Efek ΔFosB overexpression on opioid na cannabinoid signalling reséptor-dimédiasi dina accumbens inti (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley lj, MP Cassidy, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

sumber

Jurusan Farmakologi sareng Toksikologi sareng Institute pikeun Narkoba sareng Alkohol, Virginia Pasamakmuran Universitas Sakola Kedokteran, Richmond, VA 23298, AS.

abstrak

Faktor transkrip stabil ΔFosB dipangaruhan dina inti accumbens (NAc) ku paparan kronis ka sababaraha obat tina nyiksa, sareng ekspresina transgenik tina ΔFosB dina striatum ningkatkeun sipat morphine sareng kokaine. Nanging, dasar mékanika pikeun pangamatan ieu sacara teu dipikaharti. Kami nganggo modél beurit bitransgenic kalayan ekspresi anu teu kaelok dina ΔFosB di dopamin D (1) reséptor / neuron striatal anu ngandung épékorér pikeun nangtukeun épék ekspresi osFosB dina opioid na reséptor cannabinoid sinyal dina NAc. Hasilna nunjukkeun yén kagiatan G-protein mediasi mu opioid sareng ngahambat siklik adenylyl ditingkatkeun dina NAc tina beurit anu dinyatakeun ΔFosB. Sarupa oge, kappa opioid inhibisi siklus adenylyl ditingkatkeun dina beurit ΔFosB.. Kontras, sinyal cannabinoid reséptor-mediated sinyal henteu béda antara beurit anu overexpressing ΔFosB sareng beurit kontrol. Tpapanggihan hese nunjukkeun yén sinyal reséptor opioid sareng cannabinoid disédiasi sacara épékasi ku ekspresi osFosB, sareng nunjukkeun yén ekspresi ΔFosB bisa ngahasilkeun sababaraha épéktina via mu jeung reséptor opioid oppidid kappa signaling dina NAc.

Konci: G-protéin, siklus adenylyl, striatum

1. perkenalan

Reséptor opioid sareng cannabinoid CB₁ reséptor (CB₁R) mangrupikeun udagan neurobiologis pikeun dua kelas ubar anu seueur dianggo nyaéta morfin, heroin sareng resep opioid, sareng ganja (Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC)) masing-masing. Balukar akut tina opioid sareng cannabinoid diantelkeun ku reséptor g-protéin gandeng anu ngaktifkeun utamana G_{i / o} protéin sareng ngahasilkeun réspon hilir réaksi sapertos ngahambat siklus adenylyl (Budak, 1991, Budak, dkk., 1992, Howlett, dkk., 2002). Pangaruh motor, émosi memori sareng épékoaktif Δ⁹-THC diproduksi ku CB₁R (Huestis, dkk., 2001, Zimmer, et al., 1999), anu sumebar sacara lega dina uteuk, kalayan tingkat luhur di ganglia basal, hippocampus sareng cerebellum (Herkenham, dkk., 1991). Épék analgesik sareng ganjaran tina ubar opioid anu paling relevan sareng disalahgunakeun sacara klinik umumna ku reséptor mu opioid (MOR) (Matthes, et al., 1996), anu diperkirakeun dina sistem limbic sareng brainstem (Mansour, et al., 1994). Sistem mesolimbik, diwangun tina ramalan dopaminergic ti daérah penegangan ventral (VTA) ka accumbens inti (NAc), ngagaduhan peran anu penting dina épéktip pikeun opioid sareng cannabinoid (Bozarth na Wise, 1984, Vaccarino, dkk., 1985, Zangen, et al., 2006), ogé ubar penyalahgunaan séjén (Koob na Volkow, 2010). Sumawona, sistem opioid endogenous sareng cannabinoid aub dina épék reward pikeun sababaraha kelas ubar psikoaktif (Maldonado, dkk., 2006, Trigo, dkk., 2010). Ku kituna, penting pikeun mékanisme mékanisme ku opioid sareng CB₁Sinyal Sunda diatur dina NAc.

Pertanyaan sentral dina widang penyalahgunaan narkoba nyaéta pikeun ngaidentipikasi protéin anu nyéépkeun peralihan tina épék akut pikeun psikoaktif akut. Faktor transkrip AP-1 ΔFosB hususna pikaresepeun kusabab produk varian spluncated spluncated of the product fosb gén anu ngumpulkeun nalika paparan sababaraha waktos narkoba ku nyiksa atanapi ganjaran alami (McClung, dkk., 2004, Nestler, 2008, Nestler, dkk., 1999). Kami mendakan yén ΔFosB dipangaruhan dina uteuk nalika kakeunaan kakehanan morfm, Δ⁹-THC, kokain atanapi étanol, kalayan unggal ubar ngahasilkeun pola régional anu unik dina ekspresi ΔFosB (Perrotti, et al., 2008). Pamanggihna anu tetep dina obatan nyaéta ΔFosB parantos dipangaruhan dina striatum, dimana sadaya opat ubar ngainduksi ΔFosB dina inti NAc sareng sadayana, Δ⁹-THC ekspresi ngainduksi sacara signifikan dina cangkang NAc sareng caudate-putamen.

