Орташа жоғары май диетасы жас егеуқұйрықтардың суаруды өзін-өзі басқаруын көбейтеді (2013)

. Автордың қолжазбасы; PMN 2014 ақпан 1-да қол жетімді.

Соңғы редакцияланған пішінде жарияланады:

Аппетит. 2013 ақпан; 61 (1): 19-29.

2012 қыркүйек айында жарияланған 27. doi:  10.1016 / j.appet.2012.09.021

PMCID: PMC3538965

NIHMSID: NIHMS411020

дерексіз

Біз ертеректегі егеуқұйрықтардың сахарозы үшін орташа майлы диета ынталандыратындығын бұрын хабарлағанбыз. Бұл зерттеуде біз 5-8 аптасында жасөспірімдер арқылы өтетін егеуқұйрықтардағы жоғары майлы диетаның мотивациялық, нейрохимиялық және метаболические әсерлерін тексердік. Біз жоғары майлы диета сахарозаға жауапты болғанын байқадық, ол метаболикалық өзгерістерден немесе ядролардың акумбензияларындағы катехоламиндік нейротрансмиттерлік метаболиттердегі өзгерістерден тәуелсіз. Алайда гипоталамустағы AGRP mRNA деңгейлері айтарлықтай көтерілді. Біз AGRP нейрондарының белсендірілуінің дәлелденген мінез-құлқымен байланысты екенін және экзогендік (үшінші цебробровентрической) АГРП әкімшілігінің сахарозды ынталандыруға айтарлықтай артуына әкеп соқтырғанын көрсеттік. Бұл бақылаулар орта медицинадағы гипоталамуста АГРП-ның белсенділігі мен белсенділігінің жоғарылауы жоғары май диеталарымен араласатын сахароза үшін жауаптардың өсуіне негізделуі мүмкін екендігін көрсетеді. Ақыр соңында ересек егеуқұйрықтардағы сукрозға қатысты ынталандыруды салыстырдық, ал ересек адамдармен салыстырғанда жас жануарлар мен адамның тәтті дәмі үшін артықшылыққа ие екендігі туралы бұрынғы мәлімдемелерге сәйкес келетін семіздік егеуқұйрықтарында сахароза үшін ынталандыруды арттырды. Біздің зерттеулерімізде фондық диета жасөспірім жануарлардың тәтті дәмі үшін мотивацияның күшті модуляциялық рөлін атқаратындығын көрсетеді.

Түйінді сөздер: Мотивация, азық-түлік сыйымдылығы, жоғары майлы диета, жастар

кіріспе

Бұрын біз жоғары мөлшерде (31.8%) диетаға аз әсер ету ересек егеуқұйрықтардың сахарозы үшін мотивацияның жоғарылауына әкеп соқты). Өткен онжылдықта қоршаған ортаға және биологиялық әсерге немесе олардың синергиясына, тамақ өнімдерінің артықшылықтары мен энергетикалық тығыз тамақ өнімдеріне деген мотивациясына баға берілді. Бұл соңғы онжылдықта педиатриялық семіздік айтарлықтай өскендіктен жастарда өзектілігін жоғарылатты (). Тәтті дәмге артықшылықты арттыру жас жануарлар мен педиатриялық популяцияда; ; ; ; )) және азық-түлік өнеркәсібі үшін балалар үшін жоғары қантты құрғақ тамақ өнімдері мен сусындарды жобалауға және сатуға негіз болып табылады. Дегенмен, кәмелетке толмаған егеуқұйрықтардағы сахарозды ынталандыруға арналған фитнес диетасы сияқты қоршаған ортаға әсер етудің әсері жүйелі түрде бағаланбаған.

Ағымдағы бағалар АҚШ-тағы балалар мен жасөспірімдердің 10-20% -ы семіздік). Орташа есеппен АҚШ-та күн сайын қант қосылған 336 ккал тұтынады (Ұлттық онкология институты Қолданбалы зерттеулер бағдарламасы). Халық ересектерге (19 + жас) және педиатриялық популяцияға (2-18 жыл) бөлінгенде, бұл сан балаларға / жасөспірімдерге арналған сәл жоғары және ересектер үшін сәл төмен болады. Жасөспірімдер үшін көптеген қосылған қант содадан, энергетикалық сусындардан және спорттық сусындардан (National Cancer Institute Applied Research Program) қолданылады. Толық жүйелі шолу және мета-анализ көрсеткендей, алкогольсіз сусын тұтыну энергияны тұтынудың және дене салмағының өсуімен байланысты). Жасөспірімдер популяциясы (14-18 жас) тәулігіне 444 ккал қосылған қант пайдаланады, ал 9 мен 13 жас аралығындағы балалар күн сайын 381 ккал қант қосады (Ұлттық қатерлі ісік институтының қолданбалы зерттеу бағдарламасы). Бұл қосымша тұтыну ішінара жас адамдардағы ересектерге қарағанда тәттіліктің жоғарылауымен байланысты болуы мүмкін (; ; ; ). Зерттеулер көрсеткендей, 9 және 15 жастағы жастағы балалар жоғары концентрацияларда қант ерітіндісін ересек үлгідегі артықшылығы бар концентрациядан). Ұзындықтағы зерттеулер осы балалардың он тәуліктен кейінгі өмірдегі тәтті артықшылықтарын сынап көрді, сол кезде олардың артықшылықтары азайып, ересектердің артықшылықтарына қарағанда айтарлықтай айырмашылығы болмады (). Зерттеулер балалардың аналарымен салыстырғанда жоғары сахароза концентрациясының артықшылығын көрсетті (). Бұл дегеніміз, бала кезіндегі қанттың артықшылықтары генетикадан емес, дамуы мүмкін құбылысты көрсете алады. Зерттеулер сонымен қатар егеуқұйрықтардағы бұл сахарозадағы жоғары деңгейдің артықшылығын көрсетті ().

Көптеген CNS жүйелері мен қосылыстары адамдар мен кеміргіштерде жасөспірімдер кезінде пластикалық болып табылады, соның ішінде месocorticolimbic жүйесі және ядро ​​акументіндегі допаминергический белсенділік, марапаттау және ынталандыру медиациясының басты орны (; ) (қараңыз жақындағы шолу). Осы анатомиялық және нейрохимиялық өзгерістердің функционалдық маңыздылығы енді түсіндіріледі. Bolaños және оның әріптестері мен басқа зерттеушілердің соңғы зерттеулері допаминді қайта қалпына келтіретін тасымалдағыш антагонисті метилпевденттің (Ritalin) кейінгі емізу, кәмелетке толмаған кеміргіштерде емдеуден кейінгі әсерлерін зерттеді. Ересек өмірде өзгерген нейрохимия және мінез-құлық туралы есептер бар, олар метилфенидатпен (; ; ; ). Зерттеулер нәтижелері зерттелген жануарлардың әртүрлі үлгілерінің арқасында мүмкін болғанымен, бұл зерттеулер жасөспірімдік кезең допамин функциясын өзгертуге арналған дамушы терезе болып көрінеді. Азық-түлік - бұл воррал эктегаль аймағынан (VTA) проектордан допаминді ядро ​​акулементіне шығару үшін табиғи ынталандыру және егеуқұйрықтарды сахарозды қолдану операциясы өте қатты допаминді). Біз сахароза үшін ынталандыру ядро ​​акументінің допаминінің ұлғаюымен байланысты екенін және бұл жасөспірімде егеуқұйрықтың пери-pubertal сатысында ерекше әсер етуі мүмкін.

