PLoS One. 2010; 5(10): e15401.
mücərrəd
Pattern başa, qismən istəkləri ilə başlayan tam xatirələr əldə etmək imkanı, yaddaş prosesinin kritik bir xüsusiyyəti. Lakin, bu prosesin əsasını təşkil edən molekulyar və hüceyrəli mexanizmlər ilə bağlı çox az məlumat var. Dopaminin yaddaşda geri çağırılmasında rolunu öyrənmək üçün dopamin nəqlçi heteroziqoglu knockout siçanlarını (DAT+/-), və bu siçanların normal öyrənmə, konsolidasiya və yaddaşın tamamilə replika şəraitində xatırlatmasına sahib olduqları halda, qismən replika şəraitində nümunələrin tamamlanmasında xüsusi çatışmazlıqlar olduğunu göstərdilər. Dopamin daşıyıcısı heterozigotlu nokaut siçanlarında yaddaş geri çağırışının bu forması, dopamin antagonist haloperidolun aşağı dozası ilə geri götürülə bilər və yaddaş nümunələrini geri ala bilməmənin dopamin balanssızlığının nəticəsi olduğunu təsdiqləyir. Buna görə əldə etdiyimiz nəticələr, beynin dopamin səviyyəsinə incə bir nəzarətin assosiativ yaddaş geri çağırılması zamanı nümunənin tamamlanması üçün vacib olduğunu göstərir.
giriş
Yaddaşın geri çağırılması əvvəllər əldə edilmiş məlumatların təkrarlanmasını nəzərdə tutur [1], [2]. Geri çağırma vəziyyətindən asılı olaraq, yaddaş alma öyrənmə ilə əlaqəli əvvəllər rast gəlinən və ya hamısı ilə baş verə bilər (məsələn, bir insanı görmək və səsini eyni vaxtda eşitmək, ya da çox dəyişməyən məmləkətinə yenidən baxmaq və s.). Digər tərəfdən, bir çox hallarda yaddaş axtarışları yalnız ilkin istəklərin alt hissəsi olduqda baş verir (məsələn, məmləkətindəki köhnə küçə xəritələrinin yalnız bir neçə köhnə işarəsi dəyişməz qaldıqda yenidən qurulması). Bu, beynin bütün yaddaş nümunələrini qismən xarici istəklərdən və ya öz-özünə başlamış daxili proseslərdən bərpa edəcəyi və yenidən qurulması nümunəsi kimi tanınır. Hal-hazırda, yaddaşı geri çağırma rejiminin qurulmasının əsasını təşkil edən həqiqi molekulyar və hüceyrə mexanizmləri haqqında az şey məlumdur. Bununla birlikdə ortaya çıxan tədqiqatlar, monoamin siqnalının yaddaş götürülməsində rol oynaya biləcəyini göstərir [3].
Bu çalışmada, modülatör nörotransmitter dopaminin kısmi not alma esnasında yaddaş modeli tamamlanmasını düzenlemede nasıl bir rol oynadığını inceleyeceğiz. Dopamin idrak, duyğu və hərəkətə təsir edə biləcək əsas bir neyrotransmitterdir. Anormal dopaminergik ötürülmə diqqət çatışmazlığı və hiperaktivlik (ADHD), Şizofreniya və Parkinson xəstəliyi də daxil olmaqla bir sıra psixiatrik və nevroloji xəstəliklərdə tətbiq edilmişdir. [4]-[8]. Dopaminergik nöronlar yalnız ventral tegmental bölgədən və əsasən nigra kompaktadan meydana gəlsə də, onların çıxışları prefrontal korteks, medial temporal lob və hipokampus da daxil olmaqla beyində demək olar ki, hər yerdə proqnozlaşdırırlar.l [3], [9]-[14].
Qeyd etmək lazımdır ki, dopaminin yuxarıdakı beyin bölgələrində vasitəçilik etdiyi diqqət və iş yaddaşına funksional olaraq düşünülməsi vacibdir [15]-[18], hər ikisi qismən vuruş şəraitində yaddaş alma prosesində nəzərdə tutulmuşdur [19]. Dopamin siqnalını ləğv etmək üçün birincil hücresel mexanizm olaraq, nöronal presinaptik cərəyanlarda yerləşən dopamin daşıyıcısı (DAT) sinoptik yarıqdan dopamini dopaminergik neyronlara qaytarır. Beləliklə, DAT dopaminin sinaptik səviyyələrini tənzimləyən kritik bir molekuldur və nəticədə yerli neyron dövrlərdə dopamin hərəkətlərinin temporal müddətini müəyyənləşdirir. Həqiqətən, dopamin taşıyıcısı geninin genetik nöqtəsi dərin zəifləmələrə səbəb olur. Homozigot DAT-KO faraları, böyümə geriliyi, güclü lokomotor hiperaktivlik və habitabit və sosial qarşılıqlı çatışmazlıqlar, habelə bağırsaq sürətinin hərəkətliliyi, tənəffüs orqanları və s. Kimi pozğunluqlar da daxil olmaqla açıq anormalliklərdən əziyyət çəkir. [6], [20], [21]. Homozigot DAT-KO farelerinin ümumi qüsurları yaddaş proseslərini tənzimləmək üçün dopaminin rolunu araşdırmaq üçün daha az uyğunlaşdı.
