Efè ΔFosB overexpression sou opioid ak Cannabinoid reseptè-medyatè siyal nan akumbèn yo nwayo (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A., Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

sous

Depatman Famakoloji ak Toksikoloji ak Enstiti pou Etid Dwòg ak Alkòl, Virginia Commonwealth University University of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

Abstrè

Faktè transcription ki estab ΔFosB la pwovoke nan nwayo accumbens yo (NAc) pa ekspozisyon kwonik nan plizyè dwòg abi, ak ekspresyon transjenik nan osFosB nan striatum la amelyore pwopriyete yo rekonpanse nan morfin ak koka.e. Sepandan, se baz la mekanisyen pou obsèvasyon sa yo konplètman konprann. Nou itilize yon modèl sourit bitransgenic ak ekspresyon ankouraje nan FosB nan Dopamine D (1) reseptè / dinorfin ki gen newòn striatal detèmine efè onFosB ekspresyon sou opioid ak Cannabinoid reseptè siyal nan NAc a. Rezilta te montre ke yo te opiyedit medyatè-G-pwoteyin aktivite ak anpèchman nan adenylyl siklaz te ogmante nan NA a nan sourit ki eksprime BFosB. Menm jan an tou, te anpèchman kappa opioid nan adenylyl siklaz ogmante nan ΔFosB eksprime sourit yo.. Nan contrast, cannabinoid reseptè-medyatè siyal pa t 'diferan ant sourit yo twòp-eksprime FOSB ak kontwòl sourit. Trezilta sa yo sijere ke siyal opioid ak cannabinoid reseptè yo diferansyèlman modulation pa ekspresyon de BFOSB, epi endike ke mightFosB ekspresyon ta ka pwodwi kèk nan efè li yo via ranfòse mu ak kappa reseptè opioid mu nan NAc la.

Keywords: G-protein, adenylyl cyclase, striatum

1. Entwodiksyon

Reseptè opioid ak cannabinoid CB₁ reseptè (CB₁R) se objektif yo newobiolojik pou de lajman itilize dwòg klas ki gen ladan morfin, ewoyin ak preskripsyon opioids, ak marigwana ()⁹-tetrahydrocannabinol (THC)), respektivman. Efè yo egi nan opioid ak cannabinoids yo medyatè pa G-pwoteyin-makonnen reseptè ki aktive prensipalman G_{mwen / o} pwoteyin epi pwodui repons efèkteur en tankou anpèchman adenyil ciclas (Childers, NAN, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Motè a, efè memwa ak psikoaktiv nan Δ⁹-THC yo pwodwi pa CB₁R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), ki se lajman distribiye nan sèvo a, ak nivo segondè nan fondamantal nwayo yo, ipokanp ak serebeleu (Herkenham, et al., 1991). Efè yo analgesic ak rekonpanse nan medikal ki pi enpòtan ak abi dwòg opioid yo medyatè sitou pa reseptè opyoid mu (MOR) (Matthes, et al., 1996), ki rich nan sistèm lenbik la ak sèvoMansour, et al., 1994). Sistèm mesolimbik la, ki konpoze de pwojeksyon dopaminèji ki soti nan zòn ventral tegmental (VTA) nan nwayo accumbens (NAc), jwe yon wòl enpòtan nan efè rekonpanse opioids ak cannabinoidsBozarth ak Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), osi byen ke lòt dwòg abi (Koob ak Volkow, 2010). Anplis, sistèm opioid andojèn ak cannabinoid yo enplike nan efè rekonpanse plizyè klas nan dwòg psikoaktiv (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Se konsa, li enpòtan elucide mekanis pa ki opioid ak CB₁R siyal yo réglementées nan NAc a.

Yon kesyon santral nan domèn abi dwòg te idantifye pwoteyin ki medyasyon tranzisyon soti nan egi ak efè alontèm nan dwòg psikoaktiv. Faktè transkripsyon AP-1 ΔFosB a patikilyèman enteresan paske li se yon pwodwi ki etabli ki varye ak divize epitou dèlko. Fosb jèn ki akimile sou ekspoze repete a dwòg abi oswa rekonpans natirèl (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Nou jwenn ke Δ FOSB se pwovoke nan sèvo a apre ekspoze repete nan morfin, Δ⁹-THC, kokayin oswa etanòl, ak chak dwòg pwodwi yon modèl rejyonal inik nan (FosB ekspresyon (Perrotti, et al., 2008). Yon konklizyon ki konsistan nan tout dwòg te ke BFosB te trè pwovoke nan striatum a, kote tout kat dwòg pwovoke Δ FOSB nan nwayo a NAc ak tout eksepte⁹-THC eksprime siyifikativman pwovoke nan koki a NAc ak caudate-putamen.

