ઇન્સ્યુલિન ભોજન પછી ભ્રાંતિને સંકેત આપવા માટે હાયપોથેલામસમાં ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર્સ (ઇન્સર્સ) સક્રિય કરે છે. જો કે, સ્થૂળતાના વધતા જતા બનાવો, જે ક્રોનિકલ એલિવેટેડ ઈન્સ્યુલિન સ્તરોમાં પરિણમે છે, તે સૂચવે છે કે ઇન્સ્યુલિન મગજ કેન્દ્રોમાં પણ કાર્ય કરી શકે છે જે પ્રેરણા અને પુરસ્કારને નિયંત્રિત કરે છે. અમે અહીં અહેવાલ આપીએ છીએ કે ઇન્સ્યુલિન એ અણુ મિકેનિઝમ દ્વારા સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાન-આધારિત ડોપામાઇન (ડીએ) રીઝોલ્યુશનને ન્યુક્લિયસ ઍક્યુમ્બન્સ (એનએસી) માં પ્રકાશિત કરી શકે છે અને કોડેટ-પુટમેનને સ્ટ્રાઇટલ કોલિનર્જિક ઇન્ટર્ન્યુરોન્સનો સમાવેશ કરે છે જે ઇન્સઆરએસ વ્યક્ત કરે છે. વધુમાં, ઉંદરો, ખોરાક પ્રતિબંધ (એફઆર) અને ઓબ્જેજેનિક (ઓ.બી.) ખોરાકમાં બે જુદા જુદા ખોરાકની મેનિપ્યુલેશંસ, ઇન્સ્યુલિનને છોડવા માટે સ્ટ્રાઇટલ ડીએની સંવેદનશીલતાને, વિરોધી પ્રતિભાવમાં એફઆરમાં વધારો થયો છે, પરંતુ ઓ.બી.માં પ્રતિભાવમાં ઘટાડો થયો છે. વર્તણૂકલક્ષી અભ્યાસો દર્શાવે છે કે સંયુક્ત ગ્લુકોઝ સોલ્યુશનના સ્વાદ માટે પસંદગીના પ્રાપ્તિ માટે એનએસી શેલમાં અચોક્કસ ઇન્સ્યુલિન સ્તર જરૂરી છે. એકસાથે, આ ડેટા સૂચવે છે કે સ્ટ્રેઅલ ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ ખોરાક પસંદગીઓને પ્રભાવિત કરવા માટે ડીએ (CA) ના પ્રકાશનને વધારે છે.

તે સારી રીતે સ્થાપિત છે કે ભોજન દરમિયાન અને પછી પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિનમાં સતત વધારો હાયપોથેલામસમાં ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર્સ (ઇન્સર્સ) સક્રિય કરે છે, જે વધુ ખાવાથી ઓછી થતી ભૂખ્યા સર્કિટને નકારાત્મક પ્રતિભાવ આપે છે.^{1, 2, 3}. મગજ ઇન્સ્યુલિન મુખ્યત્વે સ્વાદુપિંડના β કોષોમાંથી ઉત્પન્ન થાય છે, જેમાં રક્ત-મગજ અવરોધ પર પ્લાઝ્માથી મગજની સક્રિય પરિવહન થાય છે.^{4, 5, 6, 7, 8}, તેમ છતાં ન્યુરોનલ ઇન્સ્યુલિન સંશ્લેષણ અને પ્રકાશન માટે વધતા પુરાવા છે^{1, 9}. નોંધપાત્ર રીતે, ઇન્સર્સની અભિવ્યક્તિ હાયપોથેલામસ સુધી મર્યાદિત નથી, જો કે અતિરિક્ત-હાઈપોથેલામિક ઇન્સઆરએસનું કાર્ય અનલૉક રહે છે.^{1, 2, 3}. મેદસ્વીતા અને પ્રકાર II ડાયાબિટીસની વધતી જતી ઘટનાઓને ધ્યાનમાં રાખીને, જેમાં ઇન્સ્યુલિનનું પરિભ્રમણ સ્તર સતત વધતું જાય છે અને મગજ ઇન્સ્યુલિન પરિવહન અને રીસેપ્ટર સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો થાય છે.^{3, 8, 10, 11}, મગજના વિસ્તારોમાં ઇન્સ્યુલિનના કાર્યને સમજવું મહત્વપૂર્ણ છે જે પ્રેરણા અને પુરસ્કારને નિયંત્રિત કરે છે. વિશેષ રૂચિના મગજના વિસ્તારોમાં ન્યુક્લિયસ ઍક્યુમ્બન્સ (એનએસી) નો સમાવેશ થાય છે, જે ખોરાક અને દવાઓ બંનેના ફાયદાકારક અસરોમાં મધ્યસ્થી કરે છે.^{12, 13}, અને કૌડેટ-પુટમેન (સીપીયુ), જે આદત આધારિત વર્તન અને તૃષ્ણામાં ભૂમિકા ભજવે છે.¹³. એનએસીમાં સૌથી વધુ ઘનતા ધરાવતાં ઇન્સઆર આ પ્રદેશોમાં વ્યક્ત થાય છે^{3, 14}; ઇન્સઆરએસ મધ્યવર્તીમાં ડોપામાઇન (ડીએ) ન્યુરોન દ્વારા પણ વ્યક્ત થાય છે, જેમાં વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયા (વીટીએ) અને સર્ફિયા નિગ્રા પાર્સ કોમ્પેક્ટ (એસએનસી)¹⁵. મગજ ઇન્સ્યુલિનનું સ્તર પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલીન સાંદ્રતા અને શરીરના મૈથુન માટે અનુરૂપ છે^{6, 7, 8}, જે પૂર્વધારણા તરફ દોરી જાય છે કે ઇન્સ્યુલિન આ મગજના વિસ્તારોમાં ઇન્સર્સ પર કાર્ય કરી શકે છે જે ખોરાક પુરસ્કારને પ્રભાવિત કરે છે^{3, 16, 17}.

સ્ટ્રાઇટલ સિનેપ્ટોસોમ, હેટરોલોસ કોશિકાઓ, મગજના કાપીને અને વિવો માં બતાવ્યું છે કે ઇન્સેલ્સના ઇન્સ્યુલિન સક્રિયકરણથી ડીએ ટ્રાન્સપોર્ટર (ડીએટી) દ્વારા ડી.એ.^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. આ પ્રક્રિયામાં PI3 કિનિઝ સિગ્નલિંગ પાથવે શામેલ છે^{19, 20}, અને પ્લાઝમા કલામાં ડીએટી દાખલમાં પરિણમે છે¹⁹. ઇન્સ્યુલિનના સ્તરોને ગતિશીલ રીતે ડાયાબિટીસના પશુ મોડેલ્સમાં અને ખોરાક નિયંત્રણ (એફઆર) પછી જોવા મળતા ડી.એ.એટટેક અને DAT સપાટીની અભિવ્યક્તિને કારણે સ્ટ્રેટલ DAT પ્રવૃત્તિને ગતિશીલ રૂપે મોડ્યુલેટ કરે છે.^{20, 21}. ડીએટી પ્રવૃત્તિમાં ઇન્સ્યુલિન-આધારિત વધતા વધારાને ઉત્કૃષ્ટકોશીય ડી.એચ. એકાગ્રતા ([ડીએ]_o) વીટીએમાં²³, ડીએ રીલીઝ અને અપટ્રેક વચ્ચે સંતુલનમાં પાળીને પ્રતિબિંબિત કરે છે. આત્મવિશ્વાસમાં ઇન્સ્યુલિનની સ્થાપિત ભૂમિકા સાથે સુસંગત, વીટીએમાં ઇન્સ્યુલિનનું તીવ્ર સૂક્ષ્મજીવન ખોરાક પુરસ્કાર ઘટાડે છે^{23, 24}, જ્યારે વીટીએ અને એસએનસી ડીએન ન્યુરોન્સમાં ઇન્સઆરએસનો અભાવ હોવાનું ઉંદર વધારે ખોરાક લેવાનું બતાવે છે અને સ્થૂળ બને છે.²⁵. જોકે ઇન્સ્યુલિન વીટીએ ડીએ ન્યુરોન્સને ઉત્તેજક ઇનપુટની લાંબા ગાળાના ડિપ્રેશનને પ્રેરિત કરી શકે છે²⁴, ફરીથી સંતોષમાં ભૂમિકા સાથે સુસંગત, ઇન્સ્યુલીન એક્સપોઝર પણ ડી.એન. ન્યુરોન ફાયરિંગ દરમાં વધારો કરી શકે છે, સંભવતઃ ડીએ રિલીઝ અને ઑટોરેપ્ટર-મધ્યસ્થ નિરોધ ઘટાડે છે.²⁵. સ્ટ્રેટલ ડીએ રિલીઝ પર ઇન્સ્યુલિનની ચોખ્ખી અસર આગાહી કરવી મુશ્કેલ છે. ખરેખર, સ્ટ્રાઇટલ ડીએ પર ઇન્સ્યુલિનના પ્રભાવના અભ્યાસોના પરિણામોમાંથી બહાર નીકળે છે ભૂતપૂર્વ વિવો કાપી નાંખ્યું¹⁹ અને ખોરાક પુરસ્કાર પર એનએસીમાં ઇન્સ્યુલિનના સ્થાનિક સૂક્ષ્મજીવનની અસર²⁶ વિરોધાભાસી લાગે છે. આને ઉકેલવા માટે, અમે એનએસી અને સીપીયુના અખંડ માઇક્રોએનવાયરમેન્ટમાં એક્સોનલ ડીએનું પ્રકાશન અને ઉપાડનું મૂલ્યાંકન કર્યું. ભૂતપૂર્વ વિવો ફાસ્ટ-સ્કેન સાયક્લિક વોલ્ટેમેમેટ્રી (એફસીવી) નો ઉપયોગ કરીને સ્ટ્રાઇટલ સ્લાઇસેસ, અને એનએસીમાં પુરસ્કાર વર્તન પર ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગની અસરો નક્કી કરી વિવો માં.

અમારા અભ્યાસો દર્શાવે છે કે એનએસી અને સીપીયુમાં ઇન્સ્યુલિનની પ્રાથમિક અસર એ ડીએ ઉપટેકમાં સમાન વધારો હોવા છતાં, ડીએ (DA) રિલીઝ વધારવા છે. ડીએ (DA) ના પ્રકાશનના આ ગતિશીલ નિયમનમાં સ્ટ્રાઇટલ કોલેઇનર્જિક ઇન્ટરન્યુરોનન્સ (ચીઝ) ની ઉત્તેજનામાં ઇન્સ્યુલિન-આધારિત વધારો સામેલ છે, જે નિકોટિનિક એસીટીકોલાઇન (એસીએચ) રીસેપ્ટર્સ (એનએસીએચઆરએસ) ની સક્રિયકરણ દ્વારા વિસ્તૃત DA ને છોડવામાં પરિણમે છે. ચીઝ અને ડીએ પરની ઇન્સ્યુલિનનો પ્રભાવ ઇન્સર્સ દ્વારા મધ્યસ્થી થાય છે. નોંધપાત્ર રીતે, ડીએ રીલીઝ પર ઇન્સ્યુલિનની અસર એફ.આર. ઉંદરોમાંથી કાપી નાંખવામાં આવે છે, પરંતુ ઓબ્જેજેનિક (ઓ.બી.) આહારમાં ઉંદરોમાં ભરાય છે. આ ડેટા ડીએ પ્રકાશનમાં વધારો દર્શાવે છે ભૂતપૂર્વ વિવો ઇન્સ્યુલિન દ્વારા કાપી શકાય તેવી આગાહી તરફ દોરી જાય છે કે ઇન્સ્યુલિન પુરસ્કાર સિગ્નલ તરીકે કાર્ય કરી શકે છે વિવો માં. ખરેખર, સમાંતર વર્તન અભ્યાસો ફ્લેવર-પ્રેફરન્સ કન્ડીશનીંગમાં એનએસી શેલમાં ઇન્સ્યુલિન માટે ભૂમિકા દર્શાવે છે. એકસાથે, આ તારણો ઇન્સ્યુલિન માટે પુરસ્કાર સંકેત તરીકે નવી ભૂમિકા સૂચવે છે જે ખોરાકની પસંદગીને પ્રભાવિત કરી શકે છે

ઇન્સ્યુલ્સ પર અભિનય કરતી ઇન્સ્યુલિન ઉત્પન્ન થયેલી સ્ટ્રેટલ ડી.એ.

સ્થાનિક રીતે વિકસિત [પ્રારંભિક] પરીક્ષા_o માં એફસીવી સાથે મોનીટર ભૂતપૂર્વ વિવો સાથે ઉંદરો માંથી પ્રાણઘાતક કાપી નાંખ્યું જાહેરાત જાહેરાત (એએલ) ખોરાક અને પાણીની પ્રાપ્યતાએ અનપેક્ષિત શોધ જાહેર કરી કે શારીરિક સંબંધિત સાંદ્રતાઓની શ્રેણીમાં ઇન્સ્યુલિનની તીવ્ર એપ્લિકેશન^{1, 4} એકલ પલ્સ-ઇક્ક્ક્ડ [ડીએ]_o (ફિગ. 1a-C), ઇન્સ્યુલિન ઇસી સાથે₅₀ 2-12 એનએમ (મૂલ્ય કે જેના પર પ્રભાવ અડધા મહત્તમ છે) મૂલ્યોફિગ. 1b). વધારો થયો [ડીએ]_o ખાસ કરીને આશ્ચર્યજનક હતું, આપેલ છે કે આ સાથે મહત્તમ દરમાં નોંધપાત્ર વધારો થયો હતો (V_{મહત્તમ}) દરેક પેટાવિભાગમાં DAT-mediated અપટ્રેક માટે (કોષ્ટક 1), જે વિકસિત સ્પર્ધાત્મક ઘટાડો તરફ દોરી જશે [ડીએ]_o, જેમ અગાઉ અહેવાલ^{22, 23}. તેના બદલે, અમે શોધી કાઢ્યું કે [DA]_o 20 એનએમ ઇન્સ્યુલિન દ્વારા મહત્તમ એક્સએમએક્સ-એક્સ્યુએનએક્સ એક્સ% વધારો થયો હતો; સૌથી મોટી પ્રમાણસર અસર સાથેનો પ્રદેશ એનએસી શેલ હતો, જે સૌથી વધુ ઇન્સઆર અભિવ્યક્તિ સાથેના સ્ટ્રેઅલ ઉપગ્રહ છે^{1, 14}. સમાન પરિસ્થિતિઓ હેઠળ 30 એનએમ ઇન્સ્યુલિનને ખુલ્લા કાપીને સ્ટ્રેઆટલ ડીએ સામગ્રીમાં કોઈ ફેરફાર થયો નથી (પૂરક ફિગ. 1a), જેનો અર્થ એ થાય છે કે ઇન્સ્યુલીન ડીએ (CA) સંશ્લેષણને સરળતાથી અપગ્રેટેડ કરતા ગતિશીલ રીલીઝ નિયમનને બદલે છે. ખાસ કરીને, ઇન્સ્યુલીનની અસર ઉત્પન્ન [ડીએ]_o સુપ્રિફિઝિઓલોજિકલ સાંદ્રતા ≥100 nm (એફિગ. 1b). ઇન્સ્યુલિન પરની અસર તરીકે, આ પ્રકાશનને આગળ ધપાવતા DAT પ્રવૃત્તિમાં વધારો થયો ન હતો V_{મહત્તમ} આ સાંદ્રતામાં પણ ગુમાવ્યું હતું (કોષ્ટક 1). એકંદરે, આ ડેટા દર્શાવે છે કે અખંડ સ્ટ્રાઇટલ માઇક્રોએનવાયરમેન્ટમાં, ઇન્સ્યુલીનની મુખ્ય અસર ઉત્પન્ન થાય છે [ડીએ]_o ડીએ ઉપટેકમાં સમાન વધારો હોવા છતાં, પ્રકાશન વધારવાનું છે.

  

  

(a) સરેરાશ સિંગલ-પલ્સ-ઇક્ક્ક્ડ [ડીએ]_o એનએસી શેલ, એનએસી કોર અને સીપીયુ ઇન્સ્યુલિન (ઇન્સ) પહેલાં અને પછી 30 એનએમ માટે સચિત્ર; ભૂલ બાર અવગણવામાં, પરંતુ જુઓ (b); તીરો ઉત્તેજનાનો સમય સૂચવે છે. ઇન્સ્યુલિનમાં વધારો થયો [ડીએ]_o શેલમાં (55 ± 10% સુધી), કોર (37 ± 5% દ્વારા) અને સીપીયુ (20 ± 4% દ્વારા) (***P<0.001). (b) ઇન્સ્યુલિનનો પ્રભાવ શેલમાં શારીરિક રેન્જ (1-30 એનએમ) પર આધારિત એકાગ્રતા હતી (n= 22-24, F_5,133= 14.471, P<0.001), કોર (n= 36-76, F_5,308= 16.318, P<0.001) અને સીપીયુ (n= 30-62, F_5,253= 13.763, P<0.001), પરંતુ ≥100 એનએમ પર ખોવાઈ ગયું. (c) પીક વિકસિત પ્રતિનિધિ રેકોર્ડિંગ્સ [ડીએ]_o ઇન્સ્યુલિન (30 એનએમ) ની અરજી દરમિયાન અથવા ઇન્સ્યુલિન ઇન્સિહિટર HNMPA (5 μM) ની હાજરીમાં જ્યારે ઇન્સ્યુલિન લાગુ કરવામાં આવ્યું ત્યારે ડ્રગ એપ્લિકેશન (કૉન) ની ગેરહાજરીમાં એનએસી કોરની એક જ સાઇટ પર વિરુદ્ધ સમય. (dસરેરાશ પીક-વિકસિત [ડીએ]_o એચએનએમપીએ દ્વારા ઇન્સ્યુલિન (30 એનએમ) ની ઇન્સ્યુલિનની અસર (961 એનએમ), ઇન્સઆર એન્ટિગોનિસ્ટ S1 (3 μM) અને PI294002K ઇન્હિબિટર LY1 (1 μM) દ્વારા પ્રભાવિત થતી માહિતી દર્શાવે છે, પરંતુ આઇજીએફ-એક્સNUMએક્સઆર અવરોધક પીપીપી (1 μM) દ્વારા નહીં (n= 29-76; P> 0.9 વિરુદ્ધ ઇન્સ્યુલિન). માટે ફિગ. 1A-ડી, n= દરેક ડ્રગ અથવા ઇન્સ્યુલિન સાંદ્રતા માટે 3-6 ઉંદરોથી ઉપગ્રેશન દીઠ સાઇટ્સની સંખ્યા; વન-વે એનોવા, તુકી ઈમાનદારી મહત્વ પરીક્ષણ (એચએસડી). જુઓ સપ્લિમેન્ટરી ફિગ. 1b, સી એનએસી શેલ અને સીપીયુ ડેટા માટે.

• પૂર્ણ કદની છબી (98 કેબી)

 

 

કારણ કે ઇન્સ્યુલિન ઇન્સ્યુલિન-જેવા વૃદ્ધિ ફેક્ટર એક્સએમએક્સએક્સ રીસેપ્ટર્સ (આઇજીએફ-એક્સNUMએક્સઆરએસ) પર પણ કાર્ય કરી શકે છે, જો કે 1 એનએમ (રેફ. 1), અમે પુષ્ટિ કરવા માંગીએ છીએ કે ઇન્સ્યુલીનની વધતી અસરને વિકસાવવામાં [ડીએ]_o ઇન્સઆર આધારિત હતો. આ કેસ સાબિત થયું, કારણ કે ઇન્ટ્રાસેસ્યુલર ઇન્સઆર ઇન્હિબીટર, હાઇડ્રોક્સિ-એક્સ્યુએનએક્સ-નેપ્થાલેનેઇલમેથિલોફોફોનિક એસિડ (એચ.એન.એમ.પી.એ.) દ્વારા અને આઈએસઆરએફ-એક્સ્યુએનએક્સઆરએસના પસંદગીયુક્ત અવરોધક દ્વારા, એસસીએનટીએક્સએક્સ દ્વારા, એસસીએનટીએક્સએક્સ દ્વારા અસરને અટકાવી હતી, પિકોરોપ્ડોફિલિન²⁴ (પીપીપી; ફિગ. 1C, ડી અને સપ્લિમેન્ટરી ફિગ. 1b, સી). અમે પછી PI3 કેનાઝની સંડોવણીની તપાસ કરી, જેણે ડીએટીના ઇન્સ્યુલિન-આશ્રિત નિયમન માટે જવાબદાર સિગ્નલિંગ પાથવે શરૂ કર્યો.¹⁹. 1 μM ની સાંદ્રતા પર, P13K અવરોધક LY249002 ને એકલા શિખર પર અસર થતી નથી [ડીએ]_o or V_{મહત્તમ} (n= દવા દીઠ 29-76 સાઇટ્સ (એનએસી કોર), P> 0.05, વિવિધતાનું એક-માર્ગી વિશ્લેષણ (એનોવા); ડેટા બતાવ્યો નથી), તેમ છતાં ઇન્સ્યુલિનના પ્રભાવને ઉત્તેજિત [ડી.એ.] ને અટકાવ્યો._o તમામ પ્રાણઘાતક ઉપગ્રહમાં (ફિગ. 1d અને સપ્લિમેન્ટરી ફિગ. 1b, સી).

