Dopamín D1 viðtaki módreglar hippocampal framsetning plasticity til staðbundinnar nýjungar (2008)

Dýr.

Tíu karlkyns WT-mýs (26 – 33 g) og 7 karlkyns D1R-KO mýs (24 – 29 g) voru notaðar í þessari taugafrumutökuupptöku. Mýs voru æxlaðar á rannsóknarstofu í samvinnu (National Institute for Basic Liology, National Institute of Natural Sciences).

Kynslóð af D1R-KO músum.

Dópamín D músarinnar₁ viðtaka gen var einangrað úr 129 / Sv erfðamengi DNA bókasafns (Stratagene) með blendingum með 884 bp PCR vöru, þar sem grunnpar eru 5′-TCC AAG GTG ACC AAC TTC TTT GT-3 ′ og 5′-CTA TAG CAT CCT AAG AGG GT CGA-3 ′. Miðunarvektorinn var smíðaður til að eyða allri kóðunarröðinni með því að nota eftirfarandi DNA brot: 1.2 kb MC1 promotor-barnaveiki eitur-A brot gen (DT-A) til neikvæðs vals, 2.8 kb BglI-AVRII brot sem inniheldur andstreymis svæði D1R gena músarinnar, 2.3 kb PGK kynningar-Escherichia coli xantín-guanín fosfóríbósýl transferasa gen (gpt), 1.1 kb MC1 promoter-neomycin gen (ný), 6.5 kb AVRII-bamHljóðbrot sem inniheldur 3′-óflutt svæði og flankasvæðið og plasmíðið pBluescript (Fig. 1A). Ræktaðar E14TG2a IV ES frumur (2.5 × 10⁷ frumur) voru transfected með 50 μg af línusniðnu miðunarferlinum með rafsogun 500 μF rýmd, 270 V / 1.8 mm (ECM600, BTX Electro Cell Manipulator), fylgt eftir með vali með G418 meðhöndlun (250 μg / ml) eftir transfection. Alls voru 120 lyfjaónæmir þyrpingar teknir upp og DNA í erfðamengi var tekið til greiningar á Southern blot til staðfestingar á samsöfnun á samsöfnun. D1R-KO mýsnar voru búnar til með því að nota einsleita raðbrigða ES frumurnar í meginatriðum eins og áður hefur verið lýst (Yamaguchi o.fl., 1996; Koera o.fl., 1997). D1R-KO músunum var krossað yfir í C57BL / 6J (B6 / J) stofn í 10 kynslóðir og haldið í B6 / J erfðaefni. DNA úr hala afkvæma var greind með PCR með því að nota fjóra grunna: (grunn a) D1TET-1, 5 ′ CAG AAG ACA GGT GGA AAG CA 3 ′, (grunnur b) mD1Rexon2.seq, 5 ′ TCC GTG ATC GTA GA 3 ′, (grunnur c) neo10, 5 ′ ATC AGA GCA GCC GAT TGT CTG TTG 3 ′, og (grunnur d) D1R3′60R, 5 ′ GTT GGA GAA GTT CTG TAA CTG TCCN. PCR ástand var sem hér segir: denaturation við 3 ° C í 94 mín., Eftir 4 lotur af 30 mín. Við 1 ° C, 94 mín. Við 1 ° C, 60 mín. Við 1 ° C, loka framlenging við 72 ° C fyrir 72 ° C 5 mín., Og geymsla við 4 ° C. Villtýmin og stökkbreytt samsæturnar samsvaruðu PCR afurðum 234 og 460 bp (Fig. 1B), hver um sig. Allar tilraunirnar voru gerðar í samræmi við leiðbeiningar Háskólans í Toyama og National Institute for Basic Liology.

 

Skoða stærri útgáfu: 

• Á þessari síðu
• Í nýjum glugga
• Hlaða niður sem PowerPoint Slide

Mynd 1. 

