Proc Natl Acad Sci ABŞ A. Jan 19, 2010; 107 (3): 1217-1222.
Xətti onlayn olaraq Dek 29, 2009. doi: 10.1073 / pnas.0911998107
PMCID: PMC2824263
Nevrologiyada
Yan Liu,a,b Brandon J. Aragona,c Kimberly A. Gənc,a,b David M. Dietz,b,d,e Məhəmməd Kabbaj,b,d Mişel Mazei-Robison,e Eric J. Nestler,e və Zuoxin Wanga,b,1
Bu məqalə olmuşdur istinadən PMC-də digər məqalələr.
mücərrəd
Prairie vole (Microtus ochrogaster), dopamin (DA) tətbiq olunduğu bir davranış, çiftleşmeden sonra cüt bağlar meydana gətirən sosial monogam gəmirici növdür. Burada narkotik təsirinin cüt bağlanmasına və əlaqəli neyron dövranına təsirini araşdırmaq üçün kişi boşluq boşluqlarından istifadə etdik. İlk təcrübəmizdə, amfetamin (AMPH) motivasiyalı davranış şərti bir yerə üstünlük (CPP) paradiqmasından istifadə edərək araşdırıldı və D1 kimi DA reseptorlarının aktivləşdirilməsində vasitəçilik edildiyi göstərildi. Sonradan təkrarlanan AMPH təsirinin cüt bağlantılara təsirini araşdırdıq. Bütöv və duzlu əvvəlcədən idarə olunan kişilər çift birləşməsinə səbəb olan tərəfdaş üstünlüklərini nümayiş etdirirlər, halbuki AMP ilə təsirli dozada AMPH ilə müalicə olunan kişilər çiftleşmə səbəbi olan tərəfdaş üstünlüklərini göstərə bilmədilər. Belə AMPH müalicəsi də D1-ı gücləndirdi, lakin D2 deyil, nüvədəki akkumulyatorlarda (NAcc) DA reseptoru ifadəsi. Bundan əlavə, NAcc-dəki D1-a bənzər DA reseptorlarının farmakoloji blokadası AMPH-lə müalicə olunan kişilərdə cütləşməyə səbəb olan tərəfdaş üstünlüklərini xilas etdi. Birlikdə, məlumatlarımız göstərir ki, AMPH-nin təkrar məruz qalması NAcc-də DA reseptorlarına məxsus mexanizm vasitəsi ilə kişi çanaq boşluqlarının davranış repertuarlarını daralda bilər və bunun nəticəsində cüt bağ formalaşması pozulur.
Fitnesi təşviq edən həvəsli və emosional davranışların mezolimbik dopamin (DA) sistemi də daxil olmaqla beyin mükafat dövriyyəsi ilə tənzimlənməsi geniş qəbul edilmişdir (1, 2). Bu sistem tez-tez qida qəbulu və cinsi davranışda tətbiq olunur (3, 4), digər yetkin yaşda olanlar arasındakı sosial oyun və valideyn və övlad arasındakı sosial bağlantı kimi digər təbii olaraq ortaya çıxan davranışlara da təsir etmişdir (5-9). Tədqiqatda çox vaxt yetkin həyat yoldaşları arasında yaranan sosial bağlar, yəni cüt bağlar var. Sosial monogam gəmirici bir növ istifadə edərək son araşdırma, prairie vole (Microtus ochrogaster) (10-12), cüt bağların əmələ gəlməsi və saxlanmasına əsaslanan neyron tənzimlənməsinin, nüvələrin böyüməsi (NAcc) daxilində baş verdiyini göstərir. (13-15) - əsaslandırılmış davranışların vasitəçiliyi üçün vacib olan mezolimbik beyin bölgəsi (1, 2, 16).
Həvəsləndirici dövrə qidalanma, çiftleşme və sosial bağlantı kimi fitness artırma davranışını inkişaf etdirməsinə baxmayaraq (1, 17), sui-istifadə dərmanları ilə süni mənimsənməyə həssasdır (8). Məsələn, kokain və amfetamin (AMPH) kimi psixostimulyator sui-istifadə dərmanlarının qəbulu mesolimbik DA fəaliyyətinin davamlı dəyişməsi ilə nəticələnir (18, 19). Bu və digər asılılıq dərmanların bu dövrə güclü təsiri, təbii stimulun qəbul edilmiş dəyərinin azaldılması təklif edilmişdir (20sosial xarakterli olanlar da daxil olmaqla (8). Narkomaniya aludəçilərinin ictimai davranışlarının zəif olduğu məlum olsa da (21), dərman təcrübəsi ilə sosial bağlılıq arasındakı qarşılıqlı əlaqənin sinir tənzimlənməsi zəif başa düşülür. Bunun səbəbi, qismən bu cür qarşılıqlı əlaqələrin, yetkin konspektlər arasında sosial bağlantı nümayiş etdirməyən ənənəvi laboratoriya kemiricilərində modelləşdirmək çətindir.