Syans farmakolojik te montre ke ko-administrasyon Dopamine D la₁ reseptè (D₁R) antagonist SCH 23390 bloke ΔFosB endiksyon nan NAc a ak caudate-putamen apre kokenè tanzantan oswa administrasyon morfin, sijere ke enpòtans potansyèl de D₁R-eksprime newòn (Muller ak Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Efè on FosB endiksyon sou konpòtman medyaman medyatè te envestige lè l sèvi avèk sourit bitransgenic ki eksprime ΔFosB nan popilasyon espesifik newonal nan NAc a ak stryat dorsal (Chen, et al., 1998). Sourit ki eksprime ΔFosB nan dinorfin / D₁R newòn pozitif nan NAc a ak striatom dorsal (liy 11A) montre chanje repons a dwòg nan abi, notableman ogmante sansiblite nan efè yo rekonpanse nan kokayin oswa morfin (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Chanjman sa yo te fèt nan absans chanjman ki fèt nan nivo MOR oswa divès subunit pwoteyin G. Sepandan, nivo mRNA dinorfin te redwi nan NA nan ΔFosB eksprime sourit yo (Zachariou, et al., 2006), ki sijere ke yon sèl sib nan BFosB se yon jèn kodaj yon endojèn peptides opioid. MightFosB endiksyon ta ka pwodwi tou chanjman konpòtman pa reglemante siyal reseptè nan NAc a, men posibilite sa a pa te envestige. Se poutèt sa, etid sa yo te itilize modèl la sourit bitransgenic detèmine si ovèkspresyon nan ΔFosB nan dinorfin / D₁R ki gen newòn striatal transforms MOR-medyatè aktivite G-pwoteyin ak MOR- ak KOR-medyatè inhibition adenylyl cyclase nan NAc a. Efè FosB sou CB₁R-medyatè G-pwoteyin aktivite yo te evalye tou paske Δ⁹Administrasyon -THC pwovoke ΔFosB nan NAc a (Perrotti, et al., 2008) ak sistèm nan endokannabinoid se konnen yo kontwole sikwi rekonpans nan sèvoGardner, NAN, Maldonado, et al., 2006), men efè Δ FOSB sou sistèm endokannabinoid la pa te envestige.

2. Materyèl ak metòd

NAN. Reyaktif

[³⁵S] GTPYS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) ak [³H] CAMP (26.4 Ci / mmol) te achte nan men PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, AMP, seren albumin bòl, kreyin fosfokinaz, papaverin, imidazol ak WIN-55212-2, te achte nan men Sigma Aldrich (Saint Louis, MO). GTPγS te achte nan Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO te founi pa Pwogram Pwovizyon pou Dwòg nan Enstiti Nasyonal la sou Abi Dwòg (Rockville, MD). Likid scintillation Econo-1 te jwenn nan Fisher Scientific (Norcross, GA). Yo te jwenn likid eksite ekilit nan ICN (Costa Mesa, CA). Tout lòt pwodwi chimik yo te jwenn nan Sigma Aldrich oswa Fisher syantifik.

NAN. Sourit

Male sourit bitransgenic ki sòti nan NSE-tTA (liy A) × TetOp-BFosB (liy 11) yo te pwodwi jan sa dekri nan Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Sourit Bitransgenic yo te vin ansent ak leve soti vivan sou doxycycline (100 µg nan dlo pou bwè) siprime transgene ekspresyon. Nan 8 ki gen laj semèn, doxycycline te retire nan dlo a pou mwatye nan sourit yo yo ki pèmèt ekspresyon transen, tandiske rete sourit yo te kenbe sou doxycycline pou siprime transjèn lan. Sèvo yo te kolekte 8 semèn pita, tan an nan ki efè transcriptional nan ΔFosB yo maksimòm (McClung ak Nestler, 2003). Yon dezyèm liy transjenik sourit te itilize nan ki Δc-Jun, yon dominan antagonist negatif nan c-Jun, eksprime nan D₁R / dinorfin ak D₂R / enkepalin selil nan striatum a, ipokanp ak cortical parietalPeakman, et al., 2003). C-Jun ak ki gen rapò ak pwoteyin fanmi dimerize Fos ak pwoteyin fanmi Fos ak mare sit AP-1 nan jèn sib yo kontwole transkripsyon. Sepandan, twonkontan nan N-tèminal la nan c-Jun (Δc-Jun) rann konplèks la transkriyo inaktif ak kapab bloke ADN obligatwa a nan aktif AP-1 konplèks. Male sourit bitransgenic ki sòti nan NSE-tTA (liy A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (liy E) te pwodwi jan sa dekri nan Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Sourit Bitransgenic yo te vin ansent ak leve soti vivan sou doxycycline (100 µg nan dlo pou bwè) siprime transgene ekspresyon. Pups yo te sevre nan 3 semèn, genotip, ak separe an gwoup, ak mwatye konsève sou doxycycline ki gen dlo ak mwatye sou regilye dlo pou bwè pwovoke FLAG-Δc-Jun ekspresyon. Sèvo yo te kolekte 6 semèn pita, tan an nan ki nivo maksimòm nan FLAG-Δc-Jun yo te mezire (Peakman, et al., 2003). Tout pwosedi bèt yo te fèt annakò avèk Enstiti Nasyonal Gid Sante a pou Swen ak Itilizasyon Bèt laboratwa.

NAN. Preparasyon pou manbràn

Sèvo yo te estoke nan −80 ° C jouk nan jou tès la. Anvan tès la, chak sèvo te deglase, epi NAc a te diseke sou glas. Chak echantiyon te omojeneize nan 50 mM Tris-HCl, 3 MM MgCl₂1 mM EGTA, pH 7.4 (manb tanpon) ak kou 20 ki sòti nan yon vè omojeneur nan 4 ° C. Homogenate a te santrifuje nan 48,000 × g nan 4 ° C pou 10 min, re-sispann nan manba tanpon, santrifuje ankò nan 48,000 × g nan 4 ° C pou 10 min ak resusese nan 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (espresyon tanpon). Nivo pwoteyin yo te detèmine pa metòd Bradford (Bradford, NAN) lè l sèvi avèk albumin sewòm bovin (BSA) kòm estanda a.

NAN. Agonist-Stimulated³⁵S] GTPγS Binding

Manbràn te pre-enkubatèr pou 10 minit nan 30 ° C ak adenozin deaminase (3 mU / ml) nan esè tanpon. Manbràn (5-10 µg pwoteyin) te Lè sa a, enkibatè pou 2 h nan 30 ° C nan ékrazan tanpon ki gen 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPYS, 30 µM GDP ak adenozin deaminaz (3 mU / ml) avèk ak san konsantrasyon apwopriye nan DAMGO oswa WIN55,212-2. Nonspecific obligatwa te mezire ak 20 µM GTPγS. Enkubasyon a te sispann pa filtraj nan filtè fib vè GF / B, ki te swiv pa lave 3 ak 3 ml glas-frèt 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Radyoaktivite Bound te detèmine pa spèktrofotometri sentiyasyon likid apre ekstraksyon lannwit lan nan filtè yo nan Econo-1 scintillation likid.