Myndun D1R-KO músanna og tjáning D1R próteins í heila WT og D1R-KO músa. A, Skematísk framsetning á WT samsætunni, markviglinum og stökkbreyttu samsætu D1R gensins á músinni. Kóðunar- og ósniðið svæði eru sýnd sem lokuð og opin kassi, hvort um sig. Grunnar fyrir PCR arfgerð (grunnar a, b, c og d) eru sýndir sem litlir örvahöfðar sem eru táknaðir með a, b, c og d, hver um sig. A bamHI síða er sýnd með sviga þegar það á við. The barnaveiki eiturefni A undireining (DT-A), E. coli xantín-guanín fosfóríbósýl transferasa (gpt) og neómýsín ónæm (gen) eru sýnd sem opnir kassar. B, PCR arfgerð af villigerð (D1R + / +), arfblendnum (D1R +/−) og einsleitum (D1R - / -) stökkbreyttum músum. PCR vörur frá WT samsætunni og stökkbrigði (KO) eru 234 bp og 460 bp, hvort um sig. C, Western blot með því að nota D1R-sértækt mótefni, leiddi í ljós að D1R prótein var algjörlega fjarverandi frá D1R - / - músum.

Western blot greining.

Heilinn var einsleitur í jafnalausn sem innihélt 100 mm Tris-HCl, pH 6.7, 1% SDS, 143 mm 2-mercaptoethanol og 1% próteasahemil blanda fyrir spendýrafrumur (Nacalai Tesque). Heildarlýser (200 μg af próteini hvert) voru rafskilin á 10% SDS-pólýakrýlamíð hlaup og flutt í Immobilon-P himnu (Millipore). Himnan var stífluð í PBS sem innihélt 10% undanrennu (BD Biosciences) við stofuhita í 30 mín og var ræktað í röð með einstofna mótefni gegn rottum gegn D1R (Sigma, 1: 1000 þynningu), fylgt eftir með ræktun með piparrót peroxidasa-samtengdum geitamótefni gegn rottum IgG (Sigma, 1: 1000 þynning), eða með kanínamótefni gegn aktíni (Sigma, 1: 1000 þynning), fylgt eftir með ræktun með piparrót peroxidasatengdu geitamótefni gegn kanínu IgG (Sigma, 1: 1000 þynning). Ónæmisaðgerð próteinbönd voru greind samkvæmt samskiptareglum ECL uppgötvunarbúnaðarins (GE Healthcare).

Ígræðsla rafskauts.

Mýs voru hýstar aðskildar með 12 klst ljósrás (ljósin kveikt á 8: 00 AM) og höfðu ad libitum aðgangur að mat og vatni. Mýs voru gefnar að minnsta kosti 1 viku við komuna til að aðlagast rannsóknarstofuumhverfinu fyrir tilraunaaðgerðir. Á skurðaðgerðardeginum voru mýs svæfðar (pentobarbital, 40 mg / kg, ip) og ígræddar tvíhliða með einokunarörvandi rafskautum (100 μm í þvermál, ryðfríu stáli) til sjálfsörvunar innan höfuðkúpu í miðju framheila knippisins á stigi aftari hliðar hliðar undirstúku svæði (Franklin og Paxinos, 1997) (fremri, −2.3 mm; miðlungs, ± 0.70 – 0.75 mm; og dorsoventral, −5.3 – 5.4 mm). Færanleg upptökusamsetning sem samanstendur af 2 tetrodes af brengluðum 17 μm nichrome vír (California Fine Wire Company), eða búnt af 8 vír var grætt inn á bakhluta hippocampal CA1 svæðisins (Franklin og Paxinos, 1997) (1.8 mm aftan við bregma, 1.8 mm til hliðar við bregma og 1.4 mm fyrir neðan höfuðkúpu) við sömu aðgerð. Skrúfa skartgripa sem er festur við höfuðkúpuna þjónaði sem jarðskautsskaut í öllum músum. Öradrifið var fest við höfuðkúpuna með því að nota skrúfur skartgripa og tannsement. Rafskautsábendingar voru gullhúðaðar fyrir aðgerð til að draga úr viðnámi í 100–300 kΩ við 1 kHz.

