Fadok JP, Darvas M, Dickerson TMK, Palmiter RD
(2010). PLoS TASI 5(9): e12751. doi:10.1371/journal.pone.0012751
Jonathan P. Fadok1,2, Martin Darvas2, Tavis MK Dickerson2, Richard D. Palmiter2
1 Polokalame Faʻauʻu i le Neurobiology ma Amio, Iunivesite o Uosigitone, Seattle, Uosigitone, Iunaite Setete o Amerika,
2 Matagaluega o Biochemistry ma Howard Hughes Medical Institute, Iunivesite o Uosigitone, Seattle, Uosigitone, Iunaite Setete o Amerika
Ole neurotransmitter dopamine (DA) e manaʻomia mo le aʻoaʻoina i se faʻalavelave fefe Pavlovian fa'ata'ita'iga ua ta'ua o le fefe-potentiated te'i (FPS). O isumu e leai se malosi e faʻapipiʻi ai le DA ua le mafai ona aʻoaʻoina le fesoʻotaʻiga i le va o le faʻaosofia o le faʻamalosi ma le faʻafefe-faʻafefe vae. I le taimi muamua, na matou faʻaalia o le toe faʻaleleia o le tuʻufaʻatasiga o le DA i neu o le ventral tegmental area (VTA) na lava e toe faʻaleleia ai le FPS. O iinei, na matou faʻaogaina ai se auala e toe faʻaleleia ai viral-filifiliga e iloa ai po o fea vaega o le faiʻai mesocorticolimbic o loʻo mauaina le faʻailoga DA mai le VTA e manaʻomia le DA mo FPS. Matou te faʻaalia o le toe faʻaleleia o le faʻasologa o le DA i le amygdala basolateral (BLA) ma le nucleus accumbens (NAc) e manaʻomia mo le manatua umi o le FPS. O nei faʻamatalaga e tuʻuina atu ai faʻamatalaga taua i le dopamine-faʻalagolago i le matagaluega o loʻo aʻafia i le faʻavaeina o mafaufauga faʻafefe.
faʻatomuaga
O loʻo faʻapipiʻiina e le neurons i totonu o le faiʻai i totonu o le faiʻai, e aofia ai le hypothalamus, olfactory bulb, ma le ogatotonu o le vaeluaga [1]. DA neurons i le VTA o le ventral midbrain project i vaega o le faiʻai limbic e taua mo le fefe, e pei o le cortex muamua, hippocampus, amygdala, ma le NAc [1], [2], [3]. O loʻo ogatasi ma se matafaioi a le DA i le faʻafefe o le fefe, o le fua o le sasaina o neurons DA e suia e ala i le faʻafefe faʻaosofia faʻapea foʻi ma faʻamatalaga e vaʻai ai iʻuga leaga [4], [5], [6]. E le gata i lea, i le tali atu i faʻalavelave mataʻutia poʻo tulaga faʻalavelave, e faʻateleina le maualuga o le DA i le tele o vaega ole faiʻai limbic. [7], [8], [9], [10] ma vailaʻau ma faʻataʻitaʻiga faʻapitoa o galuega a le DA e mafai ona faʻalavelaveina aʻoaʻoga i faʻataʻitaʻiga o le fefe [11], [12], [13], [14].
I totonu o le Pavlovian fear conditioning, o se mea faʻafefe faʻafefeteina, e pei o se moli, e faʻapipiʻiina ma se faʻalavelave faʻafefeteina, e pei o se vae. A maeʻa aʻoaʻoga, o le tuʻuina atu o le faʻamalosi faʻapitoa e faʻaalia ai tali fefe [3]. O le FPS o se faʻataʻitaʻiga masani a le Pavlovian e faʻafefe ai le fefe lea e suʻesuʻeina ai aʻoaʻoga e ala i le faʻateleina o faʻaopoopoga i le tali faʻafuaseʻi [15]. Ua matou faʻaalia muamua o DA neurons i le VTA e lava mo le aʻoaʻoina i se FPS paradigm [12]. E le gata i lea, na matou faʻaalia o le DA i le BLA e lava e maua ai mafaufauga pupuu (STM), ae le o se manatua umi (LTM), o le faʻalavelave faʻafuaseʻi. O faʻamoemoega o loʻo totoe o le VTA DA neurons, o le NAc e maua le tele o faʻasalalauga ma o lea na avea ai ma nofoaga autu mo le faʻavaeina o le LTM mo FPS [2].
