એમ જે ફિઝિઓલ રેગુલ ઇન્ટિગ્રમ્પ કોમ્પ ફિઝિઓલ. 2011 એપ્રિલ; 300 (4): R876-R884.
ઑનલાઇન 2011 ફેબ્રુ 9 પ્રકાશિત. ડોઇ: 10.1152 / AJPregu.00655.2010
પી.એમ.સી.આઈ.ડી.
1,2 અમૂર્ત
અમે અગાઉ નોંધ્યું છે કે હાયપોથેલામસના આર્કાઇટ ન્યુક્લિયસમાં ઇન્સ્યુલીનનું સંચાલન સુક્રોઝ માટે પ્રેરણા ઘટાડે છે, જે ઉંદરોમાં સ્વ-વહીવટી કાર્ય દ્વારા આકારણી કરવામાં આવે છે. સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ સાથે જોડાણમાં સેન્ટ્રલ નર્વસ સિસ્ટમ (સીએનએસ) સક્રિયકરણની પેટર્નનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું નથી, આજના અભ્યાસમાં, અમે સી-ફોસની અભિવ્યક્તિને ચેતાકોષ સક્રિયકરણની અનુક્રમણિકા તરીકે માપી હતી. નિયંત્રિત નિયંત્રણમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિની તુલનામાં, અમે ફિક્સ્ડ-રેશિયો (એફઆર) અથવા પ્રગતિશીલ-ગુણોત્તર (પીઆર) શેડ્યૂલ અને સી.એન.એસ. માં સી-ફોસ ઇમ્યુનોરેક્ટીવીટીના મૅપ કરેલ અભિવ્યક્તિ મુજબ, સુક્રોઝ માટે બાર-પ્રેસ કરવા માટે ઉંદરોને તાલીમ આપી હતી. અમે પીઆર કામગીરીની શરૂઆત સાથે મળીને મધ્યમ હાયપોથેલામસ (આર્કાયુટ, પેરાવેન્ટ્રિક્યુલર, રેટ્રોચાસીમેટિક, ડોર્સમેડિયલ અને વેન્ટ્રોમેડિયલ ન્યુક્લી) માં સી-ફોસની એક અનન્ય અભિવ્યક્તિને જોયેલી, અને બાજુના હાયપોથાલમસ અને બેડ ન્યુક્લિયસમાં સી-ફોસની અભિવ્યક્તિને ધ્યાનમાં લીધી. એફઆર કામગીરીની શરૂઆત સાથે સ્ટ્રિઆ ટર્મિનિસનો સમાવેશ થાય છે. સી-ફૉસ અભિવ્યક્તિમાં એફઆર અને પીઆર ઉંદરો એમ બંનેના ન્યુક્લિયસ સંક્ષિપ્તમાં વધારો થયો હતો. અમારું અભ્યાસ ખોરાક પુરસ્કાર કાર્યના પ્રભાવમાં હાયપોથૅલેમિક ઉર્જા હોમિયોસ્ટેસિસ સર્કિટ્રી અને લિંબિક સર્કિટ્રી બંનેના મહત્વ પર ભાર મૂકે છે. ઊર્જા સંતુલનના નિયમનમાં મધ્યવર્તી હાયપોથેલામસની ભૂમિકાને ધ્યાનમાં રાખીને, અમારા અભ્યાસ સૂચવે છે કે આ સર્કિટ્રી ઊર્જા હોમિયોસ્ટેસિસના મોટા સંદર્ભમાં નિયમનને વળતર આપવા માટે યોગદાન આપી શકે છે.
વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયા (વીટીએ) અને સ્ટ્રાઇટમ અને કોર્ટિકલ સાઇટ્સના પ્રોજેક્ટ્સ સહિત મેસોલિમ્બિક ડોપામિનેર્જિક (ડીએ) સર્કિટ્રી, દુરુપયોગની દવાઓના અસંખ્ય વર્ગના પ્રેરણાત્મક અથવા લાભદાયી પાસાંઓમાં મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવવા તરીકે ઓળખવામાં આવી છે.13, 22-24, 26, 48). અમારા પ્રયોગશાળા અને અન્યોના તાજેતરના સંશોધનો સૂચવે છે કે આ સર્કિટ્રી એ જ રીતે ખોરાકના પ્રેરણાદાયક અથવા લાભદાયી પાસાઓમાં મુખ્ય ભૂમિકા ભજવે છે. સર્કિટ્રી સાથે કાર્યાત્મક અને રચનાત્મક ક્રિયાપ્રતિક્રિયા જે ઉર્જા હોમિયોસ્ટેસિસને નિયંત્રિત કરે છે તે પ્રાણીઓની પોષક સ્થિતિ દ્વારા ખાદ્ય પુરસ્કારની મોડ્યુલેશનની રિપોર્ટ્સ દ્વારા સૂચવવામાં આવે છે (10, 14, 16, 43). પોષણ અથવા ચયાપચયની સ્થિતિ દ્વારા, ખોરાક પુરસ્કાર સહિત પુરસ્કારનું મોડ્યુલેશન, ઇન્સ્યુલિન સહિત ન્યુરલ અને એન્ડ્રોકિન સિગ્નલો દ્વારા સખત અસર કરે છે.15), લેપ્ટિન (11, 18, 21, 30, 32), ગેરેલીન (35), મેલાનિન-કેન્સરરેટિંગ હોર્મોન (એમસીએચ) (45), અને ઓરેક્સિન (5, 7): સેન્ટ્રલ નર્વસ સિસ્ટમ (સીએનએસ) માં આ સંકેતોની રીસેપ્ટર્સની હાજરી, બાયોકેમિકલ અને સેલ્યુલર અસરકારકતા, અને ઇન વિવો અથવા વર્તણૂકીય અસરકારકતા તાજેતરના વર્ષોમાં પુષ્કળ પ્રમાણમાં દર્શાવવામાં આવી છે.
વિસ્તૃત લિંબિક સર્કિટ્રીને પણ ખોરાક અને ખોરાક પુરસ્કારમાં ભૂમિકા ભજવવા માટે બતાવવામાં આવ્યું છે (2, 19, 28). જો કે, ત્યાં વધારાની ફાળો આપતી સીએનએસ સાઇટ્સ છે. ખાસ કરીને, લેર્ડેલ હાયપોથેલામસ (એલએચ) લાંબા સમયથી સાઇટ મધ્યસ્થ ખોરાક અને સ્વ-ઉત્તેજના વર્તણૂંક તરીકે ઓળખાય છે (4, 31). ઓરેક્સિંર્જિક ન્યુરોન્સ અને LH માં લેપ્ટીન સિગ્નલિંગને ખોરાક અને ખોરાક પુરસ્કાર માટે મહત્વપૂર્ણ તરીકે ઓળખવામાં આવી છે (5, 29, 30). અમે તાજેતરમાં જ નોંધ્યું છે કે ઇન્સ્યુલિન ત્રીજા મગજની વેન્ટ્રિકલ અથવા તો હાયપોથલામસ (એઆરસી) ના આર્ક્યુએટ ન્યુક્લિયસમાં સંચાલિત થાય છે, સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટમાં ઘટાડો કરી શકે છે, પરંતુ ઇન્સ્યુલિન વહીવટ વીએટીએ અથવા ન્યુક્લિયસ એસેમ્બન્સમાં આ વિશિષ્ટ ઈનામના પરિમાણો પર કોઈ અસર કરતું નથી (15). આમ, એવું લાગે છે કે બહુવિધ હાઈપોથેલેમિક સાઇટ્સ પ્રેરિત ખોરાકની શોધ અને સંપાદનમાં મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવી શકે છે, અને આ સાથે સુસંગત, એક અનુમાન કરશે કે હાયપોથેલેમિક પ્રદેશો ખોરાક સ્વ-વહીવટ સાથે સંકળાયેલા છે. આ પૂર્વધારણાને ચકાસવા માટે, અમે નિશ્ચિત ગુણોત્તર (એફઆર) તાલીમ પછી અથવા પ્રગતિશીલ ગુણોત્તર (પીઆર) તાલીમ પછી, સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ વિરોધાભાસમાં પ્રશિક્ષિત ઉંદરોના સીએનએસમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિને મેપ કર્યું છે, વધુ કડક કાર્ય પ્રેરણા આકારણી માટે20).
સામગ્રી અને પદ્ધતિઓ
વિષયો.
વિષયો સિમોન્સન (ગિલરોય, સીએ) ના પુરુષ આલ્બિનો ઉંદરો (325–425 ગ્રામ) હતા. ઉંદરો ચોર એડ લિબિટમ પર જાળવવામાં આવ્યા હતા. તેઓ સવારે 12 વાગ્યે લાઇટ્સવાળા 12: 6-h પ્રકાશ-ઘેરા ચક્ર પર જાળવવામાં આવ્યા હતા અને પોસ્ટરેન્ડિયલ અને પોસ્ટબsર્સર્પેટિવ સ્થિતિમાં, સવારે 7 વાગ્યાથી બપોરની વચ્ચે તાલીમ અને પરીક્ષણ કરાયા હતા. ઉંદરો પર કરવામાં આવતી બધી પ્રક્રિયાઓ પ્રાણીઓની સંભાળ માટેની રાષ્ટ્રીય આરોગ્ય સંસ્થાઓની માર્ગદર્શિકાને અનુસરતી હતી અને વીએ પ્યુજેટ સાઉન્ડ હેલ્થ કેર સિસ્ટમ પર સંશોધન અને વિકાસ સમિતિની એનિમલ કેર એન્ડ યુઝ પેટા સમિતિ દ્વારા મંજૂરી આપવામાં આવી હતી.
સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ.
પ્રક્રિયાઓ અમારી પ્રકાશિત પદ્ધતિઓ પર આધારિત હતી (15) અને ફેડ ઉંદરો પર કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રયોગમાં ત્રણ તબક્કાઓનો સમાવેશ થતો હતો: રિચાર્ડસન અને રોબર્ટ્સના પી.આર. અલ્ગોરિધમનો ઉપયોગ કરીને તાલીમ, એફ.આર. તાલીમ અને પ્રગતિશીલ રેશિયો (પીઆર) તાલીમ શરૂ કરવા માટે સ્વતઃશક્તિ આપવી.38). પીઆર એલ્ગોરિધમને 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, 575, 759, 999, 999, XNUMX, XNUMX, XNUMX ( વગેરે) સત્રમાં સફળ પુરસ્કાર ડિલિવરી માટે લીવર પ્રેસ38). ઉંદરોને પ્રવાહી ડ્રોપ રીસેપ્ટકલમાં વિતરિત 5% સુક્રોઝ (0.5 એમએલ પુરસ્કાર) સ્વ-સંચાલિત કરવા માટે તાલીમ આપવામાં આવી હતી. મેડ એસોસિયેટ્સ (જ્યોર્જિયા, વીટી) સિસ્ટમ દ્વારા સંચાલિત ઑપરેટર બૉક્સમાં બે લિવર હતા, પરંતુ ફક્ત એક જ લીવર (સક્રિય, રીટ્રેક્ટેબલ લીવર) એ પ્રેરણા પંપને સક્રિય કરી. અન્ય લીવર પર પ્રેસ (નિષ્ક્રિય, સ્થિર લીવર) પણ રેકોર્ડ કરાઈ હતી. જેમ આપણે અગાઉ અવલોકન કર્યું છે, નિષ્ક્રિય લીવર પર પ્રેસની સંખ્યા ખૂબ ઓછી હતી (10 પ્રેસ / સત્ર કરતાં ઓછી). સુક્રોઝ સોલ્યુશન મૌખિક વપરાશ (મેડ એસોસિયેટ્સ, સેન્ટ આલ્બન્સ, વીટી) માટે પ્રવાહી ડ્રોપ રીસેપ્ટકલમાં વિતરિત કરવામાં આવ્યું હતું. પ્રારંભિક તાલીમ 1-h સત્રો દરમિયાન એક સતત મજબૂતીકરણ શેડ્યૂલ હેઠળ કરવામાં આવી હતી (FR1: દરેક લીવર પ્રેસને મજબૂત કરવામાં આવ્યું હતું). પ્રત્યેક સત્ર સક્રિય લીવરને દાખલ કરવા અને સફેદ સભાના પ્રકાશ સાથે શરૂ થતું હતું જે સમગ્ર સત્ર માટે ચાલુ રહ્યું હતું. એક 5-S ટોન (બેકગ્રાઉન્ડ ઉપર 2900 Hz, 20 ડીબી) અને પ્રકાશ (સક્રિય લીવરથી 7.5 W સફેદ પ્રકાશ) ડિસ્ક્રિટ કયૂ દરેક પુરસ્કાર વિતરણ સાથે, સુક્રોઝ ડિલિવરીથી શરૂ થતાં 20-S ના સમય સાથે. 10 દિવસો માટે એફ.આર. તાલીમ હાથ ધરવામાં આવી હતી; સ્થિર પ્રતિભાવ પાંચમી સત્ર દ્વારા પ્રાપ્ત થાય છે. 3 દિવસો માટે મહત્તમ શક્ય 10 કલાક / દિવસ માટે PR તાલીમ હાથ ધરવામાં આવી હતી. પીઆર સત્રો કોઈ સક્રિય લીવર પ્રેસના જવાબમાં 30 મિનિટ પછી સમાપ્ત થયો, તે સમયે ઘરના પ્રકાશને આપમેળે બંધ કરી દેવામાં આવ્યું અને સક્રિય લીવર પાછું ખેંચવામાં આવ્યું; ઉંદરોને ચેમ્બરમાંથી બહાર કાઢવામાં આવ્યા અને તેમના ઘરના પાંજરામાં પાછા ફર્યા. અહેવાલ "સમય રોકો" કોષ્ટક 2 સિસ્ટમ બંધ કરવામાં આવી હતી તે સમયને રજૂ કરે છે; તેથી, છેલ્લી સક્રિય લીવર પ્રેસ સ્ટોપ સમય પહેલા 30 મિનિટ થઈ હોત. વર્તણૂકીય માહિતી (કોષ્ટક 2) ની સરેરાશ રજૂ કરે છે સત્ર 6-10 એફઆર તાલીમ માટે, અને સત્ર 1-9 પીઆર તાલીમ માટે. કન્ટ્રોલ-હેન્ડલ્ડ ઉંદરોને હાઉસિંગ રૂમમાંથી લેવામાં આવ્યા હતા અને ચોખ્ખા સંચાલક સુક્રોઝના ઉંદરોના હેન્ડલિંગ અને રૂમ અનુભવોનું અનુકરણ કરવા માટે, પ્રક્રિયા રૂમની અંતર્ગત 60 મિનિટ માટે ઘરના પ્રકાશ સાથે સ્વચ્છ ઓપરેટન્ટ ચેમ્બરમાં મૂકવામાં આવ્યા હતા. ઓપરેંટ બૉક્સમાં જ્યારે તેઓ ખાવા કે પીવા માટે કંઈપણ આપવામાં આવતાં નહોતા, અને તેમની પાસે લિવર્સનો કોઈ વપરાશ નહોતો.
અંતિમ દિવસે, ઉંદરોને પ્રશિક્ષણના દિવસો અનુસાર ચેમ્બરમાં મૂકવામાં આવ્યા હતા અને તેને 90 મિનિટ માટે ચેમ્બરમાં રાખવામાં આવ્યા હતા, ત્યારબાદ એને એનેસ્થેસિયા, પરફેઝન અને ત્યારબાદની ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી માટે દૂર કરવામાં આવ્યા હતા. નિયંત્રણ ઉંદરોને તે જ રીતે પ્રક્રિયા ઓરડામાં લાવવામાં આવ્યા હતા અને તાલીમના દિવસો અનુસાર, 90 મિનિટ સુધી, સ્વચ્છ operaપરેન્ટ ચેમ્બરમાં રાખવામાં આવ્યા હતા, ત્યારબાદ તેઓ એનેસ્થેસાઇટીઝ અને નાશ પામ્યા હતા. તરત જ તે છેલ્લા 90-મિનિટ સત્રને અનુસરીને, ઉંદરોને આઇસોફ્લુએન ઇન્હેલેશનથી deeplyંડે એનેસ્થેસીટીકરણ કરવામાં આવ્યું હતું અને 0.9% એનએસીએલ સાથે ઠંડુ કરવામાં આવ્યું હતું, ત્યારબાદ ઠંડા 4% પેરાફોર્મldડિહાઇડ સોલ્યુશન સાથે. એનેસ્થેટિક અને અસાધ્ય રોગ માટેનો સમય, ઘટના પછીના 90-120 મિનિટ પર સી-ફોસ પ્રોટીનના અભિવ્યક્તિના જાણીતા સમય અભ્યાસક્રમ પર આધારિત હતો. આમ, સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વર્તન કાર્યની શરૂઆત વખતે સીએનએસના સક્રિયકરણને પ્રતિબિંબિત કરશે, પ્રાણીઓના કાર્યનો અનુભવ કરવા અને સુક્રોઝને ઇન્જેસ્ટ કરવાના પરિણામને બદલે. મગજને ઘણા દિવસોથી પેરાફોર્માલ્ડિહાઇડમાં દૂર કરવામાં આવ્યા હતા અને પોસ્ટફિક્સ કર્યા હતા; પછી, તેઓને પછીથી 20% સુક્રોઝ-પીબીએસ મૂકવામાં આવ્યા, ત્યારબાદ તેઓ 30% સુક્રોઝ-પીબીએસ સોલ્યુશનમાં મૂકાયા. ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી માટે મગજને ક્રિટોસ્ટેટ (લાઇકા સીએમ 3050 એસ ક્રિઓસ્ટાટ) પર વિભાજિત કરવામાં આવ્યા હતા.
સી-ફોસ ઇમ્યુનોહિસ્ટૉકેમિસ્ટ્રી અને ક્વોન્ટિશન.
