O le fausiaina o le talafaasolopito o Histone deacetylase e faʻafaigofie le faʻavaeina o paaga i le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi (2013)

Hui Wang,^*,1,2,3 Florian Duclot,^*,1,2 Yan Liu,^2,3 Zuoxin Wang,^2,3 ma Mohamed Kabbaj^1,2

Faamatalaga tusitala ► Faamatalaga o le Puletaofia ma Laisene ►

I le va fealoai faʻapisinisi e tasi (Microtus ochrogaster), o le faʻateleina o le uʻamea tumau-faʻatagaina na amataina e le paaga ma le faʻatautaia e le tele o neurotransmitters e aofia ai le okesene, vasopressin, ma le dopamine. O iinei na matou suʻeina ai gasegase faʻataʻitaʻiga e faʻatautaia ai le tuʻufaʻatasiga o paga-lua. Matou te faʻaalia o le histone deacetylase inhibitors sodium butyrate ma le TrichoStatin A (TSA) e faʻafaigofieina le faʻavaeina o paaga i le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi i le leai o se tamaʻitaʻi. O lenei mea na fesoʻotaʻi ma se tulafono faatonutonu faʻapitoa o le okesene (OTR) ma vasopressin V1a (V1aR) i le nucleus accumbens, e ala i se faʻaopoopoga i le histone acetylation i le latou faʻalauiloa. E le gata i lea, o le TSA-faʻafaigofie le fiafia i le paaga na puipuia e le OTR poʻo le V1aR pa puipui i le tumutumu. O le mea taua, o le fiafia i paaga e faʻaaogaina i le matai na faʻaalia ai le tulafono faʻavae e tasi o le OTR ma le V1aR faʻalauiloa ole gene o le TSA. O nei matauga ua faailoa mai ai o le TSA ma le fesoasoani e faafaigofie ai le fiafia o paaga e ala i epigenetic events, ma tuuina atu ai le uluai faamaoniga tuusaʻo mo se tulafono o le epigenetic o paga-lua.

O le togafitiga a le TSA e faʻamalosia ai le fiafia i paaga

Faʻasalaga faʻafeusuaiga fafine faʻapitoa e faʻasolosolo faʻafuaseʻi (vv.) ma le CSF poʻo le CSF o loʻo i ai 0.08, 0.4 poʻo 4 ng o le TSA i luma tonu o le 6-itula faʻatasi ma le tane e aunoa ma le faʻaipoipo, ma o la latou paaga filifilia na tofotofoina. O le ono itula o le nonofo faʻatasi ma se tane e aunoa ma le faʻaipoipoina e le aʻafia ai le faʻafeiloaʻiina o paaga i le tamaʻitaʻi⁴ ma o lea la ua faʻaaogaina ai lenei faʻalapotopotoga faʻapitoa e iloilo ai aafiaga o fualaau faʻasaina i le faʻafaigofieina o le faʻavaeina o mea e fiafia iai⁵.

Na faʻaalia e manu feʻai a le CSF se fesoʻotaʻiga i le itu i itu itu ma le paaga poʻo le tagata ese e mulimuli i 6 itula o le nonofo faʻatasi e aunoa ma le faʻaipoipo (t₁₅= 0.76, P = 0.46; Fig. 1a). Ae ui i lea, o manu na togafitia ma le TSA i suʻega uma sa tofotofoina na faʻaaluina le sili atu le taimi sili atu nai lo le tagata ese (t₈= 4.35, P = 0.002 mo le TSA 0.08 ng vaega; t₁₅= 3.63, P = 0.002 mo le TSA 0.4 ng vaega; ma t₈= 2.58, P = 0.03 mo le TSA 4 ng vaega). O le mea taua, e leai se eseesega o kulupu na maua i le mafutaga faʻatasi (F_3,46 = 1.25, P= 0.30, Fig. 1b) ma e leai se amioga faʻamalosi i le suʻega a le tamaitai i le tagata ese poʻo le paaga na matauina, faʻaalia o aʻafiaga o le TSA e patino i se fiafiaga lautele, nai lo le tulaga lua i se fesuiaiga o le faʻagasolosolo poʻo le faʻalavelave faʻaagafesootai i le tagata ese.

  

Ata 1

O se tui malosi o le trichostatin A (TSA) e faʻafaigofie ai le faʻavaeina o paaga i le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi i le leai o se tamaʻitaʻi. (a) O le Cerebrospinal fluid (CSF) -o fafine ua faʻailoaina atu i tama tane mo 6 itula i le toesea o le matai e faʻaalia ai le le filifilia ...

