ΔFosB- ի N- տերմինալային տիրույթի ֆունկցիոնալ դերը `սթրեսի եւ չարաշահման թմրանյութերի արձագանքման հարցում (2014)

Neuroscience. 2014 Oct 10: pii: S0306-4522(14)00856-2. doi: 10.1016/j.neuroscience.2014.10.002.

Օնիշի ՅՆ1, Օնիշի Յ1, Vialou V2, Մուոն Է2, LaPlant Q2, Նիշի Ա3, Nestler EJ- ն4.

Վերացական

Նախորդ աշխատանքը ներառում էր միջուկային զննումներում գործող ΔFosB- ի transcription գործոնը, միջամտելով չարաշահման թմրանյութերի շահութաբեր ազդեցություններին, ինչպիսիք են կոկաինը, ինչպես նաեւ միջնորդությունը `խրոնիկական սոցիալական սթրեսին: Այնուամենայնիվ, այս ΔFosB ֆենոտիպների ստեղծման համար օգտագործվող transgenic եւ վիրուսային գենային փոխանցման մոդելները, ի լրումն ΔFosB- ի, ΔFOSB mRNA- ի այլընտրանքային թարգմանության արդյունք է, որը կոչվում է Δ2ΔFosB, որը պարունակում է N-terminal 78 aa ներկա ΔFosB- ում: Δ2ΔFosB- ի Δ2ΔFosB- ի հնարավոր ներդրումը այս թմրամիջոցների եւ սթրեսային ֆենոտիպերի համար, մենք պատրաստեցինք վիրուսային վեկտոր, որը գերազանցում է ΔFosB mRNA- ի կետի մուտանտի ձեւը, որը չի կարող ենթարկվել այլընտրանքային թարգմանության, ինչպես նաեւ այն վեկտորը, որը գերազանցում է Δ2ΔFosB- ին: Մեր արդյունքները ցույց են տալիս, որ ΔFosB- ի մուտանտի ձեւը, երբ ճառագայթումից առաջացած ճառագայթումներում արտացոլված է, վերարտադրում է պարգեւի բարձրացմանը եւ մեր նախկին մոդելների հետ կապված ճկունության բարձրացմանը, առանց ΔXNUMXΔFosB- ի տեսքի: FosB- ի լիարժեք երկարության գերազանցում, FosB գենի մյուս հիմնական արտադրանքը նույնպես չի գործում: Այս բացահայտումները հաստատում են ΔFosB- ի յուրահատուկ դերը միջուկային հեծանվարշավներում, չարաշահումների եւ սթրեսի թմրանյութերի արձագանքման վերահսկողության մեջ:

ՆԵՐԱԾՈՒԹՅՈՒՆ

ΔFosB- ն կոդավորված է FosB գեն եւ կիսում homology այլ Fos ընտանիքի transcription գործոնները, որոնք ներառում են c-Fos, FosB, Fra1 եւ Fra2: Բոլոր Fos ընտանեկան սպիտակուցները արագորեն եւ անցումային փուլերում ուղեկցվում են կոնկրետ ուղեղային շրջաններում `չարաշահումների բազմաթիվ թմրանյութերի սուր վարվելուց հետո [տես ]: Այս արձագանքները առավել ակնհայտորեն երեւում են միջուկային հեծանիվների (NAc) եւ dorsal striatum- ի մեջ, որոնք հանդիսանում են թմրամիջոցների վարձատրության եւ լոկոմոտիվ գործողությունների կարեւոր միջնորդներ: Այս բոլոր Fos ընտանիքի սպիտակուցները, սակայն, շատ անկայուն են եւ վերադառնում են բազալ մակարդակներում, թմրամիջոցների ներթափանցման ժամերին: Ի հակադրություն, ΔFosB- ն, անսովոր կայունության շնորհիվ, in vitro եւ in vivo (Բ) Carle եւ այլոք, 2006; ), կուտակում է միանգամայն նույն ուղեղի շրջաններում թմրամիջոցների կրկնակի ազդեցության հետեւանքով; ; ): Վերջերս կատարված ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ սթրեսի որոշակի ձեւերի քրոնիկական ազդեցությունը նույնպես հանգեցնում է ԱՀ-ում ΔFosB- ի կուտակմանը, եւ որ նման նախադրումը նախապատվություն է տալիս կենդանիների վրա, որոնք համեմատաբար դիմացկուն են սթրեսի (այսինքն, ճկուն կենդանիների) վնասակար հետեւանքների նկատմամբ; , ).

