Ուսումնասիրությունը ցույց է տալիս, որ պարգեւատրումում նյարդային եւ վարքային փոփոխությունները կարող են առաջանալ սեռական ակտիվությունից: Դրանք ներառում են նյարդային մասնաճյուղերի աճը եւ թմրամիջոցների նկատմամբ ավելի ուժեղ արձագանքը: Ինչպես սովորաբար, բնական ամրացնողները եւ դեղերը ունեն նման ազդեցություն ուղեղի վրա:
Pitchers KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM:
Բիոլոգիական հոգեբուժություն: 2010 Մայիս 1; 67 (9): 872-9: Epub 2009 Դեկ 16.
Անատոմիայի եւ բջջային կենսաբանության ամբիոն, Արեւմտյան Օնտարիոյի համալսարանի բժշկության եւ ստոմատոլոգիայի Schulich դպրոցը, Լոնդոն, Օնտարիո, Կանադա:
Աբստրակտ
ՆԱԽԱՊԱՏՄՈՒԹՅՈՒՆ. Բնական պարգևատրումը և չարաշահման թմրանյութերը միաձուլվում են մեզոլիմբիկ համակարգում, որտեղ չարաշահման թմրանյութերը առաջացնում են նեյրոնային փոփոխություններ: Այստեղ մենք փորձարկեցինք այս համակարգի պլաստիկությունը բնական պարգևատրումից հետո և հետագա ազդեցությունը դեղերի նկատմամբ արձագանքի վրա:
Մեթոդներ. Տղամարդկանց առնետների սեռական փորձի ազդեցությունը վարքային սենսացիացման եւ պայմանավորված տեղային նախասիրությունների վրա, որոնք կապված են դ-ամֆետամինի (AMPH) եւ Գոլգիի նրբագեղ dendrites- ների եւ կորիզի հոդակապի (NAc) բջիջների հետ: Ավելին, փորձարկված փորձառու տղամարդկանց սեռական վարքից հեռու մնալու ազդեցությունը փորձարկվել է:
ԱՐԴՅՈՒՆՔՆԵՐ՝ Նախ, կրկնվող սեռական վարքագիծը առաջացրել է AMPH-ի նկատմամբ զգայունացված շարժողական արձագանք՝ համեմատած սեռական առումով միամիտ վերահսկիչ խմբի հետ, որը դիտարկվել է վերջին զուգավորման սեանսից 1, 7 և 28 օր անց: Երկրորդ, սեռական փորձ ունեցող կենդանիները ձևավորել են պայմանական տեղային նախապատվություն AMPH-ի ավելի ցածր դեղաչափերի համար, քան սեռական առումով միամիտ արուները, ինչը վկայում է AMPH-ի բարձրացված պարգևատրման արժեքի մասին: Վերջապես, Գոլջի-Քոքսի վերլուծությունը ցույց է տվել դենդրիտների և փշերի թվի աճ NAc միջուկում և թաղանթում՝ սեռական փորձի ժամանակ: Վերջին երկու փոփոխությունները կախված էին 7-10 օրվա ձեռնպահության ժամանակահատվածից:
Ենթադրվում է, որ սեռական փորձը ներառում է մեքսոլիբիական համակարգում ֆունկցիոնալ եւ morphological փոփոխությունները, որոնք նման են հոգեբանական խթանիչների կրկնվող ազդեցությանը: Ավելին, սեռական վարքից հրաժարվելը կրկնակի զուգավորումից հետո կարեւոր էր NAc նեյրոնների թմրադեղերի եւ դենդրիտիկ խառնուրդների համար բարձր վարձատրության համար, ինչը ենթադրում էր, որ սեռական պարգեւի կորուստը կարող է նպաստել mesolimbic համակարգի neuroplasticity- ին: Այս արդյունքները վկայում են այն մասին, որ մազալիմիկ համակարգում որոշ փոփոխություններ տարածված են բնական եւ դեղորայքային պարգեւների համար եւ կարող են ընդհանուր դեր խաղալ:
Հեղինակային իրավունքի 2010 Կենսաբանական հոգեբուժության միություն: Բոլոր իրավունքները պաշտպանված են:
ՆԵՐԱԾՈՒԹՅՈՒՆ
Մեդոլիմիկ դոպամին (DA) համակարգը, որը բաղկացած է ճառագայթային ազդեցության շրջանում (ՎՏԱ) դոպամիներգիկ նեյրոններից, միջուկային accumbens (NAc) եւ medial prefrontal cortex (mPFC) կանխատեսումներով, կարեւոր դեր են խաղում վարքի խրախուսման եւ հատուցող ասպեկտների մեջ ագրեսիա (1), կերակրման (2-7), խմելու (8), զուգավորում (9-11) եւ սոցիալական կապը (12-13): Թմրամիջոցների չարաշահումները միմյանց հետ համատեղվում են mesolimbic DA համակարգի (14-15): Ավելին, դեղերի կրկնակի կառավարումը կարող է առաջացնել նեյրոնային փոփոխություններ այդ ուղիներում, ինչը, իր հերթին, դառը դեր է խաղում թմրամիջոցների վերադարձի զգայունության բարձրացման կամ թմրամիջոցների օգտագործման մեջ թմրամոլության16-18): R- ի վարքային ազդեցություններըթմրամիջոցների ներարկումը ներառում է հոգեմոստիմուլյատորներին եւ օփիատներին զգայուն լոկոմոտիվային արձագանքը (19-21), ուժեղացված պայմանավորված դեղամիջոցի վարձատրություն (22-24), Որըեւ ավելացրել է օպերատիվ պատասխանները դեղերի նախնական օգտագործման հետ կապված25): Բացի այդ, դեղատոմսերի կրկնակի կառավարումը հանգեցնում է երկարատեւ փոփոխությունների, դենդրիտիկական մորֆոլոգիայի եւ ողնաշարի խտության ամբողջ mesolimbic շրջանիt (16, 26-31), եւ induces գեն արտահայտությունը փոփոխություններ (32-35). Վերջապես, դեղամիջոցի կրկնօրինակը փոխում է սինթետիկ ուժը միջգծային դոպամինային նեյրոնների վրա արթնացնող եւ արգելիչ սինապսաներում (36-41) եւ նեյրոնները NAc- ում (42-44): Ներկայումս պարզ չէ, թե արդյոք նմանատիպ փոփոխությունները մզոլիմիկ համակարգում տեղի են ունենում կրկնակի ազդեցություն ունենալ բնական պարգեւների վրա: Որոշելով, թե արդյոք նման փոփոխությունները համընկնում են կամ չարաշահման թմրամիջոցների եզակի են, կարող են հանգեցնել բջջային մեխանիզմների ավելի լավ ընկալմանը, հիմքում ընկած են նորմալ պարգեւատրման ամրապնդման եւ որոշակի պարգեւի պարտադիր ձգտման միջեւ:
Այն վարկածը, որ դեղերից բացի այլ խթանները կարող են մեզոլիմբիկ համակարգում նեյրոնային փոփոխություններ առաջացնել, հաստատվում է այն ուսումնասիրություններով, որոնք ցույց են տալիս, որ սթրեսային խթանները ակտիվացնում են դոպամինային համակարգերը ( 45-47 ) և առաջացնում հոգեմոտոր խթանիչների զգայունացում ( 21 , 48-50 ) և ռեցիդիվ ինքնակառավարման մոդելներում ( 51-54 ) : Այնուամենայնիվ, քիչ ուսումնասիրություններ են ուսումնասիրել, թե արդյոք բնական պարգևատրող վարքագիծը կարող է նաև ֆունկցիոնալ փոփոխություններ առաջացնել DA համակարգում ( 6 , 55-56 ) : Հետևաբար, ստուգվել է այն վարկածը, որ տղամարդու սեռական փորձառությունը մեզոլիմբիկ DA համակարգում առաջացնում է նեյրոնային փոփոխություններ՝ սեռական փորձառության շարժողական զգայունացման, պայմանական տեղի նախընտրության և NAc նեյրոնների դենդրիտների ձևաբանության վրա ազդեցության վերլուծության միջոցով : Ավելին, մենք ենթադրել ենք , որ սեռական վարքից (սեռական պարգևատրում) ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածը կարևոր է այս փոփոխությունների սկզբի համար՝ հիմնվելով վերջին դիտարկումների վրա , որ դեղերից ձեռնպահ մնալը կարևոր դեր է խաղում դեղերի կրկնակի ազդեցության հետ կապված նեյրոնային պլաստիկության զարգացման մեջ ( 40 , 57-59 ):
ՄԵԹՈԴՆԵՐ
Կենդանիներ
Սփրեյգ Դոուլիի չափահաս արու առնետները (210–250 գրամ) ձեռք են բերվել Հարլան լաբորատորիաներից (Ինդիանապոլիս, Ինդիանա, ԱՄՆ) կամ Չարլզ Ռիվեր լաբորատորիաներից (Սենևիլ, Քուինսբուրգ, Կանադա) և տեղավորվել են պլեքսիգլասե վանդակներում՝ թունելային խողովակներով: Արուները տեղավորվել են նույն սեռի զույգերով ամբողջ փորձերի ընթացքում (փորձեր 2–5), բացառությամբ փորձ 1-ի, որտեղ արուները ուսումնասիրության սկզբում տեղավորված էին միայնակ: Ջերմաստիճանով կարգավորվող գաղութային սենյակը պահպանվել է 12/12 ժամյա լույս-մթության ցիկլի վրա՝ սնունդն ու ջուրը հասանելի լինելով ad libitum, բացառությամբ վարքային թեստավորման ժամանակ: Զուգավորման վարքային սեանսների համար խթանող էգերը (210–220 գրամ) երկկողմանի ձվարանահատվել են և ստացել են 5% էստրադիոլի բենզոատ և 95% խոլեստերին պարունակող ենթամաշկային իմպլանտ: Սեռական ընկալունակությունը խթանվել է փորձարկումից մոտավորապես 4 ժամ առաջ 0.1 մլ քնջութի յուղի մեջ 500 մկգ պրոգեստերոնի ներարկմամբ: Բոլոր ընթացակարգերը հաստատվել են Ցինցինատիի համալսարանի և Արևմտյան Օնտարիոյի համալսարանի կենդանիների խնամքի և օգտագործման կոմիտեների կողմից և համապատասխանում են NIH և CCAC ուղեցույցներին, որոնք վերաբերում են ողնաշարավոր կենդանիների հետազոտություններին։
Թմրամիջոցների բուժում
D-Amphetamine (AMPH) սուլֆատ (Sigma, Սեն - Լուի, MO) լուծարվել է ստերիլ 0.9% saline (SAL): Կենդանիները ստացել են AMPH դոզան `0.5-5.0 մգ / կգ մարմնի քաշը, որը հիմնված է ազատ բազայի վրա, 1mL / կգ մարմնի քաշի ծավալով: Վերահսկողության կենդանիները ստացան ՍԱԼ. Բոլոր ներարկումները լույսի առաջին փուլի (2-6 ժամ հետո լույսերից հետո), անմիջապես մինչեւ վարքագծային ապարատին տեղադրելու համար, ենթարկվել են առարկայական:
Լոկոմոտիվի գործունեության ստուգում
Շարժողական ակտիվությունը չափվել է հատուկ նախագծված շարժողական ակտիվության խցիկների (LAC) միջոցով, որոնք մոդելավորվել են Սեգալի և Կուչենսկու ( 60 ) կողմից նախագծված խցիկների հիման վրա: Շարժողական ակտիվությունը չափվել է 16×16 լուսային ճառագայթային զանգվածի միջոցով (San Diego Instruments, San Diego, CA) և արտահայտվել է րոպեում անցումների տեսքով: Անցումը գրանցվել է ամեն անգամ, երբ կենդանին մտնում էր խցիկի որևէ «ակտիվ գոտի», որոնք պատկերված են որպես ստվերավորված տարածքներ նկար 1A- ում ( 61 ):
Սեռական վարքի փորձարկում
Բոլոր փորձերում սեռական անհամար տղամարդկանց առնետները պատահականորեն բաժանվեցին խմբերին, որոնք ստացան սեռական փորձառություն կամ մնացին միամիտ: Փորձի համար բոլոր մաշկային թեստերը կատարվել են մուգ փուլի առաջին կիսամյակում (3-8 ժամ հետո լույսերի լույսի ներքո) կարմիր կարմիր լույսի ներքո: Կենդանիները, որոնք սեռական միամիտ են մնացել, վարվել եւ տեղակայվել են այն նույն սենյակներում, ինչպիսիք են սեռական փորձառական տղամարդիկ, ուստի ենթարկվում են նմանատիպ մակարդակներում խանգարման, շրջակա միջավայրի նորույթների եւ փորձառու կենդանիների հեռավոր կանացի հոտերի: Բոլոր փորձերի համար սեռական ճանապարհով փորձված տղամարդկանց խմբերը համապատասխանում էին սեռական փորձի (սեռական օրգանների քանակի եւ վերջին սեռական օրգանների ժամանակահատվածի ներթափանցման եւ ներթափանցման օրերի) հիման վրա:
Փորձ 1
1- ի եւ 2- ի փորձերը կիրառեցին տարբեր պարադիգմներ `ստուգելու միջակայքային զուգավորումն ու միջավայրը: 1- ի փորձառությունը, սեռական փորձառու խմբերի կենդանիները ստացան 5 պարբերական զուգավորման նիստեր, որոնք ընդգրկված էին 3-4 օր տարբեր ժամանակահատվածում, որի ընթացքում նրանք խճճված էին իրենց տան խցերում, 3 կոորդինացիոն շարքի համար (ներառյալ, ejaculation) կամ 60 րոպեով, որոնք առաջինն էին: Կենդանիները, որոնք ավարտել են ավելի քան հինգ կուտակային գրականություն, համարվում էին սեռական փորձ: Սեռական միամիտ կենդանիները չեն ստացել կին գործընկերներ: Վերջին հարվածային զեկույցից մեկ շաբաթ անց սեռական փորձառությամբ եւ միամիտ կենդանիները բաժանել էին AMPH (0.5 մգ / կգ) կամ SAL- ով ստացված խմբերին, որոնք ընդհանուր առմամբ չորս խմբերի համար (Naïve Amphetamine: NA, Փորձառու Amphetamine: EA; Naïve Saline: NS; Փորձառու Saline: ES, n = 6 յուրաքանչյուր):
Փորձ 2
Այս փորձը տարբերվում է 1 փորձից երեք եղանակով `1: Անընդմեջ օրերի ընթացքում կենդանիները համակցված էին մեկ զզվանքով. 2. Կենդանիները միաձուլված են նույն վանդակում, որտեղ նրանք ստացել են AMPH- ը (LAC- ներում); 3. ԱՄՀ-ից հետո լոկոմոտիվի գործունեությունը վերլուծվեց սեռական փորձից հետո երեք տարբեր ժամանակներում: Սեռական ճանապարհով փորձառու կենդանիները ստացան 7- ի հաջորդական համաժամանակյա նիստերը LAC- ներում եւ լոկոմոտիվային ակտիվությունը արձանագրվել է 15 րոպե ընթացքում LAC- ներ տեղադրման եւ կնոջ ներդրման միջեւ: Սեռական միամիտ կենդանիները LACs- ում տեղադրվել են յոթ անգամ անընդմեջ նստաշրջանի համար, առանց զուգավորման: Վերջնական համագումարից հետո օրվան հաջորդող օրը (օրվա 8 փորձը) կենդանիները տեղադրվեցին LAC- ներում AMPH (0.5 մգ / կգ) կամ SAL (Naïve Amphetamine: NA, Experienced Amphetamine: EA, Naïve Saline: NS; եւ փորձառու Saline: ES, n = 8-9 յուրաքանչյուրը) եւ արձանագրվել է լոկոմոտիվային ակտիվություն: Կենդանիները փորձարկվել էին LACs- ում, մեկ շաբաթ անց, վերջնական զուգավորման նիստից հետո (Day 14): Կենդանիները, որոնք ստացան AMPH Day 8- ին, ստացան SAL- ի օրը 14- ին, իսկ օրվա ընթացքում 8- ի SAL- ով ստացված կենդանիները ստացան AMPH- ի օրը `14- ին: Միամյա եւ փորձառու կենդանիների կեսը զոհվեց մեկ օր անց ՌՆԹ-ի արդյունահանման համար (տվյալներ չհաշվեցին այս զեկույցում): Վերջնական զուգավորման նիստից մեկ օր անց (օր 35), կենդանիների մնացած կեսը (Naïve, n = 8, Փորձառու, n = 9) ստացան AMPH եւ արձանագրվեց լոկոմոտիվային ակտիվություն:
Տվյալների վերլուծություն
Լոկոմոտիվային գործունեություն
Տվյալները հավաքագրվել են 3 րոպեանոց տարաներում՝ AMPH կամ SAL ներարկումից հետո 90 րոպեի ընթացքում: Արդյունքները ներկայացված են որպես յուրաքանչյուր խմբի միջին ± SEM և վերլուծվել են երկկողմանի ANOVA-ի միջոցով (փորձ 1, փորձ 2, 8-14 օր. գործոններ՝ սեռական փորձ, դեղորայքային բուժում) կամ միակողմանի ANOVA-ի միջոցով (փորձ 2, 35-րդ օր և զուգավորման սեանսներից առաջ ակտիվություն. գործոն՝ սեռական փորձ): Հետհոսքային համեմատությունները կատարվել են Fisher LSD թեստերի միջոցով՝ p-արժեք < 0.05 նշանակալիությամբ:
Պայմանավորված վայրի նախապատվություն (CPP) փորձարկում
Մեքենա
CPP- ը կատարվել է երեք մասի ապարատներում (Med Associates Inc., Սբ. Ալբանս, Վ.Տ., ԱՄՆ), որը բաղկացած է երկու մեծ, արտաքին պալատներից (28 × 22 × 21cm), որոնք տարբերվում են տեսողական եւ շոշափող նշաններից, խցիկ (13 × 12 × 21cm): Սարքավորումը հագեցված է լուսանկարի հետ, շարժիչային շարժման հետագծման եւ չափման ավտոմատացված վերլուծության համար:
Կոնդիցիոներներ եւ փորձարկումներ
CPP կոնդենսացիան եւ փորձարկումն իրականացվել է լուսային շրջանի առաջին կեսին: Յուրաքանչյուր կենդանու նախնական նախապատվության որոշման համար անցկացվել է նախապեստ: Երկու պալատում անցկացված ժամանակահատվածների միջեւ որեւէ զգալի տարբերություն չի հայտնաբերվել: Հաջորդ օրը, տղամարդիկ առնետները կամ սահմանափակվում էին AMPH- զույգացված սենյակում կամ 30 րոպեում SAL- զույգացված սենյակում: Հաջորդ օրը հակադարձ բուժումը ստացել է հակաբեղմնավոր կերպով: Վերջնական օրը անց է կացվում նախնական դատավարական պրակտեստային պրակտիկային:
Փորձ 3