Ina ia suʻesuʻeina pe faʻalauteleina e le TSA le faʻasaina o le histone i faiʻai o loʻo faia i le fausiaina o se paaga sili, o le isi vaega o fafine na faʻamaʻiina i le fua ole fua ole TSA (0.4 ng) ma nonofo faʻatasi ma se tane i le leai o se faʻaipoipo i le 30 min, 2 poʻo 9 itula. E le gata i lea, e leai se eseesega tele i le talafaasolopito o le lalolagi H3 acetylation (Lys14) e ono mafai ona iloa i soo se taimi-i totonu uma o le NAcc ma le caudate putamen (P > 0.05 mo vaega uma, Ata 1c & d). O loʻo faʻaalia ai e le TSA faʻafaigofie le tuʻufaʻatasiga o paaga i le leai o se faʻaipoipoga, e ui lava e le aʻafia ai le talafaasolopito o le H3 i le NAcc poʻo le tuʻuina o le kulimi.

O le mea taua, o le meaterate sodium na faʻafaigofieina ai le fiafia i paaga tamaʻitaʻi aʻo nonofo faʻatasi ma se tamaloa mo 6 itula e aunoa ma le faʻaipoipo, e fesoʻotaʻi ma le faʻaopoopoga i le talafaasolopito o le H3 acetylation (Lys14) i le NAcc (Faʻaopoopo Ata 1). O aʻafiaga o le TSA i luga o se paaga aloaʻia e ono mafai ona toe faia ma se tasi o le inhibitor HDAC, o loʻo fautua mai ai le aafia o le HDAC, e le o se faʻamaoniga patino o le TSA i le faʻamalosia o le paaga sili. Manatua o le TSA o se faʻamatalaga sili ona patino ma faʻamaoni ile inisinia I / II HDAC^{23, 24}, ma o le amio a le TSA na sili atu ona faʻailoa nai lo NaB, na matou filifili e faʻaaoga le TSA i luga o le NaB mo le suʻesuʻeina o le molecular mole faʻasaʻo i vaega nei o le suʻesuʻega.

Faʻafesoʻotaiga ole vaega ole TSA-faʻafaigofieina paaga sili

I le eseesega o le maualuga o le faʻalauiloa o le faʻavae i totonu o le NAcc, na fesoʻotaʻi ma taʻiala eseese i le va o vaʻavaʻaleʻa ma le leai o se tasi, ma le fesuiaiga o le fiafiaga o paaga i totonu o laufanua faʻapitoa^{12, 13, 25, 26}, matou te iloiloina pe o le TSA-faʻafaigofieina le faʻavaeina o mea e fiafia i ai paaga e fesoʻotaʻi ma fesuiaiga o faʻamatalaga faʻavae i le NAcc.

TSA togafitiga (0.4 ng, vv.) faʻaosoina le faateleina i le OTR mRNA levels i le NAcc e mulimuli i 2 itula o le nonofo faʻatasi ae faʻatusatusa i faʻatonuga a le CSF (t₁₀ = 2.38, P = 0.038, ^{Fig. 2a}), lea na tausia ina ua mavae 9 itula o le nonofo faʻatasi (t₉ = 2.17, P = 0.058, Fig. 2b). E ui o se laʻititi laitiiti ae e le taua i le VRNUMXaR mRNA e mafai ona matauina i le NAcc 1 itula e mulimuli i le tui o le TSA, e leai se eseesega faʻavae na iloa i le taimi taimi mo soʻo se isi mRNA, na aofia ai le D2R poʻo le D1R (P > 0.05, Fig. 2a, b). O le mea taua, e leai se eseesega o vaega na matauina i le paluga faʻamamaina i soo se taimi-ma mo soʻo se mRNA fuaina (P > 0.05 mo vaega uma, Fig. 2c, d), ma fautua mai o le siʻitia o le OTR mRNA o loʻo matauina i manu na togafitia i le TSA na patino i le NAcc. E le gata i lea, o na tulafono faatonutonu na i ai na o le nonofo faatasi ma se tane, e pei o le OTR ma le V1aR mRNA i le NAcc na tumau pea le suia o le 2 itula ina ua mavae le tui o le TSA e aunoa ma le nonofo faatasi (OTR: 100.0% ± 11.70 mo le CSF group, 86.7% ± 12.11 mo le TSA vaega, t₁₂ = 0.79, P = 0.444; V1aR: 100.0% ± 26.24 mo le CSF kulupu, 92.3% ± 13.75 mo le TSA, t₉ = 0.27, P = 0.791).