Bu cür sosial əlavənin neyrobiologiyası, xüsusən də böyüklər arasındakı cüt bağlar, prairie vole-də geniş tədqiq edilmişdir (10-12) və bu yaxınlarda bu növ AMPH-nin motivasiya dəyərini araşdırmaq üçün əlverişli bir model olaraq quruldu (22). Bundan əlavə, hər iki cüt istiqrazın formalaşması və AMPH möhkəmləndirilməsi, ən azı NAcc daxilində DA ötürülməsi ilə vasitəçilik olunur (14, 15, 23). Buna görə, hazırkı araşdırma, narkotik təsirinin sosial bağlanmaya təsirini öyrənmək üçün davranış təhlili qurmaq üçün prairie vole modelindən istifadə etdi və bu davranış təsirlərini əsas götürən sinir mexanizmini aşkar etmək üçün NAcc DA siqnal sisteminə yönəldildi.
Nəticələr
AMPH ilə əlaqəli şərtli yer seçimi (CPP) DA tərəfindən bir reseptorun xüsusi qaydasında vasitəçilik edilir.
Bir CPP'nin meydana gəlməsi, prestest'e nisbətən 3 günlük AMPH kondisionerindən sonra poststest zamanı AMPH-cütləşdirilmiş qəfəsdə sərf olunan vaxtın artması ilə təyin olundu. Nə salin enjeksiyonları, nə də ən aşağı iki AMPH dozada test edilmiş (0.1 və 0.5 mq / kq) qatı üstünlükləri dəyişdirilmədi (Əncir 1A). Bununla birlikdə, kişilər 1.0 daxil olmaqla AMPH-nin daha yüksək dozaları ilə şərtləndilər (t = 2.87, P <0.01), 3.0 (t = 3.63, P <0.01) və ya 5.0 mg / kg (t = 3.03, P <0.01), göstərilən CPP (Əncir 1A).
Çünki AMPH, prraie voles-də DA nörotransmissiyasını əhəmiyyətli dərəcədə artırır (24) və DA digər növlərdə AMPH möhkəmləndirməsində vasitəçilik edir (23), daha sonra DA reseptorunun (DAR) kişi həyətyanı boşluqlarda AMPH ilə əlaqəli CPP tənzimləməsini araşdırdıq. Mövzular, CPN paradiqmasında əvvəlcədən təyin edilmiş, 1.0 gün ərzində kondisioner zamanı AMPH (3 mq / kq) enjeksiyondan əvvəl nonselektiv DAR antaqonistinin (haloperidol) müxtəlif dozaları olan və ya salin ilə müalicə olunmuş və sonra bir poststestdə CPP üçün sınaqdan keçirilmişdir. Salin ilə müalicə olunan mövzular (t = 2.69, P <0.01) və ya iki ən aşağı doza haloperidol (0.1 mq / kq) olan salin; t = 3.62, P <0.01; 1.0 mq / kq; t = 3.89, P <0.01) əvvəl AMPH kondisionerində AMPH ilə əlaqəli CPP göstərildi, haloperidol 5.0 mq / kq-da AMPH-in yaratdığı CPP-ni blokladı və DAR-lərin AMPH-nin davranış təsirlərinə qarışdığını göstərdiƏncir 1B). Hansı DAR tipinin AMPH-ya təsir edən CPP-ni vasitəçi etdiyini müəyyən etmək üçün sonradan kondisioner zamanı AMPH inyeksiyasından əvvəl D1-a bənzər xüsusi antaqonist (SCH23390) və ya D2-a bənzər xüsusi antaqonist (etikloprid) tətbiq etdik. D2 bənzər bir antagonizm AMPH ilə əlaqəli CPP-ni maneə törətmədi (t = 3.15, P 0.01 mq / kq üçün <0.5 və t = 2.60, P <0.05 5.0 mg / kg eticlopride üçün), lakin D1-ə oxşar reseptorların blokadası AMPH-in yaratdığı CPP-ni aradan qaldırdı (Əncir 1B), AMPH ilə əlaqəli CPP-nin D1-a bənzər, lakin D2-a bənzəməyən kişi priyomundakı reseptorların aktivləşdirilməsi ilə vasitəçi olduğunu nümayiş etdirir.