Մենք ցույց ենք տվել, որ ԱՀ-ում ΔFosB- ի գերբնակեցումը կամ ցնցող բուսական փոխանցման մկների կամ տեղային վիրուսային միջնորդավորված գեների փոխանցման միջոցով ավելացնում է կենդանու զգայունությունը կոկաինի եւ այլ թմրամիջոցների չարաշահման (թմրամիջոցների); ; ; Բ) Robison եւ այլք, 2013): Նման ներածումը նաեւ նպաստում է բնական պարգեւների սպառումը եւ մղումը:; ; ; ; Բ) Pitchers et al., 2009; ), մեծացնում է ուղեղի խթանման պարգեւը intra-cranial ինքնակառավարման խթանման պարադիգմսներում (), եւ կենդանիներին ավելի դիմացկուն է դարձնում քրոնիկ սթրեսի մի քանի ձեւ, ): Նմանապես, մկները, որոնք հիմնովին բացակայում են FosB- ի լիարժեք արտահայտությունը, սակայն ցուցադրում են ավելացված արտահայտություն ΔFosB, դրսեւորում է սթրեսային սենսացիա): Միասին, այս բացահայտումները պաշտպանում են այն տեսակետը, որ ΔFosB- ը, որը գործում է NAc- ում, նպաստում է կենդանիների վարձատրության, տրամադրության եւ մոտիվացիայի վիճակին:

Այնուամենայնիվ, այս ուսումնասիրությունների հիմնական խոչընդոտը այն է, որ այլ արդյունք է FosB գենը, որը կոչվում է Δ2ΔFosB, նույնպես արտահայտված է այս բոլոր գենետիկ մուտանտի մկների եւ վիրուսային վեկտորային համակարգերի մեջ, բացելով Δ2ΔFosB- ի հնարավոր ներդրումը դիտարկված վարքային ֆենոտիպերին: Δ2ΔFosB- ն թարգմանվում է այլընտրանքային սկզբնաղբյուրից `Δ- ումFosB mRNA տեքստը (): Այս այլընտրանքային թարգմանությունը հանգեցնում է Δ2ΔFosB- ի ձեւավորմանը, որը չունի ΔFosB- ի 78 N-terminal AA- ն: Այս ուսումնասիրության մեջ մենք ուսումնասիրեցինք Δ2ΔFosB- ի դերը թմրանյութերի չարաշահման եւ սթրեսային մոդելներում, այն գերազանցելով այն, կամ ΔFosB կամ FosB, AAV (adeno- ի հետ կապված վիրուս) վեկտորների հետ; մենք օգտագործեցինք մուտանտի ձեւը ΔFosB mRNA- ն, որը չի կարող ենթարկվել այս այլընտրանքային թարգմանության մեխանիզմի: Մեր արդյունքները հաստատում են, որ ավելի վաղ ուսումնասիրություններում տեսած պարգեւատրման եւ դիմակայուն գործողությունները իրականում միջնորդավորված են ΔFosB- ի միջոցով, այլ ոչ թե մյուս երկու պրոտեինֆերտների կողմից: FosB գեն, լիարժեք FosB կամ Δ2ΔFosB:

ՄԵԹՈԴՆԵՐ

Կենդանիներ

Նախքան փորձարկումը, 9- ից մինչեւ 11- շաբաթական C57BL / 6J տղամարդկանց մկաններ (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, ԱՄՆ) էին խմբում հինգը մեկ վանդակի մի գաղութ սենյակում, որը սահմանվում է մշտական ​​ջերմաստիճանում (23 ° C) A 12 ժամ լույս / մութ ցիկլ (լույսերը, ժամը 7 AM- ում), սննդամթերքի եւ ջրի մուտքի թույլտվության հասանելիությամբ: Որոշ փորձնական փորձարկումներ են իրականացվել կրկնակի փոխանցման մկաններ, որոնցում ΔFosB- ի գերբարձր արտացոլումը գտնվում է թթասրացիկինի գենային կարգավորման համակարգի վերահսկողության ներքո, ինչպես նկարագրված է (): Մկները օգտագործվել են դոկիքսիքցլինի վրա (պահպանել գեն արտահայտությունը) կամ անջատել doxycyclin- ը, որը թույլ է տալիս ΔFosB արտահայտությունը: Բոլոր արձանագրությունները հաստատվել են Ինդիանայի կենդանիների խնամքի եւ օգտագործման կոմիտեի կողմից (IACUC) Սինայ լեռան վրա:

AAV վեկտորները

Մենք օգտագործում էինք AAV2- ի սերոտիպը AAV վեկտորների փաթեթավորման համար, որոնք արտահայտում են լիարժեք FosB, ΔFosB կամ Δ2ΔFosB- ի մարդկային անմիջական վաղ cytomegalovirus (CMV) խթանողը `Venus fluorescent սպիտակուցի հետ, որը միջամտող IRES2- ի (ներքին ribosome կրկին մուտքային կայքը 2) հետո կոդավորված է: AAV-ΔFosB կառուցվածքը արտահայտում է Δ- ի մուտանտի ձեւFosB mRNA- ն, որտեղ Met79- ի ներկայացրած կոդոնը միաձուլվել է Leu- ին `ջնջելու համար Δ2ΔFosB- ի այլընտրանքային թարգմանության սկիզբ էջ:

Վիրուսային միջնորդավորված գեների փոխանցում

Մկները տեղադրվեցին փոքրիկ կենդանիների ստերեոտաքսիկ գործիքների մեջ, ketamine (100 մգ / կգ) եւ քիլինին (10 մգ / կգ) անեստեզիայի տակ, եւ դրանց գլխիկ մակերեսները հայտնաբերվեցին: Երեսուներկու չափիչ ներարկիչի ասեղները երկակիորեն իջեցվել են NAc- ին, 0.5 μL AAV վեկտորի համար 10 ° անկյունում (նախորդ / հետերային + 1.6, միջին / կողմնային + 1.5, ցածր / ventral - 4.4 մմ): Infusions- ը տեղի է ունեցել 0.1 μl / րոպե արագությամբ: AAV ներարկում ստացող կենդանիները թույլատրվել են վերականգնել առնվազն 24 ժամ վիրահատությունից հետո: Արտահայտման հաստատման համար մկները անզգայացված էին եւ ներծծվում էին 4% paraformaldehyde / PBS (phosphate-buffered saline) հետ: Brains էին cryoprotected է 30% sucrose, ապա սառեցված եւ պահվում է -80 ° C մինչեւ օգտագործման համար: Կորոնային հատվածները (40 μմ) կտրված են գինու քլորի վրա եւ մշակվում են կոնֆլիկալ մանրադիտակի միջոցով սկանավորելու համար:

Վարքագծային փորձարկում

Մկնիկները սովորել են մի քանի ստանդարտ վարքային փորձարկումներով `ըստ հրատարակված արձանագրությունների, որոնք հետեւյալն են.

Քրոնիկ (10 օր) սոցիալական պարտության սթրեսը կատարվել է ճիշտ նկարագրված (; ): Ընդհանուր առմամբ, CD1 մկնիկի տան վանդակում մեկ փորձարարական մկնիկ եւ մեկ CD5 ագրեսոր միավորվեցին 1 րոպե: Այնուհետեւ դրանք բաժանվում էին պլաստիկ բաժանորդի կողմից, որը պատված էր, որպեսզի թույլ տան զգայական շփումը օրվա հիշեցման համար: Ամեն առավոտ 10 օրվա ընթացքում փորձարարական մուկը տեղափոխվեց տարբեր ագրեսոր մկնիկի վանդակի մեջ: Ոչ պարտված կարգավորող մկները նմանատիպ ազդեցություններ են կրել, սակայն այլ C57BL / 6J մկների հետ: Թեստեր սոցիալական փոխազդեցություն կատարվել են նախկինում նկարագրված (; ): Կարճ ասած, փորձարկման մկնիկը տեղադրվեց վեպի դաշտում, որը մի կողմում գտնվող փոքր վանդակի մեջ էր: Շարժումը (օրինակ, ճանապարհորդված հեռավորությունը, այս փոքրիկ վանդակի հարեւանությամբ անցկացված ժամանակը) նախապես դիտվել է 150 վայրկյան ընթացքում, երբ փոքր խցիկը դատարկ էր, հետեւում է լրացուցիչ 150 վայրկյանից CD1 մկնիկով այդ վանդակում: Շարժման մասին տեղեկատվությունը ստացվել է EthoVision 5.0 ծրագրով (Noldus):

Մենք ստանդարտ, անաչառ էինք պայմանավորված տեղ նախապատվություն (CPP) ընթացակարգ (Բ) Robison եւ այլք, 2013): Ընդհանուր առմամբ, կենդանիները նախապատվություն են ստացել 20 րոպեում լուսանկարի մոնիտորինգի ենթարկված եռանկյուն տուփով `ազատորեն հասանելի էկոլոգիապես հստակ կողմի պալատների: Այնուհետեւ մկները բաժանվեցին հսկողության եւ փորձարարական խմբերին, որոնք համարժեք նախադրյալներ էին: Փորձարարական մանիպուլյացիաներից հետո մկները անցան չորս 30 րոպե դասընթացներ (փոխարինող կոկաին եւ շաքարի զուգավորում): Փորձարկման օրվա ընթացքում մկները 20 րոպե ունեին բոլոր սենյակների համար անսահմանափակ մուտք, իսկ CPP- ի հաշվարկը հաշվարկվել էր կոկաինի զուգակցված պալատում անցկացրած ժամանակի նվազեցման միջոցով `աղի-զույգացված պալատում անցկացրած ժամանակը: Կոկինային իջեցված շարժիչային ճառագայթման ակտիվությունը չափվել է CPP տուփի մեջ, յուրաքանչյուր փորձարկման ներարկումից հետո, 30 րոպեով:

Բարձրացված գումարած լաբիրինթոս թեստերը կատարվել են սեւ Plexiglass- ի միջոցով, սպիտակ ներքեւի մակերեսներով, ապահովելու հակադրություն (): Մկները տեղադրվեցին պլյուսի լաբիրինթոսի կենտրոնում եւ թույլ տվեցին ազատորեն ուսումնասիրել լաբիրինթոս 5 րոպե կարմիր լույսի պայմաններում: Բաց եւ փակ ձեռքերում ժամանակի ընթացքում յուրաքանչյուր մկնիկի դիրքորոշումը դիտվել է տեսախցիկի սարքերի (Ethovision) եւ առաստաղի տեսախցիկով:

Ընդհանուր, ամբուլատոր լոկոմոտիվային գործունեություն գիշերային փուլում գնահատվել է տուփային վանդակում, որը նկարահանվել է Photocell grid- ի սարքով (Med Associates Inc., Սբ. Ալբանս, Վ.Տ., ԱՄՆ), որը հաշվարկեց 12 ժամ ժամանակահատվածում ամբուլատոր լուսանկարի ընդմիջումների քանակը).

Western blotting

NAc նմուշները ենթարկվում էին արեւմտյան բլոտի, ինչպես նկարագրված էր (, ): Սառեցված NAc dissections են homogenized է 100 μl բուֆեր պարունակող phosphatase inhibitor կոկտեյլներ I եւ II (Sigma, Սեն - Լուի, MO, ԱՄՆ) եւ protease inhibitors (Roche, Բազել, Շվեյցարիա) օգտագործելով ուլտրաձայնային մշակողը (Cole Parmer, Vemon Hills, IL , ԱՄՆ). Սպիտակուցի կոնցենտրացիաները որոշվել են DC սպիտակուցի փորձարկման միջոցով (Bio-Rad, Hercules, CA, ԱՄՆ), եւ 10-30 μg սպիտակուցը բեռնված է 12.5% կամ 4% -15% gradient Tris-HCl plyacrylamide gels վրա էլեկտրաֆորեզի մասնաբաժին (Bio -Ռադ): Սպիտակուցները ազոտելլուլոզային զտիչներին փոխանցելուց հետո ֆիլտրերը inkubated- ով հակա-FosB հակամարմիններով, որոնք ճանաչում են բոլորը FosB գենային արտադրանքները, ապա երկրորդական հակամարմինները եւ, վերջապես, քանակական համակարգը, օգտագործելով Odyssey համակարգը (Li-Cor) `ըստ արտադրողի արձանագրությունների:

Վիճակագրություններ

Օգտագործվել են ANOVA և ուսանողների t թեստեր, որոնք շտկվել են բազմակի համեմատության համար, և նշանակությունը սահմանվել է p <0.05:

ԱՐԴՅՈՒՆՔՆԵՐ

Ինչպես երեւում է Նկար 1AԷ, FosB գենը mRNA- ներն ընդգրկում է FosB- ի եւ ΔFosB- ի համար: ΔFosB mRNA- ն առաջանում է Exon 4- ի այլընտրանքային splicing միջոցառումներից FosB հիմնական գրագիր դա հանգեցնում է վաղաժամ կանգառի կոդոնների եւ վերադարձված ΔFosB սպիտակուցի առաջացմանը, որը FosB- ի C-terminal 101 aa- ն չունի: FosB եւ ΔFosB mRNA- ն կիսում է նույն ATG սկիզբն կոդոնը, որը տեղակայված է Exon 3- ի 1- ի վերջում: Այն հայտնի է, քանի որ բնօրինակը կլոնավորում FosB արտադրանքները, որոնք երկու mRNA- ն էլ են կիսում այլընտրանքային թարգմանության մեկնարկային կայք Exon 2- ում, կոչվում է Δ1, Δ2 եւ Δ3 ATGs: Նախորդ աշխատանքը ցույց է տվել, որ մի փոքր սպիտակուցային ապրանքը գեներացվել է Δ- իցFosB mRNA, բայց ոչ FosB mRNA, Δ2 ATG- ի միջոցով; այս սպիտակուցը կոչվում է Δ2ΔFosB եւ չունեն 78 Ա ΔFosB (): Ի տարբերություն, Δ1- ը եւ Δ3 ATG- ն, կարծես, լռում են, քանի որ չկա ապացույց, FosB կամ ΔFosB թղթադրամներ:

Նկար 1 

Արտահայտման մակարդակները FosB գենային արտադրանք

Նկար 1B ցույց է տալիս ներածությունը FosB գենային արտադրանքները NAc- ում կրկնակի կոկաինի վարման ընթացքից հետո, կենդանիների հետ վերջին քննական դոզանից հետո հետազոտվել է 2 ժամ: Այս պահին ցույց են տալիս, որ ΔFOSB- ը եւ FosB- ի սպիտակուցները զգալիորեն ազդում են կոկաինի կողմից, առանց Δ2ΔFosB- ի հետեւողական ներադրման: Ուշադրություն դարձրեք, որ ΔFosB- ի եւ FosB- ի դրսեւորումը տարբերվում է 24 ժամից կամ ավելի օրվանից, երբ վերջին թմրամիջոցների դոզայից հետո, երբ ΔFosB- ն առաջացնում է ΔFosB սպիտակուցի յուրահատուկ կայունությունը; ; ): Այնուամենայնիվ, ի տարբերություն Δ2ΔFosB- ի ինդուկցիայի բացակայության `կոկայի կրկնակի կառավարման կրկնօրինակը, կրկնակի մկնիկը, որը մենք օգտագործում էինք ΔFosB- ին գերազանցելու համար եւ դրանով ուսումնասիրում ենք նրա վարքային հետեւանքները (; ; ) հանգեցնում է զգալի, բայց ցածր մակարդակի, Δ2ΔFosB- ի գերազանց արտահայտությունը, բացի ΔFosB (Նկար 1C): Δ2ΔFosB- ի համանման մակարդակը դիտվում է մեր վիրուսային վեկտորների հետ, որոնք գերազանցում են wildtype ΔFosB (օրինակ, տես Նկար 2): Այս դիտողությունները բարձրացնում են այն հնարավորությունը, որ ΔFOSB- ի առաջադրած որոշ գործողությունները կարող են միջնորդվել մասամբ Δ2ΔFosB- ի միջոցով:

Նկար 2

Ընտրողական արտահայտություն FosB Neuro2A բջիջներում AAV վեկտորներով գենային արտադրանքները

ΔFOSB- ի Δ2ΔFosB- ի դիֆերենցիալ դերերը տարբերելու համար մենք ստեղծեցինք AAV վեկտորը, որը գերազանցում է Δ2ΔFosB- ին, ինչպես նաեւ նոր վեկտորը, որը գերազանցում է Δ- ի մուտանտի ձեւըFosB mRNA (mΔFosB mRNA), որը չի կարող ենթարկվել այլընտրանքային թարգմանության, առաջացնել Δ2ΔFosB: Երկու վեկտորները նաեւ արտահայտում են Վեներային որպես արտահայտիչ նշան: Մենք համեմատեցինք այս երկու վեկտորների ազդեցությունները ուրիշներին, որոնք արտահայտում էին FosB plus Venus կամ Venus- ն որպես վերահսկողություն: Այս նոր AAV վեկտորների կարողությունը ընտրովիորեն գերազանցել է իրենց կոդավորված տրանսգենների նկարագրությունը Նկար 2.

Հաջորդը, ստուգելու յուրաքանչյուրի ազդեցությունը FosB գենային արտադրանք, որը գործում է NAc- ում: բարդ գործելակերպի վրա, մենք ներարկել ենք այս բոլոր AAV- ներին այս ուղեղային տարածքի մեջ երկաթուղային առանձին խմբերում եւ 3 շաբաթ անց, երբ տրանսգենի արտահայտությունը առավելագույնն է (Նկար 3A), կատարել է թեստերի մարտկոց: Մենք առաջին հերթին գնահատեցինք այդ հնարավորությունը FosB գենային արտադրանքները, որոնք ազդում են նախկինում ΔFosB- ի համար սոցիալական կայունության պարադիգմում, ), Ինչպես ցույց է տրված Նկար 3A, Վերահսկիչ մկաններն արտահայտում են միայն Վեներան, որը ցույց է տալիս սոցիալական փոխազդեցության վարքագծի ակնկալվող նվազեցումը, զգայունության հստակ վարքագծային մարկեր (; ): MΔFosB- ի գերբարձրացումն ամբողջությամբ փոխեց այս ֆենոտիպը, ի տարբերություն Δ2ΔFosB- ի եւ FosB- ի, որոնք ոչ մի ազդեցություն չունեին:

Նկար 3 

Արդյունավետությունը FosB գենային արտադրանքները NAc- ում կոկաինի կամ սոցիալական սթրեսի վարքային արձագանքների վերաբերյալ