  

Ata 2

TSA togafitiga (0.4 ng) i luga-faʻatonutonu ai le faʻaoloa o le oxytocin (OTR) ma le vasopressin (V1aR) i le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi i le taimi o le nonofo faʻatasi ma se tane i le leai o se matai. O le mRNA (a, b) ma le protein (e, f) o loʻo maualuga-faʻatonutonuina i le mulimuli i le 2 (a, e) ma 9 itula ...

E tusa ai ma tulaga maualuga o le OTR mRNA, o manu na togafitia i le TSA na faʻaalia foi tulaga maualuga o le protein o le OTR i taimi uma-i le NAcc (2 itula: t₁₀ = 2.34, P = 0.041; 9 itula: t₁₀ = 3.16, P = 0.01, Fig. 2e, f), ae le o se mea faʻapena (t₁₀ = 0.41, P = 0.69, Fig. 2g, h). O le mea e malie ai, e ui lava e leai se suiga tele o VVNUMXaR mRNA levels e mafai ona iloa i le NAcc i 1 poʻo 2 itula pe a maeʻa le tui a le TSA (Fig. 2a, b), o le maualuga o le V1aR o le palatini na matua faateleina i itula 9, pe a faatusatusa i manu ua togafitia i le CSF, i le NAcc (t₉ = 3.46, P = 0.007, Fig. 2f) ae le o le faʻavalea o le moli (t₁₀ = 0.98, P = 0.35, Fig. 2h). E ui lava ina iai nisi fesuiaiga, e leʻi afaina tele le maualuga ole palatini o le D1R ma D2R i le NAcc ma le caudate metotia e le pulega a le TSA (P > 0.05, Fig. 2e-h).

Faʻafaigofie e le TSA le faʻasaina o talafaasolopito o le oxtr ma le avr1a

O le faateleina o le mRNA ma le protein mo le OTR i le mavae ai o le nonofo faatasi ina ua maeʻa le togafitiga a le TSA na fautuaina ai e le TSA le faateleina o le tusiga o ixtr, o le gene o loʻo faʻatulagaina mo le OTR, nai lo le fesuiaiga o le faaliliuga poʻo le faʻaaogaina o le polotini. E le gata i lea, na maualuga le maualuga o le protein o le V1aR i le NAcc, e fesoʻotaʻi ma se laʻititi ae e le taua tele i tulaga mRNA e mulimuli i le togafitiga o le TSA (Mati. 2). Mafaufau o le TSA o se pitonuu malosi I le II ma le II HDAC^{23, 24, 27}, matou te maitauina o le TSA na faʻateleina le faʻasolopito o le talafaasolopito i le ixtr ma avpr1a tagata faʻaola i le NAcc, mulimuli ane faʻamalosia a latou tusitusiga. O se vaega fou o manu na maua vv. tuiina o le TSA (0.4 ng) ma vave loa ona nonofo faatasi ma se tane e aunoa ma le faʻaipoipo mo 30 minute ao lei ositaulagaina. O le window 30-min taimi na filifilia e faavae i lipoti o galuega talu ai le siitia maualuga o le histone acetylation pe a maeʻa le tui a le TSA i kio ma mio^{28, 29}. H3K14 acetylation i le ixtr ma avpr1a na faʻamaʻiliʻiliina le au faʻasalalau e ala i le faʻasolosolo mai o chromatin.

E tusa ai ma le faateleina o le OTR mRNA ma le polotini na matauina mulimuli ane, o manu na togafitia i le TSA na faaalia ai se maualuga maualuga (+ 460%) i le histone H3 acetylation i le ixtr gene promoter, pe a faatusatusa i puleaina togafitiga CSF, i le NAcc (t₁₀ = 5.88, P = 0.0002), ae le o se mea faʻafefete (t₉= 0.31, P = 0.76, ^{Fig. 3a}). E le gata i lea, histone H3 acetylation i le avpr1a na maualuga le siitia o 30 min i le mulimulitaia o le pulega a le TSA (+ 196%) i le NAcc (t₁₀ = 3.12, P = 0.01) ae le o se mea faʻapena (t₉= 0.38, P = 0.71), pe a faatusatusa atu i le pulea o CSF ​​(Fig. 3b). O le mea lea, na siitia ai e le TSA le nofoaga o measina o measina i totonu o le NAcc i le amataga o le 30 minute talu mai le amataga o le nonofo faʻatasi ma se tane.

