CRR sistèm rekritman mediés bò nwa nan konpulsif manje (2009)

. 2009 novanm 24; 106(47): 20016–20020.

Pibliye sou entènèt 2009 Nov 9. fè:  10.1073 / pnas.0908789106

PMCID: PMC2785284

Abstrè

Rejim pou kontwole pwa kò enplike nan sik privasyon nan manje gou ki ka ankouraje manje konpulsif. Etid la montre ke rat yo retire nan aksè tanzantan nan manje ki gen bon gou montre twòp manje ki gen bon gou lè yo renouvle aksè ak yon eta ki sanble ak yon retrè afektif ki karakterize pa faktè 1 ki bay kortikotropin (CRF).1) konpòtman antagonist-revèsib reseptè, ki gen ladan ipofaji, defisi motivasyon pou jwenn manje mwens gou, ak konpòtman ki sanble ak enkyetid. Retrè te akonpaye pa ogmante ekspresyon CRF ak CRF1 repons elektwofizyolojik nan nwayo santral amigdala a. Nou pwopoze ke rekritman nan anti-rekonpans ekstrahypothalamic CRF-CRF1 sistèm pandan retrè nan manje gou, analogue ak Abstinans nan dwòg abi, ka ankouraje seleksyon konpulsif nan manje gou, undereating nan altènativ ki pi bon an sante, ak yon eta emosyonèl negatif lè konsomasyon nan manje gou yo anpeche.

Keywords: maladi manje, obezite, gou, depandans manje gou, retrè

Fòm obezite ak maladi manje, menm jan ak dejwe dwòg, yo ka konseptyalize kòm kondisyon kwonik renouvlab ak peryòd altène nan abstinans (sa vle di, rejim pou evite "entèdi" manje gou) ak rplonje (sètadi, konpulsif, souvan enkontwolab, manje manje ki wo-). manje gou) ki kontinye malgre konsekans negatif (). Malgre ke pwopriyete yo ranfòse pozitif nan manje gou yo byen li te ye (, ), yo te bay mwens atansyon sou pwopriyete ranfòsman negatif yo (-), sètadi ogmante pwobabilite pou yon repons konpòtman ki te pwodwi pa retire yon estimilis advèrsif (egzanp, konsomasyon manje gou pou soulaje eta emosyonèl negatif). Sik tanzantan nan itilizasyon pwolonje dwòg abi ka pwogresivman mennen nan "depandans afektif," obsève kòm yon bezwen pou pi wo ak/oswa pi regilye kantite dwòg la pou kenbe yon pwen emosyonèl yo bay ansanm ak yon eta emosyonèl negatif lè yo sispann. konsomasyon dwòg (, ). Retrè afektif sa a ka kenbe itilizasyon ak motive rplonje atravè pwopriyete negatif ranfòse nan kontinye ak rekòmanse itilizasyon dwòg, respektivman (, ).

Sistèm estrès nan sèvo ekstrahypothalamic corticotropin-release factor (CRF) yo swadizan patisipe nan tranzisyon an soti nan itilizasyon dwòg nan depandans, pandan ki konsomasyon nan dwòg abi vin de pli zan pli motive pa mekanis ranfòsman negatif, olye ke pozitif, mekanis ranfòsman sa yo. CRF jwe yon wòl enpòtan pou motivasyon nan sendwòm retrè pou chak gwo dwòg abi, ki gen ladan alkòl, nikotin, kokayin, opiate, anfetamin, ak tetrahydrocannabinol., ). Pa analoji, sik repete nan tanzantan, aksè pwolonje a manje trè bon gou yo te ipotèz pwovoke neroadaptasyon sistèm CRF menm jan ak sa yo wè nan modèl depandans dwòg., , ).

rezilta

Aksè tanzantan, pwolonje a manje ki gen bon gou, pwogresivman mennen nan manje mwens pito yo lè manje ki gen bon gou pa disponib epi pou manje twòp nan manje ki gen bon gou lè yo renouvle aksè (-). Pou teste ipotèz la ke CRF1 sistèm medyatè adaptasyon manje sa yo, gason rat Wistar (n = 20) yo te bay yon rejim chow ad libitum (Chow/Chow) chak jou chak semèn oswa yo te bay chow ad libitum pou 5 jou (faz C) ki te swiv pa yon rejim trè gou, ki gen sik ladan pou 2 jou (faz P) (Chow/Palatable). ) (gade Figi S1 pou orè rejim alimantè ak Figi S2 pou efè orè rejim alimantè sou konsomasyon manje ak pwa kò). Apre 7 semèn nan rejim alimantè bisiklèt, rat te resevwa CRF ki pa peptide1 antagonist reseptè R121919 (0, 5, 10, ak 20 mg/kg, sc) nan yon konsepsyon kare Latin (). Tretman yo te bay 1 èdtan anvan chanje soti nan rejim gou nan manje oswa soti nan rejim alimantè gou. R121919 depann de dòz la diminye konsomasyon rejim alimantè gou ak ogmante konsomasyon manje chow nan rat Chow/Palatable (Faz Rejim × Orè Rejim × Dòz Medikaman: F3,54 = 7.25, P <0.001), san yo pa chanje konsomasyon nan kontwòl chow. R121919 diminye konsomasyon nan rejim alimantè ki trè gou lè yo renouvle aksè nan manje ki bon gou (faz P) (Fig. 1A). Nan tès endepandan, CRF la1 antagonist reseptè ogmante konsomasyon nan manje ki gen mwens gou nan rat Chow/Palatable ki retire nan rejim alimantè a gou (faz C) (Fig. 1B). Kidonk, lè w diminye tou de ipofaji chow ak manje twòp nan manje ki bon gou, R121919 diminye anplitid sikilasyon konsomasyon (diferans ki genyen ant konsomasyon pandan premye faz P gou ak premye retrè nan faz chow C: Orè Rejim × Dòz Dwòg: F3,54 = 7.25, P <0.001) (Fig. 1C). Sipòte yon rekritman pwogresif nan CRF-CRF1 sistèm nan istwa rejim alimantè a, olye ke pa yon efè rejim alimantè egi, R121919 pa t 'diminye konsomasyon manje gou apre yon sèl ekspoze nan rejim alimantè a oswa ogmante konsomasyon manje pandan yon premye retrè nan manje gou (Figi S3).