ડી.એચ. ચેનલો અને ચીઝ પર ઇન્સઆરએસનું સ્થાનિકીકરણ

માં જોવાયેલ વધારો V_{મહત્તમ} ઇન્સ્યુલિનના શારિરીક સ્તરો સાથે ડીએ ઉપજાવી કાઢવા માટે ડીએ ચેતાક્ષ પર ઇન્સઆરએસની હાજરી સૂચવે છે, જેમ કે અગાઉના સ્ટ્રેટલ તૈયારીઓમાં અગાઉના પરિણામો^{18, 19, 20, 21, 22}. જોકે મિડબ્રેન ડી.એન. ચેતાકોષ પર ઇન્સઆરની કામગીરીત્મક અભિવ્યક્તિ નિદર્શન કરવામાં આવી છે^{15, 23, 24, 25}, સ્ટ્રેઆલ ડીએ ચેતાક્ષ પરની InsR અભિવ્યક્તિની જાણ કરવામાં આવી નથી. અમે ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રીનો ઉપયોગ કરીને આને સંબોધ્યા. ડીએન ચેતાકોષ પર ઇન્સઆર સ્થાનિકીકરણના સ્ટ્રાઇટમ મર્યાદિત જથ્થાત્મક મૂલ્યાંકન દરમિયાન ડેન્સ ઇન્સઆર ઇમ્યુનોરેક્ટીવીટી, જે ડીએ-સિન્થેસાઇઝિંગ એન્ઝાઇમ, ટાયરોસિન હાઇડ્રોક્સાઇલેસ (TH) માટે રોગપ્રતિકારક શક્તિ દ્વારા ઓળખાય છે. તેથી અમે અગાઉ અહેવાલ પ્રોટોકોલ અપનાવી હતી²⁷, જે ઇન્સઆર puncta ગણાય છે જે સામાન્ય છબી દૃશ્યમાં TH + પ્રોફાઇલ્સ સાથે ઓવરલેપ થાય છે અને ઇન્સઆર ઇમેજ પછી ફક્ત ફરીથી ગણતરી કરીને 90 ° દ્વારા ફેરવવામાં આવે છે. જો ઇન્સઆર અને TH + પ્રોફાઇલ્સની દેખીતી ઓવરલેપ અચોક્કસ હોત, તો આ પ્રક્રિયા આંકડાકીય રીતે સમાન ગણતરીઓ આપે છે કે નહીં તે સામાન્ય અથવા 90 ° તબક્કામાંથી છે. જો કે, આ વિશ્લેષણ 14 ± 9% ના TH + પ્રોફાઇલ્સ સાથે ઇન્સઆર puncta ના ઓવરલેપમાં ઘટાડો દર્શાવે છે (n= 42 ક્ષેત્રો, P<0.01, જોડીવાળી બે-પૂંછડીવાળું t-ટેસ્ટ; ડેટા બતાવ્યો નથી), ડીએ ચેતાક્ષ પર ઇન્સર હાજરીની પુષ્ટિ. વધુ રસપ્રદ રીતે, જોકે, સ્ટ્રાઇટમના ઇન્સઆર ઇમ્યુનોબેલિંગ એ મોટી કોશિકાઓ પર વિશિષ્ટ ઇન્સઆર અભિવ્યક્તિ જાહેર કરી, જેને એસીએ સંશ્લેષણ માટે આવશ્યક પ્રાથમિક એન્ઝાઇમ, કોલીન એસીટીટ્રાન્સફેરેસ (ચેટ) માટે સહ-ઇમ્યુનોલોબેલિંગ દ્વારા પ્રાણઘાતક ચીઝ તરીકે ઓળખવામાં આવી. ઇલેક્ટ્રોફિઝિઓલોજિકલ માપદંડનો ઉપયોગ કરવો²⁸ પ્રારંભિક સંપૂર્ણ-સેલ-રેકોર્ડિંગ અભ્યાસમાં ચીને ઓળખવા માટે, ઘણા ચેતાકોષ બાયોસાયટીનથી ભરેલા હતા અને પછી ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી માટે પ્રક્રિયા કરાઈ હતી; આ બધા (4 / 4) ઇન્સર અને ચેટ બંને માટે ઇમ્યુનોપોઝિટિવ હતા (ફિગ. 2a). એનએસીમાં ઇન્સઆર અને ચૅટ સહ-સ્થાનિકીકરણના પછીના મૂલ્યાંકનની પુષ્ટિ છે કે લગભગ તમામ ચેટ + ન્યુરોન્સ ઇન્સઆર (96%) વ્યક્ત કરે છે. n= બે ઉંદરોથી ચાર વિભાગોમાં = 27 / 28 ચેતાકોષો).

  

  

(a) બાયોસાયટીનથી ભરપૂર, પછી ચેટ માટે ઇમ્યુનોલેબલ, અને ઇન્સઆર (4 / 4 બાયોસાયટીન-ભરેલા ચીઝના પ્રતિનિધિ); મર્જ કરેલી છબી સહ-સ્થાનિકીકરણ બતાવે છે; સ્કેલ બાર, 10 μm. (b-e) ઇન્સ્યુલિન (3 એનએમ) પહેલા અને પછી (વર્તમાનમાં 200, 300 અને 400 પીએ; 120-S અંતરાલો) વિપરીત કઠોળની વિધ્રુવીકરણની શ્રેણીમાં સ્ટ્રાઇટલ ચેસનો પ્રતિભાવ. (b) ચી (ઉચ્ચ) માં સ્પાઇક ફ્રીક્વન્સી અનુકૂલન વર્તમાન ઇન્જેક્શન દરમિયાન સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાન (એપી) ડિસ્ચાર્જની ખોટમાં જોવા મળે છે, જ્યારે સ્પિકિંગ ઇન્સ્યુલિન (નીચલા) માં વર્તમાન પલ્સમાં ચાલુ રહે છે; માં બતાવેલ સંપૂર્ણ ડેટા સમૂહ d, (c) એઆઇપી નંબરમાં ઇન્સ્યુલીન-પ્રેરિત વધારાના પ્રતિનિધિ સમયક્રમ, જેમાં CHI માટેના દરેક વર્તમાન પગલાં સાથેનો સમાવેશ થાય છે b, (d) ઇન્સ્યુલિન એક્સપોઝરની ટોચની અસર પહેલા અને પછી પહોંચાડેલી હાલની કઠોળ દરમિયાન એપી નંબરનો સારાંશn= 21 જોડી ઉદ્દીપન, 7 ચેતાકોષ, 5 ઉંદરો) (e) નિયંત્રણની શરતો હેઠળ ઇન્સ્યુલિન (+ ઇન્સ) ની અસર દર્શાવે છે તે મીન રિસ્પોન્સ્સ (કોન; n= 21 જોડી ઉદ્દીપક, 7 ચેતાકોષ, ***P<0.001, જોડીવાળી બે-પૂંછડીવાળું t-ટેસ્ટ), એચ.એન.એમ.પી.એ. (5 μM) ની હાજરીમાં (n= 12 જોડી ઉદ્દીપક, 4 ચેતાકોષ, 4 ઉંદરો, P>0.05, બે પૂંછડી જોડી t-ટેસ્ટ), અને પીપીપી (1 μM) ની હાજરીમાં (n= 18 જોડી ઉત્તેજના, 6 ચેતાકોષ, 6 ઉંદરો, **P<0.01, વિલ્કોક્સન જોડાયેલ જોડાયેલ ક્રમ પરીક્ષણ). (f) સરેરાશ સિંગલ-પલ્સ-ઇક્ક્ક્ડ [ડીએ]_o ઇન્સ્યુલિન (30 એનએમ) માં પહેલા અને પછી એનએસી કોરમાં મેકેમિલામાઇન (એમસી; 5 μM) અથવા DHβE (1 μM) 100% પીક કંટ્રોલ (સામાન્ય નિયંત્રણ)n= 20-40 ઉંદરોથી પ્રત્યેક શરત દીઠ પેટા દીઠ પ્રતિ 3-4 સાઇટ્સ, P> 0.05 વિરુદ્ધ નિયંત્રણ, અનપાયરી t-ડેસ્ટ). (g) સરેરાશ સિંગલ-પલ્સ-ઇક્ક્ક્ડ [ડીએ]_o હેટેરોઝાયગસ કંટ્રોલ (હેટ) અને ફોરબ્રેઇન સ્લાઇસમાં ચેટ ઇન્સ્યુલિન (30 એનએમ) પહેલા અને પછી KO ઉંદર, 100% પીક નિયંત્રણ માટે સામાન્ય. ઇન્સ્યુલિનમાં વધારો થયો [ડીએ]_o એનએસી શેલમાં 190 ± 23% દ્વારા હીટરઝાઇગસ ઉંદરમાં, એનએસી કોરમાં 140 ± 8% અને સીપીયુમાં 137 ± 12% (n= 15-25 ઉંદર પ્રતિ જીનોટાઇપ દીઠ પેટાગ્રેશન દીઠ 3-4 સાઇટ્સ, **P<0.01, ***P<0.001 વિરુદ્ધ નિયંત્રણ અનપેયરી t-ટેસ્ટ), પરંતુ તેનો ઉદ્ભવ થયો ન હતો [ડીએ]_o કોઈપણ સ્ટ્રાઇટલ ઉપગ્રહમાં ચેટ કેઓ ઉંદર (P> 0.1).

• પૂર્ણ કદની છબી (167 કેબી)

 

 

ઇન્સ્યુલિન ચાઇ ઉત્તેજનાને વધારે છે

સ્ટ્રાઇટલ ચીઝ પર ઇન્સઆરએસની કાર્યક્ષમતા ચકાસવા માટે, અમે સંપૂર્ણ સેલ સેલ-ક્લૅમ્પ રેકોર્ડીંગનો ઉપયોગ કરીને ચાઇ ઉત્તેજના પર ઇન્સ્યુલિનની અસરની તપાસ કરી. ચાઇના ઉત્તેજનાનું મૂલ્યાંકન એક્સએમએક્સએક્સ-એસની વર્તમાન દાળના વિધ્રુવીકરણની શ્રેણીનો ઉપયોગ કરીને આકારણી કરવામાં આવ્યું હતું જેથી સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાનોની ટ્રેન પ્રાપ્ત થઈ શકે જે વિશ્વાસપૂર્વક સ્પાઈક ફ્રીક્વન્સી અનુકૂલન દર્શાવે છે (ફિગ. 2b), જે વર્તમાન પલ્સના અંત સુધીમાં સ્પીકીંગના નુકસાન સાથે થાય છે. આશ્ચર્યજનક રીતે, ઇન્સ્યુલિન (30 એનએમ) સ્પાઇક ફ્રીક્વન્સી અનુકૂલનને વેગ આપે છે, જેના પરિણામે સમય સાથે સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાનમાં પ્રગતિશીલ વધારો થાય છે (ફિગ. 2C), મહત્તમ વધારો સાથે (ફિગ. 2d, ઇ) સામાન્ય રીતે ઇન્સ્યુલિન એક્સપોઝરના 20 અને 50 મિનિટ વચ્ચે જોવા મળે છે. ઇન્સ્યુલિનની ગેરહાજરીમાં, નિયંત્રણ ચાઇઝે સક્રિય કરેલ સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાનોની સંખ્યામાં કોઈ ફેરફાર દર્શાવ્યો નથી (P> 0.05, બે-પૂંછડી જોડી t-ટેસ્ટ; ડેટા બતાવ્યો નથી); જ્યારે એક જ સમયે અંતરાલ પર નજર રાખતા નિયંત્રણ ચેતાકોષોની તુલનામાં, ઇન્સ્યુલિનથી ખુલ્લા ચેતાકોષોએ સક્રિય સક્રિય કલા વીજસ્થિતિમાનોની સંખ્યામાં નોંધપાત્ર ફેરફાર કર્યો છે (નિયંત્રણ n= ચાર ન્યુરોન્સ, ઇન્સ્યુલિનમાંથી 12 ઉત્તેજના જોડીઓ n= સાત ન્યુરોન્સથી 21 ઉત્તેજના જોડીઓ, F_1,25= 5.63, P<0.05, મિશ્રિત-પગલાં બે-માર્ગ એનોવા; ડેટા બતાવેલ નથી). એક્શન સંભવિત સંખ્યામાં વધતી ઇન્સ્યુલિનની અસર એચએનએમપીએ દ્વારા અટકાવવામાં આવી હતી, પરંતુ આઇજીએફ -1 આર પસંદગીયુક્ત અવરોધક પીપીપી દ્વારા નહીં (ફિગ. 2e), દર્શાવે છે કે ઇન્સ્યુલિન દ્વારા ચાઇ ઉત્તેજનામાં વધારો થયો છે, જે ઇનસાર મધ્યસ્થી હતી.

વિકસિત થતાં ઇન્સ્યુલિન ઉન્નતિ [ડીએ]_o એનએચએચઆરએસ અને એસીએચની જરૂર છે

પાછલા અભ્યાસો દર્શાવે છે કે ચા અને એસીએ ડીએન ચેતાક્ષ પર એનએસીએચઆરએસ દ્વારા મુક્ત થતા સ્ટ્રાઇટલ ડીએને નિયંત્રિત કરે છે.^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. તીવ્ર ઇન્સ્યુલિનના સંપર્કમાં જોવા મળેલી સીઆઈએસ પર વિપુલ પ્રમાણમાં ઇન્સઆર અભિવ્યક્તિ અને સીઆઈઆઈ ઉત્તેજનામાં વધારો એ સૂચવે છે કે આ ચેતાકોષો ઇન્સ્યુલિન માટેનો નવીન લક્ષ્યાંક હોઈ શકે છે જે ઉન્નત ડીએ પ્રકાશન તરફ દોરી શકે છે. આ ચકાસવા માટે, અમે મેક્માઇલેમાઇન, બિન-પસંદગીયુક્ત એનએસીએચઆર વિરોધી અથવા ડાયહાઇડ્રો-ry-એરિથ્રોઇડિન (DHβE) ની હાજરીમાં ઇન્સ્યુલિનની અસરની તપાસ કરી, β2 સબ્યુનિટ ધરાવતા (N2 *) એનએસીએચઆર માટે પસંદગીયુક્ત વિરોધી ડી.એ.³⁵. રડાયેલ [ડી.એ.]_o આ વિરોધીઓની હાજરીમાં સહેલાઇથી શોધી કા wasવામાં આવ્યું હતું, તેમ છતાં બંને દવાઓ સિંગલ-પલ્સ-ઇવોક્ટેડ [ડી.એ.] નું કંપનવિસ્તાર ઘટાડ્યું હતું._o (ઉદાહરણ તરીકે, એનએએસી કોરમાં 13 – 26% દ્વારા), અગાઉ અહેવાલ કરેલું છે^{29, 30, 31, 32}. એસીએચ અને એનએસીએચઆરની ભૂમિકાના સમર્થનમાં, ઇન્સ્યુલિનની અસર ઉત્તેજિત [ડીએ] પર_o મેકામાઇલlamમાઇન અથવા DHβE દ્વારા અટકાવવામાં આવ્યું હતું (ફિગ. 2F). ઇન્સ્યુલિન-ઉન્નત ડી.એ. પ્રકાશનમાં સ્ટ્રિએટલ એસીએચ સંકેતની સંડોવણીની પુષ્ટિ કરવા માટે, અમે ઇન્સ્યુલિનની અસરની તપાસ કરી ભૂતપૂર્વ વિવો ઉંદરમાંથી સ્ટ્રિએટલ કાપી નાંખ્યું જેમાં ChAT અભિવ્યક્તિ આનુવંશિક રીતે ફોરબinરિન સ્ટ્રક્ચર્સમાં બંધ કરવામાં આવી હતી ચેટ સ્ટ્રિઅટમ સહિત, KO ઉંદર)³². જોકે આ ઉંદરમાં સી.આઈ. અખંડ છે, એસીએચ સિન્થેસિસ નાબૂદ કરવામાં આવે છે, જે ઘટાડવાનું તરફ દોરી જાય છે, પરંતુ હજી સરળતાથી શોધી શકાય તેવું સિંગલ-પલ્સ-ઇવોક્ડ [ડી.એ.]_o, અગાઉ વર્ણવ્યા મુજબ³². નિયંત્રણમાં વિજાતીય કચરાપેટી, ઇન્સ્યુલિન (એક્સએનયુએમએક્સ એનએમ) માં વધારો થયો [ડી.એ.]_o એનએએસી શેલ અને કોર અને સીપીયુમાં 37 – 90% દ્વારા (ફિગ. 2G), ઉંદર સ્ટ્રાઇટમમાં જોવા મળેલ એમ્પ્લીફિકેશન કરતા વધુ (ઉદાહરણ તરીકે, ફિગ 1). જો કે, ઇન્સ્યુલિનની અસર ઉત્તેજિત [ડીએ] પર_o ફોરેબ્રેનમાં સ્ટ્રાઇટલ સંકુલ દરમ્યાન ગેરહાજર હતો ચેટ KO ઉંદર, તે દર્શાવે છે કે ડીએ પ્રકાશનમાં ઇન્સ્યુલિન-મધ્યસ્થી વૃદ્ધિ માટે સ્ટ્રિએટલ એસીએચની જરૂર હોય છે, પરંતુ ગ્લુટામેટ જેવા સીઆઈઆઈ દ્વારા સહ-મુક્ત કરાયેલ ટ્રાન્સમિટર્સ નહીં.³⁶.

ઉત્તેજિત [ડી.એ.] પર ઇન્સ્યુલિનનો પ્રભાવ_o આહાર આધારિત છે

પ્લાઝ્મા અને મગજની ઇન્સ્યુલિનની સાંદ્રતા શરીરના ઉત્સાહ માટે પ્રમાણસર છે^{6, 7, 8}, અને ઇન્સ્યુલિન પ્રત્યે મગજની સંવેદનશીલતામાં વળતર આપનારા ફેરફારો તરફ દોરી શકે છે. તેથી આપણે આ પૂર્વધારણાની ચકાસણી કરી છે કે આહાર, ડી.એ. પ્રકાશનને પ્રોત્સાહન આપવા માટે ઇન્સ્યુલિનની ક્ષમતાને પ્રભાવિત કરે છે, કાં તો ક્રોનિક એફઆર અથવા ઓબી ખોરાક વિરુદ્ધ AL નિયંત્રણો પર જાળવવામાં આવેલા ઉંદરોમાંથી સ્ટ્રાઇટલ કાપીને વાપરીને. અપેક્ષા મુજબ, પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિનનું સ્તર એએલ અથવા ઓબી ઉંદરો કરતા એફઆરમાં નીચા ઇન્સ્યુલિન સાથે, શરીરના વજન સાથે સુસંગત હતું.ફિગ. 3a અને કોષ્ટક 2). ફરતા ઇન્સ્યુલિનમાં આ તફાવતો હોવા છતાં, પીક-એવોક્ટેડ [ડી.એ.]_o એનએસી શેલ અને કોરમાં, અને સીપીયુ નોંધપાત્ર રીતે નીચું હતું ભૂતપૂર્વ વિવો એએલ સાથે સરખામણીમાં બંને આહાર જૂથોમાંથી સ્ટ્રાઇટલ કાપી નાંખ્યું (ફિગ. 3b અને પૂરક ફિગ. 2 એ, બી) નો અર્થ એ થાય કે ઇન્સ્યુલિન ઉપરાંત પરિબળો સંપૂર્ણ રીતે ઉત્તેજિત થાય છે [DA]_o. સ્ટ્રિએટલ ડીએ સામગ્રી આહાર જૂથોમાં જુદો નહોતો, જે ડીએ સંશ્લેષણને બદલે પ્રકાશનના નિયમનમાં ફેરફાર સૂચવે છે (પૂરક ફિગ. 2c). ગતિશીલ નિયમનના પરિવર્તન સાથે સુસંગત, ઇન્સ્યુલિનમાં સ્ટ્રિએટલ ડીએ પ્રકાશનની સંવેદનશીલતા એ આહાર પર આધારિત છે. એફઆર ઉંદરોમાં, ઇન્સ્યુલિનની સાંદ્રતા N1 nM, જેનો AL માં કોઈ પ્રભાવ નહોતો (ફિગ. 1b), વધારો થયો છે [ડી.એ.]_o (ફિગ. 3C), ઇસી સાથે વધેલી ઇન્સ્યુલિન સંવેદનશીલતાને પ્રતિબિંબિત કરે છે₅₀ એફઆર સ્ટ્રાઇટમ (0.4 – 0.6 nM) માં મૂલ્યો જે લગભગ AL ની સરખામણીએ તીવ્રતાનો ક્રમ હતો (સરખામણી કરો) ફિગ 1b અને 3c). આશ્ચર્યજનક વિપરીત, ઇન્સ્યુલિનની અસર ઓબી સ્ટ્રાઇટમમાં ખોવાઈ ગઈ; પણ 30 એનએમ ઇન્સ્યુલિન, જેએલ સ્ટ્રાઇટમમાં મહત્તમ અસર કરી હતી (ફિગ. 1b) નો ઓબીમાં કોઈ પ્રભાવ નહોતો (ફિગ. 3C).

