MENT COMAN: Her çend hem stres, hem dermanên tiryakê û hin xelatên siruştî rê li berhevdana DeltaFosB vedihewîne, stres li hucreyên jêrîn û piştre yên receptor û genên cûda çalak dike. Bi gotinên din, addiction û berxwedana li dijî stresê li ser bingeha mekanîzmayên cûda yên bingehîn ve girêdayî ye
J Neurosci. 2010 Oct 27; 30 (43): 14585-92.
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ.
Kanî
Fishberg Department of Neuroscience, Mount Sinai School of Medicine, New York, New York 10029, USA.
Abstract
Mekanîzmayên mêjî yên ku di bin stresê de ne - û adaptasyonên neuralîkî yên derman-derman in bi tevahî têne fêm kirin. Yek molekulek ku di adaptasyonên bi vî rengî de tê de ye ΔFosB, faktorek transkriptasyonê ye ku di navbêna rodent de akumulasyonê (NAc), herêmek xelatkirina mêjî ya sereke ye, di bersivê de an stresê kronîk an rîskê dubare li narkotîkên tacîzê. Tew mekanîzmayên veguhastinê li jor ku kontrola indifasyona ΔFosB ji hêla van derûnên hawîrdorê venexwar dimîne. Li vir, em faktora vegotinê ya bi çalakiyê ve girêdayî, faktora bersivdayîna serum (SRF), wekî raveyeka rohnî ya li jêr stresê nas dikin-, lê ne kokain-, ΔFosB induced. SRF di NAc de hem ji nexweşên mirovî depresyonî û hem jî di mîzan de kronîk bi stresa têkbirina civakî ve têne xuyang kirin. Ev kêmkirina SRF di heywanên zehfî de neçar e. Bi karanîna mutagenesisê inducible, em destnîşan dikin ku induction-destê-stresê ya ΔFosB, ku bi piranî di mîzên elastîk de pêk tê, bi îfadeya SRF ve girêdayî ye li vê herêma mejî.. Digel vê yekê, betalkirina genetîkî ya NA-SRF-ê SRF cûreyek fenotypes-ê-û-pro-hestiyariyê pêşve dike û heywanan ji bandorên xeternak ên ji stresiya kronîk re hestyartir dike. Berevajî vê yekê, em diyar dikin ku SRF di bersivdayîna ji kansera kronîk a kronîk de rolek di mezinbûna ΔFosB-ê de NAc tune. Digel vê yekê, nokera narkotîkî ya NAC-ê ya SRF ti bandorek li ser tevgerên bi sedema kokainê nişan dide, destnîşan dike ku stresa têkçûna civakî ya kronîk û derketina kokainê ya dubare bihevrebûna ΔFosB û hişmendiya behrê bi navgîniya mekanîzmayên serbixwe vedihewîne.
Pêşkêş
Nucleus accumbens (NAc), herêmek xelatkirina mêjî ya bingehîn e, ji bo yekkirina inputên hişmendî û cînayetî yên ku di bersivên stimulên jîngehê de behreyên têkildar ên motîfîxwaz dimeşînin (Nestler û Carlezon, 2006; Sesack and Grace, 2010). NAc di heman demê de di nav aloziyên behrê de ku bi narkotîk û depresiyonê ve girêdayî ye jî hate destnîşankirin. Li gorî vê yekê, armanckirina NAc bi mezinkirina mêjî ya kûr hate destnîşankirin ku karûbarên depresiyonê-û addiction-wekhev hem li mirov û hem li rodiyan (Schlaepfer et al., 2008; Vassoler et al., 2008; Heinze et al., 2009; Kuhn et al., 2009).
Exposureareserkirina dermanên narkotîkê ya tacîzê an jî stresê di nav NAc de modelên guhartî yên derbirînê yê giyanê dihêle, potansiyel di bin kronîkiya addiction û depresiyonê de (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Maze et al., 2010; Vialou et al.) ., 2010). Balkêş e, faktora transkriptinê ΔFosB, hilberek parçeyek jenosîdê fosB e, di bersivdayîna dermanê dubare an zexta stresê de bersivê NAC digire (Nestler, 2008; Perrotti et al., 2008; Vialou et al., 2010). ΔFosB wekî guhezek mîkrokerek potansiyonê tête pêşniyar kirin ku rêberiya ku ji karanîna narkotîkên rekreative derbasî rewşa kronîk a addiction (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Renthal et al., 2009) ve hatî rêve kirin, wekî ku akumulasyona wê di NAc de zêde dike. bersivên xelatkirina gelek narkotîkên tacîzê. Di van demên dawî de, rola induction ΔFosB li NAc li dû stresê têkçûna civakî ya kronîk (Nikulina et al., 2008; Vialou et al., 2010) ve hatî zelal kirin: ΔFosB bersivên tevlihev ên aktîf li ser stimulên streskariyê pêşde dike û elaletiyê zêde dike.. Tevî ku induction ΔFosB bi rengek birêkûpêk-stimulus pêk tê, mekanîzmayên berpirsiyarî yên ji bo dabeşkirina FFosB-DFosB-ê ku di NAC-ê de derman-û stres têne deranîn ne diyar in.
Faktora bersiva serûmê (SRF) faktorek transkrîpsiyonê ye ku ji bo çalakkirina transkrîpsiyonê ya girêdayî çalakiyê ya girêdayî çend genên zûtirîn ên yekser, ku di nav de c-fos, fosb, Egr1, û Arc jî heye (Knöll and Nordheim, 2009) pêdivî ye. Lêkolînên nû bandorên SRF-ê li ser taybetmendiyên morfolojîk û cytoarchitectural ên neuronan, di nav de birêkûpêkkirina çalakiya synaptic û damezrandina rêgezên di mejiyê mezinan de nîşan dane (Knöll and Nordheim, 2009). Van dîtinan ji me xwest ku em lêpirsîn ka SRF bi fonksiyonel ji hêla kronîk vegirtina dermanên destdirêjiyê an stresê ve tê rêkûpêk kirin, û her weha bandora potansiyel a verastkirinê ya li ser derxistina ΔFosB di bin van mercan de.
Li vir, em mekanîzmayek nûjen vedibêjin ku bi rêkûpêkkirina nizmkirina SRF di NAc de fenotîpên prodepresant û anksiyojenîk pêşve dibe, û di encamê de lawazbûna heywanek li hember bandorên xirab ên stresa kronîk. Van bandorên, bi qismî, bi windabûna derxistina ΔFosB di NAc ajalên streskirî de têne navbeynkar kirin. Di şiroveya SRF û ΔFosB de di şaneya NAc a piştî mirinê de ku ji nexweşên depresiyon hatî stendin kêmbûnên berbiçav têkildarî dîtinên me bi depresiyona mirovan re piştgirî dikin. Bi balkêşî, ev mekanîzmaya kontrolkirina berhevkirina ΔFosB xuya dike ku zexm-stres e: bandora kokaîna kronîk li ser derbirîna SRF tune, jêbirina SRF ji NA bandorê li berhevkirina ΔFosB li dû kokaîna kronîk a kronîk nake, û jêbirina wusa SRF li ser kokaîn çênabe- tevgerên hanê. Ev têkiliya nû ya di navbera SRF û ΔFosB de, di çarçoveya stresê de, dibe ku mekanîzmayek homeostatîk a girîng a ku hestiyariya kesek a li hember stresa kronîk birêve dibe, temsîl bike.
Alav û Rêbaz
Animals
Pêncî hefte yên C57BL / 6J mûçikên mêr (Labor Jackson) di hemî ceribandinên behre û biyolojîk de hatin bikar anîn. Hemî heywan bi kêmî ve 1 hefte beriya manipulasyonên ceribandî li avahiya heywanê hatin xwedan û li ad Xweser a 23 h ronî / tarî ya xNUMX ° C (25 AM heta 12: 7 PM) li 00-ê hate domandin. gihîştina xwarin û avê. Tecrubeyên li gorî rêberên Civata Neuroscience û komîteya sazûmaniya lênêrîn û karanîna heywanan li Dibistana Dermanê ya Mountiyayê Sinai pêk hatine.
Ji bo ezmûnên kokainê [Bêmalkirina rojavayî ya kemolînal û hûrgelê chromatin (ChIP)], xNUMX- ber 8-hefteya paşîn a mêrên C10BL / 57J-ê-heft-salî hate bikar anîn. Heywanan heft salîn an jî şekir an kokainê heft injeksiyonên intraperitoneal (6 mg / kg kokain-HCl; Sigma) digirin. Mice piştî dermankirina dawîn di xNUMX h de hate bikar anîn. Ji bo ceribandinên behre, mişk bi şûn de posturgerya malê têne damezrandin û bi 20 mg / kg (hişmendiya locomotor) an 24 mg / kg (pêşdestiya cîhê şertkirî) cocaine-HCl intraperitoneally têne dermankirin, mîna ku li jêrê tête diyar kirin.