મગજ વિભાગોમાં ઇમ્યુનોરેક્ટિવ સી-ફોસ પ્રોટીનનું માપ કાઢવા માટે અમે અમારી સ્થાયી પદ્ધતિનો ઉપયોગ કર્યો છે.12). સી-ફૉસ અભિવ્યક્તિ માટે સમગ્ર મગજના પ્રારંભિક ગુણાત્મક સ્ક્રીનનું આયોજન કરવામાં આવ્યું હતું. સ્લાઇડ-માઉન્ટેડ 12-μm આખા-મગજના કોરોનલ વિભાગો પીબીએસ (ઓક્સાઇડ, હેમ્પશાયર, યુકે) માં 3 વખત ધોયા હતા. પછી એક્સ્યુએક્સએક્સ એક્સ માટે રૂમમાં પી.બી.એસ.માં 1% સામાન્ય બકરી અથવા ગધેડો સીરમ સમાવિષ્ટ છે. પછી પીબીએસમાં વિભાગોને ઘણી વાર ધોવામા આવ્યાં અને પીબીએસમાં બનેલા પ્રાથમિક એન્ટિબોડી સોલ્યુશન્સમાં 5 ° C પર રાતોરાત ઉકાળી. પીબીએસમાં વિભાગોને ત્રણ વખત ધોવામા આવ્યા હતા અને પછી પી.બી.એસ. માં 4 એચ માટે બનેલા ગૌણ એન્ટિબોડી સોલ્યુશનમાં ઓરડાના તાપમાને અંધારામાં ઉકાળી ગયા હતા. પાછળથી વિભાગો ફરીથી પીબીએસમાં ધોયા અને વેક્ટીશીલ્ડ હાર્ડ સેટ માઉન્ટિંગ માધ્યમ (વેક્ટર લેબોરેટરીઝ, બર્લિંગમ, સીએ) માઉન્ટિંગ માધ્યમમાં માઉન્ટ અને કવર ફટકાર્યા. ઓપ્ટોપૉટ કૅમેરાથી કનેક્ટ થયેલા અને ઇલેક્ટ્રો પ્રો પ્લસ (મીડિયા સાયબરનેટિક્સ, સિલ્વર સ્પ્રિંગ, એમડી) સૉફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને નિકોન એક્લીપ્સ ઇ-એક્સએનટીએક્સ ફ્લેરોસેન્સ માઇક્રોસ્કોપનો ઉપયોગ કરીને વિભાગોની ડિજિટલ છબીઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.
ત્યારબાદ, અમે મર્યાદિત સંખ્યામાં ક્ષેત્રો પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું, જેમાં સ્થિતિ, જથ્થા માટે અને ન્યુરોનલ ફેનોટાઇપિંગ વચ્ચેનો સ્પષ્ટ તફાવત દર્શાવે છે. ખાસ કરીને, અમે ન્યુક્લિયસ એસેમ્બન્સ કોર અને શેલ (એનએસી) પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું છે; સ્ટેરી ટર્મીનલિસ (એબીબીએસટી, પીએનબીએસટી) ના અગ્રવર્તી અને પશ્ચાદવર્તી બેડ ન્યુક્લિયસ; મધ્યવર્તી હાયપોથેલામિક વિસ્તારો [વેન્ટ્રોમેડિયલ ન્યુક્લિયસ (વીએમએચ), ડોસોમેડિયલ હાયપોથેલામસ (ડીએમએચ), પેરાવેન્ટ્રિક્યુલર ન્યુક્લિયસ (પીવીએન), રેટ્રોચિયામેટિક એરિયા (આરએચ), અને એઆરસી]; લેર્ડેલ હાયપોથેલામસ (એલએચ), જેમાં ડોર્સલ અને વેન્ટ્રલ પ્રદેશો અને પેરિફિનીકલ (પીઇએફ) વિસ્તારનો સમાવેશ થાય છે; વીટીએ; મગજ સ્ટેમ [ઉતરતા ઓલિવ, હાયપોગ્લોસલ (એનએક્સઆઇઆઇ) એકાંત માર્ગ, નળિયું રેટિક્યુલર ન્યુક્લિયસ, અને સીએક્સએનટીએક્સએક્સ / એએક્સએનએક્સએક્સ એડેરેનાલાઇન / નોરેડ્રેનાલાઇન ન્યુક્લી] ના ન્યુક્લિયસ. એટલાસ-મેળ ખાતા 1-μm વિભાગોનું મૂલ્યાંકન સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ અને મેળ ખાતા વિભાગો અને પ્રદેશોના જથ્થામાં, પેક્સિનોસ અને વાટ્સનના એટલાસના આધારે કરવામાં આવ્યું હતું (34). મહેરબાની કરીને જુઓ કોષ્ટક 1 ચોક્કસ સ્ટીરિઓટેક્સિક કોઓર્ડિનેટ્સ માટે. એસેસનું પ્રાથમિક ધ્યાન દરેક વર્તણૂંક કાર્યને તેની સંબંધિત નિયંત્રણ (પીઆર વિ. પીઆરસી; એફઆર વિ. એફઆરસી) સાથે તુલના કરવાનું હતું. વર્તન વિરુદ્ધ નિયંત્રણની સ્થિતિઓના આધારે સંભવિત તફાવતોને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે, પીઆર અને એફઆર જૂથોના શિખરો રજૂ કરનારા વિશ્લેષણ માટે પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા. આમ, 4 / 12 PR અને 3 / 12 FR ઉંદરોનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું: આ ઉંદરોમાં સક્રિય લીવર પ્રેસ નંબર (પ્રાથમિક વર્તણૂકલક્ષી અંત્યબિંદુ) હતો જે તેમના સંબંધિત વર્તણૂક જૂથ માટે સરેરાશ કરતાં એક માનક વિચલન કરતાં વધુ હતો. નિયંત્રણ ઉંદરોનું એક સબકોર્ટ (5 PRC અને 3 FRC ઉંદરો, એફઆર અથવા પીઆર ઉંદરો જેવા જ સમયે પ્રક્રિયા ખંડમાં હાજર) નું પણ વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું. PR પ્રક્રિયાની વધારાની સમયગાળાની નકલ કરવા માટે FR પ્રક્રિયા ("FREXEX") દ્વારા ત્રણ ઉંદરોનો વધારાનો જૂથ લેવામાં આવ્યો હતો (એટલે કે, કુલ 20 દિવસો માટે, પીઆર ઉંદરો એફઆર અને પછી પીઆર દ્વારા લેવામાં આવે છે) મૂલ્યાંકન કરવા માટે FR અને PR વચ્ચેના તફાવતો વર્તણૂકલક્ષી કાર્ય અથવા પ્રક્રિયાની અવધિને કારણે હતા. FRXT મગજનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું ન હતું અને વ્યવસ્થિત રીતે તપાસવામાં આવ્યું હતું, પરંતુ પરિણામોના વિશિષ્ટ સૂચનો પ્રમાણે, તુલનાત્મક જથ્થાને મંજૂરી આપવા માટે, અન્ય ચાર જૂથો સાથે રુચિના વિશિષ્ટ ક્ષેત્રોની ખાતરી કરવામાં આવી હતી.
જથ્થા માટે (40 × વિસ્તૃતીકરણ પર), એટલાસ-મેળ ખાતા ક્ષેત્રો પસંદ કરવામાં આવ્યાં હતાં. ઇમેજપ્રો પ્લસ સૉફ્ટવેર (મીડિયા સાઇબરનેટિક્સ) નો ઉપયોગ ઇચ્છિત વિસ્તારની છબીને પકડવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. ગણના માટે એક વિસ્તારનું ચિત્રણ કરવામાં આવ્યું હતું, અને હકારાત્મક સેલ ગણતરીઓની થ્રેશોલ્ડની સ્થાપના કરવામાં આવી હતી. સમાન ક્ષેત્ર અને પૃષ્ઠભૂમિ (થ્રેશોલ્ડ) નો ઉપયોગ સંબંધિત પ્રાયોગિક જૂથોના વિભાગો માટે કરવામાં આવતો હતો અને બેકગ્રાઉન્ડ સેટિંગમાં સત્રના ફેરફારોને અટકાવવા માટે, બધા પ્રાયોગિક જૂથો માટે સમાન સત્રમાં સકારાત્મક સેલ્સ (જથ્થાબંધ) ની સૉફ્ટવેર ગણના કરવામાં આવી હતી. આંકડાકીય વિશ્લેષણ માટે, દરેક ઉતારા દ્વારા અનુરૂપ અથવા સંપૂર્ણ વિભાગો માત્ર ત્યારે જ વ્યક્તિગત ઉંદરમાંથી ગણતરી કરવામાં આવી હતી (જેમ કે વ્યાખ્યાયિત કોષ્ટક 1) ઉપલબ્ધ હતા; ચોક્કસ વિસ્તાર માટેનો ડેટા ઉતારોમાંથી લેવામાં આવ્યો ન હતો જો તે વિસ્તાર માટે અપૂર્ણ દ્વિપક્ષીય રજૂઆત હોય.
ગુણવત્તાયુક્ત ડબલ-લેબલ થયેલ ઇમ્યુનોફ્લોરેન્સન્સ વિશ્લેષણ.