AMPH Təcrübəsi Çiftleşmeye Bənzər Tərəfdaş Üstünlük Formalaşdırma Alter.
AMPH ilə əlaqəli CPP D1 kimi reseptorların aktivləşdirilməsini tələb etsə də (Əncir 1B) əvvəllər göstərdik ki, D1-a bənzər reseptorların aktivləşməsi cütləşməyə səbəb olan cüt bağ bağının yaranmasına mane olur (14). Buna görə də, AMPH-nin əvvəlcədən hazırlanmasının kişi çöl boşluqlarında cütləşmə ilə əlaqəli cüt bağa müdaxilə edəcəyini fərz etdik. Kişilər heç bir enjeksiyon (toxunulmaz), salin enjeksiyonları və ya 1.0 gün ərzində 5.0 və ya 3 mq / kq AMPH enjeksiyonları qəbul etməyən dörd qrupa bölündülər (CPP-ni inkişaf etdirmək üçün kifayət edən bir inyeksiya paradiqması). Dördüncü gün, bütün kişilər 24 h müddətində cinsi qəbul edən bir qadınla cütləşdirildi və sonra tərəfdaş üstünlükləri üçün sınaqdan keçirildi. Əvvəlki işlərə uyğundur (14, 25-27), çiftleşmədən əvvəl 3 gün ərzində duzlu iynə qəbul edən sağlam kişilər və kişilər çiftleşmədən qaynaqlanan tərəfdaş üstünlüklərini göstərdilər (bütöv kişilər; t = 3.05, P <0.01, şoran enjekte edilmiş kişilər; t = 3.21, P <0.01; Əncir 2A). Lakin, cütləşmədən əvvəl 3 gün ərzində ya AMPH dozası ilə əvvəlcədən hazırlanmış kişilər tərəfdaş seçimlərini göstərə bilmədilər (Əncir 2A). Əhəmiyyətli olan AMPH-nin əvvəlcədən hazırlanması, yaşama müddətində cütləşmə tezliyinə təsir etməmişdir (F(3, 26) = 0.26, P = 0.85; Əncir 2Bvə ya ortaq seçim imtahanı zamanı lokomotor fəaliyyətF(3, 26)= 2.34, P = 0.10; Əncir 2C), AMPH'nin çift birləşmə ilə əlaqəli tərəfdaş seçimlərinə müdaxilə etdiyini ifadə edir.
AMPH Təcrübəsi NAcc-də D1 Reseptorlarını artırır.
AMPH qabaqcıl pozulmuş tərəfdaş seçimlərini və hər iki AMPH ilə əlaqəli CPP (yuxarıya bax) və cüt bağlantıları nəzərə alaraq (14) NAcc DA tərəfindən tənzimlənir, biz AMPH'nin kişi çuxurlarında mesolimbik DA dövranını əhəmiyyətli dərəcədə dəyişdirəcəyini fərz etdik. Yuxarıda göstərilən davranış təcrübəsindən mövzuların beyinləri DA marker mRNA-larının situ etiketlənməsi üçün işlənmişdir. AMPH (1.0 mq / kq) ilə müalicə olunan kişilər, D1 reseptorunda (D1R) əhəmiyyətli dərəcədə artım göstərdilər; t = 3.06, P D0.01 reseptoru (D2R) deyil, NAcc içərisində mRNA etiketlənməsi, şoran əvvəlcədən müalicə alan kişilərlə müqayisədə (2)Əncir 3 A-C). Bununla birlikdə, ventral tegmental bölgədə (VTA) - NAcc-ə ilkin dopaminerjik giriş təmin edən beyin bölgəsində tirozin hidroksilaz (TH), DA daşıyıcısı (DAT) və ya D2R-lər üçün mRNA etiketinin sıxlığında heç bir qrup fərqi tapılmadı (Əncir 3 D-G). NAcc-də D1R-lərin artan ifadəsi Qərb ləkələnməsi ilə daha da təsdiqləndi (t = 1.90, P <0.05; Əncir 3 H və I). Birlikdə, bu məlumatlar AMPH ifrazının NAcc-də D1R səviyyəsini artıran kişilərin ərəb boşluqlarının mezolimbik DA sisteminə reseptor və sahəyə xüsusi təsir göstərdiyini göstərir.
NAcc Mediate AMPH Tərəfdaş Tercihlerinin Dəyişməməsi D1 Reseptorları.