NAN. Adenylyl Cyclase Assay

Manbràn (5-25 µg pwoteyin) te pre-asosye avèk adenozin deaminaz jan sa dekri pi wo a, Lè sa a, enkibatè pou 15 min nan 30 ° C nan prezans oswa absans nan 1µM forskolin, avèk oswa san DAMGO, U50,488H oswa WIN55,212-2, nan esè tanpon ki gen. 50 µM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM AMP siklik, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverin, 5 mM fosfatatèn, 20 inite / ml kreyinin fosfokinaz ak adenozin deaminaz (3 mU / ml) nan yon volim final nan 100 µl. Nan kondisyon sa yo, total [α-³²P] CAMP rekipere yo te jeneralman mwens pase 1% nan kantite total te ajoute [α-³²P] ATP nan chak echantiyon. Te reyaksyon an sispann pa bouyi pou min x ak [³²P] Siklik AMP te izole pa metòd kolòn doub (Dowex ak alumina) Salomon (Salomon, KA). [³H] cAMP (10,000 dpm) te ajoute nan chak tib anvan yo kwonografi kolòn kòm yon estanda entèn yo. Radyoaktivite te detèmine pa spèktrofotometri likid sentiyasyon (45% efikasite pou ³H) apre 4.5 ml disipe yo te fonn nan 14.5 ml Ecolite sentiyasyon likid.

NAN. Done analiz

Amwenske endike otreman, yo rapòte done kòm valè mwayèn = SE nan eksperyans separe 4 – 8, chak nan yo ki te fèt nan triplicate. Net-stimulated [³⁵S] GTPγS obligatwa kalkile kòm agonist-stimulé obligatwa mwens obligatwa fondamantal. Se nèt forskolin-ankouraje adenylyl siklaz aktivite defini kòm forskolin-ankouraje aktivite - aktivite fondamantal (pmol / mg / min). Pousantaj anpèchman nan aktivite forskolin-stimulé adenylyl cyclase defini kòm (nèt forskolin-ankouraje aktivite nan absans agonist - nèt forskolin-ankouraje aktivite nan prezans agonist / nèt forskolin-ankouraje aktivite nan absans agonist) × 100. Tout koub-Fitting ak estatistik analiz yo te fè lè l sèvi avèk Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc, San Diego, CA). Koub konsantrasyon-efè yo te analize pa retresyon iteratif ki pa lineyè pou jwenn EC₅₀ ak E_Max valè yo. Te estatistik siyifikasyon nan done yo konsantrasyon-efè detèmine pa de-fason analiz de divèjans (ANOVA), lè l sèvi avèk agonist dòz ak endiksyon jèn (sou oswa sou) kòm faktè prensipal yo. Estatistik siyifikasyon valè koub anfòm (E_Max oswa EC₅₀) te detèmine pa t-tès Elèv ki pa pè a, itilize koreksyon Welch oswa transfòmasyon rasin kare done yo kote li nesesè pou korije divèjans inegal (detekte pa tès F) nan EC₅₀ valè yo.

3. Rezilta yo

NAN. Efè onFosB ekspresyon sou opyòd ak Cannabinoid reseptè-medyatè G-pwoteyin deklanchman

Pou detèmine si MOR- oswa CB₁R-medyatè G-pwoteksyon deklanchman te chanje pa entwodwi ekspresyon transjenik nan BFosB nan NAc a, agonist-ankouraje [...³⁵S] GTPγS obligatwa te egzamine nan manbràn izole prepare nan rejyon sa a nan sourit bitransgenic kondisyonèlman eksprime (Δ FOSB sou) oswa pa eksprime (Δ FOSB koupe) transgene nan BFosB. Analog DAMGO enkepalin selektif MOR la te itilize pou aktive MOR e yo te itilize cannabinoid amminoalikilindol WIN55,212-2 pou aktive CB₁R. Landsan sa yo te deja montre yo dwe agonist plen nan MOR ak CB₁R, respektivman (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Li pa te posib pou egzaminen aktivite G-pwoteyin KOR-medyatè paske siyal la twò ba nan sèvo ratChilders, et al., 1998). Rezilta yo te montre eksitasyon konsantrasyon-depandan nan aktivite G-pwoteyin pa tou de DAMGO ak WIN55,122-2 nan NAc soti nan ΔFosB koupe ak ΔFosB sou sourit yo (figi 1). Pou aktivite DAMGO-ankouraje (Figi 1A), de-fason ANOVA nan done konsantrasyon-efè a revele siyifikatif efè prensipal nan estati osFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) ak konsantrasyon DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) ki pa gen okenn entèraksyon enpòtan (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Analiz regresyon lineyè nan koub yo konsantrasyon-efè devwale yon siyifikativman pi gwo DAMGO E_Max valè nan ΔFosB sou sourit yo (E_Max = 73 ± 5.2% eksitasyon) ki gen rapò ak Δ FOSB koupe sourit yo (E_Max = 56 ± 4.1% eksitasyon; p <0.05 diferan de ΔFosB sou sourit pa tès elèv la). DAMGO EC₅₀ valè yo pa te diferan ant ΔFosB sou ak ΔFosB sou sourit yo (302 ± 72 nM kont 212 ± 56 nM, respektivman, p = 0.346).

Efè onFosB ekspresyon sou agonist-stimulated [³⁵S] GTPγS obligatwa nan NAc a. Manbràn ki soti nan were FOSB-eksprime (ΔFosB sou) oswa kontwòl (ΔFosB koupe) sourit yo te assayed jan sa dekri nan Metòd lè l sèvi avèk divès konsantrasyon. ...