Panaliti Farmakologis nunjukkeun yén ko-administrasi dopamin D₁ reséptor (D.₁R) antagonis SCH 23390 diblokir induksi ΔFosB dina NAc sareng caudate-putamen nuturkeun kokain intermittent atanapi administrasi morfin, nunjukkeun poténsi pentingna D₁Neuron ngarujuk kana R (Muller jeung Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Pangaruh induksi ΔFosB dina paripolah anu ditengah obat geus ditaliti make beurit bitransgenic anu nganyatakeun ΔFosB dina populasi neuronal spesifik NAc sareng dorsal striatum (Chen, dkk., 1998). Tikus anu nganyatakeun ΔFosB di dinamis / D₁Neuron r positip dina NAc sareng striatum dorsal (garis 11A) nunjukkeun réspon anu dirobih pikeun obat-obatan anu nyiksa, utamana ditingkatkeun sensitipitas kana épék-épék tina kokain atanapi morfin (Colby, dkk., 2003, Kelz, dkk., 1999, Zachariou, et al., 2006). Parobihan ieu kajantenan henteuna parobahan dina tingkat MOR atanapi subunit protéin-G. Tapi, tingkat dinamika mRNA diréduksi dina NAc tina ΔFosB anu nyatakeun beurit (Zachariou, et al., 2006), nunjukkeun yén salah sahiji target ΔFosB mangrupikeun génod anu péptida opioid endogenous. Induksi ΔFosB ogé ngahasilkeun parobahan tingkah laku ku ngatur pangaturan reséptor dina NAc, tapi kamungkinan ieu henteu acan ditaliti. Ku alatan éta, paniliti anu ayeuna nganggo modél beurit bitransgenic pikeun nangtukeun naha overexpression ΔFosB dina dinamis / D₁R anu ngandung neuron striatal ngarobih kagiatan protéin G-medi-mediated sareng MOR- sareng inhibisi adenylyl édisiasi KOR dina NAc. Pangaruh ΔFosB dina CB₁Aktivitas G-protéin medi-R ogé ditaksir sabab Δ⁹Administrasi -THC mendorong ΔFosB dina NAc (Perrotti, et al., 2008) sareng sistem endocannabinoid dipikanyaho pikeun ngatur sirkuit ganjaran otak (Gardner, 2005, Maldonado, dkk., 2006), tapi pangaruh ΔFosB dina sistem endocannabinoid teu acan ditaliti.

2. Bahan sareng métodeu

2.1. Réspénén

[³⁵S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) sareng [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) dikésér tina PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, album serum bovine, phosphokinase creatine, papaverine, imidazole sareng WIN-55212-2, nuju ti Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS dibeli ti Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO disayogikeun ku Program Pasokan Narkoba tina Institut Narkoba Nasional (Rockville, MD). Cairan scintillation Econo-1 dicandak tina Fisher Scientific (Norcross, GA). Cairan scintillation Ecolite dicandak ti ICN (Costa Mesa, CA). Sadaya bahan kimia sanésna ti Sigma Aldrich atanapi Fisher Scientific.

2.2. Beurit

Tikus bitransgenik lalaki diturunkeun tina NSE-tTA (line A) × TetOp-ΔFosB (line 11) dijelaskeun sakumaha dijelaskeun dina Kelz et al. (Kelz, dkk., 1999). Tikus Bitransgenic dikandung sareng digedékeun dina doxycycline (100 µg dina nginum cai) pikeun ngurangan ekspresi transgene. Dina umur 8 minggu, doxycycline parantos dipiceun tina cai kanggo satengah tina beurit pikeun ngantepkeun ungkapan transgene, padahal beurit sésana dijaga dina doxycycline pikeun ngeureunkeun transgénna. Otak dikumpulkeun 8 minggu saatos, waktos dina épék transkripsial ΔFosB maksimal (McClung na Nestler, 2003). Garis beurit transgenik kadua anu dipaké di mana Δc-Jun, antagonis négatip dominan c-Jun, dikedalkeun dina D₁R / dinamis sareng D₂Sél R / enkephalin tina striatum, hippocampus sareng korteks parietal (Peakman, dkk., 2003). C-Jun sareng protéin kulawarga Jun anu aya hubunganana sareng protéin kulawarga Fos sareng meungkeut ka situs target AP-1 gén target pikeun ngatur transkripsi. Nanging, truncation of N-terminus of c-Jun (Δc-Jun) nyusun kompleks transkrip sacara teu aktip sareng tiasa ngalang-alangkeun DNA anu kompleks aktip AP-1. Tikus bitransgenik lalaki diturunkeun tina NSE-tTA (line A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (line E) dijelaskeun sakumaha dijelaskeun dina Peakman et al. (Peakman, dkk., 2003). Tikus Bitransgenic dikandung sareng digedékeun dina doxycycline (100 µg dina nginum cai) pikeun ngurangan ekspresi transgene. Murid ditiih dina minggu 3, genotyped, sareng dipisahkeun kana kelompok, satengahna dikandung dina cai anu ngandung doxycycline sareng satengah cai anu biasa pikeun mendorong ekspresi FLAG-Δc-Jun. Otak dikumpulkeun 6 minggu saatos, waktos dina tingkat maksimal FLAG-Δc-Jun parantos diukur (Peakman, dkk., 2003). Sadaya prosedur sato dilakukeun luyu sareng National Institutes of Guide Health for the Care and Use of Laboratorium Sato.

2.3. Persiapan Membran

Otak disimpen dina −80 ° C nepi ka poé Assay. Sateuacan assay, unggal otak cacakan, sareng NAc dibedah dina és. Unggal sampel homogenized dina 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membran buffer) nganggo stroke 20 tina kaca homogenizer di 4 ° C. Homogenate dipuseurkeun di 48,000 × g dina 4 ° C pikeun 10 mnt, ditahan deui dina panyerepan mémbran, dipuseurkeun deui di 48,000 × g dina 4 ° C pikeun 10 mnt sareng resuspended di 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (panyayunan assay). Tingkat protéin ditangtukeun ku metoda Bradford (Bradford, 1976) ngagunakeun album serum bovine (BSA) salaku standar.