મગજના વિભાગો ઉંદરોમાંથી લેવામાં આવ્યા હતા જેમાં સી-ફોસની માત્રા કરવામાં આવી હતી, ડબલ-લેબલવાળી ઇમ્યુનોહિસ્તોસાયમિસ્ટ્રી માટે. કારણ કે અમે પ્રાણીઓના વર્તણૂકીય પ્રભાવને ખલેલ પહોંચાડવા માંગતા ન હતા, તેથી પેપ્ટાઇડ ન્યુરોટ્રાન્સમિટરના વિઝ્યુલાઇઝેશનને શ્રેષ્ઠ બનાવવા માટે તેમને કોલ્ચિસિનથી વહેંચવામાં આવ્યું ન હતું. તેથી, સ્વ-વહીવટ કાર્ય સાથે જોડાણમાં સક્રિય ન્યુરોનલ ફીનોટાઇપ્સનું વિઝ્યુલાઇઝેશન મર્યાદિત હતું. તેમ છતાં, સંખ્યાબંધ સીએનએસ સ્થળોએ સક્રિય ન્યુરોન્સના ફીનોટાઇપ્સનું મૂલ્યાંકન શરૂ કરવા માટે, ડિજિટલ છબીઓ (ઉપરના વિભાગમાં વર્ણવ્યા અનુસાર હસ્તગત) 20 ×, 40 × અથવા 60 × લેવામાં આવી હતી (આકૃતિની દંતકથામાં સૂચવ્યા પ્રમાણે) . ગ્લુટામેટ ડેકારબોક્સીલેઝ (જીએડી), ટાયરોસિન હાઇડ્રોક્સિલેઝ (ટીએચ), સીઆરએફ, ન્યુરોપેપ્ટાઇડ વાય (એનપીવાય), એગૌટી સંબંધિત પેપ્ટાઇડ (એજીઆરપી), અને ટ્રિપ્ટોફન હાઇડ્રોક્સિલેઝ માટે ડ્યુઅલ સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયા તેના સી-ફોસ-ઇમ્યુનોરેક્ટીવીટીના પર્યાય સાથે તુલનાત્મક હતી. પોતાનું, સિવાય કે સી-ફોસ-અબ અને અન્ય પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝનું મિશ્રણ 4 ° સે. તેવી જ રીતે, બંને ગૌણ એન્ટિબોડીઝ એક જ સોલ્યુશનમાં હતા અને ઓરડાના તાપમાને અંધારામાં 1 કલાક માટે સેવામાં. બ્લોકીંગ સ્ટેપ પહેલાં 20 મિનિટમાં 50% ઇથેનોલ વોશનો ઉપયોગ ઓરેક્સિન એસિ માટે કરવામાં આવ્યો હતો. પ્રારંભિક izationપ્ટિમાઇઝેશન એસિઝ પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝની યોગ્ય મંદન નક્કી કરવા હાથ ધરવામાં આવી હતી. ઉપયોગમાં લેવાતી પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝમાં સસલું એન્ટી-સી-ફોસ (1: 500) (એસસી -52) અને માઉસ એન્ટિ-સી-ફોસ (1: 800) (બંને સાન્ટા ક્રુઝ બાયોટેકનોલોજી, સાન્ટા ક્રુઝ, સીએ) હતા; માઉસ એન્ટી-જીએડી (1: 1,000), માઉસ એન્ટી-ટાઇરોસિન હાઇડ્રોક્સિલેઝ (1: 500), અને ઘેટાં એન્ટી-ટ્રિપ્ટોફન હાઇડ્રોક્સિલેઝ (બધા ચેમિકોન, ટેમેક્યુલા, સીએથી); સસલું વિરોધી સીઆરએફ (1: 500) (ડ W. વિલી વેલે, સ Instituteલ ઇન્સ્ટિટ્યૂટ, સીએ તરફથી ભેટ); સસલું એન્ટી-એનપીવાય (1: 1,000), સસલું એન્ટી-એજીઆરપી (1: 1,000), અને બકરી એન્ટી ઓરેક્સિન એ (1: 5,000) બધા ફોનિક્સ ફાર્માસ્યુટિકલ (સેન્ટ જોસેફ, એમઓ) માંથી. ઉપયોગમાં લેવાતા માધ્યમિક એન્ટિબોડીઝમાં સાય 3-કન્જેક્ટેડ બકરી એન્ટી-રેબિટ અથવા એન્ટી-માઉસ (જેક્સન ઇમ્યુનોરસેર્ચ; વેસ્ટ ગ્રોવ, પી.એ.), એલેક્ઝા ફ્લોર 488 બકરી એન્ટી-માઉસ અથવા એન્ટી-રેબિટ અથવા ગધેડો વિરોધી ઘેટાં આઇજીજી (મોલેક્યુલર પ્રોબ્સ, યુજેન, અથવા) હતા ; બધા ગૌણ એન્ટિબોડીઝ 1: 500 પર ભળી ગયા હતા. સી-ફોસ / એમસીએચ ડ્યુઅલ ઇમ્યુનોસ્ટેઇનીંગને સીરીયલ ધારણા કરવામાં આવી હતી; પ્રથમ, એમએચસી (1: 2,500 પ્રાથમિક એન્ટિબોડી, મિલિપોર) માટે એલેક્ઝા-Alexa488-બકરી વિરોધી સસલું (૧: 1૦૦) ગૌણ એન્ટિબોડી સાથે. સ્લાઇડ્સને 500% સામાન્ય બકરી સીરમથી ફેરવવામાં આવી હતી અને ગૌણ એન્ટિબોડી તરીકે એન્ટિ-સી-ફોસ (5: 1) અને સાય 500-બકરી એન્ટી-સસલા માટે સ્ટેઇન્ડ કરવામાં આવી હતી. 3-મિનિટ 20% ઇથેનોલ વોશનો ઉપયોગ અવરોધિત પગલા પહેલા એમસીએચ ખંડ માટે કરવામાં આવ્યો હતો.
આંકડાકીય વિશ્લેષણ.
ગ્રુપ ડેટા ટેક્સ્ટ, કોષ્ટકો અને આંકડામાં ± સે અર્થ તરીકે રજૂ કરવામાં આવે છે. મહત્વ તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે P ≤ 0.05. આંકડાકીય તુલના પ્રયોગિક જૂથો (એફઆર વિ. પીઆર) અથવા પ્રાયોગિક જૂથો અને અનુરૂપ નિયંત્રણ (પીઆર વિ. પીઆરસી; એફઆર વિ. t-તેમ. વિવિધ મગજના પ્રદેશોમાં સક્રિય લિવર પ્રેસ અને સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચેના પિયર્સન સહસંબંધ ગુણાંક, તેમજ સમાન પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓમાં વિવિધ મગજના પ્રદેશો વચ્ચે સી-ફોસ અભિવ્યક્તિના સહસંબંધની ગણતરી, સ્ટેટપ્લસની મદદથી કરવામાં આવી હતી: મેક ઓએસ સંસ્કરણ માટે મેક લે આંકડાકીય વિશ્લેષણ પ્રોગ્રામ એનાલિસ્ટસોફ્ટ દ્વારા 2009. અમે રેખીય સહસંબંધ (પીઅર્સન) માટે પરીક્ષણ કર્યું છે R આંકડાકીય) સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે વિવિધ સીએનએસ ક્ષેત્રોમાં. અમે સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે વિવિધ સક્રિય CNS પ્રદેશો અને વર્તણૂંકમાં સહસંબંધની પણ તપાસ કરી. ઉંદરોમાંથી એફઆર અને પીઆર ડેટા, જેના માટે સી-ફોસ ક્વોન્ટિશન હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું, તેનો ઉપયોગ આ સહસંબંધો માટે કરવામાં આવતો હતો.
પરિણામો
સી-ફૉસ ક્વોન્ટિટેશન.