Əvvəllər göstərdik ki, kişilərin ərköyünlüklərdə NAcc daxilində D1R-lərin aktivləşdirilməsi tərəfdaş seçiminin formalaşmasına mane olur (14) və cari araşdırma göstərir ki, AMPH ifrazı NAcc-də D1R-ləri tənzimləyir (Əncir 3). Buna görə də, AMPH-nin ortaq üstünlüklərinin dəyərsizləşməsinin NAcc daxilindəki D1R-lər tərəfindən vasitəçiliyinə dair fərziyəni sınaqdan keçirdik. Kişilər NAcc qabığına ikitərəfli yönəldilmiş stereotaksik konservasiya aldılar (Əncir 4A). D1 bənzər reseptor antaqonisti SCH23390-ın müxtəlif dozalarını ehtiva edən süni serebrospinal maye (CSF) və ya CSF, 1.0 günlük kondisioner zamanı AMPH enjeksiyonlarından (3 mq / kq) əvvəl NAccə vuruldu. Bundan sonra subyektlər 24 h müddətində bir qadınla cütləşdirildi və sonra tərəfdaş seçimləri üçün sınaqdan keçirildi. Yuxarıdakı təcrübədə olduğu kimi (Əncir 2), AMPH ifrazatı CSF intra-NAcc enjeksiyonları və ya SCH23390 aşağı dozada qəbul edilən kişilərdə cütləşməyə səbəb olan tərəfdaş seçimlərinin qarşısını aldı (Əncir 4B). Bununla birlikdə, yüksək bir miqdarda SCH23390 (100 ng / kq) vurulan kişilər tərəfdaş seçimlərini göstərdilər (t = 2.55, P <0.05), NAcc-dəki D1R blokadasının partnyor üstünlük formalaşmasının AMPH-nin yaratdığı pozğunluğu aradan qaldırdığını göstərən (Əncir 4B). Tərəfdaşın üstünlük imtahanı zamanı birgə yaşama və ya lokomotor fəaliyyəti zamanı cütləşmə tezliyində qrup fərqləri tapılmadı.
Müzakirə
Bu araşdırmada, AMPH pozğunluğunun kişi çöllüklərində CPP-ni meydana gətirdiyi barədə əvvəlki tapıntılarımızı təkrarlayırıq (22) və NAcc-dəki D1R aktivləşdirməsinin bu davranış üçün lazım olduğunu, digər gəmirici növlərdəki araşdırmalara uyğun bir nəticə olduğunu göstərin (28). Bu tapıntı, əvvəllər edilən araşdırmalarla birlikdə, NAcc'də fərqli DAergik mexanizmlərin AMPH və ortaq motivli davranışları tənzimlədiyini göstərir: AMPH əsaslı davranış (CPP) D1R vasitəçiliyi, tərəfdaş əsaslandırılmış davranış (tərəfdaş seçimləri) D2R tərəfindən asanlaşdırılır) aktivləşmə və NAcc daxilində D1R aktivləşdirmə ilə maneə törədilmişdir (13-15). [NAcc-də D2R aktivləşdirməsində dərmanla əlaqəli CPP-nin müəyyən şərtlərdə vasitəçilik etdiyini qeyd etmək vacibdir (29) və D1R aktivləşdirmə, digər nəsillərə yönəlmiş davranışlar kimi digər sosial motivli davranışlarda iştirak edir (7, 30)].
CPP və tərəfdaş üstünlüklərinin formalaşmasının diferensial DAergik tənzimlənməsi, ən çox fərqli DAR alt növlərini aktivləşdirən stimullaşdırıcı DA konsentrasiyası dərəcəsindəki fərqlərlə əldə edilir. Bağlı bağlardakı fərqlər səbəbindən, DA konsentrasiyasındakı möhkəm yüksəkliklər aşağı yaxınlıq D1R-ləri aktivləşdirmək üçün tələb olunur, halbuki DA konsentrasiyalarında cüzi artım yüksək bağlantı D2R-ləri aktivləşdirir (31). Prairie boşluqlarında AMPH DA konsentrasiyasında daha çox artım doğurur (24) çiftleşmə yolu ilə ortaya çıxan ilə müqayisədə (15, 25). Bu məlumatlar sosial qarşılıqlı əlaqə zamanı DA konsentrasiyasında nisbətən az artımın olduğunu göstərir (15, 25) yüksək yaxınlıq D2R-lərin spesifik aktivləşməsinə imkan verir və beləliklə cüt əlaqələrin yaranmasını asanlaşdırır. Əksinə, AMPH administrasiyasından sonra DA konsentrasiyasında möhkəm artım, aşağı bağlantı D1R-ləri aktivləşdirmək üçün kifayətdir və bununla da AMPH-in daxil olduğu CPP-ni asanlaşdırır.