Балалар мен жас кеміргіштердің тәтті дәмі үшін жоғары артықшылықты ескере отырып, жасөспірімдер кеміргіштерінде сахароза үшін мотивацияның параметрлерін анықтау маңызды деп есептедік. Осы зерттеулер сериясында біз егеуқұйрықтардағы сахароза мотивациясына жоғары майлы диета араласуының әсерін бағаладық. Кейіннен метаболизм және CNS бағалауы метаболизмді, эндокринді немесе диета араласуымен байланысты нейрондық өзгерістерді анықтады. Үлкен ересек егеуқұйрықтарда айтылғандармен салыстыра отырып, сукроздың өзін-өзі басқаруын арттыруда қалыпты жоғары май (31.8%) диетасы тиімді болды. Біз сондай-ақ егеуқұйрықтардағы сахарозды ынталандыру үшін пост-диетаны емдеудің басқа да мінез-құлықтарға қатысты кейінгі өмірлік әсерлердің түрлерімен салыстырылатын жастар сияқты еместігін тексердік. Біздің зерттеулеріміз жас егеуқұйрықтардың орексигендік, гипоталамиялық пептидтік АГРП-мен аралық болуы мүмкін орташа майлы диетаны берген кезде сахароза үшін мотивацияның артуын көрсетеді; ерте диеталық араласудың әсерінен кейінгі кезеңдегі ересек ересекке әсер етпейтінін; және егеуқұйрықтар метаболикалық қалыпты және предшественным болса да, мінез-құлық айқын. Соңында, периpубортальные егеуқұйрықтарды жасанды ересек егеуқұйрықтарына қатысты сахароза үшін мотивацияны арттырады.

Материалдар мен әдістер

Тақырыптар

Сабонзеннің ерлер Альбино егеуқұйрықтары (Gilroy, CA) болды. Егеуқұйрықтарды шок (Laboratory Rodent Diet 5001, LabDiet зертханасы) немесе қалыпты жоғары майлы диета (31.8%; Research Diets Inc) ad libitum. Диеталар көмірсулардың жалпы мөлшеріне сәйкес келеді (тиісінше, төменгі майға қарағанда, 58% ккал және 51% ккал). Аз майдың құрамында 6.23 грамм% қант бар, ал жоғары майлы диета 29 гм% сахарозы бар. Олар 12: 12 сағаттағы 6 сағаттарда ашық жарық қараңғы циклда ұсталды. Егер басқаша көрсетілмесе, егеуқұйрықтарды 3 аптаға әкелді, дереу сепарациядан кейін және 5 аптаға дейін акудауға арналған. Осы жаста диета және / немесе мінез-құлықты дайындау және тестілеу басталды. Нақты протоколдар төменде егжей-тегжейлі сипатталған және қорытындыланады Кесте 1. Ерлер егеуқұйрықтары ХНУМХ-та жыныстық қатынастан өтіп жатқандықтанth-7th апта жасында зерттелетін уақыт егеуқұйрықтарды осы даму сатысына көшкен кезде зерттеуге арналған. Егеуқұйрықтарда жүргізілген барлық процедуралар жануарларды күту бойынша NIH нұсқауларына сәйкес жүргізілді және VA Puget Sound денсаулық сақтау жүйесіндегі Зерттеу және даму комитетінің жануарларды күту және пайдалану жөніндегі кіші комитетімен мақұлданды.

Кесте 1  

Эксперименттік хаттамалар

Сахарозаның өзін-өзі басқару

Жалпы хаттама. Процедуралар жарияланған әдістемеге негізделді (; ). Барлық оқу және тестілеу рәсімдері 0700 және 1200 сағ арасында өткізілді. Эксперимент 2-3 фазаны қамтиды: автошинг және стационарлық коэффициент (FR); хирургия және белгілі бір когорттарда қалпына келтіру (қараңыз Кесте 1); және Richardson және Roberts PR-алгоритмін қолдану арқылы прогрессивті көрсеткіштер (PR)). PR алгоритмі 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, 575 т.б.) сеанстың ішіндегі сыйақылардың сәттілігіне жету үшін басып шығарады және ынталандыру және марапаттау (759) үшін қатаң сынақ. Саңылаулар сұйықтық тамшыларға салынған 999% sucrose (999 мл сыйақы) өзін-өзі басқаруға үйретілді. Med Associates (Грузия, VT) жүйесімен басқарылатын оперативті жәшіктерде екі тетік болған, бірақ тек бір тұтқаны (белсенді, тартылатын тұтқыш) инфузиялық сорғыны белсендірді. Басқа тұтқаны (белсенді емес, стационарлық тұтқаны) басып шығарылған. Сахароза ерітіндісі ауызды тұтыну үшін сұйық тамшы ыдысына (Med Associates) жеткізілді. Алғашқы жаттығулар 27 күн бойы бір сағаттық сессия кезінде үздіксіз күшейтілген кесте бойынша жүргізілді (FR5: әрбір тұтқаны басу күшейтілді), сеанс бойынша 0.5 сахароза сыйақыларын барынша мүмкін. Әрбір сеанс белсенді тұтқышты және барлық сеанстағы қалған ақ хауссайттың жарықтандырылуымен басталды. 10 дыбыс сигналы (1 Гц, 50 дБ жоғары фон) + жарық (белсенді тұтқыштың үстіндегі 5 Вт ақ шамы) дискретті қосылыс белгісі әр сахарозды жеткізгеннен кейін әр сыйлықты жеткізуді қоса, 2900 секундқа созылады. PR-тренинг он күн бойы ең көп мүмкін 20 сағ / күн үшін өткізілді. Күнделікті сеанстар 7.5 минуттан кейін аяқталды, белсенді емес тұтқаны басудан бас тартылды, сол кезде үйдің шамы өшіп, белсенді тұтқаны алып тастады.

АГРП сахарозаның өзін-өзі басқаруға әсері

Біздің нәтижелеріміз жоғары рационды тамақтандыратын pubertal егеуқұйрықтарында AGRP мРНК өрнегінің ұлғаюын көрсеткендей, біз AGRP сахарозаның өзін-өзі басқаруын арттыра алатындығын растағымыз келді. 5-ескі егеуқұйрықтарды егеуқұйрықтар FR тренингінен өткізілді, содан кейін канналарды үшінші ми қан айналымына (ICV) алды. Бір аптадан кейін қалпына келтіруден кейін, ангиотензин II ішімдікке қарсы жауап тестімен орналастыруды растау (қараңыз ), сондай-ақ, FR қайта даярлаудың бір сессиясы басталды, ол ілінген PR өзін-өзі басқару парадигмасында басталды. PR күні 1 кейін егеуқұйрықтар екі топтың біріне тағайындалды, бұл PR күні 1 өнімділігі екі топқа (жасанды CSF көлік құралы, aCSF немесе AGRP, 2 μl 0.01 нмоль) айырмашылығы жоқ. Олар 8, 7 және 2 күндерінде ASF (n = 5) немесе AGRP (n = 8) инъекцияларын алды. PR оқыту уақытында күнделікті азық-түлікті тұтыну саны сандық түрде анықталды.

