጥምር ንጽጽሮች ጥቅም ላይ ውለዋል (ጥመር በተሰጠበት ውጤት ውስጥ የተገለፀው), እና በአንድ-መንገድ ANOVAs ለሁሉም ተደጋጋሚነት ጥቅም ላይ ውሏል (በክፍል ፍተሻ ክፍል F ዋጋ በሚሰጥበት).

መሄድ:

ውጤቶች

ተለዋዋጭ ኮኬይን የካአካሚ ኤንአይኤን በ NAc Shell ውስጥ ያነሳል

ብዙ ጥናቶች እንዳመለከቱት በኤንች ሼክ እና ኮር ውስጥ ያሉ MSN በበርካታ የአደንዛዥ እጾችን በደንብ መጋለጥን በተመለከተ የተለያዩ ባዮኬሚካዊ እና ፊዚካዊ ምላሾች እንዳላቸው አመልክተዋል (Kourrich እና ቶማስ, 2009; ሎቴስ እና ሌሎች, 2010) እና ሁለቱ ንዑስ ክፍሎች የአደንዛዥ እፅ ባህሪዎችን በተለያየ መልኩ ይቆጣጠራሉ (ኢቶ እና ሌሎች, 2004). በኬን የምርጫ ክፍል ውስጥ የኬኒን ቅባቶች ላይ የኮኬይን ልዩነት የሚያመጣውን ለውጥ ለመወሰን ቁ ዋነኛው, ባለብዙ ፕላፕላስድ ኢሶ በር ጋላክሲ (iTRAQ) እና በተደጋጋሚ በሰፊው የሙቀት መጠን (MS / MS) ተጠቅመናል. አዋቂ ወንዶች አይጦችን IP ን ከኮከኒን (20 mg / kg) ወይም ከሰሊን በየቀኑ ለ 7 ቀናት ይሞላሉ. የመጨረሻው መከተት ከጀመረ 24 ሰዓት በኋላ, NAC shell እና core ጥቃቅን ተያያዥነት ያላቸው (ምስል 1A) እና በቅዝቃዜ ቀርበዋል. በእነዚህ ናሙናዎች ውስጥ የሚገኙ ፕሮቲኖች በአይአህራግ በመጠቀም መጠነ-ይይዛሉ. አራቱም CaMKII ታሳሳዮች ከኮኮን ልምምድ በኋላ ከኮንሰር ጋር ከተወዳደሩ በኋላ በከፍተኛ ሁኔታ መጨመሩን አሳይተዋል. ከዚህ በፊት ከብዙ CaMKII ን ስርዓቶች ውስጥ ከሌሎች ስርዓቶች ጋር ተያያዥነት ያላቸው የ PP1 catalytic and regulatory subunits እና PP2A ጨምሮ በርካታ ፕሮቲን ፎስፋተስቶች (ኮሎን, 2004) ተመሳሳይ ንድፍ ተከትሏል. እነዚህ ግኝቶች በካይኒ ውስጥ ኮኬይን በሴኬም በተወሰነው መንገድ ኮኬይን (ኮኬይን) በመነሻነት የሚቆጣጠሩት የኬሚኬ 2 ምልክት ማሳያ መጀመርያ በማስረጃ የተደገፉ እና ተጨባጭ ማስረጃዎች አቅርበዋል.

ይህንን ግኝት በበለጠ መጠን ለማጣራት, ከላይ እንዳሉት አሮዎች ከኮከኒ (በወሰኑት መጠን) ወይም በሰሊን እና በካንሲን (X400X mg / kg) ወይም በጨው ክራች ውስጥ የሚገጥም የመኪና መጠን (ካሜራን) መለካት. በተደጋጋሚ ለ 5 mg / kg ኮኬይ የተለመደው የኬልሜትር ማነቃቂያ ንድፍምስል 1B). ከዚህ የመድኃኒት ቁጥጥሩ ጋር የተደረጉ ተጨማሪ ጥናቶች, በምዕራቡ ስር የሚጥለቀለቁ ኬሚካሎች በመጠቀም በተደጋጋሚ የሚከሰተውን ኮኬይን የሚመርጡት ኮምሚክ II በሰውነት ውስጥ ኮኬይን ከተጨመረ በኋላ በ NAc shell 24 hr በመምረጥ ነው.ምስል 1C እና D; p = 0.0019; F = 7.943; df = 29). በተጨማሪም, የ AMG የአካል ንጥረነገሮች የኬላ-ኤክስኤክስ አምራች የፕሮሰሲንግ ኬክሮሲየሊክስ የ A ጠቃላይ ኤክስኤንሲ (ACL) ግኝት ከፍተኛ መጠን ያለው ጭማሬ (ፒኤክስ, 831, F = 1, df = 0.0261) ሲሆኑ, CaMKIIα Thr4.208 autophosphorylation ጠንካራ ቢሆንም ግን በሼል ውስጥ ብቻ ወደ ውስጥ የሚገቡት ዋና ዋና አዝማሚያ (ምስል 1D). ሌሎች በርካታ የ gluthamate ተቀባይ ተጎጂዎች ምንም ተጽእኖ አልነበራቸውም. ከነዚህ የካሜማኪ II ማነጻጸሪያዎች በተቃራኒ በኬክስ (P = 0.0260, F = 4.189, df = 29) እና በሴል (P = 0.0350, F = 3.807, df = 29) ውስጥ የ ΔFosB ውስጣዊ ግፊት (ΔFosB) (ምስል 1C እና D), ከቀዳሚዎቹ ግኝቶች ጋር ተመጣጣኝ (ፔሮፊቲ እና ሌሎች, 2008).

ከአዳኤፒኤ ተጠባባቂዎች የኮኬይንን ደንብ በተመለከተ ከብዙ ቁጥሮች በፊት የተደረጉ ጥረቶች ከ «ዘመናዊ ኮኬይን (አጫጭር ኮኬይን) አስወጥተው ከ« ዘጠኝ ቀናት ውስጥ »ሲተኙ (ውይይት) ተመልከቱ, እነዚህ ባዮኬሚካል ትንታኔዎች በዚህ የጊዜ ነጥብ ላይ ደጋግመናል. ከኮኬይን በመጨረሻ ከተጫነን በኋላ 14 ቀናት በኋላ, የ CauKCII ወይም የ GluA14 SerxNUMX ፎሰሎሪቲን በቆመበት ጊዜ NC (p = 0.0288, F = 4.258, df = 22) ከፍ ይል እንደነበር (ኤፍ.ምስል 1E). ሆኖም ግን, አንድ ነጠላ 1 ኤምኤም / ኪግ በካንከን የሙከራ መጠን ከጠቅላላው ኤን ኤን ኤም ሲጨመር, የ CaMKII መጠን (p = 10, F = 0.0330, df = 3.947) እና የ GluA26 Ser1 (p = 831; F = 0.0213; df = 4.509) ፎስፌሎሪዜሽን ከተለመደው የኮኬይን ተጋላጭነት በኋላ ከተገኙት ጋር ተመሳሳይ ነው.ምስል 1E). እነዚህ መረጃዎች የኬሚካሎች ኒውመሮች ለረጅም ጊዜ መታቀብ ሲጀምሩ, ምናልባትም የ CaMKII ጀነቲካዊ ማስተዋወቂያ (ቀጥታ ውይይት) በቀጥታ በቀጥታ በማጥፋት የኬሚካሪ ሴል አንኳር ናቸው. በተጨማሪም, የ ΔFosB ውስጣዊ ክስተት ከ CaMK II ኢንትሴሽን የበለጠ ቋሚነት ያለው መሆኑ በውይይቱ ውስጥ እንደተገለጸው በካሚካኪ ሕገ-ደንብ ውስጥ በተቀመጠው መሰረት "ክሬኬን" ወይም "ካስኬድ" የሚጨምሩ ተጨማሪ መቆጣጠሪያዎች መኖራቸውን ያመለክታል.

እነዚህን ግኝቶች ለማጠናከር, የኮኬይን ራስን የማስተዳደር ሞዴሎችን መፈለግን ተረድተናል. የአዋቂዎች ወንዴ እንቁራሎች ለአጭር ወይም ለረጅም ጊዜ ኮኬይን ለመድረስ ተችሏል. እንደተጠበቀው (አህመድ እና ኮኣ, 1998), የመድሐኒት እራስን ማራመድን (ረጅም) የደረሰባቸው ሁኔታዎች ብቻ ናቸው (ምስል 2A). ΔFosB በተወሰነ ረጅም ዘመናት ተገድዷል ቁ በሁለቱም የ NAC ሼል (p = 0.0011, F = 11.12, df = 17) እና ኮር (p = 0.0004; F = 13.86; df = 17) ወደ ኮኬይን አጭር መዳረሻ. በተቃራኒው ግን CaMKIIα በካይኒ ውስጥ ለረጅም ጊዜ የኮኬይን (ኮኬይን) በማግኘት ብቻ ነው.ምስል 2B እና C; p = 0.0236; F = 4.957; df = 16). በአብዛኛው በአጭር ጊዜ ውስጥ የሚገኙ ኮኬይኖችን (~ 12 mg / kg IV), ረጅም የዱር እንስሳትን (~ 70 mg / kg IV), እና ሙከራ በተካሄደባቸው እንስሳት (10 mg / kg), እና ለምን እንደ ΔFosB እና CaMKII አመላካች መሆናቸው ለምን እንደሆነ ይጠይቁ. ይህ ልዩነት ከፍተኛ በሆነ ከፍተኛ የኮኬይን ደረጃዎች ውስጥ የሚከሰት ነው (ሞዛይተር-የሚተዳደረው ኮኬይን እንደ አንድ ቡሊስ አይፒ ይጠቀማል, እራስ በራሱ የሚተዳደር ኮኬይን በበርካታ የመድኃኒት ልኬቶች በኩል ይላካል), ወይም በአደገኛ ዕጢ ማዥጎድያ ልዩነት (ለሙከራው 7 ቀናት አስተዳደር, 19 ቀናት ለራስ አስተዳደር).

