Barata J Farmakolo. 2016 Jan-Feb; 48 (1): 53 – 58.
PMCID: PMC4778208
abstrakta
celo:
Nucleus accumbens (NAcc) havas rolon en toksomanio kaj ingesta konduto. Por taksi oreksinergian sistemon implikitan en tio, ni infuzis Orexin A-antagoniston kaj taksis la efikon sur manĝaĵa fluo kaj konsumado de alkoholo en ratoj Wistar.
Materialoj kaj metodoj:
Ratoj de inkognita Wistar (n = 54) estis dividitaj en kontrolajn kaj eksperimentajn grupojn (malalta dozo kaj alta dozo). Uzante stereotaksan metodon, gvida kanuleto estis starigita bilateralmente por atingi NAcc. Malalta dozo (3 ng) kaj alta dozo (6 ng) de antagonisto de Oreksino A (SB-334867) estis infuzitaj, kaj la manĝaĵa konsumado, akva konsumado kaj konsumado de alkoholo kaj du boteloj senpage elektebla testo por preferi alkoholon. eksperimenta grupo. La grupo de kontrolo ricevis salan infuzaĵon kaj ceteraj metodoj sekvis estis samaj. La mezuradoj estis efektivigitaj tuj post la infuzaĵo, je 1 h, 2 h, 4 h, kaj dum la tuta tago kaj reprezentitaj en la figuro kaj tabloj.
rezultoj:
Malkresko en la konsumado de akvo observita tuj post la infuzaĵo en 1st h (P <0.05) kaj 2nd h (P <0.01), kiu estis pli en alta doza grupo kompare kun malalta dozo kaj kontroloj. Alkoholkonsumado ankaŭ sekvis la saman modelon. En du botela libera elekto, ratoj ne montris specifan preferon al alkoholo.
konkludo:
Ekzistis doza dependa redukto de konsumado de manĝaĵoj kaj fluidoj en traktataj ratoj. Ĉi tio sugestis eblan rolon por oreksinergia sistemo en ingesta konduto. Tamen, Orexino A eble ne havas rolon en modulado de toksomanio fare de la rekompenca centro NAcc.
Enkonduko
accumbens (NAcc) estas konata pri la ingesta konduto kaj toksomanio al substancoj. [1,2] Ĝi ankaŭ estis implikita en rekompenco kaj instigo. [3] Du malsamaj regionoj estis priskribitaj en NAcc, kaj aperis multe da interkovro en la funkciado de ĉi tiuj du regionoj. [4] Mikroinjektado de toksomaniuloj en NAcc montris dozon-dependan kreskon de dopamina nivelo. Dopamina estas neŭkemia implikita en rekompenccirkvitoj. Intranuklea memadministrado de amfetamino montris pliigitan rekompencon. [5] Aliaj partoj en subkortusa regiono tro influas ingestan konduton, kiu eble estos proksime ligita al akciuloj. Manĝaĵa konsumado kaj konsumado de akvo estis montritaj influitaj de pluraj partoj de la baza cerbo, kiel flanka hipotalamo, [6] paraventricular-kerno, septum pellucidum, [7] kaj bazolateral amigdala. [8] Ekzistas vasta neŭra retado en regulado de ingesta konduto. Oni pruvis, ke NAcc estas bone konektita al la ĉefaj subkortikaj centroj, kiel ventral-tegmenta areo (VTA);9] bazolateral amigdala kaj aliaj centroj. [10] Gravaj neurotransmisiloj implikitaj en modulado de konsumado de alkoholo, rekompenco kaj manĝaĵo estis raportitaj de la neŭralaj cirkvitoj en ĉi tiu regiono.11]