Fig. 1. 

Efè CRF a1 antagonist reseptè R121919 (-1 h pretretman, 0, 5, 10, ak 20 mg / kg, sc) sou konsomasyon manje kimilatif 3 h nan (A) Faz P (sou renouvle aksè a manje ki bon gou), (B) Faz C (lè rat yo te retire nan gou a ...

Retrè nan tanzantan, pwolonje aksè a manje gou tou ka ogmante konpòtman ki tankou enkyetid (). Pou teste ipotèz la ke CRF1 reseptè yo patisipe nan siy konpòtman negatif emosyonèl ki swiv retrè nan manje gou, rat yo te administre R121919 (0, 20 mg / kg, sc, 1-h pretreatman) ak teste nan yon konsepsyon ant-sijè nan elve plis-labirent la (), 5-9 èdtan apre yo te chanje soti nan rejim gou nan manje. Veyikil-trete Rat Chow/Palatable montre mwens tan louvri bra pase kontwòl chow-fed, ki reflete yon efè tankou enkyetid, pandan retrè nan 7 semèn nan bisiklèt rejim alimantè (Fig. 2A), yon efè ki poko wè apre sèlman de sik retrè (Figi S4). Pretretman ak R121919 (20 mg/kg, dòz la ki modile tou de twòp manje ak manje ki pa gen anpil gou) bloke diminisyon nan eksplorasyon bra louvri pa rat Chow/Palatable nan yon dòz ki pa t chanje konpòtman plis-labirent nan kontwòl chow ( Orè rejim alimantè × Dòz: F1,43 = 7.25, P <0.02; Fig. 2Yon Goch). R121919 administrasyon an pa t chanje aktivite jeneral yo mezire kòm antre bra fèmen. Se poutèt sa, R121919 bloke konpòtman ki sanble ak enkyetid ki ogmante ki asosye ak retrè nan aksè pwolonje ak tanzantan nan manje gou, san yo pa chanje konpòtman kontwòl yo, ki sijere rekritman nan CRF.1 sistèm yo.

Fig. 2. 

Efè CRF a1 antagonist reseptè R121919 (-1 h pretretman, 0, 20 mg / kg, sc) sou konpòtman ki wo plis labirent (n = 47) ak pwogresif-rapò ki reponn pou manje a mwens gou (n = 17) nan rat gason Wistar retire nan manje gou ...

Retrè nan tanzantan, pwolonje aksè a manje gou tou ka mennen nan defisi motivasyon yo jwenn mwens alimantasyon pi pito, yon endèks potansyèl de konpòtman ki tankou ipoedònik (). Menm jan an tou, reponn pou ranfòsman gou mwens prefere anba orè ranfòsman pwogresif yo te deja itilize pou endis defisi motivasyonèl yo te wè pandan retrè dwòg (). Pou detèmine patisipasyon CRF1 reseptè yo, nou teste efè R121919 sou pèfòmans rat ki fè sik ak rejim alimantè yo pou jwenn manje ki pi pito yo nan yon orè pwogresif. Konfime rezilta anvan yo (), rat Chow/Palatable ki te trete ak machin yo te montre mwens motivasyon pou yo travay pou yo ka jwenn manje ki gen mwens gou a, ki reflete pa yon diminisyon pwen rupture ak repons total ki emèt yo konpare ak rat Chow/Chow () (Figi S5). R121919 pretreatman (20 mg / kg, dòz la efikas nan ogmante ipofaji chow, diminye ipèfaji manje gou ak diminye konpòtman anksyojenik) oaza efase defisi yo nan pèfòmans pwogresif-rapò nan rat rejim alimantè-siklèt nan yon dòz ki pa efikas nan kontwòl chow. (Pwen repo: Orè Rejim × Medikaman: F1,15 = 8.17, P <0.02; repons total: Orè Rejim × Medikaman: F1,15 = 9.14, P <0.01; Fig. 2B, agoch). Kont entèpretasyon altènatif ke R121919 te fasilite pèfòmans nan rat Chow/Palatable nan diminye satiyasyon postingestif, R121919 bloke defisi yo nan reponn osi bonè ke 5 minit nan sesyon an (Orè Rejim × Medikaman: F1,15 = 2.55, P <0.05) (Fig. 2B Dwa). Se poutèt sa, CRF la1 antagonist reseptè blunted defisi yo motivasyon nan pwogresis-rapò reponn pou mwens pi pito ranfòsman gou ke yo wè nan bèt retire nan tanzantan, pwolonje aksè a manje trè gou.