DA tərəfindən reseptorlara məxsus davranış tənzimlənməsi sərbəst hərəkət edən siçovullarda hüceyrədənkənar elektrofizyolojik tədqiqatlara uyğundur ki, bu da dərman və təbii stimulların NAcc daxilindəki fərqli neyron populyasiyalar tərəfindən işləndiyini göstərir (32). Belə elektrofizyolojik tədqiqatlar fərdi neyronlarda ifadə olunan DA reseptorlarının alt növlərini müəyyənləşdirə bilməsə də, anatomik tədqiqatlar NAcc-in ya D1R və ya D2R-ləri çox az əksikliyi ilə ifadə edən proyeksiya neyronlarından ibarət olduğunu göstərir (33). Psixostimulyantlar D1R-dən aşağıdaxili hüceyrədaxili siqnal yollarını aktivləşdirirlər (siqnal molekullarının artan fosforlaşması ilə müəyyən edilir) (34) və əvvəllər göstərdik ki, bu siqnal yollarının artan aktivləşdirilməsi tərəfdaş seçiminin formalaşmasına mane olur (35). Beləliklə, NAcc içərisində DA ötürülməsi AMPH-yə reaksiya və tərəfdaş seçimlərinin formalaşmasında mühüm rol oynasa da, bu davranışlar, ehtimal ki, striatal proyeksiya sistemlərini özündə cəmləşdirən fərqli mikrosxemlər vasitəsilə vasitəçilik olunur (33, 36). Bu xüsusi maraq doğurur, çünki cüt bağların meydana gəlməsi, ventral palliduma üstünlük verən D2R ifadə edən neyronların aktivləşdirilməsi ilə vasitəçilik olunur (33), cüt bağ üçün vacib olan başqa bir beyin bölgəsi (26).
Bu araşdırmada, AMPH təcrübəsinin cütləşməyə səbəb olan cüt bağların qarşısını aldığına dair bir sübut təqdim edirik. Bu təcrübələrdə ortaq seçim testləri son AMPH məruz qaldıqdan sonra 48 saat sonra aparıldı (yəni dərman tamamilə metabolizə edildikdən sonra), bu məlumatlar AMPH-nin sosial bağlantılara davamlı təsirini göstərir. AMPH-nin digər növlərə təsirinə uyğun bir potensial mexanizm (37, 38), AMPH'nin cüt bağlantısını poza biləcəyi, NAcc içərisində D1R ifadəsinin artmasıdır. Bu anlayış tərəfdaş üstünlük təşkilində NAcc D1R'ların antaqonist rolu ilə dəstəklənir (14, 24) və AMPH ilə müalicə olunan heyvanlarda daxili NAcc D1R blokadası ilə cütləşməyə səbəb olan tərəfdaş seçimini xilas etdiyini göstərən cari məlumatlarla (Əncir 4). Maraqlıdır ki, daha əvvəl göstərdik ki, kişi priyom boşluqlarında, 1 həftəlik cüt bağlanışdan sonra NAcc D2R-lərin tənzimlənməsi, cinsi qəbuledici qadınlar da daxil olmaqla, xüsusi qəriblərə qarşı seçmə aqressiyasını asanlaşdırır, bu sinir plastisiyasının kişi boşluqlarının inkişaf etdiyi bir mexanizm olduğunu göstərir. artıq qurulmuş cüt istiqrazları qorumaq (14). Hazırkı tədqiqat AMPH-nin bu neyroplastikliyi süni şəkildə tetikleyeceğini və cüt əlaqələrin AMPH-nin dəyərsizləşməsinə səbəb olduğunu göstərir. Həm də mümkündür ki, AMPH ilə müalicə olunan kişilər qadını AMPH çəkilməsinin mənfi vəziyyəti ilə əlaqələndirə bilər və beləliklə bu mənfi birləşmə cüt bağların AMPH dəyərsizləşməsinin əsasını təşkil edə bilər. Əvvəlki bir araşdırma kişi siçovullarda d-amfetamin pozulmuş cinsi davranışın artan doza cədvəlindən çəkildiyini göstərdi (39). Araşdırmamızda, fərqli müalicə qruplarındakı boşluqlar oxşar çiftleşme bouts nümayiş etdirdi (Əncir 2B), ehtimal ki, amfetamindən geri çəkilmək vəziyyətində olmadığını göstərir. Buna baxmayaraq, bu ehtimal sonrakı araşdırmalara zəmanət verir.