Mrokên Srffl / fl wekî berê hatine destnîşan kirin (Ramanan et al., 2005). Nak-taybetî ya Srf-ê ji Srf-ê re bi vegirtina stereotaksî û paşê vegirtina vîrusê ya Cre recombinase (Cre) têkildar bi proteîna fluorescent kesk (GFP) bi karanîna vektorên adeno-têkildar (AAV) ve hate bidestxistin. Creek nonself-jêbirin hate karanîn. AAV-GFP li cîhê AAV-Cre-GFP-ê di mrokên Srffl / flê de wekî kontrola hate şixulandin. Bi kurtî, mîkan bi karanîna hevamek ketamîn (10 mg / kg) û xylazine (10 mg / kg) hate şehît kirin, bi koordînasyonên stereotaksîkî yên jêrîn ên ku ji bo radestkirina virusê têne bikar anîn: + 1.6 (pêşîn / paşîn), + 1.5 (paşê), - 4.4 (dorsal / ventral) li zeviyek xNUMX ° ji midline (ji bregma re têkildar). Bi tevahî 10 μl vîrusê paqijkirî bi dirêjahî di navberek xNUMX min de (bi xNUMX μl / min) bi baldarî ve hat veguhestin, li dû min xilasiya 0.5 min. Mîzan hefteyên şûnda 5 piştî ceribandinê hatin ceribandin, dema ku vegotina vîrus pirtirîn bû, û deverên vegirtina vîral ji bo hemî heywanan bi karanîna rêbazên histolojîk standard hatin pejirandin. Karbidestiya derbirîna Cre-bi navgîniya virusê ve ji hêla immunohistochemistry û ji hêla reverse-transcriptase PCR ji bo Srf ve hatî rêve kirin li ser cûrbecûr NAcên NAc ên ji heywanên ku ji AAV-Cre-GFP û AAV-GFP re hatine nav NAC de hatine çêkirin derbasdar bû. Vîrusên AAV-GFP û AAV-Cre-GFP wekî ku berê hatine şirovekirin (Maze et al., 0.1).
Karûbarên behreyî
Şertê civakî
Mişkên C57BL / 6J ji bo rojên domdar ên 10 bi stresê têkçûna civakî ya kronîk re rûbirû bûn, wekî ku berê hate gotin (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Bi kurtahî, her mişk ji bo 1 min per roj perçeyek mîkrokerê xwerû CD5 mirovekî naskirî û xedar hate derxistin. Li dû danûstendina rasterast a bi agirbesta CD1, hingê heywan li qamyorek cîranek heman cemaetê ji bo 24 next h bi têkiliya hişmendî, lê ne bi laşî re hatin danîn. Heywanên kontirolê li kozikên wekhev lê digel endamên heman strain rûnişkandin. Testên danûstendina civakî piştî roja dawî ya têkçûnê bi 24 h hate kirin.
Dûrgirtina civakî ji mişkê zilamek nenas CD1 re li gorî protokolên weşandî hate nirxandin (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Mişk ceribandî yekem carî di nav zeviyek vekirî de ku ji bo 2.5 hûrdanê qefesa têl a vala tê de hate destnîşan kirin. Di dema danişîna duyemîn de, mişkek zilam CD1-a nenas hate nav qefesa têlkirî. Dema ku li herêma danûstendinê (korîdorek bi dorfirehiya 8 cm-dorpêça qefesê) derbas bû hate pîvandin. Veqetandina mişkên têkçûyî di bin nifûsa hestiyar û nermik de wekî ku berê hatibû vegotin hate kirin (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Ji ber ku pirraniya mişkên kontrolê bêtir wext bi têkiliyek bi hedefek civakî re derbas kirin ji bilî bi dorpêçek vala valahî, rêjeya danûstendinê ya 100 (dema wekhev a ku li herêma danûstendinê derbas bû li beramberî tunebûna hedefek civakî) wekî birrînek hate danîn. Mişkên bi pûanên <100 wekî hestiyar hatin nîşankirin, û yên ku bi pûanên ≥100 ve wekî berxwedêr hatin nîşankirin. Analîzên berfireh ên reftarî, biyokîmyayî, û elektrofîziyolojîkî piştrastiya van subpopulasyonên berbiçav û berbiçav piştgirî dikin (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010).
Ji bo ceribandina qelsiya mîzên Srffl / fl ji stresê têkçûna civakî, mêzan, ku bi AAV-GFP an AAV-Cre-GFP-ê ve bi dualî hatine vegirtin, di heman rojê de rastî sê têkçûyên xerîbiyê hatin û paşê ji bo danûstendina civakî hatin xilas kirin. Vê prosedûra têkçûna submaximal berê hate pejirandin da ku fenotypên prosesansîtiyê li dû manipulasyonên genetîkî eşkere bike (Krishnan et al., 24; Vialou et al., 2007).
Helbest fêr bûn.
Pêlên Srffl / flê ku AAV-GFP an AAV-Cre-GFP bertek nîşan didin, li gorî prosedurek xêrhatî ya hînkirî, wekî ku berê ve hatî şirove kirin (Berton et al., 2007). Bi kurtahî, mişk ji bo 1 h li ser rojên mêvandarên 2 hûr (xNUMX mA, dirêjahiya 0.45 s) ji bo xNUMX h têne rawestandin. Di roja ceribandinê de, mişk ji bo ceribandinên revînê yên domdar ên 5 ji nû ve hatin xistin. Di her ceribandinê de, şokek domdar hate şandin û mişk ji wan re hat ku ji têketina li quncikê nêzî, neelectrîfkirî derkevin. Piştî revînek serfiraz, derî bixweber hat girtin û qewimîna revê hate tomarkirin. Gava ku moşen di nav 15 s de neçû, darizandin hate bidawîkirin û wekî têkçûn hate tomar kirin. Lêkolînên pêşîn destnîşan kirin ku îfadegirtina virusê li NAc û deverên din di tunebûna stresê de bandora rêveçûna revê ya bingehîn tune (Newton et al., 25; Berton et al., 2002).
Sensomasyona locomotor.
Du hefte piştî derzîkirinên nav-NAc ên AAV-GFP an AAV-Cre-GFP, mêşên Srffl / fl ji hêla hesasiyeta lokomotîv ve hatin derbas kirin. Mişk ji bo 30 d rojane 4 hûrdem li qada lokomotîfê hatin rûnişkandin. Li dû hebîtasyonê, li ajalan 10 mg / kg kokaîn-HCl bi derzikî hate enfeksiyon kirin û danîn nav qutiyên lokomotor. Çalakiyên hereketê yên ajalan bi karanîna pergala photobeam (San Diego Instruments) hatine tomar kirin ku tîrêjê ambulans her roj 30 hûrdem dişike. Hişyariya lokomotor di heyama 6 d de hate tomar kirin.
Cihê ciyawazkirî.
Prosedûra klîmîkirina cîhê wekî ku berê hatibû vegotin (Maze et al., 2010), bi guhertinên jêrîn re hate meşandin. Bi kurtahî, 18 d piştî enfeksiyonên nav-NAc ên AAV-GFP an AAV-Cre-GFP li Srffl / fl mêşan, heywan hatin danîn nav odeyên kondîsyonê, yên ku ji sê derdorên ji hevûdu veqetandî pêk dihatin. Mişkên ku ji bo her du odeyên kondîsyonê tercîhek girîng nîşan didin ji lêkolînê hatine derxistin (<% 10 ji hemî heywanan). Komên mercan hîn bêtir hevseng bûn ku li gorî her alîgiriya odeyê ya ku hîn jî heye xwe biguncînin. Di rojên paşîn de, heywanan bi saline hate derzîkirin û piştî nîvro ji bo 30 hûrdanê li yek odeyê hatin ragirtin û dûv re kokaîn (7.5 mg / kg, ip) hate derzîkirin û roja din ji bo 30 hûrdanê hate hiştin li odeya din, bi tevahî wekhev her tedawî du dewreyên perwerdehiya komeleyê (du cot saline û du cot kokaîn). Roja ceribandinê, mişk bêyî dermankirin 20 hûrdem paşde hatin danîn nav aparatê û ji bo nirxandina tercîha aliyî hatin ceribandin. Bersivên lokomotîvî yên ji bo kokaînê bi navbênkariya tîrêjê di odeyên cot-cot de hatine nirxandin da ku bandora dermankirina narkotîkê misoger bibe. Ji bo hemî koman, veguhastina bingehîn di bersiva saline de hate nirxandin da ku bicîh bikin ku locomotion ji hêla dermankirina virus ve bandor nebûye.
Testên din ên behrekirinê.