Kontrèman ak rezilta yo jwenn ak MOR agonist DAMGO a, pa gen okenn ΔFosB estati ki depann de diferans nan G-pwoteyin deklanchman yo te obsève ak Cannon yo agonist WIN55,212-2 (Figi 1B). De-fason ANOVA nan done WIN55,212-2 konsantrasyon-efè a revele yon efè prensipal enpòtan nan WIN55,212-2 konsantrasyon (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), men se pa nan estati osFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) e pa te gen okenn entèraksyon (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Menm jan an tou, pa te gen okenn efè estati osFosB sou WIN55,212-2 E_Max valè (103 ± 6% kont 108 ± 8% eksitasyon nan Δ FOSB sou ak sou sourit yo, respektivman, p = 0.813 pa t elèv yo t-test) oswa EC₅₀ valè (103 ± 20 nM kont 170 ± 23 nM nan ΔFosB sou ak sou sourit, respektivman, p = 0.123).

Ki baze sou fòm nan koub yo ak lefèt ke syans anvan nou yo te montre biphasik WIN55,212-2 konsantrasyon-efè koub nan sèvo (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), koub WIN55,212-2 yo te analize tou lè l sèvi avèk yon modèl de sit. Analiz de done yo mwatye te montre yon ti kras amelyorasyon nan bonte nan anfòm lè l sèvi avèk modèl la de-sit (R² = 0.933 ak 0.914, sòm de kare = 3644 ak 5463 nan ΔFosB sou ak sou sourit, respektivman) konpare ak modèl la sèl-sit (R² = 0.891 ak 0.879, sòm de kare = 6561 ak 6628 nan ΔFosB sou ak sou sourit, respektivman). Sepandan, pa gen diferans siyifikatif yo te jwenn ant BFosB sou ak sou sourit swa nan E la_Max oswa EC₅₀ valè pozisyon pozans segondè oswa ba (Siplemantè Tab la), byenke te gen yon tandans nan direksyon pou yon pi ba EC₅₀ valè nan sit pisans segondè nan sourit ak BFosB sou (EC₅₀segondè = 28.0 ± 10.6 nM) konpare ak moun ki gen ΔFosB koupe (EC₅₀segondè = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Anplis, pa te gen okenn efè nan onFosB estati sou fondamantal [...³⁵S] GTPYA obligatwa nan manbràn NA (253 ± 14 kont xmn xmx fmol / mg nan onFosB sou ak sou sourit, respektivman, p = 226). Done sa yo endike ekspresyon transjenik ki entwodwi B FosB nan NAc sourit yo te ogmante deklanchman G-pwoteyin medyatè a san afekte anpil CB.₁R-medyatè oswa fondamantal G-pwoteyin aktivite.

NAN. Efè Δ FOSB sou anpèchman opyat ak cannabinoid medyatè reseptè adenylyl cyclase

Pou evalye efè eksitasyon transjenik entwodwi nan osFosB sou batman nan aktivite efèkteur en pa MOR ak CB₁R, anpèchman nan 1 µM forskolin-ankouraje aktivite siklaz te egzamine nan manbràn NA. Anplis de MOR- ak CB₁R-medyasyon anpèchman nan adenylyl siklase aktivite, efè KOR aktivite yo te egzamine tou lè l sèvi avèk KOR-selektif agonist la plen U50,488 (Zhu, et al., 1997), paske rezilta anvan yo te montre mARN dynorphin te yon sib nan ΔFosB nan modèl la bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Rezilta yo te montre ke DAMGO, U50,488 ak WIN55,212-2 chak pwodwi konsantrasyon ki depann inhibition nan adenylyl siklaz aktivite nan tou de Δ FOSB koupe ak ΔFosB sou sourit yo (figi 2). De-fason ANOVA nan DAMGO konsantrasyon-efè done (Figi 2A) devwale siyifikatif efè prensipal estati ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) ak konsantrasyon DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), men pa gen okenn entèraksyon enpòtan (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Analiz retou annaryè nan koub konsantrasyon-efè DAMGO revele yon siyifikativman pi ba DAMGO EC₅₀ valè nan osFosB sou sourit (101 ± 11 nM) konpare ak ΔFosB koupe sourit (510 ± 182 nM, p <0.05 pa tès elèv la). Sepandan, pa te gen okenn diferans enpòtan nan DAMGO E_Max valè (20.9 ± 1.26% kont 19.8 ± 1.27% inhibition nan ΔFosB sou ak sou sourit, respektivman, p = 0.534).

Efè onFosB ekspresyon sou anpèchman nan adenylyl siklaz aktivite nan NAc a. Manbràn ki soti nan were FOSB-eksprime (ΔFosB sou) oswa kontwòl (ΔFosB koupe) sourit yo te assayed jan sa dekri nan Metòd nan prezans 1 µM ...

Anrejistreman adenyilil siklaz medyatè KOR te diferan tou kòm yon fonksyon ekspresyon transjenik ankourajan nan (FOSB (Figi 2B). De-fason ANOVA nan U50,488 done konsantrasyon-efè te montre siyifikatif efè prensipal nan estati osFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) ak U50,488 konsantrasyon (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , ki pa gen okenn entèraksyon enpòtan (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Analiz retou annaryè nan koub konsantrasyon-efè devwale yon pi gwo U50,488 E_Max valè nan ΔFosB sou sourit (18.3 ± 1.14% anpèchman) konpare ak ΔFosB koupe sourit (12.5 ± 2.03% anpèchman; p <0.05 diferan de ΔFosB sou pa tès elèv la t), ki pa gen okenn diferans enpòtan nan U50,488 EC₅₀ valè (310 ± 172 nM kont 225 ± 48 nM nan ΔFosB sou ak sou sourit, respektivman, p = 0.324).