Tilraunatæki og þjálfun landupplýsinga.

Tækjabúnaðurinn fyrir staðbundna verkþjálfun var hringlaga opinn reitur (80 cm þvermál, 25 cm hár veggur); það var hækkað 80 cm fyrir ofan gólfið á körfu með hjólum sem gerðu kleift að snúa og færa opinn reit handvirkt (Fig. 2A). Opni reiturinn var málaður svartur að innan og lokaður af svörtu fortjaldi (180 cm í þvermál og 200 cm á hæð). Loftið í girðingunni innihélt fjóra litla hátalara sem voru festir nálægt ummálinu, með 90 ° millibili á milli, 4 glóperur sem voru settar hver fyrir sig nálægt innri brún hvers hátalara og myndavél í miðjunni. Venjulega var ljósapera tendruð klukkan þrjú og hátalari sendi stöðugt frá sér hvítan hávaða klukkan níu. Kveikt á perunni og hátalaranum sem sendi frá sér þjónuðu sem fjarlægar vísbendingar. Lítill 6 V ljósaperur var settur á höfuð músarinnar. Upptökuvélin (CinePlex, Plexon) breytti raunverulegu myndbandsmerki í tvöfalt merki og fylgdist með láréttri hreyfingu litlu perunnar. Rannsóknartölva (Dell, Precision 380) fékk tölvupóstinn x og y hnit um stöðu músahöfuðsins við 33 ramma / s. Mýs voru þjálfaðar í handahófi til að smíða á víðavangi (Fig. 2B). Fyrir jurtagerðina afmarkaði forrit hringlaga svæði (verðlaunasíður) með miðstöðvar þeirra valdar af handahófi innan torgs sem umritaðir voru á víðavangi, og það kallaði fram afhendingu heilaörvunar umbunar (BSR) þegar músin kom inn á verðlaunasíðuna. Eftir 5 bil, var verðlaunastaðurinn færður á annan stað og endurvirkjaður

 

Skoða stærri útgáfu: 

• Á þessari síðu
• Í nýjum glugga
• Hlaða niður sem PowerPoint Slide

Mynd 2. 

Tilrauna skipulag, landhlutverk og tilraunameðferð. A, Uppsetning tilrauna. Opinn reitur sem innihélt mús var skoðaður frá efstu miðju með CCD myndavél sem gaf merki um stöðu músarinnar. Sem fjarlægar vísbendingar voru glóandi rafperur og hátalarar fyrir hvítan hávaða losað á fjórum jaðarstöðum loftsins. Tölva lagði slóð á músina og stjórnaði afhendingu verðlauna frá örvandi. B, Handahófskennt foraging verkefni: tölvuforrit afmarkaði af handahófi hringlaga verðlaunastað (lítill þykkur rauður hringur). Músin var verðlaunuð þegar hún kom inn á verðlaunastaðinn sem var síðan gerður óvirkur (lítill þunnur rauður hringur). START, staðsetningu músarinnar í byrjun lotu. Rauðir punktar, staðsetningar verðlauna afhendingar. C, Meðhöndlun á kunnuglega opnum vettvangi. Í hefðbundinni lotu (grunnlína 1) var kveikt á peru í stöðu klukkan 3 og hátalari sendi stöðugt frá sér hvítan hávaða við klukkan 9. Í fjarlægðartímabilinu var stöðu fjarlægðar vísbendinganna snúið 180 ° með hólfinu stöðugu. Í nærliggjandi snúningstímabilinu var opna reitnum hólfið snúið 180 °, en fjarlægu vísbendingarnar voru óbreyttar. D, Meðferð í skáldsögunni opnum vettvangi. Ferningur hólf kom í stað hringlaga opins reitsins. Öll meðferðarpróf voru svipuð og notuð voru á þekkta víðavangi. Tímamælikvarði sýnir tímalengd upptöku og millibili.