Maraqlıdır ki, heteroziqoglu knockout siçan (DAT+/- fareler) hələ də funksional DAT geninin allele malik olması ümumi ümumi davranışlarında olduqca normal görünür [6], [20], [21]. Beləliklə, DAT+/- siçanlar, dopaminergik dövrə tərəfindən tənzimlənən əlaqəli yaddaş prosesləri və əlaqədar mexanizmlər kimi həssas, lakin vacib fenotipləri öyrənmək üçün dəyərli bir model təqdim edə bilər. Burada associativ yaddaşın geri çağırılması zamanı nümunənin tamamlanmasında dopamin balansının funksional nəticələrini qiymətləndirmək üçün bir sıra davranış paradiqmalarından istifadə etdik.
Nəticələr
Dopaminin yaddaşın alınmasında rolunu araşdırmaq üçün heteroziqoglu dopamin nəqlçi knockout siçanlarını (DAT+/-). Biz açıq sahə lokomotor fəaliyyətini qiymətləndirmək üçün əsas davranış ölçümlərinin batareyasını istifadə etdik (Şəkil 1A), rotarod çıxışları (Şəkil 1B və 1C) və bu heteroziqoglu knockout siçanlarının tamamilə normal olduğunu təsbit etdi. DAT da təsdiq etdik+/- fareler yüksək artı labirentlə ölçülmüş kimi narahatlıq səviyyəsində fərqsiz çıxışlar nümayiş etdirir (Şəkil 1D).
Bundan əlavə, DAT-də əsas öyrənmə və yaddaş funksiyalarını qiymətləndirdik+/- siçan. Birincisi, biz yeni obyektlərin tanınması testindən istifadə etdik və bu siçanlar 1 gündə tutma testlərində tamamilə normal davranış göstəricilərini onların yabanı tipli çöp kontaktınaŞəkil 1E). Bundan başqa, bu siçanlar da 1-gündüz qorunma şəraitində saxlanılırlar ki, bu da onların yabanı tipli nəzarət siçanlarına fərqlənmir (Şəkil 1F). Buna görə də bu nəticələr DAT olduğunu göstərir+/- Siçanların əsas yaddaş testləri bu iki formada normal öyrənmə və yaddaş funksiyası var.
Məkan referans yaddaş testi yaddaşın geri çağrılmasının nümunəsinin tamamlanmasını qiymətləndirmək üçün daha əvvəl istifadə edilmişdir. Biz DAT-in məruz qaldıq+/- bu vəzifəyə siçan və yabanı tipli nəzarət edir. Əvvəllər təsvir edilən məkan referansı yaddaş protokolunu istifadə edin [22], biz bu siçanları gizli platforma su labirentində hazırlamışıq. Təlimin gündə dörd sınaqdan ibarət olması, sınaqlar arasında bir saatlıq intervalın olmasıdır. Həm DAT olduğunu gördük+/- siçanlar və yabanı tipli siçanlar 10 gündüz sessiyalarının gedişində və oxşar üzmə sürəti ilə müqayisə edilən öyrənmə və yaddaş konsolidasiyasını nümayiş etdirirlər (Şəkil 2A və 2B).
Sonuncu olaraq, sonuncu təlimin başa çatmasından bir gün sonra 1 günü sınaqdan keçirilmiş sınaqdan (P11) istifadə edərək gizli platforma yerini xatirələrini araşdırdıq. Dörd kadr istifadəsi ilə ölçüldükdə, həm DAT+/- siçanlar və onların nəzarət çirkləndiriciləri axtarışlarını hədəf kvadrantına tam sövq edərkən yönəldirdilər (Şəkil 3A). Bundan əlavə, DAT+/- siçanlar da xəyali platforma sahələrində güclü bir üstünlük nümayiş etdirdi və idarəetmə platformalarının yerlə müqayisədə heç bir fərq yox idi (Şəkil 3B). Bundan əlavə, gözlənildiyi kimi, həm DAT+/- siçan və yabanı tipli littermates kəsişmələrin sayında əhəmiyyətli bir artım göstərdi (Şəkil 3C). Beləliklə, bu ölçülərin hamısı DAT olduğunu göstərir+/- fareler normal olaraq bu vəzifəni öyrənə və normal birləşmə yaddaşını tam cue şəraitində əldə edə bilər.