Սեռական փորձառու խմբերով կենդանիները ստացան 5- ի հաջորդական զուգավորման նիստերը `փորձարկման վանդակում: Օրը 1- ն նշանակվեց առաջին համերգին: Վերահսկիչ տղամարդիկ սեռական անփոփոխ մնացին, բայց ամեն օր 1 օրացուցային օրվա ընթացքում տեղադրվեցին մաքուր փորձարկման վանդակի համար, 5 ժամ: Կենդանիները բաժանում էին AMPH- ի տարբեր չափաբաժիններ ունեցող խմբեր (մգ / կգ), (N0.5, N1.0, N2.5 կամ N5.0, n = 7-8 յուրաքանչյուր; Փորձը `E0, E0.5, E1.0, E2.5 կամ E5.0, n = 6 -9 յուրաքանչյուր): Pretest- ը տեղի է ունեցել 14- ի օրերին, 15- ի եւ 16 օրերի պայմանների փորձարկումները եւ posttest- ին օրը 17- ում: Այս գրաֆիկը թույլ տվեց 10 օր մնալուց առաջ սեռական վարքից հեռու մնալ:
Փորձ 4
Սեռական փորձառու տղամարդիկ սեռական փորձառություն ձեռք բերեցին 5 օրացուցային օրերի ընթացքում `համաժամեցման փորձի նույնականացման 3- ի հետ: 4- ի փորձի հիմնական տարբերությունն այն էր, որ CPP- ի փորձարկումը տեղի է ունեցել, երբ կենդանիները սեռական փորձառություն են ձեռք բերում, ուստի սեռական վարքից հրաժարվելու ժամանակ չկար: Փոխարենը, կոնդիցիոներների դատավարությունները սկսվեցին առաջին 3 զուգավորման նիստերից հետո: Կենդանիները բաժանում էին AMPH- ի տարբեր չափաբաժիններ ունեցող խմբեր (մգ / կգ), (N0.5, N1.0, N2.5 կամ N5.0, n = 6-8 յուրաքանչյուր; Փորձը `E0, E0.5, E1.0, E2.5 կամ E5.0, n = 7 -11 յուրաքանչյուր):
Տվյալների վերլուծություն
CPP- ի միավորները հաշվարկվել են յուրաքանչյուր իմալի համար, քանի որ հետընտրական թեստի ընթացքում զույգ պալատում անցկացրած ժամանակը (վրկ) հանած նախնական քննությունը: Խմբի միջոցները հաշվարկվել և համեմատվել են SAL- ով մշակված խմբի (E0) հետ `չհամընկնող t- թեստերի միջոցով: Բոլոր փորձերի համար նշանակությունը դրվել է p- արժեքի <0.05:
Գոլգի փորձառություն
Փորձ 5
Սեռական փորձառու խմբերում գտնվող տղամարդիկ փորձարկված վանդակում տեղադրվել են ընդունող կանանցով եւ թույլ են տվել խառնել մինչեւ մեկ քնկոտություն կամ 60 րոպե, ինչն առաջինը տեղի է ունեցել 7 հաջորդ օրվա ընթացքում: Վերահսկիչ տղամարդիկ սեռական միամիտ են մնացել, սակայն վերցվել են իրենց տան վանդակում եւ տեղադրվել են մաքուր թեստային վանդակի մեջ, յոթ օր շարունակ ամեն օր 30 րոպե: Փորձառու կամ միամիտ կենդանիների խմբերը զոհաբերվեցին մեկ օրվա ընթացքում (N1, n = 5, E1, n = 7) կամ 7 օր (N7, E7, n = 5 յուրաքանչյուրը), վերջին կախվածության նստաշրջանից կամ փորձարկման վանդակի ազդեցությունից: Սեռական փորձառու խմբերը փորձի տարբեր չեն:
Հյուսվածքների վերամշակում
Վերջին զուգավորման սեանսից կամ փորձարկման վանդակում հայտնվելուց մեկ օր կամ մեկ շաբաթ անց կենդանիներին տրվել է նատրիումի պենտոբարբիտալի (ներմեջ) չափից մեծ դոզա և նրանց ներարկվել է 500 մլ ֆիզիոլոգիական լուծույթ։ Ուղեղները մշակվել են Գոլջի-Քոքսի ներկման համար՝ օգտագործելով Պյուի և Ռոսսիի ( 62 ) մեթոդը։ Լրացուցիչ տեղեկությունների համար տե՛ս Հավելված 1-ը ։
Տվյալների վերլուծություն
Յուրաքանչյուր կենդանու պոչային NAc միջուկի և թաղանթի ենթաշրջաններում 5-7 նեյրոնների Camera Lucida նկարներ են արվել: Ընտրվել են այն բջիջները, որոնց դենդրիտային ճյուղերի ամբողջությունը կամ մեծ մասը տեսանելի էին և հեշտությամբ տարբերակվում էին հարևան բջիջներից: Դենդրիտային ճյուղերը քանակականացվել են կենտրոնախույս կարգով ( 63 ) և հաշվարկվել են միջին արժեքները մեկ կենդանու համար: Դենդրիտային փշերը քանակականացվել են մեկ բջջի վրա երկու երկրորդ կարգի դենդրիտների 40 մկմ երկարությամբ (մեկ կենդանու համար 4-7 բջիջ): Խմբային միջինները համեմատվել են երկկողմանի ANOVA-ի (գործոններ՝ սեռական փորձ և ձեռնպահության ժամանակահատված) և Fisher LSD թեստերի միջոցով՝ հետհոկ վերլուծության համար:
ԱՐԴՅՈՒՆՔՆԵՐ
Փորձ 1
Փորձ 1-ի նպատակն էր որոշել, թե արդյոք սեռական փորձը ազդում է արու առնետների AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքի վրա: Շարժողական ակտիվությունը 90 րոպեանոց ժամանակահատվածում չափվել է սեռական փորձ ունեցող և միամիտ առնետների մոտ՝ 0.5 մգ/կգ AMPH-ով կամ SAL-ով բուժումից հետո: Փորձ 1-ի արդյունքները պատկերված են նկար 1- ում : Ինչպես սեռական փորձը (F1,22 = 15.88; p=0.0006), այնպես էլ դեղորայքային բուժումը (F1,22 = 45.00; p<0.0001) զգալի ազդեցություն են ունեցել շարժողական ակտիվության վրա, և դիտվել է սեռական փորձի և դեղորայքային բուժման միջև երկկողմանի փոխազդեցություն (F1,1,22 = 14.27; p=0.0010): Մասնավորապես, ինչպես միամիտ, այնպես էլ փորձառու կենդանիները ցույց են տվել AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքի զգալի աճ՝ համեմատած համապատասխան SAL վերահսկիչ խմբի հետ: Ավելին, սեռական փորձ ունեցող առնետները ցույց են տվել AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքի աճ՝ համեմատած միամիտ կենդանիների հետ: Սեռական փորձ ունեցող և միամիտ առնետները չեն տարբերվել SAL-ի նկատմամբ իրենց արձագանքներով:
Նկար 1- ում պատկերված է AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքների վերլուծությունը 30 րոպե և 3 րոպե ավելի կարճ ժամանակահատվածներում , CF վահանակներում: Սեռական փորձ ունեցող արուները 90 րոպեանոց փորձարկման ժամանակահատվածում ցուցաբերել են AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքի աճ՝ համեմատած միամիտ առնետների հետ: Ավելին, սեռական փորձ ունեցող առնետները 90 րոպեանոց փորձարկման ժամանակահատվածում ցուցաբերել են AMPH-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքի աճ՝ համեմատած իրենց SAL վերահսկիչ խմբի հետ, մինչդեռ միամիտ կենդանիները ցուցաբերել են զգալիորեն ավելի բարձր շարժողական արձագանք միայն վերջին 30 րոպեանոց ժամանակահատվածում ( Նկար 1 , p-արժեքները ներկայացված են նկարի լեգենդում):
Փորձ 2
Երկրորդ փորձի նպատակն էր ստուգել, թե արդյոք սեռական փորձը հանգեցնում է շարժողական զգայունացման այն կենդանիների մոտ, որոնք զուգավորվել են հաջորդական օրերի ընթացքում և նույն միջավայրում, որտեղ նրանք ենթարկվել են AMPH-ի ազդեցությանը: Սեռական զույգերի միջավայրի ազդեցությունը առաջացրել է շարժողական ակտիվության աճ յուրաքանչյուր զուգավորման սեանսից 15 րոպե առաջ ( Նկար S1 հավելված 1-ում ), որը ցույց է տալիս սեռական վարքագծի և միջավայրի միջև առկա կապը: Բացի այդ, երկրորդ փորձը ուսումնասիրել է AMPH-ի նկատմամբ շարժողական զգայունացման ժամանակային օրինաչափությունը սեռական փորձ ունեցող արու առնետների մոտ: AMPH-ի կամ SAL-ի նկատմամբ շարժողական արձագանքը չափվել է վերջին զուգավորման սեանսից մեկ օր (8-րդ օր), մեկ շաբաթ (14-րդ օր) և մեկ ամիս (35-րդ օր) հետո: Ինչպես առաջին փորձի ժամանակ, սեռական փորձ ունեցող առնետները ցուցաբերել են AMPH-ի նկատմամբ ավելի մեծ շարժողական արձագանք՝ համեմատած միամիտ կենդանիների հետ: Ավելին, այս ազդեցությունը ակնհայտ էր բոլոր երեք փորձարկման օրերին: Նկար 2-ը պատկերում է շարժողական ակտիվությունը փորձարկումների վերջին 60 րոպեների ընթացքում, որոնց ընթացքում դիտարկվել են ամենաակնառու տարբերությունները, իսկ առաջին 30 րոպեների տվյալները ներկայացված են Նկար S2-ում (Հավելված 1) : Փորձառու և անփորձ կենդանիները չեն տարբերվել SAL-ի նկատմամբ իրենց արձագանքով փորձարկման որևէ օր, և AMPH ստացած առնետները ցուցաբերել են շարժողական ակտիվության աճ՝ համեմատած իրենց SAL վերահսկիչ խմբի հետ ( Նկար 2 ; p-արժեքները ներկայացված են նկարի լեգենդում):
Փորձ 3
Փորձ 3-ը ուսումնասիրել է սեռական փորձառության ազդեցությունը պայմանական AMPH պարգևատրման վրա: AMPH CPP-ն փորձարկվել է սեռական առումով միամիտ և փորձառու արուների վրա՝ վերջին զուգավորման սեանսից 10 օր անց: Սեռական փորձառություն ունեցող կենդանիները ցույց են տվել AMPH պարգևատրման ուժեղացված ցուցանիշ: Մասնավորապես, սեռական փորձառություն ունեցող արուները ուժեղ նախապատվություն են տվել AMPH-զուգակցված խցիկին՝ 0.5 և 1.0 մգ/կգ ցածր դեղաչափերով, բայց ոչ՝ 2.5 կամ 5.0 մգ/կգ բարձր դեղաչափերով: Ի տարբերություն դրա, սեռական առումով միամիտ արուները ուժեղ նախապատվություն են տվել AMPH-զուգակցված խցիկին՝ միայն 2.5 և 5.0 մգ/կգ բարձր դեղաչափերով, և ոչ թե ցածր դեղաչափերով ( Նկար 3A ; p-արժեքները ներկայացված են նկարի լեգենդում):
Փորձ 4
Փորձ 3-ը ցույց տվեց, որ սեռական փորձառությունը, որին հաջորդում է ձեռնպահության ժամանակահատվածը, հանգեցրել է պայմանական AMPH պարգևատրման ուժեղացման: Փորձ 4-ը ուսումնասիրել է, թե արդյոք սեռական փորձառության ազդեցությունը պայմանական AMPH պարգևատրման վրա կախված է ձեռնպահության այս ժամանակահատվածից: Արդյունքները ցույց են տվել, որ սեռական փորձառություն ունեցող կենդանիները չեն ցուցաբերել AMPH-ի պայմանական պարգևատրման արժեքի աճ: Սեռական փորձառություն ունեցող և միամիտ կենդանիները ցույց են տվել ուժեղ նախապատվություն AMPH-զուգակցված խցիկի նկատմամբ՝ 2.5 և 5.0 մգ/կգ ավելի բարձր դեղաչափերով: Այնուամենայնիվ, ո՛չ սեռական փորձառություն ունեցող, ո՛չ էլ միամիտ արուները չեն ցուցաբերել CPP միավորի բարձրացում՝ 0.5 և 1.0 մգ/կգ ավելի ցածր դեղաչափերով: 0.5 մգ/կգ ամենացածր դեղաչափը նույնիսկ առաջացրել է հակակրանք, բայց սա նշանակալի է դարձել միայն սեռական փորձառություն ունեցող կենդանիների մոտ՝ AMPH-զուգակցված խցիկի համար ( Նկար 3B ; p-արժեքները ներկայացված են նկարի լեգենդում):
Փորձ 5