Einangrun eininga og upptaka.

Upptöku rafskautssamstæðan var háþróaður í HF við ∼20 μm / d. Taugastarfsemi var skráð með hefðbundinni upptökuaðferð þegar mýs fóru í fóðrun. Flókin gaddafrumur voru ákvörðuð með forsendum sem lýst var í fyrri rannsóknum (Ranck, 1973; Foster og Wilson, 2006). Gagnasöfnun hófst þegar hlutfall hljóðmerks og hávaða fór yfir ∼4 sinnum á einni af rafskautunum. Merkingarstækkun, síun og stafræn staðsetning á bylgjulögun með því að nota grundvallargreiningarvettvang voru framkvæmd með Plexon kerfi. Upptekin merki voru magnuð 10,000 sinnum, síuð á milli 0.6 og 3 kHz, stafræn með 40 kHz sýnatökuhraða og geymd á tölvudiski til að flokka utan neta. Stafrænu taugafræðilegu athafnirnar voru einangraðar í stakar einingar með bylgjuformhlutum þeirra með því að nota lína flokkunarforrit (OfflineSorter, Plexon). Yfirlagðar bylgjulög af einangruðu einingunum voru teiknuð til að kanna undantekningartilvikið í upptökum. Hver þyrping var síðan athuguð handvirkt til að tryggja að mörk þyrpingarinnar væru vel aðskilin og að bylgjulögform væru í samræmi við aðgerða möguleika. Fyrir hvern einangraðan þyrpingu var smitatímabil milli mynda og smíðað algert eldfast tímabil að minnsta kosti 1.0 ms til að útiloka grun um margar einingar. Dæmi um tetrode upptöku er sýnt í Mynd 3.

 

Skoða stærri útgáfu: 

• Á þessari síðu
• Í nýjum glugga
• Hlaða niður sem PowerPoint Slide

Mynd 3. 

Dæmi um upptöku margra eininga með tetrode einangruð af off-line flokkara. A, Yfirlagðar bylgjulögun af 4 taugafrumum (a, b, c, d) skráðar af hverri rafskaut (E1-E4) úr tetrode sem samsvarar klasagreiningu í B. B, Klasagreining. The x- og y-axar tákna hámarksgildi merkja í rafskautinu 2 og 1 af fjórum tetrode rafskautunum, hvort um sig. Hver punktur táknar einn taugafrumu sem fór yfir skilgreindan þröskuld. Fjórir umluktir þyrpingar (a, b, c, d) voru greindir. Hvítir þyrpar dreifðir í miðju og vinstra og hægra horn tákna grunnhljóð hávaða og örvunarmerki. Kvörðun: 0.8 ms, 0.5 mV.

Meðhöndlun á hringlaga víðavangi (kunnuglegt umhverfi).

Fylgst var með virkni staðfrumna í hringlaga sívalningsklefa yfir nokkrar 10 mín. Lotur, þar sem mýs leituðu til handahófs um BSR. Taugafrumur voru skráðar í röð í röð til að ákvarða stöðugleika staðsviða milli lotna og magn extramaze (distal) og intramaze (proximal) stjórnunar. Mynd 2C sýnir skýringarmynd til að prófa raðtíma. Í hefðbundinni lotu (forskipting, grunnlína 1) var fylgst með taugafrumuvirkni meðan mýs voru fóðraðar á hringlaga opna sviði með hátalara sem sendi stöðugt frá sér hvítan hávaða við klukkan 9 og glóandi rafperu var kveikt á 3 o ' klukkustaða. Taugafrumur voru síðan skráðar í distal cue rotation og proximal cue rotation session. Í dreifingartímanum fyrir distal var staða distal cues snúið 180 ° meðan hólfinu var haldið stöðugu. Í nálægri vísbendingunni var hólfinu snúið 180 ° meðan fjarlægu vísbendingarnar voru óbreyttar. Eftir hverja meðferð á distal eða proximal fundum var tekin upp viðbótarlota með því að distal og proximal vísbendingum var skilað til venjulegra skilyrða. Þar sem margar lotur voru skráðar í röð var músin venjulega ekki aftengd upptökustrengnum á milli lota. Við gerðum enga meðferð til að trufla landlæga stefnu dýrsins. Fyrir og eftir hverja upptökufund hvíldi músin á kassa sem var settur á stall utan við upptökuhólfið í 5 mínútur.