Pou teste ipotèz ke retrè nan manje gou ta ka aktive sistèm CRF ekstrahypothalamic ki gen rapò ak estrès, nivo CRF mRNA ak peptide nan nwayo santral la nan amygdala yo te mezire pa PCR an tan reyèl ak RIA, respektivman. Rat yo te fè sik nan rejim alimantè pou 7 semèn oswa manje chow kontinyèlman. Apre anestezi ak dekapitasyon, pwenson nan sèvo ki soti nan nwayo santral la nan amygdala yo te kolekte pandan retrè nan ak apre renouvle aksè nan rejim alimantè a gou. Retire manje gou nan rat Chow/Palatable pwovoke yon ogmantasyon senk fwa nan ekspresyon mRNA CRF nan nwayo santral amygdala a konpare ak rat Chow/Chow (Fig. 3A). Okontrè, CRF mRNA te retounen nan nivo kontwòl ak renouvle aksè a manje gou (F2,19 = 6.97, P <0.01). Ekspresyon mRNA CRF nan nwayo santral amygdala a pa t chanje lè rat Chow/Palatable yo te monte bisiklèt yon sèl fwa (Chow/Chow vs Chow/Palatable: 5.5 ± 2.2 vs 6.3 ± 1.7 ns), sipòte yon rekritman pwogresif nan CRF- CRF1 sistèm pa istwa rejim alimantè a, olye ke pa yon efè egi nan rejim alimantè a. Anplis de sa, ekspresyon CRF mRNA pa t 'chanje nan nwayo accumbens, cortical prefrontal oswa cortical ensulè, sipòte espesifik rejyonal la nan rezilta yo (Figi S6). Enteresan, pa gen okenn chanjman enpòtan nan ekspresyon mRNA CRF yo te obsève nan nwayo a paraventricular nan ipotalamus la oswa nan sikile kortikosteron nan menm pwen an retrè tan nan rat Chow/Palatable.Fig. S6 ak S7), sigjere ipotèz la ke chanjman nan amygdalar, olye ke ipotalamik, sistèm estrès CRF tou pre subserver adaptasyon konpòtman yo. Anplis, iminoreaktivite peptide CRF nan nwayo santral la nan amigdala bèt yo retire nan rejim alimantè a gou te 70% pi wo pase nan bèt manje manje, men li te retounen nan nivo kontwòl manje ak aksè nan rejim alimantè a gou (F2,24 = 4.01, P <0.01) (Fig. 3B). Kidonk, retire manje gou aktive sistèm peptide CRF ki gen rapò ak estrès nan nwayo santral amygdala a, menm jan ak rezilta nan modèl retrè dwòg ak etanòl (, ). Paske renouvle aksè a manje bon gou diminye deklanchman sistèm extrahypothalamic CRF nan nwayo santral la nan amygdala a, kote deklanchman CRF lye ak enkyetid (), rezilta prezan yo tou sijere ke manje gou ta ka jwenn pwopriyete negatif ranfòse nan soulaje konsekans afektif negatif nan abstinans ().

Fig. 3. 

Efè altènasyon rejim alimantè gou sou (A) CRF mRNA ak (B) Ekspresyon peptide CRF nan nwayo santral amigdala a. Rat (n = 45) yo te sikile rejim alimantè pou 7 semèn, epi yo te kolekte nwayo santral pwenson amygdala yo. Tou de CRF mRNA ak peptide ...

Pou teste ipotèz ke rat yo retire nan manje gou ta ka montre ogmante sansiblite nan CRF1 modulation antagonis nan siyal γ-aminobutyric asid (GABA) nan nwayo santral la nan amygdala a, ki rive pandan retrè etanòl (), nou egzamine efè R121919 sou transmisyon GABAergic nan nwayo santral newòn amygdala yo nan yon preparasyon tranch. Gason rat Wistar (n = 14) yo te fè sik nan rejim alimantè pou 7 semèn epi yo te sakrifye apre yo te chanje nan manje a mwens gou. Transmisyon GABAèjik bazal nan nwayo santral sinaps amigdala yo pa t diferan an relasyon ak istwa rejim alimantè a.n = 23 selil) atravè tout entansite estimilis yo itilize pou evoke potansyèl GABA-inhibitory postsynaptic (IPSP). Sepandan, 20 min superfusion ak R121919 (1 μM) pwovoke yon pi gwo rediksyon nan evoke GABA.A-IPSP nan nwayo santral newòn amygdala rat Chow/Palatable (M± SEM: 30 ± 6%, n = 9 selil) pase nan kontwòl chow-fed (M ± SEM: 12 ± 6%, P <0.05, n = 11 selil) (Fig. 4). Apre yon peryòd lave 30 minit, IPSP tou de gwoup yo te retounen nan nivo ki sanble ak debaz yo. Se poutèt sa, ki konsistan avèk overactivation nan amygdala CRF-CRF la1 sistèm ak efè yo wè pandan retrè etanòl (), rat rejim alimantè yo te montre yon sansiblite ogmante nan efè inhibition yon CRF1 antagonist reseptè sou nwayo santral transmisyon GABAèjik amigdala a.