O se tusitusiga tele e lagolagoina se matafaioi mo DA i totonu o le NAc mo faʻagasologa o aʻoaʻoga faʻapitoa i faʻataʻitaʻiga faʻavae taui [16]. E le o manino i le taimi nei pe taua foi le DA i le NAc mo le aʻoaʻoina i le Pavlovian fear conditioning. Ae ui i lea, o suʻesuʻega ua faʻaalia ai le maualuga o le DA i le NAc e tali atu ai i faʻalavelave mataʻutia ma faʻamatalaga vavalo [10]. E le gata i lea, o le NAc o loʻo faʻamalosia tele e le BLA [16], [17], o se nucleus e manaʻomia mo le faʻafefe o le fefe, ma o le DA e faʻafaigofie ai le gaioiga i le NAc ma le BLA [18], [19], [20], [21]. ]. O le mea lea, e mafai ona fesoʻotaʻi i le va o le BLA ma le NAc, ma le faʻailoga a le DA i nei itulagi uma e lua, e manaʻomia mo le faʻafefe o Pavlovian.
Ina ia iloa pe manaʻomia le DA i le NAc ma le BLA mo le LTM i le Pavlovian fear conditioning, na matou faʻaogaina le faʻataʻitaʻiga o le kiore dopamine-deficient (DD) e leai se malosi e faʻapipiʻi ai le DA ona o le faʻaofiina o le loxP-flanked transcriptional / translational stop. kaseti i le tyrosine hydroxylase (Thfs) gene [22]. I le i ai o le Cre recombinase, e mafai ona toe faʻaleleia le faʻailoga a le DA i vaega faʻapitoa e ala i le toe faʻafouina o le Thfs allele e ala i le aveeseina o le kaseti taofi. Na matou fa'aogaina se virusi toe fa'afo'isia fa'asalalau e fa'aalia ai le Cre recombinase e toe fa'afo'i fa'atonu le DA i le NAc na'o ia, po'o le NAc ma le BLA. O a matou faʻaiʻuga e faʻaalia ai o le DA i le NAc ma le BLA e lava mo le faʻavaeina o le LTM mo FPS.
i'uga
Toe fa'afo'isia o le TH i Mice DD Fa'asaoina Fa'aola
Ina ia iloa poʻo fea i totonu o le faiʻai DA e manaʻomia mo le faʻavaeina o le LTM mo FPS, na toe faʻaleleia le galuega a le DA i DD mice e ala i tui ole CAV2-Cre recombinase. O lenei siama e filifili faʻamaʻi faʻamaʻi neu ma e toe feaveaʻi mai le nofoaga o tui [23]. Afai e tui i totonu o le autu autu o DA neurons i DD mice, o lenei siama o le a toe faʻafoʻi atu i DA neurons o le ogatotonu ogatotonu lea e faʻaosoina ai le kaseti taofi faʻafefe ma toe faʻafoʻisia ai le gene Th, toe faʻaleleia le gaosiga o le TH, ma faʻatagaina le gaosiga o le DA naʻo le sini filifilia [22]. Na matou fa'aogaina lenei metotia i vaega eseese e lua o isumu. Talu ai ona o le NAc o le faʻamoemoe sili ona tele o DA neurons o le VTA [2], matou te manatu e ono taua tele lenei nucleus mo le faʻavaeina o le LTM mo FPS; o le mea lea, o tui faʻapitoa o le CAV2-Cre na faia i totonu o le NAc i le tasi vaega. Na matou faʻataʻitaʻia foʻi le manatu e ono manaʻomia le DA i le tele o sini o le VTA mo LTM. Ina ia faʻataʻitaʻiina lenei mea, na faia tui faʻapitoa i le NAc ma le BLA o DD mice.