Dopaminin həssas balansının qismən şaquli şəraitdə naxışların başa çatması üçün vacib olub-olmadığını müəyyən etmək üçün növbəti dörd sınaqdan üç gün (gün 2) aradan qaldıraraq ikinci gündüz testini (P12) aparıblar. Əvvəlki geri çağırış sessiyasından mümkün olan hər cür aradan qaldırılmaması üçün, P4 prob sınaqdan sonra bir neçə blok (1 sınaq) 1 saat sonra çatdırılmışdır. Bu partial-proqnoz probu sınaq zamanı, nəzarət siçanları digər kadrlardan daha çox hədəf kadranında axtarış müddətini cəmləşdirməyə davam edərkən, DAT+/- siçanlar hədəf kadranın doluluqla ölçülməsi ilə yalnız şans səviyyəsində performans göstərdilər (Şəkil 3D). Bundan əlavə, fantastik platforma sahələrinin doluluq ölçülməsi bu DAT-in daha da təsdiqlənmişdir+/- platforma yerini xatırlamaqda siçan zədələndi (Şəkil 3E). Bu axtarış açığı da platform keçidlərinin sayının artmaması (Şəkil 3F), yabanı tipli littermates qismən-replika yaddaş geri çağırma tam bacardı. Buna görə, bu məlumatlar DAT olduğunu göstərir+/- siçanların qismən təzyiq şəraitində məkan referans xatirələrini almaqda çatışmazlığı var.
Nəhayət, biz bu DAT-da nümunənin tamamlanmasını bərpa edə biləcəyimizi soruşduq+/- farmakoloji metodlardan istifadə edərək fareler. Dopamin antagonisti, haloperidolun aşağı dozasının müəyyən dopamin xəstəliklərini aradan qaldırmasında faydalı ola biləcəyi bildirilmişdir [20]. Məqsəd o deməkdir ki, haloperidolun aşağı dozası normal dopamin taşıyıcısı geninin bir allelinin itirilməsi nəticəsində dopamin bərpa olunmayan heteroziqlü siçanlarda yüksələn dopaminin təsirini bir qədər azaldar. Xilasetmə sınaqlarına eyni siçan dəstəsini tətbiq etdik. 13 günü və 14 gündə yuxarıda göstərilən siçanı tam nizamlama şəraitində üçüncü sınaq sınaqına (P3) və dördüncü prob sınaqdan (P4) qismən təzyiq şəraitində tətbiq etdik. Yenidən prob sınaq zamanı baş verə biləcək hər hansı bir tükənməyə qarşı çıxmaq üçün, P4 və ya P1 prob sınaqlarının tamamlanmasından sonra 2 saatlıq təlimin daha bir blokunu (3 sınaq) həyata keçirmişik. P3 proqnoz testində hədəf kadranın doluluqluğunun ölçülməsi həm DAT həm də göstərir+/- siçan və nəzarət çömçə qrupları, hədəf çeyreğindəki axtarışları tam izahatlardaŞəkil 4A). Bundan əlavə, onların normal yaddaş geri çağırılması yenidən platforma doluluq ölçülməsi ilə təsdiq edilmişdir (Şəkil 4B) və platforma keçidlərinin sayı (Şəkil 4C). Beləliklə, bu mutant siçanlar tamamilə əyilmə şərtləri altında məkan yaddaşını tam ala bilmədi.
14 günü, dörd distal istəkdən üçü çıxardıq və dördüncü prob sınaqlarını (P4) qismən təzahürü vəziyyətində aparırdıq. Biz DAT-i enjekte etdik+/- tutma testindən əvvəl 0.002 dəqiqə aşağı haloperidol (30 mg / kq çəkisi) ilə intraperitoneally siçanlarda. Vəhşi tipli littermates bir nəzarət kimi bir şoran enjeksiyon aldı. DAT olduğunu gördük+/- fareler hədəf kadranında axtarış müddətini cəmləşdirdi və vahid tipli həmkarları ilə müqayisədə statistik olaraq oxşar çıxışlar göstərdi (Şəkil 4E). Həmçinin, fantastik platforma sahələrinin doluluq ölçülməsi bu DAT-in daha da əsaslandırdı+/- siçanlar platforma yerini geri ala bilər (Şəkil 4F). Onların normal yaddaş geri çağırılması, yabanı tipli siçanla eyni dərəcədə olan platform keçidlərinin sayının artması ilə təsdiqləndi (Şəkil 4G). Beləliklə, bu təcrübələr, DAT-da ilk növbədə naxış başa çatışmazlığının müşahidə olunduğunu göstərir+/- siçanlara dopamin balansı səbəb ola bilər.