Fig. 4. 

Efè CRF a1 antagonist reseptè R121919 sou GABAA-IPSPs nan nwayo santral la nan amygdala a apre yon istwa nan altène aksè rejim alimantè gou nan rat gason Wistar (n = 14) retire nan aksè manje gou. (A) R121919 siyifikativman diminye ...

Diskisyon

Rezilta kolektif yo bay prèv fonksyonèl ke yon istwa aksè pwolonje ak tanzantan nan manje bon gou mennen nan neuroadaptasyon pwogresif, ki enpòtan pou motivasyon nan CRF-CRF ekstrahypothalamic ki gen rapò ak estrès.1 sistèm yo. Espesyalman, CRF selektif la1 antagonist reseptè R121919 afekte yon fason diferan ak selektif manje nan rat ki fè sik nan rejim alimantè a, ogmante konsomasyon regilye manje ak diminye konsomasyon manje ki trè gou lè yo renouvle aksè. CRF la1 antagonist reseptè tou oaza bloke konpòtman an enkyetid ki sanble ak defisi motivasyonèl nan reponn pou chow mwens pi pito ki te wè pandan retrè nan rejim alimantè a gou. Retire aksè nan rejim alimantè a gou ogmante jèn CRF ak ekspresyon peptide nan nwayo santral la nan amygdala a, efè ki te elimine ak aksè renouvle. Anplis de sa, rat rejim alimantè yo te montre yon sansiblite ogmante nan efè inhibition yon CRF1 antagonist reseptè sou transmisyon GABAèjik nan nwayo santral la nan amygdala a, plis sijere overactivation nan amygdala CRF-CRF la.1 sistèm. Manje twòp nan manje gou lè renouvle aksè a ka lakòz nan ogmantasyon sistèm CRF deklanchman nan peryòd retrè ki fèk fini, yo wè kòm yon ekspresyon ogmante CRF ak sansiblite elektwofizyolojik nan CRF.1 blokaj reseptè nan nwayo santral amigdala a. CRF1 Pretretman antagonis jis anvan aksè manje gou yo entèprete konsa pou opoze okòmansman toujou prezan CRF-CRF la.1 sistèm overactivation nan retrè. Kou a kout tan nan manje bon gou manje twòp otreman wè nan bèt ki pa trete () ka reflete kou tan ki ekspresyon, lage, ak efè peptide CRF nòmal yon fwa yo jwenn aksè a manje gou, jan yo wè nan etid prezan an. Kidonk, manje tanzantan manje gou ka pwovoke yon chanjman allostatik nan sistèm rekonpans sèvo ak rekritman nan CRF-CRF anti-rekonpans.1 sistèm nan nwayo santral amigdala a.

Rezilta sa yo gen enplikasyon pa sèlman pou manje konpulsif, men tou pou motivasyon an jeneral. Aktivasyon repete sistèm edonik yo te pwovoke pwosesis opozan nan sèvo a (sa vle di, rekritman CRF).1 sikwi) ki te diferan de yon senp pèt fonksyon nan sistèm transmetè rekonpans yo. Neoadaptasyon ant sistèm sa yo () rive tou pandan tranzisyon an nan depandans sou tout gwo dwòg abi (, ). Jeneralizasyon nan estimilis ki pa dwòg nan etid prezan an sijere ke pwosesis motivasyonèl yo ka vin perturbe nan moun ki fè eksperyans diferansye repete nan entansite nan estimilis edonik sou tan.). Adaptiveman, pwosesis sa yo ka chanje konpòtman k ap chèche manje ak konsomasyon anvè manje ki gen anpil enèji, ki gen anpil rekonpans, pandan y ap devalorize efò pou jwenn mwens enèji ki rich, manje ki pa gen anpil rekonpans (oswa ki pa manje), yon adaptasyon ki itil pou evolisyonè lè genyen. depans pou manje (egzanp, ekspoze predatè, tan limite ak resous enèji). Nan anviwònman jodi a, sepandan, menm pwosesis yo ka kondwi konsomasyon nan manje ki ankouraje obezite nan depans lan nan mwens bon gou, men petèt plis altènatif nourisan.

Kidonk, chanjman ki sanble ak dejwe nan CRF1 sistèm yo ka ede kondwi (i) konsome bon jan kantite manje ki gen anpil enèji, (ii) sous-konsomasyon nan altènativ ki pi an sante, ak (iii) eta emosyonèl negatif ki asosye ki rive lè yo anpeche aksè a manje bon gou (, , -, ). Tradui nan kondisyon imen an, deklanchman sistèm CRF ka ankouraje rplonje manje nan obezite ak maladi manje ki gen rapò ak osi byen ke lòt sequel motivasyonèl negatif nan abstinans siklik soti nan manje gou.

Materyèl ak Metòd

Sijè yo.