Pêlên Srffl / fl di nav testên zeviyê vekirî, ronahî / tarî û zorê-swimê de li ser bingeha protokolên weşandî hatin ceribandin (Vialou et al., 2010). Thealakiya mîsê ya li zeviyê vekirî ji bo 5 min bi karanîna pergala şopandina vîdyoyê (Ethovision) di bin şertên tîrêjê sor de hat tomar kirin. Ji bo ceribandina ronahî / tarî, mîkan destûr da ku bi azadî li kaxezek du-kemereyî ya ku ji yeka qadê ronakirî ya mezin hatî veqetandin vebibe vebibe li heremek girtî ya piçûktir. Mice ji bo demek xNUMX min de hat ceribandin da ku mîqdara wextê ku di her dravê de derbas kirin binirxînin. Di ceribandinên zeviyê vekirî û sivik / tarî de, dema ku di navend û arenaya ronahiyê de derbas bû, bi rêzdarî, wekî bersivek têkildar ya têkildar a tirsnak hate binirxîn. Ji bo demek xNUMX min ezmûnek drav-zorê ya 5 d hate çêkirin. Di dema ceribandina swim-zorê de zêdebûna bêhntengiyê wek behreyek bêpergal-şirove hate şîrove kirin. 1 d testa swim-zorê li mişkan bi berfirehî tête bikar anîn û wekî pîvana rastdarbûna pejirandî hate pejirandin, di wê de dermanên antidepressant demên bêhêzbûnê kêm dikin.
Immunohistochemistry
Pêlên Srffl / fl bi xNUMX% paraformaldehyde / PBS bi intracardialê anesthetî bûn û bîhnxweş kirin. Li 4% sucrose / PBS mêjî hate rakirin û şikandin. Beşên coronal (30 μm) li ser microtome ya rahijandin qut kirin û ji bo analîzên immunohistochemîkî hatin danûstandin. Verastkirina Srffl / fl knock-out bi karanîna antîtek polîkonalê ya li dijî SRF ve hatî rêve kirin (30 / 1; Bioteknolojiya Santa Cruz). Daxuyaniya Cre bi navgîniya GFP (mûçikê polîkonal, 2000 / 1, Aves Labs) hate piştrast kirin, ji ber ku Cre ji GFP re têkildar e. Ji bo jimartina navgîniya ΔFosB piştî stresê têkçûna civakî di mûşên Srffl / fl knock-out, ΔFosB bi karanîna antîpîta polîkonîk a rabbok hate raber kirin li dijî herêma N-termînalê ya proteîn (8000 / 1; Bioteknolojiya Santa Cruz) hate girtin. Wêneyan bi mîkroskopê konfokal ve hate kişandin (xêzkirin X 1000; Zeiss). Hejmara hucreyên GFP-immunopositive ku ji bo immunoreactivity ΔFosB wekî negatîf û erênî tê hesibandin di wêneyên pirjimar de ji bo her heywanek hate hejmartin, bi nirxên navîn re piştre ji bo her heywanan hat hesibandin. Ji bo analîzên statîstîkî her heywanek ji bo dîtina kesane çavdêriyek bû.
Mirovê postmortem NAC
Tixûbê mejiyê postmortem ê mirovî ji berhevoka Mejiyê Dallas hate stendin, ku li şûnda razîbûna ji dûz-neviyê tansiyon ji Bernameya Vekolînerê Bijîşkî ya Dallas û Zanîngeha Texas (UT) Bernameya Veguhestina Tissê ya Southwester tê berhev kirin. Tixûb ji hem ji jin û mêr ji bo temen, navberiya mirinê, jimareya yekitiya RNA (RIN), û pH hevûdu hate analîz kirin. Faktorên agonal ên taybetî, di nav de koma, hîpoksîa, pîreksî, destdirêjî, zuhabûn, hîpoglîkemî, têkçûna organa piralî û ketina madeyên neurotoksîk ên di dema mirinê de bandorê li yekbûna RNA di tevnên mejiyê postmortem dikin (Tomita et al., 2004). Me pîvanek faktorê agonal (AFS) bikar anî da ku li ser van heşt mercan her yek ji wan nimûneyên tîsê diyar bike. Nebûna faktorek agonal pûanek 0 hate destnîşankirin û hebûna wê wekî 1 hate nîşankirin da ku di navbera 0 û 8. de bi tevahî pûanên AFS peyda bike. Tissue bi pûanên agonal ên 0 an 1 nimûneyên kalîteya baş nîşan dide; demografiya rewşê di Table 1. de hatine dayîn. Qalîteya tevnê ya berbiçav ji hêla nirxên bilind ên RIN ve hate pejirandin. Bûyerên berî cemidandina bilez di −40 ° C isopentane û depokirina di −80 ° C de bi veqetandekek standard ve hatin şopandin; disekinîna bêtir NAc li ser tevnê qeşayî hate kirin. Lijneya venêrana sazûmanî ya UT Southwestern komkirina vê tevnê ji bo karanîna lêkolînê nirxand û pejirand. Di dîrokek paşîn de, ji bo her rewşa depresiyonê hevpeyivînek agahdar rasterast hate kirin, ku agahdariya di derbarê nexweşiya dozê de hate belge kirin; teşhîsek lihevhatî ya nexweşiya depresiyona mezin bi karanîna pîvanên DSM-IV ji hêla du psîkiyatrîstên lêkolînê ve hate çêkirin. Di yek ji wan dozên ku di vê lêkolînê de cih girtine ekranên toksolojolojiya xwînê ji bo dermanên destdirêjiyê, alkol, an dermanên bi reçete ji bilî antidepresan erênî nebûn. Tevî dermankirina antîdepresan, hemî mijar di dema mirinê de bi klînîkî depresiyon bûn. Nimûneyên tîsê ji bo analîzê bi rengek kor hatine belav kirin.
Table 1.
Daneyên demografîk ji bo lêkolîna postmortem mirovan
Bloka rojavayî
Nimûneyên NAC yên mirov û mîkrobê wekî berê hatine şirove kirin (Maze et al., 2010). Tîrêjê frozen di nav xNUMX mM HEPES lîperek lîsansê ya ku di nav de 5% SDS bi protease (Roche) û frensa fosfatase (Sigma) hatî vegirtin hat guhastin. Hûrbûna proteînan bi hêla testa proteîna Dc (Bio-Rad) ve hat destnîşankirin. Hêjmarên wekhev ên nimûneyên proteînê li ser SDS-PAGE û rojavaya blotînokê bûn. Blotsên rojavayî bi karanîna anodîdek li SRF (1 / 1; Santa Cruz Bioteknolojî) an GAPDH (2000 / 1; Abcam) ve hat ceribandin û dûv re bi karanîna pergala wêneyê ya Odyssey (Licor) hatine şehkirin û pîvandin.
Izolîna RNA û PCR-ê քանակî
Rêzkirina RNA, PCR-ê քանակî (qPCR), û analîzkirina daneyê wekî ku berê hate şandin (Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010). Bi kurtahî, RNA bi reagenta TriZol (Invitrogen) re hate veqetandin û bi kîtên mîkrojên RNAeasy re ji Qiagen re hate paqij kirin. Hemî nimûneyên RNA hatine destnîşankirin ku xwedî nirxên 260 / 280 û 260 / 230 ≥1.8 in. Veguhestina berevajî bi karanîna iScript (Bio-Rad) hate pêkanîn. qPCR bi karanîna SYBR kesk (Quanta) bi pergala Biosystemên Bijartî 7900HT RT PCR re hate saz kirin bi pîvanên cûrbecûr ên jêrîn: 2 min li 95 ° C; 40 ° C yên 95 ° ji bo 15 s, 59 ° C ji bo 30 s, 72 ° C ji bo 33 s; û germkirina heta 95 ° C dakêşand ku ji bo piştrastkirina hilberên yek PCR-ê de kurmên dabeşkirinê hilberîne. Daneyên bi berhevdana nirxên C (t) yê rewşa dermankirinê (kontrolkirina mûşên gumanbar an elastikî, an kontrolên mirovî li hember nexweşên depresyonê) bi rêbaza ΔΔC (t) (Tsankova et al., 2006) hate analîz kirin. Destpêkên ΔFosB qPCR: foward, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT û berevajî, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG.