Сахарозаның өзін-өзі басқаруына жастың әсері

Өзін-өзі басқарудың мінез-құлқын pubertal егеуқұйрықтары мен жас ересектер арасында, сиыр етін немесе 31.8% майдың диетасын салыстырдық. Аждың VAPSHCS вивариумына (3-5wk немесе 8-10 wk) екі аптада жерсіндірілген. Олар бүкіл емтихан / жаттығу кезеңінде диетаны алды (4 сағ.). Осылайша, алғашқы тәжірибедегідей, pubertal егеуқұйрықтары 5-8 жасында зерттелген. Жастардың ересектерін 10-13 жасқа дейін зерттеді.

Дененің құрамын анықтау

Дене құрамы сандық магниттік-резонанстық спектроскопия көмегімен өлшенді (QMR []) жеке егеуқұйрықтардың ағзаның судың құрамын анықтау, салыстырмалы организмнің майы есептеледі. Жануарлар цилиндрлік ұстағыштарға анестезирленді, содан кейін ұстаушылар 2 минуттық сканерлеу үшін QMR машинасына енгізілді, ол үш өлшемді өлшеулерді орындайды. Деректер бүкіл дененің суын, майын және массасын жылдам есептеу үшін интеграцияланған компьютерге (EchoMRI, Echo Medical Systems, Houston, TX) сақталады.

Ішілік глюкозаға төзімділік тесті (IVGTT)

Санаулы IVGTT егеуқұйрықтарды созылмалы имплантацияланған IV канюлаларымен жүргізілді, олар зерттеуге дейін түні ораза ұстады, . Екі жақты ішілік іштің каннуляциясы зерттеуге екі апта бұрын енгізілді, біздің белгіленген әдістеме бойынша (). Бастапқы үлгілер t-10 мин (инсулин мен глюкозаны анықтау үшін, барлық уақытта) және t0.5 мин. Ашығандар 0-1 секундтан кейін 2 мл тұзды ерітіндімен 15 глюкоза / 20мл / кг инфузияға ие болды. Қан үлгілері 0.5, 5, 15, 30, 60 және 90 минуттан алынды. Процедура барысында катетерді қосудың (демек, қан үлгілерін алу мүмкіншілігінің болмауы) себебінен ұсынылған базалық / IVGTT деректерінің қорытындылары 120-7, егеуқұйрықтар үшін 8%Кесте 3). Плазма инсулині Linco егеуқұйрықтарды RIA жинақтарымен (RI-13K және SRI-13K, Linco) және YSI глюкоза анализаторында плазма глюкозасын анықтаған кезде анықталды. Қисық сызық астындағы аймақ (AUC) бастапқы мәннен жауап беру үшін 5 мин және 120 мин кезінде есептелген. HOMA индексі ашытқы (глюкоза [мМ] × инсулинм [U / L]) / 22.5 ретінде есептелген және инсулин мен глюкоза үшін өлшенген терминалдың ашытқы үлгілері арқылы есептелген.

Кесте 3  

Метаболикалық параметрлер1

Метаболиттік параметрлерді сақтау

1 экспериментінен шыққан егеуқұйрықтар эвтаназиядан бұрын, IVGTT аяқталғаннан кейін бірнеше күн өткен соң ашылды. Әндер изофлуранның ингаляциясымен терең анестезирленген және экзунгенделген. Гипоталами пептидті мРНК және ядролардың акумбенза катехоламиндерін өлшеу үшін миы сұйық азотта тез жойылып, мұздатады. Терминал плазмасын немесе сарысуды аштық инсулинін, глюкозаны, лептинді және триглицеридті өлшеу үшін қолданды. Триглицеридтер үшін Point TXX-7531 (Fisher # 400-23-666) және стандартты KIT # 418-STD (Fisher # 7531-23-666) қолданылған Point Triglyceride GPO жинағы пайдаланылды және 422 мкл сарысу екі данада талданды. Плазма лептині Миллипор Линко РИА жинағымен өлшенді. # RL 3K.

Катехоламинді HPLC әдістері []

Егеуқұйрықтар изофлуран анестезиясымен эвтанизацияланған, ал миы тез жойылып, мұздатып, -80 ° C температурасында сақталды. Әрбір жануардан екі ядролық акументалды (НСК) екі жақты микро зеңбірек оқшауланған. Көрші ми аймақтарының ластануын азайту үшін елеулі қамқорлық жасалса да, біздің әртүрлі тәсілдерімізге сәйкес, біздің әдісіміз НСcc шегінде ішкі бөлімдерді (яғни, NAcc ядросы) қарсы бөлуге мүмкіндік бермеді. Жоғары сапалы сұйық хроматография (HPLC) талдауы үшін үлгілерге антиоксидантты ерітінді (0.4 N перхлорат, 1.343 мМ этилендиаминететрааксис қышқылы (EDTA) және 0.526 мМ натрий метабисульфиті қосылды, одан кейін ультрадыбыстық тін гомогенизаторы арқылы гомогенизация жасалды (Biologics; Gainesville, VA Тіндердің гомогенатының кішкене бөлігі белокты анықтау үшін 2% натрий додецил сульфатында (SDS) ақуызды анықтау үшін (Пирс BCA протеин реагент жинағы, Рокфорд, IL) ерітіндіде қалды, ал қалған суспензия 14,000 минуттан кейін салқындатқыш центрифугада супернатант HPLC үшін сақталған.

Үлгілер Microsorb MV C-18 бағанында (5 Am, 4.6_250 мм, Varian, Walnut Creek, CA) бөлініп, бір мезгілде DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) және homovanilic қышқылы (HVA) үшін зерттелген, олардың екеуі маркерлер болып табылады допамин деградациясының, 5-HT және 5-HIAA. Төмендегі шарттарда Waters 12 Solvent Delivery System (Waters, Milford, MA) жүйесіне қосылған 5200-канондық коулометриялық массив detector (CoulArray 2695, ESA, Челмсфорд, MA) арқылы қосылыстар анықталды: 1 мл / мин ағыны; 50, 175, 350, 400 және 525 мВ-ны анықтаудың потенциалы; 650 мВ-ны тазартатын потенциалы. Жылжымалы фаза дистильденген H ішінде 10% метанол ерітіндісінен тұрады221 градусы бар 0.1 г / л (10.65 M) лимон қышқылы, 0.075g / l (2 M) Na4HPO176, 0.8 мг / л (36 M) гептансульфон қышқылы және 0.097 мг / л (4.1 мМ) EDTA бар. Белгісіз үлгілер 6-нүктелі стандартты қисыққа қарсы ең аз R бар сандық бағаланған2 0.97. Сапаны бақылайтын үлгілер HPLC калибрлеуін қамтамасыз ету үшін әрбір іске қосылды.