Gason rat Wistar (n = 155, 180–230 g, 45 jou) yo te jwenn nan Charles River ak yon sèl-loje lè yo rive nan fil-antè, kaj plastik (19 × 10.5 × 8 pous) nan yon sik limyè ranvèse 12 h: 12 h (10). :00 h limyè koupe), imidite- (60%) ak tanperati-kontwole (22 °C) vivarium. Rat te gen aksè a manje wonjè ki baze sou mayi [Harlan Teklad LM-485 Rejim 7012: 65% (kcal) idrat kabòn, 13% grès, 21% pwoteyin, enèji metabolizable 341 cal/100 g] ak dlo ad libitum pou 1 semèn anvan an. kòmansman eksperyans yo. Pwosedi eksperimantal yo respekte Gid Enstiti Nasyonal Sante pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa yo (Piblikasyon NIH nimewo 85–23, revize an 1996) ak “Principles of laboratory animal care” (http://www.nap.edu/readingroom). /bookslabrats) epi yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal nan Scripps Research Institute.

Dwòg.

R121919 te sentèz jan sa dekri nan Chen et al. (). R121919 se yon gwo afinite (Ki = 3.5 nM) selektif CRF1 antagonist ak pwopriyete fizyochimik siperyè anpil lòt CRF1 antagonis (egzanp, diminye logP ak logD, ogmante solubilite dlo) (). Pou tès, R121919 te premye solubilize nan 1 M HCl (10% nan volim final), Lè sa a, dilye nan yon machin final nan 20% (wt / vol) 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (Sigma-Aldrich), tounen-titre ak NaOH a pH 4.5. Solisyon R121919 la te administre sc (sc) nan yon volim 2 mL/kg.

Altènasyon Rejim Ad Libitum.

Apre aklimatasyon, rat yo te divize an de gwoup matche pou konsomasyon manje, pwa kò, ak efikasite manje nan 3-4 jou anvan yo. Yon gwoup te bay yon rejim chow ("Chow") ad libitum 7 jou pa semèn (Chow/Chow), epi yon dezyèm gwoup te bay chow ad libitum pou 5 jou chak semèn ki te swiv pa 2 jou ad libitum aksè a trè gou. , chokola gou, rejim alimantè ki gen anpil sikwoz ("Palatable"; Chow/Palatable). Rejim alimantè a gou se yon rejim nitrisyonèl konplè, ki gen gou chokola, ki gen anpil sikwoz (50% kcal), ki baze sou AIN-76A ki konparab nan pwopòsyon makronutriman ak dansite enèji ak rejim alimantè chow la [TestDiet; Chokola-aromatize Fòmil 5TUL: 66.8% (kcal) idrat kabòn, 12.7% grès, 20.5% pwoteyin, enèji metabolizable 3.48 kcal / g; fòmile kòm granules manje presizyon 45-mg pou ogmante preferans li yo (, )]. Pou konsizyon, yo refere 5 premye jou yo (chow sèlman) ak 2 dènye jou (chow oswa gou selon gwoup eksperimantal) chak semèn nan tout eksperyans kòm faz C ak P. Rejim pa t janm disponib ansanm. Rejim Chow te swa Harlan Teklad LM-485 Rejim 7012 [65% (kcal) idrat kabòn, 13% grès, 21% pwoteyin, enèji metabolizable 341 cal/100 g] oswa rejim 5TUM fòmile kòm 4- a 5-g granules extrudée [65.5 % (kcal) idrat kabòn, 10.4% grès, 24.1% pwoteyin, enèji metabolizable 330 cal/100 g; TestDiet]. Menm jan ak etid anvan yo, Harlan Teklad LM-485 chow te itilize nan manje ak eksperyans elve plis-labirent (), pandan y ap TestDiet 5TUM chow () te itilize nan pwogresif-rapò a, CRF mRNA, CRF peptide kontni, kortikosteron RIA ak eksperyans elektwofizyolojik.

Jan te pibliye deja (), preferans rejim alimantè relatif, kalkile kòm pousantaj nan konsomasyon chak jou (kcal) nan premye rejim alimantè a an relasyon ak rejim alimantè a dezyèm, yo te sa ki annapre yo: 5TUL Rejim Chokola (rejim alimantè ki gen sik ladann) kont Harlan LM-485 chow (M± SEM). preferans 90.7 ± 3.6%) ak 5TUL Chokola Rejim (rejim alimantè ki gen sik nan gou) vs 5TUM Chow Rejim (M ± SEM preferans 91.2 ± 3.7%).

Elve Plus-labirent.

Tès laplis-labirent ki wo yo te fèt jan sa dekri nan Cottone et al. (). Rat Chow/Palatable yo te fè sik nan rejim alimantè pou omwen 7 semèn epi apre yo te pretrete ak swa machin oswa 20 mg/kg R121919 (-1 h, sc) epi yo te teste 5-9 èdtan apre yo te chanje soti nan rejim alimantè a gou pou manje (P). →C faz). Yo te teste rat kontwòl Chow/Chow ansanm nan yon konsepsyon ant matyè yo (n = 47). Rejim Chow te disponib ad libitum jouk lè tès la. Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Pwogresif-Rapò orè ranfòsman pou manje.