Pîjik
ChIP wekî berê hatiye şirovekirin (Maze et al., 2010) li ser grûpên NAC-ê duzimanî yên ji mişkên kontrol, gumanbar û elastiker (çar pincarên 14-gauge / mişk) 1 h piştî ezmûna têkçûna paşîn û ji saline- û kokain- heywanên derman kirin 24 h piştî dermankirina dawîn. Pêkêşkêşî di 1% formaldehyde-xaç-xaçê de hate girêdan. Pêkêşkirin piştre bi navgîniya serîlêdana glycine ve hate qewirandin, û tansiyon hate şuştin û heta .80 ° C heta karanîna têne girtin. Chromatin sheared bi şev hate bi antî-SRF antî-antînîtalîzmê (Santa Cruz Bioteknolojî) ku berê bi zincîrên magnetîkî ve girêdabû hat girêdan (Dynabeads M-280; Invitrogen). Piştî girêdana berevajî û paqijbûna DNA, girêdana SRF bi pêşnûma fosb ji hêla qPCR ve hatî destnîşan kirin bi karanîna Primers ku herêmek pêgirê fosb vedihewîne heye ku tê de du deverên girêdana hêmana bersiva serayê. Parêzgehên SRF digel kontrolên no-antîpotî bi girîngî hate dewlemend kirin. Pêşkêşkerên pêşverû yên gene fosb ên Mouse: pêş, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG û berevajî, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC.
Analîzên Statîstîk
ANOVA-yên yek-rê ji bo berhevdana wateyên di navbera mişkên kontrolê, hestyar û berxwedêr de di analîzên biyokîmyayî û tevgerî de hatin bikar anîn. ANOVA-yên du-alî ji bo danberheva danasîna ΔFosB bi têkçûna civakî di Srf mişkokên herêmî de, û her weha ji bo berhevdana Srf knock-out di bêçaretiya fêrbûyî û protokolên hestiyariya lokomotîv de hatin berhev kirin. Testên t-ê yên xwendekar ji bo berawirdkirina wateyên di bandora xistina Srf-ê ya li ser derxistina ΔFosB-ê de, û di navbera koman de di teşeya postmortem a mirovan û analîza ChIP-a mişk de hatine bikar anîn. Cûdahiyên di navbera mercên ceribandinê de gava p ≤ 0.05 ji hêla statîstîkî ve girîng hatin hesibandin.
results
Gotinên SRF û ΔFosB di depresyona mirovan û mîkrojeyên têkçûyî yên civakî de
Ji bo ku di pêşkeftina tevgerên mîna depresiyonê de ji bo SRF-ê roleke potansiyel bikolin, me ewil îfadeya proteîna SRF-ê ya li NAc-ê ya nexweşên mirovên depresiyonek paşmemem nirxand. Mijarên depresiyon bi NAV-ê re di asta SRF-ê de bi kontrolên xweyên temenî re (t (19) = 1.9; p <0.05) (Hêjîrê 1A) bi girîngî asta SRF-ê kêm kirin. Rola SRF-ê di birêkûpêkkirina derbirîna gena zû ya girêdayî-çalak-çalak de hatî dayîn (Ramanan et al., 2005), me hizir kir ku SRF dibe ku di kontrolkirina derbirîna ΔFosB de li vê herêma mejî hebe. Di piştgiriya vê hîpotezê de, me dît ku asta mfraNa Δfosb di NAc ya mirovên depresiyon de jî bi girîngî kêm bûne (t (16) = 1.8; p <0.05) (Hêjîrê 1B). Ev di binê van şert û mercan de bi dîtinên vê dawiyê yên kêmkirina asta proteîna ΔFosB jî lihevhatî ye (Vialou et al., 2010).
1.
Zordestiya kronîk a SRF-a-stendî bi vesazkirina ΔFosB-a di NAc de kêm dibe. A, B, Nexweşên depresiyonê yên mirovên Postmortem di NAc (n = 10 / kom; B) de asta proteîna SRF (n = 8 / kom; A) û Δfosb mRNA derbirîn kêm dikin. C, Mişkên ku bi stresa têkçûna civakî ya kevneşopî (10 d) re rû bi rû man, di nav nifûsa pêhesbar û berxwedêr de kom bûn. D, stresa têkçûna civakî ya kronîk di NAc mişkên hestiyar de asta proteîna SRF kêm dike, lê mişk nahêle, li gorî kontrola 24 h piştî ceribandina têkiliya civakî ya ku di C. de tê dîtin, asta mRNA ΔfosB di NAc de di mişkan de neguhêrbar in, lê girîng di ajalên berxwedêr de (n = 7-15 / kom) têne nîzam kirin. F, proteîna SRF piştî stresa têkçûna civakî ya kronîk girêdana bi pêşverûra gena fosb ve zêde nîşan dide tenê di mişkan de, û ne di pêhesîn de (n = 5 / kom). Daneyên nîşanî wekî wateya ± SEM têne xuyandin (wekî barên çewtiyê têne nimandin). Con., Kontrol; Dep, depresiyon; Sus., Hesas; Res., Berxwedêr. * p <0.05 beramberî kontrolê; *** p <0.001 beramberî kontrolê; #p <0.05 li hember hesas; ## p <0.01 li hember hesas; ### p <0.001 li hember hesas.
Ji bo dirêjkirina van dîtinan, me li mişkan protokola stresê ya têkçûna civakî ya kronîk bikar anî. Du komên ciyawaz ên mişkên têkçûyî, hestiyar û berxwedêr, diyar bûn (Krishnan et al., 2007) li gorî pîvana dûrketina civakî, ku tê de heywanên hestiyar têkiliya civakî bi herdu ajalên kontrol û zindî re berbiçav kêm kirin (F (2,23, 157.2) = 0.001; p <0.001; t testên bi serrastkirina Bonferroni, hesas vs kontrol, p <0.05; berxwedan vs kontrol, p <0.01; berxwedêr vs hesas, p <1) (Hêjîrê 2,32C). Du roj piştî têkçûna paşîn a paşîn, mişkên çavtirsandî, berxwedêr û bêserûber ji bo derbirîna SRF-ê di NAc de hatin analîz kirin. Mîna dîtinên di depresiyona mirovî de, asta proteîna SRF di NAc a mişkên hestiyar de bi qontrolan re girîng kêm bû, lê asta SRF di NAc mişkên berxwedêr de bê bandor bûn (F (4.7) = 0.05; p <0.05; t testên bi Correction Bonferroni, hesas vs kontrol, p <0.05; resilient vs hesas, p <1) (Hêjîrê XNUMXD).
Dûv re, me li NAcê ji van sê komên heywanan vegotina mfraza Δfosb mRNA lêkolîn kir û tenê di ajalên berxwedêr de zêdebûnek berbiçav a derbirîna Δfosb dît, bi rêgezek lê zêdebûnek girîng di mişkên pêhesbar de nehat dîtin (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (Hêjîrê 1E). Ji bo ku em bêtir têkiliyên gengaz ên di navbera astên SRF û transkrîpsiyona Δfosb de bêtir vekolînin, me ChIP bikar anî da ku vekolîna gelo SRF bi pêşverûrek genê fosb ve girêdayî ye piştî stresa têkçûna civakî ya kronîk li komikên cihêreng ên mêşên hestiyar û nerm. Heywanên berxwedêr bi NAV (bi (t (8) = 2.1; p <0.05)) û hem jî bi bi mişkên hessas (t (8) = 2.0; p <0.05) ve girêdana SRF-ê ya bi NA-fosb-ê re di NAc de bi girîngî ve girê didin. Di navbera kontrol û mişkên hestiyar de cûdahî nehatiye dîtin, dibe ku kêmbûna pêsengiya SRF-ê di mişkên hestyar de (Hêjîrê 1F) nîşan dide.
Ji bo pejirandina rola SRF di birêkûpêkkirina ΔFosB de piştî stresa têkçûna civakî ya kronîk, Srffl / fl mişk hatin bikar anîn ku bandora jêbirina bijare ya SRF ji NAc li ser stendina stresê ya ΔFosB bikar bînin. Mişkên Srffl / fl bi stereotaksî vektorên AAV yên GFP an Cre-GFP îfade dikin di nav-NAc de hatin derzandin. Knock-out-a NAc-taybetî ya SRF ku ji hêla AAV-Cre-GFP ve hatî çêkirin ji hêla immunohistochemîkî ve hate pejirandin (Hêjîrê 2A). Birastî, di navbera lekkirina SRF û vegotina Cre de, ku bandora lêdana knock-ê nîşan bide, ti pêvek çênebû. Di qulikên NAc ên mîkroşebûyî de, me di asta proteîna SRF-ê de% 50 kêmbûnek girîng dît (t (11) = 4.3; p <0.001). Mezinahî dibe ku rastiya ku perçeyek tevnê di mîkro-belavkirinên bi vî rengî de bi virusê vegirtî nişan dide.
2.
SRF ji hêla stresa têkçûna civakî ya kronîk ve navbeynkariyê ΔFosB dike. A, Derzîlêdana AAV-Cre-GFP di NAc mêşên Srffl / fl de dibe sedema lêdana proteîna SRF di nêronên Cre-îfadekirinê. Derzîlêdana AAV-GFP bêyî bandorek xuya bû. B, Wusa xistina hilbijartî ya SRF ji NAc bi tevahî astengiya têkçûna têkçûna civakî ya kronîk (n = 4 / kom) pêgirtina ΔFosB di NAc de asteng dike. Daneyên nîşanî wekî wateya ± SEM têne xuyandin (wekî barên çewtiyê têne nimandin). * p <0.05 beramberî kontrola AAV-GFP; ** p <0.01 li hember têkçûna AAV-GFP.