2.4. Agonist-Stimulated [³⁵S] Ngariung GTPγS

Mémbran parantos preububasi pikeun menit 10 di 30 ° C kalayan adénosin deaminase (3 mU / ml) dina panyangga assay. Membranes (5-10 µg protein) teras diintegrasi pikeun 2 hr di 30 ° C dina panyangga panyembutan ngandung 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, 30 µM GDP sareng adénosin deaminase (3 mU / ml) kalayan tanpa konsentrasi anu leres tina DAMGO atanapi WIN55,212-2. Beungkeut nonspecific diukur sareng 20 µM GTPγS. Inkubasi ditamatkan ku saringan ngaliwatan saringan serat GF / B kaca, dituturkeun ku 3 ngabasmi sareng 3 ml és-tiis 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Radioaktivitas Bound ditangtukeun ku spéktrum spéktroskopét cair cairan saatos ékstrak sapeupeul saringan dina cairan scintillation Econo-1.

2.5. Adenylyl Siklus Assay

Membranes (5-25 µg protein) parantos dikubaran sareng adénosin deaminase sapertos anu dijelaskeun di luhur, teras diaksir pikeun 15 min di 30 ° C dina ayana atanapi henteuna 1µM forskolin, sareng atanapi tanpa DAMGO, U50,488H atanapi WIN55,212-2 50 µM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM siklik AMP, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM phosphocreatine, unit 20 / ml creatos fosamininase / ml) dina volume ahir dina 3 µl. Dina kaayaan ieu, total [α-³²PAMP cAMP pulih umumna kirang tina 1% tina total jumlah [α-³²P] ATP dina unggal sampel. Réaksi ieu ditungtungan ku ngagolak ku 3 mnt sareng [³²P] Siklik AMP diisolasi ku metode ganda kolom (Dowex sareng alumina) tina Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) ditambah kana unggal tabung sateuacan kolom kromatografi salaku standar internal. Radioaktivitas ditangtukeun ku spéktroskopétri skintilasi cair (efisiensi pikeun 45% ³H) saatos 4.5 ml elat dibubarkeun dina 14.5 ml cairan scintillation Ecolite.

2.6. analisis data

Kacuali henteu dituduhkeun, data dilaporkeun salaku nilai mean ± SE tina 4-8 percobaan anu misah, anu masing-masing dilakukeun dina triplicate. Stimulasi net [³⁵S] Ngariung GTPγS diitung salaku anu ngarangsang agonis ngariung dikurangan beungkeutan basal. Aktivitas siklus adenylyl stimulasi forskolin-diartikeun salaku kagiatan stimulan-forskolin - kagiatan basal (pmol / mg / mnt). Persén sambetan kagiatan siklus adenylyl-pancingan forskolin diartikeun salaku (kagiatan stimulasi bersih forskolin dina henteuna agonist - kagiatan stimulasi net forskolin di payuneun kagiatan agonist / net forskolin-stimulus dina henteuna agonist) × 100. Sagala nganalisa kurva sareng statistik dilaksanakeun nganggo Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Kurva-pangaruh konsentrasi dianalisis ku régrési non-liniér régéris pikeun éntuk EC₅₀ sareng E_max nilai. Pentingna data data pangaruh-konsentrasi ditangtukeun ku analisa dua arah variance (ANOVA), ngagunakeun dosis agonis sareng induksi gen (pareum atanapi pareum) minangka faktor utama. Pentingna statistik nilai nilai kurva (E_max atanapi EC₅₀) ditangtukeun ku t-test Siswa sanés dua-buntut, nganggo koreksi Welch atanapi transformasi akar kuadrat data anu diperyogikeun pikeun menerkeun variasi anu henteu sami (kauninga ku uji-F) dina EC₅₀ nilai.

3. hasil

3.1. Pangaruh ekspresi ΔFosB dina aktivasi G-protéin opioid sareng cannabinoid aktivasi-mediated

Pikeun nangtoskeun naha MOR- atanapi CB₁Aktivasi G-protéin dimédiasi R dirobah ku ekspresi transgenik anu teu bisa dikalahkeun ΔFosB dina NAc, dirangsang agonis [³⁵S] Ngariung GTPγS ditaliti dina mémbran terasing anu disusun ti daérah beurit bitransgenik sacara ekspresina sacara nyarios (ΔFosB) atanapi henteu nyatakeun (ΔFosB pareum) kana ΔFosB transgene. DORGO analog pilihan MOR-selektif dipaké pikeun ngaktifkeun MOR sareng aminoalkylindole WIN55,212-2 digunakeun pikeun ngaktifkeun CB₁R. Ligan légal ieu sateuacanna ditingalikeun janten agonis pinuh di MOR sareng CB₁Urang Sunda, masing-masing (Breivogel, dkk., 1998, Selley, et al., 1997). Ieu henteu kéngingal nguji kagiatan protéin-K-medi-KORMAT sabab sinyal henteu pisan dina otak rodent (Budak, dkk., 1998). Hasilna nunjukkeun stimulasi gumantung konsentrasi tina kagiatan G-protein ku DAMGO sareng WIN55,122-2 di NAc tina ΔFosB dipatikan sareng ΔFosB dina beurit (Gambar 1). Pikeun kagiatan stimulasi DAMGO (Gambar 1A), dua arah ANOVA data konsentrasi-pangaruh ngungkabkeun épék utama anu signifikan tina status ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) sareng konsentrasi DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) kalayan henteu interaksi signifikan (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Analisis régrési non-lentur tina kurva pangaruh-konsentrasi ngungkabkeun DAMGO E anu nyata gedé_max nilai dina ΔFosB dina beurit (E_max = 73 ± 5.2% stimulasi) relatif beurit ΔFosB (E_max = Stimulasi 56%; p <4.1 béda ti ΔFosB dina beurit ku t-test Siswa). DAMGO EC₅₀ nilai henteu béda antara ΔFosB on sareng ΔFosB off beurit (302 ± 72 nM ngalawan 212 ± 56 nM, masing-masing, p = 0.346).

Pangaruh ekspresi ΔFosB dina agonis-dirangsang³⁵S] GTPγS mengikat dina NAc. Mémbran ti ΔFosB-expressioning (ΔFosB on) atanapi ngadalikeun (ΔFosB off) beurit diantisipasi sakumaha dijelaskeun dina Metode nganggo konsentrasi rupa-rupa ...