Փորձ 5-ի նպատակն էր ուսումնասիրել մեզոլիմբիկ համակարգի, մասնավորապես՝ NAc-ի ձևաբանական փոփոխությունները, սեռական փորձից հետո: Մորֆոլոգիական փոփոխությունները ակնհայտ էին վերջին զուգավորումից մեկ շաբաթ անց ( Նկար 4H, J և L ; p-արժեքները ներկայացված են նկարի լեգենդում), բայց ոչ թե մեկ օր անց ( Նկար 4G, I և K ): Մասնավորապես, դենդրիտների թվի զգալի աճ (դենդրիտային ճյուղավորման աճի վկայող) հայտնաբերվել է NAc միջուկում և պատյանում ( Նկար 4H և J ): Բացի այդ, դենդրիտային փշերի քանակը զգալիորեն աճել է և՛ պատյանի, և՛ միջուկի շրջաններում՝ սեռական փորձից մեկ շաբաթ անց, բայց ոչ թե մեկ օր անց ( Նկար 4L ):
ՔՆՆԱՐԿՈՒՄ
Այս ուսումնասիրությունը ցույց է տալիս, որ սեռական փորձառությունը եւ սեռական վարքից հետընտրական փորձը ձեռնպահ է մտնում արական առնետների մզոլիմիկ համակարգում ֆունկցիոնալ եւ morphological փոփոխությունների: Ֆունկցիոնալ փոփոխությունները ակնհայտ դարձան սենսացիոնացված շարժիչային արձագանքի ձեւի եւ սեքսուալ փորձից հետո AMPH- ի հետ բարձրացված պայմանավորված վարձատրության տեսքով:
Սենսիտիզացված շարժողական արձագանքը դիտվել է արդեն 1 օրից և պահպանվել է մինչև 28 օր վերջին զուգավորման սեանսից հետո : Ի տարբերություն դրա, ուժեղացված պայմանական AMPH պարգևատրումը նկատվել է միայն սեռական վարքից ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածից հետո: NAc-ի ինչպես միջուկային, այնպես էլ կճեպային ենթաշրջաններում մորֆոլոգիական փոփոխություններ դիտվել են սեռական փորձ ունեցող կենդանիների մոտ վերջին զուգավորման սեանսից հետո 7 օր, բայց ոչ 1 օր: Այս տվյալները միասին ցույց են տալիս, որ սեռական փորձը առաջացնում է պլաստիկություն մեզոլիմբիկ համակարգում, և որ զուգավորումից ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածը կարևոր է մեզոլիմբիկ համակարգի որոշ, բայց ոչ բոլոր փոփոխությունների զարգացման համար:
Լավ հայտնի է , որ բնական պարգևատրող վարքագծերը և չարաշահման թմրանյութերը գործում են նույն նեյրոնային ուղիներով ( 64 ): Իրոք, չարաշահման թմրանյութերը ցույց են տվել, որ ազդում են պարգևատրող վարքագծերի արտահայտման վրա ( 65-67 ), ներառյալ արու առնետների սեռական վարքագիծը ( 67-70 ) : Դեղամիջոցի կրկնակի կիրառման հետևանքով առաջացած սեռական վարքագծի և մոտիվացիայի փոփոխությունները կախված են դեղամիջոցից հրաժարվելու կամ ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածից, ինչպես նաև այն միջավայրից , որտեղ դեղամիջոցը ներկայացվել է: Այս ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ սեռական վարքագծի ազդեցությունը փոխում է չարաշահման թմրանյութերի նկատմամբ արձագանքը: Որոշվել է, որ սեռական փորձ ունեցող արու առնետները զգայուն են AMPH-ի շարժողական ազդեցությունների նկատմամբ, և որ այս երևույթը երկարատև է և անկախ զուգավորման ժամանակահատվածից: Ավելին, զգայունացված շարժողական արձագանքը անկախ էր զուգավորման գրաֆիկից կամ զուգավորման միջավայրից և դիտվել է դեղամիջոցի ազդեցությանը նույն կամ տարբեր միջավայրում տեղի ունեցած հաջորդական կամ ընդհատվող զուգավորման սեանսներից հետո: Էգ համստերների վրա անցկացված ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ սեռական փորձ ունեցող էգ համստերները ցուցաբերում են AMPH-ի առաջացրած շարժողական արձագանքի ավելի արագ սկիզբ՝ համեմատած սեռական առումով միամիտ վերահսկիչ խմբի հետ ( 71 ): Այնուամենայնիվ, կրծողները ցուցաբերում են սեռական դիմորֆիկ ռեակցիաներ հոգեխթանիչների նկատմամբ ( 72-73 ) : Այսպիսով, ներկայիս ուսումնասիրությունները ընդլայնում են էգ համստերների վրա ստացված արդյունքները և ցույց են տալիս արու առնետների մոտ սեռական վարքագծից հետո հոգեխթանիչների նկատմամբ ուժեղացված շարժողական ռեակցիաների արագ սկիզբը և երկարատև տևողությունը:
Ընթացիկ ուսումնասիրություններից պարզ չէ, թե սեռական վարքի որ տարրերն են նպաստում AMPH-ի շարժողական զգայունացմանը և արդյոք սոցիալական փոխազդեցությունները բավարար են: 2-րդ փորձի մասնակից կենդանիները, որոնք չեն հասել սեռական փորձի չափանիշներին (ցուցաբերել են սեռական հարաբերություններ և ինտրոմիսիաներ, բայց չեն ունեցել 5 սերմնաժայթքում զուգավորման սեանսների ընթացքում), չեն ցուցաբերել զգայունացված արձագանք ( Նկար S3 հավելված 1-ում ): Հետևաբար, իրականացվել է լրացուցիչ փորձ, որի ընթացքում արուները ենթարկվել են ընկալունակ էգի՝ առանց ֆիզիկական շփման, կամ ցուցաբերել են սեռական հարաբերություններ և ինտրոմիսիաներ, որոնցից ոչ մեկը չի հանգեցրել AMPH-ի նկատմամբ զգայունացված շարժողական արձագանքների ( Նկար S4 հավելված 1-ում ): Այսպիսով, սոցիալական փոխազդեցությունները, կարծես, չեն նպաստում սեռական փորձի ազդեցությանը AMPH-ի զգայունացման վրա, այլ, ավելի շուտ, սեռական հարաբերությունը, ներառյալ սերմնաժայթքումը, կարևոր է թվում պլաստիկության այս ձևի համար:
Բացի զգայունացված վարքային արձագանքից, սեռական փորձը մեծացնում է AMPH-ի պայմանական պարգևատրման արժեքը, բայց միայն սեռական պարգևից հրաժարվելուց հետո : CPP-ի վրա կատարված նախորդ աշխատանքները ցույց են տվել , որ հոգեմետ նյութերի կամ օփիատների կրկնակի ազդեցությունը մեծացնում է դեղորայքային առաջացրած պարգևատրման ազդեցությունը՝ համապատասխան դեղորայքային առաջացրած շարժողական զգայունացմանը ( 22-24 ): Կոկաինի (10 մգ/կգ), d-ամֆետամինի (0.5 մգ/կգ) կամ մորֆինի (5 մգ/կգ) 5 օրվա ընթացքում կրկնակի ընդունումը զգայունացնում է կոկաինի պարգևատրման ազդեցությունը , երբ այն փորձարկվել է դեղորայքային նախնական բուժման դադարեցումից 3 օր անց: Զգայունացված ազդեցությունը դրսևորվել է պայմանական նախընտրության դիտարկմամբ՝ ավելի քիչ պայմանական փորձարկումներով (3-ից 2) և դեղամիջոցի ավելի ցածր դեղաչափերով՝ համեմատած SAL-ով նախապես բուժված վերահսկիչ կենդանիների հետ: Կոկաինի կրկնակի կիրառմամբ առաջացած զգայունացված պայմանական պարգևատրումը հայտնաբերվել է կոկաինի վերջնական նախնական բուժումից 7 օր անց, բայց ոչ թե 14 օր անց ( 23 ): Նմանատիպ ուսումնասիրությունը, որն օգտագործում է մորֆինի 5 օր (5.0 մգ/կգ), ցույց է տալիս մորֆինի նկատմամբ պայմանական պարգևատրման ուժեղացված արձագանք, երբ պայմանականացումը սկսվել է դեղորայքային նախնական բուժումից 3, 10 կամ 21 օր անց: Այս ուժեղացված արձագանքը բացակայել է մորֆինի նախնական բուժումից 1 օր անց ( 24 ): Նման արդյունքները ենթադրում են, որ թե՛ հոգեխթանիչների, թե՛ օփիատների համար զգայունացված կամ խաչաձև զգայունացված պայմանական պարգևատրման համար անհրաժեշտ է դեղորայքի դադարեցման առնվազն 3 օր տևողությամբ ժամանակահատված: Սեռական փորձը, ինչպես նաև դեղորայքի կրկնակի ընդունումը, կարող է նմանատիպ նեյրոադապտացիաներ առաջացնել մեզոլիմբիկ համակարգում, որը պատասխանատու է դեղորայքային այս զգայունացված արձագանքի համար, երբ պարգևատրումը վերացվել է: Ներկայումս պարզ չէ, թե արդյոք պարգևատրումից ձեռնպահությունը կապված է սթրեսի հետ և, հետևաբար, հանդես է գալիս որպես հոգեբանական սթրեսոր՝ նպաստելով դիտարկվող փոփոխություններին:
Ակնհայտ է, որ բնական և դեղորայքային պարգևատրման ազդեցությունների միջև փոխազդեցություն կա: Պարգևատրման խաչաձև զգայունացումը ենթադրում է, որ սեռական վարքագծի և թմրանյութերի երկարատև ազդեցությունները միջնորդվում են ընդհանուր բջջային կամ մոլեկուլային մեխանիզմներով : Հետևաբար, ենթադրվում է, որ սեռական վարքագծի հետևանքով առաջացած փոփոխությունները կարգավորում են սեռական վարքագծի ամրապնդող բաղադրիչները և, հետևաբար, կարող են կարևոր լինել պարգևատրող վարքագծի դրական ամրապնդման համար ընդհանուր առմամբ: Այնուամենայնիվ , սեռական պարգևից հետագա ձեռնպահ մնալը կարող է առաջացնել պարգևատրման ձգտման աճող վիճակ կամ կախվածություն առաջացնող նյութերի ազդեցության նկատմամբ խոցելիություն, որը նման է ձեռնպահության ազդեցությանը՝ «թմրանյութերի նկատմամբ ցանկության ինկուբացիային» ( 25 , 33 , 74 ): Ընդհանուր առմամբ, արու կրծողների մոտ սեռական վարքագիծը չի առաջացնում սեռական հարաբերության հարկադրական ձգտում, ինչը ցույց է տրվել զուգավորման-անհարմարության ասոցիատիվ պայմանական փորձերի միջոցով ( 75 ), չնայած ձեռնպահության ազդեցությունը չի ստուգվել:
Դենդրիտիկական մորֆոլոգիան խորը ուսումնասիրված է ուսուցման եւ հիշատակի ոլորտներում (76-77) եւ կախվածություն (59, 78-79), եւ հայտնի է, որ այն ազդեցություն է ունենում շրջակա միջավայրի վրա (80) եւ հորմոնալ գործոնները (81-82). Քանի որ սինաստիկ նյութերը հիմնականում դենդրիտների կամ դենդրիտիկ ողնաշարերի վրա են, դրանք ամենահավանական թիրախն են, փորձի կողմից առաջացած նեւրոպլաստիկությունը (26, 83). Բնական տատանումները կամ գոնադալ հորմոնների վարումը հայտնաբերվել են մի քանի ժամվա ընթացքում դենդրիտային փոփոխություններ առաջացնելու համար (84-87). Աlso, համակարգում նկատվում է անհանգստություն, նման սթրես (88) կամ քրոնիկ կոկաինը (79), 24 ժամվա ընթացքում հայտնաբերելու դենդրիտային փոփոխություններ:
Այստեղ, NAc միջուկում և թաղանթում միջին փշոտ նեյրոնների դենդրիտային ձևաբանության փոփոխությունները չեն դիտարկվել 24 ժամվա ընթացքում, և փոխարենը պահանջվել է սեռական փորձից հետո ձեռնպահ մնալու ժամանակահատված: Սեռական փորձի և հետագա ձեռնպահ մնալու հետևանքով առաջացած կառուցվածքային փոփոխությունները նման են հոգեխթանիչների կրկնակի ազդեցությունից հետո դիտվողներին ( 16-17 , 26 , 30 ): Ի տարբերություն դրա, NAc-ում DA-ի նվազումը հանգեցնում է դենդրիտների քանակի և թաղանթի բարդության նվազմանը ( 18, 89 ) : Հետևաբար , սեռական փորձից առաջացած փոփոխությունները կարող են կախված լինել NAc-ում էնդոգեն DA գործողությունից: Այնուամենայնիվ, զուգավորման հետևանքով առաջացած ձևաբանական փոփոխությունները նկատելի էին վերջին զուգավորման սեանսից միայն 7 օր անց և համընկնում են սեռական փորձ ունեցող կենդանիների մոտ AMPH պայմանական պարգևատրման ուժեղացման հետ: Այս տվյալները ենթադրում են, որ դենդրիտային արբորիզացիայի և փշերի այս աճը պարտադիր չէ AMPH-ի նկատմամբ կարճաժամկետ շարժողական զգայունացման արտահայտման համար, և այն կարող է դեր ունենալ զգայունացման պահպանման և երկարատև արտահայտման մեջ : Դեղերի կրկնակի կիրառման նախորդ ուսումնասիրությունները նույնպես նշել են անհամապատասխանություն NAc- ի երկարատև զգայունացման և ձևաբանական փոփոխությունների միջև ( 89-94 ): Մնում է անհասկանալի , թե ինչպիսին է ձևաբանական փոփոխությունների ֆունկցիոնալ նշանակությունը, բայց այն կարող է դեր ունենալ ֆունկցիայի և գեների արտահայտման երկարատև փոփոխությունների մեջ:
Ընդհանուր առմամբ, այստեղ ներկայացված տվյալները ցույց են տալիս, որ սեռական վարքը `բնական պարգեւատրման խթան - կարող է առաջացնել երկարատեւ neuroadaptation է mesolimbic համակարգում: Մեր հետազոտության արդյունքները ցույց են տալիս, որ վարքային պլաստիկությունը, հատկապես սենսացիոնացված շարժիչային արձագանքը, սեռական փորձառության անմիջական եւ երկարաժամկետ արդյունքն է: Ավելին, ձգձգման ժամանակահատվածը կարող է թույլ տալ, որ նեվայրոմատատումը կարեւոր է ԱՀՀ-ի դիտարկված մորֆոլոգիական փոփոխությունների եւ հետագա հստակեցված պայմանավորված թմրամիջոցների վարձատրության համար: Այս վարքային եւ նյարդային պլաստիկությունը հետեւում է նմանատիպ, բայց ոչ նույնական, պրոֆիլային, ինչպես տեսնում է թմրանյութերի զգայուն կենդանիների մեջ: Այս տվյալները հատուկ հետաքրքրություն են ներկայացնում, քանի որ մենք ցույց ենք տալիս, որ բնական պարգեւից հրաժարվելը խոցելի պետություն է թմրադեղերի կառավարմանը: Հասկանալով, թե ինչպես բնական վարքագծերը եւ չարաշահման թմրանյութերը ակտիվացնում են այդ համակարգերը, հանգեցնելով նեյրոհարդապետությանը, կարող են մեզ ավելի լավ հասկանալ ամրապնդման եւ վարձատրության մասին եւ ապահովել հետագա պատկերացում թմրամոլության մեխանիզմների մեջ:
Acknowledgments
Դոկտոր Ռիխտանդը դրամաշնորհային ֆինանսավորում է ստացել NIH-ից և Վետերանների հարցերով դեպարտամենտի բժշկական հետազոտությունների ծառայությունից: Դոկտոր Ռիխտանդը հայտնում է, որ աշխատել է որպես խորհրդատու Forest Pharmaceuticals, Bristol-Meyers Squibb և Gerson Lehrman Group ընկերություններում, եղել է Bristol Meyer's Squibb և Schering-Plough Corporation-ի խոսնակների բյուրոյում, եղել է Հարավային Դակոտայի համալսարանի Սանֆորդի բժշկական դպրոցի և Scius, LLC-ի գլխավոր ներկայացումների հեղինակ, ինչպես նաև դրամաշնորհային աջակցություն է ստացել Janssen Pharmaceutics Research Foundation-ից և Astra Zeneca Pharmaceuticals-ից (միայն ուսումնասիրության դեղամիջոցի համար): Մյուս բոլոր հեղինակները չեն հայտնում կենսաբժշկական ֆինանսական շահերի կամ շահերի հնարավոր բախման մասին, բացառությամբ այս հետազոտությունը ֆինանսավորելու համար տրամադրված հետևյալ դրամաշնորհների՝ Առողջապահության ազգային ինստիտուտների (R01 DA014591), Կանադայի առողջապահական հետազոտությունների ինստիտուտների (RN 014705) և Կանադայի ազգային գիտությունների և ճարտարագիտական հետազոտությունների խորհրդի (NSERC) հայտնագործությունների դրամաշնորհի (341710) կողմից՝ դոկտոր Լիք Քուլենին, և NSERC-ի PGS-M կրթաթոշակի (360696) կողմից՝ Քայլ Փիչերսին: Մենք շնորհակալություն ենք հայտնում տիկին Մորին 1 Ֆիցջերալդին՝ Գոլջիի մեթոդի մշակման հարցում ցուցաբերած օգնության համար, և դոկտոր Քրիստին Թենկին՝ լրացուցիչ փորձ 1-ին հարցում ցուցաբերած օգնության համար :
Հղումներ
Հրատարակչի հրաժարում. Սա չխմբագրված ձեռագրի PDF ֆայլ է, որը ընդունվել է հրատարակման համար: Մեր հաճախորդներին ծառայություն մատուցելու համար մենք տրամադրում ենք ձեռագրի այս վաղ տարբերակը: Ձեռագիրը կենթարկվի խմբագրման, տպագրության և ստացված ապացույցի վերանայման, նախքան այն հրապարակվի վերջնական մեջբերելի տեսքով: Խնդրում ենք նկատի ունենալ, որ արտադրության գործընթացի ընթացքում կարող են հայտնաբերվել սխալներ, որոնք կարող են ազդել բովանդակության վրա, և գործում են ամսագրին վերաբերող բոլոր իրավական հրաժարումները:
Սայլակ