Paşê me ji bo ΔFosB di NAc de Srffl / mişkên fl ên têkçûyî ji bo ΔFosB immunohistochemistry hejmar pêk anîn an AAV-Cre-GFP an AAV-GFP di NA-NAc de derzî kirin. Li dû stresa têkçûna civakî ya kronîk, derbirîna ΔFosB bi girîngî li NAc ajalên AAV-GFP-derzîkirî (virus virus têkiliya dermankirinê, F (1,12) = 6.4; t testên bi sererastkirina Bonferroni, kontrol vs têkçûn, p <0.05;) AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01). Lêbelê, ev indukasyon di Srffl / fl mêşên ku AAV-Cre-GFP werdigirin nehat dîtin (Hêjîrê. 2B), diyar dike ku ji hêla stresa kronîk ve vegirtina ΔFosB li NAc hewce dike.
SRF knock-out li NAc pêşveçûna fenomenê-û fenotypê-mîna pro-dilxwazî dike
Ji ber ku pêxemberiya têkçûna civakî ya kronîk pêxemberê vegirtina ΔFosB berê hatibû nişandan ku di berxwedanê de navbeynkariyê dike (Vialou et al., 2010), me hîpotez kir ku kêmaskirina SRF, û di encamê de windabûna dendikirina ΔFosB, li heywanên hestiyar dibe ku adaptasyonek negatîf ku di dawiyê de dide heywan ji bandorên xeternak ên stresê bêtir nazik. Ji bo ceribandina vê hîpotezê, me wekî jorîn li ser mişkên Srffl / fl mezinan jêbirrinek herêmî-taybetî ya gena Srf derxist, û mişkên encam û kontrolên wan di battereya paradîgmayên reftarî de hatin ceribandin da ku depresyona bingehîn binirxînin- û fikar- mîna tevgerê. NAc herêmî ya jêbirina SRF-ê bandorek mîna-depresiyonê pêşve xist ku bi ceribandina bi zorê-avjeniyê (t (30) = 2.5; p <0.05) tête pîvandin, û her weha bandorek anjiyojenîk a ku di qada vekirî de tête pîvandin (t (38) = 1.9; p <0.05) û testên ronahî / tarî (t (8) = 1.9; p <0.05). Ji ber vê yekê, mişkên Srffl / fl ku di NAc de AAV-Cre-GFP werdigirin, di testa bi zorê-avjeniyê de, di navenda qada zeviyek vekirî de kêmtir dem, û di beşa ronahiyê ya qutiyek ronahî / tarî de kêmbûna derengmayîna lihevnêzîkbûnê digel ajalên AAV-GFP-derzîkirî re (hejmar 3A – C). Lêbelê, jêbirina nav-NAc a SRF astên bingehîn ên bargiraniyê neguherîne, pêşniyar dike ku bandorên reftarî yên dîtbar li SRF ajalên lêxistî ne ji ber anormaliyên di çalakiya tevgerî ya gelemperî de (Hêjîrê 3D). Van daneyan di ronahiya raporên berê de balkêş in ku, her çend ΔFosB di NAc de tevgerên mîna depresiyonê tertîb dike jî, ew xuya nake ku di bersivên têkildar-endîşe de têkildar e (Vialou et al., 2010). Vebijarkên meyên heyî ku windabûna SRF bersivên azwerî diafirîne destnîşan dikin ku ew ji hêla ΔFosB ve bi armancên din dike.
3.
Srf knock-out ji NAc fenotîpên pêşdepresyon-û mîna fikaran pêş dixe. A – C, xistina Hilbijarkî ya SRF ji NAc, ku bi navgîniya AAV-Cre-GFP di NAc mişkên Srffl / fl de tê bidest xistin, di ceribandina swim bi zorê de (n = 14–18 / kom) derengiya bêkêmasîbûnê kêm dike; A) û dema ku di navendê de derbas dibe û dema ku di beşa ronahiyê de di testên qada vekirî (B) û ronahî / tarî (C) de derbas dibe, kêm dike (n = 5-15 / kom). D, Di çalakiya lokomotor a basal de cûdahiyek di qada vekirî ya mişkên ku derziyên nav-NAc ên AAV-GFP an AAV-Cre-GFP werdigirin nehat dîtin. E, F, Zêdebûna hestiyariya ji bo bêçaretiya hînbûyî (n = 7-8 / kom; E) û stresa têkçûna civakî (n = 5-6 / kom; F), wekî ku, bi rêzê ve, ji hêla derengiya revîn û dema têkiliya civakî ve tête pîvandin . Daneyên nîşanî wekî wateya ± SEM têne xuyandin (wekî barên çewtiyê têne nimandin). * p <0.05 beramberî GFP an beramberî hedef tune; ** p <0.01 li hember GFP; *** p <0.001 li hember GFP.
Dûv re me lêkolîn kir ka gelo jêbirina SRF di NAc de lawazbûna heywanek ji bandorên xirabker ên stresa dubare jî zêde dike. Mişkên Srffl / fl, ku bi NAV-an AAV-Cre-GFP an AAV-GFP hatin derzîkirin, di du modelên depresyonê de hatin vekolandin, bêçaretî û stresa têkçûna civakî ya kronîk fêr bûn. Di bêçaretiya fêrbûyî de, heywanên Srffl / fl ku AAV-Cre-GFP distînin derengiya zêde nîşan da ku ji şoka lingê bireve piştî ku pêşîn li ber stresa şokê ya bêçare maye (dermankirin interaction ceribandinên danûstendinê, F (14,180) = 10.2; t testên bi sererastkirina Bonferroni, p <0.001; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01), diyar dike ku hestiyariya ji kêmasiyên tevgerî yên stres-zêde çêdibe (Hêjîrê. 3E). Bi heman rengî, jêbirina herêmî ya SRF ji NAc jî nefreta civakî (t (10) = 1.8; p <0.05) li gorî ajalên kontrolê yên AAV-GFP-derzîkirî yên li pey stresa têkçûna civakî ya kronîk (Hêjîrê. 3F), bandorek dişibe pêşverû zêde bû.
Nebûna tevlêbûna SRF-ê di nav ΔFosB-ê de bersivandin û bersivên tevgerî yên li ser kokainê
Ji ber ku ΔFosB di NAc de di bersiva tiryakên destdirêjiyê yên wekî kokaîn de jî tête çêkirin, ew balkêş bû ku di çalakiya kokaînê de ji bo SRF roleke potansiyel lêkolîn bike. Berevajî stresa têkçûna kronîk a civakî, dubarebûna kokaînê di NAc de (t (14) = 0.8; p> 0.05) îfadekirina proteîna SRF neguherî (Hêjîrê. 4A) û li ser girêdana SRF bi pêşverûra gena fosB a li vê herêma mejî bandor tune. (t (4) = 0.7; p> 0.05) (Hêjîrê 4B). Ev pêşnîyar dike ku, berevajî stresê, pêgirtina ΔFosB piştî kokaîna kronîk bi navgîniya SRF nayê navbirin. Me ev rasterast bi lêpirsînê gelo komkirina ΔFosB piştî kokaîna kronîk li Srffl / fl ajalên ku AAV-Cre-GFP distînin li hember AAV-GFP nav NAc diguhezîne, ceriband. Me dît ku jêbirina SRF li vê herêma mejî bandorê li berhevkirina ΔFosB ya ku ji hêla kokaîn ve hatî çêkirin tune (Hêjîrê. 4C).
4.
Loss of SRF ti bandorê li ser indareserkirina kokaîn ΔFosB an tevgerên birêkûpêk ên kokaîn bû. A, B, exposureêkirina kokainê ya dubare (7 d, 20 mg / kg cocaine-HCl) ti bandorek li ser îfadeya proteîna SRF li NAc (A) an li ser girêdana SRF bi peydakirina genê fosB li vê herêma mêjî (B) 24 h piştî eşkerekirina derman (n = 5 / kom). Berhevdana C, ΔFosB, pîvandina immunocytochemîkî tête jêrîn, jêrîn derxistina kokaîn kronîk ji hêla SRF-knock-NA-taybetî-bandor ve nayê bandor kirin. D, E, Rakirina Herêmî ya SRF ji NAc jî ti bandorek li ser çalakiya locomotor a li pey injeksiyonê salane (d 1) li ser çalakiya locomotor-hişkkirî û hişmendîkirina kokainê (n = 8 / kom) (d 1-7; D) an li ser bijartina cîhê şerta kokainê (n = 8 / kom; E). Daneyên têne xuyang kirin wekî wateya ± SEM (wekî barsên çewtiyê têne xuyang kirin).