Kontras kana hasil anu diala sareng ahli agonis MOR DAMGO, henteu aya bédana gumantung status ΔFosB dina aktivasina G-protéin ditingali kalayan agonis agénis cannabinoid WIN55,212-2 (Gambar 1B). ANOVA dua arah tina data pangaruh-konsentrasi WIN55,212-2 ngungkabkeun pangaruh utama anu signifikan tina konsentrasi WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), tapi sanés status ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) sareng teu aya interaksi (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Nya kitu, teu aya pangaruh status ΔFosB dina WIN55,212-2 E._max nilai (103 ± 6% ngalawan 108 ± 8% stimulasi dina ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing, p = 0.813 ku tés tés Siswa) atanapi EC₅₀ nilai (103 ± 20 nM ngalawan 170 ± 23 nM dina ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing, p = 0.123).

Dumasar kana bentuk kurva sareng kanyataan yén hasil panilitian urang saméméhna parantos nunjukkeun kurva-épéktip biphasic WIN55,212-2Breivogel, dkk., 1999, Breivogel, dkk., 1998), kurva WIN55,212-2 ogé dianalisis maké modél dua situs. Analisis data anu rata-rata nunjukkeun kamajuan séhat pikeun nyocogkeun nganggo modél dua situs (R² = 0.933 sareng 0.914, jumlah kuadrat = 3644 sareng 5463 dina ΔFosB sareng beurit, masing-masing) dibandingkeun sareng modél situs tunggal (R² = 0.891 sareng 0.879, jumlah kuadrat = 6561 sareng 6628 dina ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing). Tapi, henteu aya bédana anu béda antara ΔFosB hurung sareng beurit dina E_max atanapi EC₅₀ nilai tina situs anu luhur atanapi rendah (Suplemén Table 1), sanaos aya arah arah EC anu handap₅₀ nilai dina situs potency tinggi dina beurit sareng ΔFosB dina (EC₅₀luhur = 28.0 ± 10.6 nM) dibandingkeun sareng anu pareum ΔFosB (EC₅₀luhur = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Sumawona, teu aya pangaruh tina status ΔFosB dina basal [³⁵S] GTPγS mengikat dina membran NAc (253 ± 14 ngalawan 226 ± 14 fmol / mg dina ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing, p = 0.188). Data ieu nunjukkeun yén ekspresi transgenik anu teu bisa dikonci ΔFosB dina beurit ningkat tina aktivasina G-protéin MOR-mediated tanpa mangaruhan sacara signifikan CB₁Aktivitas R-protéin atanapi basal G-protéin.

3.2. Pangaruh ΔFosB dina panyambutan opioid opioid sareng cannabinoid-mediated inhibisi of adenylyl siklik

Pikeun ngira-ngira efek ekspresi transgenik anu teu bisa dikalahkeun dina ΔFosB dina modulasi kagiatan effector hilir ku MOR sareng CB₁R, inhibisi 1 µM forskolin-stimulus kagiatan siklon siklusly diuji dina mémbran NAc. Salaku tambahan MOR- sareng CB₁Larangan-medi ngahambat ku kagiatan siklus adenylyl, épék kagiatan KOR ogé ditaliti nganggo agénis pinuh KOR-U50,488 (terpilih)Zhu, dkk., 1997), sabab hasil sateuacanna nunjukkeun yén dinorphin mRNA mangrupakeun udagan ΔFosB dina modél bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Hasilna nunjukkeun yén DAMGO, U50,488 sareng WIN55,212-2 masing-masing ngahasilkeun kendang gumantung konsentrasi kagiatan siklik adenylyl dina duanana ΔFosB pareum sareng ΔFosB dina beurit (Gambar 2). ANOVA dua-data tina pangaruh pangaruh DAMGO (Gambar 2A) ngungkabkeun épék utama anu signifikan tina status ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) sareng konsentrasi DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), tapi henteu aya interaksi anu signifikan (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Analisis régrési Nonlinear tina kurva-konséntrasi pangaruh DAMGO ngungkabkeun DAMGO EC anu sacara signifikan handap₅₀ nilai dina ΔFosB dina beurit (101 ± 11 nM) dibandingkeun sareng ΔFosB beurit (510 ± 182 nM, p <0.05 ku t-test murid). Nanging, teu aya bédana anu signifikan dina DAMGO E._max nilai (20.9 ± 1.26% ngalawan 19.8 ± 1.27% inhibisi di ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing, p = 0.534).

Pangaruh ekspresi ΔFosB ngeunaan ngahambat kagiatan siklus adenylyl dina NAc. Mémbran ti ΔFosB-pareputan (ΔFosB on) atanapi ngadalikeun (ΔFosB off) beurit di assayed sakumaha dijelaskeun dina Metode ayana 1 µM ...

Rambangan adenylyl mediated KOR ogé bénten salaku fungsi éksprési transgenik inducible ΔFosB (Gambar 2B). ANOVA dua arah data konséntrasi-pangaruh U50,488 nunjukkeun pangaruh utama anu signifikan tina status osFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) sareng konsentrasi U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , kalayan henteu aya interaksi anu signifikan (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analisis régrési nonlinear tina kurva-pangaruh konsentrasi ngungkabkeun langkung ageung U50,488 E._max nilai dina ΔFosB dina beurit (18.3 ± 1.14% pancegahan) dibandingkeun sareng ΔFosB peureum beurit (pancegahan 12.5 ± 2.03%; p <0.05 benten sareng ΔFosB anu dilakukeun ku t-test Mahasiswa), kalayan henteu aya bédana anu signifikan dina U50,488 EC₅₀ nilai (310 ± 172 nM ngalawan 225 ± 48 nM dina ΔFosB sareng mareuman tikus masing-masing, p = 0.324).

