Ang epekto sa ΔFosB overexpression sa opioid ug cannabinoid receptor-mediated signaling sa nucleus accumbens (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

tinubdan

Department of Pharmacology and Toxicology ug Institute for Drug and Alkohol Studies, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

abstract

Ang lig-ong transcription factor nga ΔFosB gipahinabo sa mga accumbens sa nucleus (NAc) pinaagi sa kanunay nga pagkaladlad sa daghang mga droga sa pag-abuso, ug ang ekspresyon sa transgenic nga ΔFosB sa striatum nagdugang sa mga ganti nga mga kabtangan sa morphine ug cocaine. Bisan pa, ang mekanikal nga sukaranan alang niining mga obserbasyon dili pa kompleto nga nasabtan. Gigamit namon ang usa ka bitransgenic nga modelo sa mouse nga dunay inducible expression nga ΔFosB in dopamine D (1) reseptor / dynorphin nga adunay mga neuron nga striatal aron matino ang epekto sa ΔFosB nga ekspresyon sa opioid ug cannabinoid receptor signaling sa NAc. Ang mga resulta nagpakita nga ang kalihokan sa G-protein nga mu-opioid ug pagdugtong sa adenylil cyclase gipalambo sa NAc sa mga ilaga nga gipahayag ΔFosB. Sa samang paagi, ang pagdili sa kappa opioid sa adenylil cyclase gipalambo sa ΔFosB nga nagpahayag sa mga ilaga. Sa kasukwahi, ang pag-sign-mediated nga cannabinoid nga receptor wala magkalahi tali sa mga ilaga nga nag-overexpresse ΔFosB ug kontrol nga mga ilaga. Tkini nga mga kaplag nagsugyot nga ang opioid ug cannabinoid receptor signaling nagkalainlain modulated pinaagi sa pagpahayag sa ΔFosB, ug nagpakita nga ang eksposyong FosB mahimong makamugna sa pipila ka mga epekto pinaagi sa enhanced mu ug kappa opioid receptor signaling sa NAc.

keywords: G-protein, adenylyl cyclase, striatum

1. Pasiuna

Opioid receptors ug cannabinoid CB₁ mga receptor (CB₁R) mao ang mga target sa neurobiological alang sa duha ka sagad nga gigamit nga mga klase sa droga nga naglakip sa morphine, heroin ug presko nga opioids, ug marijuana (Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC)), matag usa. Ang mga epekto sa mga opioids ug mga cannabinoids gihusay pinaagi sa G-protein-coupled receptors nga gi-activate primarily G_{i / o} protina ug makahimo sa downstream effector responses sama sa pagdugta sa adenylyl cyclase (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Ang motor, paghinumdum sa memorya ug psychoactive nga epekto sa Δ⁹-Ang mga produkto nga gihimo sa CB₁R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), nga gipanghatag sa kadaghanan sa utok, nga adunay taas nga lebel sa basal ganglia, hippocampus ug cerebellum (Herkenham, et al., 1991). Ang analgesic ug rewarding nga mga epekto sa kadaghanan sa mga tambal nga may kalabutan sa klinikal ug giabusohan nga opioid nga mga tambal nga gikonsidera pinaagi sa mu opioid receptors (MOR) (Matthes, et al., 1996), nga gipalambo sa limbic system ug brainstem (Mansour, et al., 1994). Ang mesolimbic system nga gilangkuban dopaminergic projections gikan sa ventral tegmental area (VTA) ngadto sa nucleus accumbens (NAc), adunay importante nga papel sa mga ganti nga epekto sa opioids ug cannabinoids (Bozarth ug Maalamon, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), ingon man usab sa ubang mga droga sa pag-abuso (Koob ug Volkow, 2010). Dugang pa, ang mga endogenous opioid ug cannabinoid nga mga sistema nalambigit sa magantihon nga mga epekto sa daghang mga klase sa mga psychoactive nga tambal (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Busa, hinungdanon nga ipatin-aw ang mga mekanismo nga ang opioid ug CB₁Ang pag-signal gipatuman sa NAc.

Usa ka pangunang pangutana sa natad sa pag-abuso sa droga mao ang pag-ila sa mga protina nga naghusay sa kausaban gikan sa mahait ngadto sa taas nga epekto sa mga tambal nga psychoactive. Ang AP-1 nga transcription factor nga ΔFosB ilabi na nga makapaikag tungod kay kini usa ka lig-on nga naputol nga produkto sa usa ka splice fosb gene nga natigum sa balikbalik nga pagkaladlad sa mga droga sa pag-abuso o natural nga ganti (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Nakita namon nga ang ΔFosB gipahinabo sa utok nga nagsunod sa balik-balik nga pagkaladlad sa morphine, Δ⁹-THC, cocaine o ethanol, sa matag droga nga nagpatunghag usa ka talagsaon nga panig-ingnan nga rehiyon sa ΔFosB nga ekspresyon (Perrotti, et al., 2008). Ang usa ka makanunayon nga pagpangita sa mga droga mao nga ang ΔFosB gipahinabo sa striatum, diin ang tanan nga upat ka mga druga nga giduso ΔFosB sa core NAc ug ang tanan gawas sa Δ⁹-Ang kamahinungdanon nga gihulagway nga ekspresyon sa NAc shell ug caudate-putamen.