  

Ata 3

TSA togafitiga e faʻaleleia ai le faʻasalaga o talafaasolopito o le ixtr ma avpr1a tagata faʻasaga i le taimi o le nonofo faʻatasi ma se tane i le leai o se tamaʻitaʻi. Histone H3 acetylation (Lys14) i ixtr (a) ma avpr1a (b) faʻateleina le faʻaolaina i totonu o le nucleus accumbens (NAcc) ae leai ...

E faʻafaigofie e le TSA le manaʻoga paaga e ala mai i le OTR ma le V1aR

Mai le seti o suʻega na muamua atu, o le a faʻaalia se faʻataʻitaʻiga o le faatinoga o galuega, pe a oʻo i le taimi o le nonofo faʻatasi, o le TSA e mafai ona faʻasaoina le histone acetylation i le ixtr ma avpr1a tagata faʻasalalau, mulimuli ane faʻaleleia a latou tusitusiga ma mafua ai le maualuga maualuga o palatini o le OTR ma le V1aR i itula 9 ina ua mavae le amataga o le taimi e nonofo faatasi ai. O le mea taua, o lenei aafiaga o le TSA o le faʻapitoa o le nofoaga e pei o le kulimi mūmū tumau e le afaina. O iinei na matou tofotofoina ai pe o le siitia o le TSA i le OTR ma le V1aR e fesoʻotaʻi ma le faʻamalosia o le faʻavaeina o paaga. O le tamaitai prairie voles na maua se tui in-NAcc o le TSA (0.04ng i le tasi itu) i poʻo le leai foi o le tui (30minutes aʻo leʻi inuina le TSA, 0.5ng i le tasi itu) o le CSF poʻo le CSF o loʻo aofia ai le tasi o le TTRO eseese, o le OTA (B) ma le OTA (T), poʻo le V1aR tagata faʻatau (V1aRA). I le taimi lava na maeʻa ai le tui a le TSA, sa nonofo faatasi fafine ma se tamaʻitaʻi mo 6 itula e aunoa ma le faʻaipoipo, sosoo ai ma se suʻega a le paaga.

E leʻi faʻaalia e manu feʻai a le CSF se manaʻoga paaga (t₅ = 0.17, P = 0.87, Fig. 4a). Ae ui i lea, o meaola na togafitia e le TSA na faʻaaluina le tele o taimi i fesoʻotaʻiga i le itu i le itu ma le "paaga" nai lo le "tagata ese", ma fai mai o se tasi TSA tui tuusao i totonu o le NAcc ua lava lea e faʻafaigofieina ai le faʻaaogaina o le manaʻoga e aunoa ma le faʻaipoipo (t₅ = 7.04, P = 0.0009). O le mea e mataʻina ai, o le poloka o le OTR poʻo le V1aR aʻo lei togafitia i le OTA (B), OTA (T), poʻo le V1aRA na puipuia ai aʻafiaga o le TSA (P > 0.05 mo vaega uma). E pei ona leai ni eseesega kulupu na maua i locomotor gaoioiga (F_4,32 = 1.89, P = 0.14, Fig. 4b), o nei faʻamatalaga e faʻamaonia ai o le TSA i le NAcc e faʻatautaia le faʻaaogaina o paaga i auala faʻapitoa OTR- ma V1aR-faʻasalalauga i se amioga faʻapitoa.

  

Ata 4

TSA-faʻafaigofieina paaga faifaimealua e manaʻomia ai le faʻamaʻi o le oxtocin- (OTR) ma le vasopressin (V1aR) -o le faʻasaʻoina o le neurotransmission i totonu o le ulutala fafine. (a) Faʻafaigofie e le TSA le fiafia i le paaga pe a oʻo i totonu o le nucleus accumbens (0.04 ng i le tasi itu), ...

O faʻataʻitaʻiga e faʻaosoosoina ai faʻafitauli e pei o le TSA

I le maeʻa ai o matou faʻamatalaga talu ai, na matou faʻamautuina ai le malosi o le epigenetic o le oxtocin ma vasopressin neurotransmission i le NAC fafine na lava lea e faʻafaigofieina ai le faʻataʻitaʻiina o le manaʻoga i le leai o se faʻaipoipo. Ina ia suʻesuʻeina pe o faʻafitauli nei e tupu i le taimi o le faʻavaeina masani o paaga, o le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi e nonofo faʻatasi ma se tamaloa i le 24 itula i le taimi o le faʻaipoipo, lea e faʻailoa ai le fiafia o le paaga⁴, ma ositaulaga. Na matou matauina le faateleina o both ARV ma le V1aR mRNA ma le palatini i le NAcc, pe a faʻatusatusa atu i fafine mataga faʻafeusuaiga (OTR: + 38%, t₁₀ = 2.68, P = 0.02 mo mRNA, ma + 58%, t₈ = 3.05, P = 0.01 mo le protein; V1aR: + 89%, t₁₄= 2.53, P = 0.02 mo mRNA, ma + 26%, t₂₀ = 2.23, P = 0.037 mo le polotini, Fig. 5a, b).