Lastatempe, hipokretinoj, grupo de heterogenaj peptidoj, estis identigitaj el la hipotalamo, hipokretino 1 kaj 2 (Oreksino A kaj B), peptidoj kun 32 aa kaj 29 aa, respektive. [12] Origine, ĉi tiuj substancoj estis implikitaj en la regulado de dorma vekiga ciklo, kiel pruvas la pliigita Oreksino A trovita en hipotalamo dum la aktiva fazo de vekiĝo. [13] En nia laboratorio, ni trovis ke Oreksino A pliigis manĝaĵon kaj fluidan konsumon kiam injektitaj en NAcc. [14] La antikva administrita oreksina antikorpo inhibas dozon de manĝaĵa dependaĵo en ratoj 24 h rapidigitaj, kaj intraperitoneala administrado de oreksina antikorpoj malsukcesis subpremi manĝaĵon, reprezentas ke oreksina antikorpo agas en la centra nerva sistemo sed ne en la ekstercentra histo. [15] Plue, ili konfirmis, ke endogenaj oreksinoj havas fiziologian rolon sur la nutra konduto. Kvankam komence Oreksinoj estis postulataj por influi ingesteman konduton, la evidenteco de rolo de Oreksino A en nutra konduto kaj la konsumado de alkoholaĵoj kaj ankaŭ alkohola prefero estas malkvieta. En nia antaŭa studo, ni pruvis, ke Oreksino A pliigis manĝaĵon kaj fluidan konsumon en fastitaj ratoj. [14] Por klarigi sendube la rolon de Oreksino A en la ingesta agado, ni efektivigis ĉi tiun aron da eksperimentoj ĉe viraj Wistar-ratoj posttagmeze posttagmeze infuzante la antagoniston de Orexino A-SB-334867 en la NAcc. [16] Ni ankaŭ testis la preferon de alkoholo en traktataj ratoj por eligi la efikon de antagonisto de Oreksino A sur konsumado de alkoholoj. La rezultoj de la eksperimentoj pri manĝaĵo, akvo kaj alkoholaĵo kaj alkohola prefero estas diskutitaj ĉi tie.
Materialoj kaj metodoj
Kvindek kvar masklaj albinaj ratoj de Wistar (n = 54) pesado (250 ± 10 g), 3-4-jaraj estis elektitaj por studo. Ili estis dividitaj en tri grupojn viz. Akvogrupo, alkohola grupo kaj du boteloj senpaga elekta grupo (n = 18 ĉiu). Ili estis subdividitaj en tri subgrupojn, nome. Grupo 1 - Kontrolo (Sala infuzaĵo); Grupo 2 - Malalta dozo de SB-334867 (3 ng); Grupo 3 - Alta dozo de SB-334867 (6 ng, n = 6 ĉiu). Manĝaĵo kaj fluido estis provizitaj al ĉiuj grupoj ad libkrom se menciite por noktotempaj fastoj.
Ĉiuj bestoj estis loĝigitaj individue en polipropilenaj kaĝoj, kun taŭga ŝelo-litoj kaj konservitaj sur 12-h lumo / malhela ciklo en temperaturo kontrolita. Bestoj estis konservitaj laŭ la gvidlinioj de komitato por regado kaj kontrolado de eksperimentoj sur bestoj kaj gvidlinioj de la Registaro de Barato por uzo de laboratoriaj bestoj. Institucia Komitato pri Etika Besto aprobis ĉi tiun studan protokolon.
Drogoj kaj Aparatoj
Salo 0.9%, SB-334867 (El: Tocris-bioscienco) dissolviĝis en 2% ciklodextrano en senfrukta akvo. Kiam ili ne uzas, solvoj konserviĝis ĉe 4 ° C ĝis 3-semajnoj. Harvard Pico plus (Usono) infuza pumpilo estis uzata por liveri drogon. Frapeta akvo estis provizita en Plastaj trinkboteloj, kaj rataj manĝaĵaj buletoj (Hindustan Unilever Ltd.,) estis provizitaj. Oni akiris etilan alkoholon (Absoluta) (Hayman Ltd., Eastways Park, Witham, Essex, CM83YE, UK) kaj diluis por fari 10% alkoholon (Ĉi tiu koncentriĝo estis elektita surbaze de pilota studo pri la prefero de alkohola koncentriĝo) . Ketamino (NEON-Laboratorioj limigita, Thane, MS) kaj xilazino (hinda imunologia Ltd., Hyderabad) estis uzataj por anestezio.