Ang mga pagtuon sa pharmacological nagpakita nga ang co-administrasyon sa dopamine D₁ receptor (D₁R) antagonist SCH 23390 gibabagan ΔFosB induction sa NAc ug caudate-putamen following intermittent cocaine o morphine administration, nga nagsugyot sa potensyal nga kahinungdanon sa D₁R-expressing neurons (Muller ug Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Ang epekto sa ΔFosB induction sa drug-mediated behaviors nga gi-imbestohan gamit ang bitransgenic nga mga ilaga nga nagpahayag ΔFosB sa piho nga neuronal nga populasyon sa NAc ug dorsal striatum (Chen, et al., 1998). Mga ilaga nga nagpahayag ΔFosB sa dynorphin / D₁Ang positibo nga mga neuron sa NAc ug dorsal striatum (linya 11A) nagpakita sa giusab nga mga tubag sa mga droga sa pag-abuso, labi nga gipalabi ang pagkasensitibo sa magantihon nga mga epekto sa cocaine o morphine (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Kini nga mga pag-usab nahitabo sa wala'y mga pagbag-o sa mga lebel sa MOR o sa nagkalain-laing mga subunit sa G-protein. Apan, ang mga lebel sa dynorphin mRNA gikunhod sa NAc sa ΔFosB nga nagpahayag sa mga ilaga (Zachariou, et al., 2006), nga nagsugyot nga ang usa ka tumong sa ΔFosB usa ka gene nga nag-encode sa usa ka endogenous opioid peptide. ΔFuB induction mahimo usab nga makamugna og mga pagbag-o sa kinaiya pinaagi sa pagkontrol sa receptor signaling sa NAc, apan kini nga posibilidad wala pa gi-imbestigar. Busa, ang mga pagtuon karon migamit sa model nga bitransgenic mouse aron mahibal-an kung ang overexpression sa ΔFosB sa dynorphin / D₁R nga naglangkob sa striatal neurons mag-usab sa MOR nga gitun-an sa G-protein activity ug MOR- ug KOR-mediated adenylyl cyclase nga pagdili sa NAc. Ang epekto sa ΔFosB sa CB₁Gipamatud-an usab nga G-protein nga kalihokan tungod sa Δ⁹-Ang administrasyon sa TB nagdasig sa ΔFosB sa NAc (Perrotti, et al., 2008) ug ang endocannabinoid nga sistema nahibal-an nga makontrol ang mga circuits sa ganti sa utok (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), apan ang epekto sa ΔFosB sa sistema sa endocannabinoid wala pa gisusi.

2. Mga Materyal ug Pamaagi

2.1. Mga Reagen

[³⁵S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) ug [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) gipalit gikan sa PerkinElmer (Shelton, CT). Ang ATP, GTP, GDP, cAMP, bovine serum albumin, creatine phosphokinase, papaverine, imidazole ug WIN-55212-2, gipalit gikan sa Sigma Aldrich (St. Louis, MO). Ang GTPγS gipalit gikan sa Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). Ang DAMGO gihatag sa Drug Supply Program sa National Institute on Drug Abuse (Rockville, MD). Ang fluid sa Econo-1 scintillation nakuha gikan sa Fisher Scientific (Norcross, GA). Ang fluids nga scolabillary sa Ecolite nakuha gikan sa ICN (Costa Mesa, CA). Ang tanan nga ubang kemikal nakuha gikan sa Sigma Aldrich o Fisher Scientific.

2.2. Mga ilaga

Ang mga bitransgenic nga mga tiyan gikan sa NSE-tTA (linya A) × TetOp-ΔFosB (linya 11) gimugna sama sa gihulagway sa Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Ang mga bitransgenic nga mga ilaga gipanamkon ug gipadako sa doxycycline (100 μg sa inum nga tubig) aron sumpuon ang transgene expression. Sa 8 nga mga semana sa edad, ang doxycycline wala ilabay gikan sa tubig alang sa katunga sa mga ilaga aron pagtugot sa ekspresyon sa transgene, samtang ang nahibiling mga ilaga gipabilin sa doxycycline aron sumpuon ang transgene. Ang mga utok gikolekta 8 mga semana sa ulahi, ang panahon diin ang transcriptional nga mga epekto sa ΔFosB mao ang pinakadako (McClung ug Nestler, 2003). Gigamit ang ikaduhang transgenic mouse line diin ang Δc-Jun, usa ka dominanteng negatibo nga antagonist sa c-Jun, gipahayag sa D₁R / dynorphin ug D₂R / enkephalin cells sa striatum, hippocampus ug parietal cortex (Peakman, et al., 2003). Ang C-Jun ug ang may kalabutan nga mga protina sa pamilya sa Jun mao ang dimeroize sa mga protina sa pamilya nga pamilya ug nagbugkos sa AP-1 nga dapit sa target nga mga genes sa pagkontrol sa transcription. Hinuon, ang pagputol sa N-terminus sa c-Jun (Δc-Jun) naghubad sa komplikado nga transcriptionally nga dili aktibo ug makababag sa DNA binding sa mga aktibong AP-1 complexes. Ang mga bitransgenic nga mga tiyan nga gikan sa NSE-tTA (linya A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (linya E) gimugna sama sa gihulagway sa Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Ang mga bitransgenic nga mga ilaga gipanamkon ug gipadako sa doxycycline (100 μg sa inum nga tubig) aron sumpuon ang transgene expression. Ang mga pups nalutas sa 3 nga mga semana, genotyped, ug mibulag ngadto sa mga grupo, uban ang katunga nga gihuptan sa tubig nga adunay tubig nga doxycycline ug katunga sa kanunay nga inum nga tubig aron ipasulod ang FLAG-Δc-Jun nga ekspresyon. Ang mga utok gikolekta 6 ka semana sa ulahi, ang panahon nga ang sukod sa FLAG-Δc-Jun gisukod (Peakman, et al., 2003). Ang tanan nga mga pamaagi sa hayop gipahigayon sumala sa National Institutes of Health Guide alang sa Pag-atiman ug Paggamit sa mga Laboratory Animals.

2.3. Pagpangandam sa Membrane

Ang mga utok gitipigan sa -80 ° C hangtud sa adlaw sa pagsulay. Sa wala pa ang pagsulay, ang matag utok nalaya, ug ang NAc gibahin sa yelo. Ang matag sample nga homogenized sa 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membrane buffer) nga may 20 nga mga pagsulat gikan sa usa ka glass homogenizer sa 4 ° C. Ang homogenate nga centrifuged sa 48,000 × g sa 4 ° C alang sa 10 min, resuspended sa membrane buffer, centrifuged na usab sa 48,000 × g sa 4 ° C alang sa 10 min ug resuspended sa 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (assay buffer). Ang lebel sa protina natino pinaagi sa pamaagi sa Bradford (Bradford, 1976) gamit ang bovine serum albumin (BSA) isip standard.