Orè pwogresif-rapò ranfòsman pou manje te fèt jan sa dekri nan Cottone et al. (). Bèt yo te resevwa ad libitum A/I chow (5 g granules extruded) nan kalòj lakay yo pandan tout eksperyans la sof si sa presize. Ranfòsman manje yo te 45-mg chow-presizyon granules, ki idantik nan konpozisyon ak rejim alimantè a chow kay extrudée. Sesyon yo te fini lè matyè yo pa t konplete yon rapò pou 14 minit, ak dènye rapò ki te konplete yo te defini kòm pwen rupture a. Rat Chow/Palatable yo te fè sik nan rejim alimantè pou omwen 7 semèn epi apre yo te pretrete ak R121919 (-1 h, sc) nan moman yo te chanje soti nan rejim gou pou manje (faz P → C). Yo te teste rat kontwòl Chow/Chow ansanm nan yon konsepsyon ant matyè yo (n = 17). Dòz R121919 (0, 20 mg/kg pwa kò, sc) yo te bay nan yon konsepsyon andedan-sijè, kontrebalance atravè de sik rejim alimantè. Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Quantitative PCR an tan reyèl.

Ratn = 20) yo te fè sik nan rejim alimantè pou 7 semèn, anestezi, ak dekapite pandan de kondisyon rejim alimantè yo (jou 5 ak 7 nan chak sik chak semèn). Sèvo yo te byen vit retire epi koupe kouwòn nan yon matris sèvo, ak nwayo santral amygdala a, nwayo accumbens, cortical insular, ak pwenson cortical prefrontal yo te kolekte sou yon etap frèt. Yo te prepare RNA total nan chak kout pwen nan sèvo lè l sèvi avèk yon pwotokòl estanda pou fè ekstraksyon RNA nan tisi bèt yo. Lè sa a, RNA total (1 μg) te ranvèse transkri an prezans Oligo (dT) 20 dapre enstriksyon manifakti a. Reyaksyon RT-PCR kantite yo te pote soti nan yon volim 20-μL lè l sèvi avèk 0.5 μM primè ak 4 mM MgCl.2. Rezilta yo te analize pa metòd dezyèm dérivés ak eksprime nan inite abitrè, nòmalize nan nivo ekspresyon nan jèn referans la, CypA. Tout reyaksyon RT-PCR pou yon sekans bay yo te fèt nan menm kouri a. Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Ekstraksyon Asid Peptide ak CRF RIA.

Ratn = 25) yo te fè sik nan rejim alimantè pou omwen 7 semèn, anestezi, ak dekapite pandan de kondisyon rejim yo (jou 5 ak 7 nan chak sik chak semèn). Sèvo yo te byen vit retire epi koupe coronal nan yon matris nan sèvo, ak nwayo santral nan pwenson yo amygdala yo te kolekte sou yon etap glas-frèt. Ekstraksyon asid peptide swiv yon pwosedi deja etabli (). Iminoreaktivite tisi ki tankou CRF te mezire ak yon RIA sansib ak espesifik solid-faz adapte nan Zorrilla et al. (). Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Kortikosteron RIA.

Ratn = 12) yo te fè sik nan rejim alimantè pou omwen 7 semèn, epi yo te pran echantiyon san ke pandan de kondisyon rejim yo (jou 5 ak 7 nan chak sik chak semèn). Nivo plasma nan iminoreaktivite ki sanble ak kortikosteron yo te detèmine ak yon twous RIA ki disponib nan komès, dapre enstriksyon manifakti a (MP Biomedicals, Inc.) (). Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Etid elektwofizyolojik

Preparasyon tranch.

Nwayo santral tranch amygdala yo te prepare jan sa te dekri anvan an (, ) soti nan rat (n = 7/gwoup) ki te fè sik nan rejim alimantè pou omwen 7 semèn, anestezi, epi dekapite 2-3 èdtan apre yo te retire nan manje gou. Sèvo yo te rapidman retire epi yo mete yo nan likid serebrospinal atifisyèl (aCSF) ki frèt ak 95% O.2 ak 5% CO2. Tranch yo te koupe, enkube nan yon konfigirasyon koòdone pou apeprè 30 minit, ak konplètman submerged ak kontinyèlman superfused ak aCSF cho, gaze. Dwòg yo te ajoute nan aCSF a soti nan solisyon stock yo jwenn konsantrasyon li te ye nan superfusate la. Nan pousantaj sipèfizyon 2-4 mL/min yo itilize, konsantrasyon dwòg rive nan 90% konsantrasyon rezèvwa a nan 2 minit.

Electrophysiology.

Nou anrejistre nwayo santral newòn amygdala yo ak mikwopipèt byen file lè l sèvi avèk mòd vòltaj diskontinyèl oswa aktyèl kranpon. Nou te kenbe pifò newòn tou pre potansyèl manbràn repo yo. Done yo te akeri ak yon preamplifier epi estoke pou analiz pita lè l sèvi avèk lojisyèl pClamp. Farmakolojik izole GABAA Reseptè-medyatè potansyèl inhibitory postsinaptik (GABAA-IPSPs) yo te evoke pa eksitan lokalman nan nwayo santral la nan amygdala a atravè yon elektwòd eksitan bipolè pandan y ap superfusing bloke reseptè glutamate CNQX ak APV ak GABA.B reseptè blocker CGP 55845A. Pou detèmine paramèt repons yo pou chak selil, nou te fè yon pwotokòl antre-sòti. Yo te aplike yon seri de kouran, kòmanse nan papòt aktyèl ki nesesè pou pwovoke yon IPSP jiska vòltaj ki nesesè pou pwovoke anplitid maksimòm lan. Nou nòmalize twa entansite estimilis nan etap egal (papòt, demi-maksimòm, ak maksimòm) kòm 1-3 ×. Hyperpolarizing ak depolarize etap aktyèl yo (enkreman 200-pA, dire 750-ms) tou yo te aplike pou jenere koub vòltaj-aktyèl (VI). Nou te mezire anplitid IPSP yo evoke ak repons VI lè nou itilize lojisyèl Clampfit. Tout mezi yo te pran anvan superfusion ak CRF selektif la1 antagonist reseptè R121919 (1 μM), pandan sipèfizyon li yo (20 min), ak apre lave (30 min). Pou plis detay, gade nan Tèks SI.