Kirurgia Proceduro
Masklaj Wistar-albino-ratoj estis anestezitaj per injektado de miksaĵo de ketamina klorhidrato (60 mg / kg), xilazina klorhidrato (6 mg / kg) kaj muntitaj sur stereotipa aparato (Inco, Barato). Inizio estis farita sur la skalpon, tre malinstigita kun kirurgia spirito. La areo estis purigita per kotono kaj hidrogena peroksido. Kunordigitaj punktoj estis markitaj sur la kranio en respondaj areoj por atingi NAcc, kun la referenco de Paxinos kaj cerba atlaso de Watson [17] (De Bregma: Anteroposterior + 2.2 mm, flanka ± 1 mm kaj vertikala 7.4 mm). Burr truo estis farita, kaj neoksidebla ŝtala gvidila kanulo (22-gazo) estis enplantita laŭ la stereotaksaj koordinatoj. Post kiam la kanulo estas en loko, ĝi estas sekurigita helpe de ŝraŭboj kaj dentaj akrilaĵoj. Gvida kanuleto estis ekipita kun stileto, kaj ratoj rajtis resaniĝi dum almenaŭ 7 tagoj antaŭ la eksperimento. Infuza kanuleto (interna kanulo) estis fabrikita el dentokudrila kudrilo de Septoject de 30-mezuriloj, kiu havas hubon, konvenan por la uzado. [18] Infuza kanulo etendas 1 mm preter la respektiva gvida kanulo. Antaŭ la komenco de la eksperimentoj ĉiuj ratoj ricevis du trejnajn kunsidojn, dum kiuj ili estis tenataj sur 24 h fastado, tiam ricevis manĝaĵon, akvon kaj 10% alkoholon. Dum ĉi tiu kunsido, ratoj lernis faston.
Eksperimenta Proceduro
Normala salo kaj SB-334867 (en du dozoj) estis infuzitaj respektive en grupoj de ratoj post 24 h fastado; neanfetitaj (senmovaj) ratoj tra la sekurigita gvida kanulo. La infuzaĵo estis farita per Xingum-xingl-Hamilton-seringeto ligita kun polietilena tubo kaj interna kanulo. Ĉi tiu seringo estis agordita al la Harvard-bombo. Poste la stileto metita en la gvidan kanelon estis forigita. La interna kanulo estis enigita en la gvidan kanelon kaj sekurigita. Tiam la pumpilo estis komencita liveri la solvon en la dekstran kaj maldekstran flankon de NAcc unu post la alia, 10 µl / min (post infuza interna kanulo lasis ĉirkaŭ 1 s por permesi disvastigon de drogoj). Du dozoj de SB-10 estis infuzitaj je 334867 ng (malalta dozo) kaj 3 ng (alta dozo). Fine de infuzaĵo, la interna kanulo estis forigita, kaj stileto estis metita reen en pozicion kaj tempo estis rimarkita. Post infuzaĵo, tuj premeasured kvanto de manĝaĵo, akvo, kaj 6% alkoholo estis provizitaj en respektivaj grupoj. La efiko de SB-10 sur konsumado estis mezurita kaj rimarkita, skrupule je infuza tempo-intervaloj 334867, 1, 2 kaj 4 h respektive. Restante sur buletoj, akvo, kaj alkoholo estis forigitaj, kaj la kvanto konsumita estis kalkulita (Kvanto konsumita = antaŭmezura kvanto-restanta kvanto, ekz. Ĉe la fino de 24 h).
Post la kompletigo de la studo, la ratoj estis oferitaj per mortiga dozo de anestezio kaj la cerbo estis dissekcita kaj konservita por histologia prilaborado. Sep mikronaj sekcioj estis tranĉitaj kaj makulitaj kun kreska violeto por konfirmi la lokon de infuzaĵo [figuro 1].