Kontras sareng épék anu dititénan ku MOR sareng KOR, teu aya pangaruh anu éksprési transgenik ΔFosB eksprési pikeun ngahambat siklik adenylyl ku agonist agénis WIN55212-2 (Gambar 2C). ANOVA dua arah data konséntrasi-pangaruh WIN55,212-2 nunjukkeun pangaruh penting tina konsentrasi ubar (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), tapi henteu tina status ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) ogé henteu aya interaksi anu signifikan (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Salajengna, teu aya pangaruh status ΔFosB kana kagiatan siklase adenylyl dirangsang basal atanapi forskolin dina henteuna agonis naon waé. Aktivitas siklik adenylyl siklase nyaéta 491 ± 35 pmol / mg / mnt dina ΔFosB dina beurit dibandingkeun sareng 546 ± 44 dina ΔFosB beurit (p = 0.346 ku t-test Siswa). Kitu ogé, kagiatan siklik adenylyl ku ayana 1 µM forskolin nyaéta 2244 ± 163 pmol / mg / mnt dina ΔFosB dina beurit ngalawan 2372 ± 138 pmol / mg / mnt dina iceFosB beurit (p = 0.555).

3.3. Pangaruh ΔcJun on inhibisi opioid opnid sareng cannabinoid-mediated inhibisi of adenylyl siklik

Kusabab ekspresi transgenik inducible transparansi inhibitor ΔFosB ditingkatkeun tina MOR sareng KOR ka siklus adenylyl dina NAc, éta dipikaresep pikeun nangtukeun naha hiji négatip négatip tina pangiriman transisi ΔFosB bakal ngarobih reséptor resépsi opioid sacara bertentangan. Pikeun ngatasi sual ieu, panyambutan kagiatan siklus adenylyl pancén forskolin-stimulus ku DAMGO sareng U50,488 diteliti dina mémbran anu disiapkeun ti NAc tina beurit bitransgenic sacara parantos nyatakeun ΔcJun. Hasilna nunjukkeun henteu aya épéktip anu signifikan tina ekspresi ΔcJun pikeun ngahambat tina kagiatan siklus adenylyl ku MOR atanapi KOR (Gambar 3). ANOVA dua arah kurva pangaruh-konsentrasi DAMGO nunjukkeun pangaruh utama signifikan tina konsentrasi DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), tapi henteu tina status ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) sareng teu aya interaksi anu signifikan (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Nya kitu, teu aya bédana anu signifikan dina E._max atanapi EC₅₀ nilai antara beurit sareng ΔcJun on (E_max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) atanapi ΔcJun pareum (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Hasil anu sami katingali kalayan U50,488, sapertos ANOVA dua arah tina kurva pangaruh-konsentrasi nunjukkeun pangaruh konsentrasi anu signifikan (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), tapi sanés status ΔcJun (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) sareng teu aya interaksi anu signifikan (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Kitu ogé, teu aya béda anu signifikan dina E._max atanapi EC₅₀ nilai antara beurit sareng ΔcJun on (E_max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) atanapi pareum (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Pangaruh ekspresi ΔcJun dina cara ngahambat kagiatan siklus adenylyl dina NAc. Membran ti ΔcJun-expression (ΔcJun on) atanapi ngadalikeun (ΔcJun off) beurit diasingkeun ku ayana DAMGO (A), U50,488H (B) atanapi WIN55,212-2 ...

Ekspresi ΔcJun ogé henteu mangaruhan sacara signifikan pancegahan siklase adénil dina NAc ku agonis cannabinoid. ANOVA dua arah kurva pangaruh WIN55,212-2 nunjukkeun pangaruh utama anu signifikan tina konsentrasi WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), tapi henteu tina genotype (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) sareng teu aya interaksi anu signifikan (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Kitu ogé, teu aya béda anu signifikan dina WIN55,212-2 E._max nilai (13.0 ± 2.3% sareng 13.6 ± 0.9% ngahambat dina ΔcJun dumasar kana beurit, masing-masing, p = 0.821) sareng atanapi EC₅₀ nilai (208 ± 120 nM sareng 417 ± 130 nM dina ΔcJun ngalawan tikus, masing-masing, p = 0.270). Maka, sanaos aya aliran anu saeutik ka arah manjangna tina WIN55,212-2 dina beurit ngahijikeun ΔcJun, transgene teu sacara signifikan ngarobih inhibisi cannabinoid tina siklus adenylyl. Sumawona, teu aya pangaruh status ΔcJun dina aktifitas siklus adenylyl basklik atanapi forskolin. Aktivitas siklik dasar adenylyl nyaéta 1095 ± 71 pmol / mg / min sareng 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) dina beurit sareng ΔcJun atanapi mareuman. Aktivitas siklus Adenylyl dirangsang ku 1 µM forskolin nyaéta 4185 ± 293 pmol / mg / min versus 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) dina beurit sareng ΔcJun atanapi pareum.

3.4. diskusi

Hasil tina penelitian ieu ngungkabkeun aktivasi G-protéin dimédiasi MOR sareng ngahambat siklik adenylyl dina NAC tina beurit kalayan ekspresi transgenik induk tina ΔFosB di dinorphin / D₁Urang ngandung neuron. Perencangan KOR-mediated ngahambat kagiatan siklus adenylyl ogé ditingkatkeun dina NAc tina ΔFosB anu nyatakeun beurit, nunjukkeun yén ΔFosB ngatur sistem opioid endogen di NAc. DAMGO E_max nilai leuwih gede pikeun dirangsang MOR [³⁵S] Ngariung GTPγS, sareng EC na₅₀ nilai éta leuwih handap pikeun inhibisi siklus adenylyl, dina beurit -FosB over-keu dibandingkeun beurit kontrol. Pamanggihan ieu nunjukkeun kamungkinan reséptor reséptor pikeun modulasi épéktor tapi sanes aktivasi G-protéin dina kaayaan assay anu nalungtik. Pamanggihan yén pencegahan maksimal siklus adenylyl ku agonist KOR kapangaruhan ku ekspresi ΔFosB nunjukkeun resép anu lowong pikeun résponori mediasi KOR, saluyu sareng tingkat situs KOR anu mengikat dina otak beurit (Unterwald, dkk., 1991). Kontras, CB₁Aktivitas protein G-medi-R sareng ngahambat siklik adenylyl teu kapangaruhan ku ekspresi ΔFosB, nunjukkeun yén sistem opioid sareng cannabinoid bénten dina résponna ka ΔFosB dina neuron NAc ieu.