Ji bo şopandina vê vedîtina sosret, me lêkolîn kir ka gelo xistina hilbijartî ya SRF ji NAc bersivên reftarî yên ji bo kokaînê diguherîne. Bi nebûna birêkûpêkkirina SRF ya vesazkirina ΔFosB ji hêla kokaînê ve, têkçûna NAc-taybetî ya SRF li ser çalakiya lokomotîvê ya ku ji hêla kokaîna tûj an hestiyariya lokomotîv ve hatî peydakirî piştî veberînên kokaîn ên dubarekirî tê dîtin (bandora treatment têkiliya demjimêr, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (Hêjîrê. 4D). Bi heman awayî, xistina-ji NA-taybetî ya SRF li ser tercîha cîhê ku bi kokaîn ve girêdayî ye (t (14) = 0.1; p> 0.05) ti bandor nebû (Hêjîrê 4E), ku pîvanek neyekser a xelata kokaînê peyda dike.
Nîqaş
Vê lêkolînê SRF wekî navgînek xwerû ya rûbirûyî ya ΔFosB di NAc de piştî zexta têkçûna civakî ya kronîk nas kir, û SRF di pêşkeftina behreyên depresyon- û xeysetê-wekhev de ferz dike. Em delîlên rasterast peyda dikin ku stresê têkçûna civakî ya kronîk di nav NAc de heywanên guncan, lê ne zeytûnal di SRF de kêm dibe, û ku ev jêrdestpêkirina pêşîlêgirtina ΔFosB li vê herêma mejî, ya ku me destnîşan kir ku ji bo pêşîlêgirtina bi stresê kronîk re pêwîst e, ango, resenbûn (Vialou et al., 2010). Aareseriyek bi vî rengî ya vegotina SRF di NAc-ê ya mirovên depresyonê de, ku ΔFosB mRNA û îfadeya proteîn jî kêm bû hat dîtin. Berevajî vê, asta ΔFosB di mûyên guncan ên NAc de kêm nebûne, tevî ku binpêkirina SRF-ê ye, ku vê yekê wekî mekanîzmayên veguhastinê yên din, wekî hê nediyar, di kontrolkirina vegotina ΔFosB de nîşan dide. Rola sedemek ji bo SRF di navberkirina ΔFosB-ê di NAc de piştî stresiya kronîk bi karanîna betalkirina genetîkî ya indirable ya SRF ji vê herêma mêjî hate saz kirin. Analîzên behrê yên xwedan mîzan bi vê NAC-taybetî SRF nokkerî bêtir SRF-ê wekî rolek sereke di pêşketina her du bingehîn û depresiyonê de ji hêla stresê ve girêdayî- û tevgerên xeyalî-mîna dilîze. Di berevajî de, hilweşandina SRF ti bersîvek li ser rêveberiya kokaîn kronîk an li ser bandorên behreyî yên kokainê de bandorê li ser êşa ΔFosB tune. Van lêgerînan li ser rêziknameya ΔFosB û bersivên behremendiyê yên ji tengasiyên hawîrdorê yên cûrbecûr re rolek nûxwaz-xwerû ya SRF-ê piştgirî dikin.
Veguheztina navgîniya SRF berê berê çalakiya sinaptîk bersivandiye, bi piranî ji hêla zêdebûna zêdebûna kalsiyûmê ve, û her weha ji bo zêdekirina çalakiya neurotrofîkî ve, bi taybetî di mijara faktora neurotrofîkî ya mêjî (BDNF) de (Bading et al., 1993); Xia et al., 1996; Johnson et al., 1997; Chang et al., 2004; Kalita et al., 2006; Knöll û Nordheim, 2009). Vê yekê pirsa balkêş derdixe holê ku çima SRF li NAc ji masûlkeyên guncan, lê ne ewledar in, têne qutkirin. Ev rêziknameya ciyawazî mûhtemelen ji hêla nîşana dopamîn an BDNF ve nabe, ji ber ku xuyangkirina mişkên gumanbar asta proteîn a BDNF zêde kir û zêdebûna nîşana BDNF li jêr li NAc û her weha firoşîna şûnda ya fireh a devera tegmental a ventral (VTA) ya dîpamîn a ku di hundurê NAc de zêde dike, zêde kir. Heywanên zehfî rêjeyên normal ên nîşana BDNF û firotana VTA nîşan didin (Krishnan et al., 2007). Possibilityhtîmalek alternatîf ev e ku îfadeya SRF li NAc-ê di bersivê de ji bo navbeynkariya guhartina glutamatergîk a vê herêma mêjî tê tepisandin, ya ku me destnîşan kiriye di navbêna guncan de li hemberê mezelên hişkberkirî cuda ye (Vialou et al., 2010). Ji bo lêkolîna rasterast a vê û mekanîzmayên din ên mimkunî hewceyê karên din hewce ye.
Lêkolînên nû yên bi karanîna genome-berfireh û rêbazên din re pêşniyar dikin ku neur5-10% ji genên armancên SRF di nehûnan de genên zû zû ne (Philippar et al., 2004; Ramanan et al., 2005; Etkin et al., 2006; Knöll û Nordheim, 2009). Ev bi daneyên me re hevgirtî ye ku rolek krîtîk ji bo SRF-ê di vexwendina ΔFosB, hilberek hilbigire ya giyayê zû ya fosb de, ji hêla stresê kronîk ve nîşan dide. Balkêş e, gelek genên hedef ên SRF ku di van lêkolînên cûda de hatine destnîşankirin di heman demê de di nav NAc de armancên naskirî yên ΔFosB jî diyar dikin (Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008, 2009; Maze et al., 2010). Di nav van genên bi gelemperî têne rêve kirin de gelek heb hene ku tête navnîşkirin ku ji hêla sîtoskeletonê ya nejonî ve têne rêve kirin (mînakî, Cdk5, Arc, û Actb). Ev, di encamê de, bi raporên ku SRF bandor li dînamîzma actin û motîwona neuronal li çend celebên hucreyê neuralî bandor dike (Alberti et al., 2005; Ramanan et al., 2005; Knöll et al., 2006), di heman demê de ΔFosB tê zanîn e. bandorên dendritic spî yên nehûnên NAC (Maze et al., 2010) bandor dikin. Vê dawiya dawiya fonksiyonên hevbeş dibe ku bandorên hevbeş ên SRF nîşan bide, bi navgîniya wê ΔFosB re hevbeş, tevgera li ser hejmarek ji genên armancên hevbeş ku bandorê li morfolojiya neuronal dike û, dawiyê, behreke tevlihev.
SRF jî hate xuyang kirin ku rolên giring di rêziknameya plastîtîkî ya synaptic û vegotina jenosîd û tevgera neuralon de heye. Mînak, windabûna navgîniya SRF-têkildar a destpêka gêncanên bilez di bersivê de an vekolîna dilxwazî ya jîngehek nûjen an jî aktîvkirina neuronale ji sehayên electroconvulsive re têkildar e ku bi potansiyela synaptîk a demdirêj a demdirêj a ku di hippocampus de Srf mutants re têkildar e (Ramanan et al. , 2005; Etkin et al., 2006). Wekî din, kêmkirina SRF di hippocampus de hate xuyakirin ku dibe sedema kêmbûna depresyona synaptic-ê ya dirêj, îfadeya genê zû ya zûde ku ji hêla kontekstek nû ve hatî vexwendin, û şiyana bêserûber a di dema lêgerînê de li hawîrdora nûjen (Etkin et al., 2006). Van daneyan girîngiya SRF di kapasîteya ajalê de digire ku bi guncanî bi tevliheviyên hawîrdorê ve biguncîne, wek ku di bûyera navborî de fêrbûna jîngehê li hawîrdorek nû, an jî, di rewşa adaptekirina hişyarkerên stresê yên negatîf de, da ku pêşî li belavbûna stresê bigire. -kêmasiyên reftarî, wekî di lêkolîna meya nuha de, anîn. Ji ber vê yekê, em dibînin ku heywanên ku di derbirîna SRF de kêmasiyan nîşan didin, an di bersiva stresa têkçûna civakî de di kesên pêhesbar de an jî bi riya xistina rasterast a SRF-ê, tevgerên mîna-depresiyon-û fikaran zêde dikin. Ji ber ku mijarên mirovên depresiyon di NAc de asta SRF-ya kêm jî hene, ew tête fikirîn ku SRF di birêkûpêkkirina kapasîteya kesek de ku bi erênî li teşwîqên hawîrdorê yên neyînî xwe diguncîne, bi qismî bi rêkxistina vegotina ΔFosB di NAc de, roleke bingehîn dilîze.