P4 prob sınaqda haloperidol ilə enjekte edilmiş fenotipin nəticələrinin təkrarlanan prob sınaqları zamanı aşkara çıxması səbəbindən istisna edilməməsi üçün başqa bir DAT+/- və littermates nəzarət və bütün eksperiment təkrar. Gözlənildiyi kimi, həm DAT+/- Siçanlar və onların yabanı tipli siçanlar 10 günün təlim kursları zamanı yaxşı öyrənmə dərəcələrini nümayiş etdirdilər (Şəkil 5A). 11 günü, sonra bu siçanları tam istinadla geri çağırış testlərinə tabe etdik, DAT arasında yaddaş tutma test nəticələrində əhəmiyyətli bir fərq yoxdur+/- kvadrant doluluqları ilə ölçülmüş siçan və nəzarətçiŞəkil 5B), hədəf kadranın doluluq (Şəkil 5C) və platform keçidlərinin sayı (Şəkil 5D). Tam replika probu testinin tamamlanmasından bir saat sonra, biz bu siçanları hər hansı bir tükənmə təsirinin qarşısını almaq üçün daha bir təlim bloku ilə yenidən hazırladıq. 12 günündə bu siçanlar qismən-replika geri çağırış testlərinə məruz qaldı. Nəzarət üçün aşağı bir doz haloperidol (və ya salin) dozası intraperitonal olaraq 30 dəqiqəlik qismən-təzahi sınaqdan əvvəl səciyyələndi. Bu müalicənin mutant siçanlarda normal performanslara gətirib çıxardığını gördük. Mutant və nəzarət siçanları quadrant işğalında müqayisə edilən performansları nümayiş etdirdi (Şəkil 5E), hədəf kadranın doluluq (Şəkil 5F) və platform keçidlərinin sayı (Şəkil 5G). Üzmə sürətlərinin ölçülməsi də fərqlənməmişdir (Şəkil 5H). Buna görə də, bu məlumatlar DAT-da qeydə alınmış qismən cue axtarış açığının açıq olduğunu göstərmişdir+/- Haloperidol tərəfindən siçanlar çoxlu prob sınaqları zamanı təkrarlanan təkrarlanma səbəbindən deyil.
Müzakirə
Dopamin sistemi çox bilişsel proseslərin tənzimlənməsi üçün çox vacibdir [8], [16]-[18], [23]-[25]bizim hazırkı tədqiqat normal dopamin daşıyıcısı geninin bir allelinin itkisindən meydana gələn dopaminin bərabərsizliyinin ilk dəfə assosiativ məkan yaddaşının geri çağırılması zamanı nümunənin tamamlanmasında xüsusi bir çatışmazlığa səbəb olduğunu sübut edir. Bu yaddaş geri çağırma açığı yalnız qismən-məkan-replika şəraitində açıqdır, lakin tam qeyd şərtləri altında deyil. Üstəlik, bu yaddaş geri çağırış kəsiri olduqca xüsusi yaddaş formasını əks etdirir, çünki əsas davranışların geniş sahələri (açıq sahədə lokomotiv, rotarod və narahatlıq) və kontekstində qorxu kondisionerləri və yeni obyektlərin tanınması kimi yaddaşın digər formaları normaldır.
Dopaminin bu yaddaş prosesinin əsasını təşkil edən əsas namizəd molekulası olduğu düşünülür ki, müşahidə olunan məkan parsiyel-təzyiqə səbəb olan çağırış çatışmazlığına kollektiv şəkildə kömək edə biləcək bir neçə potensial molekul və hücresel ssenarilər mövcuddur, çünki diqqəti və işləyən yaddaş ilk növbədə dopamin siqnalları, məkan xatirələrinin alınması üçün kritik olduğu bildirildi [15]-[18], [26]. Məlumdur ki, prefrontal korteks, medial temporal lob və hipokampus daxil olmaqla, beynin demək olar ki, hər yerində yalnız ventral tegmental sahədən və əsas nigra kompaktadan meydana gələn dopaminergik nöronlar [5], [19], [27]-[28], yaddaşın alınması və diqqət prosesləri zamanı aktiv olduğu bilinən bölgələr [3], [9]-[14], [29], [30]. Dopamin diqqət və iş yaddaşına görə vacib olduğunu sübut edən geniş sübutlar nəzərə alınmalıdır [15]-[18] DAT genində olan genetik polimorfizmi DEHB-yə aid olduğu düşünülür [31]-[33], DAT vasitəçisi olan dopamin tənzimlənməsi ilə qismən-muş şərtlər daxilində yaddaş götürmə işinin tamamlanmasında həm diqqət, həm də işləyən yaddaşın rol oynaya biləcəyi mümkündür. Beləliklə, DAT heterozigotlu mutant siçanlarında müşahidə olunan yaddaş nümunəsinin tamamlanması qüsurları, sintetik dopamin pozulması nəticəsində qismən replika əsaslanan yaddaş geri çağırılması zamanı siçanın artan diqqət tələbatını ödəyə bilməməsi ilə əlaqəli ola bilər.