Meðhöndlun á torginu á víðavangi (skáldsöguumhverfi).

Staðarfrumur voru síðan skráðar á nýjan opinn reit sem músin var útsett fyrir í fyrsta skipti. Nýja opna reitinn var ferningur hólf (stærð 55 × 55 cm, 25 cm hæð) sem kom í stað kunnuglegs opins reits. Tvö sams konar fermetra hólf voru notuð til skiptis. Raðir meðferðar í nýja umhverfinu voru svipaðar og notaðar voru í kunnuglega umhverfinu (Fig. 2D). Fyrir hverja lotu í annað hvort þekktu eða nýju umhverfi var gólfið hreinsað með 0.5% Hibitan lausn (Sumitomo Company).

Setjið svæðið afmörkun.

Að deila heildarfjölda toppa með uppsöfnuðum dvalartíma í hverjum pixla fyrir alla lotuna skilaði skothríðarkorti. Dreifingarkortið á hleðsluhraða pixla var táknað með litaskala með pixelstærð 2.4 × 2.4 cm. Dílar sem músin hafði ekki heimsótt á opnum vettvangi eru sýndar í gráu, og þeir sem músin heimsótti en klefinn hefur aldrei skotið frá eru af hvítum pixlum. Hraðahraði hærri en núll var metinn á stigandi mælikvarða þar sem litavogirnir voru blágrýti, blár, grænn, gulur og rauður. Pixlar með hleðsluhraða hærri en tvöfalt meðaltal eru sýndir sem rauðir punktar. Staðarreitir voru afmarkaðir sem þyrpingar pixla þar sem skothraði var meiri en tvöfalt hærra en meðaltal hleðsluhraða fundanna. Hægt væri að halda áfram staðreit um hvaða brún sem er deilt með tveimur pixlum sem uppfylla viðmiðið en ekki í gegnum hornin. Ef einn eða fleiri nálægir punktar uppfylltu viðmiðið var reiturinn stækkaður til að innihalda punktana. Hver viðbótar pixla var síðan prófuð á nærveru nálægra pixla sem uppfyllti viðmiðið. Þegar engir nálægir pixlar fullnægðu viðmiðinu voru mörk svæðisins greind. Lágmarks reitstærð staðartengdrar frumu var stillt á 9 pixlar. Ósamræmdir plástrar af aðliggjandi pixlum sem innihéldu verulega aukið skothraða voru skilgreindir sem „undirsvið“ ef þeir fullnægðu ofangreindu viðmiði um staðareitina.

Hefðbundin fundagreining.