MRNA qPCR-ның орехигенді пептидтері

Біз азықтандыруды ынталандыратын және мотивациялау және марапаттау мінез-құлқына ықпал ететін гипоталамикалық пептидтердің): нейропептид Y (NPY [ ; ; ]); агутиге байланысты пептид (AGRP [; ; ; ; ; ; ; ; ]); және орексин (; ). Егеуқұйрықтар изофлуран анестезиясымен эвтанизацияланды, ми тез жойылды, мұздатылды және өңделгенге дейін -80 ° C температурада сақталды. Медиальды және бүйірлік гипоталамус AHP-1200CPV мұздату жазықтығын (Thermoelectric Cooling America, Chicago, Il) пайдаланып бір блок ретінде микродиссекцияланды, ол диссекция процесінде тұрақты 12 ° C температураны ұстап тұрды. Микродисекцияланған тіннен алынған жалпы РНҚ Тризол реагентімен оқшауланған (Invitrogen, Carlsbad, CA) және өндірушінің нұсқауларына сәйкес RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) көмегімен тазартылған. Жалпы РНҚ РНазсыз DNase (Promega, Madison, WI) көмегімен кез-келген потенциалды геномдық ДНҚ-ластануын жою үшін өңделді және NanoVue спектрофотометрінің көмегімен мөлшерленді (GE Healthcare, Кембридж, Ұлыбритания). РНҚ сапасы стандартты агарозды гель электрофорезімен расталды. Содан кейін қосымша ДНҚ (кДНҚ) iScript cDNA синтез жинағын (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA) пайдаланып кездейсоқ гексамерлер мен олиго ДТ прайминг қоспасы арқылы жалпы РНҚ-ның 1-2 мкг-нан ретротранскрипцияланды (RT). Ретротранскрипцияланбаған (RT жоқ) реакциялар әр үлгіден ДНҚ-ның потенциалды геномдық ластануын бақылау үшін дайындалды. CDNA және no-RT басқару элементтері сұйылтылған және MyIQ нақты уақыттағы ПТР анықтау жүйесін (Bio-Rad, Hercules) қолдана отырып, таңдалған гендердің мРНҚ экспрессиясын нақты уақыттағы сандық ПТР көмегімен өлшеу үшін әр үлгіден алынған 5-10 нг шаблон кДНҚ қолданылды. Әрбір сынамаға арналған үш өлшемді өлшемдер стандартты iCycler 96 ұңғыма плиталарында жүргізілді, сонымен қатар кросстық ластануды анықтайтын шаблондық бақылау жоқ (NTC), 20 мкл реакция көлемінде 10 мкл 2 × iQ Sybr Green Supermix (Bio-) Рад, Геркулес, Калифорния), 2 мкл 0.2-0.5 мкМ әр праймер, 3 мкл DEPC суы және 5 мкл шаблон. Барлық qPCR реакцияларына сигналдың ерекшелігін қамтамасыз ету үшін балқыманың қисық сызығын талдау кірді. Әрбір қызығушылық тудыратын ген үшін салыстырмалы өрнек экстраполяция әдісімен әр пластинада жеке жүретін стандартты қисыққа дейін есептелген және сілтеме кДНҚ-ның жинақталған үлгісінің сериялы сұйылтуынан алынған және анықтамалық гендердің салыстырмалы экспрессиясына қалыпқа келтірілген (қышқыл рибосомалық фосфопротеин 36B4 геннің экспрессиясы үшін) гипоталамус тіні және акументтік ядродағы экспрессия үшін митохондриялық рибосомалық ақуыз L32). Келесі праймерлік тізбектер (IDT, Сан Диего, Калифорния) егеуқұйрық препро-орексин, NPY және AGRP-ді күшейту үшін қолданылды: Препро-орексин, Алға: 5′-TTCCTTCTACAAAGGTTCCCT-3 ′, 5′-GCAACAGTTCGTAGAGACGGCAG-3 ′; NPY: Алға, 5- TACTCCGCTCTGCGACACTACATC-3 ′; Реверсінде: 5′-CACATGGAAGGGTCTTCAAGCC-3 ′; AGRP, Алға: 5′-GCAGAAGGCAGAAGCTTTGGC-3 ′; Реверс: 5′-CCCAAGCAGGACTCGTGCAG-3 ′.

cFos Immunocytochemistry (ICC) және Кванттау

Флуоресценция ICC медицинадағы гипоталамуста Fos-позитивті және AGRP-позитивті нейрондық клеткалардың денелерін анықтау үшін қолданылған, біздің белгіленген әдіснамаға). Соңғы күні (PR күні 10) егеуқұйрықтар 90 минут ішінде өзін-өзі басқару бөлмелеріне орналастырылды. Осы 90 минуттық сессиядан кейін бірден егеуқұйрықтар изофлуран ингаляциясымен терең анестезирленді және 0.9% NaCl-мен перфузияланды, содан кейін салқын 4% параформальдегид ерітіндісімен. Анестезияға және эвтаназияға уақыт 90-120 минуттан кейін болған кезде cFos ақуызының ең жоғары экспрессиясының белгілі уақытына негізделген. Осылайша, cFos экспрессиясы тапсырманы бастан кешірген жануарлардың нәтижесі емес, мінез-құлық тапсырмасы басталған кезде ОЖЖ-нің белсендірілуін көрсетеді. Миы алынып тасталды және бірнеше күннен кейін параформальдегидке бекітілді, содан кейін 20% сахароза-ПБС, содан кейін 30% сахароза-ПБС ерітіндісіне орналастырылды. Иммуногистохимия үшін миды криостатқа (Leica CM 3050S криостат) бөлді. Біз мидың бөлімдеріндегі иммунореактивті cFos ақуызының мөлшерін анықтау үшін белгіленген әдістемені қолдандық (). Слайдпен бекітілген 12 μm тұтас мидың корональдық бөлімдері фосфат буферлі тұзды ерітіндісінде үш рет жуылды (PBS, OXOID, Гэмпшир, Англия). Бөлімдер 20% этанол / ДЭ суымен (100%, көлем / көлем) 50 мин арқылы жууға ұшырады, содан кейін PBS жуып, 1% қалыпты ешкі немесе эшек сарысуы бар PBS бөлме температурасында 5 сағатқа дейін блокталды. Содан кейін бөлімдер бірнеше рет PBS-де жуылады және PBS-де жасалған бастапқы антиденелердегі ерітінділерде түні бойы 4 ° C кезінде инкубацияланды. Бөлімдер PBS-те үш рет жуып, содан кейін 1 сағатта PBS-де жасалған екінші антидене ерітіндісінде бөлме температурасында қараңғыда инкубацияланды. Кейіннен секциялар қайтадан PBS-де жуылып, Vectashield-да қатты жинақталған құрастырушы ортаға (Vector; Burlingame, CA) құрастыру ортасына орнатылып, жабысып кетті. Бөлімдердің сандық кескіндері NIS Elements (Nikon) бағдарламалық жасақтамасын пайдаланып, Qimage Retiga сандық фотокамерасына қосылған Nikon Eclipse E-800 флуоресценттік микроскопы арқылы алынған.