Kontrèman a efè yo obsève ak MOR ak KOR, pa te gen okenn efè siyifikatif nan entwodwi transjenik ΔFosB ekspresyon sou anpèchman nan adenylyl siklaz pa kanabinoid agonist la WIN55212-2 (Figi 2C). De-fason ANOVA nan done konsantrasyon-efè WIN55,212-2 te montre yon efè enpòtan nan konsantrasyon dwòg (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), men se pa nan estati osFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) ni te gen yon entèraksyon enpòtan (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Anplis de sa, pa te gen okenn efè statusFosB estati sou aktivite bazal oswa forskolin-stimulé adenylyl siklas nan absans nenpòt agonist. Aktivite baz adenilil siklaz te 491 ± 35 pmol / mg / min nan osFosB sou sourit konpare ak 546 ± 44 nan ΔFosB sou sourit (p = 0.346 pa tès elèv la). Menm jan an tou, aktivite adenilil siklaz nan prezans 1 µM forskolin te 2244 ± 163 pmol / mg / min nan osFosB sou sourit kont 2372 ± 138 pmol / mg / min nan ΔFosB koupe sourit (p = 0.555).

NAN. Efè uncJun sou anpyetman nan opyok ak cannabinoid reseptè medyatè nan adenylyl cyclase

Paske eksitasyon nan transgenik entwodwi nan enhancedFosB amelyore transdiksyon siyal inhibition soti nan MOR ak KOR adenylyl cyclase nan NAc a, li te nan enterè detèmine si yon dominan inibitè negatif nan ΔFBB-medyatè transkripsyon ta modile reseptè opioid siyal nan yon fason opoze. Pou adrese kesyon sa a, yo te anpèchman nan forskolin-ankouraje adenylyl aktivite siklas pa DAMGO ak U50,488 egzamine nan manbràn prepare soti nan NAc a nan sourit bitransgenic kondisyonèl eksprime uncJun. Rezilta yo pa te montre okenn efè siyifikatif oncJun ekspresyon sou anpèchman nan adenylyl aktivite siklaz pa MOR oswa KOR (figi 3). De-fason ANOVA nan DAMGO konsantrasyon-efè koub te montre yon efè prensipal enpòtan nan konsantrasyon DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), men se pa nan estati JcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) e pa te gen okenn entèraksyon siyifikatif (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Menm jan an tou, pa te gen okenn diferans enpòtan nan E_Max oswa EC₅₀ valè ant sourit ak ΔcJun sou (E_Max = 23.6 + 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) oswa ΔcJun koupe (E_Max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Rezilta ki sanble yo te wè ak U50,488, tankou ke de-fason ANOVA nan koub yo konsantrasyon-efè te montre yon efè enpòtan nan konsantrasyon (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), men se pa nan ΔcJun estati (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) e pa te gen okenn entèraksyon enpòtan (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Menm jan an tou, pa te gen okenn diferans enpòtan nan E_Max oswa EC₅₀ valè ant sourit ak ΔcJun sou (E_Max = 14.8 + 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) oswa koupe (E_Max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Efè oncJun ekspresyon sou anpèchman nan adenylyl aktivite siklaz nan NAc a. Manbràn ki soti nan werecJun-eksprime (ΔcJun sou) oswa kontwòl (ΔcJun Off) sourit yo te enkubatè nan prezans DAMGO (A), U50,488H (B) oswa WIN55,212-2 ...

ExpressioncJun ekspresyon tou pa t 'siyifikativman afekte anpèchman nan adenilil siklaz nan NAc la pa agonist la cannabinoid. De-fason ANOVA nan koub yo konsantrasyon WIN55,212-2 te montre yon efè prensipal enpòtan nan konsantrasyon WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), men se pa nan jenotip (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) e pa te gen okenn entèraksyon enpòtan (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Menm jan an tou, pa te gen okenn diferans enpòtan nan WIN55,212-2 E_Max valè (13.0 ±% 2.3 ak 13.6 ± 0.9% inhibition nan ΔcJun sou kont sourit, respektivman, p = 0.821) ak oswa EC₅₀ valè (208 ± 120 nM ak 417 ± 130 nM nan uncJun sou kont sourit, respektivman, p = 0.270). Kidonk, byen ke te gen yon ti tandans nan direksyon diminye puisans nan WIN55,212-2 nan sourit eksprime uncJun, transjèn lan pa t 'siyifikativman chanje anpèchman cannabinoid nan adenylyl cyclase. Anplis, pa te gen okenn efè sou oncJun estati sou fondamantal oswa forskolin-ankouraje adenylyl siklaz aktivite. Aksyon basen siklen adenylyl te 1095 ± 71 pmol / mg / min ak 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) nan sourit ak uncJun sou oswa koupe, respektivman. Aknilil siklaz aktivite ankouraje pa 1 µM forskolin te 4185 ± 293 pmol / mg / min kont 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) nan sourit ak uncJun sou oswa koupe, respektivman.