  

  

(a) ખોરાકના જૂથોમાં પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિન સાંદ્રતા હકારાત્મક રીતે શરીરના વજન સાથે સંબંધિત છે.R= 0.76). (b) સરેરાશ સિંગલ-પલ્સ-ઇક્ક્ક્ડ [ડીએ]_o એનએસી કોરમાં (જુઓ પૂરક ફિગ. 2a, બી એનએસી શેલ અને સીપીયુ માટે) એફ (38 ± 4%) અને OB (25 ± 4%) ની સરખામણીએ AL (n= 50 diet 60 માંથી 5 સાઇટ્સ - આહાર જૂથ દીઠ 6 ઉંદરો, F_2,156= એક્સએન્યુએમએક્સ, વન-વે એનોવા, ટુકી એચએસડી; ***P<0.001); ઓબી વિરુદ્ધ એફઆર (P<0.08). (c) ઉત્તેજિત [ડી.એ.] ની સંવેદનશીલતા_o ઇન્સ્યુલિન માટે એફઆરમાં વધારો કરવામાં આવ્યો હતો, પરંતુ ઓબીમાં ખોવાઈ ગયો (n= 21 diet 49 diet 2 ઉંદરોથી આહાર જૂથ દીઠ, વન-વે એનોવા, ટુકી એચએસડી) ની સાંદ્રતા દીઠ 4 સાઇટ્સ, જેમાં તમામ પેટા ક્ષેત્રોમાં એફઆર વિરુદ્ધ AL ઉંદરોમાં વધુ સંવેદનશીલતા છે (Pદરેક ક્ષેત્ર માટે <0.001; બે-માર્ગ એનોવા; સી.પી. યુ: F_{(ક concનક × ડાયેટ; 3,286)}= 10.253; મુખ્ય: F_{(ક concનક × ડાયેટ; 3,353)}= 6.166; શેલ: F_{(ક concનક × ડાયેટ; 3,195)}= 10.735).

• પૂર્ણ કદની છબી (124 કેબી)

 

 

આ ડેટા સ્ટ્રિએટલ ઇન્સઆર સંવેદનશીલતા અને શરીરની ઉત્તેજના વચ્ચેના વિપરીત સંબંધ સૂચવે છે. વૈકલ્પિક રીતે, જો કે, આ આહાર આધારિત આ તફાવત બદલાતી એનએસીએચઆર સંવેદનશીલતાને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે. તેથી અમે દરેક આહાર જૂથમાંથી એનએસી કોરમાં નિકોટિન પ્રત્યે એકાગ્રતા પ્રતિસાદ નક્કી કર્યો. નિકોટિન એનએસીએચઆર ડિસેન્સિટાઇઝેશનનું કારણ બને છે, જેને [ડી.એ.] ના ગુણોત્તરની તુલના કરીને જથ્થો આપી શકાય છે_o 100 હર્ટ્ઝ પર પાંચ કઠોળની ટૂંકી ટ્રેન દ્વારા સિંગલ-પલ્સ-ઇવોક્ડ [ડી.એ.]_o (એક્સએન્યુએમએક્સ પી: એક્સએનએમએક્સ પી રેશિયો) એનએસીએચઆર સક્રિયકરણ / ડિસેન્સિટાઇઝેશનના અનુક્રમણિકા તરીકે^{30, 31}. આ અભિગમનો ઉપયોગ કરીને, અમને એનએસીએચઆર સંવેદનશીલતામાં એનએસી કોરમાં આહાર જૂથોમાં કોઈ તફાવત જોવા મળ્યો નથી (પૂરક ફિગ. 3a-C). તદુપરાંત, 5 p ને નિયંત્રિત કરો: એનએએનસી કોરમાં આહાર જૂથોમાં 1 p રેશિયો અલગ ન હતો (પૂરક ફિગ. 3d) અથવા સીપીયુ (સચિત્ર નથી), સૂચિત કરે છે કે આહાર એનએસીએચઆર આધારિત ડીએ પ્રકાશનના નિયમનને બદલતો નથી. આમ, સ્ટ્રિએટલ ઇન્સઆર સંવેદનશીલતા એફઆર વિરુદ્ધ એએલ ઉંદરોમાં સુધારેલ દેખાય છે, પરંતુ ઇન્સ્યુલિનની શારીરિક સાંદ્રતામાં સ્ટ્રિએટલ ડીએ પ્રકાશનના નિયમનના નુકસાન સાથે, ઓબી ઉંદરોમાં ગેરહાજર છે.

એનએસી શેલ ઇન્સ્યુલિન કન્ડિશન્ડ ફ્લેવર પ્રેફરન્સને મોડ્યુલેટ કરે છે

ખોરાકની પસંદગીઓ બંને પૂર્વ અને ઇન્જેસ્ટિવ પરિબળો દ્વારા ઉત્પન્ન થાય છે; દરેક માટેની મિકેનિઝમ્સનો સંપૂર્ણ ઉકેલો નથી, પરંતુ વર્તમાન પુરાવા એનએસી ડીએ બંનેમાં સંકેત આપે છે^{37, 38}. પેરિફેરલ ગ્લુકોઝ એલિવેશન પછી પ્લાઝ્મા અને સેરેબ્રોસ્પાઇનલ ફ્લુઇડ (સીએસએફ) ઇન્સ્યુલિનનું સ્તર ઝડપથી વધે છે તે જોતાં⁶, અને તે કે સ્ટ્રાઇટમમાં ઇન્સ્યુલિનનો વધારો પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિન એલિવેશનના 5 મિનિટની અંદર શોધી શકાય છે⁷, ભોજન દરમિયાન પેરિફેરલ ઇન્સ્યુલિન પ્રકાશન એનએસી ડીએ પ્રકાશનમાં વધારો કરી શકે છે અને ઇન્જેસ્ટિવ પછીના ઇનામ પદ્ધતિઓ માટે ફાળો આપી શકે છે તેવું અનુમાન લગાવવું તાર્કિક છે. અમે અગાઉ વર્ણવેલ ફ્લેવર-પ્રેફરન્સ પ્રોટોકોલ સ્વીકાર્યું³⁷ ઉંદરોમાં સેકરિન-મધુર ગ્લુકોઝ સોલ્યુશન્સ સાથે એનએસીમાં ઇન્સ્યુલિન એન્ટિબોડી (ઇન્સએબી) ની સ્થાનિક એપ્લિકેશન દ્વારા એન્ડોજેનસ ઇન્સ્યુલિનની અસરને અવરોધિત કરવાથી જોડી સ્વાદ માટે પસંદગીઓમાં ઘટાડો થશે. ઇન્સ્યુલિનની અસરોને અવરોધિત કરવામાં ઇન્સએબીની અસરકારકતાની પરીક્ષણ એ.એન. ઈન વિટ્રો સ્થિતિએ સ્ટ્રીટલ સિનેપ્ટોઝોમ્સમાં ડી.એ. ઇન્સ્યુલિન (30 nM) ને કારણે નોંધપાત્ર વધારો થયો V_{મહત્તમ} એનએસી અથવા સીપીયુના સિનપ્ટોઝosમ્સમાં (પૂરક ફિગ. 4), સાથે સુસંગત V_{મહત્તમ} સ્ટ્રાઇટલ કાપી નાંખ્યું માંથી માહિતી (કોષ્ટક 1) અને પાછલા અભ્યાસ સાથે^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. ઇન્સ્યુલિનની ગેરહાજરીમાં, ન તો ઇન્સએબ અથવા ન તો કંટ્રોલ એન્ટિબોડી ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન જી (આઇજીજી) એ બદલી V_{મહત્તમ} નિયંત્રણ વિરુદ્ધ ડી.એ. આઇજીજીની હાજરીમાં, હજી પણ ઇન્સ્યુલિનમાં નોંધપાત્ર વધારો થયો V_{મહત્તમ}; જો કે, ઇન્સ્યુલિનની અસર V_{મહત્તમ} InsAb ની હાજરીમાં ખોવાઈ ગઈ (પૂરક ફિગ. 4).

પેશીઓના નુકસાનને ઓછું કરવા અને પેશીઓના લક્ષ્યની સંવેદનશીલતાને જાળવવા માટે, વિષયોના બે જૂથોની તપાસ કરવામાં આવી જેમાં અમે વિષયોના એક જૂથનો ઉપયોગ કરવા અને ઇન્સએબી સાથે એક સ્વાદવાળા સોલ્યુશનને જોડવાની જગ્યાએ, મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન પ્રક્રિયા સાથે ઇન્ટ્રા-એનએસી માઇક્રોઇન્જેક્શનને વૈકલ્પિક બનાવ્યું. વાહન. પરિણામે, એક-બોટલ-કન્ડિશનિંગ સત્રો દરમિયાન, પ્રાયોગિક જૂથને બે સ્વાદમાંથી એક સાથે જોડાયેલા ઇન્સએબી માઇક્રોઇંજેક્શન્સ પ્રાપ્ત થયા, અને વૈકલ્પિક સત્રો પર, મોક માઇક્રોઇંજેક્શન્સ અન્ય સ્વાદ સાથે જોડાયેલા (ફિગ. 4a, ડાબી). કંટ્રોલ ગ્રૂપને ફોસ્ફેટ-બફર સ salલીન (પીબીએસ) અથવા આઇજીજીના માઇક્રોઇન્જેક્શનથી વૈકલ્પિક મોક માઇક્રોઇંજેક્શન્સ પ્રાપ્ત થયા. બંને સ્વાદિષ્ટ ઉકેલોમાં કન્ડિશનિંગ દરમિયાન ગ્લુકોઝ હોય છે. કંટ્રોલ-માઇક્રોઇંજેક્ટેડ જૂથમાં ફ્લેવર્સ વચ્ચે કોઈ વિભેદક પસંદગીની અપેક્ષા રાખવામાં આવતી ન હતી, જ્યારે પસંદગી ઇન્સએબ-માઇક્રોઇન્જેક્ટેડ જૂથમાં મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન-જોડી સ્વાદ તરફ સ્થાનાંતરિત થવાની અપેક્ષા રાખવામાં આવી હતી.

  

  

(a) એક બોટલ કન્ડીશનીંગ (ડાબી બાજુ) અને બે બોટલ પરીક્ષણ (જમણી બાજુ) નું ચિત્રણ આપતું આકૃતિ. (b) એક બોટલ-કન્ડિશનિંગ સત્રો દરમિયાન વોલ્યુમનું સેવન (મિલી). પ્રેરણા-કન્ડીશનીંગ સત્ર અને માઇક્રોઇન્જેક્શન ટ્રીટમેન્ટ વચ્ચે નોંધપાત્ર સંપર્ક થયો (n= 19 group 20 ઉંદરો પ્રતિ જૂથ, F_(3,111)= 3.088, P<0.05, 2 × 4 પ્રેરણા-કન્ડીશનીંગ સત્ર પરના પુનરાવર્તિત પગલાઓ સાથે મિશ્ર એનોવા). ઇન્સએબી માઇક્રોઇન્જેક્શન ત્રીજા દરમિયાન નિયંત્રણની તુલનામાં વપરાશમાં નોંધપાત્ર ઘટાડો થયો (t(40) = 3.026, **P<0.01) અને ચોથું (t(40) = 3.052, **P<0.01, એક પૂંછડીવાળું સુરક્ષિત t-tests) પ્રેરણા. મોક ઇંજેક્શન્સની કોઈ પણ જૂથના વપરાશ પર કોઈ અસર નહોતી (F_3,111= એક્સએન્યુએમએક્સ, એક્સએન્યુએમએક્સ × એક્સએનએમએક્સએક્સ એનોવાને મોક કન્ડિશનિંગ સત્ર પર વારંવાર પગલાં સાથે મિશ્રિત કર્યા છે). (c) બે બોટલ ફ્લેવર-પ્રેફરન્સ પરીક્ષણ દરમિયાન વોલ્યુમનો વપરાશ. કન્ડિશનિંગ દરમિયાન સ્વાદ અને માઇક્રોઇનેજેક્શન ટ્રીટમેન્ટ વચ્ચે નોંધપાત્ર સંપર્ક થયો હતો.F_1,37= 5.36, P<0.05, સ્વાદ પર વારંવાર પગલા સાથે દ્વિમાર્ગી મિશ્ર એનોવા). ઇન્સએબી જૂથે મોક જોડી કરેલા સ્વાદની તુલનામાં ઇન્સએબ-જોડી સ્વાદનો નોંધપાત્ર રીતે ઓછો વપરાશ કર્યો હતો.t(18) = 2.82, ** પી<0.01, એક પૂંછડીવાળું સુરક્ષિત t-સ્ટ); કંટ્રોલ જૂથે કોઈ સ્વાદ પસંદ કર્યું નથી (t(19) = 0.803, P> 0.05, સુરક્ષિત t-તેમ). જૂથોની તુલના કરતાં, ઇન્સએબી ઉંદરોએ રેડવાની ક્રિયામાં જોડાયેલા સ્વાદના નોંધપાત્ર પ્રમાણમાં ઓછું પીધું (t(40) = 1.96, *P<0.05) અને મોક-જોડી સ્વાદમાં નોંધપાત્ર રીતે વધુ (t(40) = 1.77, *P<0.05, એક પૂંછડીવાળું સુરક્ષિત t-તેમ) નિયંત્રણો કરતા.

• પૂર્ણ કદની છબી (161 કેબી)

 

 

વન-બોટલ કન્ડિશનિંગ સત્રો દરમિયાન, ઇન્સએબી માઇક્રોઇન્જેક્શન દ્વારા ત્રીજા અને ચોથા ઇન્ફ્યુઝન દરમિયાન વાહનની તુલનામાં વપરાશમાં નોંધપાત્ર ઘટાડો થયો છે.ફિગ. 4b). તેનાથી વિપરિત, બંને જૂથોએ ચારેય મોક ઇંજેક્શન સત્રો દરમિયાન સમાન દ્રાવણનો વપરાશ કર્યો (F_3,111= 0.127, P>0.05, મિશ્રિત દ્વિ-માર્ગ એનોવા) (ફિગ. 4b). કુલ આઠ કન્ડીશનીંગ સત્રો પછી, સ્વાદની પસંદગીનું મૂલ્યાંકન બે બોટલના પરીક્ષણમાં કરવામાં આવ્યું હતું જેમાં ઉંદરોને બંને સ્વાદવાળા ઉકેલો વારાફરતી એક્સેસ હતી (ફિગ. 4a). આંકડાકીય વિશ્લેષણથી કન્ડિશનિંગ દરમિયાન પ્રાપ્ત સ્વાદ અને માઇક્રોઇન્જેક્શન ટ્રીટમેન્ટ વચ્ચે નોંધપાત્ર ક્રિયાપ્રતિક્રિયા જાહેર થઈ (ફિગ. 4C). ઇન્સએબી જૂથે મોક જોડી કરેલા સ્વાદની તુલનામાં ઇન્સએબ-જોડી સ્વાદનો નોંધપાત્ર રીતે ઓછો વપરાશ કર્યો હતો.ફિગ. 4C), જ્યારે વાહન જૂથે કોઈ સ્વાદ પસંદ ન કરી (ફિગ. 4C) નો અર્થ એ છે કે અખંડ ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ દ્વારા મીઠી કેલરી સોલ્યુશનની પસંદગી કરવામાં ફાળો આપ્યો છે. વાહનની તુલનામાં, ઇન્સએબી-માઇક્રોઇંજેક્ટેડ ઉંદરોએ રેડવાની ક્રિયા-જોડીવાળા સ્વાદમાં નોંધપાત્ર રીતે ઓછો અને મોક-ઇન્જેક્શન-જોડી સ્વાદમાં વધુ પીધો (ફિગ. 4C). આઇજીજીનું માઇક્રોઇન્જેક્શન (t(9) = 0.792. P>0.05, સુરક્ષિત t-સ્ટેટ્સ) અથવા પીબીએસ (t(9) = 0.442. P>0.05, સુરક્ષિત t-એસ્ટ્સ) ને સ્વાદ પસંદગી પર કોઈ અસર નહોતી (ડેટા બતાવેલ નથી), ઇન્સએબી માઇક્રોઇન્જેક્શનની કોઈ નોંધપાત્ર અસર વપરાશ અથવા સ્વાદની પસંદગીમાં ઘટાડો થવાની સંભાવના સામે દલીલ કરે છે. તે પણ ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ કે પરીક્ષણમાં ઇન્સએબ જૂથની પસંદગી ઓછી નવલકથા સ્વાદ માટે પસંદગી નથી, કારણ કે ઇન્સએબી જૂથ માટે સત્ર અને સત્ર પ્રકાર (વાસ્તવિક પ્રેરણા વિરુદ્ધ મોક ઇન્ફ્યુઝન) વચ્ચે કોઈ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા નથી.F_3,54= 1.584, P> 0.05, દ્વિ-માર્ગ એનોવા). એટલે કે, ઇન્સએબ જૂથે ઇન્સએબ ઇન્ફ્યુઝન-જોડી સ્વાદ સંબંધિત મોક-ઇન્ફ્યુઝન-જોડી સ્વાદનો વધુ વપરાશ કર્યો નથી; તેના બદલે, સારવાર જૂથો વચ્ચેના તફાવતો ફક્ત પ્રેરણા-કન્ડીશનીંગ સત્રો દરમિયાન જ ઉદભવ્યા. એકંદરે, આ ડેટા સૂચવે છે કે એનએસીમાં ઇન્સ્યુલિન ગ્લાયકેમિક લોડને સંકેત આપતા સ્વાદ માટે પસંદગીના મજબૂતીકરણમાં ભૂમિકા ભજવે છે.

અમે અહીં જણાવીએ છીએ કે ઇન્સ્યુલિન, ઇએનઆરએસ દ્વારા સીઆઈઆઈ ઉત્તેજનાને મોડ્યુલેટ કરીને, એનએસીએચઆર-આધારિત રીતે સ્ટ્રિએટલ ડીએ પ્રકાશનને વિસ્તૃત કરે છે. અમારા પરિણામો સૂચવે છે કે ઇન્સ્યુલિન સંતોષની સંકેતની તેની સ્થાપિત ભૂમિકા ઉપરાંત ઇનામ સિગ્નલ તરીકે પણ કામ કરી શકે છે. નોંધનીય રીતે, ડી.એ.ના પ્રકાશન પર ઇન્સ્યુલિનની અસર એફઆર પછી ઇન્સ્યુલિન પ્રત્યે નોંધપાત્ર વધેલી સંવેદનશીલતા સાથે, આહાર દ્વારા મોડ્યુલેટ કરવામાં આવે છે, પરંતુ ઓબી આહાર પર ઇન્સ્યુલિન-વધારવામાં આવેલા નિયમનનું સંપૂર્ણ નુકસાન. આ ફેરફારો ઇન્સઆર સંવેદનશીલતાના ફેરફારોને પ્રતિબિંબિત કરે છે જે ઇન્સ્યુલિનના પરિભ્રમણથી વિપરિત રીતે સંબંધિત છે, તે જોતાં પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિનનું સ્તર આહાર આધારિત હોવાનું જણાયું હતું, પરંતુ એનએસીએચઆર સંવેદનશીલતા ન હતી. છેવટે, પ્રાણીઓને વર્તવામાં અમારા સ્વાદ-પસંદગીના અધ્યયન સૂચવે છે કે એનએસી શેલમાં ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ ખોરાકની પસંદગીને પ્રભાવિત કરે છે, જે ફક્ત ખોરાક સંબંધિત શિક્ષણમાં ઇન્સ્યુલિનને જ અસર કરે છે, પણ તે પુરસ્કાર સંકેત તરીકેની તેની ભૂમિકાની પુષ્ટિ પણ કરે છે.

ચોખ્ખી [ડી.એ.]_o ડી.એ. રીલીઝ અને ડીએટી દ્વારા ડી.એ. અપટેક વચ્ચેનું સંતુલન પ્રતિબિંબિત કરે છે. અગાઉના પુરાવા દર્શાવે છે કે ઇન્સ્યુલિન DAT પ્રવૃત્તિને નિયંત્રિત કરી શકે છે^{18, 19, 20, 21, 22, 23} આગાહી તરફ દોરી ગઈ કે ઇન્સ્યુલિનમાં વધારો થવાને કારણે ઉત્તેજિત [ડી.એ.] માં ચોખ્ખી ઘટાડો થવો જોઈએ._o વધેલા ડી.એ. જો કે, અમે શોધી કા .્યું છે કે સ્ટ્રાઇટમમાં, ઇન્સ્યુલિનની અસર આ કરતા વધુ જટિલ છે. જોકે ઇન્સ્યુલિનના સંપર્કમાં વધારો થયો હતો V_{મહત્તમ} ડીએટી માટે, ઇન્સ્યુલિનની પ્રાથમિક અસર, ડી.એ.ના પ્રકાશન પર હતી, ડી.એ._o એનએસી શેલ અને કોર અને સીપીયુમાં ઇન્સ્યુલિન સાંદ્રતાની શારીરિક શ્રેણીમાં. જોકે ઉત્તેજિત [DA] નો વધારો_o એક્સએન્યુએમએક્સ એનએમના સુપ્રિફિઝિઓલોજિકલ સાંદ્રતા પર નિયંત્રણના સ્તરો પર પાછા ફર્યા, V_{મહત્તમ} સમજૂતી તરીકે DAT પરની મુખ્ય અસરને દૂર કરીને, નિયંત્રણમાંથી પણ કોઈ ફેરફાર થયો ન હતો. તેના બદલે, ઉપાડ પરની અસરની ખોટ તેમજ પ્રકાશન ઇન્સઆરના ડિસેન્સિટાઇઝેશન અથવા ઉચ્ચ ઇન્સ્યુલિન સાંદ્રતા પર ડાઉનસ્ટ્રીમ સિગ્નલિંગ માર્ગોના ડાઉનગ્રેલેશનને સૂચિત કરે છે. પેરિફેરલ પેશીઓમાં ઇન્સ્યુલિન બંધનકર્તા પછી, ઇન્સઆર ઝડપથી એન્ડોસાઇટોસિસ અને અધોગતિથી પસાર થાય છે.¹, ઇન્સ્યુલિન અથવા ઉચ્ચ કેલરીવાળા આહારના ઉચ્ચ સ્તરના ટૂંકા ગાળાના સંપર્ક પછી ન્યુરોનલ ઇન્સઆર સંવેદનશીલતાના નુકસાનના ઉભરતા પુરાવા સાથે.^{10, 11, 39}.