AGRP mRNA деңгейінің жоғарылауын көрсететін ПТР зерттеулеріне сүйене отырып, біз медиальдық гипоталамикалық аймақтарға, әсіресе, ventromedial ядросы мен арвиат ядросына (ARC) назар аудардық. Атласқа сәйкес келетін 12 μm бөлімдері cFos экспрессиясы және санмен сәйкестендірілген бөлімдерде және аймақтарда атласты негізге ала отырып бағаланды . Кванттау үшін (40 × ұлғайту кезінде) атласқа сәйкес аймақтар таңдалды. NIS Elements бағдарламалық жасақтамасы (Nikon) қажетті аймақтың суретін түсіру үшін қолданылған. Есептеу үшін аудан анықталған және ұяшық оң сандар үшін шекті мән белгіленді. Бірдей аймақ пен фондық (шекті) тиісті эксперименталдық топтардан алынған бөлімдер үшін пайдаланылды және оң эквиваленттің бағдарламалық жасақтамасын санау (сандық анықтау) фондық режимде сеанстық өзгерулердің алдын-алу үшін барлық эксперименталдық топтар үшін сол сессияда өткізілді. Статистикалық талдау үшін жекелеген егеуқұйрықтардан әрбір учаске бойынша тиісті немесе толық секциялар болған жағдайда ғана санау жүргізілді; белгілі бір аймаққа арналған деректер егеуқұйрықтан алынбаған болса, сол аймақ үшін толық емес екі жақты өкілдігі болған жоқ.

CFos кванттауынан басқа, cFos және AGRP үшін сандық екі белгілі иммуногистохимия жүргізілді. Біз жануарлардың мінез-құлқына кедергі жасағымыз келмегендіктен, оларды AGRP бейнесін оңтайландыру үшін оларды колхицинмен алдын-ала емдемеді. Сондықтан AGRP-позитивті нейрондардың визуализациясын бағаламауға болады. AGRP үшін екі рет бояу процедурасы cFos-иммунореактивтіліктің талдауымен салыстыруға болатын, тек бөлімдер PBS-5% есек сарысуында бөлме температурасында бір сағатқа бұғатталған. Содан кейін fos-Ab және AGRP бастапқы антиденелерінің қоспасы 4 ° C температурасында түні бойы инкубациялау үшін қолданылды; сол сияқты екіншілік антиденелер де бір ерітіндіде болды және бөлме температурасында қараңғы жерде бір сағат инкубацияланды. Бастапқы антиденелердің лайықты сұйылтуын анықтау үшін алғашқы оңтайландыру талдаулары жүргізілді. Алғашқы антиденелер қоянға қарсы cFos (1: 500) (sc-52) және ешкіге қарсы AGRP (1: 100) (18634) болды (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Санта Крус, Калифорния). Екінші антиденелер Cy3-біріктірілген есекке қарсы қоян (Jackson Immunoresearch; West Grove, PA) және Alexa fluor 488 ешкіге қарсы IgG (Molecular Probes, Eugene, OR); барлық екінші антиденелер 1: 500-де сұйылтылған.

Статистикалық талдау

Топтық мәліметтер мәтіндегі, кестелердегі және суреттердегі орташа мәннің (SEM) орташа қателігі ретінде ұсынылған. Маңыздылығы p ≤ 0.05 ретінде анықталады. Статистикалық салыстырулар «Нәтижелер» бөлімінде ұсынылған, эксперименттік топтар арасында Студенттің жұптаспаған тестін қолдану арқылы жүзеге асырылады (мысалы, диета, жас немесе емдеуді салыстыру). Деректердің 'қалыпқа келтірілуі' ол қолданылған кезде анықталады.

нәтижелері

Сахарозды пери-pubertal мотивациясына арналған жоғары орташа майлы диетаның әсері

31.8-5 кезінде егеуқұйрықтар 8% май диетасын береді, өзін-өзі басқару сеанстарында сиыр егеуқұйрықтарымен салыстырғанда сахароза үшін айтарлықтай жоғары ынталандыру болды. Көрсетілгендей Сурет 1a, бастапқы FR жаттығулары кезінде өнімділікте ешқандай айырмашылық болмады (1-10 ортақ FRDays 38-5, 39 ± 2 қарсы 31.8 ± XNUMX vs. XNUMX% май диета үшін тиісінше). Дегенмен, егеуқұйрықтарды қатаң PR тапсырмасына ауыстырған кезде, белсенді тұтқышты басу санын көбейту және сахароза сыйақыларының саны алынды, бірақ жалпы сеанс ұзақтығында емес (Сурет 1b). Диетаның созылмалы емін белсенді емес тұтқалардың саны бойынша әсер етпеді. 5-8 кезінде егеуқұйрықтардың биологиялық диетаны азықтандырғаннан кейін, кейін FRN және PR арқылы жаттығудан өткен 9-12 жаттығуларына қайта оралды, бұл үрдіс пайда болды, бірақ белсенді тұтқышты басудың айтарлықтай айырмашылығы жоқ. Осылайша, пери-pubertal мерзімінде тұтынылатын орташа жоғары майлы диета мінез-құлқының әсерін тигізбейді. Осы когорстарға арналған PR параметрлері туралы деректер жинақталған Кесте 2. Сахароза ынталандырудың диетаны индукцияға ықпал ету тетігін (үлгілерін) анықтауды бастау үшін біз метаболизм және CNS өлшеуінің бірқатар өлшемдерін жасадық.

Сурет 1Сурет 1  

Секроздың пайдасына жауапты PR-ны пирипбертальдік егеуқұйрықтарда 31.8% майлы диета (n = 8) беріледі. 1a. FR сессияларында диета әсері болмады, бірақ егеуқұйрықтарды PR парадигмасына ауыстырған кезде диета әсері көрінеді. 1b. Деректер ...
Кесте 2  

Пери-Pubertal High Fat Diet-дің сукрозға арналған прогрессивті көрсеткіштерге әсер етуі

Метаболикалық параметрлері бойынша қалыпты жоғары майлы диетаның әсері

Мінез-құлық тестілеуі аяқталғаннан кейін, организмнің май құрамын 5-8 кезінде диеталық интервенция және мінез-құлық парадигмасы бар егеуқұйрықтар анықталды. Содан кейін егеуқұйрықтарға созылмалы ішілік ішілік қан тамырлары (саналы) IV глюкозаға төзімділік тесттері (IVGTTs) түсті. Содан кейін қосымша метаболизм шаралары үшін терминалдың ашытқы плазмасы мен сарысуы алынды. Көрсетілгендей Кесте 3, дене салмағының, дене салмағының инсулині немесе глюкозаның шаралары, инсулин сезімталдығы (HOMA есептеуі) немесе ИВГТТ жауаптары, сиыр еті мен жоғары диеталық егеуқұйрықтар арасында айырмашылық болған жоқ. Терминалдың ашылу лептині мен триглицеридті өлшеуі екі топ арасында айырмашылығы болмады. Осылайша, рационды емдеу сахарозды ынталандыруға айтарлықтай әсер еткенімен, ол семіздікке ұшыраған жоғары майланған егеуқұйрықтардағы мінез-құлыққа әсер етеді.