3.4. Diskisyon

Rezilta etid sa a te revele aktivasyon G-pwoteyin ak medyasyon adenlylil siklas nan NAc sourit ak ekspresyon transjenik entwodwi ΔFosB nan dinorfin / D₁R ki gen newòn. Anrejistreman KOR-medyatè nan aktivite adenyilil siklaz te amelyore tou nan NAc nan sourit ΔFosB eksprime, sijere ke ΔFosB kontwole sistèm nan opioid andojèn nan NAc a. E DAMGO_Max valè te pi gwo pou MOR-ankouraje [³⁵S] GTPγS obligatwa, ak EC li yo₅₀ valè te pi ba pou anbitin cyclolyse adenylyl, nan sourit BFosB-eksprime konpare ak kontwòl sourit. Rezilta sa yo sijere posibilite pou rezève reseptè pou modulasyon efèkteur men se pa G-pwoteksyon deklanchman anba kondisyon yo tès egzamine. Konklizyon an ki te maksimòm anpèchman nan adenylyl siklase pa agonis la KOR afekte pa suggestsFosB ekspresyon sijere rezèv ki ba reseptè pou KOR-medyatè repons lan, ki konsistan avèk nivo yo ki ba nan KOR sit obligatwa nan sèvo sourit (Unterwald, et al., 1991). Nan contrast, CB₁R-medyatè G-pwoteyin aktivite ak anpèchman nan adenylyl siklaz te afekte pa ΔFosB ekspresyon, sijere ke sistèm nan opioid ak cannabinoid diferan nan repons yo nan ΔFosB nan sa yo newòn NAc.

Efè ΔFosB sou siyal medyatè reseptè opioid yo konsistan avèk rapò anvan nou ke ekspresyon ΔFosB nan striatum la chanje efè egi ak kwonik morfin (Zachariou, et al., 2006). Yon rezilta nan etid sa a te ke sourit yo ak ekspresyon transjenik nan BFosB nan dinorfin / D₁Newòn striatal R yo te plis sansib a morfin nan kote kondisyone pase kontwòl. Anplis de sa, efè sa a te imite pa ekspresyon viral medyòm ΔFosB pa piki sit-espesifik nan NAc a. Obsèvasyon sa yo konsistan avèk rezilta aktyèl yo ki montre ranfòse siyal MOR nan NAc a.

Nou te deja idantifye kodaj jèn yo dynorphin kòm yon sib nan os FOSB, ak pwopoze ke dinorphin redwi ta konsistan avèk pwopriyete ranfòse ranfòse nan morfin nan sourit ΔFosB bitransgenic (Zachariou, et al., 2006). Rezilta yo prezante montre ke inhibition KOR-medyatè nan adenylyl cyclase nan NAc a ogmante nan ΔFosB eksprime sourit, ki ta ka reflete yon ogmantasyon konpansatwa nan KOR sansiblite apre dinorphin redwi. Etid anvan yo montre ke KOR te upregulated nan rejyon sèten nan sèvo prodynorphin pentch sourit, ki gen ladan NAc (Clarke, et al., 2003).

Kontrèman a ΔFosB, eksitasyon ankourajan transjenik nan uncJun, dominan negatif tronkonik mutant la nan os FosB patnè obligatwa cJun a, pa t 'chanje ancyclingly inhibition inhibition pa MOR oswa agonist KOR. Rezilta sa yo sijere ke nivo fondamantal nan ekspresyon BFosB, ki se relativman ba, pa jwe yon wòl enpòtan nan kenbe reseptè opioid siyal nan nivo sa a nan transdiksyon siyal nan NAc a. Lefèt ke te kondisyone efè a rekonpanse nan morfin diminye pa incJun ekspresyon nan etid anvan nou yo (Zachariou, et al., 2006) sijere swa ke endikasyon morfin nan B FOSB pandan pwosedi a kondisyone enpòtan nan reglemante repons konpòtman nan dwòg la oswa ki efè transkripsyon nan otherFosB lòt pase sa ki afekte siyal pi pre nan reseptè opioid ka enfliyanse rekonpans opioid. Nan nenpòt ka, rezilta etid la montre klèman ke, lè ekspresyon Δ FOSB elve pi wo pase nivo bazal nan striatal dinorfin / D₁R-eksprime newòn, gen yon ogmantasyon gaya nan kouti nan MOR ak KOR pou anpèchman nan adenylyl cyclase nan NAc a.

Mekanis yo pa ki MOR- ak KOR-medyatè siyal yo ranfòse pa Δ FosB surèkspresyon yo klè, men nou te deja montre ke nivo MOR, evalye pa [³H] obligatwa naloxone, yo pa diferan nan NAc nan ΔFosB sou sourit koupe (Zachariou, et al., 2006). Etid la menm te jwenn ke Gα_iNivo pwoteyin 1 ak 2 pa te afekte nan rejyon sa a pa ekspresyon BFosB. Sepandan, analis ansyen etalaj ekspresyon jèn te montre ke Gα_o mRNA te regle moute nan NAc nan ΔFosB sou sourit yo (McClung ak Nestler, 2003). Li pral nan enterè nan etid nan lavni konplètman egzaminen efè a nan transjenik on FOSB ekspresyon sou G-pwoteyin subunit ekspresyon nan nivo pwoteyin kòm byen ke sou ekspresyon an nan anpil pwoteyin G-pwoteyin.