  

Ata 5

O le mafuta faʻatasi ma le matua e maua ai le faʻamalosia o le faʻaoloa o le oxytocin (OTR) ma vasopressin (V1aR) i totonu o le nucleus accumbens (NAcc) o le tamaʻitaʻi. 24h O le nonofo faʻatasi ma se tane ma le faʻataʻitaʻiga e faʻatonutonu ai le OTR (a) ma le V1aR (b) mRNA ma le protein ...

Aʻo faʻatupulaia uma le mRNA ma le protein mo le OTR ma le V1aR e ala i le nonofo faʻatasi ma matua, matou te suʻesuʻeina mulimuli ane pe o lenei tulafono faatonutonu e fesootaʻi ma le faʻaleleia o le epigenetic ixtr ma avpr1a genes transcription. O se vaega fou o tamaitai sa nonofo faatasi ma se tane mo itula 6 faatasi ai ma le mating ma le H3K14 acetylation i le ixtr ma avpr1a tagata faʻalauiloa ua fuaina i le chromatin immunoprecipitation. E tusa ai ma le OTR ma le V1aR mRNA ma le palatini, o loʻo ola le tamaʻitaʻi tamaitai i le maualuga o H3K14 acetylation i le ixtr ma avpr1a tagata faʻasalalau i le NAcc, pe a faʻatusatusa atu i fafine mataga faʻafeusuaiga (ixtr: t₉ = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t₉ = 2.91, P = 0.017 Fig. 5c, d). O nei faʻamatalaga e faʻamaonia ai o le nonofo faʻatasi o mea e faʻalagolago i le fiafia o le paaga i le tamaʻitaʻi tamaʻitaʻi, e mafua ai se tulafono faatonutonu o le OTR ma le V1aR i le NAcc e ala i le epigenetic mechanisms, e pei ona matauina ina ua maeʻa togafitiga TSA.

Mataupu

Faʻasalaga faʻafeusuaiga fafine faiva (Microtus ochrogaster) mai se falesa o le fausiaina o falesuesue na faʻamaʻaʻaina i le 21 aso o le matua ma nofo i paga tutusa i le itupa e tasi i paʻu palasitika (12 × 28 × 16 cm) ma vai ma meaʻai ad libitum. O potu uma sa tausia i lalo o le 14: 10 H o le lio-pouliuli, ma o le vevela e tusa ma le 20 ° C. O manu uma na tuʻuina atu i se vaega i vaega faʻataʻitaʻiga ina ua latou oʻo i 70-90 aso o le matua. O le numera o manu na faʻaaogaina na faʻavae i luga o suʻesuʻega talu ai i le fanua e la matou vaega ma isi, faʻatasi ai ma le faʻamalosiina o le malosiaga. O faʻataʻitaʻiga faʻapitoa na faʻamaonia e le Komiti Faʻafoe ma le Faʻaaogaina o Manu ile Florida State University.

fualaau faasaina

O le butyrate o le sodium (NaB), faʻamaʻi i le saline, ma le Trichostatin A (TSA), na faʻataʻapeʻapeina i le vailaau faʻamalosi o le cerebrospinal fluid (CSF, BioFluids, Rockville, MD) na faʻatau mai Sigma-Aldrich (St Louis, MO). Na afaina ai le NaB i le initaneti (ip) i se fualaau o le 600 mg / kg, lea e iloa e faatosina ai le faʻasalaga o histone i le tele o fomaʻi o loʻo faia i lava^{43, 44}. E tutusa foʻi, o le fuataga o loʻo faʻaaogaina mo le TSA na faʻavaeina i luga o galuega na muamua atu e faʻamoemoe ai lona aoga i le faʻaosoina o tala faʻasolopito o measina i le lotoifale ma fesuiaiga o faʻamatalaga i le gaʻo i roi^{19, 20}. O le sui filifilia v1aR V1aRA, d(CH₂)₅[Tyr (Me)] AVP, ma le OTR feteʻenaʻi OTA (B), [d(CH₂)₅, Tyr (Me)², Thr⁴, Tyr-NH₂⁹] -OVT), na maua mai Bachem (Torrance, CA). O le lona lua, sili atu le tagata filifilia OTR, OTA (T), dGly-NH₂-d(CH₂)₅ [Tyr (Me)^{2, Thr4}] OVT⁴⁵, na faia lelei e Dr. Maurice Manning (Iunivesite o Toledo, OH). O nei faʻataʻitaʻiga ma vailaau na faʻaaogaina na filifilia e faʻavae i luga o suʻesuʻega muamua na faʻaalia ai lo latou filifilia mo V1aR poʻo OTR,^{35, 39, 46-49}.