જેમ આપણે અગાઉ અવલોકન કર્યું છે, પીઆર વિ. એફ. એફ. કામગીરી માટે સક્રિય લીવર પ્રેસની સંખ્યા નોંધપાત્ર રીતે વધારે હતી.કોષ્ટક 2), અને એફઆર કામગીરી દરમિયાન સુક્રોઝ પુરસ્કારોની સંખ્યા વધુ હતી. પીઆર ઉંદરો માટે સત્ર લંબાઈ લગભગ 90 મિનિટ (સ્ટોપ ટાઇમ - 30) હતી. કોષ્ટક 3 તમામ સી.એન.એસ. ક્ષેત્રોમાં સી-ફોસ ઇમ્યુનોરેક્ટિવ સેલ ગણનાની સૂચિ છે જ્યાં ક્વોન્ટેશન હાથ ધરવામાં આવ્યું હતું. એફઆર અને પીઆર ઉંદરો માટે સી-ફોસ અભિવ્યક્તિની પેટર્નમાં સારાંશ આપવામાં આવ્યું છે ફિગ 1. મેડિયલ હાયપોથેલામસ (એમએચ.) નું નોંધપાત્ર સક્રિયકરણ થયું હતુંટોટ, સુક્રોઝ માટે દબાવીને પીઆર લીવરમાં રોકાયેલા ઉંદરોના એઆરસી, પીવીએન, આરચીએચ, ડીએમએચ, અને વીએમએચનું મિશ્રણ), પરંતુ સુક્રોઝ માટે દબાવતા ઉંદરોમાં કોઈ ઉંદરમાં એકંદર સક્રિયકરણ, સંબંધિત નિયંત્રણોની તુલનામાં નહીં. પીઆર ઉંદરોના મધ્યસ્થ હાયપોથેલામસમાં, આ સક્રિયકરણ પીવીએન, એઆરસી, અને વીએમએચમાં થયું છે (ફિગ 2). એફઆર લિવર દબાવીને, પરંતુ પીઆર લીવર દબાવીને નહીં, એલએચ (જે મુખ્યત્વે પેરિફૉનિકલ વિસ્તારમાં સક્રિયકરણ પર આધારિત છે) માં નોંધપાત્ર સક્રિયકરણ સાથે સંકળાયેલું હતું. બંને સક્રિય લીવર પ્રેસ અને હાયપોથેમિક સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ FREX અને FR જૂથ વચ્ચે (MHટોટ, 946 ± 26 અને 911 ± 118; એઆરસી, 176 ± 18 અને 186 ± 10; એલએચટોટ, 468 ± 79 અને 378 ± 34; એલએચપીએફ, 200 ± 31 અને 173 ± 15 અનુક્રમે), સૂચવે છે કે FR અને PR જૂથો વચ્ચે અભિવ્યક્તિ પેટર્નમાં તફાવત એ તાલીમ / અનુભવની અવધિ સાથે નહીં પરંતુ ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટલ કાર્યની પ્રકૃતિ સાથે સંબંધિત છે. એફઆર જૂથ માટે, બીએનએસટીમાં સી-ફૉસ અભિવ્યક્તિમાં નોંધપાત્ર વધારો થયો હતો, એબીબીએસટી અને પીબીબીએસટી એમ બંનેમાં જોવા મળ્યો હતો. એફએઆર અને પીઆર લીવર દબાવીને બંને એનએસી શેલમાં વધેલા સી-ફોસ-ઇમિનોપોઝિટિવ ન્યુરોન્સ સાથે સંકળાયેલા હતા; પી.આર. લિવર દબાવીને રોકવામાં આવેલી ઉંદરોમાં વધેલી સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ તરફ નકારાત્મક સંકેત સાથે, એફ.આર. લિવર દબાવીને રોકાયેલા ઉંદરોથી એનએસી કોરમાં સી-ફોસ ગણનામાં નોંધપાત્ર વધારો થયો હતો. પી-ટાસ્ક સાથે સીટી-ફોસમાં વીએટીએમાં વધારો થયો ન હતો, જો કે એફ તરફના કાર્યમાં વધારો તરફ નકારાત્મક વલણ જોવા મળ્યું હતું. છેવટે, સી-ફોસ નોંધપાત્ર રીતે પીઆર માટે પ્રશિક્ષિત ઉંદરોના મગજના સ્ટેમમાં હાઇપોગ્લોસલ (ક્રેનિકલ નેવર XII) ન્યુક્લિયસમાં નોંધપાત્ર રીતે વધારો થયો હતો, પરંતુ FR માટે નહીં.
સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ અન્ય સી.એન.એસ. ક્ષેત્રોમાં જોવા મળી હતી, જેમાં એમિગડાલા અને સેરેબ્રલ કોર્ટેક્સ (ફિગ 3). જો કે, બંને નિયંત્રણ પરિસ્થિતિઓમાં તેમજ પીઆર અને એફઆર કાર્યો સાથે અભિવ્યક્તિનું અવલોકન કરવામાં આવ્યું હતું, જે સૂચવે છે કે પ્રક્રિયા (સંભાળવાની પ્રક્રિયા, પ્રક્રિયા ખંડમાં ચળવળ) ના અચોક્કસ પાસાઓ આ સક્રિયકરણમાં પરિણમી શકે છે. આ પ્રદેશોમાં જથ્થો હાથ ધરવામાં આવ્યો ન હતો. તેવી જ રીતે, એનએક્સઆઈઆઇ સિવાયના મગજ સ્ટેમ વિસ્તારોમાં સક્રિયકરણ અવલોકન કરવામાં આવ્યું હતું, પરંતુ નિયંત્રણ અને કાર્ય-સંબંધિત સ્થિતિઓ બંને સાથે જોડાણમાં થયું હતું, તે પણ બિનસાંપ્રદાયિક ઉત્તેજના અથવા વર્તણૂક સક્રિયકરણમાં ભૂમિકા સૂચવે છે.
અમે વિવિધ સી.એન.એસ. પ્રદેશોમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચેના સંબંધો માટે પરીક્ષણ કર્યું છે. લિવર-પ્રેસિંગ જૂથોના ડેટાને જોડીને, અમને એલએચ અને વીએમએચમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે નકારાત્મક સહસંબંધ મળ્યો; આમ, વીએમએચનું સક્રિયકરણ એલએચ (પીઅર્સન) ની એકંદર સક્રિયતા સાથે સંકળાયેલું હતું R, -0.7986; t = -3.7534; P = 0.0056). ઉપરાંત, અમે એલએચ અને વીટીએ (પેઅર્સન) ના પેરિફornરનિકલ ક્ષેત્રમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે નોંધપાત્ર હકારાત્મક સહસંબંધ નિહાળ્યો R, 0.7772; t = 3.493; P = 0.0082), આ બે પ્રદેશો વચ્ચે જાણીતી મોનોસિનેપ્ટિક કનેક્ટિવિટી સાથે સુસંગત (Ref. માં ચર્ચા જુઓ. 2 અને 13). અમને વીટીએ વિ. એનએએસી-શેલમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે નોંધપાત્ર નકારાત્મક સંબંધ મળ્યો, એફઆર પ્રભાવ માટે અલગથી પરીક્ષણ કરાયું (પીઅર્સન R, -0.9262; t = -4.9125; P = 0.008) અથવા PR પ્રદર્શન (પીઅર્સનનું) માટે R, -0.9897; t = -9.7624; P = 0.0103), જે નિશ્ચિત પ્રદેશો વચ્ચેના પારસ્પરિક પ્રદેશો વચ્ચે જાણીતા પારસ્પરિક ઇનપુટ્સ સાથે સુસંગત છે અને મોટાભાગે નિગ્રા અને વીટીએ (2, 13). અમે વિવિધ સી.એન.એસ. પ્રદેશોમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ અને વર્તન વચ્ચેના સંબંધો માટે પણ પરીક્ષણ કર્યું છે. લિવર-પ્રેસિંગ જૂથોના ડેટાને જોડીને, અમે એઆરસીમાં સી-ફોસ અને સક્રિય લિવર પ્રેસ (પીઅર્સન) વચ્ચે નોંધપાત્ર હકારાત્મક સંબંધ જોયો R, 0.8208; t = 3.8017; P = 0.0067)
સુક્રોઝની સક્રિયતા અને સુક્રોઝ માટે પ્રેરણા સાથે સક્રિય ચેતાકોષોની ઓળખ.
મગજના સ્ટેમમાં, સી-ફોસ-પોઝિટિવ ચેતાકોષોએ TH માટે હકારાત્મક ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ બતાવ્યું નથી, એપિનેફ્રાઇન અને નોરેપિનેફ્રાઇન (અને ડોપામાઇન) માટે રેટ-મર્યાદિત એન્ઝાઇમ; આમ, આ કેટોકોલામિનેર્જિક ન્યુરોન્સ એફઆર અથવા પીઆર કાર્યો દ્વારા સક્રિય થવાનું જણાય છે. જો કે, કેટલાક સી-ફોસ-પોઝિટિવ ચેતાકોષોએ ટ્રિપ્ટોફેન હાઇડ્રોક્સાઇલેઝ માટે હકારાત્મક ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ બતાવ્યું છે, જે સૂચવે છે કે સેરોટોનિન ચેતાકોષોની વસ્તી સક્રિય કરવામાં આવી હતી. બતાવ્યા મુજબ ફિગ 4, એઆરસીમાં, સી-ફોસ-પોઝિટિવ કોષો એજીઆરપી-સ્ટેઇન્ડ રેસા દ્વારા ઘેરાયેલા હતા, અને એનપીવાય ફાઇબર / સી-ફોસ ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ માટે સમાન પેટર્ન જોવા મળી હતી (બતાવેલ નથી). પીવીએન (CV) માં, સી-ફોસ-પોઝિટિવ ચેતાકોષ સીઆરએફ-પોઝિટિવ ચેતાકોષની આસપાસ જોવા મળતા હતા, પરંતુ કોઈ કોલોકલાઇઝેશન જોવા મળ્યું ન હતું (ડેટા બતાવવામાં આવ્યો નથી). ફિગ 5 LH માં ઓરેક્સિન અને એમસીએચ બંને માટે ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ બતાવે છે. ઓરેક્સિન ચેતાકોષ ડીએલએચ અને પીએલએલએચમાં મળી આવ્યા હતા. જો કે અમે પીએલએચમાં એમસીએચ પોઝિટિવ ચેતાકોષો જોયા હોવા છતાં, એલએચના તે પ્રદેશમાં સી-ફોસ સાથે આવશ્યકપણે કોઈ કોલોસીલાઇઝેશન નહોતું. જો કે, અમે પીએલએચની અંદર ઓરેક્સિન-પોઝિટિવ ચેતાકોષમાં સી-ફોસ કોલોક્લાઇઝેશન જોયું છે (ફિગ 6, ટોચ), અને વીએલએચ (VLH) માં એમસીએચ સાથે સી-ફોસ કોલોક્લાઇઝેશન ખૂબ મર્યાદિત છે (ફિગ 6, નીચે). તેને ભારપૂર્વક માનવો જોઈએ કે બંને સ્થાનિકીકરણ અને સી-ફોસ સાથેના કોલોસીલાઇઝેશનને સી.એચ.એચ. જેવા પેપ્ટાઇડ ન્યુરોટ્રાન્સમિટર્સ માટે ઓછું અનુમાનિત કરી શકાય છે, કારણ કે ઉંદરોને કોલેચિસિનની સારવાર આપવામાં આવતી નથી. છેવટે, ન્યુક્લિયસ અંદર કોર અને શેલ accumbens (ફિગ 7), સી-ફોસ કોમીમ્યુનોસ્ટેનિંગ જીએડી સાથે, ન્યુરોટ્રાન્સમીટર જીએબીએ માટે કૃત્રિમ એન્ઝાઇમ, એફઆર અને પીઆર ઉંદરો એમ બંને માટે જોવા મળ્યું હતું. વીટીએ (VTA) ની અંદર TH માટે મજબૂત સ્ટેઇનિંગ હતી; જો કે, સી-ફોસ-પોઝિટિવ ચેતાકોષ ભાગ્યેજ અવલોકન કરવામાં આવ્યાં હતાં અને તે થા સાથે વિશિષ્ટ રૂપે સંલગ્ન હોવાનું જણાય છે.