በ ΔFosB እና CaMKII ውስጥ ባሉ ኮኬይን እርምጃዎች ሰፊ ጽሁፎች ቢኖሩም, በሰው ፕሮቶኮል ተጠቃሚዎች ላይ የእነዚህ ፕሮቲኖች ጥናት የለም. እዚህ ላይ የመጀመሪያ ደረጃ ማስረጃዎችን እናገኛለን ብለን እናሳያለን. የ <ΔFosB> ደረጃዎች (p = 0.0316; t = 1.921; df = 34) እና CaMKII (p = 0.0444; t = 1.755; df = 32) በካናይ-ጥገኛ በሆኑ ሰዎችምስል 2D, ማውጫ 1). እነዚህ መረጃዎች እንደሚያመለክቱት በአይሮይድ ኤንአይኬ ውስጥ ኮኬይንን በማጣራት ላይ የሚገኘው ΔFosB እና CaMKII ምርመራ በሰው ልጅ ኮኬይ ሱሰኝነት ላይ ነው.

ማውጫ 1

ከሰዎች የኮኬይን ሱሰኞች እና ከተዛመደ ቁጥጥር ቡድኖች ናሙናዎች መለየት

ΔFosB የ CmkII ን ቅጅ በ D1-Type MSN የ NAc Shell ን በጥንቃቄ ይቆጣጠራል

ሁለቱም CaMKII እና ΔFosB በኬሬን ኤንአር በተባለው ኮኬይን ተስተካክለው መገኘታቸው አፋርሲ የ CaMKII ዘረ-መል (ጅን) መዘገብ ይችል እንደሆነ ለመወሰን ይመራናል. ቀደም ሲል CaMKIIa ን ስለ ኤኤፍሲ እንደአስፈላጊነቱ በአይአርሲ (አና)ማክከል እና ናሰልለ, 2003), ነገር ግን በዚህ ጥናት ውስጥ ተጨማሪ ግኝት አልተረጋገጠም. በመጀመሪያ ΔFosB ለካማኪ 2 ጂን ማእቀፍ በሴካን ወራጅ ወንዞች (NK) ውስጥ ተዳዳሪ መሆን አለመሆኑን ለመወሰን ለመጀመሪያ ግኝት ዪኤፍሲስ (ChIP-ChIP) እና ቁጥራዊ ፔሮሲ (quantitative PCR) ተጠቀመበት. በአስቸኳይ በኬል / p = 0.0133; t = 2.901; df = 12), ነገር ግን ዋናው ንኡስ ክልል አይደለም (ምስል 3A). በዚህ የንጥል ሲ ኤክሲየም ታዳጊዎች መካከል ያለው የ <ΔFosB> ልዩነት ልዩነቶችን የበለጠ ለመረዳት, በዚህ ጂኖሚክ ክልል ውስጥ የሂውዮ ሞዳሎችን ለመለየት qChIP ተጠቀምን. ቀደም ካሉት ጥናቶች በኬማ ኬዝ ማራኪው ውስጥ የ H3 acetylation (ኮምፕላላይዜሽን) በጠቅላላው መዳፊት NAcWang et al, 2010). በተቃራኒው ደግሞ ኮኬይን በኬሚካ ኬዝ ማራኪያን በኬሚካ ኬዝ ማለፊያ በሄንሲ ኮር (ኮንሰርት) ውስጥ መቀነስምስል 3B; p = 0.0213; t = 2.726; df = 10), በሼል ውስጥ የሚታይ ምንም ለውጥ የለም, ከንዑስ ክምችት የተወሰነ የክሮሚኒን ለውጥ ከ ΔFosB ማሰር ጋር. qCh for forCh ChChChChCh ChChChChCh ChChChCh ChChCh / ChChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh / ChChCh /ምስል 3C).

ΔFosB የ CaMKII ከአንድ ግዜ ጋር ተጣርቶ ስለመሆኑ ለመወሰን Vivo ውስጥ, ሁለት ቢትርጀንዶች ያሉት የአይን መዳፎች ተጠቅመናል አፋጣኝ ΔFosB በመተንተን በ D1 ቁ D2-type MSN ን በመጠጥ ውሃ በ doxycycline መቆጣጠር በሚቻልበት መንገድ (ቼን እና ሌሎች, 1998; Kelz እና ሌሎች, 1999; Werme እና ሌሎች, 2002). በከፍተኛ ቁጥር በ D1-type MSN ላይ ΔFosB ከፍተኛ መጠን ያለው የ CaMKIIα ኤም ኤን ኤ ኤን ኤ ኤም ኤ ኤ ኤም ኤ ኤን ኤ ኤ ኤም ኤ ኤን ኤ (ኤክስኤክስ) በከፍተኛ ደረጃ በከፍተኛ ደረጃ ጨምሯል (p = 0.0337; t = 1.996, df = 13).ምስል 3D). በኬክስ ኤክስ ኤም ኤ ኤን ኤ ውስጥ መጨመር በ "D1" ዓይነት MSN ውስጥ በ ΔFosB ትርጓሜ የተተገበረው በካይ ኬኤን ፕሮቲን ውስጥ በሲኤንኤክስ (pc = 0.0030; t = 3.578; df = 14) እና በሴል (p = 0.0392; t = 2.275; df = 14; Figs 3E እና F). ይህ መረጃ የሚያሳየው ΔFosB በሁለቱም ክልሎች ውስጥ የኬሚክ 2 ኛ የጂን አገላለፅ በ D1-type MSN ውስጥ ማራመድ የሚችል ነው. ምስል 3B በኬሚካይ መካከለኛ ኮምፓይን (ቻምሲታይዜሽን) ሲቀንስ የኮኬይን ክሮሞቲን ሲቀየር (ΔFosB) ኮኬይን ተከትሎ ኬሚካ (ኬሚካ) ከዋና ኮኬይን (ኬሚካ) ተከላካይ እንዳይዛባ ይከላከላል.

የእኛ ተዛማጅነት ያለው የመዳፊት መረጃችን የ MFosB የ CaMKII ጂን አገላለፅ ማነቃቃት በኤንኤሲ ውስጥ ለ D1-type MSNs የተለየ መሆኑን በመቀጠል ፣ በመቀጠልም የኮኬይን ጥገኛ የሆነው የ ‹CaMKII› አሠራር የ D1 dopamine መቀበያ ማግበርን የሚፈልግ መሆኑን ለማወቅ እንቀጥላለን ፡፡ የጎልማሳ ወንዶች አይጦች እንደበፊቱ ሥር የሰደደ ኮኬይን ወይም ሳላይን ይሰጡ ነበር ፣ ግን ከእያንዳንዱ መርፌ 30 ደቂቃ በፊት በኮኬይን ቡድን ውስጥ ያሉ አይጦች የጨው ፣ የ D1 ተቃዋሚ SCH 23390 (0.5 mg / kg) ፣ ወይም የ D2 ተቀባዩ ተቃዋሚ ኢቲፕሎራይድ ይሰጡ ነበር ፡፡ (0.5 mg / kg) ፡፡ ከመጨረሻው የኮኬይን መርፌ በኋላ እንስሳት 24 ሰዓት ተንትነዋል ፡፡ የምዕራባውያን መደምሰስ እንደሚያሳየው D1 ፣ ግን D2 አይደለም ፣ ተቃዋሚው ቀደም ሲል እንደዘገበው ΔFosB (p <0.0001; F = 18.96; df = 18) ውስጥ የኮኬይን መካከለኛ ሽግግርን ሙሉ በሙሉ አግዶታል (ኖይ እና ሌሎች, 1995) እና በ CaMKII (p = 0.0005; F = 10.99; df = 18; ምስል 3G እና H). እነዚህ መረጃዎች ኮኬይን በኬሚካይ ጂን ውስጥ በተለይም በ D1-type MSN የ NAc shell ላይ የ ΔFosB-mediated ሽግግሩን ይጨምራል የሚል መላምትን ይደግፋሉ. በዚህ አንጎል ክልል ውስጥ ስለ CaMK II ሕላዌ ይህን ማዕከላዊ ተፅእኖ በግልጽ የሚያሳየውን ለማሳየት ወደፊት በሚደረጉ ጥናቶች ውስጥ አስፈላጊ ነው.

ΔFosB ለካኪን ለውጥ ለካይ ኬን ማወቂያን በኬክስ ሼል ውስጥ ሁለቱም አስፈላጊ እና በቂ ናቸው

የባክሣንጂ ጂትን መጠቀም ለማሟላት, በኬሚካል-ተማራጭ ጅን መጠቀም በኩይቲዎች ሽግግር በመጠቀም የ CaMKIIα ን ኮኬይን ለማጣራት ΔFosB የሚለውን ሚና ተጠናቀቅን. በአዶኖ-ተያያዥነት ያለው ቫይረስ (አኢት) የተባሉትን ቫይረሶች በሴካ ጎድጎ ወራጅ ተባእት አይጥ (እሾህ በሚታወቅበት ቦታ ላይ) ΔFosB እና GFP ወይም GFP ብቻ መሆን አለበት. እንስሳቶቹ አንድ ጊዜ የ 10 mg / kg ኮኬይን አንድ ወጥ IP መርፌ ይሰጡ ነበር. እንስሳት ከእንስሳት ጋር ሲወዳደሩ ΔFosB / GFP ከመጠን በላይ መጨፍጨፋቸው ከ GFP በላይ ብቻ ከመጠን በላይ መጨመር ያሳያሉምስል 4A). ነጠላውን ኮኬይድ ከተከተለ በኋላ የ 24 ሰዓር ጊዜ, የጂ ኤፍ ፒ ፖዘቲቭ የ NAC ህብረ ህዋስ ከእነዚህ ፍጥረታት ተለጥፎ በተፈነጠዘ ፈሳሽ ብርሃን ፈሳሽ ውስጥ ተለጥፎ ነበር. የምዕራባውያን ሕብረ ሕዋስ በምዕራቡ ስር ነክሳትን (ምስል 4B እና C) የተጋለጡ የ ΔFosB ከመጠን በላይ ተጋላጭነት እና የጂ ፒ ኤም እንስሳትን (p = 0.0070, t = 2.894, df = 30) ጋር ሲነጻጸር በጠቅላላው የኬሚካን ፕሮቲን ከፍተኛ ጭማሪ አሳይቷል. ከዚህም በተጨማሪ በካይሮክ ኤክሴሎሪልቲንግ በ "Thr286" (ኢንዛይም ማስነቃቃት ") በ ΔFosB ከፍተኛ ግፊት (p = 0.0330; t = 2.243; df = 28) 831; df = 1), እንደገና የከፋ ኮኬይን ድርጊቶችን መኮረጅ (ምስል 1C እና D). ቲE ነዚህ መረጃዎች በ A ጠቃላይ የኤክስኤን A ቀማመጥ (ኤን.ሲ.ኤል) ዛጎል ውስጥ ለመንኮራኩር ማነቃነቅ E ና ለ CaMKII ን ማስተዋወቅ E ና E ንቅስቃሴዎች በቂ ናቸው.