અહીં નોંધાયેલા સ્ટ્રિએટલ ડી.એ. રિલીઝને વધારવા માટે ઇન્સ્યુલિનની પ્રબળ અસર તાજેતરના બે અન્ય પરિણામોના વિરોધાભાસી છે ભૂતપૂર્વ વિવો કટકા અભ્યાસ. પ્રથમમાં, ઇન્સ્યુલિનને લીધે ઇલેક્ટ્રિકલી પેદા થયેલા ઓવરફ્લોમાં ઘટાડો થયો [³એચ] સ્ટ્રિએટલ કાપી નાંખેલ ડીએ, જોકે વધ્યા [³એચ] જ્યારે ડીએટીને અટકાવવામાં આવ્યું ત્યારે ડીએ ઓવરફ્લો શોધી કા .્યો²². આપવામાં આવ્યું છે કે પ્રકાશિત [³એચ] સુપરફ્યુઝિંગ સોલ્યુશનમાં શોધી શકાય તે માટે ડી.એ.ને ડીશ્યુ-મધ્યસ્થી ઉપાયથી બચવું આવશ્યક છે, આ પ્રોટોકોલ ખાસ કરીને ડીએટી નિયમન માટે સંવેદનશીલ છે. અમારા પરિણામો દર્શાવે છે કે ઇન્સ્યુલિન સીએચઆઈ અને એનએસીએચઆર એક્ટિવેશન દ્વારા ડીએ પ્રકાશનને વધારે છે, ડીએટી-મધ્યસ્થી અપટેક વધારવા ઉપરાંત, ઇન્સ્યુલિન-ઉન્નત [para] માં સંભવિત વિરોધાભાસી વધારો સમજાવશે [³એચ] જ્યારે ડીએટી પરની હરીફાઇ અસરો અવરોધિત કરવામાં આવી ત્યારે ડીએ ઓવરફ્લો જોવા મળી²². બીજા અભ્યાસમાં એફસીવીનો ઉપયોગ વીટીએમાં સોમેટોડેન્ડ્રિટિક ડી.એ.ના પ્રકાશનની સીધી તપાસ માટે કરવામાં આવ્યો હતો, પણ ડી.એ.ના ઉપાય પર ઇન્સ્યુલિનનો મુખ્ય પ્રભાવ પણ જોવા મળ્યો હતો, તેમાં ઘટાડો થયો હતો [ડી.એ.]_o (સંદર્ભ આપો) 23). સ્થાનિક માઇક્રોક્રિક્વિટ્રીથી સોમેટોડેન્ડ્રિટિક વિ એક્સોનલ ડીએ પ્રકાશન પદ્ધતિઓ સુધીના ઘણા પરિબળોમાં તફાવતો.⁴⁰, આ પ્રાદેશિક તફાવત માટે ફાળો આપી શકે છે. આગળ નીચે ચર્ચા કર્યા મુજબ, ઇન્સ્યુલિનની પ્રાદેશિક આધારિત ભૂમિકા વિરોધાભાસી હોવાને બદલે પૂરક બને તેવી સંભાવના છે.

પહેલાં, ડી.એ. સિગ્નલિંગના ઇન્સ્યુલિન આધારિત આધારિત નિયમનની કોઈપણ ભૂમિકા ડી.એ. ન્યુરોન્સ પર ઇન્સઆરના સીધા સક્રિયકરણ દ્વારા મધ્યસ્થી હોવાનું માનવામાં આવતું હતું. અમે અહીં બતાવીએ છીએ કે સ્ટ્રિએટલ સીઆઈઓ પર ઇન્સઆર પણ વ્યક્ત કરવામાં આવે છે, અને તે ઇન્સ્યુલિન સ્ટ્રિએટલ ડીએ પ્રકાશનને વિસ્તૃત કરવા માટે ચી ઉત્તેજનાને મોડ્યુલેટેડ કરે છે, જે આહાર પર ઇન્સ્યુલિનના પ્રભાવમાં મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવી શકે છે. સ્ટ્રિએટલ સીઆઈઓ થેલેમસના ઇન્ટ્રાલેમિનાર ન્યુક્લિયસના ચેતાકોષો પાસેથી આક્ષેપો મેળવે છે, જે સ્પષ્ટ સંવેદનાત્મક ઉત્તેજનાના જવાબમાં વિસ્ફોટ ગોળીબાર દર્શાવે છે અને સીઆઈઆઈમાં બર્સ્ટ-થોભો સ્પાઇકિંગ પેટર્ન ચલાવવામાં મદદ કરે છે જે ધ્યાન, મજબૂતીકરણ અને સહયોગી શિક્ષણના નિર્દેશનમાં મહત્વપૂર્ણ છે.⁴¹. તેથી, સ્ટ્રિએટલ સી.આઈ.એસ. પર ઇન્સ્યુરિનની ક્રિયા થેલેમિક ફાયરિંગ પ્રત્યે સ્ટ્રિએટલ રિસ્પોન્સિટિવ પર સંવેદનાત્મક ખોરાકના સંકેતોની અસરને વધારી શકે છે, જે ઇન્જેસ્ટેડ ભોજનના ઇનામ મૂલ્યની વધેલી સમજને ફાળો આપે છે. સીઆઈ એક્ટિવેશન દ્વારા સ્ટ્રિએટલ ડી.એ.ના પ્રકાશનની સીધી બતીના પગલે એ સૂચન તરફ દોરી ગયું છે કે, ChI ને ઉત્તેજીત કરનારા પરિબળો ડી.એ.ના પ્રકાશનના કારણોસર વિશેષાધિકૃત ભૂમિકા ભજવશે³³. અમારું ડેટા આના માટે પ્રથમ સહાયક પુરાવા પ્રદાન કરે છે, જેમાં ઇન્સ્યુલિન-ઉન્નત સીઆઇ ઉત્તેજના અને એસીએચ સિગ્નલિંગ ડ્રાઈવિંગ ગતિશીલ વધારો ડીએ પ્રકાશનમાં કરે છે.

ઇન્સ્યુલિનની હાજરીમાં એલિવેટેડ ડી.એ. પ્રકાશન પણ એસીએચ સંકેતની મર્યાદામાં વધારાની સામે દલીલ કરે છે કે જે એનએસીએચઆર ડિસેન્સિટાઇઝેશન અથવા મસ્કરનિક એસીએચ રીસેપ્ટર (એમએસીએચઆર) સક્રિયકરણનું કારણ બને છે, જેમાંથી કોઈપણ સિંગલ-પલ્સ-ઇવોક્ટેડ [ડીએ] દબાવવા શકે છે._o (સંદર્ભ આપો) 29, 30, 31, 42). આમ, અહીં અહેવાલ આપેલ મિકેનિઝમ્સ એમએસીએચઆરના એસી એક્ટિવેશનથી અલગ છે, જે અણગમો અને તૃષ્ણા સાથે સંકળાયેલ છે.⁴³.

સિંગલ-પલ્સ-ઇવોક્ટેડ [DA]_o એએલ ઉંદરો કરતા બંને એફઆર અને ઓબી ઉંદરોમાં ઓછા હતા; જોકે આ પરિણામો અગાઉના અહેવાલો સાથે સુસંગત છે^{44, 45, 46}, અમારા અધ્યયનો સતત સમયમર્યાદામાં બે આહાર જૂથોમાં ત્રણ સ્ટ્રિએટલ પેટા ક્ષેત્રોની પ્રથમ પદ્ધતિસરની તુલના પૂરી પાડે છે. ડી.એ. પ્રકાશનમાં આહાર આધારિત આનુષંગિક ફેરફારોની અંતર્ગત પદ્ધતિઓ સ્પષ્ટ કરી શકાતી નથી, અને વર્તમાન અધ્યયનની તકની બહાર છે. જો કે, એફઆર અને ઓબી આહાર દ્વારા પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિનના સ્તરમાં વિપરિત ફેરફાર કરવામાં આવે છે, તેવું શક્ય નથી._o બંને જૂથોમાં આહાર આધારિત ઇન્સ્યુલિન સ્તરનું પરિણામ છે.

બીજી તરફ, આહાર સાથેના ઇન્સઆર સંવેદનશીલતામાં ફેરફાર અને પરિણામે આહાર આધારિત પ્લાઝ્મા ઇન્સ્યુલિનના સ્તરમાં એફઆરમાં ઇન્સ્યુલિન પ્રત્યેની સંવેદનશીલતા વધવાની અને ઓબીમાં ઇન્સ્યુલિન પ્રત્યે પ્રતિભાવ ગુમાવવાની સંભાવના છે. એફઆર અથવા ઓબી ઉંદરો વિરુદ્ધ બંનેમાં બદલાયેલી એનએસીએચઆર સંવેદનશીલતાના વૈકલ્પિક સમજૂતી માટે કોઈ પુરાવા નથી. તેમ છતાં, અમારા તારણો એફઆર સાથે સ્ટ્રિએટલ ઇન્સઆર સંવેદનશીલતામાં વધારો સૂચવતા પ્રથમમાં છે¹⁸, વજન ઘટાડવાની સાથે સાથે સીએસએફમાં ઇન્સ્યુલિનના સ્તરમાં ઘટાડો થાય છે⁷, જે એફઆરમાં ઇન્સ્યુલિન માટે ડીએ પ્રકાશનની વિસ્તૃત સંવેદનશીલતામાં ફાળો આપશે. તેનાથી વિપરિત, OB ઉંદરોમાં ઇન્સ્યુલિન પ્રતિભાવની ખોટ એ વજનમાં વધારો અથવા OB આહાર દ્વારા પ્રેરિત મગજની ઇન્સઆર સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો માટેના અગાઉના પુરાવા સાથે સુસંગત છે.^{3, 10, 11}.

અમારી ભૂતપૂર્વ વિવો સ્લાઇસ ડેટા એવી કલ્પનાને સમર્થન આપે છે કે ઇન્સ્યુલિન ઇનામ તેમજ સંતોષનો સંકેત આપી શકે છે. અમે સ્વાદ-પસંદગીના કન્ડિશનિંગ દરમિયાન એનએએસી શેલમાં દ્વિપક્ષીય ઇન્સએબી માઇક્રોઇન્જેક્શન સાથે અંતoજેનિક ઇન્સ્યુલિનની અસરને અવરોધિત કરીને આ પૂર્વધારણાને પરીક્ષણ કર્યું છે. ઇનામની ભૂમિકા સાથે સુસંગત, ઇન્સ્યુલિનની અસરને અવરોધિત કરવાથી, જોડીવાળા ગ્લુકોઝ ધરાવતા સોલ્યુશનના સ્વાદની વિરુદ્ધ, અસ્પષ્ટ ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ સાથે સંકળાયેલ સ્વાદની પસંદગીમાં ઘટાડો થયો છે. એનએસી શેલમાં ઇન્સ્યુલિન અવરોધિત કરવાથી વન બોટલ કન્ડિશનિંગ દરમિયાન જોડી કરેલા સોલ્યુશનનો વપરાશ પણ ઘટી ગયો છે, જ્યારે મોક અથવા કંટ્રોલ માઇક્રોઇન્જેક્શનનો વપરાશ પર કોઈ અસર નહોતી. આ ડેટા સૂચવે છે કે એનએસી શેલમાં ઇન્સ્યુલિન ખોરાકની પસંદગીમાં ભૂમિકા ભજવે છે. અગાઉના અધ્યયનોએ બતાવ્યું છે કે સ્વાદ કન્ડીશનીંગના સંપાદન માટે એનએસીમાં અખંડ ડીએ સિગ્નલિંગ જરૂરી છે^{37, 38}, પોષક ઉકેલોના પ્રબલિત અસરોના મધ્યસ્થીમાં એનએસી ડીએ માટેની ભૂમિકાની પુષ્ટિ. આ પ્રકાશમાં, અકબંધ ઇન્સ્યુલિન પ્રાપ્યતા સાથે જોડાયેલા ગ્લુકોઝ સોલ્યુશનની પસંદગી એનએએસી શેલમાં ડીએટી-મધ્યસ્થી ડી.એ. અપટેક પર ઇન્સ્યુલિનના પ્રાથમિક પ્રભાવ સામે દલીલ કરે છે, કારણ કે આમાં ઘટાડો થવાની અપેક્ષા રાખવામાં આવશે [ડી.એ.]_o અને તેથી નિયંત્રણ-જોડી સ્વાદનો વપરાશ ઓછો કરો. અમારા પરિણામો અગાઉના અધ્યયન સાથે પણ સુસંગત છે જેમાં એનએસી શેલમાં ઇન્સ્યુલિનના માઇક્રોઇન્જેક્શનથી પ્રાણીઓ મૌખિક સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટમાં રોકાયેલા હતા ત્યારે સુક્રોઝના વપરાશમાં સરહદ વધારો થયો હતો.²⁶, જે વધેલા ડી.એ. અપટેકના અપેક્ષિત પરિણામથી વિરુદ્ધ હતું. એકંદરે, આ વર્તણૂકીય ડેટા સ્ટ્રિએટલ સીઆઈએસ અને ઉન્નત ડીએ પ્રકાશન પર ઇન્સ્યુલિનના આગાહી પ્રભાવ સાથે સુસંગત છે. જો કે, આ પરિણામો મોનિટર કરેલા વર્તણૂકોમાં સ્ટ્રાઇટલ માઇક્રોક્રિક્વિટ્રીના અન્ય તત્વોની સંડોવણીને બાકાત રાખતા નથી, સમગ્ર સ્ટ્રાઇટમમાં વ્યાપક ઇન્સઆર અભિવ્યક્તિ આપવામાં આવે છે.^{1, 14}.

અહીં અહેવાલ કરેલા અધ્યયનો પ્રથમ પુરાવો પૂરો પાડે છે કે ઇન્સ્યુલિન કેલરી મૂલ્યના સંદેશાવ્યવહારમાં ભૂમિકા ભજવે છે, અને તેથી ભોજનની લાભદાયી અસરો, જે ઓછા વજનવાળા અને મેદસ્વી બંને વિષયોમાં ઇન્સ્યુલિનના પ્રભાવ માટે મહત્વપૂર્ણ સૂચિતાર્થ ધરાવે છે. કેટલાક અભ્યાસ સૂચવે છે કે સ્વાદના ટ્રાન્સજેક્શન માર્ગો અકબંધ છે કે કેમ તે ધ્યાનમાં લીધા વિના, ખોરાક પછીની અસરો⁴⁷, એનએસી ડીએ પ્રકાશન અને વર્તનની હકારાત્મક મજબૂતીકરણમાં વધારો^{37, 47}. આમ, પોસ્ટ-શોષક ઇન્સ્યુલિન પ્રતિસાદ ભોજનની ગ્લાયકેમિક ઉપજને એન્કોડ કરી શકે છે અને ખાદ્યપદાર્થોને સક્ષમ કરવા અને ખોરાકની પસંદગીઓ અને વર્તણૂકોના મજબૂતીકરણમાં ફાળો આપી શકે છે. જો કે, ઇન્સ્યુલિનના સ્તર અને કેન્દ્રીય ઇન્સઆર સંવેદનશીલતામાં અતિશય પરિવર્તનની અસામાન્ય, તેમજ અનુકૂલનશીલ વર્તણૂકમાં ભૂમિકા હોઈ શકે છે. ઉદાહરણ તરીકે, એફઆર વિષયોમાં હાયપોઇન્સ્યુલિનેમિયા અને ઇન્સઆર સંવેદનશીલતાને વળતર આપતું અપગુલેશન તેમના દ્વિસંગી સ્વભાવમાં એક પરિબળ હોઈ શકે છે.⁴⁸. Oલટું, પ્રકાર II ડાયાબિટીઝ અથવા મેદસ્વીપણુંમાં કેન્દ્રીય ઇન્સ્યુલિન પ્રત્યે સંવેદનશીલતા, અહીં ઓબી ઉંદરોમાં અરીસામાં, ઇન્જેશનને પગલે ઈનામની ઘટતી ભાવનામાં ફાળો આપી શકે છે, વળતર તરીકે ઉચ્ચ ગ્લાયકેમિક ઇન્ડેક્સવાળા ખોરાક લે છે.^{49, 50}. તેથી, ક્યાં તો સ્ટ્રાઇટલ ઇન્સ્યુલિન સંવેદનશીલતામાં વધારો અથવા ઘટાડો રોગવિજ્ .ાનવિષયક ખાવામાં ફાળો આપી શકે છે, પરિણામે દ્વીજ આહાર અને / અથવા સ્થૂળતા.

એકંદરે, અમારા તારણો ઇનામ સિગ્નલ તરીકે ઇન્સ્યુલિન માટેની નવી ભૂમિકા જાહેર કરે છે. આવી ભૂમિકા તૃષ્ટી સંકેત તરીકેના તેના જાણીતા કાર્ય સાથે વિરોધાભાસી છે, જેમાં તાજેતરના તારણોનો સમાવેશ થાય છે કે જેમાં વીટીએમાં ઇન્સ્યુલિન માઇક્રોઇંજેક્ટેડ છે, હેડનિક ખોરાક અને ખોરાકના પુરસ્કાર સાથે સંકળાયેલા સંકેતોની પસંદગીમાં ઘટાડો કરી શકે છે.^{23, 24}. આ એ પ્રશ્ન isesભો કરે છે કે આ ડી.એ.-આધારિત કાર્યોમાં ઇન્સ્યુલિન માટેના ભૂમિકાના વિરોધની ભૂમિકામાં સમાધાન કેવી રીતે થઈ શકે છે. જવાબ એ હોઈ શકે કે આ અસરો વિરોધાભાસી હોવાને બદલે પૂરક છે. હાલનાં પરિણામો સૂચવે છે કે સ્ટ્રાઇટમમાં ઇન્સ્યુલિન એ ઇન્જેસ્ટેડ ભોજનના ઇનામ મૂલ્યનો સંપર્ક કરે છે. તૃપ્તિના સંકેતની બેવડી ભૂમિકા, ઇન્સ્યુલિનને ભોજન સમાપ્ત કરવાના મહત્વપૂર્ણ હેતુની સેવા કરવાની મંજૂરી આપી શકે છે, જ્યારે તે જ સમયે તેની ન્યુટ્રિશનની મેમરી સ્થાપિત કરે છે અને આ રીતે લાભકારક ગુણો, ત્યાં સુધી ઇન્જેસ્ટિવ વર્તનની પુનરાવર્તનને મજબુત બનાવે છે.

એનિમલ હેન્ડલિંગ

પ્રાણી પ્રક્રિયાઓ એનઆઈએચ માર્ગદર્શિકા અનુસાર હતી અને એનવાયયુ સ્કૂલ Medicફ મેડિસિન એનિમલ કેર એન્ડ યુઝ કમિટી દ્વારા મંજૂરી આપવામાં આવી હતી. બધા પ્રાણીઓ 12 એચ લાઇટ પર હતા: ડાર્ક ચક્ર, લાઇટ્સ સાથે 06: 00 થી 18: 00; ભૂતપૂર્વ વિવો ટુકડાઓ 08: 00 અને 12: 00 વચ્ચે તૈયાર કરવામાં આવી હતી. એએલ ઉંદરો અને ઉંદરમાં મિકેનિસ્ટિક અભ્યાસ હાથ ધરવામાં આવ્યો હતો ભૂતપૂર્વ વિવો પ્રાણીઓની ટુકડાઓ જોડીમાં રાખવામાં આવી હતી, જ્યારે ઉંદરો એકલા બધા આહાર જૂથની તુલના માટે અને વર્તણૂકીય અભ્યાસ માટે રાખવામાં આવતા હતા.

ઉંદર આહાર શાસન

8 – 10 દિવસ સુધી ચાલેલા ડાયેટ રેજિન્સની આરંભમાં પુખ્ત પુરૂષ સ્પ્રેગ – ડawવલી ઉંદરો (ટેકોનિક) 21 – 30 અઠવાડિયા જૂનાં હતા. ઉંદરોને અર્ધ-રેન્ડમ રીતે આહાર જૂથોને સોંપવામાં આવ્યા હતા: વિષયોને પ્રારંભિક વજન દ્વારા ક્રમાંકિત કરવામાં આવ્યા હતા, ત્યારબાદ ઉંદરોની દરેક ક્રમિક ત્રણેયને આહાર જૂથોમાં રેન્ડમ વિતરણ કરવામાં આવ્યું હતું. એએલ ઉંદરોને એફઆર અથવા ઓબી આહાર પર જોડી ઉંદરોની સમાન અવધિ માટે ઉંદર ચોની મફત accessક્સેસ હતી. બધા ઉંદરોને પાણીની મફત પહોંચ હતી. પહેલાની જેમ ખાદ્ય પ્રતિબંધ લાગુ કરવામાં આવ્યો હતો⁵¹; ટૂંકમાં, ઉંદરોને 40% 50% પ્રમાણભૂત ઉંદર ચોનો દૈનિક ઇન્ટેક મળ્યો, ત્યાં સુધી શરીરનું વજન 20% દ્વારા ઘટાડવામાં ન આવ્યું, ત્યારબાદ આ વજન જાળવવા માટે ખોરાકને ટાઇટ્રેટ કરાયો હતો. OB ઉંદરોને ઉંદર ચો અને ચોકલેટ નિsસૂસ (મફત ચોક્કો) મળતો હતો, જે ખૂબ જ ચરબીયુક્ત ખાંડ અને ખાંડવાળા ખૂબ જ સ્વાદિષ્ટ પ્રવાહી છે.⁵².