Immunohistochemistry na faʻaaogaina e faʻamaonia ai le toe faʻaleleia o le galuega a le TH i mice DD faʻamaʻi siama (Ata 1). E pei ona faʻamoemoeina, sa i ai se faʻailoga malosi mo le TH i le NAc o le faʻatonutonuina o isumu e faʻatasi ma le DA transporter (DAT) (Ata 1A-D). Na maua foi le TH i le BLA o isumu pulea (Ata 1E); ae ui i lea, o le DAT immunoreactivity na matua maualalo i le BLA ma o lea e le o faʻaalia. O le immunohistochemistry na faia foi i luga o le faiʻai mai isumu DD e leʻi tui (Ata 1 F-J). E leai se faʻailoga TH faʻaalia i le NAc (Ata 1F, G), ae o loʻo iai le staining DAT (Ata 1H, I). O le BLA o le DD mice na tele lava ina leai se TH staining (Ata 1J).
Ata 1
Toe faʻafoʻisia filifilia o le TH i mice DD faʻasaoina virally.
Immunohistochemistry mai le NAc-injected DD mice na faʻaalia ai na toe faʻaleleia le TH i le tele o le NAc (Ata 1K-N). Leai se TH faʻaalia na matauina i le BLA o NAc-injected DD mice (Ata 1O). Faʻalua laveaʻi i le NAc ma le BLA na maua ai se faʻailoga malosi mo TH i le NAc (Ata 1P-S) ma se faʻailoga malosi TH i le BLA (Ata 1T). O fa'amaumauga nei o lo'o fa'aalia ai o le tui viral o le CAV2-Cre na matua aoga tele i le toe fa'aleleia o le fa'aaliga o le TH fa'apitoa i le fai'ai na tui.
Ina ia faʻamaonia o le laveaʻiina viral o le TH na taʻitaʻia ai le toe faʻaleleia o le DA i isumu DD tui, matou te faʻatusatusaina DA, DA metabolites ma norepinephrine e faʻaaoga ai le chromatography vai maualuga (HPLC; Laulau 1). Mo lenei faʻataʻitaʻiga, matou te faia le laveaʻiina i le NAc poʻo le amygdala e fuafua ai foi pe o le laveaʻiina o le TH i se tasi o faʻamoemoega o faʻataʻitaʻiga a le DA o le a aʻafia ai le maualuga o le DA i se isi itu e le o tui. Na matou mauaina o le dopamine-depleted DD mice na i ai le 0.51% o le pulea o le maualuga o le DA i le NAc ma le 1.39% o le faʻatonutonuina o tulaga i le amygdala. NAc-laveaiina DD isumu sa i ai tulaga DA o 34.0% o le pulea i le NAc; ae o le maualuga o le DA i le amygdala e tutusa ma tulaga DD e leʻi tui (1.57%). Amygdala-laveaiina DD isumu sa i ai le maualuga o le DA i le amygdala o le 38.4% o le puleaina, ae o le maualuga o le DA i le NAc e tutusa ma le le laveaʻiina DD maualuga (0.46%). O fa'ai'uga nei e fa'aalia ai o le lavea'iina o le TH fa'ama'i fa'ama'i e ta'ita'i atu ai le maualuga o le maualuga o le DA i vaega fa'atatau o le isumu DD.
E le gata i lea, o le tuiina o le siama i totonu ole NAc poʻo le amygdala e leʻi taʻitaʻia ai le maualuga ole maualuga ole DA ile isi sini. Ma le mea mulimuli, talu ai o le TH o loʻo faʻaalia i noradrenergic neurons o DD mice [24], [25], matou te taʻua le itiiti o le TH o loʻo vaaia i le IHC o le BLA i le DD mice i le noradrenergic axons. O le i ai o le norepinephrine i le BLA o isumu DD e le faʻasaoina na faʻamaonia i le HPLC (Laulau 1).
Laulau 1
HPLC Fuafuaga o DA, NE, ma metabolites DA.