ચર્ચા
વર્તમાન અભ્યાસમાં, અમે સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ લિવર દબાવવાની પ્રવૃત્તિના પ્રારંભ સાથે સંકળાયેલા તીવ્ર સી.એન.એસ. સક્રિયકરણની પેટર્નનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે તાત્કાલિક પ્રારંભિક જનીન, સી-ફોસની અભિવ્યક્તિનો ઉપયોગ કર્યો હતો, ક્યાં તો પ્રમાણમાં અનિવાર્ય કાર્ય (એફઆર) અથવા એ પ્રગતિશીલ રીતે વધુ પડકારરૂપ કાર્ય, જે સુક્રોઝ જેવા ઇનામની પ્રેરણા માટે પ્રતિબિંબિત કરે છે, અને લિંબિક સર્કિટ્રી (સખત સર્કિટ્રી)22, 24, 49) (પીઆર). સક્રિયકરણની હાયપોથાલેમિક પદ્ધતિઓ, બે કાર્યો વચ્ચે ભિન્ન હતી, એલઆર / લિમ્બિક સક્રિયકરણ એફઆર કાર્યમાં મુખ્યત્વે અને પીઆર કાર્યમાં મુખ્યત્વે મધ્યવર્તી હાયપોથેમિક / લિમ્બિક સક્રિયકરણ સાથે જુઓ (જુઓ ફિગ 1). આ માટે ઘણા શક્ય કારણો છે. પ્રથમ, આ વિરોધાભાસ સી.એન.એસ. માં ગુણાત્મક રીતે વિવિધ અનુભવો તરીકે "નકશા" કરી શકે છે. FR કામગીરીમાં પ્રશિક્ષિત ઉંદરો એક સરળ, ઉચ્ચ-પુરસ્કારની પ્રવૃત્તિની અપેક્ષા રાખશે. પુરસ્કારવાળા ખોરાકની અપેક્ષાએ FR ઉંદરોમાં જોવા મળતા સી-ફોસ પેટર્નને ભારે પ્રભાવિત કરવો જોઈએ. સક્રિયકરણ પધ્ધતિમાં સ્પષ્ટ ગુણાત્મક તફાવત સૂચવે છે કે બીજી શક્યતા - પીઆર પ્રાણીઓને કાર્ય સાથે વધુ અનુભવ હોય છે-તે સંભવ છે તે ઓછી શક્યતા છે, અને આ સીએફએસના અમારા માપ દ્વારા આધારભૂત છે જે ઉંદરના હાયપોથેલામસમાં 20 FR સત્રો પ્રાપ્ત કરે છે. , જે એફઆર ગ્રૂપની જેમ પ્રવૃત્તિ દર્શાવે છે, પીઆર જૂથ નહીં. આ બંને શક્યતાઓને FR ફ્રાન્સીંગની તકલીફને વ્યવસ્થિત રીતે વધારીને અને સીએનએસ સક્રિયકરણમાં ફેરફારોનું મૂલ્યાંકન કરીને પરીક્ષણ કરી શકાય છે, તે કિસ્સામાં, એક સક્રિયકરણ પેટર્નમાં ગુણાત્મક પરિવર્તનની આગાહી કરશે. જો કે, પ્રશિક્ષણ અનુભવોની સંખ્યા કદાચ સીએનએસ સક્રિયકરણ પેટર્ન માટે જવાબદાર નથી, સત્રમાં સુક્રોઝ પુરસ્કારોની સરેરાશ સંખ્યા કદાચ: કદાચ પીઆર કાર્યને "ઓછું વળતર આપવું" અનુભવ તરીકે શીખી શકાય છે, અને આ કાર્યત્મક રૂપે આ સાથે સંકળાયેલ હોઈ શકે છે એલએચ સક્રિયકરણ અભાવ. આમ, સત્રની શરૂઆતમાં સીએનએસ સક્રિયકરણ પેટર્ન એક ઇન્ટરસેપ્ટિવ રાજ્યને પ્રતિબિંબિત કરે છે, જેમ કે કંડિશન કરેલા સ્થાનાંતરણની સ્થિતિ: લિંબિક સર્કિટ્રીની અંદર સક્રિયકરણની મજબૂતાઈ શીખવાની અને પ્રેરણા સાથે જોડાયેલ છે. અમે એફ-સી પ્રાણીઓના મધ્યવર્તી હાયપોથેલામસમાં સી-ફોસ અભિવ્યક્તિની વિવિધતાને ધ્યાનમાં લીધી. ખાસ કરીને પીવીએનની અંદર, આ ભિન્નતા એફ.આર. ઉંદરોમાં માસ્કિંગ સક્રિયકરણ હોઈ શકે છે, જેના માટે સી-ફોસ વિરુદ્ધ એફઆરસી ઉંદરો તરફ વલણ જોવા મળ્યું હતું (કોષ્ટક 3). જો કે, એફ.આર. અને એફ.આર.સી. પ્રાણીઓ વચ્ચે એકંદર મધ્યયુગીન હાયપોથેલામિક સક્રિયકરણ અલગ નથી.
તે નોંધવું જોઈએ કે તેમ છતાં અમારું ધ્યેય સી.એન.એસ. સાઇટ્સને ઓળખવું હતું જે વર્તનની શરૂઆતમાં યોગદાન આપે છે, અસ્થાયી રીઝોલ્યુશન કંઈક અંશે વિચારણા છે. નીચે ચર્ચા કર્યા મુજબ, હવે તેની પ્રશંસા કરવામાં આવે છે કે વાદ્ય અથવા ઓપરેટર્સના વિવિધ ઉપભોક્તાઓ ન્યુરોન્સની વિવિધ વસતીને સક્રિય કરીને મધ્યસ્થી કરે છે (13, 23, 33, 49). અમે સંપૂર્ણપણે નકારી શકતા નથી કે તાત્કાલિક બાર-દબાવવાની અથવા વળતરની તીવ્રતાને કારણે સક્રિયકરણને અમે જે સક્રિયકરણ પધ્ધતિઓએ જોયેલી છે તેમાં કંઈક અંશે ફાળો આપ્યો હોઈ શકે છે. અમારા તારણો, વિશિષ્ટ સી.એન.એસ. સાઇટ્સની ભૂમિકામાં સ્વ-વહીવટ કાર્યના વિવિધ પાસાઓ અથવા ઘટકોમાં વધુ તપાસ માટે આધાર આપે છે, અને આવા અભ્યાસો માટે, અન્ય તત્કાલ પ્રારંભિક જનીનોનું માપ "ઑન" અને "ઑફ" ટાઇમકોર્સ (અલગ-અલગ)36) ખૂબ જ ઉપયોગી થશે.