2.4. Agonist-Modasig [³⁵S] GTPγS Binding

Ang mga membranes pre-incubated alang sa 10 minutos sa 30 ° C sa adenosine deaminase (3 mU / ml) sa assay buffer. Ang membranes (5-10 μg nga protina) dayon gipilit alang sa 2 hr sa 30 ° C sa assay buffer nga adunay 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, 30 μM GDP ug adenosine deaminase (3 mU / ml) nga adunay ug dili angay nga konsentrasyon sa DAMGO o WIN55,212-2. Ang dili tino nga pagbugkos gisukod uban sa 20 μM GTPγS. Ang paglumlom gitapos pinaagi sa pagsala pinaagi sa mga filter sa GF / B glass fiber, nga gisundan sa 3 nga mga lababo nga adunay 3 ml nga bugnaw nga 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Ang nataran nga radioactivity natino pinaagi sa likidong scintillation spectrophotometry human sa overnight extraction sa mga filter sa Econo-1 fluidillary fluid.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Ang membranes (5-25 μg nga protina) gi-preincubated sa adenosine deaminase sama sa gihulagway sa ibabaw, unya gilumlom alang sa 15 min sa 30 ° C sa atubangan o pagkawala sa 1μM forskolin, nga adunay o DAMGO, U50,488H o WIN55,212-2, sa assay buffer containing 50 μM ATP, [α-³²P1 ATP (1.5 μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 μM cyclic AMP, 50 μM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM phosphocreatine, 20 units / ml creatine phosphokinase ug adenosine deaminase / ml) sa katapusang volume sa 3 μl. Ubos niini nga kondisyon, ang total [α-³²P] cAMP nakuha nakuha sa kasagaran ubos pa kay sa 1% sa kinatibuk-ang gidaghanon sa dugang [α-³²P] ATP sa matag sample. Ang reaksyon natapos pinaagi sa pagpabukal alang sa 3 min ug [³²P] Cyclic AMP nahimulag sa dual nga kolum (Dowex ug alumina) nga pamaagi sa Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) idugang sa matag tubo una sa kolum chromatography ingon nga internal nga sumbanan. Ang radioactivity natino pinaagi sa liquid scintillation spectrophotometry (45% efficiency alang sa ³H) human sa 4.5 ml sa eluate ang natunaw sa 14.5 ml sa fluid nga scintillation sa Ecolite.

2.6. Pagtuki sa datos

Gawas kon ipaila, ang mga datos gitaho ingon nga mga hinungdan nga mga kantidad nga ± SE sa 4-8 nga managlahing mga eksperimento, ang matag usa niini gihimo sa triplicate. Gipukaw ang pukot [³⁵S] GTPγS binding gikalkulo isip agonist-stimulated binding minus basal binding. Ang lunsay nga aktibo nga cyclase nga forskolin nga gitawag ug forskolin gihulagway nga aktibo nga kalihokan nga gipa-usbaw sa forskolin - basal activity (pmol / mg / min). Ang gidaghanon sa pagdasok sa forskolin-stimulated adenylyl cyclase activity gihulagway nga (net forskolin-stimulated nga kalihukan sa pagkawala sa agonist-net forskolin-stimulated nga kalihokan sa atubangan sa agonist / net forskolin-stimulated nga kalihokan sa pagkawala sa agonist) × 100. Ang tanang pagsulbad sa curve ug statistical analysis gihimo pinaagi sa Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Ang mga curves nga epekto sa konsentrasyon gi-analisar sa iterative non-linear regression aron makuha ang EC₅₀ ug E_Max mga hiyas. Ang statistical significance sa data sa konsentrasyon nga epekto gitino pinaagi sa duha ka pag-usisa sa pag-usab sa variance (ANOVA), gamit ang agonist dose ug gene induction (on o off) ingon nga mga nag-unang hinungdan. Statistical significance of curve-fit values (E_Max o EC₅₀) gitino sa dili pares nga duha nga gisulud nga t-test sa Estudyante, gamit ang pagtul-id ni Welch o square root nga pagbag-o sa datos kung diin gikinahanglan aron matul-id ang dili managsama nga pagkalainlain (nakit-an sa F-test) sa EC₅₀ mga hiyas.

3. Resulta

3.1. Epekto sa ΔFosB nga ekspresyon sa opioid ug cannabinoid receptor-gipatuman nga G-protein activation

Aron matino kung ang MOR- o CB₁Ang R-mediated nga G-protein activation giusab sa inducible transgenic nga pagpahayag sa ΔFosB sa NAc, agonist-stimulated [³⁵S] GTPγS binding gisusi sa mga isolated membranes nga giandam gikan niining rehiyon sa bitransgenic nga mga ilaga nga nagpahayag sa (ΔFosB on) o wala nagpahayag (ΔFosB off) ang ΔFosB transgene. Ang MOR-selective enkephalin analog DAMGO gigamit sa pagpaaktibo sa MOR ug ang cannabinoid aminoalkylindole WIN55,212-2 gigamit sa pag-activate CB₁R. Kini nga mga liguan gipakita kaniadto nga puno nga mga agonista sa MOR ug CB₁R, matag usa (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Dili mahimo ang pag-usisa sa G-protein activity sa KOR tungod kay ang signal gamay kaayo sa utok sa ilagaChilders, et al., 1998). Ang mga resulta nagpakita sa pagdasig sa pagdepende sa konsentrasyon sa kalihokan sa G-protein pinaagi sa DAMGO ug WIN55,122-2 sa NAc gikan sa ΔFosB sa gawas ug ΔFosB sa mga ilaga (Figure 1). Alang sa DAMGO-stimulated activity (Figure 1A), two-way ANOVA sa konsentrasyon-epekto nga datos gipadayag mahinungdanong panguna nga mga epekto sa kahimtang sa ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) ug konsentrasyon sa DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) nga wala hinungdanon nga pakig-uban (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Ang pagtuki sa nonlinear regression sa mga kurbada nga epekto sa konsentrasyon nagpadayag usa ka labi ka dako nga DAMGO E_Max bili sa ΔFosB sa mga ilaga (E_Max = 73 ± 5.2% stimulation) may kalabutan sa ΔFosB sa mga ilaga (E_Max = 56 ± 4.1% nga pagpadasig; p <0.05 lainlain gikan sa ΔFosB sa mga ilaga pinaagi sa t-test sa Estudyante). DAMGO EC₅₀ ang mga bili wala magkalahi tali sa ΔFosB on ug ΔFosB sa mga ilaga (302 ± 72 nM versus 212 ± 56 nM, matag usa, p = 0.346).

Ang epekto sa eksposyong ΔFosB sa agonist-stimulated [³⁵S] GTPγS nga nagbugkos sa NAc. Ang mga membran gikan sa ΔFosB-expressing (ΔFosB on) o kontrol (ΔFosB off) gisulayan sumala sa gihulagway sa mga Pama nga gigamit nga nagkalainlain nga mga konsentrasyon ...