ફોરેબ્રેઇન ચેટ નોકઆઉટ ઉંદર

શરતી ફ્લોક્સ્ડ એલીલ સાથેના ઉંદર ચેટ (ચેટ^{ફ્લોક્સ}) ની સાથે ઓળંગી ગયા હતા Nkx2.1^ક્રે ઉંદરને ઉત્પન્ન કરવા માટે ટ્રાન્સજેનિક લાઇન જેમાં એસીએચ સંશ્લેષણને ઘટાડવું એ ફોરેબ્રેઇન સુધી મર્યાદિત છે³². બિન-મ્યુટન્ટ ટ્રાન્સજેનિક લિટરમેટ્સ નિયંત્રણો હતા; તેમના જીનોટાઇપ્સ ક્રિ⁺;ચેટ^{ફ્લોક્સ / +} અને ક્રે^-;ચેટ^{ફ્લોક્સ / ફ્લોક્સ} જેને 'હેટરોઝાઇગોટ્સ' તરીકે ઓળખવામાં આવે છે. સ્લાઇસ અભ્યાસ માટે વપરાયેલા પુખ્ત પુરુષ ઉંદર હતા જાહેરાત જાહેરાત ચા અને પાણીની પહોંચ.

ભૂતપૂર્વ વિવો સ્લાઇસ તૈયારી અને શારીરિક ઉકેલો

ઉંદરો અથવા ઉંદરો 50 મિલિગ્રામ કિગ્રા સાથે deeplyંડે એનેસ્થેસિયાઇઝ્ડ હતા^-1 પેન્ટોબાર્બીટલ (ઇન્ટ્રાપેરીટોનેઅલ (આઈપી)) અને શિરચ્છેદ. વોલ્ટેમેટ્રી માટે, કોરોનલ ફોરબ્રેઇન કાપી નાંખ્યું (300 – 400-thickm જાડાઈ) ને બરફ-કોલ્ડ HEPES- બફર કૃત્રિમ સીએસએફ (એસીએસએફ) માં (એમએમએલ) સમાવી લેઇકા વીટીએક્સએનયુએમએક્સ વાઇબ્રેટિંગ બ્લેડ માઇક્રોટોમ (લિકો માઇક્રોસિસ્ટમ્સ; બેનકબર્ન, આઈએલ) પર કાપી હતી: એન.સી. (1200); નાહકો₃ (20); ગ્લુકોઝ (10); એચપીઇએસ એસિડ (એક્સએનએમએક્સ); કેસીએલ (6.7); HEPES સોડિયમ મીઠું (5); સી.સી.એલ.₂ (2); અને એમ.જી.એસ.ઓ.₄ (2), 95% O સાથે સંતુલિત₂/ 5% CO₂. પ્રયોગો પહેલાં 1 h માટે ઓરડાના તાપમાને આ ઉકેલમાં કાપી નાંખવામાં આવે છે^{30, 32, 53}. ઇલેક્ટ્રોફિઝિયોલોજી માટે, એનેસ્થેટીયાઇઝેશન પછી, ઉંદરો બરફ-કોલ્ડ સોલ્યુશન (એમએમમાં) સાથે ટ્રાન્સકાર્ડિયલ રીતે પર્જ કરવામાં આવ્યા હતા: સુક્રોઝ (એક્સએનએમએક્સ); કેસીએલ (225); સી.સી.એલ.₂ (0.5); એમજીસીએલ₂ (7); નાહકો₃ (28); નાહ₂PO₄ (1.25); ગ્લુકોઝ (7); એસ્કોર્બેટ (1); અને પિરુવેટ (3), અને 95% O સાથે સંતુલિત₂/ 5% CO₂. આ ઉકેલમાં કાપી નાંખ્યું, પછી સુધારેલા એસીએસએફ (એમએમ માં) ધરાવતા પુન recoveryપ્રાપ્તિ ચેમ્બરમાં સ્થાનાંતરિત: નાસીએલ (એક્સએનએમએક્સ); કેસીએલ (125); નાહ₂PO₄ (1.25); નાહકો₃ (25); એમજીસીએલ₂(1); સી.સી.એલ.₂ (2); ગ્લુકોઝ (25); એસ્કોર્બેટ (1); પિરુવેટ (3); અને માય-inositol (4), 95% O સાથે સંતુલિત₂/ 5% CO₂; આ સોલ્યુશન શરૂઆતમાં 34 ° સે પર હતું, પછી ઓરડાના તાપમાને ધીમે ધીમે ઠંડું થવા દેવામાં આવ્યું⁵⁴. 32 ° C પર સબમર્ઝન રેકોર્ડિંગ ચેમ્બરમાં બધા વોલ્ટેમેટ્રી અને શરીરવિજ્ologyાન પ્રયોગો હાથ ધરવામાં આવ્યા હતા જે 1.5 મિલી મિનિટ પર અનાવશ્યક હતા^-1 (એમએમમાં) ધરાવતા એસીએસએફ સાથે: નાસીએલ (એક્સએનએમએક્સ); કેસીએલ (124); નાહકો₃ (26); સી.સી.એલ.₂ (2.4); એમ.જી.એસ.ઓ.₄ (1.3); કે.એચ.₂PO₄ (1.3); અને ગ્લુકોઝ (10), અને બોવાઇન સીરમ આલ્બુમિન (BSA, 0.05 – 0.1 મિલિગ્રામ મિલી^-1) 95% O સાથે સંતુલિત₂/ 5% CO₂; પ્રયોગો પહેલાં 30 મિનિટ માટે કાપીને આ વાતાવરણમાં સંતુલિત કરવાની મંજૂરી આપવામાં આવી હતી.

ફાસ્ટ-સ્કેન સાયક્લિક વોલ્ટમૅમેટ્રી

મગજની ટુકડાઓમાં એફસીવીનો ઉપયોગ કરીને ઇવોક્ટેડ ડીએ પ્રકાશન અભ્યાસ હાથ ધરવામાં આવ્યો હતો^{32, 53} પુરુષ ઉંદરોમાંથી અથવા ચેટ ફોરબinરિન નોકઆઉટ ઉંદર અને હેટરોઝાઇગોટ નિયંત્રણો (5 – 8 અઠવાડિયા). માં અભ્યાસ કરે છે ચેટ નોકઆઉટ ઉંદરને બ્લાઇન્ડ કરવામાં આવ્યા હતા, પરંતુ ઉંદરના આહાર જૂથોમાં સ્પષ્ટ ફીનોટાઇપ્સ હતી જે આંખ બંધ કરી દેતી હતી. મિલ્લર વોલ્ટેમમીટર (સેન્ટ બર્થોલોમિઝ અને ડ Julક્ટર રોયલ લંડન સ્કૂલ Medicફ મેડિસિન અને ડેન્ટિસ્ટ્રી, લંડન યુનિવર્સિટી) માં ડ Jul જુલિયન મિલરની વિશેષ વિનંતી દ્વારા ઉપલબ્ધ) વ Volલ્ટમેટ્રિક માપન. Convention0.7 થી + 1.3 V (વિરુદ્ધ Ag / AgCl) ની સ્કેન રેંજ સાથે, 800 V s ના સ્કેન રેટ સાથે, FCV માટે એક પરંપરાગત ત્રિકોણ તરંગ રૂપનો ઉપયોગ કરવામાં આવતો હતો.^-1, અને એક્સએન્યુએમએક્સ એમએસનું નમૂનાકરણ અંતરાલ^{30, 32, 53}. ક્લેમ્પેક્સ 1200 સ softwareફ્ટવેર (મોલેક્યુલર ડિવાઇસીસ) દ્વારા નિયંત્રિત ડિજિડેટા 7.0B એ / ડી બોર્ડનો ઉપયોગ કરીને ડેટા પ્રાપ્ત કરવામાં આવ્યો હતો. ડી.એ. પ્રકાશન એક કેન્દ્રીક ઉત્તેજક ઇલેક્ટ્રોડનો ઉપયોગ કરીને ઉશ્કેરવામાં આવ્યો હતો; ઉત્તેજના પલ્સ કંપનવિસ્તાર 0.4 – 0.6 mA હતું અને સમયગાળો 100 μs હતો^{30, 32, 53}. સ્થાનિક સિંગલ-પલ્સ સ્ટીમ્યુલેશનનો ઉપયોગ એનએસી કોર અને સીપીયુમાં થતો હતો; જો કે, સંક્ષિપ્ત ઉચ્ચ-આવર્તન પલ્સ ટ્રેન (એક્સએનએમએક્સએક્સ હર્ટ્ઝ પર પાંચ કઠોળ) નો ઉપયોગ વિસ્તૃત કરવા માટે કરવામાં આવ્યો [ડી.એ.]_o એનએસી શેલમાં. બંને ઉત્તેજનાના દાખલા ડીએ પ્રકાશનને ઉત્તેજિત કરે છે જે ક્રિયા સંભવિત છે અને સીએ²⁺ આશ્રિત, એકસાથે પ્રકાશિત ગ્લુટામેટ અને જીએબીએ દ્વારા અસરગ્રસ્ત^{42, 55}, અને સાથે સાથે પ્રકાશિત એસીએચ દ્વારા સુવિધા આપવામાં આવી છે^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. ઉત્તેજીત કરવા માટે [ડી.એ.]_o, એસીએસએફના દરેક પ્રયોગ પછી અને આપેલ પ્રયોગ દરમિયાન વપરાયેલી દરેક દવાઓની હાજરીમાં, ઇલેકટ્રોડ્સને 32 ° C પર ડી.એ. ની જાણીતી સાંદ્રતા સાથે માપાંકિત કરવામાં આવ્યા હતા.⁵³.

ઉત્તેજિત [ડી.એ.] પર ઇન્સ્યુલિનની અસરની આકારણી કરવા માટે વોલ્ટમેટ્રી પ્રયોગો._o બેમાંથી કોઈપણ પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરીને મેળવવામાં આવ્યા હતા. ઇન્સ્યુલિન (સિગ્મા, આઈએક્સએનએમએક્સ) ની અસર માટેનો સમય અભ્યાસક્રમ નક્કી કરવાના પ્રારંભિક પ્રયોગો નિરીક્ષણ દ્વારા કરવામાં આવ્યા હતા [ડી.એ.]_o એક જ સાઇટમાં દરેક 5 મિનિટ. ઇન્સ્યુલિન લાગુ કરવામાં આવ્યા પછી સતત ઉદભવ્યા [ડી.એ.]_o પ્રાપ્ત થયું (સામાન્ય રીતે 4 – 5 માપન); ઇન્સ્યુલિનની અસર 50 – 60 મિનિટ પછી મહત્તમ હતી, અને પછી ઉત્તેજિત [DA]_o પ્રયોગની અવધિ માટે આ સ્તરે રહ્યો (સામાન્ય રીતે 90 મિનિટ કુલ ઇન્સ્યુલિનના સંપર્કમાં; ફિગ. 1C). ત્યારબાદ, ઇન્સ્યુલિનની અસરનું મૂલ્યાંકન [ડી.એ.] દ્વારા કરવામાં આવ્યું._o કન્ટ્રોલ શરતો (એસીએસએફ અથવા એસીએસએફ પ્લસ ડ્રગ) હેઠળના દરેક ત્રણ સ્ટ્રિએટલ પેટા ક્ષેત્રોમાં અને ફરીથી મહત્તમ ઇન્સ્યુલિન અસરના સમયે (4 – 5 મિનિટ પર નમૂના લેતા), ટુકડાઓમાં 1.5 – 60 ડિસ્ક્રિટ સાઇટ્સ પર (બ્રેગ્માથી + 80 મીમી) અને ફરીથી આ નમૂનાઓ દરેક પેટા વિભાગ માટે સરેરાશ હતા. કટકાની તૈયારી પછીના સમય સાથે ઇન્સ્યુલિનની અસર ઓછી થઈ; સમય ઘટાડવા માટે ભૂતપૂર્વ વિવો અને પ્રાણીના ઉપયોગને izeપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે, સામાન્ય રીતે આપેલ પ્રાણીમાંથી બે ટુકડાઓ એક જ સમયે રેકોર્ડિંગ ચેમ્બરમાં પરીક્ષણ કરવામાં આવતા હતા. ઇન્સ્યુલિનની અસરને પડકારવા માટે ઉપયોગમાં લેવામાં આવતી દવાઓ, એફ.એન.એમ.પી.એ. ટ્રાઇસેસેટોક્સિમેથિલ એસ્ટર (એચ.એન.એમ.પી.એ.-એ.એમ. સહિત) સુપરફ્યુઝિંગ એ.સી.એસ.એફ દ્વારા ઇન્સ્યુલિન પહેલાં 15 મિનિટ પહેલાં લાગુ કરવામાં આવી હતી._3; એન્ઝો લાઇફ સાયન્સિસ, એસએક્સએનયુએમએક્સ (નોવો નોર્ડીસ્ક), એલવાયએક્સએનયુએમએક્સ (સિગ્મા), પિકરોપોડોફાઇલોટોક્સિન (પીપીપી; ટocક્રિસ), મેકામેલામાઈન (ટrisક્રિસ) અને ડીએચβઈ (ટocક્રિસ). પરિણામોમાં વર્ણવ્યા મુજબ, આહાર જૂથોમાં નિકોટિનિક એસીએચ રીસેપ્ટર્સની સંભવિત બદલાતી સંવેદનશીલતા, પીક [ડી.એ.] ના ગુણોત્તરની તુલના કરીને પરીક્ષણ કરવામાં આવી હતી._o 5 p (100 હર્ટ્ઝ) દ્વારા ઉત્તેજીત તેની સાથે 1 p દ્વારા ઉત્તેજિત (5 p: 1 p રેશિયો)^{30, 31} 0 – 500 nM નિકોટિન (સિગ્મા) ની હાજરીમાં એનએએસી કોરમાં.

ની નિશ્ચય V _{મહત્તમ} માંથી ઉત્તેજિત [DA]_o સ્ટ્રાઇટલ કાપી નાંખ્યું માં ક્ષણ

ડીએટી-મધ્યસ્થી ડી.એ. ઉપક્રમે ઇન્સ્યુલિન-પ્રેરિત ફેરફારોનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, ઉદ્ભવતા [ડીએ] ના ઘટતા તબક્કાના પ્રારંભિક ભાગ_o વળાંક કા Michaelવા માટે માઇકલિસ – મેન્ટેન સમીકરણમાં ફીટ કરવામાં આવ્યા હતા V_{મહત્તમ} (મહત્તમ અપટેક રેટ સતત)⁵⁶. K_m (જે Dંધી રીતે ડી.એ. માટે ડી.એ.ટી. ના લગાવ સાથે સંબંધિત છે) ને 0.2 μM પર ઠીક કરવામાં આવી હતી અને સ્ટ્રાઇટલ પેટા ક્ષેત્રોમાં સમાન હોવાનું માનવામાં આવે છે⁵⁷ અને ઇન્સ્યુલિનથી પ્રભાવિત નથી (જુઓ પૂરક ફિગ. 4 કtionપ્શન).

સંપૂર્ણ સેલ રેકોર્ડિંગ

મગજની ટુકડાઓ 29- થી 35- દિવસ-જુની પુરુષ ઉંદરો સુધી તૈયાર કરવામાં આવી હતી; રેકોર્ડિંગ શરતો ડી.એ. પ્રકાશન અધ્યયનોમાં ઉપયોગમાં લેવાતી સમાન હતી. સંપૂર્ણ સેલ વર્તમાન-ક્લેમ્પ રેકોર્ડિંગ્સ પરંપરાગત પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરે છે⁵⁴. સ્ટ્રિએટલ સીઆઈને ઓલિમ્પસ બીએક્સએક્સએનએમએક્સએમએક્સઆઈ માઇક્રોસ્કોપ (ઓલિમ્પસ અમેરિકા, સેન્ટર વેલી, પીએ) નો ઉપયોગ કરીને ઇન્ફ્રારેડ ડિફરન્સલ-હસ્તક્ષેપ વિપરીત optપ્ટિક્સ અને × 51 જળ-નિમજ્જન ઉદ્દેશથી બનાવવામાં આવ્યું હતું. પિપેટ સોલ્યુશન સમાયેલ છે (એમએમમાં): કે-ગ્લુકોનેટ (એક્સએનએમએક્સ); કેસીએલ (40); HEPES (129); એમજીસીએલ₂ (2); ઇજીટીએ (એક્સએનએમએક્સ); ના₂-એટીપી (2); ના₃-જીટીપી (એક્સએનએમએક્સ); અને પીએચ 0.3 – 7.2 સાથે KOH ગોઠવ્યો. ચેટ ઇમ્યુનોરેક્ટીવીટી માટે મૂલ્યાંકન કરવા માટે રેકોર્ડ કરેલા ચેતાકોષો માટે, એક્સએન્યુએમએક્સ% બાયોસાયટીનને પિપેટ સોલ્યુશનમાં શામેલ કરવામાં આવ્યું હતું અને ન્યુરોન્સ સંક્ષિપ્તમાં રેકોર્ડ કરવામાં આવ્યા હતા (~ 7.3 મિનિટ) ઇન્ટ્રા સેલ્યુલર સમાવિષ્ટોના ઘટાડાને ઘટાડવા માટે. પીપેટ રેઝિસ્ટન્સ ~ 0.3 – 5 MΩ હતું. Ingsક્સોપેચ 3B એમ્પ્લીફાયર (મોલેક્યુલર ડિવાઇસીસ, સન્નીવાલે સીએ) નો ઉપયોગ કરીને રેકોર્ડિંગ્સ મેળવવામાં આવી હતી અને 5 કેએચઝેડમાં લો-પાસ ફિલ્ટર કરેલ. સીઆઈઆઈની સ્થાપના ઇલેક્ટ્રોફિઝિયોલોજિકલ માપદંડ દ્વારા કરવામાં આવી હતી²⁸; મોટાભાગના ટોનિકલી શરૂઆતમાં સક્રિય હતા, પરંતુ પેચિંગ પછી પ્રવૃત્તિ ચલ ઓછી થઈ. જો કે, વર્તમાન ઇન્જેક્શન પ્રત્યેની પ્રતિક્રિયા સામાન્ય રીતે સખત અને સમય જતાં સુસંગત હતી, અને તેથી ChI ઉત્તેજના પરના ઇન્સ્યુલિનની અસરની તપાસ કરવા માટે વપરાય છે (પરિણામો જુઓ). આ પ્રતિભાવમાં ઇન્સઆર અને આઈજીએફ-એક્સએનએમએક્સએક્સની ભૂમિકાની તપાસ કરવાના પ્રયોગોમાં, એચએનએમપીએ અથવા પીપીપી દ્વારા એક સીઆઈએ (PI) પેચ થાય તે પહેલાં ઓછામાં ઓછા 1 મિનિટ માટે અરજી કરવામાં આવી હતી. ઇન્સ્યુલિનની મહત્તમ અસરો એકલા એક્સપોઝરના ~ 20 મિનિટ પછી જોવા મળી હતી, જોકે કેટલાક કોષોમાં, 16 મિનિટ અથવા તેથી વધુ સમય સુધી વધારો મહત્તમ ન હતો. તદુપરાંત, પીપીપીમાં નોંધાયેલા છમાંથી ચાર ન્યુરોન્સમાં, ઇન્સ્યુલિનને કારણે સ્પાઇક સંખ્યામાં પુન beforeપ્રાપ્ત થતાં પહેલાં અને પ્રારંભિક સ્પાઇક નંબર કરતાં વધુ થતાં પ્રારંભિક ઘટાડો થયો હતો. પરિણામે, બધા પ્રયોગોમાં, ઇન્સ્યુલિનની અરજી પહેલાં તુરંત જ સ્પાઇક્સની સંખ્યા સાથે ઉત્પન્ન થયેલ સ્પાઇકની સંખ્યા સાથેની મહત્તમ અસરની તુલના કરીને ઇન્સ્યુલિનની અસરનું પ્રમાણ નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું. પીક ઇફેક્ટ સુધી પહોંચવાના સમયનો સ્પષ્ટ તફાવત, સ્લાઈસમાં રેકોર્ડ સેલની includingંડાઈ સહિતના ઘણા પરિબળોને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે. તુલનાત્મક સમયના તબક્કે ઇન્સ્યુલિનની ગેરહાજરીમાં સીઆઈઆઈમાં ભૂગર્ભિત ક્રિયાત્મક સંભાવનાઓ પણ નોંધવામાં આવી હતી.

ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફી

ઉંદર સ્ટ્રિએટલ કાપી નાંખવાની ડીએ કન્ટેન્ટ (400-μm જાડાઈ) એ ઇલેક્ટ્રોકેમિકલ તપાસ સાથે ઉચ્ચ-પ્રભાવવાળા પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ કરીને નક્કી કરવામાં આવ્યું⁵⁸. ટુકડાઓ જોડીને એસીએસએફમાં 30 at C પર 32 મિનિટ માટે સંતુલિત કરવામાં આવ્યા હતા, અને પછી જોડી દીઠ એક ટુકડો એસીએસએફમાં 60 at C પર વધારાની 32 મિનિટ માટે સેવામાં આવી હતી જ્યારે બીજો 10 અથવા 30 nM ઇન્સ્યુલિન સાથે એસીએસએફમાં ઉતારવામાં આવ્યો હતો. આહાર જૂથની તુલના માટે, સ્ટ્રિએટલ પેશીઓ 30 – 60 મિનિટ પછીની પુન recoveryપ્રાપ્તિ વચ્ચે એકત્રિત કરવામાં આવી હતી. સેવન પછી, વધારે એસીએસએફને કાપી નાંખ્યુંમાંથી કાળજીપૂર્વક દૂર કરવામાં આવ્યો, સ્ટ્રિએટલ પેશીઓ (7 – 10 મિલિગ્રામ) નો નમૂના લેવામાં આવ્યો, તેને શુષ્ક બરફ પર સ્થિર કરવામાં આવ્યો અને પછી સ્ટોરેજ કરી then80. સે. વિશ્લેષણના દિવસે, નમૂનાઓ બરફ-ઠંડા, ચાહક, આર્ગોન સાથે ડિઓક્સિનેટેડમાં સોનાકેટ હતા⁵⁸, એક્સએનયુએમએક્સ મિનિટ માટે માઇક્રોસેન્ટ્રિફ્યુઝમાં કાપવામાં આવે છે, અને સુપરમેનટને સીધા એચપીએલસી કોલમ પર ઇન્જેક્શન આપ્યું છે (બીએએસ, વેસ્ટ લફેટે, આઈએન); ડિટેક્ટર એ 2 વી વિ એજી / એજીસીએલ પર સેટ કરેલું ગ્લાસ કાર્બન ઇલેક્ટ્રોડ હતું.

ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી

ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિકલ લેબલિંગ માટે, ઉંદરોને સોડિયમ પેન્ટોબાર્બીટલ (50 મિલિગ્રામ કિગ્રા) દ્વારા એનેસ્થેસીટીઝ કરાયો હતો^-1, આઈપી), પછી પીબીએસ (154 એમએમ ફોસ્ફેટ બફરમાં 10 એમએમ NaCl, પીએચ 7.2) સાથે ટ્રાન્સકાર્ડિઆલિલી આ પીબીએસમાં 4% પેરાફોર્મldલ્ડિહાઇડ પછી; મગજ કા wereી નાખવામાં આવ્યા હતા અને કોરોનલ વિભાગો (20 )m) પરંપરાગત રીતે કાપીને પ્રક્રિયા કરવામાં આવ્યા હતા^{27, 59}. ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ છબીઓ એ સ્પોટ સ softwareફ્ટવેર (ડાયગ્નોસ્ટિક ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટ્સ ઇંક.) દ્વારા નિયંત્રિત ડિજિટલ કેમેરાથી સજ્જ નિકોન પીએમ એક્સએનએમએક્સ કocન્કોકલ માઇક્રોસ્કોપથી અને × 800 ઉદ્દેશ્ય (આંકડાકીય છિદ્ર = 100) નો ઉપયોગ કરીને અથવા ઝીસ એલએસએમ એક્સએનએમએક્સ કન્ફોકલ માઇક્રોસ્કોમ ope ઉદ્દેશ્ય (આંકડાકીય છિદ્ર = 1.4). લેસરો આર્ગન (510 એનએમ), તે / ને (63 એનએમ) અને તે / ને (1.2 એનએમ) હતા. દરેક લેસર માટે યોગ્ય ફિલ્ટર્સની પસંદગી કocન્કોકલ માઇક્રોસ્કોપ સ softwareફ્ટવેર દ્વારા કરવામાં આવી હતી. ઉપયોગમાં લેવાતા ઉદ્દેશ્ય અને વિભાગની જાડાઈમાં પિનહોલનું કદ ભિન્ન છે zસ્ટackક પે generationી; અમે સ softwareફ્ટવેર દ્વારા સૂચવેલ શ્રેષ્ઠ પિનહોલ મૂલ્ય પસંદ કર્યું છે (સામાન્ય રીતે 30 μm). એડોબ ફોટોશોપ 7.0 નો ઉપયોગ કરીને પ્રક્રિયા કરવામાં આવતી અંતિમ છબીઓ સાથે ડિજિટલ ફાઇલોનું ડિકોન્વ્યુલેશન સ softwareફ્ટવેર (Quટોક્વન્ટ ઇમેજિંગ) સાથે વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું. બધી છબીઓ તેજ અને વિરોધાભાસ માટે સમાયોજિત કરવામાં આવી હતી; આવા ગોઠવણો છબીના તમામ ભાગોમાં સમાનરૂપે કરવામાં આવી હતી. સ્ટ્રિએટલ ડીએ એક્ષોન્સને બે ટીએચ એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરીને ઓળખવામાં આવી હતી: પોલીક્લોનલ એબીએક્સએન્યુએમએક્સ સસલું એન્ટી-ટીએચ (એક્સએનએમએક્સ: એક્સએનએમએક્સ) અને મોનોક્લોનલ એમએબીએક્સએનએમએક્સ માઉસ એન્ટી-ટીએચ (એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએનએમએક્સ) (બંને ચેમિકોનથી). ત્રણ ઇન્સઆર એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો: sc-152 અને sc-1 (800: 318; સાન્ટા ક્રુઝ), અને PP1 (ફાઇઝરની ભેટ). દરેકની વિશિષ્ટતા અગાઉ દર્શાવવામાં આવી છે^{60, 61}, અને તેની સાથે સંબંધિત અવરોધિત પેપ્ટાઇડની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝ એસસી-એક્સએનએમએક્સ અથવા પીપીએક્સએન્યુએમએક્સ સાથે ઇમ્યુનોલેબેલિંગની ગેરહાજરી દ્વારા વર્તમાન અધ્યયનમાં પુષ્ટિ મળી હતી. ચેટ એન્ટિબોડી એબીએક્સએન્યુએમએક્સ (એક્સએનએમએક્સ: એક્સએનએમએક્સ; મિલિપોર) હતી, અને બાયોટિન વેક્ટર (57342: 5) નું હતું. ઉપયોગમાં લેવાતા ગૌણ એન્ટિબોડીઝમાં ગધેડો વિરોધી સસલું એલેક્ઝા એક્સએનએમએક્સ (ઇન્વિટ્રોજન), અથવા ગધેડો વિરોધી સસલું સાયક્સએનયુએમએક્સ (જેક્સન લેબોરેટરી, બાર હાર્બર, એમઇ), ગધેડો વિરોધી બકરી સાયક્સએનયુએમએક્સ (જેક્સન) અને ગધેડો એન્ટી-માઉસ સાયક્સએનયુએમએક્સ (જેક્સન) હતા.

ટી.એચ. + ચેતાક્ષમાં ઇન્સઆરના સહ-સ્થાનિકીકરણનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, અમે કિર્ક્સએન્યુએમએક્સની હાજરીને ઓળખવા માટે અગાઉ વર્ણવેલ પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કર્યો, એટીપી સંવેદનશીલ કેના છિદ્ર-નિર્માતા સબનિટ⁺ DA ચેતાક્ષમાં ચેનલો²⁷. ઇન્સઆરનું પ્રતિનિધિત્વ કરતી પુંક્તાને સમાયોજિત છબીઓ દરમિયાન વિતરણ કરવામાં આવી હતી, જે સૂચવે છે કે ટી.એચ. આ ધારણાને ચકાસવા માટે, અમે બે ઉંદરોમાંથી ત્રણ એનએસી ઇમ્યુનોલેબેલ્ડ વિભાગોમાં 42 સ્વતંત્ર ક્ષેત્રોમાં INR / TH સુપરલિપોઝિશન ગણાવી. પછી ઇન્સઆર ડિજિટલ ફાઇલોને 90 ° ઘડિયાળની દિશામાં ફેરવવામાં આવી અને ગણતરીઓ પુનરાવર્તિત; પરિભ્રમણથી મોટાભાગના ક્ષેત્રોમાં ટીએચ સાથે સહ-સ્થાનિકીકૃત ઇન્સઆર પંક્ટાની સંખ્યામાં ઘટાડો થયો (પરિણામો જુઓ). પરિભ્રમણ સાથે સુપરિમ્પોઝિશનની સંખ્યામાં ઘટાડો²⁷ ડીએ onsક્સન સાથે સંકળાયેલા દરેક સ્ટ્રિએટલ ક્ષેત્રમાં ઇન્સઆર પંકટાના પ્રમાણને સૂચવ્યા.

બ્લડ ગ્લુકોઝ અને ઇન્સ્યુલિન એલિસા

સ્લાઈસ અભ્યાસ માટે શિરચ્છેદ સમયે ટ્રંક લોહી એકત્રિત કરવામાં આવતું હતું. લોહીમાં ગ્લુકોઝ પ્રમાણભૂત રક્ત ગ્લુકોઝ મોનિટર દ્વારા તરત જ નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું. ઇન્સ્યુલિન માટે, EDTA ધરાવતી નળીઓમાં વધારાનું લોહી એકત્રિત કરવામાં આવ્યું હતું અને 1,500 પર સેન્ટ્રીફ્યુગ કર્યું હતુંg 15 મિનિટ માટે; એએલપીકો ર Ratટ ઇન્સ્યુલિન એલિસા કીટ સાથે પ્રક્રિયા ન થાય ત્યાં સુધી સુપરનેટantન્ટ (પ્લાઝ્મા) −80 ° C પર એકત્રિત અને સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યું હતું.

કેન્યુલા પ્લેસમેન્ટ અને હિસ્ટોલોજીકલ ચકાસણી

ચાળીસ એક પુખ્ત પુરૂષ સ્પ્રેગ – ડleyવલી ઉંદરો (ટેકોનિક અને ચાર્લ્સ નદી) શરૂઆતમાં 350 – 425 ગ્રામ વજનવાળા કેટામાઇનથી એનેસ્થેસીયાવાળા હતા (100 મિલિગ્રામ કિગ્રા)^-1, આઈપી) અને ઝાયલાઝિન (10 મિલિગ્રામ કિગ્રા.)^-1, આઇપી) અને સ્ટીરિયોટેક્સલીક રીતે બે ક્રોનિકલી ઇન્ડોલ્ડિંગ ગાઇડ કેન્યુલે (26 ગેજ) સાથે દ્વિપક્ષીય 2.0 મીમી ડોર્સલને એનએએસી મેડિયલ શેલમાં રેડવાની સાઇટ્સ પર મૂકવામાં આવ્યા છે.⁶² (બ્રેગ્માથી 1.6 મીમી અગ્રવર્તી; 2.1 મી.મી. બાજુની બાજુના સgગિટલ સિવીન, ટીપ્સ કોણની સપાટીથી 8 °, મધ્યમ તરફ 5.8 led કોણીય સપાટીથી). ઉંદરોને બનાનાઇન (2.0 મિલિગ્રામ કિગ્રા) આપવામાં આવ્યું હતું^-1, સબક્યુટેનીયસ) એનેસ્થેસિયાથી અને પછી સવાર પછીની રિકવરી પછીના સર્જિકલ પછીના એનાલિજેસિક તરીકે. શસ્ત્રક્રિયા પછીના એક અઠવાડિયા પછી, ઉંદરોને એફઆર પર મૂકવામાં આવ્યા હતા (ઉપર વર્ણવેલ) અને બાકીના અધ્યયન માટે તેમના સર્જિકલ પછીના પુન recoveryપ્રાપ્તિ વજનના 80% પર જાળવવામાં આવ્યા છે. વર્તન પરીક્ષણ પૂર્ણ થયા પછી કેન્યુલા પ્લેસમેન્ટ હિસ્ટોલોજીકલ રીતે નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું. દરેક ઉંદર સીઓ સાથે માર્યા ગયા હતા₂, ડિક્પેટેડ અને મગજ દૂર કરવામાં અને> 10 એચ માટે 48% બફર કરેલ ફોર્મિનિનમાં નિશ્ચિત છે. ફ્રોઝન કોરોનલ વિભાગો (40-μm જાડાઈ) એક રિશેર્ટ-જંગ ક્રિઓસ્ટેટ પર કાપવામાં આવ્યા હતા, જિલેટીન-કોટેડ ગ્લાસ સ્લાઇડ્સ પર લગાવેલા હતા, અને ક્રેસિલ વાયોલેટથી રંગાયેલા હતા. આપેલા ઉંદરોમાંથી ડેટા ફક્ત ત્યારે જ ઉપયોગમાં લેવામાં આવતો જ્યારે બંને કેન્યુલા મધ્યસ્થ એનએસી શેલની અંદર હોય⁶² (શેલ / કોર અથવા શેલ / ઓલ્ફેરી ટ્યુબરકલ બોર્ડર સહિત) (પૂરક ફિગ. 5); આ માપદંડના આધારે, બે ઉંદરોને અંતિમ વિશ્લેષણમાંથી બાકાત રાખવામાં આવ્યા હતા.

સ્વાદ-પસંદગીની કન્ડિશનિંગ પ્રી-એક્સપોઝર

ઉંદરોએ સત્રો વચ્ચેના 30-h અંતરાલ સાથે પાણીમાં 0.2% સોડિયમ સcચેરિન (સિગ્મા) થી પ્રી એક્સપોઝર (પરીક્ષણ ચેમ્બર્સમાં) માં એક રાતભર (ઘરના પાંજરામાં) અને છ એક્સએનયુએમએક્સ-મિનિટ-દીઠ સત્રો પ્રાપ્ત કર્યા. ત્યારબાદ ઉંદરોને 48% સોડિયમ સેચેરિનના 5% અનવેઇન્ટેડ દ્રાક્ષ અથવા ચેરી કૂલ-એઇડ (ક્રાફ્ટ ફુડ્સ) માં પાણીમાં એક્સએનએમએક્સ% સોડિયમ સેક્રેઇનના સંપર્કમાં આવવા માટેના બે 0.2- મિનિટ દીઠ સત્રો મળ્યા. પહેલા કૂલ-એઇડના પ્રી-એક્સપોઝર સત્ર માટે, અડધા ઉંદરોએ ચેરી-ફ્લેવર્ડ સોલ્યુશન મેળવ્યું હતું, અને બીજા અડધાએ દ્રાક્ષ-સ્વાદવાળા સોલ્યુશન મેળવ્યું હતું. બીજા કૂલ-એઇડ પ્રી-એક્સપોઝર સત્રમાં સ્વાદ બધા ઉંદરોએ દરેક સ્વાદને નમૂના આપ્યા તેની ખાતરી કરવા માટે ઉલટાવી દીધા હતા. ઇન્ટેક બધાં પૂર્વ-સંપર્કમાં સત્રો માટે માપવામાં આવ્યું હતું. પરીક્ષણ ચેમ્બરમાં તાજી પથારીવાળા સ્પષ્ટ પ્લાસ્ટિકનાં પાંજરા હતા. બધા એક્સ-એક્સપોઝર સત્રો માટે, ઉંદરોની પાસે ચેમ્બરની બંને બાજુએ સમાન ઉકેલમાં પ્રવેશ હતો. રાતોરાત પૂર્વ-એક્સપોઝર સત્ર સિવાય, બધા સત્રો વર્તણૂકીય પ્રક્રિયા રૂમમાં, કોઈપણ તાલીમ અથવા પરીક્ષણ પહેલાં 0.05-min વસ્તીના સમયગાળા સાથે લેવામાં આવ્યા હતા.

એક બોટલ કન્ડિશનિંગ

અગાઉના અધ્યયનોએ બતાવ્યું છે કે વેન્ટ્રોમોડિયલ હાયપોથાલેમસમાં ઇન્સએબીનું માઇક્રોઇનેજેક્શન ખોરાકની વર્તણૂક અને ગ્લુકોગન સ્ત્રાવ પર ઇન્સ્યુલિનની અસરને અવરોધિત કરી શકે છે.^{63, 64}. અહીં અમે આ અભિગમનો ઉપયોગ ખોરાકની પસંદગીના મજબૂતીકરણમાં ઇન્સ્યુલિનની શક્ય ભૂમિકાની આકારણી માટે કર્યો. નિયંત્રણ અથવા પ્રાયોગિક (ઇન્સએબી) બે જૂથોમાં સરેરાશ પૂર્વ-એક્સપોઝર ઇન્ટેક વોલ્યુમના આધારે ઉંદરોને અર્ધ-રેન્ડમ સોંપવામાં આવ્યા હતા. નિયંત્રણ જૂથમાં, ઉંદરોએ વાહન પ્રાપ્ત કર્યું (માઇક્રોઇન્જેક્શન પીબીએસ; 137 એમએમ NaCl અને 2.7 એમએમ કેસીએલ 10 એમએમ ફોસ્ફેટ બફર) અથવા આઇજીજી (અબકામ એબીએક્સએનએમએક્સ; 81032 μg μl)^-1 પી.બી.એસ. માં, જેમ કે પ્રાપ્ત થાય છે), બે સ્વાદિષ્ટ ઉકેલોમાંથી એક લેવા પહેલાં એનએએસી શેલમાં માઇક્રોઇન્જેક્શન, અને અન્ય સ્વાદવાળા સોલ્યુશનનો વપરાશ કરતા પહેલા મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન. પ્રાયોગિક જૂથમાં, ઉંદરોને ઇન્સએબીનું એનએસી શેલ માઇક્રોઇન્જેક્શન પ્રાપ્ત થયું (અબકામ એબીએક્સએનએમએક્સ; 46707 μg μl નો 0.5 μl^-1 પીબીએસમાં, જેમ કે પ્રાપ્ત થાય છે) એક સ્વાદવાળા સોલ્યુશનના સંપર્ક પહેલાં, અને બીજા પર મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન પહેલાંના સંપર્કમાં. પ્રવાહી માઇક્રોઇન્જેક્શન અને મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન વચ્ચેના વૈકલ્પિક વિષયોના બે સેટ્સનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો, જેથી માઇક્રોઇન્જેક્શનની કુલ સંખ્યા ચાર સુધી મર્યાદિત હતી, જેનાથી માઇક્રોઇન્જેક્શન સાઇટ પર સંભવિત પેશીઓના નુકસાન અને સંવેદનશીલતાના નુકસાનને ઘટાડવામાં આવશે.⁶⁵. પ્રવાહી માઇક્રોઇન્જેક્શન માટે, કંટ્રોલ સોલ્યુશન અથવા ઇન્સએબી એક 30 cml હેમિલ્ટન સિરીંજથી નિસ્યંદિત પાણીથી ભરેલા અને બીજા છેડે 50- ગેજ ઇન્જેક્ટર કેન્યુલેમાં જોડાયેલ પીએ-એક્સએનએમએક્સ ટ્યુબિંગની બે 5-સે.મી. લંબાઈમાં લોડ કરવામાં આવી હતી, જે 31 મીમી વિસ્તૃત રોપાયેલા માર્ગદર્શિકાઓથી આગળ. 2.0 infl પ્રેરણા વોલ્યુમો 0.5 overl s ના દરે 90 s ઉપર વિતરિત કરવામાં આવ્યા^-1; પ્રસરણ માટે સમય આપવા માટે પિચકારીને ~ 60 s ની જગ્યાએ બાકી હતી, પછી પિચકારીને સ્ટાઇલ સાથે બદલવામાં આવ્યો.

માઇક્રોઇન્જેક્શન અથવા મોક માઇક્રોઇન્જેક્શન પૂર્ણ થયાના 2 મિનિટની અંદર વર્તન ચેમ્બરમાં ઉંદરો સીધા સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવ્યા હતા. કન્ડિશનિંગ સોલ્યુશન્સમાં 0.2% સોડિયમ સેચેરિન, 0.05% અનવેઇન્ટેડ દ્રાક્ષ અથવા ચેરી કૂલ-એઇડ અને 0.8% ગ્લુકોઝ શામેલ છે. સોલ્યુશન એક્સેસ સત્ર દીઠ 30 મિનિટ સુધી મર્યાદિત હતું. જોડાયેલ સ્વાદ અને પીવાના પ્રવેશની સાથે ચેમ્બરની બાજુ અર્ધ-રેન્ડમલી સોંપવામાં આવી હતી અને દરેક જૂથમાં કાઉન્ટરબેલેન્સ હતી. માઇક્રોઇન્જેક્શન વચ્ચેનું અંતરાલ ઓછામાં ઓછું 72 એચ હતું, કુલ આઠ કન્ડીશનીંગ સત્રો માટે પ્રેરણા અને મોક સત્રો વચ્ચે વૈકલ્પિક.