Li enteresan ke ekspresyon FosB pa te ogmante CB₁R-medyatè siyal nan NAc a. Li posib ke chanjman nan CB₁R siyal rive nan yon popilasyon disrè nan newòn ki kache nan tout preparasyon an NAc. Pa egzanp, administrasyon⁹- THC siyifikativman pwovoke osFosB nan nwayo a, men se pa koki, nan NAc la (Perrotti, et al., 2008). nanndeed, li te montre ke defi ak Δ⁹-THC apre administrasyon repete nan Δ⁹-THC ogmante dopamine lage nan nwayo a NAc, men diminye lage nan koki an (Cadoni, et al., 2008). Li enpòtan tou sonje ke liy lan 11A nan bitransgenic sourit eksprime Δ FOSB sèlman nan dinorfin / D₁R pozitif mwayen nwa epineux nan striatum a, men CB₁R yo eksprime nan tou de dinorfin / D₁R ak enkephalin / D₂R newòn striatal pozitif (RHohmann ak Herkenham, NAN), osi byen ke sou terminaux afèrents cortical (Robbe, et al., 2001). Ekspresyon regilatè negatif dominan transkripsyon BFosB-medyatè, ΔcJun, pa te gen okenn efè siyifikatif sou siyal reseptè cannabinoid, byenke ΔcJun se enditivabl eksprime nan tou de D₁ ak D₂ki gen popilasyon nan newòn mwayen epineux nan sourit sa yoPeakman, et al., 2003). Li posib, sepandan, ki espresyon basal B FOSB se ase ki ba JcJun pa ta afekte reseptè siyal, jan sijere pa rezilta ak MOR ak KOR. Li posib tou ke CB₁R siyal modesteman ranfòse pa ekspresyon basal BFosB, tankou plis ekspresyon Δ FOSB ogmante oswa bloke aksyon li yo ak ΔcJun te sèlman efè ti tay ki pa t 'rive nan nivo a siyifikasyon estatistik. Ka sipò endirèk pou sa a entèpretasyon ka konpare lè yo konpare WIN55,212-2 EC₅₀ valè ant sourit ki eksprime cJun kont ΔFosB. Rapò a nan WIN55,212-2 EC la₅₀ value for adenylyl cyclase inhibition nan sourit ak indiksyon ekspresyon ΔcJun nan EC li yo₅₀ valè pou aktivasyon G-pwoteyin nan sourit ak ekspresyon pwovoke nan wasFosB te 4.0, tandiske menm rapò an nan sourit yo san endiksyon nan transjèn te 1.2.

Altènativman, cannabinoids ta ka pwovoke ekspresyon BFosB san okenn efè dirèk sou CB₁R siyal. Nan senaryo sa a, kanabinoid te kapab modile reyaksyon a efè psikoaktiv lòt medikaman atravè. Regilasyon transcriptional BFosB-medyatè. Mwenn reyalite, administrasyon⁹-THC pwodui sansibilizasyon kwa-a opioid ak anfetamin (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), ki konsistan avèk ipotèz sa a. Anplis, yo te repete administrasyon nan agonist a cannabinoid CP55,940 ogmante MOR-medyatè G-pwoteyin deklanchman nan NAc a, Menm jan ak sourit yo enduksibl eksprime BFosB nan etid la prezan (Vigano, et al., 2005). Efè ekspresyon BFosB sou Δ⁹Konpòtman -THC-medyatè pa te evalye, men rezilta yo prezan pa anpeche yon entèraksyon. Rezilta yo nan sa a ak etid anvan nou yo (Zachariou, et al., 2006) montre in FOSB-indwi altènasyon nan MOR ak KOR / dinorfin nan striatum la. Efè rekonpanse nan Δ⁹-THC, jan yo mezire pa preferans plas, yo aboli nan MOR sourit nil, tandiske sipresyon nan KOR atenye⁹-THC aversion kote ak devwale Δ⁹-THC plas preferans (Ghozland, et al., 2002). Menm jan tou, kondisyone degoutans plas nan Δ⁹-THC absan nan pro-dynorphin pentch konpare ak sourit di ki kalite sovaj (Zimmer, et al., 2001). Done sa yo sijere ke Δ⁹-THC ka pi rekonpanse apre andFosB endiksyon ak konsekan endiksyon nan MOR siyal ak rediksyon nan ekspresyon dinorfin.

Nan rezimey, rezilta etid sa a te montre ekspresyon BFosB nan D₁R / dinorfin pozitif newòn striatal ranfòse MOR- ak KOR-medyatè siyal nan nivo a G-pwoteyin medyasyon anpèchman nan adenylyl aktivite cyclase nan NAc a. Konklizyon sa a ki konsistan avèk etid sa yo ki te demontre yon wòl pou sistèm nan andojèn opyòd nan rekonpans (Trigo, et al., 2010), ak bay yon mekanis potansyèl pou onFOSB-medyatè efè sou rekonpans. Nan contrast, CB₁R-medyatè siyal nan NAc a pa te siyifikativman afekte pa striatal ekspresyon BFosB nan kondisyon yo egzamine, byenke plis syans yo jistifye yo detèmine efè onFosB endiksyon sou sistèm nan endocannabinoid.

Pwen esansyèl rechèch la

Siyal MOR ogmante nan nwayo accumbens sourit yo ki eksprime ΔFosB
KOR anpèchman nan adenylyl siklaz tou amelyore nan sourit yo eksprime ΔFosB
Ekspresyon BFosB pa chanje CB₁R siyal nan nwayo accumbens la

Materyèl siplemantè

01

Klike la a pou wè.^{(NT, pdf)}

Remèsiman

Otè yo remèsye Hengjun Li, lòt bò larivyè Jouden Cox ak Arawon Tomarchio pou asistans teknik ak nan [...³⁵S] GTPγS obligatwa assays. Etid sa a te sipòte pa USPHS Sibvansyon DA014277 (LJS), DA10770 (DES) ak P01 DA08227 (EJN).

Nòt anba paj

Limit responsabilite Piblikatè a: Sa a se yon dosye PDF nan yon maniskri inedan ki te aksepte pou piblikasyon. Kòm yon sèvis nan kliyan nou yo nou ap bay vèsyon sa a byen bonè nan maniskri a. Maniskri a pral sibi copyediting, sijè, ak revizyon prèv ki vini an anvan li pibliye nan fòm final li yo. Tanpri sonje ke pandan erè pwosesis pwodiksyon yo ka dekouvri ki ta ka afekte kontni an, ak tout avètisman legal ki aplike nan jounal la konsène.