Sukwahi sa mga resulta nga nakuha sa MOR agonist DAMGO, walay mga kalahian nga depende sa status nga ΔFosB sa pag-aktibo sa G-protein ang nakita uban sa cannabinoid agonist nga WIN55,212-2 (Figure 1B). Ang duhaduha nga ANOVA sa datos nga konsentrasyon nga epekto sa WIN55,212-2 nagpadayag usa ka hinungdanon nga punoan nga epekto sa konsentrasyon sa WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), apan dili sa kahimtang nga ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) ug wala’y pakig-uban (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Sa susama, wala’y epekto sa kahimtang sa ΔFosB sa WIN55,212-2 E_Max (103 ± 6% versus 108 ± 8% stimulation sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, sumala sa p = 0.813 sa t-test sa Estudyante) o EC₅₀ mga bili (103 ± 20 nM kontra 170 ± 23 nM sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, sumala pa, p = 0.123).

Base sa porma sa mga curves ug ang kamatuoran nga ang atong mga pagtuon kaniadto nagpakita sa biphasic WIN55,212-2 nga konsentrasyon-epekto curves sa utok (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), ang WIN55,212-2 curves gi-analisa usab gamit ang usa ka modelo sa duha ka-site. Ang pag-analisar sa na-average nga datos nagpakita sa usa ka gamay nga pag-uswag sa pagkamaayo nga angay gamit ang duha-nga-site nga modelo (R² = 0.933 ug 0.914, ang kantidad sa mga kwadrado = 3644 ug 5463 sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, matag usa) kon itandi sa single-site nga modelo (R² = 0.891 ug 0.879, ang gidaghanon sa mga kuwadrado = 6561 ug 6628 sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, matag usa). Bisan pa, walay mahinungdanon nga kalainan ang nakit-an tali sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga sa bisan asa nga E_Max o EC₅₀ mga bili sa taas o ubos nga potency sites (Supplementary Table 1), bisan pa nga adunay usa ka hilig ngadto sa ubos nga EC₅₀ bili sa taas nga potency site sa mga ilaga nga adunay ΔFosB on (EC₅₀hatag-as nga = 28.0 ± 10.6 nM) kumpara sa mga adunay ΔFosB off (EC₅₀hatag-as nga = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Dugang pa, walay epekto sa status sa FosB sa basal [³⁵S] GTPγS nagbugkos sa NAc membranes (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, sumala pa, p = 0.188). Gipakita niini nga mga datos nga ang inducible transgenic nga ekspresyon sa ΔFosB sa NAc of mice nadugangan ang MOR-nga gitun-an nga G-protein activation nga walay dakong epekto sa CB₁R-mediated o basal G-protein activity.

3.2. Epekto sa ΔFosB sa opioid ug cannabinoid receptor-gipahiluna nga pagdugtong sa adenylil cyclase

Aron mahibal-an ang epekto sa inducible transgenic expression sa ΔFosB sa modulasyon sa downstream effector activity sa MOR ug CB₁R, pagdili sa 1 μM forskolin-stimulated adenylyl cyclase nga kalihokan gisusi sa NAc membranes. Dugang sa MOR- ug CB₁Ang pagdumala nga R-mediated sa adenylil cyclase activity, ang mga epekto sa KOR nga kalihokan gisusi usab gamit ang KOR-selective full agonist U50,488 (Zhu, et al., 1997), tungod kay ang mga resulta kaniadto nagpakita nga ang dynorphin mRNA usa ka tumong sa ΔFosB sa bitransgenic nga modelo (Zachariou, et al., 2006). Ang mga resulta nagpakita nga ang DAMGO, U50,488 ug WIN55,212-2 matag usa nagpatunghag konsentrasyon nga nagdepende sa pagdugtong sa adenylil cyclase nga kalihukan sa ΔFosB sa ug ΔFosB sa mga ilaga (Figure 2). Duha ka paagi ANOVA sa DAMGO data nga epekto sa konsentrasyon (Figure 2A) gipadayag ang mahinungdanong mga nag-unang epekto sa kahimtang sa ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) ug konsentrasyon sa DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), apan wala’y hinungdan nga pakig-uban (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Ang pagtuki sa nonlinear regression sa mga curve nga epekto sa konsentrasyon sa DAMGO nagpadayag sa usa ka kamahinungdanon nga labing ubos nga DAMGO EC₅₀ kantidad sa ΔFosB sa mga ilaga (101 ± 11 nM) kumpara sa ΔFosB off mouse (510 ± 182 nM, p <0.05 pinaagi sa t-test sa estudyante). Bisan pa, wala'y hinungdan nga kalainan sa DAMGO E_Max mga bili (20.9 ± 1.26% kontra 19.8 ± 1.27% nga pagdugtong sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, sumala pa, p = 0.534).

Epekto sa ΔFosB nga ekspresyon sa pagdugtong sa kalihokan sa adenylil cyclase sa NAc. Ang mga membran gikan sa ΔFosB-nagpahayag (ΔFosB on) o kontrol (ΔFosB off) gisulayan sumala sa gihulagway sa Mga Pamaagi sa atubangan sa 1 μM ...

Ang KOR-mediated adenylyl cyclase nga pagdugtong usab nagkalahi ingon nga usa ka function sa inducible transgenic nga pagpahayag sa ΔFosB (Figure 2B). Ang duhaduha nga ANOVA sa U50,488 nga datos sa konsentrasyon-epekto nagpakita sa hinungdanon nga punoan nga mga epekto sa kahimtang sa ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) ug konsentrasyon nga U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , nga wala’y hinungdan nga pakig-uban (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Ang pagtuki sa nonlinear regression sa mga kurbada sa epekto sa konsentrasyon nagpadayag usa ka labi ka daghan nga U50,488 E_Max kantidad sa ΔFosB sa mga ilaga (18.3 ± 1.14% pagpugong) kumpara sa ΔFosB off mouse (12.5 ± 2.03% pagpugong; p <0.05 lahi sa ΔFosB sa t-test sa Estudyante), nga wala’y hinungdan nga kalainan sa U50,488 EC₅₀ mga bili (310 ± 172 nM kontra 225 ± 48 nM sa ΔFosB sa ug sa mga ilaga, sumala pa, p = 0.324).