ተመሳሳይ የ A ስተሳሰብ ዘዴ AEF ፎርምን ለካንኔ-ማማው የኬሚካዊ ንቃተ-ንካ (NAC) ዛጎል ውስጥ ለመግረዝ A ስፈላጊ E ንደሆነ ይወስናል. ኤ.ኤስ.ቪ (አኖቭ) የተሰነዘረው የጁንዲን ፕሮቲን (አሲድ ፔኒን ዲ) አትንቆይድለው ነበር, ይህም የ ΔFosB የዝቅተኛ ፅሁፍ መዘግየት (ΔFosB)Winstanley et al, 2007) በተጨማሪም GFP ወይም GFP ብቻ. ከሁለት ሳምንት በኃላ, መተላለፊያ መግለጫው ከፍተኛ ነው, እንስሳት በየቀኑ ለ 10 ቀናት ኮኬይን (7 ሚ.ግ. / ኪ.ግ) ወይም ሳሊን በየቀኑ ለኮንስተር ፈተና (የ 5 ሚ.ግ. / ኪ.ግ) የኪሎሜትር ምላሹን ለመፈተሽ ሞክረዋል.ምስል 4D). ΔJunD እጅግ በጣም ግፊት ከመጠን በላይ መቆየቱ የኮርሞተር መርዛማነትን ወደ ኮኬይን አግዶታል, እንዲሁም የ CaMKIIα ኢንሴሽን እና በኬካ ሼል (አግንሴ)ምስል 4E እና F; p = 0.0437; F = 2.997; ጠቅላላው df = 38), ይህም በዚህ ንዑስ ክሌይ ውስጥ ኮኬይ-ተማራጭ የሲማካይ ኢንሳይክሎፒዲያ ΔFosB የዝግጅት እንቅስቃሴ አስፈላጊ እንደሆነ ያመለክታል. በሚያስገርም ሁኔታ, Δ ጁኒ ዳም በጨው እና በኮኬን በተያዙ ሁኔታዎች (p = 0.0004, F = 8.110, df = 35) ቅናሽ በማድረግ የ ΔFosB ደረጃዎችን በመቀነስ, ΔFosB በ AP-1 እንቅስቃሴው በራሱ የቃላት ደረጃ ላይ ተመስርቶ.

CaMKII Phosphorylates ΔFosB በ Ser27

በመጠቀም ላይ በብልቃጥ ውስጥ የፕሮቲን ኪይነስ ምልከታዎች, ንጽሕናው ΔFosB ለካሚካII ተለቅ ያለ ጥንካሬ እንደሆነ አረጋገጥን. የእሳት ነበልባል₆-ΔFosB ከ CaMKIIα እና ATP ወደ ΔFosB ውስጥ ኤሌክትሮኒካዊ ቅኝቶች ወደላይ ተለዋወጡምስል 5A); በርከት ያሉ የቡድኑ ቡድኖች በርካታ የፎክስዮክዬሽን ጣቢያዎችን ጠቁመዋል. ተመሳሳይ በብልቃጥ ውስጥ የ kinase ምርመራዎችን በ [γ-³²P] ATP የሬዲዮለማስተር ፎስፌት በተቀየሩ ΔFosB ባንድ ውስጥ ተካትቷል (ምስል 5B), የፕሮቲን ቀጥተኛ ፎሆን ሆሄሪዝነትን በማሳየት. ፊፋ-ተኮር የሆነ ፈሳሽ (ኢንቲን) ፈለክን ለቀደመው Ser27 በ ΔFosB (ኡ. ኡ. Et al., 2006). ምንም እንኳን ይህ አንቲ አንቲየም Ser27-phosphorylated ΔFosB (መረጃው የማይታየው) በሚይዛቸው የአዕምሮ ፈሳሾች ላይ ምንም ምልክት ሳያሳየን, ሴክስክስክስክስ ፎስፌሪልሽን በ በብልቃጥ ውስጥ ካንሴይኤስ በመጠቀም CaMKII ን (ምስል 5B). የ ΔFosB የ CaMKII ፎስፋሎሬዚሽን የኪነቲክ ትንታኔዎች ይህ ለ kinase (ኃይለኛ ኪታብዝ) በጣም ኃይለኛ ጥራጥሬ ነውምስል 5C), ከሚታወቅ K_M የ 5.7 ± 2.0μM እና K_CAT ከ 2.3 ± 0.3 ደቂቃ^-1. እነዚህ ውጤቶች በደንብ ከተገለጹት ጋር ተመጣጣኝ ናቸው Vivo ውስጥ የ CaMKII ንስርች (ኮሉምራን እና ብራውን, 2004). በተጨማሪ, CaMKII phosphorylates ΔFosB በ 2.27 ± 0.07 ሞላ / ሞለስ (stochichometry)ምስል 5D), በሱ ውስጥ ቢያንስ ሦስት የኬሚክ II የፎቶሎፕላሪስቶች መኖራቸውን በማመልከት₆-FFosB ፕሮቲንን በተመለከተ ከ ምስል 5A.

ነጠላውን የፎክስዮትሪየም ጣቢያን ለመመርመር, የእኛን የናሙናዎች ማኔጅተን እንጠቀማለን በብልቃጥ ውስጥ kinase assays. ምስል 5E ቀደም ሲል በባህሪው Ser27 እና በብዙ ተጨማሪ ጣቢያዎች (ዉስጥ የማይታዩ) ΔFosB ፊፋዮፕላሊቲን ያሳያል. የ Ser27 ቀዳሚ የመግባቢያ ባህሪይ ከተሰጠን, በ Ser27 የ phospho- እና Non Phospho-states ግዛቶችን በማንሳት በዚህ ጣቢያ ላይ አተኩረናል, ከዚያም የታወቁ የተጠቀሱትን የ Peptides አምራቾች እንደ የ MRM ትንታኔዎች በ ΔFosB በፊት እና በኋላ በብልቃጥ ውስጥ የኬፕሎሌዜሽን በካሚክ II. ቀጣጣዊ መጠኖች (ምስል 5F) Ser27 ለ CaMK II ከፍተኛ ኃይል እንዳለው ያረጋግጣል. እነዚህ ውጤቶች በ ΔFosB ውስጥ በበርካታ ፍሎረክሎሬዲክ ውስጥ ከሚገኙ ቅሪቶች መካከል ሲ ኤክስ ኒክስ ለ CaMK II በተለየ ሁኔታ ውጤታማ ነው.

CaMKII መፍትሄዎች በ NAc Shell ውስጥ የ ΔFosB ኮኬን ማከማቸት

CaMKII ÅFosB ስለሚሆን ፎስፎርዝተላታል በብልቃጥ ውስጥ ይህም በተረጋጋ ሁኔታ የተረጋጋ እንዲሆን ያደርጋል በብልቃጥ ውስጥ ና Vivo ውስጥ (ኡ. ኡ. Et al., 2006; Ulery-Reynolds et al, 2009), የ CaMKII እንቅስቃሴ እንቅስቃሴ የ APF ደረጃዎችን በ NAc ይቆጣጠረን Vivo ውስጥ. ለዚህ ጥያቄ መልስ ለመስጠት, በበርካታ የአንጎል ክልሎች ውስጥ በካልሲየም በሌለው የካይሜክ II (T286D) ባዮኬሚን ተለዋጭ መተንተን (ሎድ) ላይ በመሞከር (ናሲ)ሜይፎርድ እና ሌሎች, 1996; Kourrich እና ሌሎች, 2012). ዕድሜያቸው ለጋለ ጎልማሳ ጎልማሳ ወንዶች እና ዝርያ የሌላቸው ወፍጮዎች በ 20 mg / kg ኮኬይን ወይም በጨው ውስጥ ለአንድ ቀን ለ 14 ቀናት አንድ ጊዜ እንጨምራለን, ከዚያም የመጨረሻውን መርፌ ከተጨመረ በኋላ አንድ ቀን ከሞተ በኋላ እንስሳቱን መርተናል. የ'ΔFosB መሰረታዊ ደረጃዎች በኤንሲ ሼል (p = 0.0001, F = 9.207, df = 37) ውስጥ በሚገኙ የሚውሉ የእንስሳት ዝርያዎች ውስጥ ተገኝተዋል, ነገር ግን ጥልቀትምስል 5G እና H). በሚያስገርም ሁኔታ, የዲ ኤፍ ፋሲን ኮኬይ-ጥገኛ ግፊት በሴል እና በሴል ውስጥ በሚገኙ የሚቀይሩ እንስሳት ላይ ታግዶ ነበር, ይህም CaMKII ቀጥተኛነት ΔFosB በኬንካ ሼል ውስጥ ቀጥተኛ ቁጥጥር ሊያደርግ ይችላል, ሆኖም በሁለቱም የጋራ ንብረቶች ውስጥ ኮኬይን-ነቃፊ መንገዶች ያሉት ΔFosB .