Dopamin dengesizliğinin yaddaş çıxışı çatışmazlığı ilə nəticələndiyini aşkar etməyimiz Parkinson xəstələrində müşahidə olunan klinik demans baxımından da maraqlıdır. Bu xəstələr ümumiyyətlə yeni yaddaşı öyrənmək, konsolidasiya və saxlama qabiliyyətini qoruyub saxlayacaq kimi görünür, lakin xüsusilə qismən xarici istəklər və ya öz-özünə xatırlatma şəraitində xatirələrin alınmasında dərin dəyərsizləşirlər. [34], [35]. Bu çatışmazlıqlar açıq-aşkar istəklər olmadığı zaman xüsusilə dərindir [8], [23], [34]-[36], bununla da dopaminin yaddaşın geri çağırılması prosesində iştirak edə biləcəyini göstərir. Parkinson xəstələrində yaddaş geri çağırışındakı bu növ çatışmazlıqlar digər neyrotransmitter sistemlərindəki yaddaş çatışmazlığından ciddi şəkildə fərqlənir. [37] və ya adətən köhnə xatirələri xatırlamaq qabiliyyətini qorumaqla yeni xatirələri öyrənmək və konsolidasiya etməkdə zəif olan Alzheimer xəstələrində erkən demans. [34], [35]. Bu yaddaş dövriyyələrində fərqli molekulyar və zamansal proseslərə müxtəlif zəifliklər səbəbindən müxtəlif terapevtik strategiyaların inkişaf etdirilməsinin zəruriliyini göstərir.
Geri çağırma zamanı halopersionun enjeksiyasına uyğun olaraq modelin tamamlanmasının tamamilə xilas olmağımızın nümayişi yaddaşda axtarışda balanslı dopamin səviyyəsinin rolu haqqında fikirini gücləndirir. Bu farmakoloji xilasetmə təcrübəsi qismən replika əsaslı geri çağırış çatışmazlığına səbəb olan müvəqqəti spesifiklik üçün əlavə sübutlar təqdim edir. Qeyd etmək lazımdır ki, DAT-də dopamin pozğunluqları+/- siçanlar və Parkinson xəstələri bir-birlərindən tamamilə fərqlidirlər, lakin hər ikisi də nümunə götürmə çatışmazlığına səbəb olur. Bu ortaqlıq, dopamin sisteminin zərif balansının yaddaş çıxartması üçün çox vacib olduğunu və hər iki istiqamətdə (yuxarı və ya aşağı) dengesizliği xatırlatma əsnasında yaddaş nümunələrinin tamamlanmasına səbəb ola biləcəyi anlayışına kollektiv dəstək verir. Əhəmiyyətli olanı qeyd etmək istərdik ki, indiki analizimiz DAT mutant siçanlarının Parkinson xəstəliyi modeli kimi istifadə edilməsinə dəlil olaraq şərh edilməməlidir. Digər tərəfdən, vivo ilə DAT homozigotlu knockout siçanlarında dopaminin ölçülməsi burst stimullaşdırılması ilə tetiklenen dopamin salınımında əhəmiyyətli bir azalma olduğunu göstərir [38]-[40]. Bu, sinir fəaliyyətinin partlayış siçanlarının müxtəlif beyin bölgələrində dopamin siqnallarına çevrilmə qabiliyyətinin qeyri-mümkün olduğunu göstərir. Dopamin nisbətinin azaldılmasının, yaddaş emalı ilə məşğul olan sinir dövranlardakı atəş nümunələrində dəyişdirilmiş fizioloji dəyişikliklərə səbəb ola biləcəyi qəbuledilməzdir. Hal-hazırda oxşar dəyişikliyin DAT heterozigotlu nokaut siçanlarında və ya Parkinson xəstəliyi xəstələrində də olub olmadığı məlum deyil.