Sukwahi sa mga epekto nga nakita sa MOR ug KOR, wala'y mahinungdanong epekto sa inducible transgenic ΔFosB nga ekspresyon sa pagdugtong sa adenylil cyclase sa cannabinoid agonist nga WIN55212-2 (Figure 2C). Ang duhaduha nga ANOVA sa WIN55,212-2 data sa konsentrasyon-epekto nagpakita usa ka hinungdan nga epekto sa konsentrasyon sa droga (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), apan dili sa kahimtang nga ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) ni adunay usa ka hinungdanon nga pakig-uban (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Dugang pa, wala’y epekto sa kahimtang sa ΔFosB sa basal o forskolin-stimulated adenylyl cyclase nga kalihokan kung wala’y bisan kinsa nga agonist. Ang kalihokan sa Basal adenylyl cyclase mao ang 491 ± 35 pmol / mg / min sa ΔFosB sa mga ilaga kumpara sa 546 ± 44 sa ΔFosB nga mga ilaga (p = 0.346 pinaagi sa t-test sa Estudyante). Ingon usab, ang kalihokan sa adenylyl cyclase nga adunay 1 µM forskolin mao ang 2244 ± 163 pmol / mg / min sa ΔFosB sa mga ilaga kumpara sa 2372 ± 138 pmol / mg / min sa ΔFosB nga mga ilaga (p = 0.555).

3.3. Ang epekto sa ΔcJun sa opioid ug cannabinoid receptor-gipahiluna nga pagdugtong sa adenylil cyclase

Tungod kay ang inducible transgenic nga ekspresyon sa ΔFosB giusbaw nga signal transduction gikan sa MOR ug KOR ngadto sa adenylyl cyclase sa NAc, interesado ang pagtino kung ang usa ka dominanteng negatibo nga inhibitor sa ØFosB-gipaagi nga transcription ang modulate sa opioid receptor signaling sa usa ka kaatbang nga paagi. Aron masulbad kining pangutanaha, pagdili sa kalihokan nga gipaagi sa forskolin nga adenylyl cyclase sa DAMGO ug U50,488 gisusi sa mga membranes nga giandam gikan sa NAc sa bitransgenic nga mga ilaga nga nagpahayag sa ΔcJun. Ang mga resulta nagpakita nga walay mahinungdanong epekto sa ΔcJun nga ekspresyon sa pagdugtong sa kalihokan sa adenylil cyclase sa MOR o KOR (Figure 3). Ang two-way ANOVA sa DAMGO konsentrasyon sa epekto sa konsentrasyon nagpakita usa ka hinungdanon nga punoan nga epekto sa konsentrasyon sa DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), apan dili sa kahimtang nga ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) ug wala'y hinungdan nga pakig-uban (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Sa susama, wala'y hinungdan nga pagkalainlain sa E_Max o EC₅₀ mga bili tali sa mga ilaga nga adunay ΔcJun on (E_Max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) o ΔcJun off (E_Max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Ang mga kaamgid nga sangputanan nakita sa U50,488, ingon ang two-way ANOVA sa mga kurbada sa epekto sa konsentrasyon nagpakita sa usa ka hinungdanon nga epekto sa konsentrasyon (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), apan dili sa statuscJun kahimtang (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) ug wala’y hinungdan nga pakig-uban (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Ingon usab, wala’y hinungdanon nga pagkalainlain sa E_Max o EC₅₀ mga bili tali sa mga ilaga nga adunay ΔcJun on (E_Max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) o sa (E_Max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Epekto sa ΔcJun ekspresyon sa pagdugtong sa adenylil cyclase activity sa NAc. Ang mga membran gikan sa ΔcJun-expressing (ΔcJun on) o kontrol (ΔcJun off) nga mga ilaga gipamubog sa atubangan sa DAMGO (A), U50,488H (B) o WIN55,212-2 ...

Ang ekspresyon nga ΔcJun wala usab makaapekto sa pagpugong sa adenylyl cyclase sa NAc sa cannabinoid agonist. Ang two-way ANOVA sa WIN55,212-2 konsentrasyon sa epekto sa konsentrasyon nagpakita usa ka hinungdanon nga punoan nga epekto sa konsentrasyon nga WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), apan dili sa genotype (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) ug wala’y hinungdan nga pakig-uban (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Ingon usab, wala’y hinungdanon nga pagkalainlain sa WIN55,212-2 E_Max mga bili (13.0 ± 2.3% ug 13.6 ± 0.9% pagsupak sa ΔcJun sa kontra sa mga ilaga, sumala sa, p = 0.821) ug o EC₅₀ mga bili (208 ± 120 nM ug 417 ± 130 nM sa ΔcJun sa pagsupak sa mga ilaga, matag usa, p = 0.270). Busa, bisan tuod adunay gamay nga uso sa pagkunhod sa potensyal sa WIN55,212-2 sa mga ilaga nga nagpahayag sa ΔcJun, ang transgene wala kaayo makausab sa cannabinoid nga pagdugta sa adenylyl cyclase. Dugang pa, wala'y epekto sa status sa ΔcJun sa basal o forskolin-stimulated adenylyl cyclase activity. Ang basal adenyll cyclase activity mao ang 1095 ± 71 pmol / mg / min ug ang 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) sa mga ilaga nga adunay ΔcJun sa o off, matag usa. Ang aktibidad nga Adenyll cyclase nga giduso sa 1 μM forskolin mao ang 4185 ± 293 pmol / mg / min kumpara sa 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) sa mga ilaga nga may ΔcJun sa o off, matag usa.

3.4. Panaghisgutan

Ang mga resulta sa kini nga pagtuon nagpadayag sa gipaayo nga MOR nga gitun-an nga G-protein activation ug pagdupta sa adenylyl cyclase sa NAc sa mga ilaga uban sa dili mapakyas nga ekspresyon sa transgenic nga ΔFosB sa dynorphin / D₁R nga adunay mga neuron. Gipaluyohan sa KOR ang pagdugtong sa adenylil cyclase nga kalihokan gipalambo usab sa NAc sa ΔFosB nga nagpahayag sa mga ilaga, nga nagsugyot nga ang ΔFosB nag-regulate sa endogenous opioid system sa NAc. Ang DAMGO E_Max Ang bili mas dako alang sa MOR-nagdasig [³⁵S] GTPγS binding, ug sa iyang EC₅₀ Ang bili mas ubos alang sa adenylil cyclase nga pagdili, sa ΔFosB nga labaw nga nagpahayag nga mga ilaga itandi sa pagkontrol sa mga ilaga. Kini nga mga kaplag nagsugyot sa posibilidad nga reseptor reserve alang sa effector modulation apan dili ang G-protein activation ubos sa mga kondisyon nga gisusi. Ang pagkadiskobre nga ang gidugayon nga pagdugta sa adenylil cyclase sa KOR agonist naapektuhan sa ΔFosB nga ekspresyon nagsugyot sa ubos nga reseptor nga reserba alang sa pagtubag sa KOR nga gitumong, subay sa ubos nga lebel sa KOR binding sites sa utok sa mouseUnterwald, et al., 1991). Sa kalahian, CB₁Ang kalihukan sa G-protein nga G-mediated ug pagdugta sa adenylil cyclase wala maapektohi sa ΔFosB nga ekspresyon, nga nagsugyot nga ang mga sistema sa opioid ug cannabinoid managlahi sa ilang tubag sa ΔFosB niining mga neuron NAc.