બે બોટલ પસંદગી પરીક્ષણ

છેલ્લા કન્ડીશનીંગ સત્રના અyીસ કલાક પછી, ઉંદરોને પરીક્ષણ ચેમ્બરમાં બંને કન્ડીશનીંગ સ્વાદમાં એક સાથે પ્રવેશ સાથે મૂકવામાં આવ્યા હતા; ગ્લુકોઝ વિના, 0.2% દ્રાક્ષ અથવા ચેરી કૂલ-એઇડમાં 0.05% સોડિયમ સcકરિન ઉકેલો હતા. 2 દિવસ (દિવસ દીઠ 60 મિનિટ) ઉપર પરીક્ષણ થયું. મockક-જોડી અથવા પ્રેરણા-જોડી સોલ્યુશનવાળી પીણાની નળીની સ્થિતિ, તેની ખાતરી કરવા માટે કે પાંજરામાં બંને બાજુએ દરેક ઉકેલમાં વપરાશ માટે દરેક ઉંદરની તપાસ કરવામાં આવી હતી. પસંદગી નક્કી કરવા માટે, દરેક સ્વાદવાળા સોલ્યુશનના સેવનનું પ્રમાણ સરેરાશ બે પરીક્ષણ દિવસો સુધી કરવામાં આવ્યું હતું.

[³એચ] ઇન્સએબી અસરકારકતા આકારણી માટે સ્ટ્રિએટલ સિનેપ્ટોઝોમ્સમાં ડી.એ.

સ્ટ્રિએટલ સિનેપ્ટોઝોમ્સ^{21, 66} AL ઉંદરો (પુરુષ, 350 UM 400 g) માંથી તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા, જેમાં એનએએસી (શેલ અને કોર) અને સીપીયુને ડિસેક્ટેટેડ અને અલગથી તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રત્યેક ક્ષેત્રમાંથી પેશી એક મોટર-સંચાલિત ટેફલોન પેસ્ટલ સાથેના ગ્લાસ હોમોજેનાઇઝરમાં આઇસ-કોલ્ડ 15 M સુક્રોઝ સોલ્યુશનના 0.32 વોલ્યુમમાં એકરૂપ થઈ હતી; કોગળા અને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, બરફ-કોલ્ડ 0.32 M સુક્રોઝમાં અંતિમ પેલેટ ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવ્યું^{21, 66}. શરૂ કરતા પહેલા [³એચ] ડી.એ.⁶⁶, અપટેક બફરના 180 μl ના કુલ વોલ્યુમમાં સિનાપ્ટોસોમલ એલિકોટ્સ 15 મિનિટ માટે 30 at C પર શેકરમાં વાહન (પીબીએસ) માં અથવા ઇન્સએબી (અંતિમ મંદન 30: 1) માં ઉતારવામાં આવ્યા હતા. , આઇજીજી (અંતિમ મંદન 500: 1) માં અથવા વાહનમાં. અપટેક બફર સમાયેલ છે (એમએમ માં): નાસીએલ (એક્સએનએમએક્સ); ના₂એચપીઓ₄ (3); નાહ₂PO₄ (15); કેસીએલ (5); એમ.જી.એસ.ઓ.₄ (1.2); ગ્લુકોઝ (10), CaCl₂ (1); નિયાલામાઇડ (0.01); ટ્રોપોલોન (0.1); અને એસ્કોર્બિક એસિડ (0.001), પીએચ 7.4. ની અપટેક [³એચ] ડીએ (20 – 96 μM) ની વિવિધ સાંદ્રતાવાળા 0.003-well પ્લેટોમાં પ્રત્યેક સિનેપ્ટોસોમલ સસ્પેન્શનના 1.0 rapidlyl ઝડપથી વિતરિત કરીને શરૂ કરવામાં આવી હતી.³એચ] ડીએ (એક્સએનએમએક્સએક્સ એનએમ); 5 ° C પર પ્લેટ-શેકરમાં 5 મિનિટ પછી, અપટેક ઠંડા, ઝડપી વેક્યૂમ ગાળણક્રિયા દ્વારા સમાપ્ત કરવામાં આવ્યું⁶⁶. સારી દીઠ ગણતરીઓને પિમોલ્સમાં પરિવર્તિત કરવામાં આવ્યા હતા, પછી મિનિટ દીઠ કુલ પ્રોટીનના સુધારેલા. બધા એસો ત્રિકોણમાં કરવામાં આવ્યા હતા અને ઓછામાં ઓછા ચાર વખત પુનરાવર્તિત થયા હતા; V_{મહત્તમ} અને K_m બાયોસોફ્ટ કેલ રેડલિગ સ softwareફ્ટવેર (કેમ્બ્રિજ, યુકે) ની મદદથી ગણતરી કરવામાં આવી હતી.

આંકડાકીય વિશ્લેષણ

ડેટા અર્થ તરીકે આપવામાં આવે છે m સેમ; જોડી અથવા અનપેયર્ડ વિદ્યાર્થીનો ઉપયોગ કરીને મહત્વનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું t-સ્ટેટ્સ અથવા એનોવા, સિવાય અન્યથા સૂચવેલ. વોલ્ટેમેટ્રી ડેટા માટે, n રેકોર્ડિંગ સાઇટ્સની સંખ્યા છે, જો કે સ્ટ્રિએટલ પેટા ક્ષેત્રમાં સાઇટ-થી-સાઇટ વિવિધતા આંતર-પ્રાણી અથવા આંતર-ભાગની ચલ કરતાં વધુ હોય^{30, 32, 55, 56}; દરેક ડેટા સેટ માટે એનિમલ નંબરની નોંધ લેવામાં આવે છે. ઇસી₅₀ પીક-ઇવોક્ડ [ડી.એ.] પર ઇન્સ્યુલિન અને નિકોટિનની અસર માટે_o પ્રિઝમ 6.0 (ગ્રાફપેડ સ Softwareફ્ટવેર ઇન્ક., લા જોલા, સીએ) ની મદદથી ગણતરી કરવામાં આવી હતી. ઇલેક્ટ્રોફિઝિયોલોજિકલ ડેટા માટે, જોડી બનાવીને આંકડાકીય મહત્વનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું tપ્રિસ્ટ 6.0 માં -tests અથવા વિલ્કોક્સન પરીક્ષણ, અથવા SAS 9.3 (એસએએસ ઇન્સ્ટિટ્યૂટ ઇન્ક., કેરી, એનસી) માં મિશ્ર દ્વિ-માર્ગ એનોવા. સ્વાદ-પસંદગીની કન્ડિશનિંગમાં ઇન્સ્યુલિનની સંડોવણીના મૂલ્યાંકન માટે, બે સંપૂર્ણ અભ્યાસ પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરીને પૂર્ણ કરવામાં આવ્યા હતા જે વપરાયેલ વાહનની સારવારના અપવાદ સાથે સમાન હતા. પ્રથમ અધ્યયનમાં, 10 ઉંદરોને પીબીએસના વાહન રેડવામાં આવ્યા છે અને 9 ને ઇન્સએબીનું પ્રેરણા મળી છે. બીજા અધ્યયનમાં, 10 ઉંદરોને આઇજીજી અને 10 વાહનના રેડવાની પ્રેરણા મળી, જેમાં ઇન્સએબીનું પ્રેરણા મળી. પ્રેરણા-કન્ડીશનીંગ સત્રો દરમિયાન બંને વાહન જૂથો (પીબીએસ અથવા આઈજીજી) વચ્ચે કોઈ ખાસ તફાવત નહોતો.F₁₉ઇન્ફ્યુઝન-કન્ડીશનીંગ સત્રના પુનરાવર્તિત પગલાં સાથે = એક્સએન્યુએમએક્સ, મિશ્રિત બે-માર્ગ એનોવા) અથવા પરીક્ષણ પર (F₁₉= એક્સએન્યુએમએક્સ, સ્વાદ પર વારંવાર પગલા સાથે દ્વિમાર્ગી મિશ્ર એનોવા). પરિણામે, બંને પ્રયોગો વિશ્લેષણ માટે જોડાયા હતા. આ વિશ્લેષણ માટે, 0.012 × 2 મિશ્ર એનોવા (પ્રેરણા-કન્ડીશનીંગના દિવસે વારંવાર પગલા સાથે) નો ઉપયોગ કન્ડિશનિંગ દરમિયાન માઇક્રોઇન્જેક્શન ટ્રીટમેન્ટની અસરો નક્કી કરવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો, ત્યારબાદ સુરક્ષિત t-સ્ટેસ (કન્ડીશનીંગ સેશન્સ માઇક્રોઇન્જેક્શન ટ્રીટમેન્ટ દ્વારા ઇન્ટેક વોલ્યુમમાં ઘટાડો થયો તે નક્કી કરવા માટે એક પૂંછડી). મોક કન્ડિશનિંગ સત્રો માટે સમાન વિશ્લેષણ પૂર્ણ થયું હતું. બે બોટલ ફ્લેવર-પ્રેફરન્સ પરીક્ષણ દરમિયાન કન્ડીશનીંગ ટ્રીટમેન્ટની અસર નક્કી કરવા માટે, મિશ્રિત દ્વિ-માર્ગ એનોવા (સ્વાદ પર વારંવાર પગલાં લેતા) નો ઉપયોગ કરીને ડેટા વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું, ત્યારબાદ સુરક્ષિત t-tests (એક એવી કલ્પનાને પરીક્ષણ કરવા માટે પૂંછડી આપવામાં આવે છે કે જે ઇન્સએબી પસંદગીમાં ઘટાડો કરશે).

આ લેખ કેવી રીતે ટાંકવું: સ્ટૂફર, એમ.એ. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન cholinergic ઇન્ટર્ન્યુરન્સને સક્રિય કરીને સ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન પ્રકાશનમાં વધારો કરે છે અને તે દ્વારા ઇનામ સંકેત આપે છે. નેટ. કોમ્યુન. 6: 8543 doi: 10.1038 / ncomms9543 (2015).