વિવિધ મગજ પ્રદેશો વચ્ચે સી-ફૉસ અભિવ્યક્તિમાં મળતા સહસંબંધો, ખાસ કરીને લિવ અને વીએમએચ વચ્ચે, અને એલએચ અને વીએટીએના પેરિફૉનિકલ પ્રદેશ વચ્ચે, આ ખાસ પુરસ્કાર કાર્ય માટે હાયપોથેલામિક અને પ્રાથમિક અંગીય પ્રદેશોની જાણીતી કાર્યશીલ જોડાણને સમર્થન આપે છે. (સંદર્ભમાં ચર્ચા જુઓ. 2 અને 13). અમે સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે વિવિધ સક્રિય ક્ષેત્રો અને વર્તણૂંકમાં સહસંબંધની પણ તપાસ કરી. એઆરસી અને સક્રિય લિવર પ્રેસમાં સી-ફૉસ વચ્ચેનો સંબંધ ખોરાકના વપરાશમાં એઆરસી પ્રવૃત્તિની સારી રીતે વ્યાખ્યાયિત ભૂમિકા સાથે બંધબેસે છે (1); અમારા અગાઉના અવલોકન સાથે કે ઇન્સ્યુલિન ઇન્જેક્શન ખાસ કરીને એઆરસીમાં સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ (15); એઆરસીની મહત્ત્વની ભૂમિકા અને તેના એન્ડોર્ફિનેર્જિક ચેતાકોષોની અગાઉની અહેવાલો સાથે, કોકેન સ્વ-વહીવટના સંપાદન અને પ્રભાવમાં (40-42); અને એઆરસીથી એનએસી સુધી ઓળખાયેલી અંદાજો સાથે (17). આમ, એઆરસી સંભવિત વર્તણૂંકમાં ઘણા મહત્વના ઉત્તેજનાની શોધ કરવા અને પ્રાપ્ત કરવા માટે મહત્વની ભૂમિકા ભજવે છે, જેમાં ખોરાક પણ શામેલ નથી. છેલ્લે, અમે પીઆર સુક્રોઝ-શોધની શરૂઆત સાથે પીવીએન અને વીએમએચનું નોંધપાત્ર સક્રિયકરણ નોંધ્યું. આ મેડીઅલ હાયપોથેલામિક ન્યુક્લીની સારી પાત્રિત ભૂમિકાઓ સાથે સુસંગત છે જેમાં ખોરાકના સેવનના નિયમનમાં, એઆરસી સાથે ડાયરેક્ટ સિનેપ્ટિક કનેક્ટિવિટી, અને લિંબિક સર્કિટ્રી સાથે ઓળખાયેલ જોડાણો (1, 27, 37).
એનએસી-શેલ વિરુદ્ધ વીટીએ (VTA) વિરુદ્ધ સી-ફોસ અભિવ્યક્તિ વચ્ચે અમને નોંધપાત્ર નકારાત્મક સંબંધ મળ્યો છે, પછી ભલે એફઆર અથવા પીઆર પ્રભાવ માટે ચકાસાયેલ હોય. તે કંઈક અંશે આશ્ચર્યજનક હતું કે પીઆર અથવા એફઆર સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટ (વિ. સંબંધિત નિયંત્રણો) સાથે જોડાણમાં મજબૂત વીટીએ એક્ટિવિટી જોવા મળી નહોતી. કદાચ આ શોધ આપણા માપનના સમયને પ્રતિબિંબિત કરે છે, કાર્યની શરૂઆતમાં સક્રિય સંભવિત CNS સાઇટ્સ પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરે છે, જેના માટે આ પ્રાણીઓ સારી રીતે પ્રશિક્ષિત હતા. આ શલ્લ્ત્ઝના અવલોકનો અને થિસિસ સાથે સુસંગત રહેશે (44), કે ડોપામાઇન ન્યુરોનલ સક્રિયકરણ અનપેક્ષિત ઉત્તેજના અથવા પુરસ્કારોના માર્કર તરીકે કાર્ય કરે છે, અને આ સક્રિયકરણ તાલીમ સાથે જોડાણમાં ઘટાડો કરે છે. જો કે, તાલીમબદ્ધ પ્રાણીઓમાં સુક્રોઝ લેવા દરમ્યાન સ્ટ્રાઇટલ ડોપામાઇન પ્રકાશન ખૂબ ચોક્કસ અને અસ્થાયી રૂપે અસંતુષ્ટ ઘટના તરીકે જોવા મળે છે (39). આમ, તે શક્ય છે કે આપણે જે વલણો જોયા છે તે મોટા અભ્યાસ જૂથ (એટલે કે, વધુ આંકડાકીય શક્તિ) સાથે નોંધપાત્ર રીતે મહત્વપૂર્ણ રહેશે. અમે એફઆર અને પીઆર સુક્રોઝ લેવાની શરૂઆત સાથે જોડાણમાં એનએસી સક્રિયકરણનું અવલોકન કર્યું. એનએસી ન્યુરોન્સની સક્રિયકરણ અને અવરોધ બંનેને ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટલ પુરસ્કાર પ્રદર્શન સાથે સહયોગમાં જાણ કરવામાં આવી છે, અને સક્રિયકરણ / પ્રવૃત્તિની પેટર્ન તાલીમ અને પર્યાવરણ પર આધારિત છે, અને વર્તનના વિવિધ ઘટકો (દા.ત., અભિગમ, અભિગમ, ઇન્ટેક) સાથે સંકળાયેલ છે (6, 33, 50). ઉપર ચર્ચા કર્યા મુજબ, સી-ફોસનું માપન આવી ચોક્કસ પ્રવૃત્તિને કેપ્ચર કરશે નહીં. કાર્લેઝને સૂચવ્યું છે કે "ઇનામ" મુખ્યત્વે એનએસી ન્યુરોન્સની પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો સાથે સંકળાયેલું છે, એટલે કે, મધ્યમ સ્પાઇની ન્યુરોન્સ (3). આ અમારા અવલોકનો સાથે સુસંગત નથી - મોટાભાગના ઉન્નત એનએસી સી-ફોસ, હેન્ડલિંગ નિયંત્રણો અને ગૅડ સાથે જોડાયેલા સી-ફોસ-પોઝિટિવ ન્યુરોન્સની તુલનામાં, મધ્યમ સ્પાઇની ન્યુરોન્સ (GABAergic) ની સક્રિયતા સાથે સુસંગત છે - પરંતુ અમે વિશિષ્ટ રીતે એનએસી ન્યુરોનલ "ઇન્હિબિશનનું મૂલ્યાંકન કર્યું નથી. ". એનએસી સક્રિયકરણ અને અવરોધ બંને રચનાત્મક કાર્યો દરમિયાન થઈ શકે છે, બંને રચનાત્મક અને અસ્થાયી વિશિષ્ટતા સાથે. આ અભ્યાસના પરિપ્રેક્ષ્યમાંથી, કોઈ એવું નિષ્કર્ષ આપી શકે છે કે એનએસી મોટરગામી સક્રિયકરણમાં યોગદાન આપે છે અને કાર્યના મોટર અને પ્રેરણાત્મક પાસાં બંનેમાં યોગદાન આપે છે તે એનએસી કોર સાથે ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટલ સુક્રોઝ લેવાની શરૂઆતમાં સામેલ છે.
અમે એફ.આર. ઉંદરોમાં બીએનએસટી (અગ્રવર્તી અને પશ્ચાદવર્તી) બંને મુખ્ય પ્રદેશોના સક્રિયકરણને પણ જોયું. બીએનએસટી એ લિંબિક સર્કિટરીનો એક ભાગ છે જે વારંવાર ઉત્તેજના અનુભવો માટે ન્યુરોએન્ડ્રોકિન પ્રતિભાવને સુધારે છે (8, 9), અને મોટા અર્થમાં, પુનરાવર્તિત ઉત્તેજના વિશે શીખવાની સાથે સંકળાયેલું છે. પુનરાવર્તિત તણાવ અનુભવોના સંદર્ભમાં તેની ભૂમિકાને સૌથી વધુ વ્યાપક રીતે સમજાવવામાં આવી હોવા છતાં, અમારી શોધ એ બીએનએસટી માટે વ્યાપક ભૂમિકા સૂચવે છે: બીએનએસટી, સીએનએસના પ્રતિભાવોને પુનરાવર્તિત હકારાત્મક, તેમજ નકારાત્મક અથવા તાણપૂર્ણ ઉત્તેજના માટે સુધારી શકે છે. અમે એફઆરની શરૂઆતમાં આ સક્રિયકરણને જોયું છે, પરંતુ પીઆર, કામગીરી, બીએનએસટી ભરતી એફઆર તાલીમના સુક્રોઝ પુરસ્કારો સાથે જોડાયેલું હોઈ શકે છે. સીઆરએફ ચેતાકોષો પ્રત્યે સીધી સક્રિયકરણનું અમારું નિરીક્ષણ સૂચવે છે કે સુક્રોઝ માટે સહાયક જવાબ આપવો એ મુખ્ય તાણ નથી; જો કે, અન્ય પીવીએન ચેતાકોષમાં સી-ફૉસ અભિવ્યક્તિ તણાવ સર્કિટ્રીના મોડ્યુલેશન સાથે સુસંગત છે (46). હકીકતમાં, ઉલરિચ-લાઇ અને તેના સાથીઓએ અહેવાલ આપ્યો છે કે, વિવિધ ખોરાક / ખોરાક આપતા પરિભાષાનો ઉપયોગ કરીને, સુક્રોઝ ઇન્ટેક પીવીએન કાર્યમાં ફેરફાર કરે છે (47). છેવટે, અમે પીઆર સાથે જોડાણમાં હાઈપોગ્લોસલ નર્વના ન્યુક્લિયસના સક્રિયકરણને જોયું પરંતુ FR કામગીરી નહીં. આનો અર્થ ફક્ત અનુમાનિત કરી શકાય છે; એક શક્યતા એ છે કે સુક્રોઝનો સ્વાદ સુસંગતતા ઉંદરોમાં વધારી શકાય છે જે ઓછી સુક્રોઝ પુરસ્કારોમાં શામેલ હોય છે.