Narkotik maddələrdən qaynaqlanan sinir plastisiyasının narkomaniya üçün əsas olduğu yaxşı müəyyən edilmişdir (40). Psixostimulyantlar mezolimbik DA sistemindəki struktur plastikliyini kəskin şəkildə dəyişdirir (41) və bu dəyişikliklərin D1 ifadə edən neyronlarda daha davamlı olmasına dair sübutlar var (37). Bundan əlavə, elektrofizyolojik tədqiqatlar kokain təcrübəsinin NAcc daxilindəki sonrakı nöroplastikliyi azalda biləcəyini göstərdi (42). Həqiqətən, NAcc-in dərmanla əlaqəli sinir yenidən qurulması, mürəkkəb mühitlərə yeni məruz qaldıqdan sonra təbii olaraq meydana gələn sinir yenidən quruluşunu pozur (43). Buna görə də, narkomaniya geniş şəkildə öyrənmə və yaddaş pozğunluğu olaraq tanınır (1, 40, 44), tez-tez bir maddənin təsiriylə mezolimbik dövranlarda əlavə dəyişiklik üçün potensialın itirilməsinin də asılılıq üçün zəruri ola biləcəyi vurğulanmır. Plastikliyin belə bir azalması davranış repertuarını narkotik axtarışında məhdudlaşdıra bilər. Buna görə AMPH-lə işlənmiş gövdələrin cütləşmə davranışının azaldılması təəccüblü deyil. Cüt bağlamaya AMPH məruz qalmasının cari təsiri, psixostimulyatorların ana davranışları da daxil olmaqla digər sosial davranışlara təsirli təsirini göstərən əvvəlki araşdırmalara uyğundur (45-47) və sosial oyun (48-50). Birlikdə, belə bir iş, narkotik və sosial stimulların beyində necə təsir etdiyini araşdırmağın insanlarda sosial davranış və narkotik istifadəsi arasındakı güclü qarşılıqlı təsir haqqında anlayışımızı əhəmiyyətli dərəcədə genişləndirəcəyinə söz verir21).
Material və metodlar
Mövzu.
Mövzular, bir laboratoriya heyvandarlıq koloniyasından olan cinsi sadəlövh kişi prairie voles idi. Mövzular, 21 yaşında süddən keçirildi və eyni cinsdə bacı cütlüklərdə su və qida təmin olunduğu plastik qəfəslərdə (12 × 28 × 16 sm) yerləşdirildi. Bütün qəfəslər bir 14: 10 açıq qaranlıq bir dövrə altında saxlanıldı və temperatur təxminən 20 ° C idi. Bütün fənlər sınaqdan keçirildikdə təxminən 90 gün idi. Stereotaksik konservasiya və DA dərmanlarının əraziyə infuziyası başqa yerlərdə ətraflı təsvir edilmişdir (14).
Davranış Testi.
CPP testi əvvəlcədən təsvir olunduğu kimi aparıldı (22aşağıdakı istisnalarla. Hər mövzuya ilkin kafes üstünlükləri, 30 günündə bir 1 dəqiqəlik bir prestestdə təyin olundu. Bundan sonra mövzular, 40 min seans müddətində, üstünlük verilən qəfəsə qədər AMPH və duzlanmış qəfəsə qədər (həm AMPH, həm də salin enjeksiyonları eyni gündə, 6 saat ayrı) 3 ardıcıl günlərdə (2 - 4 gün) verilir. Bundan sonra, subyektlər 5 günündə bir CPP olması üçün sınaqdan keçirildi (posttest).
Tərəfdaş seçim imtahanı əvvəllər təsvir olunduğu kimi aparıldı (14). Qısaca, sınaq aparatı hər bir stimullaşdırıcı heyvanın yerləşdiyi iki paralel eyni qəfəsə daxil olaraq içiboş borularla (12 × 28 sm) birləşdirilmiş mərkəzi bir qəfəsdən (16 × 7.5 × 16 sm) ibarət idi. Həvəsləndirici heyvanlar bir-birləri ilə birbaşa əlaqə qurmadan ayrı-ayrı qəfəsləri arasında bir-birinə bərkidilmiş tanış "tərəfdaş" (subyektin qadın yoldaşı) və tanımadığı "qərib" (əvvəllər bu mövzuya rast gəlməmiş qadın) idi. 3-h testinin başlanğıcında, subyektlər mərkəzi qəfəsə yerləşdirildi və aparat boyunca sərbəst hərəkət etməyə icazə verildi. Davranış bir zaman fasiləsi video qeyd sistemindən istifadə edərək qeyd edildi. Bu manipulyasiyanı görməyən eksperimenterlər lentə baxdılar və mövzunun davranışlarını qeyd etdilər. Bir tərəfdaş seçimi, qoşalaşmış nümunələrlə göstərildiyi kimi, qəriblə müqayisədə tərəfdaşla yan-yana təmasda daha çox vaxt sərf edən mövzu olaraq təyin olundu. t test (27).