Mekanîzmayên Difirandî: PIRSNGEY VN BI VIR BYE
Lêpirsînek heyî ya nedîtbar ev e ku, her çendî SRF ji bo kolandina ΔFosB di NAc de di bersivê de ji stresê kronîk re pêdivî ye, ji bo bersivdayina ji kokaina kronîk hewce ne ji bo pêkanîna ΔFosB di heman herêma mejî de. Bi vî rengî, SRF ne ji bo bersivên nermîneyî yên normal ên li ser dermanê ne hewce ye. Van daneyan destnîşan dikin ku, tevî vê rastiyê ku ΔFosB di NAc-ê de di bersivdayîna gelek cûrên bîhnfirehiyê de (Nestler et al., 1999; Nestler, 2008), dişibihe riyên molekulê ya berbiçav ku rê li ber induction ΔFosB digire. Yek vegotinek mimkun ji bo van lêgerînan celebên hucreyî yên hûrgulî ye ku di bersiva stresê ya li dijî kokainê de, dravkirina ΔFosB nîşan dide. Stresa kronîk ΔFosB hema hema bihevre di nav du jêrdanên mezin ên neuronên spî yên navînî NAc de, ewên ku bi piranî D1 li hember receptorên dopamine D2 derdixe, diqewime. . Bi vî rengî, mimkun e ku riyên têkildar ên SRF-ê ji bo induction ΔFosB-ê di neuronên D1 + de girîng be. Lêbelê, ev ê têkçûna tevahî ya induction ΔFosB li mîkrokên narkotîk ên SRF piştî stresiya kronîk şirove bike, ji ber ku ev induction di her du jêrzemînên neuralon de pêk tê. Explanationiroveyek alternatîf ev e ku stresê kronîk û kokaîn a kronîk li ser cascadayên nîşana intacellular veqetandî, bi saya şêwazên cihêreng ên çalakiya wan li ser nehûnên NAc, bi stresê kronîk dibe ku bi veguhastina glutamatergîk a guherandî, mîna ku di destpêkê de hate destnîşankirin, û kokaina kronîk bi serî D1 ve dixebite. nîşana receptor (Nestler, 2008). Dibe ku îhtîmalek din ev e ku indûkê ΔFosB ji hêla stresê kronîk ve li hember kokaina kronîk ve girêdayî ye ku bi mekanîzmayên veguhastina berbiçav ve girêdayî ye ku bi cûrbecûr ve tête kontrol kirin ji hêla inputên neuralî ve ji hêla NAc ve ji herêmên projeksiyonî yên glutamatergic cuda ve têne kontrol kirin, ji bo nimûne, gelek herêmên cortexê prefrontal, hippocampus, û amygdala. Ji bo vekolîna van û gengaziyên alternatîf gelek karên din hewce dike.
Bi hev re, lêgerînên me mekanîzmayek veguhastinê ya nûjen bi navgîniya ku ΔFosB-ê di NAc-ê de tête pejirandin da ku bersivên proresilience-ê ya ji bo stimulasyonên zextkar dike. Vê lêkolînê jî ronahiyek nû ya girîng li ser rola ku SRF li ser asta NAC lîstiye di rêziknameya depresiyonê- û tevgerên xeyalî-mîna. Fêrbûna çêtirîn a rola transkrîpsiyonê ya SRF di birêkûpêkkirina tevgerên wusa de dê bibe alîkar di destnîşankirina armancên genê yên nûjen ên ku di berxwedanê de ji nexweşiyên girêdayî stresê re têkildar in, û dikare pêşkeftina pêşê dermanên antidepresan ên bi bandortir hêsan bike.
Ev xebata ji alîyê grûpên ji Enstîtuya Neteweyî ya Tenduristiya Giyanî û Enstîtuya Neteweyî ya li ser Abuse Drug û ji hêla Hevpeymanek Lêkolînek bi AstraZeneca re hate piştgirî kirin. Em spasiya David D. Ginty dikin ku mîkrokên Srffl / fl peyda kirine.
Divê peywendî bi Eric J. Nestler, Wezareta Neuroscience ya Fishberg, Dibistana Dermanê ya Mount Sinai, One Gustave L. Levy Place, Box 1065, New York, NY 10029-6574 ve tête navnîş kirin. [email parastî]
Copyright © 2010 nivîskarên 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
Çavkanî
1. ↵
1. Alberti S,
2. Krause SM,
3. Kretz O,
4. Philippar U,
5. Lemberger T,
6. Casanova E,
7. Wiebel FF,
8. Schwarz H,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Nordheim A
(2005) Veguhestina neuralî ya di pêlava migratory ya rostralê ya mûzokê de pêdivî ye ku faktora bersiva serumê hewce bike. Proc Natl Acad Sci USA 102: 6148 – 6153.
Abstract / Free Full Text
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Greenberg ME
(1993) Rêziknameya îfadeya giyanê di neuronên hippocampal de ji hêla rêça nîşankirina kalsiyûmê vekirî. Zanist 260: 181 – 186.
Abstract / Free Full Text
3. ↵
1. Berton O,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Krishnan V,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Graham D,
8. Tsankova NM,
9. Bolanos CA,
10. Rios M,
11. Monteggia LM,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2006b) Rola bingehîn a BDNF di riya dopamine ya mesolimbic di stresê têkçûna civakî de. Zanist 311: 864 – 868.
Abstract / Free Full Text
4. ↵
1. Berton O,
2. Covington HE 3rd.,
3. Ebner K,
4. Tsankova NM,
5. Carle TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Krishnan V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ
(2007) uctionêkirina ΔFosB-ê di xalîçeya periaqueductal de ji hêla stresê ve bersivên tevgerîna çalak dide. Neuron 55: 289 – 300.
CrossRefMedline
5. ↵
1. Chang SH,
2. Poser S,
3. Xia Z
(2004) Rola nû ya ji bo faktora bersiva serayê di zindîbûna neuralon de J Neurosci 24: 2277 – 2285.
Abstract / Free Full Text
6. ↵
1. Etkin A,
2. Alarcón JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Kandel ER
(2006) Di fêrbûna ji bo SRF de rolek heye: betalkirina li ser hişê mezinan LTD asteng dike û avakirina bîranîna yekser a bingehek nû. Neuron 50: 127 – 143.
CrossRefMedline
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Voges J,
4. Hinrichs H,
5. Marco-Pallares J,
6. Hopf JM,
7. Müller UJ,
8. Galazky I,
9. Sturm V,
10. Bogerts B,
11. Münte TF
(2009) Pêşbînîkirina hişmendiya teşwîqê ya li ser têkiliya hişk a alkolê ya bi navgîniya kûr a mêjî ya nucleus bi kar tîne: aliyên zanistî yên klînîkî û bingehîn. Neurosci ya Pêşîn 3: 22.
MEDLINE
8. ↵
1. Johnson CM,
2. Hill CS,
3. Chawla S,
4. Treisman R,
5. Bading H
(1997) Kalcium bi navgîniya sê rêça berbiçav ku dikare serbixwe ji Ras / kîtota proteîn çalak a Ras / mitogen-ê çalak bike (ERK) bixweberî vegotina giyanê kontrol dike. J Neurosci 17: 6189 – 6202.
Abstract / Free Full Text
9. ↵
1. Kalita K,
2. Kharebava G,
3. Zheng JJ,
4. Hetman M
(2006) Rola leukemia akut ya megakaryoblastîkî-1-a di stimulasyona ERK1 / 2-ê de bi têkçûna faktora bersivê ya serayê ya ku ji hêla BDNF ve hatî çêkirin an çalakiya synaptic zêde dibe. J Neurosci 26: 10020 – 10032.
Abstract / Free Full Text
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.
4. Whisler K,
5. Gilden L,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Zhang YJ,
9. Marotti L,
10. Self DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. DJ DJ
14. Neve RL,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) Daxuyaniya faktorê ΔFosB di mêjî hestiyariya kocaine kontrol dike. Nature 401: 272-276.
CrossRefMedline
11. ↵
1. Knöll B,
2. Nordheim A
(2009) Guhertoya fonksiyonel a faktorên transkrîbûnê di pergala nervê de: nimîneya SRF. Trends Neurosci 32: 432 – 442.
CrossRefMedline
12. ↵
1. Knöll B,
2. Kretz O,
3. Fiedler C,
4. Alberti S,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Nordheim A
(2006) Faktora bersiva serum di hippocampus de civîna pişka neuralî kontrol dike. Nat Neurosci 9: 195 – 204.
CrossRefMedline
13. ↵
1. Krishnan V,
2. Han MH,
3. Graham DL,
4. Berton O,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Laplant Q,
8. Graham A,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ghose S,
12. Reister R,
13. Tannous P,
14. Green TA,
15. Neve RL,
16. Chakravarty S,
17. Kumar A,
18. Eisch AJ,
19. Self DW,
20. Lee FS,
21. et al.