በ ΔFosB-Mediated Structural እና Behavioral Plasticity የ CaMKII እንቅስቃሴ ያስፈልጋል

በኒ.ኤስ.ሲ.ኤስ. (አረንጓዴ) የዲንጌቲክ እጢዎች (ኮንዶም) ውስጥ ኮኬይን ማራመጃ በዚህ አንጎል ክልል ውስጥ ከሚታወቁ የአርሶአደሮች ማስተዋወቁ ውስጥ አንዱ ነው, እና እንዲህ ዓይነቱ ጭንቅላት በአደገኛ ዕጾችሮቢንሰን እና ኮልብ, 2004; ራሰሰ እና ሌሎች, 2010) እና ለ D1-type MSN ምችዎች እንደሚመረጡ ሪፖርት ተደርገዋል (ሊ እና ሌሎች, 2006). በቅርብ ጊዜ ውስጥ በኬኒን የሚደረጉትን የዱርቲካቲክ ስጋቶች አከባቢ በ "ΔFosB" እና በእሱ የታችኛው የዝግጅት መርሃግብር ("ሚዛልና ሌሎች, 2010). በዲንቸሪክ ስፒል ስነ-ምህዳሩ እና በሌሎች የአንጎል ክልሎች እና የሙከራ ስርዓቶች ውስጥ ኢንሳይክሎፒዲያን በተመለከተ የ CaMKII ተሳትፎ ሰፋፊ ጽሑፍ ቢኖርምጆርዲን እና ሌሎች, 2003; Penzes እና ሌሎች, 2008; ኦኪናቶ እና ሌሎች, 2009), በ NAc MSN ስነጣ አይነትነት ውስጥ ሚናው አልተመረጠም. ስለሆነም, የ CaMKII እንቅስቃሴው ለኤፍኤስቢ-መካከለኛ የሂዩሜል ስፔል ጎኖች (ኢንሴሪቲክ) ሚዛን ማካተት የሚያስፈልግ ከሆነ የ CaMKII Inhibitor Peptide AC3I ሞዴል ወደ GFP በመተግበር በካይኤምሲቢ II እንቅስቃሴ Vivo ውስጥ (ዬንግ እና ሌሎች, 2005; ክሉክ እና ሌሎች, 2012) በአዋቂ አይጦች ላይ በ ‹ናክ› shellል ውስጥ ‹osFosB› ቫይረስ ከመጠን በላይ መገመት በ MSN dendritic spine density (p <0.0001; F ምስል 6A እና B) ቀደም ሲል ሪፖርት ተደርጓል (ሚዛልና ሌሎች, 2010), እና ይህ ጭማሬ በዋነኝነት በስፋት (p = 0.0027, F = 5.319, df = 59) እና በጥርጣሬ (p = 0.0378, F = 2.988, df = 59) የጡንት ዓይነቶች (ሁለቱም ያልበሰሉ እንደሚመስሉ ይታሰባሉ) (ምስል 6C-E). በበሰለ እና እንጉዳይ ቅርፅ የተሰሩ የእብሪት ውጤቶች ላይ ምንም ውጤት አልተገኘም. ሆኖም ግን, GFP-AC3I ሲሳሳቱ, ΔFosB የአከርካሪ ማስነጠፍ ሙሉ ለሙሉ ተወስዷል (ምስል 6A-E), ይህም ለኤ.ኤስ.ሲ.ቢ. (ኤ.ኤስ.ሲ.ቢ) በኒ.ኤ.ሲ (DKN) የአከርካሪ አጥንት ውስጥ የዱር /

እኛ ቀጣይ የሆኑ የቫይረስ መሳሪያዎች ለኮክሽን ባህሪያዊ የስነምግባር ተፅእኖ ለ "ΔFosB" የሚያስከትለው የ CaMKII እንቅስቃሴ አስፈለገ. ወደ NAC ዛጎል በቫይረክሲቭ ከተከተቡ በኋላ የ 72 ሰዓታት እንስሳት አንድ ነጠላ መርፌ ለ 5 mg / ኪ.ሜ ኮኬይን እና በአንድ ጊዜ የመንኮራኩሮቻቸው እንቅስቃሴ ተመዝግቧል. ከዚህ በፊት እንደሚታየው ኤፍ.ኤስ.ቪ.ምስል 4A), ኤኤፍኤስ-የተዳከመ የ ΔFosB የክብደት መጠን ወደ ኮኬይን (p = 0.0002; F = 8.823; df = 37; ምስል 6F). እንደ የዲንችላስቲክ ሽክርክሪት እንደሚታየው, የ GMP-AC3I ን ንፅፅር በካፒኤን-ኤን-ኤ (CMP-ACXNUMXI) ን ተጽእኖ በመገጣጠም የ COFB-mediated cocaine sensitivity መጠን ሙሉ በሙሉ አግዷል, ይህም የ CaMKII እንቅስቃሴ ለ "ΔFosB" በካይኒን ባህሪይ ተፅእኖዎች ላይ ለውጥ እንዲያመጣ ያስገድዳል.

መሄድ:

ዉይይት

የአሁኑ ጥናት የሚያተኩረው ኤኤፍሲስ ኤን ኤ (NAc) የተባለ የኬሚካሌን ጂን (የኬሚካሌን ጂን) በኬንሲ ሼል ውስጥ በሚመርጥበት ጊዜ ነው.. CaMKIIa በመቀጠል ፎ phosphorylate እና ΔFosB ወደ ትላልቅ ΔFosB ማጠራቀሚያ እና ከዚያም ተጨማሪ CaMKIIα ማስተዋወጥንምስል 6G). ኮኬይን ለረዥም ጊዜ በተጋለጡበት ወቅት ሁለቱ ፕሮቲኖች የሚያባክኑባቸው ደረጃዎች ለአደገኛ መድሃኒቶች ባህሪ ምላሽ እንዲሰጡ ለማድረግ ወሳኝ መንገዶችን ያበረክታሉ. ይህ ሁለቱም ΔFosB እና CaMKII ለኮኪን ለተያዙ የባህሪ ምላሽ ባህሪያት የግድ መሟላት ያለባቸው ቅድመ-መላምት ነው. (Pierce እና ሌሎች, 1998; Peakman እና ሌሎች, 2003), እና ይሄንን ስለ ΔFosB በ NAc shell ውስጥ በተለይ የቫይረስ አቀራረብንFigs 4 ና እና66).

ምንም እንኳን በ "D1" ዓይነት MSN የሚተላለፍ የ A ልፎ A ልፎ A ልፎ A ልፎ A ልፎ በ A ልካካሚው E ና በካኔን ናኔቭ E ንስሶች ውስጥ የ CaMKII ን መተላለፍ ቢለማም በሁለቱም ክልሎች ውስጥ የሚከሰተውን የ CaMKII E ንዳይበዙ በ A ካባቢው ውስጥ . ይህ ልዩነት በቢራጂን ሞዴል ከተመዘገበው ከፍተኛ የ ΔFosB ደረጃዎች ጋር ሊዛመድ ይችላል. ይሁን እንጂ የኬሚካላዊውን የኬሚካለሽን ቅርፊት ለማስተካከል የኮኬይን ችሎታም ያንፀባርቃል. ቁ ዋነኞቹ የ MSN ተጠቂዎች የ <ΔFosB> ማስያዣ እንዲያደርጉ ወይም በኋለኛው ክልል ውስጥ እንዳይካተቱ ለማድረግ ነው. በእርግጥ, በኬሚካዊ የኬሚካሌ ማእከል ውስጥ የኬሚካዊ አይነቶችን በሴሚንሴ ቫይታሚን ዲያቆንሲስ ውስጥ የሚያራምዱ የሴክስቲክ ዲያቆሌሽን (ዲያሲቲዜሽን) የሚያሳየው የ ChIP ውሂብ, የ chromatin ዘዴን ለመሳተፍ ይደግፋሉ. ከዚህ መላምት ጋር በሚስማማ መልኩ, በ D1-type MSN ΔFosB እጅግ በጣም ወሳኝነት ከኮኬይኑ በሌለባቸው የሲኤምካይኤን ኢንሴሽን መንዳት ይችሉ ነበር (ምስል 3F), ይህ በካንሲን ተጋላጭነት ወቅት የኬሚካ (ሲማክዋይ) መርዛግብር ማሻሻያ መኖሩን የሚጠቁም ነው. በካማኪ 2 ኛ ማራኪያን የ chromatንድ መልክዓ ምድር ላይ ደንብ ማውጣቱ የከፋ መከላከያ ክኒን (ኮኬይን) በካይሮ ውስጥ ኮኬይን (ኮኬይንስ) በመግፋቱ ምክንያት የሚከሰተው ለምን እንደሆነ ይገልፃል.ምስል 1E) ግን ዕፅ-እምቢተኛ እንስሳትን አይደለም (ምስል 1D). ይህ ኤፒቬኔክስ "ጂን ማስጀመር" ውጤትን ሊያመለክት ይችላል (ΔFosB (ሮቦንና ናስለር, 2011), እናም በዚህ መንገድ የኮኬይን ማቃለልን በማጣራት አንድ ሞለኪውላዊ ዘዴ ሊሆን ይችላል (Pickens et al, 2011). ይሁን እንጂ ለዚህ ክሮማቲን ለውጥ ከሥልጣን ፍላጎት ጋር ተያያዥነት አለው በሚል ምክንያት ከጊዜ በኋላ መጨመር ይኖርበታል. ጉዳዩ ይህ መሆኑን, እና ሌሎች ዘረ-መልዎች ΔFosB-ጥገኛን, ንዑስ ክበባዊ-ተኮር ደንብን በ ኮኬይን ማሳየቱ ይመረጣል. በተጨማሪም የምንገልጸው የምግብ አመጣጥ ዑደት መጨረሻ የሌለው የ CaMKII ወይም ΔFosB ማከማቸት እንዳልሆነ ማስታወስ ጠቃሚ ነው.ምስል 1E); ለዚህ ተጠያቂነት የሞለኪዩል "ብሬክ" መኖሩ የወደፊት ጥናቶች ዋነኛ ግብ ነው.