Ang epekto sa ΔFosB sa signaling nga gipataliwad sa opioid receptor nahisubay sa una natong report nga ang ekspresyon sa FosB sa striatum giusab ang mahait ug kanunay nga epekto sa morphine (Zachariou, et al., 2006). Ang usa nga nakakaplag sa maong pagtuon mao nga ang mga ilaga nga adunay ekspresyon sa transgenic nga ΔFosB sa dynorphin / D₁Ang mga striatal neurons mas sensitibo sa morphine sa pagkondisyon kaysa sa kontrol. Dugang pa, kini nga epekto gisundan sa virally mediated nga ekspresyon sa ΔFosB pinaagi sa site-specific injection ngadto sa NAc. Kini nga mga obserbasyon nahisubay sa kasamtangan nga mga resulta nga nagpakita sa gipaayo nga signal sa MOR sa NAc.

Giila namo kaniadto ang encoding sa gene dynorphin isip usa ka target sa ΔFosB, ug nagsugyot nga ang pagkunhod sa dynorphin nahisubay sa dugang nga ganti nga mga kabtangan sa morphine sa ΔFosB bitransgenic nga mga ilaga (Zachariou, et al., 2006). Ang kasamtangan nga mga resulta nagpakita nga ang KOR-gipataliwad nga pagdugta sa adenylyl cyclase sa NAc gipalambo sa ΔFosB nga nagpahayag sa mga ilaga, nga mahimo nga nagpakita sa usa ka igo nga pagsaka sa KOR sensitivity human sa pagkunhod sa dynorphin. Gipakita sa mga nangaging mga pagtuon nga ang KOR gipalig-on sa pipila ka mga utok nga rehiyon sa prodynorphin knockout nga mga ilaga, lakip ang NAc (Clarke, et al., 2003).

Sukwahi sa ΔFosB, ang inducible transgenic nga ekspresyon sa ΔcJun, ang dominanteng negatibo nga naputol nga mutant sa ΔFosB binding partner nga cJun, wala magbag-o sa adenylil cyclase nga pagdugta sa MOR o KOR agonists. Kini nga mga resulta nagpakita nga ang basal nga lebel sa ΔFosB nga ekspresyon, nga medyo ubos, walay hinungdan nga papel sa pagmintinar sa opioid receptor signaling niini nga lebel sa signal transduction sa NAc. Ang kamatuoran nga ang gigarantiyahan nga ganti nga epekto sa morphine mikunhod sa ekspresyon nga ΔcJun sa atong nangagi nga pagtuon (Zachariou, et al., 2006) nagsugyot nga ang morphine induction sa ΔFosB sa panahon sa conditioning procedure importante sa pagkontrol sa mga tubag sa panggawi sa tambal o nga ang transcriptional nga epekto sa ΔFosB gawas sa mga naka-apekto sa proximal signaling sa opioid receptors mahimong makaimpluwensya sa opioid nga ganti. Sa bisan unsa nga panghitabo, ang mga resulta sa kasamtangan nga pagtuon tin-aw nga nagpakita nga, sa diha nga ang ekspresyon sa FFB gibayaw labaw sa basal nga lebel sa striatal dynorphin / D₁R-expressing neurons, adunay usa ka lig-on nga pagsaka sa pagkabit sa MOR ug KOR sa pagdugtong sa adenyllyl cyclase sa NAc.

Ang mga mekanismo diin ang MOR- ug KOR nga gipatuman nga pagpirma gipabaskog pinaagi sa overexpression ΔFosB dili klaro, apan gipakita na nato kaniadto nga ang mga lebel sa MOR, gibana-bana sa [³H] naloxone binding, dili lahi sa NAc sa ΔFosB sa kontra sa mga ilaga (Zachariou, et al., 2006). Ang sama nga pagtuon nakit-an nga ang Gα_iAng mga lebel sa protina sa 1 ug 2 wala maapektohan niining rehiyon pinaagi sa ekspresyong ΔFosB. Apan, ang nahaunang gene expression analysis nagpakita nga ang Gα_o Ang mRNA napalig-on sa NAc sa ΔFosB sa mga ilaga (McClung ug Nestler, 2003). Makapainteres kini sa umaabot nga mga pagtuon aron masusi ang komprehensibo nga epekto sa transgenic ΔFosB nga ekspresyon sa G-protein subunit expression sa lebel sa protina ingon man sa pagpahayag sa daghan nga protina sa Modulatory G-protein.

Makapainteres nga ang ekspresyon nga ΔFosB wala makapauswag sa CB₁R-mediated signaling sa NAc. Posible nga ang pag-usab sa CB₁Ang pag-signal nga mahitabo sa usa ka diskriminadong populasyon sa mga neuron nga dili makita sa tibuok nga pag-andam sa NAc. Pananglitan, pagdumala sa Δ⁹- Ang THC hinungdan nga nakaaghat ΔFosB sa kinauyokan, apan dili kabhang, sa NAc (Perrotti, et al., 2008). AkoHinuon, kini gipakita nga ang hagit sa Δ⁹-Ang mosunod nga subli nga pagdumala sa Δ⁹-Ang pagpataas sa dopamine release sa core sa NAc, apan mikunhod ang pagpagawas sa kabhang (Cadoni, et al., 2008). Importante usab nga matikdan nga ang 11A nga linya sa bitransgenic nga mga ilaga nagpahayag sa ΔFosB lamang sa dynorphin / D₁R positibong medium spiny neurons sa striatum, apan CB₁R gipahayag sa dynorphin / D₁R ug enkephalin / D₂R positibo nga mga neuron (Hohmann ug Herkenham, 2000), ingon man sa mga terminal sa cortical afferents (Robbe, et al., 2001). Ang pagpahayag sa dominanteng negatibo nga regulator sa transpektasyon nga Δ FosB, ΔcJun, wala usab mahinungdanon nga epekto sa cannabinoid receptor signaling, bisan tuod ang ΔcJun mao ang inducibly express sa D₁ ug D₂-nga naglakip sa mga populasyon sa mga medium nga mga neuron sa tunga niini nga mga ilaga (Peakman, et al., 2003). Hinuon, posible nga ang basehan nga ΔFosB nga ekspresyon igo nga ubos nga ang ΔcJun dili makaapekto sa receptor signaling, nga gisugyot sa resulta sa MOR ug KOR. Posible usab nga ang CB₁Ang pag-senyas mapadayunon nga gipadako pinaagi sa basal nga eksposyong FosB, sa ingon nga ang dugang nga pagdugang sa eksposyong FosB o pag-ali sa mga aksyon niini uban sa ΔcJun adunay gamay nga mga epekto nga wala makaabot sa lebel sa statistical significance. Ang dili direkta nga suporta alang niini nga interpretasyon makita pinaagi sa pagtandi sa WIN55,212-2 EC₅₀ mga bili tali sa mga ilaga nga nagpahayag sa ΔcJun versus ΔFosB. Ang ratio sa WIN55,212-2 EC₅₀ bili sa adenylil cyclase nga pagdugtong sa mga ilaga nga gipaaghat sa pagpahayag sa ΔcJun sa iyang EC₅₀ ang bili sa G-protein nga pagpaaktibo sa mga ilaga nga may gipahinungdan nga ekspresyon sa ΔFosB mao ang 4.0, samtang ang samang ratio sa mga ilaga nga walay induksiyon sa bisan asa transgene mao ang 1.2.