Məkan yaddaşının geri çağırılması zamanı aktivləşdirilən neyron sxemlərlə bağlı az məlumat olsa da, prefrontal korteks, medial temporal korteks və hipokampus da daxil olmaqla bir çox bölgəni ehtimal edir. Bu, ventral tegmental sahədən olan dopaminergik nəticələrin ventral CA1 sahəsinə və entorin korteksinə ağırlıq verdiyini anatomik sübutlarla yaxşı uyğun gəlir[13], [28]. Bu prefrontal-hipokampal-VTA dövrü kontekstual tanışlığın yaranmasında mühüm rol oynaya bilər, bu da öz növbəsində dopamin tənzimlənən diqqətin asanlaşdırılması vasitəsilə qismən replika əsaslı yer fənnini geri çağırmaq zamanı nümunənin tamamlanmasına kömək edir [3], [14], [26], [28]. Gələcək tədqiqatlarda müşahidə edilən nümunə başa çatışmazlıqların baş verdiyi anatomik lokusun daha da müəyyən edilməsi vacibdir. Anterior cingular korteks, temporal korteks və farmakoloji, genetik və böyük miqyaslı in vivo qeyd üsullarından istifadə edərək hipokampus kimi namizəd sahələrini araşdırmaq xüsusilə maraqlıdır. [11], [41]-[44]. Mutant beyində genetik təzminat və ya yavaş dəyişikliklərin müşahidə olunan geri çağırış çatışmazlığına təsirinin olub-olmadığını qiymətləndirmək də vacibdir. Digər nörotransmitter sistemlərinin də yaddaşın alınması tənzimlənməsində tənqidi şəkildə iştirak edə biləcəyi göstəriciləri də var [3], [37], [45], [46]qismən cue-tetiklemeli model tamamlanması və tam replika əsaslı yaddaş axtarışı arasında dinamik qarşılıqlı əlaqələrini araşdırmaq və müqayisə etmək olduqca maraqlı olardı. Nəticədə, araşdırmamız, dopamin səviyyələrində həssas bir tarazlığın, assosiativ məkan yaddaşının geri çağırılması zamanı nümunənin tamamlanması üçün vacib olduğunu göstərir.
Material və metodlar
Etik bəyanatlar
Araşdırmada təsvir edilən bütün heyvan işləri NIH qaydalarına əsasən aparılmış və Gürcüstan Tibb Kollecində İnstitutun IACUC komitəsi tərəfindən təsdiq edilmişdir (Approval AUP nömrəsi: BR07-11-001).
Mutant Siçanlarının istehsalı və genotipləşməsi
DAT siçanları Çikaqo Universitetinin doktor XiaoXi Zhuang laboratoriyasından səxavətli bir hədiyyə idi. DAT heteroziqoglu knockout siçanlarının yetişdirilməsi və genotipləşdirilməsi təsvir olunanlarla eynidır [6]. Denemelerimiz üçün, hem erkek hem de dişi fareler eyni ölçüde 1 oranında istifadə edilmişdir![[nisbət]](http://www.ncbi.nlm.nih.gov/corehtml/pmc/pmcents/x2236.gif){kind=small}
1. DAT üçün PCR+/- siçanları izah edildiyi kimi protokol izlədi [6]. Bütün siçanlar Gürcüstan Tibb Kollecinin Heyvan Təsislərində standart şəraitdə (23.1 ° C, 50.5% nəm) saxlanılıb. Bütün təcrübələr səs-küylü və xüsusi bir davranış otağında aparıldı. Bütün eksperimentlər fərdi heyvanın genotipinə kor idi.
Novel-Object Recognition Task
Təcrübə protokolu daha əvvəl təsvir edilən ilə eyni idi [37], [47]. Qısaca, siçanlar 20 gün üçün fərdi olaraq açıq sahə qutusuna (20 × 10 × 3 yüksək düym) alışdılar. Təlimlər zamanı açıq sahədə iki yeni obyekt yerləşdirilib və heyvana 15 dəqiqəlik araşdırma imkanı verildi. Hər bir obyektin araşdırılmasına sərf olunan vaxt qeydə alınıb. Bir saatlıq geri çağırış testləri zamanı, heyvanın təlim zamanı tanış olan obyektlərdən biri yeni bir obyekt ilə əvəzləndiyi və 15 dəqiqə üçün sərbəst araşdırılmasına imkan verən eyni qutuya yerləşdirildi. Hər iki obyekti araşdırdıqları vaxt ərzində iki obyektdən (tədris sessiyasından) və ya yeni birindən (tədqiqat sessiyasından) hər hansı birini araşdırdığınız vaxtın nisbəti, tanınma yaddaşını ölçmək üçün istifadə edildi.