(2007) Li herêmên xelatkirina mêjî adaptasyonên molekulî yên bin bandora gumanbariyê û berxwedana têkbirina civakî. Hucre 131: 391 – 404.
CrossRefMedline
14. ↵
1. Kuhn J,
2. Bauer R,
3. Pohl S,
4. Lenartz D,
5. Huff W,
6. Kim EH,
7. Klosterkoetter J,
8. Sturm V
(2009) ervavdêriyên li ser sekinandina cixareyê bê alî piştî şilandina mêjî ya kûr a nucleus guncan dibe. Res Addict Res 15: 196 – 201.
CrossRefMedline
15. ↵
1. Kumar A,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Tsankova NM,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Russo SJ,
8. Laplant Q,
9. Sasaki TS,
10. Whistler KN,
11. Neve RL,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2005) Riparastkirina Chromatin mekanîzmayek bingehîn e ku di bin steryatumê de sedemên plastîk-avêtin ji kokainê ne. Neuron 48: 303 – 314.
CrossRefMedline
16. ↵
1. Maze I,
2. Covington HE 3rd.,
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Mechanic M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Haggarty SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath SC,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Tarakhovsky A,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ
(2010) Rola bingehîn a histone methyltransferase G9a di pêgirta kokainê de. Zanist 327: 213 – 216.
Abstract / Free Full Text
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton O,
6. Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: Guherînek mêjî ji bo adaptasyona dirêj-di mêjî de. Res Brain Res Brain Res 132: 146 – 154.
MEDLINE
18. ↵
1. Nestler EJ
(2008) Mekanîzmayên veguhastinê yên addiction: rola deltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363: 3245 – 3255.
Abstract / Free Full Text
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA Jr.
(2006) Dravê mezolimbic dopamine li depresiyonê. Psîkolojiya Biyolojîk 59: 1151 – 1159.
CrossRefMedline
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Chen J
(1999) ΔFosB: navbeynek mêjî ya ku ne gengaziya neuralî û nebatî ya dirêjtirîn e. Res Brain 835: 10 – 17.
CrossRefMedline
21. ↵
1. Newton SS,
2. Thome J,
3. Wallace TL,
4. Shirayama Y,
5. Schlesinger L,
6. Sakai N,
7. Chen J,
8. Neve R,
9. Nestler EJ,
10. Duman RS
(2002) Kêmbûna elementa bersivê ya cAMP proteîn-binding proteîn an dynorphin di nav nucleus de zencîre antidepressant-ê çêdike. J Neurosci 22: 10883 – 10890.
Abstract / Free Full Text
22. ↵
1. Nikulina EM,
2. Arrillaga-Romany ferheng, Glosbe
3. Miczek KA,
4. Hammer RP Jr.
(2008) Guhertina dirêjtirîn di strukturên mesocorticolimbic de piştî stresa têkçûna civakî ya dubare di rats de: qursa dema mu-opioid receptor mRNA û fosB / DeltaFosB immunoreactivity Nebatên Eur J 27: 2272 – 2284.
CrossRefMedline
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Duman RS,
7. Nestler EJ
(2004) Di pêvajoya ΔFosB de di strukturên mêjî de piştî zextên zindî. J Neurosci 24: 10594-10602.
Abstract / Free Full Text
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Robison B,
4. Renthal W,
5. Maze I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Knapp DJ,
9. Selley DE,
10. Martin BR,
11. Sim-Selley L,
12. Bachtell RK,
13. Self DW,
14. Nestler EJ
(2008) Modelên berbiçav ên DeltaFosB-ê di mêjî de ji hêla narkotîkên tacîzê ve vedihewîne. Synapse 62: 358 – 369.
CrossRefMedline
25. ↵
1. Philippar U,
2. Schratt G,
3. Dieterich C,
4. Müller JM,
5. Galgóczy P,
6. Engel FB,
7. Keating MT,
8. Gertler F,
9. Schüle R,
10. Vingron M,
11. Nordheim A
(2004) Sermiyona gelemperî ya SRF Fhl2 dijberkirina RhoA / MAL-ê ya çalakkirina SRF dijber dike. Mol Cell 16: 867 – 880.
CrossRefMedline
26. ↵
1. Ramanan N,
2. Shen Y,
3. Sarsfield S,
4. Lemberger T,
5. Schütz G,
6. Linden DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF navberdana çalakiya ku ji hêla giyayê vejenê û teşebuskirina synaptic dike lê ne qewitandina neuronal e. Nat Neurosci 8: 759 – 767.
CrossRefMedline
27. ↵
1. Renthal W,
2. Carle TL,
3. Maze I,
4. Covington HE 3rd.,
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Kumar A,
8. Montgomery RL,
9. Olson EN,
10. Nestler EJ
(2008) Delta FosB piştî eşkerekirina kêşeya amfetamîn li nav genê c-fos mestir dike desensitasyona epigenetic. J Neurosci 28: 7344 – 7349.
Abstract / Free Full Text
28. ↵
1. Renthal W,
2. Kumar A,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Covington HE 3rd.,
6. Maze I,
7. Sikder D,
8. Robison AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Russo SJ,
12. Vialou V,
13. Chakravarty S,
14. Kodadek TJ,
15. Stack A,
16. Kabbaj M,
17. Nestler EJ
(2009) Analîziya berbiçav a genomê ya rêziknameya chromatin a ji hêla kokainê ve rolek ji sirtuins diyar dike. Neuron 62: 335 – 348.
CrossRefMedline
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Cohen MX,
3. Biryar C,
4. Kosel M,
5. Brodesser D,
6. Axmacher N,
7. Joe AY,
8. Kreft M,
9. Lenartz D,
10. Sturm V
(2008) Stimulasyona mêjî ya kûr a ku xelata qaydeyê dide anhedonia di depresyona mezin a zirav de vedixwe. Neuropsychopharmacology 33: 368 – 377.
CrossRefMedline
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Grace AA
(2010) Torgiloka xelatdayîna gangliya Cortico-basal: mîkrokûryer. Neuropsychopharmacology 35: 27 – 47.
CrossRefMedline
31. ↵
1. Tomita H,
2. Vawter MP,
3. Walsh DM,
4. Evans SJ,
5. Choudary PV,
6. Li J,
7. Overman KM,
8. Atz ME,
9. Myers RM,
10. Jones EG,
11. Watson SJ,
12. Akil H,
13. Bunney WE Jr.
(2004) Bandora faktorên agonal û postmortem li ser profîla xeberdana genê: kontrolkirina kalîteyê di analîzên microarray de an jî mêjiyê mirovê postmortem. Psîkolojiya Biol 55: 346 – 352.
CrossRefMedline
32. ↵
1. Tsankova NM,
2. Berton O,
3. Renthal W,
4. Kumar A,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ
(2006) Rêgezek chromatinî ya hippocampal ya domdar di modela mûzek depresiyonê û çalakiya antidepressant de. Nat Neurosci 9: 519 – 525.
CrossRefMedline
33. ↵
1. Vassoler FM,
2. Schmidt HD,
3. Gerard ME,
4. KR navdar,
5. Ciraulo DA,
6. Kornetsky C,
7. Knapp CM,
8. Pierce RC
(2008) Stimulasyona mêjî ya kûr a nucleus di nav guleyê de zirav dike û di reaktora lêgerînê ya dermanê ku di nîskan de ye re dibe sedema destpêkirina kokaîn. J Neurosci 28: 8735 – 8739.
Abstract / Free Full Text
34. ↵
1. Vialou V,
2. Robison AJ,
3. Laplant QC,
4. Covington HE 3rd.,
5. Dietz DM,
6. Ohniyi YN,
7. Mouzon E,
8. Rush AJ 3rd.,
9. Watts EL,
10. Wallace DL,
11. Iñiguez SD,
12. Ohniyi YH,
13. Steiner MA,
14. Warren BL,
15. Krishnan V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ghose S,
19. Berton O,
20. Tamminga CA,
21. Nestler EJ
(2010) ΔFosB di cûrbecûrên xelatkirina mêjî de bersîva tundî û bersivên antidepressant bi navgîn dike. Nat Neurosci 13: 745 – 752.
CrossRefMedline
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Kumar A,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ
(2009) Dermankirina ipmipramîn û berxwedana pêgirtan rêziknameya kromatîn a weha li herêma xelatkirina mêjî ya sereke nîşan didin. J Neurosci 29: 7820 – 7832.
Abstract / Free Full Text
36. ↵
1. Xia Z,
2. Dudek H,
3. Miranti CK,
4. Greenberg ME
(1996) Bûyera kalcium bi rêya receptora NMDA pê re rûbirûbûna zûka ya genê ji hêla Mekanîzma MAP kinase / ERK ve girêdayî dibe. J Neurosci 16: 5425 – 5436.
Abstract / Free Full Text