Fyrir hverja staðtengda taugafrumu var hleðsluhraða samsætunnar á venjulegu lotunni notað til að ákvarða (1) stærð svæðisreitsins; (2) meðalhleðsluhlutfall í heild; (3) meðalhraðahraði innrásar; (4) meðaltal hraðastigs á útivelli; (5) hámarkshraðahraði innherja; (6) dreifð; (7) landstjórnun; (8) landhlutfall; og (9) innihald landupplýsinga (bitar / gaddur). Þessar greiningar voru gerðar með áður lýst aðferð (Wiener o.fl., 1989; Skaggs o.fl., 1993; Jung et al., 1994; Hetherington og Shapiro, 1997; Shapiro o.fl., 1997). Gildi þessara breytna voru borin saman milli tveggja músahópa sem notuðu nemanda t próf. Í stuttu máli var stærð staðreitsins metin sem hlutfall staðreitsins yfir vettvanginn sem heimsótt var. Meðalhleðsluhlutfall var reiknað sem heildarfjöldi toppa sem var skotið innan setu deilt með lotutímanum. Meðalhraði innra innkeyrslu og meðalhýsi var ákvarðað sem meðaltal hraðastigs frumunnar innan og utan staðreitsins. Hámarkshraðahraði innrásar var hæsta hraðastig allra pixla með staðreitinn. Landstilla á klefanum var ákvörðuð sem hlutfall meðalhleðsluhraða staðreitsins og meðalhleðsluhraða útivallar (Wiener o.fl., 1989). Samræmi landhluta var reiknað með því að framkvæma z-umbreytingu í fylgni milli hraðans í pixel og meðalhraðans í aðliggjandi pixlum. Landupplýsingar (Inf) merktar af hverri einingu (Skaggs o.fl., 1993) var reiknað með eftirfarandi jöfnu: þar sem R er meðaltal hleðsluhlutfalls lotunnar, r_i er gengi í pixla iog P_i er líkurnar á því að músin hafi fundist í pixla i.

Distal snúningur, proximal rotation og remapping greiningar.

Til að mæla snúning staðarreita milli mismunandi funda með umhverfismeðhöndlun (snúningur á fjarlægum eða nálægum vísbendingum) var snúnings fylgni stig mæld fyrir hverja staðfrumu. Tunnurnar voru sléttaðar með því að endurreikna skothraða hverrar tunnu sem meðaltalið af sjálfu sér og aðliggjandi ruslafötum. Fyrir hverja klefi, (1) var fylgni Pearson vöru-augnabliks milli skothraða fylkisins í upphaflegu lotunni og að í annarri lotunni með umhverfismeðhöndlun var mæld, og síðan (2) magn snúningshraða skothraða kortanna var magnað á milli fundarins. Þetta síðastnefnda gildi var ákvarðað með því að snúa skothraða korti annarrar lotunnar í 5 ° snúningshraða til að ákvarða stöðuna þar sem snúið skothríðarkortið var í hámarki tengt skothraða korti upphaflegu lotunnar. Snúningshornið sem gaf mesta fylgni var tekið sem það magn sem svæðisreiturinn hafði snúist á milli tveggja lotanna og klefi var réttlætanlegur eins og hann fylgdi vísbendingunum ef staðreitir þess færðust> 50% af horninu sem var snúið við tiltekna vísbendingu fundi miðað við fyrri grunnlotu. Aðgerðirnar fyrir frávik skothríðanna (endurkorta) í hólfunum tveimur voru einnig reiknaðar. Fruma var talin endurmappa ef hún uppfyllti eitt af eftirfarandi skilyrðum: (1) fruman hætti að skjóta eftir að hafa orðið fyrir skáldsögunni, (2) fruman varð öflugri virk í skáldinu en í hinu kunnuglega hólf, (3) reiturinn færðist á stað sem skarast ekki í stöðu og stefnu við fyrri stað í kunnuglegu hólfinu.

Sjónskerpapróf.