Estatistik.

Konpare gwoup yo te itilize Elèv la t-tès (konparezon de gwoup) oswa analiz de divèjans (ANOVA) (omwen twa gwoup konparezon), lèt la entèprete pa senp analiz efè prensipal oswa konparezon Newman-Keuls apre efè omnibus enpòtan (P <0.05). Done ki soti nan eksperyans manje a te analize pa twa-fason melanje ANOVA ak Orè Rejim kòm faktè ant-sijè yo ak Dòz ak Rejim Faz kòm faktè andedan-sijè yo. Done ki soti nan eksperyans nan plis-labirent elve yo te analize pa de-fason ANOVAs ak Orè Rejim ak Dòz kòm faktè ant-sijè. Pou orè pwogresif-rapò nan eksperyans ranfòsman, pwen breakpoint ak repons total yo te analize pa de-fason melanje ANOVA ak Orè Rejim kòm faktè a ant-sijè ak Dòz kòm faktè a andedan-sijè. Tan-kou a nan reponn pandan premye 5 minit yo te analize pa twa-fason melanje ANOVA ak Orè Rejim kòm faktè a ant-sijè ak Dòz ak Tan kòm faktè andedan-sijè. Done ki soti nan syans elektwofizyolojik yo te analize ak yon ANOVA ant-sijè oswa andedan-sijè ANOVA ak mezi repete, jan sa apwopriye. Done ki soti nan kortikosteron RIA kote yo analize pa de-fason melanje ANOVA ak Orè Rejim kòm faktè a ant-sijè ak Faz Rejim kòm faktè a andedan-sijè. Pake estatistik yo te itilize yo se Instat 3.0, Prism 4.0 (GraphPad), Systat 11.0, ak SPSS 11.5 (SPSS).

 

Materyèl siplemantè

Sipò pou Enfòmasyon: 

Remèsiman.

Nou remèsye Mike Arends pou asistans editoryal, Mary Gichuhi pou asistans administratif, ak Bob Lintz, Jeanette Helfers, Stephanie Dela Cruz, ak Molly Brennan pou asistans teknik. Travay sa a te sipòte pa National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases Grant DK70118, DK26741, and P30DK56336; Sibvansyon Enstiti Nasyonal pou Abi Dwòg DA023680; Enstiti Nasyonal pou Abi Alkòl ak Sibvansyon Alkòl AA016731 ​​ak AA015566; Enstiti Nasyonal pou Maladi Newolojik ak Sibvansyon Konjesyon Serebral IT32NS061847-01A2; National Institute on Aging Grant AG028040; National Heart, Lung and Blood Institute Grant HL088083; Fondasyon Medikal Ellison; ak Sant Pearson pou Rechèch Alkòl ak Dejwe. Yon pati nan travay sa a te sipòte pa Pwogram Rechèch Entramural Enstiti Nasyonal pou Abi Dwòg ak Enstiti Nasyonal pou Abi Alkòl ak Alkòl. Sa a se nimewo maniskri 19807 ki soti nan Scripps Research Institute.

Nòt anba paj

 

Otè yo deklare okenn konfli enterè.

 

 

Atik sa a se yon PNAS Dirèk Soumèt.

 

 

Atik sa a gen enfòmasyon sou entènèt sou sipò nan www.pnas.org/cgi/content/full/0908789106/DCSupplemental.

 