Statistika Analizo
Analizo de la datumoj estis farita per la statistika programaro SPSS versio - 16 (SPSS por Vindozo, Versio 16.0. Ĉikago, SPSS Inc. Usono); unudirekta ANOVA estis farita por kompari la konsuman konduton inter la grupoj. Inter komparo estis farita de post-hoc Testo de Tukey (Hora konsumo kompare aparte, ekz. 1 h kontrolas manĝokvanton kontraŭ 1 h SB-334867 traktitan manĝokvanton). Datumoj estis esprimitaj kiel meznombro ± norma eraro de meznombro P <0.05, estis konsiderita signifa.
rezultoj
Eksperimento I
Mezura konsumo de manĝaĵoj kaj akvo (n = 18) en ĉi tiu grupo, NAcc kanuligitaj bestoj (n = 18), estis dividitaj en subgrupojn, Grupo 1 (0.9% salina infuzaĵo), Grupo 2 (SB-334867-3 ng), Grupo 3 (SB-334867-6 ng). Oni enmetis drogojn bilateralmente en NAcc [Datumoj montris en tablo 1 kaj Figuro Figuro1a, 1a, , Bb].
Manĝaĵa konsumado
Kompare kontroli ĉe 1 h post SB-334867-kuracado montris gravan malpliiĝon (F [2, 15] = 9.171 p = 0.003) en la manĝaĵa konsumado (t.e. Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.002); dum, neniu signifa ŝanĝo estis rimarkita ĉe 2 h (F [2, 15] = 0.190 p = 0.829); 4 h (F [2, 15] = 0.160 p = 0.854); 24 h postinfuzaj intertempoj (F [2, 15] = 4.873 p = 0.023) (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.028; Grupo 2 kontraŭ Grupo 3, p <0.05).
Akvo de akvo
SB-334867-kuracado ne montris nenian efikon al akva konsumado ĉe 1 h (F [2, 15] = 0.957 p = 0.406); 2 h (akvo 2 h F [2, 15] = 0.773 p = 0.479); 4 h (F [2, 15] = 0.288 p = 0.753) postinfuzaj tempintervaloj; sed entute 24 h akvokvanto malpliiĝis (F [2, 15] = 10.688 p = 0.001) kompare kun kontrolo (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.002; Grupo 2 kontraŭ Grupo 3, p <0.006).
Eksperimento II
Alkoholo (10%) kaj manĝaĵa konsumo estis mezuritaj [n = 18, datumoj en tablo 2 kaj figuro 2].
NAcc kanuligitaj ratoj estis dividitaj en tri subgrupon, Grupo 1 (salo 0.9%) n = 6), Grupo 2 (SB-334867-3 ng, n = 6), kaj Grupo 3 (SB-334867-6 ng, n = 6).
Rezultoj de konsumado de alkoholaj 10%
Ĉe 1 h kaj 2 h SB-334867-kuracado signife malpliigis konsumon de alkoholo ĉe 1st h (F [2, 15] = 4.457 p = 0.030), (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.004), 2nd h (F [2, 15] = 11.122 p = 0.001) (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.001; Grupo 2 kontraŭ Grupo 3, p <0.038). Tamen ne estis signifa ŝanĝo en alkohola konsumo ĉe 4 h (F [2, 15] = 0.709 p = 0.508) kaj 24 h (F [2, 15] = 2.631 p = 0.105) intervaloj respektive.
Manĝaĵa konsumado
Ĉe 1 h kaj 2 h SB-334867-kuracado signife (F [2, 15] = 4.230 p = 0.035) mildigita manĝaĵa konsumado (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.03); (F [2, 15] = 16.558 p = 0.000) (Grupo 1 vs. Grupo 2, p <0.000; Grupo 2 kontraŭ Grupo 3, p <0.021), respektive, kompare kun kontrolo. Neniuj signifaj ŝanĝoj estis rimarkitaj ĉe 4 h (F [2, 15] = 0.070 p = 0.933). Dum, totala manĝaĵa konsumado malpliiĝis (0 – 24 h) (F [2, 15] = 4.457 p = 0.030) (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.025).