Referans

Bozarth MA, Wise RA. Anatomikman distenk jaden reseptè opyat medyasyon rekonpans ak depandans fizik. Syans. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Yon metòd rapid ak sansib pou quantification nan kantite mikwo nan pwoteyin itilize prensip la nan pwoteyin-lank obligatwa. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, SA Deadwyler, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kronik delta⁹Tretman tetrahydrocannabinol pwodui yon pèt tan ki depann de G-pwoteyin cannabinoid aktive reseptè nan sèvo. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid reseptè agonist efikasite pou enteresan [...³⁵S] GTPγS obligatwa nan rat membranes serebele korèl ak agonist-induit diminye nan rapor GDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Konpòtman sansibilizasyon apre repete ekspoze nan Delta 9-tetrahydrocannabinol ak kwa-sansibilizasyon ak morfin. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Konpòtman sansibilizasyon delta 9-tetrahydrocannabinol ak kwaze-sansibilizasyon ak morfin: chanjman diferans nan koki accumbal ak debaz transmisyon Dopamine. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Bèt transjenik ak entuzyab, vize ekspresyon jèn nan sèvo. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Dezyèm mesaje reseptè opioid-makonnen. Lavi Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opyoyid ak cannabinoid anpeche reseptè a adenylyl cyclase nan sèvo. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid reseptè eksitasyon nan [...³⁵S] GTPYA obligatwa nan sèvo kochon Gine: Mank prèv pou kappa₂-selektif aktivasyon nan G-pwoteyin. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Rejyon selektif monte-règleman nan mikwo-, delta- ak kappa-opioid reseptè men pa reseptè opioid ki tankou reseptè 1 nan sèvo yo nan enkephalin ak dinozondin pentch sourit. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Selil eksyatris tip-espesifik twòp eksè nan DeltaFosB amelyore ankourajman pou kokayin. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Sistèm siyal endokanabinoid ak rekonpans nan sèvo: anfaz sou dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Efè motivasyon cannabinoid yo medyatè pa reseptè mu-opioid ak kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Karakterizasyon ak lokalizasyon nan reseptè cannabinoid nan sèvo rat: yon quantitative nan etid autoradiographic vitro. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. lokalizasyon cannabinoid CB (1) mRNA reseptè nan nerono subpopul nan striatum rat: yon doub-mete etikèt sou sit hybridization etid. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Inyon entènasyonal nan farmakoloji. XXVII. Klasifikasyon nan reseptè cannabinoid. Revizyon farmakolojik. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, DA Gorelick, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blokaj nan efè marijuana fimen pa antisipe a recette cannabinoid CB1-selektif SR141716. Arch. Jeneral Sikyatri. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, DW pwòp tèt ou, Tkatch T, Baranauskas G, DJ Surmeier, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ekspresyon transtaks faktè deltaFosB nan sèvo a kontwole sansiblite a kokayin. Lanati. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry de dejwe. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC gratis atik] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Tretman kwonik avèk Delta (9) -tetrahydrocannabinol amelyore repons lokomotè a anfetamin ak ewoyin. Enplikasyon pou vilnerabilite a dejwe dwòg. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Patisipasyon sistèm endokanabinoid la nan depandans dwòg. Tandans Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. espresyon m-opiyid pou reseptè mRNA nan rat CNS yo: konparezon avèk obligatwa reseptè mu. Resjin nan sèvo. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Pèt morfojèn-pwovoke analgesia, efè rekonpans ak sentòm retrè nan sourit ki manke µ-jèn nan reseptè opioid. Lanati. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Regilasyon ekspresyon jèn ak rekonpanse kokayin pa CREB ak DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: yon switch molekilè pou alontèm adaptasyon nan sèvo a. Sèvo Res. Mol. Sèvo Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. Reseptè D1 Dopamine modile deltaFosB endiksyon nan striatum rat apre yo fin tanzantan administrasyon morfin. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Revize. Transcriptional fòmil de dejwe: wòl DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC gratis atik] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: yon medyatè molekilè medikaman nan yon tan ki long ak konpòtman. Resjin nan sèvo. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye li, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Syans farmakolojik nan règleman an nan kwonik FOS ki gen rapò ak antijèn endiksyon pa kokayin nan striatum la ak nwayo accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Endisibl, sèvo ekspresyon rejyon-espesifik nan yon mutan dominan negatif nan c-Jun nan sourit transjenik diminye sansiblite a kokayin. Resjin nan sèvo. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze mwen, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Modèl distenk nan endiksyon DeltaFosB nan sèvo pa dwòg abi. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC gratis atik] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, J Bockaert, Manzoni OJ. Lokalizasyon ak mekanism aksyon nan reseptè cannabinoid nan sinaps glutamatergic nan accumbens yo nwayo sourit. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid receptor stimulated³⁵S] GTPYA obligatwa nan talaman rat ak liy selil kiltive: mekanis transdiksyon siyal kache efikasite agonis lan. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Sistèm opioid andojèn yo: yon substra komen nan dejwe dwòg. Dwòg Alkòl depann. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Lokalizasyon newo-anatomik reseptè opioid κ1 ak κ2 nan sèvo rat ak kochon Gine. Resjin nan sèvo. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokaj nan nwayo accumbens reseptè opyatèn diminye rekonpans ewoyèn nan venn nan rat la. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, C Castiglioni, Parolaro D. Molekilè mekanism ki patisipe nan entèraksyon asimetri ant cannabinoid ak sistèm opioid. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Yon wòl esansyèl pou DeltaFosB nan nwayo accumbens yo nan aksyon morfin. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, RA saj. De sit nan sèvo pou rekonpans cannabinoid. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktivasyon nan reseptè klonye imen opioid kappa pa agonist amelyore [35S] GTPGN lye nan manbràn: detèminasyon potencies ak efficacies nan ligan. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, P Robledo, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Absans delta - Efè dysphoric delta -NNUMX-tetrahydrocannabinol nan sourit dinòfen-ensufizant. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Ogmantasyon mòtalite, ipèaktivite, ak ipoalgensya nan cannabinoid CB1 reseptè pentan sourit yo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [PMC gratis atik] [PubMed]