Breytt sjónræn klettapróf (Fox, 1965; Crawley, 2000) var notað til að prófa sjónskerpu músanna okkar. Trékassi (46 cm × 46 cm) með láréttu plani sem er tengt lóðréttri falla (48 cm), sem síðan tengdist lægra láréttu plani við hlið lóðrétta fallsins. Svartur og hvítur afritunarpappír með mynstri sem huldi yfirborð lárétta flugvéla og lóðrétta falla. A lak af gagnsæjum Plexiglas huldi klettinn. Rammi af áli (2.54 cm breiður og 3.8 cm þykkur) var komið fyrir á brún klettans. Báðar hliðar tækisins voru mjög upplýstar. Þeyturnar voru fjarlægðar fyrir sjónskerpuprófið til að útrýma áþreifanlegum upplýsingum. Tveir hópar með hvorum 10 fullorðnum körlum úr D1R-KO og WT músunum voru notaðir. Músinni var komið fyrir á miðjuhryggnum í byrjun allra 10 rannsókna í röð (eftir 5 rannsóknir var tækinu snúið 180 ° og 5 fleiri rannsóknir voru gerðar). Þegar músin valdi að stíga niður á lárétta köflóttu yfirborðið var litið á það sem „jákvæð“ viðbrögð en músin sem steig niður á klettabrúnina var talin „neikvæð“ viðbrögð. Tíminn sem músin tók að stíga niður frá miðjuhryggnum var skráð sem seinkun svara.

Histology.

Eftir að áætlað var að upptöku rafskautanna færu fram undir pýramídafrumulaga í hippocampal CA1 voru staðsetningar upptökurafskautanna sagnfræðilega staðfestar. Mýs voru svæfðar djúpt með pentobarbital natríum (40 mg / kg ip). Rafgeislun (30 μA neikvæður straumur fyrir 15 s) var beitt í gegnum upptöku rafskautin. Músin var blandað með 0.9% saltvatni fylgt eftir með 10% buffuðu formlegu saltvatni. Heilinn var fjarlægður og festur í 30% saltlausn í viku. Gáfarnir voru settir í kransæða (50 μm) á frystingu smágráðu og litaðar með kresýlfjólubláum.

Staðfesting rafskautsstaðsetningar. Staðsetning upptöku rafskautaábendinga (svörtum fylltum hringjum) fyrir WT-mýs (A) og D1R-KO mýs (B) notuð við tilraun einingarinnar. Plötum var breytt til að líkjast þeim frá Franklin og Paxinos (1997). Tölur við hliðina á hverjum kafla samsvara millimetrum frá bregma.

Samanburður á hippocampal hleðslueiginleikum staðfrumna í WT og D1R-KO músum í kunnuglegu umhverfi

Fjöldi hippocampal staðfrumna í WT og D1R-KO músum prófaðar á svörum þeirra við breytingum á distal og proximal vísbendingum í bæði kunnuglegu og skáldsögulegu umhverfi

Áhrif breytinga á staðbundnum samskiptum milli distal og proximal vísbendinga á hippocampal staðatengda virkni í WT músum í kunnuglegu (1 – 5) og skáldsögu umhverfi (6 – 10). A, Í hinu kunnuglega umhverfi hafði staðhólf stað fyrir skothríð í kringum klukkan 9 (1) í hefðbundinni lotu og staðsvið hennar færðist yfir í klukkan 3 (2) í fjarlægðartímabilinu , aftur í sömu stöðu (3) og í hefðbundinni lotu í grunnlínu 2 lotu, engin vakt (4) í nálægum snúningsfundi, og engin breyting (5) á endurkomu þar sem upptökuhólfinu var skilað til eðlileg staða. Í skáldsögulegu umhverfinu fylgdi staðsetningarsértæk skothríð þessa frumu einnig eftir fjarlægum vísbendingum (6-7), en ekki nálægum vísbendingum (8-9). B, Staðarfrumur var með staðreit sem fylgdi ekki snúningi distal vísanna (1 – 2) en fylgdi proximal vísunum (3 – 4) í kunnuglega umhverfinu. Staðarreitur þessarar frumu var endurgerður í skáldsöguumhverfinu þegar staðarsvið hans virtist andstætt því sem þekkist í umhverfinu, en fylgdi samt snúningi nærlægu vísanna (8 – 9). C, Staðarfrumur hafði staðreit sem fylgdi breytingunni á bæði fjarlægu vísunum (1 – 2) og nálægum vísum (3 – 4) í kunnuglega umhverfinu. Athyglisvert er að í skáldsöguumhverfinu fylgdi staðarsvið þessarar frumu eingöngu fjarlægu vísurnar (5 – 6), ekki nærlægu vísurnar. Myndir af ljósaperum og hátalara við hlið skothríðarkortanna sýna fyrirkomulag þeirra við meðhöndlun skilyrða fjarlægra og nærlægra vísbendinga. Snúningsörvarnar segja til um snúning upptökuhólfsins í næstum snúningsstund. Litamælikvarðatöflur hægra megin við skotakortin sýna kvörðun fyrir hraðastigið. Tölurnar í feitletruðum og sviga til hægri á skothraðakortunum gefa til kynna hleðsluhraða innrásar og utandyra, hvort um sig. Grænu opnu reitirnir fylgja skothríðarkortunum til að leggja áherslu á fundina þar sem staðreit frumunnar hafði snúist.