E manaʻomia le Dopamine i le NAc ma le BLA mo le Faʻamanatuga umi
O le fefe-potentiated tete'e o se ituaiga o Pavlovian conditioning lea e fa'atupu ai le fa'aoso fa'aoso fa'atupuina le fa'atuputeleina o le tali fa'afuase'i [15]. Ina ia mautinoa o le toe faʻaleleia o le DA naʻo le NAc, pe naʻo le NAc ma le BLA, e le faʻaleagaina ai le tali faʻafuaseʻi lava ia, na faʻatupuina pupuni tali faʻafuaseʻi mo faʻatonuga ma laveaʻiina DD mice (Ata 2A). O suʻesuʻega faʻasolosolo e lua-auala o le eseesega (RM ANOVA) na faʻaalia ai se aafiaga taua o le malosi o le leo (F (4,172) = 37.1, p<0.01), ae leai se vaega e ala i fegalegaleaiga togafitiga. O le faʻalavelaveina o galuega a le DA e mafai foi ona mafua ai eseesega i le gating sensorimotor e mafai ona faʻaleagaina FPS [15], [26]. Ina ia suʻesuʻeina le gating sensorimotor, o isumu uma na faʻataʻitaʻiina i le tele o laʻasaga i se faʻataʻitaʻiga muamua (PPI) (Ata 2B). Sa i ai se aafiaga taua o le prepulse malosi (RM ANOVA F (2,86) = 57.79, p <0.01) ae leai se vaega e ala i fegalegaleaiga togafitiga. O nei taunuʻuga e faʻaalia ai o le laveaʻiina filifilia o le faailoilo a le DA i le NAC, poʻo le NAc ma le BLA, na mafua mai ia matou faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga e leʻi suia ai le tali faʻafuaseʻi poʻo le gating sensorimotor. mo FPS. O isumu na tuʻuina atu i se faʻataʻitaʻiga o le fefe (Ata 2C). I le taimi o aʻoaʻoga, na tuʻuina atu ai isumu 2 faʻataʻitaʻiga lea na tuʻufaʻatasia ai le 30-sec light cue ma se vae vaivai (10 sec, 0.5 mA). Faʻamanatuga puupuu (STM) na faʻataʻitaʻiina 0.2 min ina ua maeʻa aʻoaʻoga ma faʻataʻitaʻiina le LTM 10 hr mulimuli ane. E leai ni eseesega taua i le va o vaega aʻo leʻi faʻatulagaina. I le maeʻa ai o aʻoaʻoga, na toe faʻaleleia atoatoa le STM i DD mice ma le toe faʻaleleia i le NAc ma le BLA. STM i le NAc-injected DD mice na faʻaleagaina, ae o lenei aafiaga na le mafai ona ausia le taua; ae ui i lea, e matua itiiti lava a latou LTM nai lo isumu pulea (p<24; Bonferroni posttest). LTM na toe faʻafoʻisia atoatoa e pulea tulaga i DD mice na tui faʻatasi i le NAc ma le BLA. E leai se eseesega tele i le va o vaega i uiga faʻaalia i le maʻi vae (Ata 0.05D). O faʻamaumauga nei o loʻo faʻaalia ai le DA i le NAc ma le BLA e lava e faʻafaigofie ai le LTM mo FPS.
Talanoaga
O loʻo manatu le DA e faʻafaigofie le faʻamalosia ma le faʻavaeina o le LTM i vaega autu o le faiʻai limbic e pei o le amygdala, NAc ma le hippocampus [27], [28], [29], ma o suʻesuʻega talu ai ua fautuaina ai se matafaioi mo le DA i le Pavlovian fear conditioning [ 13]. I le taimi muamua, na matou faʻaalia e taua tele le DA mo le faʻamautuina o le manatuaga i se FPS paradigm [12]. E le gata i lea, o le toe faʻaleleia o galuega a le DA i le mesocorticolimbic circuit e mafua mai i le VTA na lava e toe faʻafoʻi ai le STM ma le LTM mo FPS, ae o le toe faʻafoʻisia i le BLA naʻo le toe faʻafoʻisia STM [12]. Ae ui i lea, o nofoaga o le gaioiga a le DA e manaʻomia mo le faʻavaeina o le LTM i lenei ituaiga o aʻoaʻoga e leʻi iloa. O iinei, matou te faʻaalia o le toe faʻaleleia o le faʻasologa o le DA i le NAc ma le BLA e lava mo LTM mo FPS. Matou te iloa foi o le toe faʻaleleia o le TH i DA neurons o loʻo faʻatinoina i le NAc e leʻi aoga tele i le laveaʻiina o le STM e pei o le BLA toe faʻaleleia [12], poʻo le toe faʻaleleia i le BLA ma le NAc. E taʻu mai ai o le NAc atonu e sili atu le taua mo le faʻavaeina o le LTM nai lo le STM.