Referans

NAN. Volkow ND, Wise RA. Kouman ka dejwe dwòg ede nou konprann obezite? Nat Neurosci. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
2. Corwin RL. Rat bingeing: Yon modèl konpòtman twòp tanzantan? Apeti. 2006;46:11–15. [PMC gratis atik] [PubMed]
3. Boggiano MM, et al. Konsomasyon segondè nan manje bon gou predi manje repa egzajere endepandan de sansiblite nan obezite: Yon modèl bèt nan mèg vs obèz repa egzajere ak obezite ak ak san repa egzajere. Int J Obes. 2007;31:1357–1367. [PubMed]
NAN. Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Prèv pou dejwe sik: efè konpòtman ak newochemik nan konsomasyon tanzantan, twòp sik. Neurosci Biobehav Rev. 4; 2007: 32 – 20. [PMC gratis atik] [PubMed]
NAN. Teegarden SL, Bale TL. Diminye nan preferans dyetetik pwodwi ogmante emosyonèl ak risk pou rplonje dyetetik. Sikyatri Biol. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
NAN. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Opioid ki depann antikatalans kontras negatif ak repa egzajere ki tankou manje nan rat ak aksè limite nan trè prefere manje. Neuropsychopharmacology. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
NAN. Koob GF. Yon wòl pou sistèm estrès nan sèvo nan dejwe. Neuron. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PMC gratis atik] [PubMed]
NAN. Koob GF, Le Moal M. Abi dwòg: dèsregulation Hedonic lakayostatik. Syans. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
9. Ghitza UE, Gray SM, Epstein DH, Rice KC, Shaham Y. Yohimbine dwòg anksyojenik retabli manje ki bon gou nan yon modèl rplonje rat: Yon wòl nan reseptè CRF1. Neropsikofarmakoloji. 2006;31:2188–2196. [PMC gratis atik] [PubMed]
10. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Aksè manje pi pito tanzantan diminye efikasite ranfòsman chow nan rat. Am J Physiol. 2008;295:R1066–1076. [PMC gratis atik] [PubMed]
NAN. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Adaptasyon, ak enkyetid ki gen rapò ak metabolik adaptasyon nan rat fi ak altène aksè a manje pi pito. Psikouroendokrinoloji. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PMC gratis atik] [PubMed]
12. Berner LA, Avena NM, Hoebel BG. Bingeing, oto-restriksyon, ak ogmante pwa kò nan rat Ak aksè limite a yon rejim dous-grès. Obezite. 2008;16:1998–2002. [PubMed]
13. Zorrilla EP, Koob GF. Potansyèl terapetik antagonis CRF1 pou enkyetid. Ekspè Opin Investig Drugs. 2004;13:799–828. [PubMed]
14. Carobrez AP, Bertoglio LJ. Analiz etolojik ak tanporèl nan konpòtman ki sanble ak enkyetid: modèl la plis-labirent elve 20 ane sou. Neurosci Biobehav Rev 2005;29:1193–1205. [PubMed]
15. Markou A, et al. Modèl bèt nan anvi dwòg. Sikofarmakoloji. 1993;112:163–182. [PubMed]
16. George O, et al. Aktivasyon sistèm CRF-CRF1 medyatè ogmantasyon retrè pwovoke nan oto-administrasyon nikotin nan rat ki depann de nikotin. Proc Natl Acad Sci USA. 2007;104:17198–17203. [PMC gratis atik] [PubMed]
NAN. Wells AS, Li NW, Laugharne JD, Ahluwalia NS. Chanjman nan atitid apre ou fin chanje nan yon rejim alimantè ki gen anpil grès. Br J Nutr. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
18. Cruz MT, et al. Antagonis reseptè CRF1 bloke liberasyon GABA ki pwovoke etanòl nan amygdala santral la nan vitro ak nan vivo. Alkòl Clin Exp Res. 2008;32:6s1 P27A.
NAN. Koob GF, Bloom FE. Selilè ak molekilè mekanism depandans dwòg. Syans. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]
20. Flaherty CF, Grigson PS. Soti nan kontras ak ranfòsman: Wòl enprevi repons nan kontras antisipatwa. J Exp Psychol. 1988;14:165–176. [PubMed]
21. Chen C, et al. Konsepsyon 2,5-dimethyl-3-(6-dimethyl-4-methylpyridin-3-yl) -7-dipropylaminopyrazolo [1, 5-a]pyrimidine (NBI 30775/R121919) ak relasyon estrikti-aktivite nan yon seri de antagonist reseptè faktè ki pisan ak oralman aktif kortikotropin-lage. J Med Chem. 2004;47:4787–4798. [PubMed]
22. Cooper SJ, Francis RL. Efè administrasyon egi oswa kwonik nan chlordiazepoxide sou paramèt manje lè l sèvi avèk de teksti manje nan rat la. J Pharm Pharmacol. 1979;31:743–746. [PubMed]
23. Laboure H, Saux S, Nicolaidis S. Efè chanjman teksti manje sou paramèt metabolik: Modèl manje kout ak alontèm ak pwa kò. Am J Physiol. 2001;280:R780–R789. [PubMed]
24. Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. FG 7142 espesyalman diminye gwosè repa yo ak pousantaj ak regilarite manje soutni nan rat fi: Prèv ki montre agonist envès benzodyazepin diminye gou manje. Neropsikofarmakoloji. 2007;32:1069–1081. [PubMed]
25. Lahmame A, Grigoriadis DE, De Souza EB, Armario A. Brain corticotropin-divilge faktè iminoreaktivite ak reseptè nan senk tansyon rat enbred: Relasyon ak konpòtman naje fòse. Sèvo Res. 1997;750:285–292. [PubMed]
26. Zorrilla EP, Valdez GR, Weiss F. Chanjman nan nivo rejyonal CRF-tankou-iminoreaktivite ak plasma kortikosteron pandan retrè dwòg pwolonje nan rat depandan. Sikofarmakoloji. 2001;158:374–381. [PubMed]
27. Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Tallent MK, Siggins GR. Etanòl ogmante transmisyon GABAèjik nan tou de sit pre- ak postsynaptic nan rat santral newòn amygdala. Proc Natl Acad Sci USA. 2003;100:2053–2058. [PMC gratis atik] [PubMed]
NAN. Roberto M, Madamba SG, Stouffer DG, Parsons LH, Siggins GR. Ogmantasyon lage GABA nan amikalg santral la nan rat etanòl-depandan. J Neurosci. KOULYE; NAN: KIJAN-NAN. [PubMed]