Eksperimento III
Manĝaĵo, 10% alkoholo kaj akvo [du boteloj prefero, tablo 2] konsumo estis mezurita. NAcc kanuligitaj ratoj estis subgrupigitaj kiel Grupo 1 (0.9% salo, n = 6), Grupo 2 (SB-334867-3 ng, n = 6), kaj Grupo 3 (SB-334867-6 ng, n = 6), estis injektitaj.
Manĝaĵa konsumado
SB-334867-kuracado ĉe 1 h (F [2, 15] = 5.111, p = 0.02) mildigita manĝaĵa konsumado (Grupo 1 vs. Grupo 3, p <0.011) sed neniu signifa diferenco estis observita ĉe 2 h, 4 h (F [2, 15] = 0.093 p = 0.911), (F [2, 15] = 0.797 p = 0.469) respektive kaj ĉe 24 h ambaŭ dozo de antagonisto montris malpliiĝon de konsumado de manĝaĵoj (F [2, 15] = 12.698 p = 0.001) (Grupo 1 vs. Grupo 2 kaj Grupo 3, p <0.039, p <0.000, respektive), kompare al kontrolgrupo.
Akvo de akvo
SB-334867-kuracado produktis neniun ŝanĝon en akva konsumado en iu ajn grupo kun tempodaŭro ĉe 1 h (F [2, 15] = 0.584 p = 0.578), 2 h (F [2, 15] = 0.662 p = 0.530), 4 h (F [2, 15] = 1.655 P = 0.224) kaj 24 h (F [2, 15] = 0.513 p = 0.609).
Alkoholo (10%) konsumado
SB-334867-kuracado mildigis alkoholan konsumon ĉe 1 h (F [2, 15] = 9.098 p = 0.003), (Grupo 1 vs. Grupo 2 kaj Grupo 3, p <0.004, p <0.008, respektive). Neniu signifa ŝanĝo en iu ajn grupo ĉe 2 h (F [2, 15] = 0.854 p = 0.446), 4 h (F [2, 15] = 0.931 p = 0.416) kaj 24 h (F [2, 15] = 0.349 p = 0.711) respektive.
Tuta flua konsumado
Neniu signifa ŝanĝo en iu el la grupoj, ĉe 1st h (F [2, 15] = 2.064 p = 0.161), 2nd h (F [2, 15] = 1.023 p = 0.383), 4th h (F [2, 15] = 1.205 p = 0.327) kaj 24 h (F [2, 15] = 0.484, p = 0.626).
diskuto
Moduli manĝaĵon kaj akvan akvon de diversaj neŭkemiaj produktoj estis sub skrutinio. Inter pluraj kandidataj molekuloj, kiuj montriĝis, ke ili influas la manĝan konduton, inkluzive de konsumado de alkoholo, Oreksinoj ankaŭ estas implikitaj. [19] Oreksinoj estis origine kredataj esti stimuliloj de la konsumado de manĝaĵoj kaj regulado de ingesta aktiveco; ili poste trovis ke ili influas la dormon kaj vekajn statojn. [20] Dube et al. pruvis ke centra administrado de Oreksinoj havas modulan rolon en ingesta konduto, ĉefe centrita en hipotalamo. [21] En nia aktuala eksperimento, ni testis la efikon de antagonisto de Oreksino A (SB-334867) sur NAcc. NAcc estis atribuita pivota rolo en toksomaniuloj kaj nutrado-rilataj agadoj. [22] Oksinoj ankaŭ estis implikitaj en mediacio de ĉi tiu ago de NAcc. [4] Tamen, NAcc montris du histologie distingajn distriktojn, [23] kiuj povas havi funkciajn diferencojn [24] kaj iliaj funkcioj ŝajnis superplenumi signife. [25] En niaj antaŭaj eksperimentoj, ni trovis, ke infuzaĵo de Oreksino A en NAcc uzante mikroinjektan teknikon pliigis manĝaĵon kaj akvan konsumon en la horoj tuj post infuzaĵo, sed ne estis aparta prefero al alkoholo kiam testite per du botelaj senpagaj elektoj. [14] Tial ni provis injekti Orexin A-antagoniston en NAcc kaj analizis la manĝaĵon, akvan konsumon kaj konsumon de alkoholo en ratoj, kiuj estis fastitaj dum la nokto.