በተወሰኑ የሙከራ ስርዓቶች እና የአንጎል ክልሎች ውስጥ የሚታወቁት ΔFosB እና CaMKII የሚታወቁ ተግባራት በበርካታ ደረጃዎች ይደምቃሉ (ምስል 6F). ሁለቱም ሞለኪውል ከዲንቴክሽን አከርካሪ እድገት ጋር በቅርበት የተሳሰሩ ናቸው-ሲኤምኪ 2 ከፕሮቲን ሲትሶሌትተን (ኦኪናቶ እና ሌሎች, 2009), የአከርካሪ አናት መጠን ይቆጣጠራል (Matsuzaki et al, 2004), እና ለዲፕላስቲክ-አስፈላጊ እና በቂ ነው-ፊሊፒዲያ እና የሾፒድያ ቁጥር በሂፖፖፓካል ኦርዮቲክክሲክ ባክቲካ ባህሎች (ጆርዲን እና ሌሎች, 2003), ሸኤች.አይ.ሲ.ኤስ.ቢ. (ኤች.አይ.ሲ.ኤስ.ቢ) በሲ ኤን ኤ ሲ ኤም ኤስሚዛልና ሌሎች, 2010). በተጨማሪም ሁለቱም ሞለኪውሎች ከኤፒኤም (glutamate) ተቀባይ የተባሉት መቆጣጠሪያዎች ጋር የተያያዙ ናቸው. CaMKII ሙሉ የአጠቃላይ ኤፒኤፍ መቀበያ መርሃግብሮችን አያስተናግድም, ግን AMPA መቀበያዎችን ወደ ሰርፕሬፕስ (ሰርፕላስቲክ ሰርቪስ) እንዲገባ አያደርግም እናም በአሜሪካን ኤክስኤንሲ (ሰርቪስ) ውስጥ በ "ፎፎሎሪንግ" ግላይኦክስንጌትስ "GluA1" ውስጥ በ "ግሮኤክስክስ" ውስጥ በሄፕኮምፕታል ፒራሚድል ነርቮች ውስጥ, Vivo ውስጥ (የተገመገመ በ (ማሊኖው እና ማሌንካ, 2002; ኮሉምራን እና ብራውን, 2004)). እንዲህ ዓይነቱ የ GluA1 ሕገ-ወጥ የሰዎች ዝውውርን ወደ ዘረማዊነት ማፈላለግ በዶክ ምልክት ኮኬይን እርምጃ ውስጥም ተካትቷል (Boudreau and Wolf, 2005). ከዚህም በላይ ለኤ.ኤስ.ፒ. ተቀባይ ኢነርጅን (ኤኤፒኤኤፒ) ማግኘቱ በባህሪው ሲ ኤም ኤ (CMAII) ውስጥ ከመጠን በላይ ተጋላጭነት በ D1 dopamine መቀበያ ላይ ጥገኛ ነው (ዘፋኝ እና ሌሎች, 2010). ረጅም-ጊዜ D1-ተኮር የ ΔFosB የከፍተኛ አጫጫን የ GluA2 ግብረ-ስርዓት በ NAcKelz እና ሌሎች, 1999), ይህም በአላማ ግጭት አማካይነት በ "GluA1" አማካይነት የአማራ መልሶ መፍትሄዎችን የሚያስተጓጉል ሲሆን, የአጭር ጊዜ ΔFosB መጠነ-ልክነት እና የአጭር ጊዜ ኮኬይን ተጋላጭነት በዚህ ንዑስ ደረጃ ላይ ምንም ተጽዕኖ አይኖረውም (ምስል 1). ሆኖም ግን, በአጭር ጊዜ ውስጥ ΔFosB እጅግ በጣም ግፊት ቢገጥመንም, በኤክስኤ ውስጥ በ D1-type MSN ውስጥ የ AMPA ምላሾችን ይቀንሳል.Grueter et al., 2013). እነዚህ መረጃዎች ከጊዜ ወደ ጊዜ ጥገኛ በሆኑ የሱስ ሱስ የተደገፉ ጐጂ ደረጃዎች ላይ ተፅዕኖ የሚኖራቸው ጊዜያዊ ጥገኛ የሆኑ የኒውትዮቴጅቲስ ተከታታይነት ያላቸው ተለዋዋጭ መሳሪያዎችን ነው. በባህሪው ደረጃ, ሁለቱም CaMKII እና ΔFosB ለካዮሜር ማነቃነቅ ለኮኬይን (ከላይ ያለውን ይመልከቱ) እና ሁለቱም በቆርጠው ዘላቂ የኮኬይን እራስ-አስተዳዳሪ (ብሬን) ውስጥ ያስፈልጋሉኮልቢ እና ሌሎች, 2003; Wang et al, 2010), ሁለቱ ፕሮቲኖች ለአንዳንድ የአጭር እና የረጅም ጊዜ ባህሪያት ከአደገኛ እጽ መጋለጥ አስፈላጊ ናቸው አለ. ምናልባትም, ΔFosB እና CaMKII እንደዚህ ያሉ ውስብስብ ባህሪ ለውጦችን በ NAC ሲሳፕቲክ ተግባሩ ውስጥ በመለወጥ ያስተካከላሉ, ምንም እንኳን ተጨማሪ የሲዊፒክ ክስተቶችን ከጠባይ ለውጥ ጋር በቀጥታ ለማገናኘት አስፈላጊ ነው.

የ CaMKII ኢንዛኒዜም በተመሳሳይ ጊዜ ከተለያዩ የስኳር ፕሮቲኖች ጋር ይሠራል (ሮቢል እና ሌሎች, 2005) (ፒዲኤዲ), ለሲቲፕቲክ ፕላስቲክ ጠቃሚነት የተገጠመለት ክስተት ናቸው. በተለይም, CaMKII ን ከ NMDA-type glutamate receptor ጋር የተገናኘው የ GluN2B ንዑስ መቆጣጠሪያ በቅርብ ጊዜ ውስጥ ሁለቱንም የሲዊፕቲክ ፕላስቲክ እና መማርHalt et al, 2012). የ AC3I peptide የ CaMKII ን ራስ-ሰር ወደ ተከላካይ ጎራ ሲቀይር እና ይህ በእንዲህ ዓይነት ኤንዛይም catalytic ተግባር እንቅስቃሴን የሚገታ ሲሆን, በርካታ ፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብሮችንስትራክ እና ሌሎች, 2000; ሮቢል እና ሌሎች, 2005). ስለዚህ, እዚህ ሪፖርት የተደረገው የ HSV-GFP-AC3I በባህሪ እና በሥነ-መለዋወጥ ምክንያቶች የሚከሰተው የካይፕኪይስ (ፕዮፒክ) መርዛማ ኬሚካሎች, በካሚካይ ኢላማ ላይ የተደረጉ ለውጦች ወይም በካሜሚ II በሲምፕስስ (በሲምፕኪየም) ላይ ያቀረቡት መዋቅራዊ ለውጥሊንማን እና ሌሎች, 2002).

በቅርብ ጊዜ የተከናወነው ሥራ ከኬኬን እና ከኮኬን አሠራር ጋር የተያያዙ በርካታ የቁሳቁናዊ ልዩነቶች እንዳሳዩ የታወቀውን የ ΔFosB-CaMKII ቀለብ ወደ NAC ሼል መገደብ ልዩ ትኩረት ነው, በተጨባጭ በአይቲአህዝ (ሰንጠረዥ S1) . በ NAc shell ውስጥ ያሉ MSNዎች ለበርካታ ሳምንታት ለረጅም ጊዜ የሚቆይ የቆየ ኮኬይን ካሳለፉ በኋላ የመንፈስ ጭንቀትን ያሳያሉ, በተመሳሳይ እንስሳቱ ውስጥ ያሉ ዋናው MSN ምንም የጨጓራ ​​አቅም (1-3 ቀን) በካንሰሩ ደረጃ ወደ መለኪያ ደረጃ ሲመለስ (2-XNUMX ቀን)Kourrich እና ቶማስ, 2009). በተጨማሪ, በርካታ የሲንፕቲክ ፕሮቲኖች በ NAc shell ውስጥ በተለያየ መልኩ ቁጥጥር ይደረግባቸዋል ቁ ለግዥን ኮኬይን የተጋለጡ የእንስሳት ዋነኛ ገዢዎች, ማለትም GluA2 (Knackstedt et al, 2010). ክሮኤክ አምፖታይሚን ሲሜካ IIን በተለይም በ NAc shell ()ሎቴስ እና ሌሎች, 2010), ከኮኬይን ተመሳሳይ ውጤት እናገኛለን. ይሁን እንጂ ΔFosB በሁለቱም የኬካን ዛጎሎች እና በከባድ ጥቃቅን ኮኬይን ውስጥ ይነሳሳል (ፔሮፊቲ እና ሌሎች, 2008) እና በካሜራው ላይ ያለው የኬሚካይ ግኝት ΔFosB ላይ ጥገኛ እንደሆነ ስለሚያሳይ, ግኝታችን በሁለቱም ጥቃቅን ኬሚካሎች ውስጥ ለሚመረጡ የካሜማ ኬላዎች መቆጣጠሪያዎች በካሚካ 2 ኛ ሴቲንግ መካከል ለሚገኙ ለየትኛዎቹ የሽግግር ስልቶች አዳዲስ ማስረጃዎችን ያቀርባሉ.

በጣም በቅርብ ጊዜ የተከናወነው ሥራ በ D1- እና D2-type NAC MSN ዲስ መካከል ያለውን ልዩነት በመጥቀስ ላይ አተኩሯል. ምንም እንኳን ሁለቱም D1 እና D2 ተቀባዮች ኮኬይን በሚያስገኘው ሽሚያ ተካፋይ ቢሆኑም (ራስ, 2010), በቅርብ ጊዜ የተደረጉ ጥናቶች እንደሚያመለክቱት የ "D1" ዓይነት MSN ያላቸው የመርጃዊ ማንቃራት እንቅስቃሴ ለኮኪኑ የባህሪ ምላሾችን ይጨምረዋል, D2-type የ MSN ማንቂያ ተቃራኒ ውጤት አለውLobo እና ሌሎች, 2010). ከእነዚህ ጥናቶች አንጻር D1-receptor knockout mice ከኮኬይን እራስን የማስተዳደር ()Caine et al, 2007), ነገር ግን D2 ጠፍተው አይሄዱም (Caine et al, 2002). D1 የግብረሰዶማውን አስተዳደር በቀጥታ ወደ NAC ኮንሴይ ፈላጊዎች ባህሪን መልሶ በመተካት ምሳሌዎች ያስጀምራል (ራስ, 2010). የሚገርም ነገር, ይህ ውጤት በካይኤንሲው የኬሚካይ (የኬሚካይ) እንቅስቃሴ ውስጥ የዲ ኤን ኤም ኤ (NMKII) እንቅስቃሴን (ዲ ኤን ኤም ኤክስ) ጭማሪን ይጠይቃል, ነገር ግን ቁልፍ አይደለምአንደርሰን እና ሌሎች, 2008), በ D1- እና ሼል-ዝርዝር ΔFosB-CaMKII ቅደም ተከተል ጋር አብሮ የሚሄድ ውጤት ነው.

ቀደም ሲል እንደጠቀስነው Ser27 በ ΔFosB በፋይሚን ኪንሴሲ-2ኡ. ኡ. Et al., 2006) ይሁን እንጂ, CaMKII phosphorylates ΔFosB እዚህ እና በሌሎች ከፍተኛ ቁጥሮች እና ቁመኒዮሜትሪ ያላቸው ሌሎች ተያያዥነት ያላቸው ቦታዎችን እና ከፍተኛውን M_r በ ΔFosB (ምስል 5A) ከኮኬይን መጋለጥ ጋር Vivo ውስጥ (Nestler, 2008). የ Ser27 ፎፎሎሪሌሽን የ ΔFosB መረጋጋት እና የዝግጅት እንቅስቃሴ (ΔFosB) መጨመሩን እናውቃለን.ኡ. ኡ. Et al., 2006; ኡይል እና ናስለር, 2007; Ulery-Reynolds et al, 2009). የወደፊቱ ስራ በአሁኑ ጥናቱ ላይ የተጠቀሱት የ "ΔFosB" ፎፎሮሎጊዝ "አዲስ ፋብሪካዎችን" ለይቶ የማወቅ እና ተግባራዊ ውጤት ላይ ያተኩራል.