Pangaruh ΔFosB dina sinyal opioid-mediated signallion konsisten sareng laporan kami saméméhna yén ekspresi BFosB dina striatum anu dirobih épék akut sareng kronis épstras (Zachariou, et al., 2006). Salah sahiji panemuan kajian anu nyaéta beurit kalayan ekspresi transgenik tina ΔFosB di dinorphin / D₁Neuron r striatal langkung peka kana morfin dina hawa tempat tinimbang kadali. Salajengna, épék ieu ditiru ku ekspresi émosional ΔFosB ku jalan suntikan khusus kana NAc. Pengamatan ieu konsisten sareng hasil ayeuna anu nunjukkeun sinyal MOR ditingkatkeun dina NAc.

Urang saacanna ngaidentipikasi gen panyandi dinamis janten target ΔFosB, sareng ngusulkeun yén dinamis dinamis janten konsisten kalayan kamajuan sipat morfin dina beurit ΔFosB bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Hasilna nunjukkeun yén pencegahan KOR-mediated inhibisi siklus adenylyl dina NAc ditingkatkeun dina ΔFosB nyatakeun beurit, anu tiasa nunjukkeun kanaé kompensasi dina sensitipitas KOR nyusut dinamis. Panaliti saacanna nunjukkeun yén KOR didagékeun di daérah otak tangtu beurit knockynorphin, kalebet NAc (Clarke, dkk., 2003).

Kontras jeung ΔFosB, ekspresi transgenik inducible ΔcJun, mutan négatip truncated négatip tina pasangan bFosB cJun, henteu ngarobih inhibisi siklik adenylyl ku agonis MOR atanapi KOR. Hasilna nunjukkeun yén tingkat basal ekspresi ΔFosB, anu rada rendah, henteu maénkeun peran anu penting dina ngajaga sinyal resépsi opioid dina tingkat transduksi sinyal dina NAc. Kanyataan yén pangaruh morfm anu aya syarat anu turun ku ekspresi ΔcJun dina pangajaran kami sateuacana (Zachariou, et al., 2006) nunjukkeun yén induksi morfin tina ΔFosB nalika prosedur udar penting dina ngatur réspon paripolah pikeun ubar atanapi anu épék transkripsial ΔFosB salain ti jalma anu mangaruhan sinyal proksimal ku reséptor opioid tiasa pangaruh pahala opioid. Dina naon waé, hasil tina pangajaran ayeuna nunjukkeun jelas yén, nalika ΔFosB ekspresi diangkat luhur tingkat basal dina dinastiam striatal / D₁Neuron-ungkapan R, aya kanaékan anu kuat dina gandeng MOR sareng KOR pikeun ngahambat siklik adenylyl dina NAc.

Mékanisme dimana sinyal MOR- sareng KOR-mediated ditingkatkeun ku overexpression ΔFosB teu jelas, tapi kami sateuacanna nunjukkeun yén tingkat MOR, ditaksir ku [³H] ngariung naloxone, henteu béda dina NAc of ΔFosB tibalik beurit (Zachariou, et al., 2006). Ulikan anu sami mendakan yén Gα_iTingkat protéin 1 sareng 2 teu kenging di daérah ieu ku ekspresi ΔFosB. Sanajan kitu, nganalisa campuran ekspresi gen saméméhna nunjukkeun yén Gα_o mRNA dirawat di NAc tina ΔFosB dina beurit (McClung na Nestler, 2003). Éta bakal dipikaresep pikeun panilitian masa depan pikeun nguji sacara lengkep efek ekspresi transgenik ΔFosB dina ekspresi subunit G-protein dina tingkat protéin ogé dina ungkapan seueur protéin modulasi G-protein.

Éta pikaresepeun yén ekspresi ΔFosB henteu ningkatkeun CB₁Sérdiasi R-sinyal dina NAc. Éta mungkin yén modifikasi di CB₁Sinyal Sunda aya dina populasi neuron diskrit anu teu jelas dina nyiapkeun NAc. Contona, administrasi Δ⁹- THC sacara signifikan ngainduksi ΔFosB dina inti, tapi sanés cangkang, tina NAc (Perrotti, et al., 2008). abdiKénging, parantos ditembongkeun tangtangan éta sareng Δ⁹-THC nyusul administrasi anu diulang deui Δ⁹-THC ningkat pelepasan dopamin dina inti NAc, tapi turunna dirilis dina cangkang (Cadoni, dkk., 2008). Perlu ogé dicatet yén garis 11A sahiji beurit bitransgenik ekspres ΔFosB ngan ukur dinamis / D₁R positip neuron spiny medium of striatum, tapi CB₁Urang Sunda dikedalkeun dina duanana dinamis / D₁Urang Sunda sareng enkephalin / D₂R neuron striatal positip (Hohmann sareng Herkenham, 2000), ogé dina terminal katélar cortical (Robbe, et al., 2001). Ekspresi régulator négatip dominan transkrip mediasi ΔFosB, ΔcJun, ogé teu gaduh pangaruh anu signifikan dina sinyal reséptor cannabinoid, sanaos ΔcJun sacara réa dikedalkeun dina duanana D₁ sarta D₂-Mikeun populasi neuron spiny sedeng dina beurit ieu (Peakman, dkk., 2003). Mungkin wae, ungkapan basal ΔFosB cekap cekap yén ΔcJun moal mangaruhan reséptor sinyal, sakumaha anu disarankeun ku MOR sareng KOR. Mungkin ogé yén CB₁Sinyal R disederhanakeun ditingkatkeun ku ungkapan basal ΔFosB, ku sabab éta nambahan éksprési ΔFosB atanapi ngahalangan tindakanna ku ΔcJun ngan ukur pangaruh anu teu ngahontal tingkat statistika. Dukungan langsung pikeun interpretasi ieu tiasa katingali ku ngabandingkeun WIN55,212-2 EC₅₀ nilai antara beurit nganyatakeun ΔcJun ngalawan ΔFosB. Babandingan WIN55,212-2 EC₅₀ nilai pikeun inhibisi siklus adenylyl dina beurit kalayan ekspresi ngainduksi ΔcJun ka EC na₅₀ nilai pikeun aktivasina G-protein dina beurit kalayan ekspresi ngainduksi tina ΔFosB nyaéta 4.0, sedengkeun rasio anu sami dina beurit tanpa induksi tina transgene ogé 1.2.