સુક્રોઝ-ક્વેકિંગ અને સુક્રોઝ-લેટીંગ મલ્ટિમોટાટીટી અનુભવ તરીકે માનવામાં આવે છે, તે સમયસર ગતિશીલ છે, કારણ કે ઇન્જેક્શનથી સુક્રોઝની કેલરી સામગ્રીથી સંબંધિત પેરિફેરલ સિગ્નલો પરિણમે છે, તેમજ વસવાટ અને આંતરિક સત્ર એલિએસ્ટેસિયા (25). જ્યારે આપણા સંશોધનએ પેરિફેરલ એન્ડ્રોક્રિન સિગ્નલો, એટલે કે ઇન્સ્યુલિન અને લેપ્ટીનને પ્રભાવિત કરવા માટે ખોરાકના પુરસ્કારને નિયંત્રિત કરવા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું છે, તેના બદલામાં, તેના પ્રભાવો, ટ્રાન્સમિટર્સ અને ન્યુરોપેપ્ટાઇડ્સ દ્વારા સીધી મધ્યસ્થી થઈ શકે છે જે ટૂંકા અથવા લાંબા ગાળાની ભૂમિકા ભજવે છે. ખોરાક અથવા ખોરાક પુરસ્કાર (સંદર્ભમાં ચર્ચા જુઓ. 14). વર્તમાન અભ્યાસ આમાં કેટલીક સમજ આપે છે; અમે ચેતાકોષના કેટલાક સક્રિયકરણને ધ્યાનમાં લીધા છે જે એમ.સી.સી. અથવા ઓરેક્સિન વ્યક્ત કરે છે, બે ન્યુરોપેપ્ટાઇડ જે ઓરેક્સિજેનિક છે. આ તારણો, હકીકતમાં, ખોરાક પુરસ્કારમાં એમસીએચ અથવા ઓરેક્સિનની ભૂમિકાને ઓછો અંદાજ આપી શકે છે, કેમ કે નોન-કોલિસીન-સારવાર કરાયેલા ઉંદરોમાં રોગપ્રતિકારક રસાયણશાસ્ત્રમાં કોઈ શંકા નથી કે આ બંને ન્યુરોપ્પ્ટાઇડ્સની કલ્પનાને મર્યાદિત કરે છે. એલ.એચ.માં સક્રિય ઓરેક્સિન ચેતાકોષોની ઓળખ ખોરાક, ખોરાક પુરસ્કાર અને વધુ સામાન્યકૃત ઉત્તેજના પુરસ્કાર (દા.ત., 5, 7, 29) માં ઓરેક્સિન ચેતાકોષને શામેલ કરવા અસંખ્ય અભ્યાસો સાથે સુસંગત છે. અમે પીએફએલએચ ઓરેક્સિન ચેતાકોષની સક્રિયકરણને જોયું. એસ્ટન-જોન્સ અને સાથીઓ (5) ઇનામ વર્તનમાં એલએચ ઓરેક્સિન ચેતાકોષની વિવિધ વસતીની ભૂમિકાને અલગ કરી દીધી છે અને પ્રત્યેક પુરસ્કારની વિરુદ્ધમાં પીઆરએલએચ ઓરેક્સિન ચેતાકોષ ઉત્તેજિત કરી છે. આમ, અમારી શોધ, એઆરએલએક્સિનમાં ઉત્તેજનામાં ભૂમિકા સૂચવે છે, અને કદાચ સુક્રોઝ લેવા માટે સક્રિય લીવર અથવા સંકેતો તરફ દિશામાન કરે છે.
ભાવિ વિચારણા માટે લાયક એ સ્રોરોઝની વિશિષ્ટતા અથવા સામાન્યીકરણ યોગ્ય પુરસ્કાર તરીકે છે. અમે અહીં નોંધીએ છીએ તે પ્રારંભિક સીએનએસ સક્રિયકરણની પેટર્ન એ ઉત્તેજના તરીકે ખોરાક માટે વિશિષ્ટ છે, અથવા અન્ય લાભદાયી ઉત્તેજનાને સામાન્ય બનાવે છે, તે નિર્ધારિત કરવાનું રહે છે. ઉપર જણાવેલ મુજબ, ખાસ કરીને એફઆર કાર્યમાં, ઘણા સુક્રોઝ પુરસ્કારોના ઇન્જેશનને હોર્મોન પ્રકાશનના મોડ્યુલેશન (ઉદાહરણ તરીકે, cholecystokinin, ઘ્રેલિન, ઇન્સ્યુલિન) અને પેરિફેરલ અને સી.એન.એસ. ન્યુરલ સક્રિયકરણમાં ફેરફાર સાથે મેટાબોલિક પરિણામો હોવાનું અપેક્ષિત છે. આ પરિવર્તન પ્રારંભિક સીએનએસ સક્રિયકરણ દાખલાઓમાં સીધી ભૂમિકા ભજવવાની અપેક્ષા રાખશે નહીં જે અમે માપ્યા છે પરંતુ તાલીમ દરમિયાન સુક્રોઝ પુરસ્કાર વિશે શીખવામાં ભૂમિકા ભજવી શકે છે. ફરીથી, ઓરેક્સિન જેવા ન્યુરોપેપ્ટાઇડ્સ વિવેચનાત્મક રીતે સંકળાયેલા હોઈ શકે છે.
આપણું જ્ઞાન, આપણા જ્ઞાનને, સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટની શરૂઆતમાં ચોક્કસ મધ્યયુગીન હાયપોથેલામિક ન્યુક્લીની સક્રિયકરણનું પ્રથમ નિદર્શન, હોમિયોસ્ટેસિસ અને તાણની જવાબદારીમાં સંકળાયેલ પીવીએન, અને એઆરસી, જે ઊર્જા હોમિયોસ્ટેસિસ માટે નિર્ણાયક છે એમ બંનેનો સમાવેશ કરે છે, પોષક સંવેદના, અને ખોરાકના સેવનની નિયમન. મહત્ત્વની વાત એ છે કે, અમે મેડિકલ હાયપોથેલામસ અને એનએસીના સક્રિયકરણને પીઆર પ્રારંભ સાથે સાંકળીને સૂચવ્યું હતું કે હોમિયોસ્ટેટિક અને કેટલીક અંગત સાઇટ્સ સુક્રોઝ સ્વ-વહીવટની શરૂઆતમાં ભૂમિકા ભજવે છે. વધારાની લિંબિત સર્કિટ્રી સાઇટ્સની કાર્યકાળમાં પછીના ટાઇમપોઇન્ટમાં ભરતી થઈ શકે છે.
દ્રષ્ટિકોણ અને મહત્વ
ઐતિહાસિક રીતે, પ્રેરણાદાયક અને પુરસ્કાર વર્તણૂકોના અભ્યાસો સીએનએસ લિમ્બિક સર્કિટ્રીમાં મોટા પ્રમાણમાં સંકળાયેલા હોય છે, પુરાવાઓનો મોટો ભાગ પ્રાપ્ત કરે છે જે લિંબિક અને ઊર્જા હોમિયોસ્ટેસિસ સર્કિટ્રી વચ્ચેના નિર્ણાયક કાર્યવાહી પર ભાર મૂકે છે. વર્તમાન અભ્યાસ હવે સુક્રોઝ માટે પ્રેરિત કામમાં ચોક્કસ મધ્યયુગીન હાયપોથેમિક ન્યુક્લીની સંભવિત મહત્વ સૂચવે છે. આ અભ્યાસમાંથી બહાર નીકળી જવાથી, ભાવિ અભ્યાસો મૂલ્યાંકન કરી શકે છે કે શું મેડિયલ હાયપોથેલામસની ભૂમિકાની આવશ્યકતા છે અને શું તેના સક્રિયકરણને દુરુપયોગની દવાઓ જેવા અન્ય ઇનામો મેળવવા માટે પ્રોત્સાહન આપવામાં આવે છે. આ ઉપરાંત, આ અભ્યાસના નિષ્કર્ષ સ્થૂળ મધ્યસ્થ હાયપોથેલામિક શરીરવિજ્ઞાન, જેમ કે મેદસ્વીપણું સાથે સંકળાયેલા સંજોગોમાં પ્રેરિત વર્તણૂંકમાં ફેરફારના અભ્યાસ માટે તર્ક આપે છે.
GRANTS
આ સંશોધનને નેશનલ ઇન્સ્ટિટયુટ ઑફ હેલ્થ ગ્રાન્ટ ડીકેક્સ્યુએક્સ દ્વારા સમર્થન આપવામાં આવ્યું હતું. ડો. ડાયઆન ફિગેલવિક્સ લેત્ટમેન એ વરિષ્ઠ સંશોધન કારકિર્દી વૈજ્ઞાનિક, બાયોમેડિકલ લેબોરેટરી સંશોધન કાર્યક્રમ, વેટરન્સ અફેર્સ વિભાગ, પુજેટ સાઉન્ડ હેલ્થ કેર સિસ્ટમ, સિએટલ, વોશિંગ્ટન વિભાગ છે. ડૉ. સિપોલ્સને લાતવિયન કાઉન્સિલ ઑફ સાયન્સ ગ્રાન્ટ 40963 દ્વારા ટેકો આપ્યો છે.
માન્યતા
અમે ડૉ. આભાર. સલાહ અને સહાયક ચર્ચાઓ માટે યવિન શાહમ, સ્ટીફન બેનોટ, ક્રિસ્ટીન ટુરિનિયસ અને જેઈ બેલિવિન્સ.
સંદર્ભ
;