እዚህ ላይ የተገለጸው የምግብ መገናኛ ቅኝት በተደጋጋሚ የሚከሰተውን ኮኬይን በተደጋጋሚ የሚያስተላልፍ አዲስ የኮንቬንሽን ሥራ የሚያከናውንበት አዲስ ዘዴን ያቀርባል. ስለዚህም ይህ ባዮኬሚካዊ መንገድ ለወደፊቱ የሱስ ሱስ በሚያስፈልጋቸው በሽታዎች ጣልቃ-ገብነት ውስጥ ጣልቃ-ገብነት እንዲኖር ሊያደርግ ይችላል. ኬሚካ 2 ለበርካታ የካልካን ነርቮች እና የባህርይ ተግባራት የበዛ ስለሆነ ብዙውን ጊዜ የ CaMKII መቆጣጠሪያዎችን መጠቀም በቀጥታ ሱስ የተያዘበት መንገድ ነው. የእኛ መረጃ እንደሚያመለክተው ለካንሰሩ አንድ ሴል ዓይነት እና ለአንጎል ሽልማት ወረዳዎች የተወሰነ የካሜካ ኬሚካዊ ማስተካከያ ዘዴን የበለጠ ዒላማ በማድረግ ዒላማ ማድረግ የሲዊክ ኬሚካዊ ተጽእኖን ከማስወገድ የሚያግዘውን የሥርዓተ-ዒላማ ግብ ሊያቀርብ ይችላል.

መሄድ:

ማረጋገጫዎች

ይህ ሥራ የተደገፈው ከብሄራዊ የአደንዛዥ እፅ ተቋም (EJN), NIDA-Yale ፕሮቲሞሚስ ማዕከል DA018343 (AJR እና EJN) እና የሃርትwell ፋውንዴሽን (AJR) በተገኘ የገንዘብ ድጋፍ ነው. የጸሐፊዎቹ ምስጋና ለጋስ ስጦታ የሆነውን ΔFosB እና ሮጀር ኮልባን ለትክክለኛው ስጦታ CaMKIIa ስጦታ ስለሰጡ Gabby Rundenko ማመስገን ይፈልጋሉ.

መሄድ:

ማጣቀሻዎች

1. አህመድ ሺ, ኮውቦ. ከመካከለኛ እስከ ከፍተኛ የመድሐኒት ጣልቃገብነት ሽግግር - በሄዲኒክ የተወሰነ ነጥብ ላይ መለወጥ. ሳይንስ. 1998; 282: 298-300. [PubMed]
2. Anderson SM, Famous KR, Sadri-Vakili G, Kumaresan V, ሽሚት ኤችዲ, ባስ ኤስ ሲ, ታርዊለርኤኤፍ ኢፍ, ቻድ ኤች ኤ, ፒሲሲ ሲ. CaMKII: ባዮኬሚካል ብሪጅን በማገናኘት የኮፖን እሽነትን በመፈለግ ዶክሚን እና ግሉታሜትን ይጠቀማሉ. ናታን ኔቨርስሲ. 2008; 11: 344-353. [PubMed]
3. Boudreau AC, Wolf ME. ከኮኬይን የስነምግባር ማነቃቃት በ Nucleus accumbens (ኒውክሊየስ አክሰንስ) ውስጥ ከኤፒኤፍ መቆጣጠሪያ ገጽታ ጋር የተያያዘ ነው. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2005; 25: 9144-9151. [PubMed]
4. ቤክሌይ ዴኤ, ኮልብራን አርኤጂ, ፊን አይኤል, ስደሪል TR. የባካኮሎቫዮረስ ሂደትን በመጠቀም የ Ca2 + / calmodulin-dependent Protein kinase II alpha-subunit መግለጫ መሆን እና ባህርይ ማሳየት. ባኮሆም ቢiophes Res Commun. 1990; 173: 578-584. [PubMed]
5. ኬኔን SB, Negus SS, Mello NK, Patel S, Bristow L, Kulagowski J, Vallone D, Saiardi A, Borrelli E. dinamin D2-like receptors ውስጥ ኮኬን እራስን በማስተዳደር በክትትል ውስጥ የተካሄዱ ጥናቶች: D2 receptor mutant mice and novel D2 receptor ጠላት. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2002; 22: 2977-2988. [PubMed]
6. ካይን ኤስ.ቢ.ኤስ, ቶምሰን ኤም, ጋብሪኤል ኢ. ኬ., በርክኦቬትስ ኤች., ወርቅ ኤልኤች, ኮው ቦርብ, ቶንጋዋ ኤስ, ጄምስ ጃ, ሲ ኤም. ዲፓሚን D1 ተቀባይ ኮምፓንዲን አውታር እራሳቸውን የሚያስተዳድሩ. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2007; 27: 13140-13150. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
7. ካረል ቲኤል, ኦህኒሺ ዩ, አኒሺ ዩ, አልቢይኢ ውስጥ, ዊልካን ቢ, ማሙር ኤ, ናስትለር ኢ. ለፋስቴክ እመቤትነት-ተከላካይ እና ለግቤት-ተፅእኖ ያሉ ስርዓተ-ጥገኛዎች-የ FosB ጥልቀት ጎራዎች እና የዴልፎፋስ ቢዎች መረጋጋት. ዩር ጄ. ኒዮርስሲ. 2007; 25: 3009-3019. [PubMed]
8. ኬን ጄ, ኬልዝ ሜቢ, ዚንግ ጂ, ሳይካይ አይ, ስቴፌን ሲ, ሹክፔይ ፒ, ፒኮዚቶ ኤም, ዱማን ሪ, ናሰልት ኢጁ. ዝርያ ያላቸው እንሰሳት, አንጎል ውስጥ ዒላማዎች የሚያመለክቱ የጂን አካላት. ሞል ፋርማኮል. 1998; 54: 495-503. [PubMed]
9. ክሪስቶልድ ዲ. ዲ. ኤ. ጂ. ሳ. ሳ. ዱምሪዩ ዲ. ሮቦን ኤ ኤች, ጄንሰን ሰውስ ኤች ኤፍ ኤፍ, ክሪሽናን ቪ, ሬዬስ ሲኤም, ሃን ኤች ኤ ኤች, አቢል ጄ ኤል, ኢኢስ አር ኤ ኤች, ዲየዝ ዲኤም, ፈርግሰን ዲ, ኔቨ አርኤል, ግሪጋርድ ፒ, ኪም ዮ, ሞሪሰን JH , ራሲሶ ሳጄ IkappaB kinase የማኅበራዊ ውድቀት ጭንቀት-አስገዳጅ የሳምፕቲክ እና የባህርይ ፕሮቲንነትን ይቆጣጠራል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2011; 31: 314-321. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
10. ኮልሃን RJ. በከሲክስX + / calmodulin-dependent ጥራጥሬ ፕሮቲን መጠን 2 በካል ኦውሮፊዮሎጅሎሽን እንዳይተነተን ማድረግ. ጀ ባዮል ኬም. 2; 1993: 268-7163. [PubMed]
11. ኮልሃን RJ. ፕሮቲን / ፎስፋዲን እና ባክቴሪያን / ፕሮቲንዲንዲን-ተከላካይ የፕሮቲን ኪይዝስ II-ጥገኛ ሰፔጅቲፕ ፕላስቲክ. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2004; 24: 8404-8409. [PubMed]
12. ኮልብራን RJ, ብራውን AM. ካልሲየም / ረጋ-ዑዲን-ተከላካይ የፕሮቲን ኪይዝ II እና የሳይፕቲክ ፕላስቲክ. Curr Opin Neurobol. 2004; 14: 318-327. [PubMed]
13. ኮልቢ ሲ, ዊስለር ኬ, ስቴፌን ሲ, ናሰልት, የግል DW. የዱርታ FosB የደም ክፍል ዓይነቶች ለኮኒን ማበረታቻ የሚያበረታቱ ናቸው. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
14. ኩቪንግተን ሄ, 3rd, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnish Y, Berton O, Fass DM, Renthal W, Rush AJ, 3rd, Wu EY, Ghose S, Krishnan V, Russo SJ, Tamminga C, Haggarty SJ, Nestler EJ. የኢን ሂዎ ዴደቴላይዜዥን መከላከያ መድሃኒቶች የእምቅ ግፊት እርምጃዎች. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2009; 29: 11451-11460. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
15. ዳቪሽ አ, ፈርናንዴዝ-ሄርኖን, ሲዳ ጂ, ደርካን ቢ ቢ, ሊን ኤም, ሊ ኤ, ጂኦ ኤ, ሉሎ ሪ, ካባሎን ሲ, ሴሳ ዋቢ. የ caveolin-1-ተቆጣጠራቸው ፕሮቲኖች የቁጥር ቅምጦች-የ polymerase i እና የመቁጠርያ መለኪያ / CAVIN-1 በፅንሰ-ሕዋሶች ውስጥ. ሞል ሴል ፕሮቲሚክስ. 2010; 9: 2109-2124. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
16. Dumais A, Lesage AD, Alda M, Rouleau G, Dumont M, Chawky N, Roy M, Mann JJ, Benkelfat C, Turecki G. ዋነኛ የመንፈስ ጭንቀት ራስን የማጥቃትን ሁኔታዎች ያጠቃልላል: በቃኝ እና ቁጥቋጦ ወንዶች. Am J Psychiatry. 2005; 162: 2116-2124. [PubMed]
17. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC. ΔFosB በተለያየ መልኩ ኒውክሊየስ ቀጥተኛ እና ቀጥተኛ ያልሆነ የእግር ጉዞን ተግባር ያስተላልፋል. ኮትክት ናታል አክስታድ ሴይስ 2013 በፕሬስ. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
18. አርኤን, ዳላፒዛዛ ኤር ኤም አር, ዡዋን ኤ, ስታይን ኢሲ, ኳን ኤች, ጁኒ ቲ ኤስ, ዋይጂክ ሳ, ብ ብስ ኒ, ሲላቫ ኤጄ, ሲኦል ጂ. ደብልዩ. CaMKII ከ GluN2B ጋር መያያዝ በማስታወሻ ማጠናከሪያ ወቅት ወሳኝ ነው. EMBO J. 2012; 31: 1203-1216. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
19. ሂሮይ ኤን ፣ ብራውን ጄአር ፣ ኃይሌ ሲኤን ፣ ዬ ኤች ፣ ግሪንበርግ ME ፣ ነስትለር ኢጄ ፡፡ የ FosB ተለዋዋጭ አይጦች-ከፎስ ጋር የተዛመዱ ፕሮቲኖችን የማያቋርጥ የኮኬይን ውህደት ማጣት እና ለኮኬይን ሳይኮሞቶር ከፍተኛ ስሜት እና ጠቃሚ ውጤቶች ፡፡ ፕሮክ ናታል አካድ ሲሲ ዩ.ኤስ.አ.አ. 1997; 94: 10397-10402. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
20. Ito R, Robbins TW, Everitt BJ. በኒውክሊየስ ውስጥ ኮኬይ-ፈላጊ ባህሪን በተመለከተ የተለያየ ቁጥጥር ዋና እና ዛጎል ይጠቀማል. ናታን ኔቨርስሲ. 2004; 7: 389-397. [PubMed]
21. Joreissen HJ, Ulery PG, Henry L, Gournen S, Nestler EJ, Rudenko G. ማጣቀሻ እና የዲ ኤን ኤ አወቃቀሩን (ዲ ኤን ኤ) Fosb (ዲ ኤን ኤ) ማመሳከሪያ ባህሪያት. ባዮኬሚስትሪ. 2007; 46: 8360-8372. [PubMed]
22. ጁድዲን ፔ, ፊኩኑጋ K, ​​ሙለር ዲ. ካልሲየም / ረጋት ዲዲን-ነክ ያለው ፕሮቲን ኪይነስ II ለ እንቅስቃሴ-ጥገኛ የፋፖዲያ እድገትና የአከርካሪ አሠራር አስተዋፅኦ ያበረክታል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2003; 23: 10645-10649. [PubMed]
23. ኬልዝ ሜቢ, ቻን ጄ, ካርልሎን ዋር, ጀር, ዊስለር ኬ, ጊልዲን ኤል., ቤክማን መ., ስቴፌን ሲ, ቻንግ ያ ዮ, ማርቶቲ ኤል, ራስ DW, Tkatch T, ባራቆውስስ ጌ, ሱለሜይ ዲጅ, ኔቭ ራውኤል, ዲማን አር, Picciotto MR, Nestler EJ. በአእምሮ ውስጥ ያለው ዴልታ ፊስ የተባለ ትራንስክሪፕት ሐረግ መግለጽ ለኮኬይን መቆጣትን ይቆጣጠራል. ተፈጥሮ. 1999; 401: 272-276. [PubMed]
24. ክሉግ ጄ R, ማትሬን ቢ ኤን, ካሽ ታኤል, ቫም ኤች, ማቲውስ ኤች ቲ, ሮቦን ኤ ኤች, አንደርሰን ME, ደች ኤ, ኤን. ሎንዶንግ ጂኤም, ኮልራን ራጄ, ዊርነር ዲጂ. ካምካኪ II በጄኔቲክ ማራኪ (ጄኔቲክ) ማባዛትን (ዲስከን) አጥንት (spherical neurons) በተፈጥሯዊ ማራገሻዎች ላይ ማነቃቃት (የተጋለጡ) ጉልበተኞችን ማነቃነቅ እና ልዕለትን ማሻሻል. PLoS One. 2012; 7: e45323. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
25. Knከስቴድ ላ, ሙሳዌ ኬ, ላሊሚይ ሩት, ሾንትች ኤም, ክሉግማን መ, ካሊቫስ ፒ. የኮኬይን የራስ-አመራረት ስራ ከቆየ በኋላ የጠፋ ኤክስቴንሽን ስልኮችን (ኮታኒኬሽን) በማስወገድ የኮኬይንን ፍለጋን ለመግታት ያስችላል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2010; 30: 7984-7992. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
26. Kourrich S, ቶማስ ሜጄ. ተመሣሣይ የነርቭ ሴራዎች, ከሁኔታዎች ጋር ለማጣጣም ተቃራኒዎች ናቸው. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2009; 29: 12275-12283. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
27. Kourrich S, Klug JR, Mayford M, ቶማስ ሜጄ. AMPAR-የሽምችት alphaCaMKII ተፅእኖ የማይታለፍ ውጤቶች የኮኬን ሽልማት ማነቃቃትን ያበረታታል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2012; 32: 6578-6586. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
28. ላ ፓሊንግ Q, ቼካራቲ ስፒ, ቫይሉ ቪ, ሙክዬ ጂ ሴ, ኮ ጂ ጄዋ, ካላሃው ጂ, ብራድቤሪ ክሬን, ቴይለር ኖርዌይ SV, ሚዛን ኢ, ኩመር ኤ, ግሬም ኤ, ብርሀሚም SG, ክሪሺን ቪ, ትራሕ ኤፍ ኤ, ኔቭ ራኤል, ናስትራል ኤጄ, ራስሶ ሲ.ኤጄ . የኩላሊት የኬፕታር ድርሻ ኦቭቫይረር ሆርሞን-ሽምግልና በሴት እንስት ተባዕተ-ተዳማሪዎች ውስጥ ነው. ባዮል ሳይካትሪ. 2009; 65: 874-880. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
29. ሊ ኬ, ኪም ዪ, ኪም ኤም, ሔሚን ኪ, ናይር ኤ ሲ, ግሪጋር ፒ. ፒ. ኮኬን-የሴሬቲክ ሽክርክሪት በ D1 እና D2 ዳፖመን መቀበያ-ነጭ መካከለኛ የነርቭ ሴልሶች በኒውክሊየስ አክቲንግስ ውስጥ ይነሳሉ. Proc Natl Acad Sci US A 2006; 103: 3399-3404. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
30. ሊመን ጄ, ሹልማን ሃ, ካሊን ኤች. የ CaMKII ሞለኪዩል በሳይፕቲክ እና በባህርይ ትውስታ. ናታን ራይን ኒውሮሲስ. 2002; 3: 175-190. [PubMed]
31. Lobo MK, Covington: HE, 3rd, Chaudhury D, Friedman AK, Sun H, Damez-Werno D, Dietz DM, Zaman S, Koo JW, Kennedy PJ, ሙሞዮን ኤ, ሞገሪ ኤም, ኔቨ RL, Deisseroth K, Han MH, Nestler EJ. የሕዋስ ዓይነቶች የተወሰነ የቢንዲን ሽልማትን መቆጣጠርን የሚያካትቱ የ BDNF መዘዞች. ሳይንስ. 2010; 330: 385-390. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