Փորձարկելու յուրաքանչյուրի հարաբերական ներդրումը FosB գենային արտադրանքը կոկաինի հատուցող հետեւանքների նկատմամբ, մենք չափազանց մեծացրինք Δ2ΔFosB ինքն իրեն, mΔFosB- ին կամ FosB- ին, երկակիորեն, NAc- ում եւ սովորեցրեց կենդանիներին `պայմանավորված տեղում նախապատվության պարադիգմում: Ինչպես երեւում է Նկար 3B, NAc- ի երկկողմանի գերբնակեցումը մեծացնում է կոկաինի շեմի դոզայի տեղակայման ազդեցությունը, որը Վեներայի արտահայտիչ վերահսկող կենդանիների համար կարեւոր տեղ նախադրյալ չի առաջացրել: Ի հակադրություն, Δ2ΔFosB- ի կամ FosB- ի գերբնակեցումը ոչ մի ազդեցություն չի ունեցել կոկաինի տեղադրման վրա: Քանի որ մենք օգտագործում էինք կոկաինի շեմի դոզան, որը չհանգեցրեց վերահսկող կենդանիների նշանակալից տեղի նախապատվությունը, մենք չենք կարող բացառել այն հնարավորությունը, որ FosB կամ Δ2ΔFosB կարող են նվազեցնել կոկաինը:

Վերջապես, գնահատելու բազային վարքագծերը, մենք ուսումնասիրեցինք կենդանիների տան վանդակում շարժվող շարժումը, ինչպես նաեւ բարձր լցված լաբիրինթոսում մտահոգիչ վարքը: NAA- ում FosB, mΔFosB, Δ2ΔFosB գերբնակեցումը ազդեցություն ունեցավ լոկոմոտիվային գործունեության վրա, չնայած FosB- ի եւ Δ2ΔFosB- ի, բայց ոչ mΔFosB- ն արտադրեց փոքր, բայց զգալի նվազեցում, բարձր լարված լաբիրինթոսում անհանգստության նման վարքագիծըՆկար 3D, E): Այս տվյալները վկայում են այդ մասին FosB գենի արտահայտությունը նշանակալիորեն չի փոխում նորմալ պայմաններում վարքը:

ՔՆՆԱՐԿՈՒՄ

Սույն ուսումնասիրության արդյունքները վկայում են, որ նախկինում ΔFosB- ի համար ներկայացված ֆենոտիպը իսկապես միջնորդավորված է ΔFosB- ի միջոցով, այլ ոչ Δ2ΔFosB- ով, այլընտրանքային թարգմանված արտադրանք ΔFosB mRNA- ն, որը չունի ΔFosB- ի N-terminus: Չնայած մեր նախկինում օգտագործված գործիքները ΔFOSB- ին գերազանցելու համար բերում են նաեւ Δ2ΔFosB- ի ցածր մակարդակների սերունդ, մենք ցույց ենք տալիս, որ ԱԷԿ-ում անչափ արտացոլված է մի mutated ձեւի ΔFosB mRNA- ն, որը չի կարող առաջացնել Δ2ΔFosB, այլընտրանքային կադոնների մուտացիայի մուտացիայի շնորհիվ, recapitulates աճը ինչպես կոկաինը պարգեւատրման եւ ճկունություն սոցիալական պարտության սթրեսի համար նախկինում ΔFosB (; ): Ավելին, Δ2ΔFosB- ի գերբեռնվածությունը ոչ մի ազդեցություն չի ունենում կոկաինի կամ սթրեսային արձագանքների վրա: Մենք նաեւ ցույց ենք տալիս, որ առաջին անգամ ԱՀԱ-ում լիարժեք FosB- ի գերբնակեցումը չի ազդում կոկաինի կամ սթրեսի վարքային արձագանքների վրա:

Թեեւ այդ արդյունքները չեն բացառում այն ​​հնարավորությունը, որ Δ2ΔFosB, որպես փոքր սպիտակուցային պրոդուկտ FosB գենը կարող է ֆունկցիոնալ ազդեցություն ունենալ այլ ուղեղի շրջաններում կամ ծայրամասային հյուսվածքներում, սակայն մեր հայտնաբերումները, այնուամենայնիվ, հաստատում են ΔFosB- ի յուրահատուկ ներդրումը, որը գործում է NAc պարգեւավճարների շրջանում, խթանելով կոկաինը եւ սթրեսային կայունությունը:

Թեթեւ մելիռովկա

  • ΔFosB mRNA- ն առաջացնում է ΔFosB- ն եւ փոքր այլընտրանքային թարգմանված Δ2ΔFosB:
  • Միայն ΔFosB- ի գերբեռնվածությունը հաստատում է իր պարգեւատրման եւ պրոզինֆենսության ֆենոտիպը:
  • Ի հակադրություն, Δ2ΔFosB չի ազդում կոկաինի պարգեւի կամ սթրեսային խոցելիության վրա:
  • Ամբողջական FosB, կոդավորված է FosB mRNA- ը չի ազդում պարգեւի կամ ճկունության վրա:

Acknowledgments

Այս աշխատանքը ֆինանսավորվել է Հոգեկան առողջության ազգային ինստիտուտի եւ Թմրամիջոցների չարաշահման ազգային ինստիտուտի դրամաշնորհների, ինչպես նաեւ «Ishibashi» հիմնադրամի եւ Ճապոնիայի գիտության խթանման ընկերության կողմից (JSPS KAKENHI համարները `24591735):

Հղումներ

Հրատարակչի հրաժարումը Սա հրատարակման համար ընդունված չհրապարակված ձեռագրի PDF ֆայլ է: Որպես ծառայություն մեր հաճախորդներին, մենք տրամադրում ենք ձեռագրի այս վաղ տարբերակը: Ձեռագիրը ենթարկվում է պատճենահանման, տպագրության եւ վերանայման արդյունքների, մինչեւ դրանց հրապարակման վերջնական ձեւը: Խնդրում ենք նկատի ունենալ, որ արտադրության ընթացքում հնարավոր է հայտնաբերել սխալներ, որոնք կարող են ազդել բովանդակության վրա, եւ բոլոր իրավական խոստումները, որոնք վերաբերում են ամսագրին:

Սայլակ

  1. Եղել են LE, Hedges VL, Vialou V, Nestler EJ, Meisel RL- ը: Delta JunD- ի արտահայտությունը միջուկի երիկամների մեջ խանգարում է սեռական պարգեւի կանանց սիրահար համազգեստին: Genes Brain Behav. 2013; 12: 666-672: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  2. Բերտոն Օ, McClung CA, DiLeone RJ, Krishnan V, Russo S, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ: BDNF- ի հիմնական դերը մզոլիմիկ դոպամինային ճանապարհում, սոցիալական պարտության սթրեսի ժամանակ: Գիտություն. 2006; 311: 864-868: [PubMed]
  3. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai Ի.Ն., Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ: Պահպանված C-terminal- ի դեգրոնային տիրույթի բացակայությունը նպաստում է ΔFosB- ի յուրահատուկ կայունությանը: Eur J Neurosci: 2007; 25: 3009-3019: [PubMed]
  4. Chen JS, Kelz MB, Հույս BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ: Քրոնիկ ֆոսին առնչվող հակիգենիներ. ԴելտոֆոսԲ կայուն տարբերակները ուղեկցվում են քրոնիկ բուժման միջոցով: J Neurosci. 1997; 17: 4933-4941: [PubMed]
  5. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW- ն: ΔFosB- ը խթանում է կոկաինը: J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493: [PubMed]
  6. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC- ը: ΔFosB- ը տարբեր ձեւերով կարգավորում է միջուկի ուղիղ եւ անուղղակի ուղիների գործառույթը: Proc Natl Acad Sci ԱՄՆ. 2013; 110: 1923-1927: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  7. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL- ը: ΔFosB- ի գերբնակեցումը միջուկի մեղվաբուծությունում բարձրացնում է սեռական պարգեւը կանանց սիրահարների համար: Genes Brain Behav. 2009; 8: 442-449: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  8. Hiroi N, Brown J, Haile C, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ: FosB- ի մուտանտի մկները. Fos- ի հետ կապված սպիտակուցների քրոնիկ կոկաինի ներարկման եւ կորածի հոգոմատորի եւ հատուցող ազդեցությունների բարձր զգայունության կորուստ: Proc Natl Acad Sci ԱՄՆ. 1997; 94: 10397-10402: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  9. Հույսը BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ: Անցում երկարատեւ AP-1 համալիրը բաղկացած փոփոխված Fos- նման սպիտակուցներ ուղեղի քրոնիկ կոկաին եւ այլ քրոնիկ բուժում. Նյարդոն: 1994; 13: 1235-1244: [PubMed]
  10. Կառլզոն Վ., Ջր, Ուիսլեր Ք, Գիլդեն Լ, Բեքման AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch R, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ- ն: Ուղեղի աշնանացանի գործակիցը արտահայտում է ուղեղի կառավարումը զգայունություն կոկաինի նկատմամբ: Բնություն: 1999; 401: 272-276: [PubMed]
  11. Monteggia LM, Luikart B, Barrot M, Theobald D, Malkovska I, Nef S, Parada LF, Nestler EJ: BDNF- ի պայմանական նոկաուտները ցույց են տալիս դեպրեսիայի հետ կապված վարքագծի գենդերային տարբերությունները: Բիոլոգիական հոգեբուժություն: 2007; 61: 187-197: [PubMed]