O se tasi o faʻamatalaga faʻapitoa i le auala e toe faʻaleleia ai viral e mafai e neurons DA ona tuʻuina atu faʻamaoniga faʻamaonia i le sili atu ma le tasi le sini. O le mea lea, o le tuiina o le siama i totonu o le NAc e mafai ona toe faʻafoʻi le TH, ma faʻapea DA, i le BLA. O a matou immunohistochemistry i'uga e ta'u mai ai o le DA neurons o lo'o i totonu o le NAc o se faitau aofa'i ese'ese mai i latou o lo'o fa'aosoina le BLA ona o le tuiina o le siama i le tasi fai'ai e fa'aleleia ai le pisia o le TH na'o lena itulagi. O taunuʻuga a le HPLC e faʻamalosia ai lenei finauga ona o le maualuga o le DA e maualuga i le NAc o le NAc-faʻasaoina DD mice ae le o le amygdala. O nei suʻesuʻega e ogatusa ma le tele o suʻesuʻega na suʻesuʻeina le eseesega o DA neurons e faʻavae i luga o faʻamoemoega [30], [31], [32], [33].
O le matagaluega ma masini e faʻavae ai le manaʻoga mo le DA i le NAc ma le BLA mo Pavlovian faʻafefe faʻafefe e tumau pea e leʻi foia. O le mea e mataʻina ai, o le BLA e tuʻuina atu faʻamatalaga i le NAc [16], [34] ma o nei synapses e mafai ona maua le malosi umi, o se fesoʻotaʻiga telefoni feaveaʻi o le aʻoaʻoina ma le manatua [35]. E le gata i lea, e faʻafaigofie e DA le LTP i le BLA ma le NAc [18], [21]. O le mea lea, i le taimi o le fefe o Pavlovian, e mafai e le DA i le BLA ona faʻatautaia le glutamatergic pyramidal cell activity [19], [20], [36], e aofia ai na sela o loʻo faʻaogaina i le NAc [34], ae o le DA i le NAc faʻafaigofie. LTP o le BLA i le NAc synapses, ma faʻateleina ai le faʻavaeina o le LTM. O le fuafuaina o le taimi tonu o mea e faʻalagolago i le DA i le BLA ma le NAc mo FPS o le a faʻaleleia ai lo tatou malamalama i lenei faagasologa.
Mea ma Metotia
Talosaga Tetele
O isumu uma na togafitia e tusa ai ma taʻiala na faʻatuina e le National Institutes of Health ma taualumaga faʻatasi ai ma isumu na faʻamaonia e le Iunivesite o Washington Institutional Animal Care and Use Committee (2183-02).
Meaola ma togafitiga
DD isumu na gaosia e pei ona faamatalaina [22]. I se faapuupuuga, DD (Thfs/fs; DbhTh/+) isumu e ave lua tyrosine hydroxylase (Th) alleles e le mafai ona faʻaaogaina e mafai ona toe faʻafouina e le Cre recombinase. O isumu DD e tasi le dopamine β-hydroxylase (Dbh) allele, ma le tasi Dbh allele faʻatasi ma le faʻaogaina o le Th gene e faʻatagaina ai le gaosiga masani o le norepinephrine [24], [25]. O manu fa'atonutonu e ave a itiiti ifo ma le tasi le Th allele ma le tasi Dbh allele. O isumu tane ma fafine na faia i suʻesuʻega o amioga i le va o le 2-6 masina. O isumu uma na faʻapipiʻiina i lalo ole 12 12 (malamalama: pogisa) taamilosaga i se siosiomaga e pulea le vevela ma meaʻai (5LJ5; PMI Feeds, St. Louis, MO) ma le vai avanoa ad libitum. O fa'ata'ita'iga uma fa'ata'ita'iga sa fa'atino i le ta'amilosaga malamalama. Talu ai ona o isumu DD e matua'i hypophagic, na tui i latou i aso uma (intraperitoneally) ma le 3, 4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-Dopa) i le 50 mg/kg i le voluma o le 33 µl/g, e amata ile aso pe a uma le fanau. 10 [25]. Ina ua maeʻa tui viral, na tausia DD isumu i aso uma tui o le L-Dopa seia mafai ona latou 'ai lelei e aunoa ma se togafitiga L-Dopa.