Laʻau faʻamalosi ma le microinjection

O fafine na faʻailoaina i le sodium pentobarbital (1mg / 10g body weight), ma le 26 maʻaleʻale taʻavale gaosi (Plastics One, Roanoke, VA) na faʻapipiʻiina i luga, e faʻatatau i le ventricle latérale (unilaterally, nose nose at -2.5 mm, 0.6 mm ma le 1.0 mm ventral i bregma) poʻo le 'upega tafaʻilagi-aemaise lava i le NAcc (bilaterally, nose nose at -2.6 mm, 2.5 mm rostral, ± 1.7 mm vaeluaina, ma le 1.0 mm ventral e bregma). A maeʻa le 4.5 aso o le toe faʻaleleia, o mataupu na maua ai microinjections o le CSF poʻo le CSF o loʻo i ai faʻasalalauga eseese o le TSA. Aʻo faʻaaogaina tagata faʻatau mo le OTR poʻo le V3aR, na faʻamaʻiina i latou i le 1 minute ao lumanaʻi le TSA. Injections na faia i le pulupulu o le 30 o loʻo faʻalautele le 33 mm i lalo o le taifau taʻiala i totonu o le nofoaga tulimanu, i totonu o le iniseti o le 1 nL i totonu o le ventricle lateral (vv.) poʻo 200 nL i le tasi itu ile NAcc. O le tola na faʻafesoʻotaʻi i le Hamilton Syringe (Hamilton, Reno, NV) e ala i le polyethylene-20 tubing ma faʻaititia le atuatuvale, e manaʻomia ai le 1 minute i le tui. I le faaiuga o le faʻataʻitaʻiga, o mataupu uma sa ofoina atu e ala i le vave faʻaaogaina ma le mafaufau na aumai e faʻamaonia ai le faʻaogaina o le cannulae e se tagata tauaso tauaso e faʻataʻitaʻiina tulaga. O mataupu na aʻafia ai le kololaula sese na le aofia ai le auiliiliga o faʻamaumauga.

Faʻaipoipoga ma faʻataʻitaʻiga sili ona fiafia

I le taimi lava e sosoo ai ip., vv., poo inra-NAcc injections o fualaau faasaina, o fafine sa nonofo faatasi ma se tane mo itula 6 e aunoa ma le faʻaipoipo. O le toesea o le tamaʻitaʻi na faʻamaonia e ala i le suʻesuʻeina o le ata vitio. Mo le suʻesuʻega o le neuroadaptations na mafua ona o le nonofo faʻatasi ma matai, estrogen-primed females (2μg per day, ip., mo 3 aso) na nonofo faʻatasi ma se tama i itula 6 poʻo 24, ma ua faʻamaonia le auai o le mating a posteriori i luga o le kaseti vitio (mai i le 6 i le 11 i luga o le 6 itula muamua o le nonofo faʻatasi).

Na faia le suʻega a le paaga i le taimi lava e mulimuli ai i le 6-itula le nonofo faatasi, e pei ona faʻamatalaina muamua¹¹. I se taimi puʻupuʻu, o potu e tolu o suʻega o mea e faʻaaoga e aofia ai le pa e le faʻapipiʻi e fesoʻotaʻi ma pa e lua tutusa, o fale taʻitasi o se meaola faʻaosofia - o se aliʻi e le masani ai "tagata ese" poʻo se aliʻi e masani "paʻaga" faʻaaoga i le vaitaimi o nonofo faʻatasi. O tamaʻitaʻi mataupu sa saoloto e feoaʻi i totonu o mea faigaluega i le taimi o le 3-itula suʻesuʻega, ma o tama tane faʻaosofia na lokaina i totonu o a latou pa, faʻatagaina ai se fesoʻotaʻiga tuʻusaʻo ma le tasi. O le sauniga atoa na puʻeina i ata puʻe ma o le umi o le fesoʻotaʻiga a le mataupu ma le paʻaga poʻo se tagata ese na mulimuli ane faʻatulagaina e se faʻataʻitaʻi faʻataʻitaʻi le iloaina o vaega o meaola. O se paʻaga fiafia na faʻamatalaina o ni mataupu faʻaaluina tele taimi sili atu i le tino faʻafesoʻotaʻi ma le paʻaga faʻafeagai tagata ese, e pei ona fuafuaina e se paga, lua-siʻusiʻu t-test. I le faʻaopoopoga, o le tolu potu faʻapipiʻi na faʻapipiʻiina i ai ata eletise, e mafai ai ona fuafuaina le gaoioiga o le locomotor o loʻo faʻasinoina e le numera o faʻamaumauga a le tamaʻitaʻi i totonu o potu faʻamalosi. O lenei togi maualalo e mafai ai ona tatou puleaina mea leaga lona lua o fualaau faasaina i luga o amioga a tamaitai, e pei o gaoioiga lautele, popole, po o le suia o suʻesuʻega o se siosiomaga fou, e masani ona faaaoga e la tatou vaega ma isi¹².