Open Field və Rota-rod Testlər
Protokolların təsvir olunduğu kimi eyni idi [48]. Açıq sahədə fəaliyyətin ölçülməsi üçün siçanlar 14 × 14 düymlü qara qutudan hazırlanmış açıq sahədə yerləşdirilib. Kutu 2 × 2 düymlük kiçik kvadrat ızgaralarla (7 kvadratlarda 7 kvadratlarla 49 kvadratlarla birlikdə) qeyd edildi. Heyvanların açıq sahədə fəaliyyəti, siçanların 3 dəqiqəlik dövr ərzində keçdiyini xaç sayı ilə ölçüldü. Rota-rod testinin ölçülməsi üçün siçanlar sürətləndirən fırlanan ağac çubuğuna yerləşdirildi. Çubuk 12 uzunluğunda və 1 düym diametrindədir. İlkin fırlanma sürəti 4 rpm idi və sonra da 40 rpm-ə sürətlə sürətləndi. Performans, beş dəqiqəlik və ya bir saatlıq geri çağırış testləri zamanı fırlanan çubuqda qalmağı bacaran siçanların (saniyə) miqdarı ilə ölçüldü.
Elevated Plus Maze Testləri
Protokolların təsvir olunduğu kimi eyni idi [49]. Yüksək artı labirent paslanmayan poladdan hazırlanmış və mat qara rəngli boyadır. Dörd qol (iki ədəd açıq və iki xNUMX sm yüksək divarları ilə əhatə olunmuş) 15.25 sm uzunluğunda və 30 sm genişlikdən ibarətdir. Labirentin hər bir qolu sağlam metal ayaqlarına əlavə olunur ki, onun üzərində oturduğu masadan yuxarı 5 sm yuxarıdır. Aktivlik, dijital kamera (Logitech Kamera, Model N40) tərəfindən labirentin üstündə 231 sm yuxarıda qeyd edildi. Sirkadyan dövrünün işıq fazında (130 və 40 h arasında) işıqlandırma işığı altında (bir 60-W və bir 0900-W yumşaq ağ işıq lampası, həm labirentdə dolayı işıqlandırma yaratmaq üçün açılmış). Labirent testlər arasında 1400% sirkə turşusu ilə təmizlənmişdir. Ağ səs (5 dB) kənar fon səs-küyünü maskalı. Test günü heyvanlar ev kafeslərindəki test otaqlarına gətirildi və heyvanların hər cütü ev qəfəsindən çıxarıldı və labirentə yerləşdirilməzdən əvvəl 30 dəq üçün ayrı bir tutma kafesinə yerləşdirildi. Heyvanlar labirentin mərkəzində fərdi olaraq yerləşdirilib, baş mövqeyi siçanlar arasında balanslaşdırılmış və davranış 5 dəqiqə ilə qeyd edilmişdir. açıq qolu və qapalı qola sərf olunan vaxt (gəminin bütün dörd pəncəsi açıq və ya qapalı qolda olduqda) qeydə alındı və təhlil edildi.
Bağışlayıcı Qorxu Kondisionerləri
Qorxma əvvəlcədən izah edildi [45]. Təcrübə qorunma sistemində, tavanda bir ev işığı və bir paslanmayan polad şəffaf mərtəbəli (Coulbourn Instruments, Whitehall, PA) səsli zərif qutuda yerləşən bir kamerada aparılıb. Şəffaf mərtəbə bir şok generatoru ilə əlaqələndirilmişdir və səsli siqnal kameranın divarına bağlı bir hoparlordan çıxmışdır. Bütün xəbərdarlıqlar Qrafik Dövlət proqramı olan bir şəxsi kompüterdən istifadə edərək avtomatik olaraq idarə olundu. Davranışı yazmaq üçün qəfəs qarşısında bir video kamera yerləşdirilib. Siçanlar 3 gün işlədilər və sonra 5 dəqiqə üçün təlim otağına köçdülər. 85 s üçün 2.8 mA-da şərti stimulus (ABŞ) 0.8 kHz-də 2 dB səs idi. Bir tək-təkərli CS / US parinqdən sonra heyvan dərhal dondurmanın ölçülməsi üçün kamerada başqa bir 30 s üçün qaldı. Tutma testi zamanı hər siçan eyni kameraya yerləşdirildi və dondurma cavabları 5 min (kontekstual dondurma cavabı) üçün qeyd edildi. Bütün testlər qırmızı işıq altında videotəsdir. Ümumi dondurma vaxtı qorxu anı indeksi olaraq ölçüldü. Dondurma davranışı tənəffüs istisna olmaqla hərəkətsizliyin tam olmaması kimi təsvir edilmişdir. Dondurma davranışları proqram təminatı (Coulbourn Instruments) tərəfindən qiymətləndirilib və dondurma reaksiyasına çevrildi [dondurma reaksiyası 
= (ümumi dondurma vaxtı / ümumi sınaq müddəti) × 100%].