Sa laing bahin, ang mga cannabinoids mahimong magpahinabo sa eksposyong FosB nga walay direktang epekto sa CB₁R signaling. Niini nga sitwasyon, ang mga cannabinoids mahimo nga modulate sa pagsanong sa psychoactive nga mga epekto sa uban nga mga droga pinaagi sa ΔFosB-gipatuman nga transcriptional regulation. Akon kamatuoran, pagdumala sa Δ⁹Ang TB nagapamunga sa pagpaapekto sa mga opioids ug amphetamine (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), nga nahiuyon niini nga pangagpas. Dugang pa, ang balik-balik nga pagdumala sa cannabinoid agonist CP55,940 gitaho nga nagdugang sa pag-activate sa MOR nga giniyahan sa MOR sa NAc, susama sa mga ilaga nga dili makapakgang sa pagpahayag sa ΔFosB sa kasamtangan nga pagtuon (Vigano, et al., 2005). Ang epekto sa ΔFosB nga ekspresyon sa Δ⁹Ang mga kinaiya nga gipaluyohan sa TI-wala mahibal-an, apan ang kasamtangan nga mga resulta dili makapugong sa pagpakig-uban. Ang mga resulta niini ug sa atong nangagi nga pagtuon (Zachariou, et al., 2006) nagpakita sa mga pag-usab nga gihulagway nga FosB sa MOR ug KOR / dynorphin sa striatum. Ang magantihon nga mga epekto sa Δ⁹-Ang, ingon nga gisukat sa gipili nga lugar, giwagtang sa MOR null mice, samtang ang pagtangtang sa KOR gihuptan Δ⁹-Ang kahadlok sa dapit ug gipadayag Δ⁹-Pagpili sa lugarGhozland, et al., 2002). Sa samang paagi, ang pag-ayad sa kahimtang nga adunay kondisyon sa Δ⁹-Ang absent sa pro-dynorphin knockout kumpara sa ihalas nga mga ilaga (Zimmer, et al., 2001). Gipakita niini nga mga datos nga Δ⁹-Ang TANANG mahimo nga labaw nga magantihon pagkahuman sa pagtudlo sa ΔFosB ug resulta sa pagsinyas sa MOR nga may mga pagkunhod sa ekspresyon sa dynorphin.

Sa summary, ang mga resulta niini nga pagtuon nagpakita nga ang pagpahayag sa ΔFosB sa D₁R / dynorphin positibo nga striatal neurons nga gipalambo ang MOR- ug KOR nga gipatuman nga pagpirma sa lebel sa G-protein nga gipatuman nga pagdugtong sa adenylyl cyclase activity sa NAc. Kini nga pasiuna nahiuyon sa pagtuon nga nagpakita sa usa ka papel alang sa endogenous nga sistema sa opioid sa ganti (Trigo, et al., 2010), ug paghatag og usa ka potensyal nga mekanismo alang sa mga epekto sa ØFB nga gigamit sa ganti. Sa kalahian, CB₁Ang R-mediated signaling sa NAc wala kaayo maapektuhan sa striatal ΔFosB nga ekspresyon ubos sa mga kondisyon nga gisusi, bisan pa ang dugang nga mga pagtuon ang gikinahanglan aron mahibal-an ang epekto sa ΔFosB induction sa endocannabinoid system.

Mga Talalupang Panghunahuna

Ang MOR signaling gipalambo sa nucleus accumbens sa mga ilaga nga nagpahayag ΔFosB
Ang KOR pagdili sa adenylyl cyclase gipalambo usab sa mga ilaga nga nagpahayag sa ΔFosB
Ang pagpahayag sa ΔFosB wala mag-usab sa CB₁R nga nagpaila sa nucleus accumbens

Supplementary nga Materyal

01

I-klik dinhi aron makita.^{(45K, pdf)}

Pasalamat

Ang mga tagsulat nagpasalamat kang Hengjun He, Jordan Cox ug Aaron Tomarchio alang sa teknikal nga tabang sa [³⁵S] GTPγS binding assay. Kini nga pagtuon gisuportahan sa USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) ug P01 DA08227 (EJN).

Mga footnote

Pagdawat sa Publisher: Kini usa ka file nga PDF sa usa ka wala'y nabasa nga manuskrito nga gidawat alang sa pagmantala. Ingon sa usa ka pag-alagad sa among mga kustomer nga kami naghatag niining sayo nga bersyon sa manuskrito. Ang manuskrito magaagi sa pagkopya, pagporma, ug pagsusi sa resulta nga pruweba sa wala pa kini ma-publish sa iyang katapusan nga mapili nga porma. Palihug timan-i nga sa panahon sa mga kasayuran sa proseso sa produksyon mahimo nga madiskobrehan nga maka-apekto sa sulod, ug ang tanan nga legal nga mga pagsupak nga magamit sa journal pertain.