Situ Hibridləşmə və Qərb İmmunoblottingdə.
Xüsusi antisense riboprobes (Cədvəl 1) D1R, D2R, TH və DAT situ mRNA etiketləmə üçün istifadə edilmişdir. Etiketleme ilə edildi 35S-etiketli zondlar və əvvəlcədən təsvir olunduğu kimi hər DA marker üçün mRNA nəzarət (51). Qərb laxtalanma analizi üçün, DAR zülalı, NAcc toxuma zərbələrinin fövqəladə maddəsindən alındı və əvvəllər göstərildiyi kimi təhlil edildi52).
Məlumatların miqdarı və təhlili.
CPP və tərəfdaş seçimləri cütləşdirilmiş nümunələrlə müəyyən edildi t testlər. Partnyor seçim imtahanı zamanı bir qadın və qəfəs girişləri ilə cütləşmənin ilk 6 s saatında cütləşmə itkilərindəki qrup fərqləri ANOVA tərəfindən təhlil edilmişdir. NAcc-də D1R və D2R mRNA etiketləmə, həmçinin VTA-da TH, DAT və D2R mRNA etiketləmə etiketlərinin optik sıxlıqları kompüterləşdirilmiş bir görüntü proqramı (NIH IMAGE 1.64) istifadə edərək autoradioqramlardan hesablanmışdır. Məlumatlar şoran nəzarət qrupunun ortalama faiz dəyişməsi şəklində təqdim edildi və qrup fərqləri təhlil edildi t testlər. Nəhayət, Qərb ləkələnmə təcrübələrindən x-ray filmindəki D1R və D2R etiketli optik sıxlıqlar təhlil edildi t testlər.
Eksperimental dizayn.
Təcrübə 1a AMPH ilə əlaqəli CPP üçün doza-cavab əyrisini qurdu. Mövzular, 1 günündə CPP aparatlarında, müxtəlif konsentrasiyaları olan ip (ip) salin enjeksiyonlarını alan altı eksperimental qruplardan birinə təsadüfən təyin olunmuşdur (0).n = 12), 0.1 (n = 8), 0.5 (n = 9), 1.0 (n = 12), 3.0 (n = 12) və ya 5.0 mq / kq (n = 13)] 3 gün ərzində (gündə 2 - 4) kondisioner istifadə etdi və sonra 5 günündə bir poststestdə CPP üçün sınaqdan keçirildi.
Təcrübə 1b AMPH ilə əlaqəli CPP-də DA reseptorlarının rolunu aşkar etdi. Mövzular CPP aparatında əvvəlcədən təyin edilmiş və təsadüfi bir salin (sc) enjeksiyonu alan səkkiz eksperimental qrupdan birinə təyin edilmişdir.n = 10) və ya nonselektiv DA reseptor antaqonistinin müxtəlif konsentrasiyalarını ehtiva edən salin [haloperidol; 0.1 (n = 8), 1.0 (n = 8) və ya 5.0mg / kq (n = 8)] və ya D1 kimi xüsusi (SCH23390; 0.5 (n = 7) və ya 5.0 mq / kq (n = 7)] və ya D2 kimi xüsusi DA reseptor antagonisti [etikloprid; 0.5 (n = 8) və ya 5.0 mq / kq (n = 8)]. Otuz dəqiqədən sonra AMPH kondisionerində CPP-ni tətbiq edən AMPH (1.0mg / kq) həddindən artıq bir doz istifadə edildi. 1 günlük AMPH kondisionerindən sonra bütün subyektlər bir CPP posttest aldı.