Alternatipna, cannabinoid bisa nyababkeun ekspresi ΔFosB tanpa pangaruh langsung dina CB₁R sinyal. Dina skenario ieu, cannabinoid tiasa ngaréspon responsif kana épék psikoaktif obat-obatan sanés via régulasi transkripsial ΔFosB. abdin kanyataan, administrasi Δ⁹-THC ngahasilkeun cross-sensitization ka opioid jeung amphetamine (Cadoni, dkk., 2001, Lamarque, dkk., 2001), konsisten sareng hipotesis ieu. Leuwih ti éta, administrasi terulang tina agonis CP55,940 cannabinoid dilaporkeun nambahan aktivasina G-protein mediasi MOR di NAc, sami sareng beurit sacara teu langsung nyatakeun ΔFosB dina pangajaran ayeuna (Vigano, dkk., 2005). Pangaruh ekspresi ΔFosB dina Δ⁹Paripolah mediasi -THC teu acan ngaevaluasi, tapi hasil ayeuna henteu ngaleungitkeun interaksi. Hasil ieu sareng pangajaran saacanna (Zachariou, et al., 2006) nunjukkeun parobahan indFosB-ngainduksi dina MOR sareng KOR / dinamis di striatum. Épék rewarding Δ⁹-THC, sakumaha anu diukur ku pilihan tempat, dileungitkeun dina beurit batuk MOR, padahal ngahapus KOR katandatangan Δ⁹-THC kahoream tempat sareng wangsit Δ⁹-THC pilihan tempat (Ghozland, dkk., 2002). Sarupa oge, panyebrangan tempat anu kaayaan Δ⁹-THC teu aya di knockout pro-dinorphin dibandingkeun beurit jinis-liar (Zimmer, et al., 2001). Data ieu nunjukkeun yén Δ⁹-THC tiasa langkung rewarding saatos induksi ΔFosB sareng induksi akibat tina MOR sinyal sareng réduksi dina ekspresi dinamis.

Dina summary, hasil tina kajian ieu nunjukkeun yén ekspresi ΔFosB di D₁Neuron R / dinorphin positip striatal ditingkatkeun MOR- sareng KOR-mediated sinyal dina tingkat G-protéin dimencengkeun tina kagiatan siklus adenylyl dina NAc. Pamanggihan ieu konsisten sareng panaliti anu parantos nunjukkeun peran pikeun sistem opioid endogenous di ganjaran (Trigo, dkk., 2010), sareng masihan mékanisme poténsial pikeun épék mediasi osFosB pikeun ganjaran. Kontras, CB₁Sinyal di-R dina NAc teu kapangaruhan ku éksprési riFosB striatal dina kaayaan anu ditaliti, sanaos studi salajengna diperyogikeun pikeun nangtukeun pangaruh induksi ΔFosB dina sistem endocannabinoid.

Panalungtikan Highlights

Sinyal MOR ditingkatkeun dina inti accumbens sahiji beurit anu nganyatakeun ΔFosB
Perencatan KOR tina siklus adenylyl ogé ditingkatkeun dina beurit nganyatakeun ΔFosB
Babasan ΔFosB henteu ngarobih CB₁R sinyal dina inti accumbens

Bahan suplemén

01

Klik di dieu pikeun nempo.^{(45K, pdf)}

Acknowledgments

Panulis hatur Hengjun He, Jordan Cox sareng Aaron Tomarchio pikeun bantosan téknis kalayan [³⁵S] GTPγS ngariungkeun garansi. Panaliti ieu dirojong ku USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) sareng P01 DA08227 (EJN).

Footnotes

Bantahan Panerbit: Ieu berkas PDF tina hiji naskah unedited nu geus katampa keur publikasi. Salaku jasa ka konsumén urang urang nu nyadiakeun Vérsi mimiti ieu naskah. naskah bakal ngalaman copyediting, Typeset, sarta review sahiji buktina hasilna saméméh éta diterbitkeun di formulir citable ahir na. Perhatikeun yén dina mangsa kasalahan proses produksi bisa jadi pamanggihna anu bisa mangaruhan eusi, sarta sakabeh Disclaimers légal nu dilarapkeun ka jurnal pertain.