Spatial Reference Memory Testlər
Məkan referans yaddaş testi gizli platforma su labirentiydi. Biz daha əvvəl Nakazawa et al. [22]. Təlimin gündə dörd sınaqdan, məhkəmələr arasında bir saatdan ibarət idi. Siçan hərəkətləri video kamera ilə izlənilir və proqram təminatı ilə ölçülür (Noldul İnformasiya Texnologiyaları, Hollandiya). Platforma qaçış gecikmələri, həmçinin kadrların istifadəsi və platforma keçişi qeyd olundu və təhlil edildi. Hovuz 118 sm diametrinə malikdir və platform 9.5 sm diametrindədir. Dörd zond sınaqları edildi. İlk proba testi (P1) tam təlimat şərtləri (Day 11) altında son məşqdən sonrakı gün keçirilmişdir. İkinci sınaqdan keçmə testi (P2) 12 günündə qismən nişanlanma şəraitində aparılıb (qara pərdə divarına asdıqdan sonra dörd görünüşündən üçü çıxardı). DAT üçün+/- 3 günündə tam nişan şəraitində üçüncü prob sınaq (P13) və 4 günündə partial-cue şəraitində dördüncü prob sınaq (P14) altında həyata keçirmişik. Tədqiqatın daha bir bloku (4 sınaq) prob sınaq zamanı baş verə biləcək hər hansı bir tükənməyə qarşı çıxmaq üçün sırasıyla P1, P1 ve P2 prob testlərindən sonra 3 saat təslim edildi. Bundan əlavə, P4 (partial-cue və haloperidol enjeksiyonu ilə prob sınaq) əvvəlki ehtimalüstü tramvayların kompozisiya təsirini istisna etmək məqsədilə başqa bir DAT qrupunu+/- siçanlar və onların nəzarət yabanı tipli littermates iki əlavə zond test (P3 ′ və P4 ′ sınaq). P3 ′ zond sınağı, tam təlim şəraitində (10 gün) son məşqdən bir gün sonra keçirildi. P4 ′ zond sınağı 11-ci gündə hissə-hissə şəraitində keçirildi. Bütün sınaq sınaqlarımız zamanı platforma söküldü və siçanların məşq zamanı istifadə edilən miqdarda (60 saniyə) hovuzda üzməsinə icazə verildi. Hər kvadrantda sərf olunan vaxt qeyd edildi. Dopamin səviyyəsini bərpa etmək [6], [20], [21], DAT dən fareler+/- və nəzarət qruplarına hamısı ya haloperidol (0.002 mq / kq bədən çəkisi) və ya P30 və P4 ′ sınaq sınaqlarına 4 dəqiqə qalmış duzlu su ilə daxil edilmişdir.
Məlumat Təhlili
Təkrarlanan ölçümler arasında daxili hayvan korelâsyonunu hesablamaq üçün Morris su labirentinde, yeni nesne tanıma, bağlamda qorunma koşusu ve rota-rod testlerinde davranış performansını tahmin etmek üçün doğrusal karma modeller kullanılmıştır. DT arasında bu davranış ölçümlerinin əhəmiyyətini müəyyən etmək üçün Tukey-Kramer metodu istifadə edilmişdir+/- siçanlar və nəzarət edənlər. Açıq sahə və yüksəldilmiş plus labirent testlərində, genotip təsirlərini təyin etmək üçün birtərəfli ANOVA və post hoc Dunnett testindən istifadə edilmişdir. Davamlı dəyişənlər orta (SEM) ortalama və standart səhv kimi təqdim olunur. Verilər SPSS versiyası 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) istifadə edilərək analiz edilmişdir. Fərqlər P <0.05 olduqda əhəmiyyətli hesab edildi.
Minnətdarlıq
DAT təmin etmək üçün Çikaqo Universitetindən Dr. Xiaoxi Zhuang'a təşəkkür edirik+/- KO siçanları və Brianna Klein təcrübələr üçün texniki yardım üçün.
Dəyişikliklər
Rəqabət Maraqlar: Müəlliflər heç bir rəqabət mənsubu olmadığını bəyan etdi.
Maliyyələşdirmə: Bu tədqiqat NIMH (MH060236), NIA (AG024022, AG034663 & AG025918), USAMRA00002, Georgia Araşdırma İttifaqı və Şanxay Bələdiyyəsinin Elm və Texnologiya Komissiyası (10140900500) (hamısı JZT'ye) tərəfindən dəstəkləndi. Çin Milli Elm Fondu (81000592), Şanxay Bələdiyyəsinin Elm və Texnologiya Komissiyası (10DZ2272200, 09DZ2200900, 10PJ1407500 və 10JC1411200), Şanxay Bələdiyyə Təhsil Komissiyası (11ZZ103) FL və XMS-ə. Maliyyələşdirənlərin iş dizaynında, məlumatların toplanmasında və təhlilində, nəşr qərarında və ya əlyazmanın hazırlanmasında heç bir rolu yox idi.
;