RNA ma faʻamalosi mea e maua

O fafine sa ositaulagaina e ala i le leʻavavevave vave, ma o le mafaufau na vave ona aumaia ma faʻasua i luga o le aisa malo. Vaega o le Coronal (200 μm) na tipiina i luga o se cryostat ma o le kiona na faʻaauau i luga o ata uʻamea microscope. O soʻo se vaega o le va o le 1 mm diameter na aveesea mai le NAcc atoa ma le caudate putamen, o le vaega mulimuli lea, ma teuina i -80 ° C seia maeʻa. O le aofaʻiga o le RNA ma faʻamalosi na maua mai e ala i le faʻaaogaina o le TRI-Reagent e tusa ai ma faʻamatalaga a le au gaosi (Centre mo Suesuega Molecular, Cincinnati, OH).

Faʻamatalaga faʻamatalaga o Protein i Western-blot

Ina ua mavae le teteʻa i luga o le 10% polyacrylamide gel (15% mo histones), na faʻafeiloaʻi ai protein i se membranes nitrocellulose ma faʻafefiloi i faʻamaʻi muamua: anti-OTR (sc-8102, 1: 1000), -V1aR (sc-18096, 1: 500, 1: 33660), -D1R (sc-1000, 2: 9113, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), -actin (A1, 1000: 2066, Sigma Aldrich. St Louis, MO), poʻo le anti-acetyl histone H1 (Lys1000, # 3-14, 06: 911) ma le H1 atoa (# 1000-3, 05: 928, Millipore, Temecula, CA). O faʻamalosi uma e faʻamaonia mo lo latou faʻaaogaina i tagata, kio, ma mio, ma o le laufanua e maua ai pasene maualuga o le homology (mai le 1 i le 1000%). Ina ua maeʻa ona faʻavasegaina faʻatasi ma le HRP-conjugated secondary anticorps, na faʻaalia mai membranes i le ECL (ECL SuperSignal West Dura substrate, Pierce Biotechnologies, Rockford, IL) ma faʻaalia i ata Fuji XAR (Fuji Film, Tokyo, Iapani). Na faʻatinoina le faʻatinoina o le AIS 81 Image software (Research Imaging, St. Catharines, Ontario, Kanata), ma o faailoilo uma na faʻapenaina i totonu o le membrane lava e tasi i le gaioiga, sei vagana ai le faailo acetyl-H96 lea sa faʻapitoa i le numera o histone H6.0. O faʻamaumauga masani o loʻo faʻaalia i le pasene o manu feʻai a CSF.

Faʻataʻitaʻituina o le gaosiga o le polymerase faʻamaoni-taimi-moni (RT-PCR)

0.5 μg o le RNA atoa na gaosia mo le tuufaatasiga o DNA, ona iloilo lea e pei ona faamatalaina muamua⁵⁰ faʻatasi ai ma le faʻasaʻoina i le nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase (NADH) gene. O tali uma lava na faia i le tolu pilikeri ma o latou tulaga faapitoa na faamaonia e ala i le faʻavasegaina o suʻesuʻega o le pusa ma le vavaeʻesea i le 2% Agarose gel. O laina muamua na faʻaaogaina: 5'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-3 '(Fwd) ma le 5'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-3' (Rev) mo OTR, 5'-GAGGTGAACAATGGCACTAAAACC-3 '(FOR) ma le 5'-CCAGATGTGGTAGCAGATGAAGC-3' (Rev) mo le AVP1aR, 5'TTAACAACAATGGGGCTGTG-3 '(FOR) ma le 5'-GGCATGAGGGATCAGGTAAA-3' (Rev) mo le D1R, 5'-GTGAAGGCGCTGTAGAGGAC-3 '(FOR) ma le 5'-CGGTGTGTTCATCATCTGCT-3' (Rev ) mo D2R, ma le 5'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-3 '(FOR) ma le 5'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-3' (Rev) mo le NADH. O faʻamaumauga faʻapitoa e faʻamatalaina o se pasene o manu feʻai a le CSF.