Iniseti Viral
Isoflurane (1.5-5%)-o isumu faʻamaʻi na tuʻuina i totonu o se mea faʻapitoa (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Mo le toe faʻaleleia o le gaioiga o le Th gene i totonu o le nucleus accumbens na o ia, recombinant CAV2-Cre virus (titered i 2.1 × 1012 particles / ml) na tui faʻatasi (faʻamaopoopo i mm: 1.7 i luma i Bregma, 0.75 lateral i le ogatotonu, 4.75 ventral i Bregma; 0.5 µl/hemisphere) i le DD ma pulea isumu. Mo le toe faʻaluaina o le DA i le NAc ma le BLA, o le CAV2-Cre virus na tui faʻatasi i totonu o le NAc, pei o luga, ma le BLA (faʻamaopoopo i mm: 1.5 pito i tua i Bregma, 3.25 pito i tua i le ogatotonu, 5 ventral i Bregma; 0.5 µl /hemisphere) i le DD ma pulea isumu. O faʻamatalaga auiliili o lenei vailaʻau viral ua faʻasalalau [22]. O siama na tui i luga o le 10-min vaitaimi e faʻaaoga ai se nila tui 32-gauge (Hamilton, Reno, NV) faʻapipiʻi i se pamu micro-infusion (WPI, Sarasota, FL). Pulea isumu mai le NAc na'o ma lua lavea'i vaega na tu'ufa'atasia i le tasi vaega ma e le'i 'ese'ese i so'o se ta'iala tau amio.
Meafaigaluega
O potu faʻalavelave faʻafuaseʻi (SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) na faʻaaogaina e fua ai le faʻalavelave muamua, tali faʻafuaseʻi, ma le fefe tele, e pei ona faamatalaina [12]. O le maualuga maualuga o le tali na faʻaaogaina e faʻatatau ai le faʻalavelave muamua, tali faʻateʻia, teʻi faʻafefe, ma le faʻalavelave faʻafuaseʻi. Na fa'amaonia le maualuga o le leo i le fa'aogaina o le faitau leo (RadioShack, Fort Worth, TX). Na faʻaaogaina se iunite faʻavasegaina e faʻamautinoa ai le faʻamaoni o faitauga tali faʻafuaseʻi (San Diego Instruments, San Diego, CA). O se moli 8-watt na faʻapipiʻiina i le puipui pito i tua o le pusa faʻafuaseʻi mo le faʻaaogaina e fai ma faʻailoga.
Amata tali amata
I le maeʻa ai o le 5-min, na tuʻuina atu i manu le 10 faʻasologa o faʻataʻitaʻiga faʻatasi ai ma le faʻateleina o le paʻu leo: mai le null, lea e leai se leo, i le 105 dB, ma le ITI o le 30 sec. O fatu leo uma e 40 msec.
Faʻailoga muamua
PPI na fuaina e pei ona faamatalaina [12]. I se faapuupuuga, i le maeʻa ai o se vaitaimi masani, o isumu na tuʻuina atu i le 5, 40-msec, 120-dB, faʻataʻitaʻiga naʻo le pulse. Ona tuʻuina atu lea o isumu i faʻataʻitaʻiga 50 o se faʻataʻitaʻiga faʻafuaseʻi-na o ia, o se tasi o faʻataʻitaʻiga muamua e tolu (5, 10, ma le 15-dB i luga aʻe), poʻo se faʻataʻitaʻiga le aoga lea e leai se faʻamalositino. Na fa'atatau le fa'alavelave fa'ato'a mo ta'imua ta'itasi e fa'aaoga ai le fua fa'atatau: % inhibition = [(o le tali fa'ate'ia averesi i luga o le fa'ata'ita'iga muamua / averesi tali fa'ate'ia i luga o le fa'ata'ita'iga na'o le pulse) ×100].