CNS homeostatic және май нехохимиясының жоғары деңгейлі майлы диета әсері

Терминалдың метаболикалық өлшеулеріне қосымша, диеталық араласу және мінез-құлық тренингтері бар когорттың миы 5-8 аптаның ішінде ядроның акументальды аминдер профилі (n = 4 диеталық топ үшін) немесе гипоталамикалық ореоксигенді пептидтердің mRNA деңгейлері үшін өлшенді. Көрсетілгендей Кесте 4, дофамин, norepinephrine немесе серотонин метаболиттері бойынша жоғары майлы диетаның ядролық акументингтерде, маркетингтік және мотивациялық қызметтің орталық жерінде айтарлықтай әсері болмады (; ) онда осы нейротрансмиттерлік жүйелердің әрқайсысы негізгі реттеуші рөл атқарады. Гипоталамикалық сығындылардың ішінде орексигенді пептидтердің, NPY, AGRP және орексиннің mRNA деңгейлері өлшенді. Бұл когорта майлы егеуқұйрықтарда AGRP жоғарылауының күшті, бірақ маңызды емес тенденциясы байқалды (екі диета үшін n = 8); сондықтан біз диета / мінез-құлық жаттығуларының парадигмасын қосымша когортта қайталап, гипоталамуста NPY, AGRP және орексин мРНҚ өлшедік. Аралас когорттарда біз майлы диетамен қоректенген егеуқұйрықтарда AGRP mRNA-ның айтарлықтай (p <0.05) жоғарылауын бақылаумен салыстырғанда (бақылау)Сурет 2), бірақ NPY немесе орексиннің айтарлықтай өзгерісі жоқ. AGRP өрнегі мен өзін-өзі басқару әрекеті арасындағы ықтимал байланыстарды бағалау үшін біз mediobasal гипоталамуста cFos және AGRP иммунопоцитивті нейрондарын өлшедік. Егеуқұйрықтардың топтары чусты немесе 31.8% май диетасын берді; кейбіреулер өзін-өзі басқару протоколы арқылы (апта 5-8) және басқалары мінез-құлық бақылауы ретінде қарастырылды. Сурет 3a cFos және AGRP-ні арокиат ядросының нейронында бірлесіп оқшаулау мысалын көрсетеді. Қорытындыда келтірілген Кесте 5, AGRP нейрондарының белсендіруі (cFos-ICC және AGRP-ICC-нің бірдей жасушалар ішіндегі бірге көрінуі) өзін-өзі басқару қызметімен байланысты болды. Бұл көрініс табуда Сурет 3b, онда белсендірілген (cFos-positive) нейрондардың саны нейрондық клеткалардың саны немесе жалпы AGRP-позитивті нейрондардың пайызы ретінде көрсетіледі: егеуқұйрықтардағы АГРП нейрондарының өзін-өзі басқаратын сахарозада, , аралас диеталық топтарда. Өзін-өзі басқаратын топта жұмыс істемейтін топтардағы белсендірілген АГРН нейрондарының санына диеталық емдеуді салыстыру статистикалық маңыздылыққа жетпеген үрдісті көрсетті (chow, p = .078; 31.8% май диета, p = .073) . Маңыздысы, AGRP нейрондық активтендіруі осы деректермен ғана емес, сонымен қатар cFos өлшемі үшін уақытты белгілеуден (90 минуттан кейін егеуқұйрықтарды өздігінен басқару камераларына орналастырылған) ғана емес, cFos сөзі AGRP нейрондарының белсенділігін көрсетеді. өзін-өзі басқару іс-қимылының басталуына немесе басталуына байланысты. Өзін-өзі басқаратын топта AGRP-позитивті нейрондардың жиынтығын жоғарылату бойынша маңызды емес үрдіс байқалды (басқару элементтеріне қарсы, p = 0.16). Диеталық топтар арасында тұтқаны басуды салыстырған сол егеуқұйрықтарда AGRP-позитивті нейрондардың саны да сәйкестендірілді. Диетаны емдеуге мінез-құлықты бақылау егеуқұйрықтарында AGRP-позитивті нейрондардың санына ғана әсер етпеді.

Сурет 2  

31.8% майлы диетаның медиальды гипоталамус пептидті мРНҚ экспрессиясына әсері. Деректер майлы семіретін егеуқұйрықтар үшін қалыпқа келтірілген (n = 17) және chow басқару элементтеріне қарағанда (n = 16). AGRP mRNA айтарлықтай жоғарылаған (p <0.05).
Сурет 3Сурет 3  

Сахарозаның өзін-өзі басқаруы кезінде AGRP нейрондарын белсендіру. 3a. CFOS және AGRP-нің арекиаттық ядросындағы нейронды, 60x үлкейтуін біріктіру. 3b. Медиобазальді гипоталамуста белсендірілген (cFos-иммунополитикалық) AGRP-иммунопоцитивті нейрондарының саны ...
Кесте 4  

Аминнің метаболиттері
Кесте 5  

Agrp Neuron Қосылу: диета және мінез-құлық

AGRP әкімшілігінің сахарозды ынталандыруға әсері

Осы табылғанымызды түсіндіруіміз - бұл жоғары жасуша егеуқұйрықтарындағы АГРП өрнегі жоғары сиыр егеуқұйрықтарының сахарозаның өзін-өзі басқаруын қамтамасыз ететін негізгі механизм. AGRP сахарозы үшін ынталандырудың тиімділігін растау үшін AGRP мінез-құлық парадигмасының PR бөлігі кезінде үшінші потенциалды егеуқұйрықтарға арналған үшінші қарынша арқылы өткізілді. AGRP дозалық режимі PR-парадигмасының екі аптасында шошқа қабылдауды ынталандыру үшін суб-шекті болды, бірақ көрсетілгендей, сахарозаның өзін-өзі басқарудың айтарлықтай өсуі Сурет 4. (Әрбір сахароза сыйақысының 0.1 ккал мөлшерінде калориялық құрамы бар екенін ескеріңіз, сондықтан сахарозаның өзін-өзі басқару қызметі күнделікті тұтынудың жалпы мөлшеріне аз мөлшерде калориялар әкеледі.) Кесте 6 9 күндік PR парадигмасы бойынша өздігінен басқару параметрлері туралы деректерді көрсетеді, AGRP немесе aScF ICV күндері 2, 5 және 8 арқылы енгізеді. AGRP арқылы өңделген егеуқұйрықтарда белсенді тұтқаны басу саны PR Days 2-10 (p = 0.03), ал инъекциялық емес күндерде (p = 0.048) жалпы (орташа) инъекциялық күндер. Сонымен қатар, Stop-Time (өзін-өзі басқару тапсырмасымен айналысатын жұмсалған жалпы уақытты көрсететін уақыт) инъекция күндерінде (p = 0.02) жалпы өсімге және инъекция күндеріне қатысты үрдістермен айтарлықтай артты. Сахароза сыйақыларының саны PR Days 2-10 (p = 0.03) бойынша өсті. АГРФ емделмеген басқару құралдарымен салыстырғанда, инъекциялық және инъекциялық емес күндер арасында AGRP емдеуге әсер етпейді. Нәтижелері САКРОСОЗДІҢ өзін-өзі басқаруды ұлғайту үшін АГРП-ның тұрақты әсерін түсіндіруді қолдайды: егеуқұйрықтар сыйақыны арттыратын тұтқышқа көбірек басқан, сахароза сіңірген сыйақыларға ие болды және көп уақыт жұмысты өткізді.