mga pakisayran

Bozarth MA, Maalamon nga RA. Ang anatomically distinct opiate receptor nga mga laray nag-agad sa ganti ug pisikal nga pagsalig. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Usa ka paspas ug sensitibo nga pamaagi alang sa pag-quantify sa microgram nga gidaghanon sa protina nga naggamit sa prinsipyo sa pag-angkat sa protina-dye. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Ang malungtarong delta⁹Ang pagtambal-tetrahydrocannabinol nagresulta sa pagkawala sa panahon sa pagkawala sa cannabinoid receptor nga gi-activate nga G-proteins sa utok. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid receptor agonist nga pagka-epektibo alang sa pagpukaw [³⁵S] GTPγS nga nagbugkos sa rat nga cerebellar membranes nagsumpay sa agonist-nga gidaghanon nga pagkubos sa GDP affinity. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Pagpakabana sa Behavioral human sa balikbalik nga pagkaladlad sa Delta 9-tetrahydrocannabinol ug cross-sensitization sa morphine. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Kahimsog sa paghimo sa delta 9-tetrahydrocannabinol ug cross-sensitization sa morphine: ang mga pagbag-o sa kaugalian sa kabhang sa accumbal ug duso sa dopamine. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Mga transgenic nga mga hayop nga dunay inducible, target nga gene expression sa utok. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioid receptor nga gipauban nga ikaduhang mga mensahero. Kinabuhi Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid ug cannabinoid receptor nga pagdugtong sa adenylyl cyclase sa utok. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Ang kappa opioid receptor nga pagpukaw sa [³⁵S] GTPγS binding sa guinea pig brain: Walay ebidensya alang sa kappa₂-pagpili nga pagpaaktibo sa mga G-proteins. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kusina I. Pagpili sa rehiyong rehiyon sa micro-, delta- ug kappa-opioid receptors apan dili opioid receptor-sama sa 1 receptors sa utok sa enkephalin ug dynorphin knockout nga mga ilaga. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Ang Striatal cell-espesipiko nga overexpression sa DeltaFosB nagdugang sa insentibo alang sa cocaine. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Ang sistema sa pag-signal sa endocannabinoid ug gasa sa utok: pagpasiugda sa dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motivational nga mga epekto sa cannabinoids gihusay pinaagi sa mu-opioid ug kappa-opioid receptors. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Pag-ila ug pag-localize sa mga receptor sa cannabinoid sa utok sa ilaga: usa ka quantitative in vitro autoradiographic nga pagtuon. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Pag-localize sa cannabinoid CB (1) receptor mRNA sa neuronal subpopulations sa rat striatum: usa ka double-label sa situ hybridization study. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. International Union of Pharmacology. XXVII. Klasipikasyon sa mga receptor sa cannabinoid. Pagdumala sa Pharmacological. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blockade sa mga epekto sa aso nga marijuana sa CB1-pumili nga cannabinoid receptor antagonist SR141716. Arch. Gen. Psychiatry. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Gipangutana ko sa akong kaugalingon nga ang akong mga pangutana mao ang pag-uswag, Nestler EJ. Ang ekspresyon sa deltaFosB sa transcription factor sa utok nagkontrol sa sensitibo sa cocaine. Kinaiyahan. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry sa pagkaadik. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [Ang artikulo sa PMC libre] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Ang pagtambal sa Delta (9) -tetrahydrocannabinol nagdugang sa tubag sa locomotor sa amphetamine ug heroin. Mga implikasyon alang sa kahuyang sa pagkaadik sa droga. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Pag-apil sa sistema sa endocannabinoid sa pagkaadik sa droga. Trends ni Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Mu-Opioid receptor mRNA expression sa ilaga CNS: pagtandi sa mu-receptor binding. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Ang pagkawala sa analgesia nga giaghat sa morphine, ang ganti nga epekto ug mga sintomas sa pagbiya sa mga ilaga nga kulang ang μ-opioid receptor gene. Kinaiyahan. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Pagdumala sa gene expression ug cocaine reward sa CREB ug DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: usa ka molekular nga switch alang sa long-term adaptation sa utok. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. Ang D1 dopamine receptors modulate deltaFosB induction sa striatum sa ilaga human sa intermittent morphine administration. J. Pharmacol. Exp. Pananglitan. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Repasohon. Transcriptional mekanismo sa pagkaadik: papel sa DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [Ang artikulo sa PMC libre] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: usa ka molecular mediator sa long-term neural ug behavioral plasticity. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Ang mga pagtuon sa pharmacological sa regulasyon sa mga chronic-related antio-induction sa cocaine sa cocaine sa striatum ug nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Pananglitan. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, utok nga rehiyon nga piho nga ekspresyon sa usa ka dominanteng negatibo nga mutant sa c-Jun sa transgenic nga mga ilaga nagpakunhod sa pagkasensitibo sa cocaine. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Talagsaong sumbanan sa DeltaFosB induction sa utok pinaagi sa mga droga sa pag-abuso. Synapse. 2008;62: 358-369. [Ang artikulo sa PMC libre] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Ang lokalisasyon ug mga mekanismo sa aksyon sa mga cannabinoid receptor sa glutamatergic synapses sa mouse nga nucleus accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid receptor-nagdasig [³⁵S] GTPγS nagbugkos sa tikod thalamus ug kultura nga mga linya sa cell: Mga mekanismo sa transduction sa signal nga nagpaluyo sa agonistang pagka-epektibo. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Ang endogenous opioid system: usa ka komon nga substrate sa pagkaadik sa droga. Depende sa Drug Alcohol. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuroanatomical localization sa κ1 ug κ2 opioid receptors sa rat ug guinea pig brain. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Ang blockade sa nucleus accumbens opiate receptors naghatag sa intravenous reward sa heroin sa ilaga. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molecular mekanismo nga nalambigit sa asymmetric interaction tali sa cannabinoid ug opioid systems. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Usa ka importante nga papel alang sa DeltaFosB sa nucleus accumbens sa aksyon nga morphine. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Maalamon nga RA. Duha ka utok nga lugar alang sa cannabinoid nga ganti. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Ang pag-activate sa cloned human kappa opioid receptor pinaagi sa mga agonist nagdugang sa [35S] GTPγS nga nagbugkos sa mga membranes: determinasyon sa mga potency ug efficacies sa ligands. J. Pharmacol. Exp. Pananglitan. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Wala sa delta -9-tetrahydrocannabinol dysphoric nga epekto sa dynorphin-kulang nga mga ilaga. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Dugang nga mortalidad, hypoactivity, ug hypoalgesia sa cannabinoid CB1 receptor knockout nga mga ilaga. Mga Taga-Cor. Natl. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [Ang artikulo sa PMC libre] [PubMed]