Təcrübə 2, AMPH təcrübəsinin cüt bağlanmasına müdaxilə edib etmədiyini araşdırdı. Mövzular, təsadüfi olaraq salinanın ip enjeksiyonlarını alan üç eksperimental qrupdan birinə təyin edildi (n = 8) və ya 1.0 mq / kq olan salinn = 8) və ya 5.0 mq / kq (n = 7) AMPH, 3 ardıcıl gün ərzində gündə bir dəfə - kişilərin ərkən boşluqlarında CPP-ni meydana gətirən bir paradiqma. Dördüncü gün, mövzular 24 h üçün estrogenli bir qadın ilə cütləşdirildi (14) və sonra bir 3-saatlıq ortaq üstünlük testində sınaqdan keçirildi. Enjeksiyonların cüt bağlanmasına təsirini idarə etmək üçün, heç bir enjeksiyon almamış dördüncü bir eksperimental qrup.n = 6), 24 h üçün estrogen tərkibli qadınlarla birləşdirilmiş və ortaq üstünlükləri üçün sınaqdan keçirilmişdir. Bütün davranış testləri çiftleşmənin yoxlanılması üçün video lentə alındı. Tərəfdaş və qərib ilə yan-yana əlaqə quran subyektlərin müddəti kəmiyyətlə qiymətləndirildi. Bundan əlavə, 6-saatlıq tərəfdaş seçim imtahanı zamanı ilk 3 h cütləşmə və lokomotor fəaliyyəti (qəfəs keçidi ilə göstərilmişdir) zamanı cütləşmə döngələrinin tezliyi ölçülmüşdür. Tərəfdaş seçim imtahanından sonra subyektlər dərhal öldürüldü. Bütün beyinlər yığılmış, quru buz üzərində dondurulmuş və DA marker mRNA-larının situ hibridləşdirmə etiketlənməsi üçün N80 ° C-də saxlanılmışdır.
Təcrübə 3, AMPH pozulmuş cüt bağlantısının mezolimbik DA fəaliyyətindəki dəyişikliklərlə əlaqəli olub olmadığını araşdırdı. Salin qəbul edən subyektlərdən beyinlər (n = 8) və ya 1.0 mq / kq AMPH (n = 8) Təcrübə 2-də bir kristat üzərində Superfrost / üstəgəl slaydlara (Fisher Scientific) quraşdırılmış koronal hissələrə kəsildi (14 μm qalınlığı). 98-μm fasilələrlə beyin bölmələri D1R, D2R, TH və DAT mRNA-larının situ hibridləşdirmə etiketlənməsi üçün işlənmişdir. 1.0 mq / kq AMPH ilə qarşılaşan boşluqlar D1R-də artım göstərdi, lakin DAXUMXR deyil, NAcc-də mRNA etiketlənməsi, şoran vurulan idarəetmə ilə müqayisədə, şoran inyeksiya alan iki əlavə subyekt qrupu meydana gəldi (n = 6) və ya 1.0 mq / kq AMPH (n = 6), 24 saat çiftleşmə və daha sonra yuxarıda göstərildiyi kimi tərəfdaş seçim imtahanı. Mövzular decapitated və beyinlər 300 μm qalınlığında bir kristatta dilimləndi. NAcc-dən ikitərəfli alınan toxuma yumruları D1R və D2R Qərb laxtalanması üçün işlənmişdir.
Təcrübə 4, NAcc-dəki D1 tipli reseptorların aktivləşməsinin cüt birləşmənin AMPH-nin pozulmasına görə olub olmadığını araşdırdı. Mövzular, NAcc qabığına yönəldilmiş bələdçi cannulae ilə implantasiya edildi. 3 gün sonra bərpa olunduqdan sonra təsadüfi olaraq CSF intra-NAcc enjeksiyonları aldıqları üç eksperimental qrupdan birinə təyin edildi (200 nL / side, n = 11) və ya 0.4 (CSN) olan CSFn = 6) və ya 100 ng / yan (n = 7) SCH23390. Otuz dəqiqədən sonra 1.0 mq / kq AMPH ip iynələrini aldılar. Bu prosedur 3 ardıcıl gün ərzində təkrarlandı. Dördüncü gün, subyektlər 24 saat üçün estrogenli bir qadın ilə cütləşdirildi və sonra tərəfdaş üstünlükləri üçün sınaqdan keçirildi.
Minnətdarlıq
Müəlliflər bu əlyazmanı tənqidi oxuduqlarına görə Kayl Qobroqge, Claudia Liberwirth, Kelly Lei və Melissa Martin-ə təşəkkür edir. Bu iş Milli Səhiyyə MHR01-58616, DAR01-19627 və DAK02-23048-dan ZW-yə qədər dəstəklənmişdir
References
;