Te'i fa'atupu fefe
O isumu uma na faʻataʻitaʻiina e faʻaaoga ai le 3-aso FPS paradigm e pei ona faʻamatalaina [12]. I se faapuupuuga, i luga o le laina, na tuʻuina atu i isumu se faʻasologa faʻafuaseʻi o faʻataʻitaʻiga o 20 faʻataʻitaʻiga, vaelua tutusa i le va o le faʻailoga ma le leai o se faʻailoga. I le aso 2, na maua e mice 30 pairings (2 min mean ITI) o le 10-sec cue light ma le 0.2-mA, 0.5-sec footshock. Ona tuʻu lea o isumu i totonu o latou fale mo le 10 minute aʻo leʻi faia suʻega mo se taimi pupuu. I le aso 3, na iloiloina ai le LTM. O le fua fa'atatau o lo'o i lalo na fa'aaogaina e fa'atatau ai le fa'ate'ia fa'amata'u: %potentiation = [(averesi o tali i fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga/ averesi o tali i fa'ata'ita'iga leai-1) ×100].
Immunohistochemistry
Na saunia le faiʻai o le isumu mo suʻesuʻega faʻasolopito e faʻaaoga ai metotia masani, e pei ona faʻamatalaina [12]. O vaega o le coronal opeopea fua (30 µm) na puipuia i le lapiti anti-TH (1 2000, Millipore) ma rat anti-DAT (1 1000, Millipore) antibodies. O faʻamaʻi faʻamaʻi lua na faʻapipiʻiina Cy2- poʻo Cy3- (1 200, Jackson ImmunoResearch). Na pu'eina ata i se microscope fa'asa'o sa'o (Nikon).
Faʻasologa o le vai chromatography
Na fa'amama isumu ile Beuthanasia (250 mg/kg) ona aveese lea ole fai'ai ma tu'u i luga ole ipu maamora malulu aisa. I le faʻaaogaina o se matrix faiʻai o le isumu (Activational Systems, Warrren, MI), 1-mm fasi pepa mafiafia na ave i le NAc poʻo le amygdala. Ona ave lea o tu'i (1-mm le lautele), tu'u i totonu o paipa microcentrifuge 1.7 mL, ma fa'ato'a aisa i le vai. O faʻataʻitaʻiga na teuina i le −80 ° C seia oʻo ina lafoina i luga ole Dry Ice ile Neurochemistry Core Lab (Venderbilt University Center mo Molecular Neuroscience Research) mo suʻesuʻega.
Iloiloga Faʻamaumauga
Sa fa'atinoina le su'esu'ega fa'amaumauga i le fa'aaogaina o le GraphPad Prism software (La Jolla, Kalefonia).
tautinoga
Matou te faafetai atu ia Larry Zweifel mo faamatalaga aoga i tusitusiga, Glenda Froelick ma Albert Quintana mo le fesoasoani i tala faasolopito, ma Valerie Wall mo le tausiga o le koleni o isumu. Matou te faafetai atu foi ia Dr. Miguel Chillon (Vector Production Unit of CBATEG i Universitat Autonoma of Barcelona) mo CAV2.
Faamatalaga Faʻamatalaga
Tulaga Faatauva: Ua faailoa mai e tusitala e leai ni mea e fiafia i ai.
Faʻatupeina: O lenei suʻesuʻega na lagolagoina i se vaega e le Howard Hughes Medical Institute, Public Health Service, National Research Service Award, T32 GM07270, mai le National Institute of General Medical Sciences ma NIH National Institutes of General Medical Sciences 'Grant 4 R25 GM 058501- 05. E leai se sao a le au faʻatupeina i suʻesuʻega suʻesuʻega, aoina o faʻamaumauga ma auʻiliʻiliga, faʻaiuga e lolomi, poʻo le sauniaina o tusitusiga.
mau faasino
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