Chromatin Immunoprecipitation

O le histone H3 acetylation (Lys14) i le NAcc ma palu lanu mumu paʻulaʻau na suʻeina e ala i le faʻaaogaina o le Magna ChIP protein G Tissue Kit (Millipore, Temecula, CA) e mulimuli i faatonuga a le kamupanī. I le faapuupuuga, ina ua uma le tuiina o le 1% formaldehyde, sa tautua le chromatin i le faaaogaina o Misonix XL-2000 i vaega o le 200-600 bp. O le faʻamaonia o le histone acetylated H3 (Lys14) na faʻatautaia i le 10μg o le anti-acetyl-H3 (Lys14) antibody (Millipore) i le po ile 4 ° C. Ina ua maeʻa le fufuluina o le tui, faʻaleleia mai pusa ma le fesuiaʻiina o le fesoʻotaʻiga, na faʻamamaina DNA faʻamaonia ma suʻesuʻeina i luga o faʻataʻitaʻiga e le RT-PCR i luga o le iCycler platform (silasila i luga) faʻatasi ai ma se faʻataʻitaʻiga masani o loʻo faia mai faʻataʻitaʻiga INPUT samples. O mamanu na mamanuina e faʻalautele ai se 236 bp-umi le itulagi o loʻo iai 128 bp i luga aʻega o le uluai faʻasalaga mo le togavao o loʻo faʻaaogaina le OTR (ixtr, Genbank ulufale mai #AF079980), po o le 192 bp-umi itulagi o loʻo iai 141 bp i luga aʻe o le faʻatagaina muamua o le faʻamaonia mo le laufanua vaʻai V1aR (avpr1a, Genbank ulufale mai #AF069304). O le faasologa e pei o: 5'-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3 '(Fwd) ma le 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3' (Rev) mo ixtr, ma le 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3 '(Fwd) ma le 5'-TGCAGAGCCAGGCGCTTTCC-3' (Rev) mo avpr1a. O faʻataʻitaʻiga taʻitasi na faʻapitoaina e le faʻamanuiaga o le INPUT, ma o faʻamaumauga ua faʻamatalaina o se pasene o manu feʻai a le CSF.

Suʻesuʻega faʻamaumauga ma faʻamaumauga o faʻamatalaga

Mo iloiloga o mea e fiafia i ai le paaga, o manu na faʻaalia amioga faʻafeusuai i le taimi o le nonofo faʻatasi poʻo le leai foi o se cannulae na le faʻatagaina. Mo isi suʻesuʻega mole mole, o le maualuga o le tasi o faʻamatalaga faʻamatalaga mo le vaega o le olaola na faʻateʻaina pe a faʻamaonia e sili atu. O le tele lava o faʻataʻitaʻiga na toe faʻafoʻiina, sei vagana ai ua manino lelei iuga. O le taimi na faʻaalu i le itu i le itu ma le mea e faʻamalosi ai le manu i le taimi o le suʻega a le paaga na suʻeina i se paʻu lua-tailed t-test. O suʻesuʻega faʻatinoga na suʻeina e ala i le faʻaaogaina o ni pepa e lua t-test (mo vaega e lua) poʻo se auala e tasi ANOVA (mo sili atu i le lua vaega), ma a talafeagai ai, Fischer's PLSD post-hoc sa faia suʻesuʻega ma se taua tele o P <0.05. Ina ua maeʻa faʻamaoniga o tulaga masani, o isi faʻamatalaga uma na auiliiliina ma le lua-siʻusiʻu t-o le manatu e tutusa ma le tutusa fesuiaiga na suesueina muamua. O suʻega fuainumera uma sa faia e faʻaaoga ai le software a le StatView (SAS Institute). Pe a faʻasalalau faʻamaumauga i a latou lava pulega (% o CSF, Saline poʻo Mating groups), o suʻesuʻega fuainumera faʻataʻitaʻi na faia i luga o faʻamaumauga saʻo.

1

O lenei galuega na lagolagoina e le National Institute of Health Psychology (NIMH) na tuʻuina atu le MHR21-083128 i MK ma ZW, ma le MHR01-058616 i le ZW Matou te faafetai foi ia Dr. Maurice Manning mo le meaalofa alofa a le Ota TT o le OTR.

Feeseeseaiga o tului: Fai mai tusitala e leai se feteenaʻiga tului.