Flüoresan-aktivləşdirilmiş hüceyrə sıralaması (FACS) (2013) istifadə edərək, metamfetamin-aktivləşdirilmiş Fos-ifadə nöronların molekulyar dəyişikliklərin tək siçovul dorsal striatumdan təyin edilməsi

Metamfetamin və digər preparatlar beynindəki bütün nöronların kiçik bir hissəsini aktivləşdirir. Daha əvvəl, Fos'un nöral aktivlik markerasını ifadə edən aktiv nöronlarda molekulyar dəyişiklikləri seçici şəkildə təyin edən bir flüoresan-aktivləşdirilmiş hüceyrə sıralaması (FACS) əsaslı bir üsul inkişaf etmişdir. Ancaq bu üsul bir çox sıçandan nümunələrin birləşdirilməsini tələb edir. Fos-dorsal striatal neyronları bir siçandan çoxpleksli əvvəlcədən amplifikasiya strategiyasından istifadə edərək molekulyar dəyişiklikləri xarakterizə etmək üçün FACS-ə əsaslanan metodu təsvir edirik.

Fos və NeuN (bir neyronal marker) immunohistokimyası 5-6% dorsal striatum nöronların 90 min aktiv olduqdan sonra 5% -dən az olan neyronların salin inyeksiya ilə aktivləşdirildiyini göstərir (0.5 mg / kg, ip).

Fos-pozitiv və Fos-mənfi nöronlara NeuN-etiketli nöronları ayırmaq üçün FACS-dən istifadə etdik və RT-qPCR-dən istifadə edərək mRNA ifadəsini beş Fos-pozitiv nörondan az qiymətləndirdik. Metamfetamin dərhal erkən genlərin yayını, homer-3, c-fos, fosB və onun izoformlarını (20-2-dəfə)ΔfosB və yeni izoformu ΔfosB-2Fos-müsbət, lakin Fos-mənfi nöronlar deyil. Dərhal erkən gen mRNA induksiyası, tək dorsal striatum homojenatlarından sıralanmamış nümunələrdə qiymətləndirildikdə 10-də aşağı və ya yox idi. Bizim modifikasiya üsulu, kompleks bağımlılıq modellərində dərman və ya dərmanla əlaqəli ipuçları ilə aktivləşdirilən nöronlarda nadir molekulyar dəyişikliklərin öyrənilməsini mümkün edir.

Metamfetamin və digər preparatlar beynindəki bütün nöronların kiçik bir hissəsini aktivləşdirir. Burada Fos neytral fəaliyyət göstəricisini ifadə edən aktiv nöronlarda selektiv bir şəkildə molekulyar dəyişiklikləri xarakterizə etmək üçün təkmilləşdirilmiş bir üsul hesabatını verdik. FACS, bir metamfetamin ilə əlaqəli gen ifadəsini bir siçovul dorsal striatumdan 5 Fos-ifadə nöron kimi az qiymətləndirmək üçün hədəf PCR pre-amplification ilə birlikdə istifadə. Metamfetamin Fos-müsbət, lakin Fos-mənfi nöronlar deyil, dərhal erkən genlərin (IEGs) 3-20-qat artdı. Hedeflenen PCR önceden amplifikasyon, kompleks bağımlılık modellere uyuşturucu ya da uyuşturucuya aid olan ipuçları ile aktif olan nöronlardaki benzersiz molekulyar değişiklikleri incelemek üçün mümkündür.

2013 nəşr olundu. Bu məqalə ABŞ Hökumətinin işidir və ABŞ-da ictimaiyyətdədir.