Сурет 4  

Үшінші қарыншалық (ICV) AGRP (0.01 нмол) PR парадигмасында сахарозаның өзін-өзі басқаруын ынталандырады, бірақ зерттеу кезеңінде күнделікті тамақ қабылдау кезінде әсер етпейді (PR Days 2-10, Days 2, 5 және 8 арналған инъекциялармен) . AGRP (n = 9) деректері көрсетілген ...
Кесте 6  

Сукрозға арналған ICV AGRP-ның ACSF-ге қарсы прогрессивті көрсеткіштерге әсер етуі

Өмір кезеңін сахарозды артықшылыққа және ынталандыруға әсері

Соңғы экспериментте біз сахароза үшін мотивацияны ересек және ересек егеуқұйрықтар арасында айырмашылығы бар-жоғын бағалаймыз. Бастапқыда 5-және 10-wk ескі егеуқұйрықтарға 0-дан 20% -ке сахароза дейін, өзін-өзі басқару сынақтарын және жаттығуларын бастамас бұрын, сахароза преференциясы сыналды. Көрсетілгендей Сурет 5a, және әдебиетте жарияланған мәліметтерге сәйкес, ересек ересек егеуқұйрықтар жас ересек егеуқұйрықтарға қарағанда жылдам шешім қабылдағанды ​​жөн көрді: ерте егеуқұйрықтардың басым көпшілігі 20% сахароза ерітіндісінің ең жоғары деңгейіне ие болған, ал ересек егеуқұйрықтардың ең жоғары егеуқұйрықтары 15% сахароза. Содан кейін өзін-өзі басқаруды дайындау және тестілеу кезінде екі жас топтары раковин мен жоғары майлы диеталар арасында бөлінді. Форс-мажорлық сеанстарда орташаланған пери-pubertal және ересек егеуқұйрықтар (45 ± 3 vs. 37 ± 2, p = 0.05) бойынша белсенді тұтқыш пресстарының саны шамалы, бірақ статистикалық тұрғыдан елеулі түрде өсуі болды, сахароза сіңіргіштері немесе белсенді емес тетігіндегі баспа саны. Көрсетілгендей Сурет 5b(n = 15) егеуқұйрықтардан (n = 14) егеуқұйрықтардан (2-жол ANOVA, PRDay × age) салыстырғанда жыныстық жетілу (n = 0.017) үшін белсенді леберлік басуды айтарлықтай ұлғайта отырып, PR сеанстарында жастың жалпы маңызды әсері болды. жастың әсері, p = 13, PRDay тәуелсіз әсері жоқ, елеулі өзара әрекеттесу жоқ). Tthere жоғары диеталық азықтандыру жағдайында жастың үлкен әсер ету үрдісі болды, бірақ бұл статистикалық маңыздылыққа қол жеткізді (p = .XNUMX). Кесте 7 PR мінез-құлық параметрлерін тізімдейді: белсенді леберлік баспалардан басқа, пери-pubertal егеуқұйрықтары сахароза жетістіктерін айтарлықтай арттырды және Стоп уақытын ұлғайту үрдісін көрсетті. Сонымен қатар, пери-pubertal егеуқұйрықтарында пери-pubertal және ересек егеуқұйрықтар үшін белсенді емес (мысалы, сыймайтын) тұтқаны шағын, бірақ айтарлықтай өсуі болды, бірақ белсенді емес тұтқаны саны шамамен 10% болды белсенді тұтқышты басу. Бұл нәтижелер пери-pubertal егеуқұйрықтарды тәтті дәмдеуші тағамдарды жақсы көретіндіктерін және жақсы көретіндігін көрсетеді және әсер майы жоғары диета аясында күшейе түседі.

Сурет 5Сурет 5  

Кәмелетке толған егеуқұйрықтар ересек егеуқұйрықтармен салыстырғанда сахароза сыйақыларын арттыруға ынталандырады. 5a. Жасөспірімдерге (пери-pubertal, n = 15) және жас ересекке (n = 14) егеуқұйрықтарға арналған сахарозды таңдауға арналған сынақтар. Әндер концентрациялар ауқымынан ішу үшін 30 мин болды (0-20% сахароза). ...
Кесте 7  

Прогрессивті коэффициенттердің орындалуына жастың әсеріa сукрозға арналған

талқылау

Зерттеудің негізгі қорытындысы пери-pubertal кезеңінде (әдетте, жыныстық жетілу кезеңінен бұрын, уақыт ішінде және кейін ғана) тұтынылатын орташа мөлшерлі майлы диета сахароза ерітінділеріне ынталандыруды едәуір арттырды. Бұл біздің ересек егеуқұйрықтарымыздағы алдыңғы, ұқсас, байқауымызға сәйкес келеді (). Бұл жануарларда және қосымша жастағы және емдестірілген когорттарда біз егеуқұйрықтардың семіздіксіз немесе предшественными және перифериялық инсулинге төзімді емес метаболиттік сипаттама кеңейтілген арқылы анықтады. Бізде егеуқұйрықтардың CNS-инсулиннің немесе лептиннің әрекеттеріне төзімділігі бар екендігін жоққа шығара алмаймыз: бұл екі гормондар да CNS-ге тән азық-түлік сыйақысын модуляциялауға ықпал етеді (; ; ).

Іліністің жиынтығында біз ортаңғы ағызудан допаминергиялық проекцияларды ауыр инвестицияларды қабылдайтын ядролық акументаларда аминді нейротрансмиттерлер мен олармен байланысты метаболиттерді өлшедік және марапаттау мен дәлелді мінез-құлықты медиация үшін негізгі және орталық CNS торабы болып саналады (; ). Біз осы таратқыш метаболиттерінің ешқайсысының өзгеруін байқаған жоқпыз, ол ядролардың акументіндегі өзгерістерге ұшыраған катехоламерикалық немесе серотонергиялық белсенділіктің сахароза ынталандыруының өсуіне негіз болатын негізгі немесе негізгі CNS механизмі емес екендігін көрсетеді. Бұл соңғы есеппен сәйкес келеді , ересек егеуқұйрықтарда көрсеткендей, ICV АГРП медиальді префронтальды кортексте допамин айналымын көбейтеді, бірақ ядро ​​акументіне емес. Бұдан басқа, жас ересектер сияқты дереу жыныстық жетілуден кейін егеуқұйрықтарда сыналған кезде диетаның мінез-құлқының әсерін байқадық. Бұл Bolaños және басқалардан, мінез-құлық пен катехоламинергиялық параметрлер бойынша, метилфенидатпен өңделген ересек кеміргіштерде (; ; ; ). Бұл, әдетте, допаминергические нейрондарды метилфенидатпен тікелей бағыттауға байланысты және диеталық араласу уақытын және жануарларды сынау уақытының функциясы болуы мүмкін. Ақыр соңында, біз өткізгіш әсерлерін байқамауымыз мүмкін, себебі осы зерттеуде диеталық әсердің басты локусы медиальдық гипоталамус болып көрінеді.