32. ሎተስ ጄአ, ቤከር ሎኬ, ጉፕታታ ቲ, ጊዮርየር ኤም, ቬዛና ፒ. ኒውክሊየስ ውስጥ የኬሚካይ II ን ማስቀረት በተነጠቁ አይጥሶች ውስጥ የአምፋይሚን ንጥረ ነገር መቀነስ ይቀንሳል. Neurosci Lett. 2008; 444: 157-160. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
33. ሎቴ ጄአ, ዘፋኝ BF, Baker LK, Wilke G, Inamine H, Bubula N, አሌክሳንደር ጃክ, ካርልሎን WA, Jr, Neve RL, Vezina P. ዘመናዊ አልካካ Ca2 + / calmodulin-dependent Protein kinase II በመጠን በላቀው ኒውክሊየስ አክሰምበር ሼል ለ አምፋሚን ማምረት ባህሪን ያዳብራል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2010; 30: 939-949. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
34. ማኖኖ ሮ, ማለንካ አርሲ. AMPA መቀበያ ትራንስፖርት እና ሲስፕቲክ ፕላስቲክ. Annu Rev Neurosci. 2002; 25: 103-126. [PubMed]
35. Matsuzaki M, Honkura N, Ellis-Davies GC, Kaiai H. የረጅም ጊዜ ጥንካሬን በዲንቸቲክ አጥንት ላይ መዋቅራዊ መሠረት. ተፈጥሮ. 2004; 429: 761-766. [PubMed]
36. Mayford M, Bach ME, Huang YY, Wang L, Hawkins RD, Kandel ER. በካሜ ማቲን ትራንስጅን በተገቢው መግለጫ በኩል የማህደረ ትውስታ መፍጠርን ይቆጣጠራል. ሳይንስ. 1996; 274: 1678-1683. [PubMed]
37. Maze I, Covington, HEW, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, ሙሞዮን ኤ, አርቴል አርኤል, ሃጋርታ ሳጄ, ሬን ያ, ሳምፓት ሲ, ሂድ ዳይሊ, ግሪጋርድ ፒ, ታራኮቭስኪ አ, ሻፌር ኤ, Nestler EJ. በኬኬን-የቅባት-ፕላስቲክነት ውስጥ ሂስቶሮን ሜይራል-ቴርፋሬት G9a አስፈላጊ የሆነ ሚና. ሳይንስ. 2010; 327: 213-216. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
38. ማክሊን CA, Nestler EJ. በ CREB እና DeltaFosB የጂን አገላለፅ እና የኮኬይ ሽልማት ደንብ. ናታን ኔቨርስሲ. 2003; 6: 1208-1215. [PubMed]
39. Nestler EJ. ግምገማ. የሱስ የመገለባበጥ አሰራር ዘዴዎች የዴልታይፋስ ሚና. ፊሎስ ትራንስፖርት ሮ ሳን ሎንግ ቢ ቢዮል ሶይ. 2008; 363: 3245-3255. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
40. ኖይ ሄ, ተስፋ BT, ኬዝ ሜቢ, አይዳራሎላ ኤም, ናስትራል ኤጄ. በሬታቱም እና ኒውክሊየስ አክሰንስ በተሰኘው ኮኬይ ውስጥ የሚከሰተውን ሥር የሰደደ የኤስ ኦ ሙስ-ጂኦክሽን ስርዓት ደንብ በተመለከተ በፋሲካሎሎጂ ጥናት ላይ. ጄ. ፋርማኮል አውስትር. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
41. Okamoto K, Bosch M, Hayashi Y. የዲንቸሪክ አከርካሪ አካላት የኬሚክ II እና የ F-actin ሚናዎች በሲምፔክቲክ መለያ የተሰነዘሩ ሞለኪውላዊ መለያዎች ናቸው? ፊዚዮሎጂ (Bethesda) 2009; 24: 357-366. [PubMed]
42. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. በኒውክሊየስ አክሰነዶች ውስጥ የሚገኘው ዴልታ ፎስ ቡክ ምግብን የሚጨምር መሳሪያ እና ተነሳሽነት ይቆጣጠራል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
43. ፓክስኖስ ጂ, ዋትሰን ሐ. የአይሮክ አንጎል በስታርቲቶክሲክ መጋጠሚያዎች ውስጥ. 6th እትም. አምስተርዳም; ቦስተን: ትምህርታዊ ፕሬስ / ኤሊቬሪ; 2007.
44. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, ቻao J, ዱማ ሲ, ስቴፌን ሲ, ሞንጎጂላ ኤ, አለን ኤን, አክሲዮን JL, ዱማን አር, ማኬኒሽ ጄ ዲ, ባሮሞ ሜ, የግል DW, Nestler EJ , ሻፌር ኢ. የማይከስ, የጂ-ጁን አሉታዊ ተፅዕኖ ፈፅሞ በአዕምሮ ውስጥ የሚታይበት የአንጎል ክፍል ለኮኒን ጠቋሚነት ይቀንሳል. Brain Res. 2003; 970: 73-86. [PubMed]
45. Penzes P, Cahill ME, Jones KA, Srivastava DP. ተለዋዋጭ የ CaMK እና የ RacgenF ምልክቶች አዕላፍ አወቃቀሮችን እና ተግባርን ይቆጣጠራሉ. አዝማሚያዎች ህዋስ Biol. 2008; 18: 405-413. [PubMed]
46. ፔሮቲቲ ሊ, ሀዲሺ ዩ, ኡለሪ ፒጂ, ባሮሞ ሜ, ሞንጎጂላ ሊ, ዱማ አር, ናሰልት ኢ. የድህረ ፋብስን ከሽልማት ጋር በተዛመደ ከአእምሮ የአንጎል መዋቅሮች በኋላ ለከባድ ውጥረት ከተደረገ በኋላ. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2004; 24: 10594-10602. [PubMed]
47. ፔሮፊቲ ሊ, ዌቬር ሪ አር, ሮቦን ቢ, ቱርሀል ደብሊዩ, ሚዛን I, ያዳዲኒ ሲ, ኤላ ኤር አርጂ, ኖፓ ብሩክ, ሳሊ ዴ, ማርቲን ብሩዝ, ሲም ሴሊ ኤል, ባቾቴል አር ኤች ኬ, ራድ DW, Nestler EJ. በደል የአደገኛ መድሃኒቶች አደገኛ በሆነ መልኩ በደምዎር ፋሲስ ውስጥ የሚከሰት ልዩነት. ስረዛ. 2008; 62: 358-369. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
48. ፒክስልስ CL, Airavaara M, ትንሳኤ F, Fanous S, Hope BT, Shaham Y Neurobiology የአደገኛ ዕፅ ፍላጎት ማነሳሳት. አዝማሚያዎች ኒውሮሲስ. 2011; 34: 411-420. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
49. Pierce RC, Quick EA, Reeder DC, Morgan ZR, Kalivas PW. ካሊሚየም የሚማከሩ ሁለተኛ መልእክተኞች የባህሪ ማነቃነቅ (ኮሜት) ስሜትን ኮኬይን ያሳያሉ. ጄ. ፋርማኮል አውስትር. 1998; 286: 1171-1176. [PubMed]
50. ክሪዮን ሮ, ሮፒቴል ዬ, ማርሻል ጃ, ቻባት ጂጂ, ሎኤን ፔን, ፔፐሊል ሲ, ዳሊፕ ኤ. ሙሉዋ የደም-ዘር ክፍልን በመጠቀም የሰው አንጎል ተቀባይ / ሬዲዮ ዳይቶግራፊ-የሕዋስ አርቲፊሶች ለመቀነስ የሚረዳ አጠቃላይ ዘዴ. ስረዛ. 1987; 1: 446-454. [PubMed]
51. Robinson TE, Kolb. ኒውሮፋርማኮሎጂ. 2004; 47 (Suppl 1): 33-46. [PubMed]
52. ሮቦን ኤጄ, ናስትራል ኤጅ. የሱስ የመገረዝ እና የጄኔሽን ሂደቶች. ናታን ራይን ኒውሮሲስ. 2011; 12: 623-637. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
53. ሮቦን ኤ ኤች, ባሳ ኤም ኤ, ጂአይኤ, ማክሚሊን ቢባ, አርኤሞዲ ኤልሲ, ባርትሌት አር ኤች ኬ, ኮልራን RJ. የካልሲየም / የተረጋጋ ኳድኑ-ጥገኛ ፕሮቲን ኪን-ዳይ II ከተለመዱ ልኬቶች እና ልምዶች በ NR2B, densin-180, እና alpha-actinin-2 በበርካታ ልኬቶች. ጀ ባዮል ኬም. 2005; 280: 35329-35336. [PubMed]
54. Ross PL, Huang YN, Marchese JN, Williamson B, Parker K, Hattan S, Khainovski N, Pillai S, ዲሸ, ዳኒልስ ኤስ, ፑርኪሳተስ ኤስ, ጁሀስዝ ፒ, ማርቲን ኤስ, በርርት-ጆንስ ኤም, ኤፍ ኤፍ, ጃኮብሰን ኤ, Pappin DJ. በሳክራሞሚ ሴልስሼይ (Amel-reactive isobaric tagging reagents) በመጠቀም በ Saccharomyces cerevisiae ውስጥ በበርካታ ፕላትቻዎች መጠን. ሞል ሴል ፕሮቲሚክስ. 2004; 3: 1154-1169. [PubMed]
55. Russo SJ, Dietz DM, Dumitriu D, Morrison JH, Malenka RC, Nestler EJ. የሱስ ሱስ (synapttic synaptic and structural plasticity) በኒውክሊየስ አክሰንስ (ኒውክሊየስ) ክውታዎች ውስጥ. አዝማሚያዎች ኒውሮሲስ. 2010; 33: 267-276. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
56. የግል DW. በውስጡ: - ዶፖሚን ተቀባይ ኢፖረዶች. Neve KA, አርታኢ. ኒው ዮርክ-ሃናስታ ፕሬስ; 2010. ገጽ 479-524.
57. ዘፋኝ BF, Lowth JA, Neve RL, Vezina P. በተለዋጭ ቫይታሚን ፐሮቴክሊን / ረጋትዲን-ነግር ያለው ፕሮቲን 2 ኛ ክሮሜትር በኒኑክለስ አክቲንስስ (ኒውክሊየስ) አክቲቭስ (ኦል ክላይዜን) ላይ ከመጠን በላይ መቆየት የአልፋ-አሚኖ-3-hydroxyl-5 -ሜም-ኤክስ-4-isoxazole-propionate ተቀባይ: - dopamine የዝርዝር-1 ተቀባይ እና ፕሮቲን ኪይነስ. ጥገኛ ነው. ዩር ጄ. ኒዮርስሲ. 2010; 31: 1243-1251. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
58. ስትራክ ስ, ማኬኔል ሪቢ, ኮልራን RJ. የኒ ኤም ሜል-ዲ-aspartate ተቀባይ ለ NR2B ንዑስ ኳስ የካልሲየም / አል-ፈትዲዲን-ተከላካይ የሆነ ፕሮቲን ኪይነስ II መቆጣጠር እና ስልት. ጀ ባዮል ኬም. 2000; 275: 23798-23806. [PubMed]
59. ኡሌሪ-ሬይኖልስ ፒ.ጂ, ካስቲል ኤም, ቪሊያዎ ቫ, ራሶ ሶጂ, ናሰልት ኢ. ዴልታ ፎሸስ ፎስሆሌትሊስ በተፈጥሮ ውስጥ ስኬታማነት እንዲሰምጥ ያደርገዋል. ኒውሮሳይንስ. 2009; 158: 369-372. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
60. ኡ.ኤል ፒ., ናሰልት ኢ .J. የ DeltaFosB የዝግጅት እንቅስቃሴ በ Ser27 phosphorylation ደንብ. ዩር ጄ. ኒዮርስሲ. 2007; 25: 224-230. [PubMed]
61. ኡለሪ ፒ., ሩዲኖ ጂ, ናሰልት ኢጁ. የዴልፎፋስትን ደንብ በፎፎሎሌክሽን መረጋጋት. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2006; 26: 5131-5142. [PubMed]
62. Vialou V, et al. DeltaFosB በአንጎል ሽልማት ወረዳዎች ውስጥ ውጥረትን ለመቋቋም እና በሆስፒታሎች ላይ ተፅዕኖን ለመቋቋም ይረዳል. ናታን ኔቨርስሲ. 2010; 13: 745-752. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
63. Wang L, Lv Z, Hu Z, Sheng J, Hui B, Sun J, Ma L. ዘመናዊ ኮኬይን-ኤች ኤ, ሰን ጃ, ማኤ ል. Neuropsychopharmacology. 3; 2010: 35-913. [PMC ነፃ ጽሑፍ] [PubMed]
64. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB የዊል መቆጣጠሪያዎችን ይቆጣጠራል. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
65. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, አረንጓዴ TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. በዲቦራክታር ኳስ ታክሲከ (ዲክታፋይል) ኢንስታይክ ኢምፕሬሽን (ኮምፕሊክስ) ኮኬይን (ኮኬይን) የማወቅ ችሎታውን (ኮግኒቲቭ) በተቃውሞ ማለፍን ማስታረቅ ነው. ጄ. ኒውሮሲሲ. 2007; 27: 10497-10507. [PubMed]
66. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz ሜቢ, ሻው-ሉሽማን ቲ, በርቶን ኦ, ሲም ሴሊ ት, ዳሌሮ ሮጅ, ካመር ኤ, ናስትለር ኢ. በኒውክሊየስ ውስጥ ለ DeltaFosB በጣም ወሳኝ ሚና በሞርፊን ርምጃ ይሰራል. ናታን ኔቨርስሲ. 2006; 9: 205-211. [PubMed]
67. የቻር ኤች, ቬርች ኤች ኤ, ማዱ ኤ ሲ, ሹራ ኤ, ቪሺኒቭስኬያ TA, Atkinson JB, Gurevich VV, ሳላሜ ጂ, ሎደርደር ደብልዩ, ዣንበራን አርጄ, አንደርሰን ME. Calmodulin kinase II inhibition መዋቅራዊ የልብ በሽታን ይከላከላል. ናም ሜዳል. 2005; 11: 409-417. [PubMed]