Rujukan

Bozarth MA, Wise RA. Widang reséptor opiate béda anatomis nyapihkeun ganjaran sareng gumantungna fisik. Élmu. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Cara anu gancang sareng sénsitip pikeun kuantitas jumlah mikrogram anu nganggo prinsip beungkeutan protéin-ngalelep. Meleg. Biokim. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Delta kronis⁹Perawatan -tetrahydrocannabinol ngahasilkeun leungitna-gumantung tina g-protein resép-cannabinoid dina otak. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid reséptor agonist pikeun stimulasi [³⁵S] GTPγS mengikat beurit membran cerebellar korélasi sareng panurunan anu didorong ku agonis dina pangirut GDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Meka sensitipitas paripolah sanggeus kakeunaan deui kana Delta 9-tetrahydrocannabinol sareng sensitipasi nganggo morfm. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. sensitipitas Paripolah pikeun ngahapus 9-tetrahydrocannabinol sareng sensitipasi kalayan morfin: bédana parobihan dina cangkang akumbal sareng transmisi dopamin inti. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
J J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Sasatoan transgenik nganggo ekspresi gen anu disasarkan, dina uteuk. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Bocah SR. Utusan reséptor opioid-gandeng. Kahirupan Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid sareng inhibitor reséptor cannabinoid dina siklus adenylyl dina otak. Petingan. NY Acad. Ilmu. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Stimulan reséptor Kappa opioid tina [³⁵S] Ngagabung GTPγS dina otak babi guinea: Kurangna bukti pikeun kappa₂-uplikasi aktivasina G-protéin. Biokim. Farmakol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Dapur I. Wilayah milih-milih pangaturan mikro-, delta- sareng reséptor kappa-opioid tapi henteu resep-resepsi 1 sapertos opioid dina otak enkephalin sareng beurit ketukan dinamis. Neurosains. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. sél Striatal tipe-spésifik overexpression of DeltaFosB ngaronjatkeun incentive pikeun kokain. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Tukang kebon EL. Sistem sinyal Endocannabinoid sareng pahala otak: tekenan kana dopamin. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Pangaruh motivasi tina cannabinoid diantisipasi ku reséptor mu-opioid sareng kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Karakterisasi sareng lokalisasi reséptor cannabinoid dina otak beurit: kuantitatif dina diajar vitro autoradiographic. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Pelokalan tina cannabinoid CB (1) reséptor mRNA dina subpopulasi neuronal beurit striatum: labél dobel dina tempat panélangan hibridisasi situ. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Uni internasional Farmakologi. XXVII. Klasifikasi reséptor cannabinoid. Review Farmakologis. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan AND, Frank RA. Sekatan kesan ganja rokok ku CB1 reséptor antagonis CB141716 CBXNUMX-selektif. Arch. Gen. Psychiatry. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, JR, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto Bapak, Nestler EJ. Ekspresi tina deltaFosB faktor transkripsi dina uteuk ngawasaan sensitipitas mun kokain. Alam. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry tina kecanduan. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC artikel bébas] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Perawatan Simon H. Kronis sareng Delta (9) -tetrahydrocannabinol ningkatkeun résponomotor pikeun amphetamine sareng heroin. Kesan pikeun kakurangan tina kecanduan narkoba. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Involusi tina sistem endocannabinoid dina kecanduan narkoba. Tren Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Babasan mu-Opioid éksprési mRNA dina beurit CNS: ngabandingkeun pikeun ngiket mu-reséptor. Otak res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Dapur Kuring, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Kaleungitan analgesia anu ngainduksi morphine, épék ganjaran sareng ditarikna gejala dina beurit anu kurang gén reséptor µ-opioid. Alam. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Pangaturan éksprési gén jeung kokain ganjaran ku CREB na DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti Li, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: a switch molekular pikeun adaptasi jangka panjang dina uteuk. Otak Res. Mol. Otak Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald ÉM. reséptor dopamin D1 modulate deltaFosB induksi dina striatum beurit sanggeus administrasi morfin intermittent. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Review. mékanisme Transcriptional tina kecanduan: peran DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Ilmu. 2008;363: 3245-3255. [PMC artikel bébas] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: a mediator molekular neural jangka panjang sarta plasticity behavioral. Otak res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye anjeunna, asa BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. studi Pharmacological tina pangaturan antigen induksi FOS nu patali kronis ku kokain dina striatum na inti accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti Li, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen Bapak, Bursa JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, uteuk ekspresi wilayah-spésifik of a mutant négatip dominan tina c-Jun di mencit transgenik nurun sensitipitas mun kokain. Otak res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti Li, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. pola béda tina DeltaFosB induksi dina otak ku ubar ti nyiksa. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC artikel bébas] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalisasi sareng mékanisme tindakan reséptor cannabinoid dina sinétrasi glutamatatergic tina accumbens inti beurit. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate siklus assay. Adv. Sikil Nukléotida Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid reséptor-dirangsang [³⁵S] GTPγS ngariung beurit thalamus sareng garis sél berbudaya: Mékanisme transduksi sinyal kaayaan efficacy agonis. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Sistem opioid endogen: substrat umum dina kecanduan narkoba. Obat Alkohol gumantung. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Lokalisasi neuroanatomical tina κ1 sareng κ2 reseptor opioid beurit sareng otak babi guinea. Otak res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Sumbatan inti inti accumbens reséptor opiate attenuates pahlawan intravena dina beurit. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Mékanisme Parolaro D. Mékanisme dina interaksi asimétri antara sistem cannabinoid sareng opioid. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley lj, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Hiji peran penting pisan pikeun DeltaFosB dina intina accumbens dina peta morfin. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Dua situs otak pikeun hadiah cannabinoid. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktipkeun reséptor kappa opioid manusa anu diklon ku agonis ningkatkeun [35S] GTPγS mengikat membran: tekad poténsi sareng khasiat ligan. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Absence of delta -9-tetrahydrocannabinol Épéktik dysphoric dina beurit dinamis-kakurangan. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Anah TI. Ningkatkeun mortality, hypoactivity, sareng hypoalgesia dina cannabinoid CB1 beurit kalah. Proc. Natl. Acad. Ilmu. AS 1999;96: 5780-5785. [PMC artikel bébas] [PubMed]