  12. Մուսչամ Ջ.Ն., Nemeth CL, Robison AJ, Nestler EJ, Carlezon WA., Jr ΔFosB- ը խթանում է կոկաինի հատիկավոր ազդեցությունները `նվազեցնելով kappa-opioid agonist U50488- ի դեպրեսիվ ազդեցությունները: Բիոլոգիական հոգեբուժություն: 2012; 71: 44-50: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  13. Nestler EJ- ն: Կախվածության անդրսահմանային մեխանիզմներ. Դելտոֆոսբի դերը: Ֆիլոս Տրանս Ռոկ Լոնդոն Բ Բոլ Սի. 2008; 363: 3245-3255: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  14. Օնիշի ՅՆ, Օնիշի Յ.Հ., Հոկամա Մ, Նոմարու Հ, Յամազակի Կ, Թոմինագա Յ, Սաքումի Կ, Նեստլեր Է.Ջ., Նակաբեպփու Յ.ՖոսԲ: Սթրեսների հանդուրժողականության բարձրացման եւ FosB- ի կողմից տեղաշարժման ազդանշանների հակազդեցման համար անհրաժեշտ է: Բիոլոգիական հոգեբուժություն: 2011; 70: 487-495: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery P, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ: Խրոնիկական սթրեսից հետո ΔFosB- ի ներդիրը պարգեւատրման հետ կապված ուղեղներում: J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602: [PubMed]
  16. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ: ΔFosB- ի ուղեղի հագեցման հստակ օրինաչափություններ `չարաշահման թմրամիջոցներով: Synapse- ը: 2008; 62: 358-369: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  17. Pitchers KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM: ΔFosB- ն ճառագայթային ակեմբենսներում կարեւոր է սեռական պարգեւների ամրապնդման համար: Genes Brain Behav. 2010; 9: 831-840: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  18. Pitchers KK, Vialou V, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM- ը: Սեքսուալ փորձը մեծացնում է ամֆետամինային պարգեւը եւ դոպամին D1- ի ընկալիչի ակտիվացումով եւ deltaFosB- ի ինդուկցիայի միջոցով ստացված սպինոգենեզը: J Neurosci. 2013; 33: 3434-3442: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  19. Roybal K, Theobold D, DiNieri JA, Graham A, Russo S, Krishnan V, Chakravarty S, Peevey J, Oehrlein N, Birnbaum S, Vitaterna MH, Orsulak P, Takahashi JS, Nestler EJ, Carlezon WA, Jr, McClung CA. Mania- ի նման վարքագիծը, որը հանգեցրեց CLOCK- ի խափանմանը: Proc Natl Acad Sci ԱՄՆ. 2007; 104: 6406-6411: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  20. Teegarden SL, Bale TL- ն: Դիետիկ նախապատվության նվազում է առաջացնում աճող հուզական եւ ռիսկային ռեակցիա: Բիոլոգիական հոգեբուժություն: 2007; 61: 1021-1029: [PubMed]
  21. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ: Ֆոսֆորի կայունության կարգավորում ֆոսֆորիալացման միջոցով: J Neurosci. 2006; 26: 5131-5142: [PubMed]
  22. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ: ΔFosB- ի ֆոսֆորումը միջնորդում է իր կայունության մեջ vivo- ում: Neuroscience. 2009; 158: 369-372: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  23. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, Covington HE, III, Dietz DM, Ohnishi YN, Mouzon E, Rush AJ, III, Watts EL, Wallace DL, Iñiguez SD, Ohnishi YH, Steiner MA, Warren B, Krishnan V, Neve RL, Ghose S, Berton O, Tamminga CA, Nestler EJ: ΔFosB ուղեղի պարգեւատրման սխեմաներում միջնորդում է սթրեսին եւ հակադեպրեսանտային պատասխաններին: Բնություն Նյարդաբան: 2010a; 13: 745-752: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  24. Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ: Շիճուկային արձագանքման գործոնը նպաստում է քրոնիկ սոցիալական սթրեսի նկատմամբ կայունությանը ΔFosB- ի ներդաշնակեցման միջոցով: J Neurosci. 2010b; 30: 14585-14592: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  25. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham D, Green TA, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolaños CA. ΔFosB- ի ազդեցությունը ճառագայթման ակունքներում բնական պարգեւատրման հետ կապված վարքագծի վրա: J Neurosci. 2008; 28: 10272-10277: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
  26. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thorén P, Nestler EJ, Brené S. ΔFosB- ն կարգավորում է անիվի վազքը: J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138: [PubMed]
  27. Զաչարիո Վ, Բոլանոս CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ: ΔFosB: Մորֆինային գործողության մեջ էական դեր ΔFosB- ի համար: Բնություն Նյարդաբան: 2006; 9: 205-211: [PubMed]