La konsumo en 1st h malkreskis signife de orexinaj antagonistoj traktitaj bestoj. Nia studo plue pruvas la rolon de Oreksino A en nutra konduto. Orexin-ricevilo tipo 1 (OX1R) antagonisto SB-334867-infuzaĵo mildigas la nutradon kaj trinkadon. Oreksino A konsekvence montris la stimulan efikon al nutrado kaj trinkado. OX1R-antagonisto havas 10-fojojn pli grandan afinecon por Orexino A ol B. [26,27]
Oreksinergiaj neŭronoj projektantaj la AccSh kaj ambaŭ oreksinaj riceviloj (OX1R kaj OX2R) ĉeestas en la NAcc, kun OX2R esprimita en pli granda mezuro. [28,29] Oreksino A pliigis GABAergic-fluoj kaj malpliiĝis N-metil-D-aspartataj fluoj en izolitaj neŭromaj neŭronoj. [30] Krome, oreksinoj ekscitas dopaminergajn VTA-neŭronojn. [31] Ekde dopaminergic VTA-neŭronoj senvestigas kaj ekscitas neŭtralojn AccSh GABAergic (inhibitorajn), oreksignalado povus plue pliigi lokan inhibicion en la Acc pliigante neŭronan agadon en la VTA, rezultigante plian plibonigon de konsumata konduto. Sed ĉi tio estis kontraŭdirita de Baldo kaj Kelley, [32] kiuj trovis neniun efikon al nutrado aŭ lokomotora agado kun intra-AccSh Orexin A.
Ni testis la eblon ke Oreksino A funkciu kiel modulatoro de alkohola konsumado [tablo 2] kune kun manĝaĵo. De nia antaŭa studo, ni establis, ke ratoj preferis konsumi alkoholon ĉe 10% -solvo, kiu estis konfirmita en nia propra antaŭa studo. [33] Tial en ĉi tiu studo, ni provizis alkoholon en ĉi tiu diluo post la infuzaĵo de drogo en NAcc. Ni trovis signifan malpliiĝon de la konsumado de alkoholo en la horoj tuj post la infuzaĵo de antagonisto de Oreksino A. La malkresko de konsumado de akvo kaj manĝaĵo estis pli malalta en la infuza grupo de malalta dozo (3 ng) dum ĝi estis pli alta en la grupo de alta dozo (6 ng). Por testi la preferon pri alkoholo, ni provizis al la ratoj du elektajn botelajn kondiĉojn, kie unu botelo da akvo kaj alia enhavanta 10% alkoholon estis samtempe provizitaj. Post infuzaĵo de la Oreksino A-antagonisto produktis gravan malkreskon en manĝaĵa konsumado kaj alkoholaĵo. Ĉi tiu tipo de malkresko estis trovita kaj en malalta kaj alta dozo sed restriktita al 1st h post la infuzaĵo. Tamen, la malkresko en konsumado de nutraĵoj estis pli markita kompare al akvo aŭ alkoholo. Ĉi tiu evidenteco subtenas la implikiĝon de la Oreksino A en la regulado de aŭ manĝaĵa konsumado, sed ne subtenas la eblecon de Oreksino A en la prefero pri alkoholo.
Financa Subtenado kaj Sponsorado
Fako de Bioteknologio, Parto de DBT-financita projekto, Ref: Ref: BT / PR14012 / MED / 30 / 315 / 2010 datita 30.09.2010 Registaro de Barato.
Konfliktoj de Intereso
Ne estas konfliktoj de intereso.
Dankoj
La aŭtoroj dankas la fakon pri bioteknologio, registaro de Barato, pro la financa subteno. Kasturba Medicina Kolegio, Mangalore, Universitato Manipal, por la provizitaj instalaĵoj.
Referencoj
;