1. શ્યુલિંગકampમ્પ, આરજે, પેગાનો, ટીસી, હંગ, ડી. અને રફા, આરબી ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર્સ અને મગજમાં ઇન્સ્યુલિન ક્રિયા: સમીક્ષા અને ક્લિનિકલ અસરો. ન્યુરોસિ. બાયોબેવ. રેવ. 24, 855–872 (2000).
   • સીએએસ
   • આઈએસઆઈ
   • પબમેડ
   • લેખ
   • સંદર્ભ બતાવો
2. ગેરોઝિસિસ, કે મગજ ઇન્સ્યુલિન, energyર્જા અને ગ્લુકોઝ હોમિયોસ્ટેસિસ; જનીનો, પર્યાવરણ અને મેટાબોલિક પેથોલોજીઓ. યુરો. જે ફાર્માકોલ. 585, 38 – 49 (2008).
3. સીએએસ
4. પબમેડ
5. લેખ
6. સંદર્ભ બતાવો
7. સીએએસ
8. પબમેડ
9. લેખ
10. સંદર્ભ બતાવો
11. સીએએસ
12. પબમેડ
13. લેખ
14. સંદર્ભ બતાવો
15. સીએએસ
16. પબમેડ
17. લેખ
18. સંદર્ભ બતાવો
19. સીએએસ
20. આઈએસઆઈ
21. પબમેડ
22. લેખ
23. સંદર્ભ બતાવો
24. આઈએસઆઈ
25. પબમેડ
26. લેખ
27. સંદર્ભ બતાવો
28. સીએએસ
29. પબમેડ
30. લેખ
31. સંદર્ભ બતાવો
32. સંદર્ભ બતાવો
33. સીએએસ
34. આઈએસઆઈ
35. પબમેડ
36. લેખ
37. સંદર્ભ બતાવો
38. સીએએસ
39. આઈએસઆઈ
40. પબમેડ
41. લેખ
42. સંદર્ભ બતાવો
43. સીએએસ
44. આઈએસઆઈ
45. પબમેડ
46. સંદર્ભ બતાવો
47. આઈએસઆઈ
48. પબમેડ
49. લેખ
50. સંદર્ભ બતાવો
51. સીએએસ
52. આઈએસઆઈ
53. પબમેડ
54. લેખ
55. સંદર્ભ બતાવો
56. સીએએસ
57. આઈએસઆઈ
58. પબમેડ
59. લેખ
60. સંદર્ભ બતાવો
61. સંદર્ભ બતાવો
62. સીએએસ
63. આઈએસઆઈ
64. પબમેડ
65. લેખ
66. સંદર્ભ બતાવો
67. સીએએસ
68. આઈએસઆઈ
69. પબમેડ
70. લેખ
71. સંદર્ભ બતાવો
72. સીએએસ
73. આઈએસઆઈ
74. પબમેડ
75. લેખ
76. સંદર્ભ બતાવો
77. પબમેડ
78. લેખ
79. સંદર્ભ બતાવો
80. સંદર્ભ બતાવો
81. સીએએસ
82. પબમેડ
83. લેખ
84. સંદર્ભ બતાવો
85. આઈએસઆઈ
86. પબમેડ
87. લેખ
88. સંદર્ભ બતાવો
89. સીએએસ
90. આઈએસઆઈ
91. પબમેડ
92. લેખ
93. સંદર્ભ બતાવો
94. સીએએસ
95. આઈએસઆઈ
96. પબમેડ
97. લેખ
98. સંદર્ભ બતાવો
99. સીએએસ
100. પબમેડ
101. લેખ
102. સંદર્ભ બતાવો
103. સંદર્ભ બતાવો
104. સીએએસ
105. આઈએસઆઈ
106. પબમેડ
107. લેખ
108. સંદર્ભ બતાવો
109. સીએએસ
110. આઈએસઆઈ
111. પબમેડ
112. લેખ
113. સંદર્ભ બતાવો
114. સીએએસ
115. આઈએસઆઈ
116. પબમેડ
117. લેખ
118. સંદર્ભ બતાવો
119. સીએએસ
120. આઈએસઆઈ
121. પબમેડ
122. લેખ
123. સંદર્ભ બતાવો
124. પબમેડ
125. લેખ
126. સંદર્ભ બતાવો
127. સીએએસ
128. આઈએસઆઈ
129. પબમેડ
130. લેખ
131. સંદર્ભ બતાવો
132. સીએએસ
133. પબમેડ
134. લેખ
135. સંદર્ભ બતાવો
136. સીએએસ
137. આઈએસઆઈ
138. પબમેડ
139. લેખ
140. સંદર્ભ બતાવો
141. સીએએસ
142. પબમેડ
143. લેખ
144. સંદર્ભ બતાવો
145. આઈએસઆઈ
146. પબમેડ
147. લેખ
148. સંદર્ભ બતાવો
149. સંદર્ભ બતાવો
150. સંદર્ભ બતાવો
151. સીએએસ
152. આઈએસઆઈ
153. પબમેડ
154. લેખ
155. સંદર્ભ બતાવો
156. સીએએસ
157. આઈએસઆઈ
158. પબમેડ
159. લેખ
160. સંદર્ભ બતાવો
161. સીએએસ
162. આઈએસઆઈ
163. પબમેડ
164. લેખ
165. સંદર્ભ બતાવો
166. સીએએસ
167. આઈએસઆઈ
168. પબમેડ
169. લેખ
170. સંદર્ભ બતાવો
171. સીએએસ
172. આઈએસઆઈ
173. પબમેડ
174. સંદર્ભ બતાવો
175. સીએએસ
176. આઈએસઆઈ
177. પબમેડ
178. લેખ
179. સંદર્ભ બતાવો
180. પબમેડ
181. લેખ
182. સંદર્ભ બતાવો
183. સીએએસ
184. આઈએસઆઈ
185. પબમેડ
186. લેખ
187. સંદર્ભ બતાવો
188. સીએએસ
189. આઈએસઆઈ
190. પબમેડ
191. લેખ
192. સંદર્ભ બતાવો
193. સીએએસ
194. આઈએસઆઈ
195. પબમેડ
196. લેખ
197. સંદર્ભ બતાવો
198. સીએએસ
199. આઈએસઆઈ
200. પબમેડ
201. લેખ
202. સંદર્ભ બતાવો
203. સંદર્ભ બતાવો
204. સીએએસ
205. આઈએસઆઈ
206. પબમેડ
207. સંદર્ભ બતાવો
208. સંદર્ભ બતાવો
209. સંદર્ભ બતાવો
210. સંદર્ભ બતાવો
211. સીએએસ
212. આઈએસઆઈ
213. પબમેડ
214. લેખ
215. સંદર્ભ બતાવો
216. સીએએસ
217. પબમેડ
218. લેખ
219. સંદર્ભ બતાવો
220. સીએએસ
221. આઈએસઆઈ
222. પબમેડ
223. સંદર્ભ બતાવો
224. સંદર્ભ બતાવો
225. સીએએસ
226. પબમેડ
227. લેખ
228. સંદર્ભ બતાવો
229. આઈએસઆઈ
230. પબમેડ
231. લેખ
232. સંદર્ભ બતાવો
233. સંદર્ભ બતાવો
234. આઈએસઆઈ
235. પબમેડ
236. લેખ
237. સંદર્ભ બતાવો
238. સંદર્ભ બતાવો
239. સીએએસ
240. આઈએસઆઈ
241. પબમેડ
242. લેખ
243. સંદર્ભ બતાવો
244. સંદર્ભ બતાવો
245. વોગ, એમસી અને બ્રુનિંગ, જેસી સી.એન.એસ. ઇન્સ્યુલિન, ગર્ભથી લઈને વૃદ્ધાવસ્થા સુધી energyર્જા હોમિયોસ્ટેસિસ અને ગ્લુકોઝ ચયાપચયના નિયંત્રણમાં સંકેત આપે છે. વલણો એન્ડોક્રિનોલ. મેટાબ. 24, 76-84 (2013).
246. હાવરંકોવા, જે., સ્મેચેલ, ડી., રોથ, જે. અને બ્રાઉનસ્ટેઇન, એમ. ઉંદરના મગજમાં ઇન્સ્યુલિનની ઓળખ. પ્રોક. નેટલ એકડ. વિજ્ .ાન. યુએસએ 75, 5737–5741 (1978).
247. કિંગ, જી.એલ. અને જોહ્ન્સન, એસ. રિસેપ્ટર-મધ્યસ્થી પરિવહન એંડોથેલિયલ સેલ્સમાં ઇન્સ્યુલિનનું વહન. વિજ્ 227ાન 1583, 1586–1985 (XNUMX).
248. સ્ટ્રુબે, જેએચ, પોર્ટે, ડી. જુનિયર અને વુડ્સ, એસસી ઇન્સ્યુલિન પ્રતિભાવો અને ઉંદરોમાં ઉપવાસ અને દૂધ પીવા દરમિયાન પ્લાઝ્મા અને સેરેબ્રોસ્પીનલ પ્રવાહીમાં ગ્લુકોઝનું સ્તર ફિઝિયોલ. બિહેવ. 44, 205–208 (1988).
249. બેંકો, ડબ્લ્યુએ અને કેસ્ટિન, એજે બે રક્તવાહિની પેપટાઇડ્સમાં લોહી-મગજની અવરોધની વિભેદક અભેદ્યતા: ઇન્સ્યુલિન અને એમિલિન. પેપ્ટાઇડ્સ 19, 883–889 (1998).
250. બેંકો, ડબ્લ્યુએ સેરેબ્રલ ઇન્સ્યુલિનનો સ્રોત. યુરો. જે ફાર્માકોલ. 490, 5 – 12 (2004).
251. નેમોટો, ટી. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન સંશ્લેષણ અને ઉંદરો હિપ્પોકampમ્પસ અને સેરેબ્રલ કોર્ટેક્સમાં તેના સ્ત્રાવને લગતી નવી આંતરદૃષ્ટિ: ગ્લાયકોજેન સિન્થેસ કિનેઝ-એક્સએનએમએક્સએક્સ દ્વારા પ્રોમિન્સુલિનના સ્તરમાં એમીલોઇડ-એક્સએનએક્સએક્સએક્સએનએમએક્સ-પ્રેરિત ઘટાડો. સેલ સિગ્નલ. 1, 42 – 3 (26).
252. ડી સૂઝા, સીટી એટ અલ. ચરબીયુક્ત આહારનો વપરાશ પ્રોનિફ્લેમેટરી પ્રતિક્રિયાને સક્રિય કરે છે અને હાયપોથાલેમસમાં ઇન્સ્યુલિન પ્રતિકાર પ્રેરિત કરે છે. એન્ડોક્રિનોલોજી 146, 4192 – 4199 (2005).
253. એન્થોની, કે. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન પ્રતિકારમાં ભૂખ અને ઈનામને નિયંત્રણમાં રાખતા મગજ નેટવર્ક્સમાં ઇન્સ્યુલિન-ઉત્તેજિત જવાબોનું ધ્યાન: મેટાબોલિક સિન્ડ્રોમમાં ખોરાકના વપરાશના અશક્ત નિયંત્રણ માટે મગજનો આધાર? ડાયાબિટીઝ 55, 2986 – 2992 (2006).
254. કેલી, એઇ અને બેરીજ, કેસી કુદરતી ઇનામનું ન્યુરોસાયન્સ: વ્યસનકારક દવાઓ માટે સુસંગતતા. જે ન્યુરોસિ. 22, 3306–3311 (2002).
255. કુબ, જીએફ અને વોલ્કો, વ્યસનની એનડી ન્યુરોસિર્કીટ્રી. ન્યુરોસિકોફર્માકોલોજી 35, 217–238 (2010).
256. વર્થર, જી.એ. એટ અલ. ઉંદરના મગજ અને કફોત્પાદક ગ્રંથિમાં ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર્સનું સ્થાનિકીકરણ અને લાક્ષણિકતા ઈન વિટ્રો સ્થિતિએ oraટોરાડીયોગ્રાફી અને કમ્પ્યુટરાઇઝ્ડ ડેન્સિટોમેટ્રી. એન્ડોક્રિનોલોજી 121, 1562 – 1570 (1987).
257. ફિગલવિઝ, ડી.પી., ઇવાન્સ, એસ.બી., મર્ફી, જે., હોન, એમ. અને બાસ્કીન, ઉંદરોના વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયા / સબસ્ટન્ટિયા નિગ્રા (વીટીએ / એસએન) માં ઇન્સ્યુલિન અને લેપ્ટિન માટે રીસેપ્ટર્સની ડી.જી. મગજ રિઝ. 964, 107–115 (2003).
258. ડવ્સ, એલસી એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન સંકેત અને વ્યસન. ન્યુરોફાર્માકોલોજી 61, 1123 – 1128 (2011).
259. ફિગલેવિઝ, ડીપી અને સિપોલ્સ, એજે એનર્જી રેગ્યુલેટરી સિગ્નલો અને ફૂડ ઇનામ. ફાર્માકોલ. બાયોકેમ. બિહેવ. 97, 15-24 (2010).
260. પેટરસન, ટી.એ. એટ અલ. ખોરાકની વૃત્તિ એમઆરએનએ અને ઉંદરો ડોપામાઇન ટ્રાન્સપોર્ટરની પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો કરે છે. ન્યુરોએન્ડ્રોક્રિનોલોજી 68, 11 – 20 (1998).
261. કાર્વેલી, એલ. એટ અલ. ડોપામાઇન અપટેકનું પીઆઈ એક્સએનએમએક્સ-કિનાસ નિયમન. જે ન્યુરોકેમ. 3, 81 – 859 (869).
262. વિલિયમ્સ, જે.એમ. એટ અલ. હાયપોઇન્સ્યુલિનમિયા ડોપામાઇનના એમ્ફેટેમાઇન-પ્રેરિત વિપરીત પરિવહનને નિયંત્રિત કરે છે. પીએલઓએસ બાયોલ. 5, e274 (2007).
263. ઝેન, જે., રેથ, એમઇએ અને કેર, કેડી ક્રોનિક ફૂડ પ્રતિબંધ અને ઉંદરોના સ્ટ્રાઇટમમાં ડોપામાઇન ટ્રાન્સપોર્ટર કાર્ય. મગજ રિઝ. 1082, 98–101 (2006).
264. શૌફેલમેમીર, એએન એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન કોકેન-સંવેદનશીલ મોનોમાઇન ટ્રાન્સપોર્ટર ફંક્શન અને આવેગજન્ય વર્તનને મોડ્યુલેટ કરે છે. જે ન્યુરોસિ. 31, 1284 – 1291 (2011).
265. મેબલ, ડીએમ, વોંગ, જેસી, ડોંગ, વાયજે અને બોર્ગલેન્ડ, વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયામાં એસ.એલ. ઇન્સ્યુલિન હેડોનિક ફીડિંગ ઘટાડે છે અને વધેલા ફરીથી અપડેક દ્વારા ડોપામાઇનની સાંદ્રતાને દબાવશે. યુરો. જે ન્યુરોસિ. 36, 2336–2346 (2012).
266. લેબોબી, જી. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન એંડોકannનાબિનોઇડ્સ દ્વારા વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયા ડોપામાઇન ન્યુરોન્સના લાંબા ગાળાના ડિપ્રેસનને પ્રેરિત કરે છે. નેટ. ન્યુરોસ્કી. 16, 300 – 308 (2013).
267. કોનનર, એસી એટ અલ. Energyર્જા હોમિયોસ્ટેસિસના નિયંત્રણમાં કેટોલેમિનેર્જિક ન્યુરોન્સમાં ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ માટેની ભૂમિકા. સેલ મેટાબ. 13, 720 – 728 (2011).
268. ફિગલવિઝ, ડી.પી., બેનેટ, જે.એલ., અલીઆકબારી, એસ., ઝવoshશ, એ. અને સિપોલ્સ, એ.જે. ઇન્સ્યુલિન વિવિધ સુપ્રોઝ ઇનટેક ઘટાડવા અને ઉંદરોમાં સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ ઘટાડવા માટે વિવિધ સી.એન.એસ. સાઇટ્સ પર કામ કરે છે. છું. જે ફિઝિયોલ. રેગુલ. પૂર્ણાંક. કોમ્પ. ફિઝિયોલ. 295, આર 388 – આર 394 (2008).
269. પટેલ, જેસી, વિટકોવ્સ્કી, પી., કોટઝી, ડબલ્યુએ અને ચોખા, પ્રિ-સિનેપ્ટિક કે દ્વારા સ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન પ્રકાશનનું એમ.ઇ. સબ્સકોન્ડ નિયમન_{એટીપી} ચેનલો. જે ન્યુરોકેમ. 118, 721 – 736 (2011).
270. ટેપર, જેએમ અને બોલેમ, જેપી કાર્યાત્મક વિવિધતા અને નિયોસ્ટ્રિએટલ ઇન્ટર્ન્યુરન્સની વિશિષ્ટતા. ક્યુર ઓપિન. ન્યુરોબિઓલ. 14, 685-692 (2004).
271. ઝુઉ, એફએમ, લિઆંગ, વાય. અને ડેની, જેએ એન્ડોજેનસ નિકોટિનિક કોલિનરજિક પ્રવૃત્તિ સ્ટ્રાઇટમમાં ડોપામાઇનના પ્રકાશનને નિયંત્રિત કરે છે. નેટ. ન્યુરોસિ. 4, 1224–1229 (2001).
272. ચોખા, એમઇ અને ક્રેગ, એસજે નિકોટિન સ્ટ્રાઇટમમાં ઇનામથી સંબંધિત ડોપામાઇન સંકેતોને વિસ્તૃત કરે છે. નેટ. ન્યુરોસિ. 7, 583–584 (2004).
273. ઝાંગ, એચ. અને સુલ્ઝર, ડી નિકોટિન દ્વારા ડોપામાઇન પ્રકાશનની આવર્તન-આધારિત મોડ્યુલેશન. નેટ. ન્યુરોસિ. 7, 581–582 (2004).
274. પટેલ, જે.સી., રોસિગનોલ, ઇ., રાઇસ, એમ.ઇ. અને મoldચોલ્ડ, આર.પી. સ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન પ્રકાશનના નિયમનની વિરુદ્ધ અને ફોરેબ્રેઇન અને બ્રેઇનસ્ટેમ કોલિનર્જિક ઇનપુટ્સ દ્વારા એક્સ્પ્લોરેટરી મોટર વર્તન. નેટ. કોમ્યુન. 3, 1172 (2012).
275. થ્રેફેલ, એસ. એટ અલ. સ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન પ્રકાશન કોલીનર્જિક ઇન્ટર્ન્યુરન્સમાં સિંક્રનસ પ્રવૃત્તિ દ્વારા ઉત્તેજિત થાય છે. ન્યુરોન 75, 58 – 64 (2012).
276. કેશોપ, આર. એટ અલ. કોલીનર્જિક ઇન્ટર્ન્યુરન્સની પસંદગીયુક્ત સક્રિયકરણ એક્ટિમ્બલ ફેસિક ડોપામાઇન પ્રકાશનમાં વધારો કરે છે: પુરસ્કારની પ્રક્રિયા માટે ટોન સેટ કરે છે. સેલ રેપ. 2, 1 – 9 (2012).
277. જોન્સ, આઈડબ્લ્યુ, બોલેમ, જેપી અને વોનાકોટ, એસ ઉંદરો નિગ્રોસ્ટ્રિએટલ ડોપામિનર્જિક ન્યુરોન્સમાં નિકોટિનિક એસીટીલ્કોલાઇન રીસેપ્ટર બીટા 2 સબ્યુનિટ ઇમ્યુનોએરેક્ટિવિટીનું પ્રેસિન્સપ્ટિક સ્થાનિકીકરણ. જે.કોમ્પ. ન્યુરોલ. 439, 235–247 (2001).
278. હિગ્લી, એમ.જે. એટ અલ. કોલીનર્જિક ઇન્ટર્ન્યુરન્સ સ્ટ્રિએટમમાં ઝડપી વીજીલ્યુટીએક્સએનએમએક્સ-આધારિત ગ્લુટામેટરજિક ટ્રાન્સમિશનની મધ્યસ્થતા કરે છે. PLOS ONE 3, e6 (19155).
279. ટzઝની, કે., બોડનાર, આર. અને સ્ક્લાફની, એ. ઉંદરોમાં પોષક-સ્થિતિયુક્ત સ્વાદની પસંદગીઓ માટે, ન્યુક્લિયસ umbમ્બેન્સમાં ડોપામાઇન ડી 1 જેવા રીસેપ્ટર્સનું સક્રિયકરણ એ સંપાદન માટે મહત્વપૂર્ણ છે, પરંતુ અભિવ્યક્તિ નહીં. યુરો. જે ન્યુરોસિ. 27, 1525–1533 (2008).
280. સ્ક્લાફની, એ., તોઝની, કે. અને બોડનાર, આરજે ડોપામાઇન અને ખોરાકની પસંદગીઓ શીખ્યા. ફિઝિયોલ. બિહેવ. 104, 64-68 (2011).
281. મેયર, સીએમ અને બેલ્શમ, ડીડી સેન્ટ્રલ ઇન્સ્યુલિન સિગ્નલિંગ ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર સબસ્ટ્રેટ -1 સીરીન ફોસ્ફોરીલેશન, પ્રોટીસોમલ ડિગ્રેડેશન અને લાઇસોસોમલ ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર ડિગ્રેજેશન દ્વારા લાંબા ગાળાના ઇન્સ્યુલિનના સંપર્કમાં આવવાને ધ્યાનમાં લે છે. એન્ડોક્રિનોલોજી 151, 75-84 (2010).
282. ચોખા, એમ.ઇ., પટેલ, જે.સી. અને ક્રેગ, એસ.જે. ડોપામાઇન બેસલ ગેંગલીઆમાં છૂટી. ન્યુરોસાયન્સ 198, 112–137 (2011).
283. સ્મિથ, વાય., સુરમીઅર, ડીજે, રેડગ્રાવ, પી. અને કિમુરા, એમ. થ Thaલેમિક બેસલ ગેંગલિયા સંબંધિત વર્તણૂકીય સ્વિચિંગ અને મજબૂતીકરણમાં ફાળો આપે છે. જે ન્યુરોસિ. 31, 16102–16106 (2011).
284. થ્રેફેલ, એસ. એટ અલ. સ્ટ્રિએટલ મસ્કરિનિક રીસેપ્ટર્સ ડોન્ટામિન ટ્રાન્સમિશનની પ્રવૃત્તિ પરાધીનતાને વેન્ટ્રલ વર્સિસ ડોર્સલ સ્ટ્રાઇટમમાં કોલીનર્જિક ઇન્ટર્ન્યુરન્સ પર અલગ રીસેપ્ટર પેટા પ્રકારો દ્વારા પ્રોત્સાહન આપે છે. જે ન્યુરોસિ. 30, 3398 – 3408 (2010).
285. હોબેલ, બી.જી., એવેના, એનએમ અને રાડા, પી. એક્કમ્બન્સ ડોપામાઇન-એસીટીલ્કોલાઇન સંતુલન અને અભિગમ ક્યુર ઓપિન. ફાર્માકોલ. 7, 617–627 (2007).
286. પોથોઝ, ઇ.એન., ક્રીઝ, આઇ. અને હોબેલ, બી.જી. વજન ઘટાડવા સાથે પ્રતિબંધિત ખાવાથી ન્યુક્લિયસ એક્મ્બમ્બન્સમાં એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર ડોપામાઇનની પસંદગીમાં ઘટાડો થાય છે અને એમ્ફેટામાઇન, મોર્ફિન અને ખોરાકના સેવનના ડોપામાઇનના પ્રતિભાવમાં ફેરફાર થાય છે. જે ન્યુરોસિ. 15, 6640–6650 (1995).
287. ગિજર, બી.એમ. એટ અલ. ઉંદરો આહાર મેદસ્વીપણામાં મેસોલીમ્બિક ડોપામાઇન ન્યુરોટ્રાન્સમિશનની ઉણપ. ન્યુરોસાયન્સ 159, 1193 – 1199 (2009).
288. મોરિસ, જે.કે. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન રેઝિસ્ટન્સ નિગ્રોસ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન ફંક્શનને નબળી પાડે છે. સમાપ્તિ ન્યુરોલ. 231, 171 – 180 (2011).
289. ડી અરાજો, એટલે કે એટ અલ. સ્વાદ રીસેપ્ટર સિગ્નલિંગની ગેરહાજરીમાં ખોરાકનો પુરસ્કાર. ન્યુરોન 57, 930 – 941 (2008).
290. સ્ટાઇસ, ઇ., સ્પોર, એસ., બોહોન, સી. અને સ્મોલ, ડી.એમ. વચ્ચે મેદસ્વીપણા અને ખોરાક માટે બ્લુન્ટ સ્ટ્રાઇટલ રિસ્પોન્સ વચ્ચેનો સંબંધ તાકીઆએ એ 1 એલીલ દ્વારા મધ્યસ્થી છે. વિજ્ 322ાન 449, 452-2008 (XNUMX).
291. વાંગ, જીજે એટ અલ. મગજ ડોપામાઇન અને જાડાપણું. લેન્સેટ એક્સએન્યુએમએક્સ, એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ (એક્સએનએમએક્સ).
292. જહોનસન, પીએમ અને કેની, પીજે ડોપામાઇન ડી 2 રીસેપ્ટર્સ વ્યસન જેવા ઇનામની તકલીફ અને મેદસ્વી ઉંદરોમાં અનિવાર્ય ખોરાક. નેટ. ન્યુરોસિ. 13, 635–641 (2010).
293. કેર, કેડી, કિમ, જી.વાય. એન્ડ કેબીઝા ડી વેકા, એસ. રિવાર્ડિંગ અને સીધી ડોપામાઇન રીસેપ્ટર એગોનિસ્ટ્સની લોકોમોટર-એક્ટિવ અસરો, ઉંદરોમાં ક્રોનિક ફૂડ પ્રતિબંધ દ્વારા વધારવામાં આવે છે. સાયકોફાર્માકોલોજી (બર્લ.) 154, 420–428 (2001).
294. લેવિન, બીઇ અને કીસી, આરઇ આહાર પ્રેરિત મેદસ્વી અને પ્રતિરોધક ઉંદરોમાં શરીરના વજનના જુદા જુદા સેટ પોઇન્ટનો સંરક્ષણ. છું. જે ફિઝિયોલ. 274, આર412 – આર 419 (1998).
295. પટેલ, જે.સી. અને રાઇસ, એમ.ઇ. મોનીટરીંગ એકોનલ અને સોમાટોડેન્ડ્રિટિક ડોપામાઇન મગજની ટુકડાઓમાં ફાસ્ટ સ્કેન સાયક્લિક વોલ્ટેમેટ્રીનો ઉપયોગ કરીને. પદ્ધતિઓ મોલ. બાયોલ. 96, 243–273 (2013).
296. લી, સીઆર, વિટકોવ્સ્કી, પી. અને રાઇસ, એમ.ઇ. રેગ્યુલેશન ઓફ સબસ્ટtiaન્ટિઆ નિગ્રા પાર્સ રેટિક્યુલેટા જીએબીએર્જિક ન્યુરોન એક્ટિવિટી એચ દ્વારા₂O₂ ફ્લુફેનેમિક એસિડ-સંવેદનશીલ ચેનલો અને કે દ્વારા_{એટીપી} ચેનલો. આગળ. સિસ્ટ. ન્યુરોસ્કી. 5, 14 (2011).
297. ચેન, બીટી, મોરન, કેએ, અવશેલમોવ, એમવી અને ચોખા, વોલ્ટેજ-સંવેદનશીલ સીએ દ્વારા સોમાટોડેન્ડ્રિટિક ડોપામાઇન પ્રકાશનનું એમઇ લિમિટેડ રેગ્યુલેશન²⁺ ચેનલો એકોનલ ડોપામાઇન પ્રકાશનના મજબૂત નિયમન સાથે વિરોધાભાસી છે. જે ન્યુરોકેમ. 96, 645 – 655 (2006).
298. લી, એક્સ. એટ અલ. ઉંદરમાં એલઆરઆરકેએક્સએનયુએમએક્સ ઓવરએક્સપ્રેસન સાથે ઉન્નત સ્ટ્રિએટલ ડોપામાઇન ટ્રાન્સમિશન અને મોટર કામગીરી, ફેમિલી પાર્કિન્સન રોગના પરિવર્તન G2S દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. જે ન્યુરોસિ. 2019, 30 – 1788 (1797).
299. વુ, ક્યુ., રેથ, એમઇએ, વિટમેન, આરએમ, કાવાગોઇ, કેટી અને ગેરીસ, પીએ રિલીઝનું નિર્ધારણ અને રીઅલ-ટાઇમ વોલ્ટેમેટ્રી દ્વારા માપેલા ઇલેક્ટ્રિકલી ઇવોક્ટેડ ડોપામાઇન ગતિશીલતાના પ્રાયોગિક પરિમાણો. જે ન્યુરોસિ. પદ્ધતિઓ 112, 119–133 (2001).
300. ચેન, બીટી, અવશેલ્મોવ, એમવી અને ચોખા, એમઇ એચ₂O₂ સિનેપ્ટિક ડોપામાઇન પ્રકાશનનું એક નવલકથા, અંતર્જાત મોડ્યુલેટર છે. જે ન્યુરોફિઝિઓલ. 85, 2468 – 2476 (2001).
301. વિટકોવ્સ્કી, પી., પટેલ, જે.સી., લી, સી.આર. અને રાઇસ, એમ.ઇ. ઇમ્યુનોસાયટોકેમિકલ ઓળખ ડોગામિનમાં સામેલ પ્રોટિનની નિગ્રેલ ડોપામિનેર્જિક ન્યુરોન્સના સોમાટોડેન્ડ્રિટિક ડબ્બામાંથી. ન્યુરોસાયન્સ 164, 488–496 (2009).
302. સુગિમોટો, કે. એટ અલ. ઉંદર પેરિફેરલ ચેતામાં ઇન્સ્યુલિન રીસેપ્ટર: તેનું સ્થાન અને વૈકલ્પિક રીતે કાતરી આઈસોફોર્મ્સ. ડાયાબિટીઝ મેટાબ. અનામત. રેવ. 16, 354 – 363 (2000).
303. સાંચેઝ-અલાવેઝ, એમ. એટ અલ. ઇન્સ્યુલિન ગરમ-સંવેદનશીલ ન્યુરોન્સના સીધા નિષેધ દ્વારા હાયપરથર્મિયાનું કારણ બને છે. ડાયાબિટીઝ 59, 43 – 50 (2010).
304. પેક્સિનોસ, જી. અને વોટસન, સી. ધી રેટ બ્રેઇન ઇન સ્ટીરિયોટેક્સિક કોઓર્ડિનેટ્સ 6 ઠ્ઠી એડન એકેડેમિક (2007).
305. સ્ટ્રમ્બે, જેએચ અને મેઇન, સીજીએ VMH માં ઇન્સ્યુલિન એન્ટિબોડીઝના દ્વિપક્ષીય ઇન્જેક્શનના જવાબમાં ખોરાકમાં વધારો કર્યો. ફિઝિયોલ બિહેવ. 19, 309–313 (1977).
306. પરાંજપે, એસ.એ. એટ અલ. સ્વાદુપિંડનું ગ્લુકોગન સ્ત્રાવ પર વેન્ટ્રોમિડિયલ હાયપોથાલેમસમાં ઇન્સ્યુલિનનો પ્રભાવ વિવો માં. ડાયાબિટીઝ 59, 1521 – 1527 (2010).
307. વાઈઝ, આરએ અને હોફમેન, ડીસી ઇન્ટ્રાકાર્નિયલ ઇન્જેક્શન્સ દ્વારા ડ્રગ ઇનામ પદ્ધતિઓનું સ્થાનિકીકરણ. સાયનેપ્સ 10, 247–263 (1992).
308. ઝેન, જે., મૈતી, એસ., ચેન, એન., દત્તા, એકે અને રેથ, એમઇએ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા 4- (2-બેન્ઝાઇડ્રાઇલોક્સી-એથિલ) -1- (4-ફ્લોરોબenનઝિલ) પાઇપરિડાઇન અને એસ્પાર્ટેટ 68 માં માનવ ડોપામાઇન ટ્રાન્સપોર્ટર. યુરો. જે ફાર્માકોલ. 506, 17–26 (2004).

સંદર્ભો ડાઉનલોડ કરો

આ અભ્યાસને NIH અનુદાન DA033811 (MER, KDC and MEAR), NS036362 (MER), DA03956 (KDC) અને એક NARSAD સ્વતંત્ર તપાસ અધિકારી એવોર્ડ (KDC) દ્વારા સમર્થન મળ્યું હતું. એસ.એક્સ.એન.એમ.એક્સ. એ ડો લોજ શેફર, નોવો નોર્ડીસ્કની એક ઉદાર ભેટ હતી. પીપીએક્સએન્યુએમએક્સ એન્ટિબોડી ફાઇઝરની ઉદાર ભેટ હતી. સોફ્ટવેર કાractવા માટે, એન.વાય.યુ. સ્કૂલ Medicફ મેડિસિનના ડ Dr. ચાર્લ્સ નિકોલ્સનનો અમે આભાર માનીએ છીએ V_{મહત્તમ} એફસીવી ડેટામાંથી મૂલ્યો.