Áhrif breytinga á staðbundnum samskiptum milli distal og proximal vísbendinga á hippocampal staðatengda virkni í D1R-KO músum í kunnuglegu (1 – 5) og skáldsögu umhverfi (6 – 10). A, Dæmigerð staðarfrumur hafði staðreit sem fylgdi ekki snúningi á fjarlægu vísunum (1 – 2), en fylgdi snúningi nálæga vísanna (3 – 4) í kunnuglegu umhverfi. Í skáldsöguumhverfinu var staðarsviði þessarar frumu ekki breytt með hvorki distal né nálægum bendingum. B, Annað dæmi um staðfrumu þar sem staðtengd virkni fylgdi ekki snúningi á fjarlægu vísunum (1 – 2) en fylgdi snúningi nálægra vísanna (3 – 4) í kunnuglega umhverfinu og þessi klefi svaraði á svipaðan hátt í skáldsöguumhverfinu (6 – 10). Athugið að engar staðfrumur í D1R-KO músum fylgdu breytingunni á fjarlægu vísunum. Aðrar lýsingar eru eins og þessar Mynd 2.

Dreifingarrými landgildisgilda á móti snúningshornum sem framleiddu hámarks fylgni gildi milli para af fundum fyrir hippocampal staðfrumur í WT og D1R-KO músum. Snúningshorn eru táknuð á abscissa og staðbundin fylgni gildi milli para af fundum eru táknuð á hnitinu; bláfylltir demantar eru fyrir WT mýs og rauðir opnir reitir fyrir D1R-KO mýs. A – D, Í kunnuglegu umhverfi voru tvær undirflögur staðfrumna í WT-músum þar sem staðreitir voru undir áhrifum af fjarlægum vísbendingum (dreift um 180 °, venjulegt lotu samanborið við dreifingarröð)A) og nálægar vísbendingar (dreift um 180 °, grunnlotu 2 samanborið við nálæga snúningshreyfingu) (C), með áhrifum distal vísbendinganna sem eru aðallega yfir nærliggjandi vísbendingum. Fyrir D1R-KO músir færðu engar staðfrumur staðreitina sína með snúningi á fjarlægu vísunum (allt í kringum 0 °) (A), og flestar frumur færðu staðreitina sína með snúningi á nærlægu vísunum (C). E-H, Í skáldsöguumhverfinu eru aðaláhrif distal vísanna (E) yfir nálægar vísbendingar (G) sást enn og var meira áberandi í WT músum. Hjá D1R-KO músum svöruðu aðeins fáar frumur snúningi á distal vísunum (E) og nálægar vísbendingar (G), og margar frumur fylgdu hvorki breytingum á fjarlægum né nærlægum bendingum í skáldsöguumhverfinu.

Niðurstöður sjónskekkjuprófs í WT og D1R-KO músum