Зерттеудің үш дәлелі медицинадағы гипоталамикалық нейропептидтің АГРП-ына сиыр етін жоғары сиыр егеуқұйрықтарында сахарозаның өзін-өзі жоғарылатуында маңызды рөл атқарады. Алдымен біз егеуқұйрықтардағы барлық гипоталамустың сығындыларында AGRP өрнегін (mRNA) ұлғайтуды байқадық. Дегенмен, орексин мРНҚ және NPY мРНҚ деңгейлері өзгерген жоқ. Осылайша, жоғары майлы диета / мінез-құлық парадигмасының әсері ORR-ның нейропептидтеріне жалпылама емес, AGRP-ге тән болып көрінеді. Бұл АГРП-ны азық-түлікке ынталандыру немесе іздеуде маңызды рөл атқарады және әдебиеттегі (төменде талқыланған) бірқатар соңғы есептерге сәйкес келеді. Біздің соңғы жұмысымыз мотивациялық парадигмамызда ПР-дың өнімділігімен бірге медиальдық гипоталамикалық белсендірудің негізгі рөлін көрсетті, бірнеше медиальдық гипоталамикалық ядролардағы). Сондай-ақ, біз сукроздың өзін-өзі басқаруын азайту үшін (экзогендік) инсулиннің әсер етуі үшін ARC-ты анықтадық (). ARC құрамында AGRP / NPY нейроны бар (; ), көптеген механизмдер арқылы азықтандыруды ынталандыру үшін медиальдық гипоталамуста әрекет етеді. Зерттеу барысында активтендірілген АГРН нейрондарының иммуноцио-химиялық санын анықтау егеуқұйрықтардағы cFos / AGRP нейрондарының жоғарылауын көрсетті, олар сахарозды өздігінен басқаруға үйренбеді, бұл үйренбеген мінез-құлық бақылауымен салыстырғанда. Бұл сахарозаның өзін-өзі басқаруға (басталуына) үлес қосатын AGRP нейрондық белсенділігінің түсіндірілуіне әкелетін екінші тәсіл. Алдыңғы және соңғы зерттеулердің екеуі де AGRP сөйлемшесінің және майдың жеңілдетілген тұтынуымен әрекеттесуі сияқты диета () немесе мотивациялық парадигма тұрғысынан (); ал ересек егеуқұйрықтарда ICV AGRP басым майлыға артықшылық береді). Соңғы зерттеулерде тышқандардағы AGRP нейрондарының нақты белсендірілуіне мүмкіндік беретін мақсатты молекулалық техникалар; ) AGRP азықтандыруды сенімді түрде ынталандырады, азық-түлік іздеуді арттырады және энергия шығынын азайтады. Жоғары майлы диетаны азықтандыратын экспериментальды топтарда калориялардың жалпы тұтынылуы бақыланатын егеуқұйрықтармен салыстырғанда айтарлықтай төмен болды (Кесте 8), бұл энергия шығындарын төмендету үшін эндогенді AGRP әсерімен үйлесетін болады. Бұл эффектілер бұрынғы тұжырымдарға сәйкес келеді , бұл экзогендік АГРП энергия теңгерімінің кейбір аспектілеріне әсер етуі мүмкін. Осылайша, Үшінші әдіс ретінде, біздің нәтижелер ICV AGRP-ді ескере отырып, сукроздың өзін-өзі басқаруымен (chow-fed) pubertal егеуқұйрықтары арқылы көрсетіледі. Төрт апта бойы жоғары рационды диетаны беретін егеуқұйрықтардағы AGRP mRNA экспрессиясының нақты жоғарылауы соңғы зерттеулерге сәйкес келеді. экзогенді майлы қышқылдарды, жасуша ішіндегі жасушалық май қышқылдарын қосады және гипоталамус нейрондарында AGRP өрнегін арттырады. Осылайша, гипоталамустық жасушаларды өсіруге арналған олеинді немесе пальмит қышқылын қосу AGRP өрнегін арттырды. Біз қолданған диета стеаринді, пальмицалық және олеин қышқылын ұлғайтқанымен, осы май қышқылдарының in vivo гипоталамикалық орта, олардың локализацияланған шоғырлануы диеталық май қышқылының профиліне сәйкес бола ма, және олардың біреуі немесе бірнешеуі арнайы AGRP өрнегіне әкеледі ме? Дегенмен, диеталық субкомпоненттер медиальдық гипоталамуста негізгі іс-әрекеттер арқылы тәттілерді ынталандырудың өсуіне үлес қосуы мүмкін екендігін болжауға тырысады.

Кесте 8  

Эксперименттік хаттамалар: Ккал

Біздің зерттеулеріміз жас егеуқұйрықтар ересек егеуқұйрықтармен салыстырғанда сахароза үшін уәждеуді арттырғанын көрсетеді. Бұл PR өзін-өзі басқарудың барлық уақытында анық болды, және жастық әсерді жақсарту үшін жоғары майлы диета үшін үрдіс болды. Мүмкін, бұл шағын топтың өлшемдеріне байланысты статистикалық мәнге жете алмады; Осылайша, деректер бойынша, pubertal жануарларында (және, бәлкім, адамдарда) орташа диетадағы майдың мөлшері тәтті сусындар мен тағамдарды алу үшін мінез-құлықты іздестіруге ықпал ете алады. Қоғамдық тұрғыдан ол артық диеталық майдың тікелей, теріс метаболическалық салдарынан ғана емес, сонымен қатар, ол нәтижеге әкелетіндіктен, «твиттердің» немесе жасөспірімдердің диеталарының май компоненттеріне назар аудару қажеттілігіне баса назар аударады қанттарды кеңінен қолдану. Жақында қарағандай , майлармен бірге қанттарды біріктіруде айтарлықтай теріс метаболикалық зардаптар болуы мүмкін. Адамдардағы жоғары май / қант комбинациясы-ақ салыстырмалы түрде аз тамақтанатын диета (). Қант диабетімен сырқаттанушылықтың артуымен () және майлы бауыр () педиатриялық популяцияда кездесетін болсақ, жастардың салауатты және теңдестірілген диетаның маңыздылығы айқын. Біз тетіктердің саны әлі де төмен болғанымен, ересек егеуқұйрықтардағы (ересек егеуқұйрықтарға қарсы) белсенді емес тұтқыштың баспа құралдарының айтарлықтай өсуін байқадық. Белсенді тұтқаны басуды жалпы белсенділіктің «ерекше емес» әсері ретінде ескеруге болады, өйткені белсенділігі белсенді тұтқышқа бағытталған. Белсенді емес лебіздер пресстерінің нақты саны артып отырса да, белсенді леберлік престерге қатысты пропорция пери-pubertal және ересек егеуқұйрықтар арасында салыстырмалы болды, және тұтқаны күшейтетін баспа машиналары өзін-өзі басқару камераларында ұзағырақ белсенді уақытты көрсетуі мүмкін. Басқа парадигмада (кейбір азық-түлік шектеуі, тәтті марапаттан гөрі тамақ таблеткаларын пайдалану және FR1 кестесі) жақында жасөспірімдер мен ересек егеуқұйрықтардың өзгерген аспаптық өнімділігін хабарлады. Олар тамақ таблеткаларын, кәмелетке толмаған және ересек егеуқұйрықтарды жеткізетін носепоктардың айырмашылығын байқады. Дегенмен, кәмелетке толған егеуқұйрықтарда жоғалту кезінде күшейтілген мінез-құлықты қадағалап отырды. Бірігіп алынған екі зерттеулер жас ерекшелігі мен дамуы кезеңінің тағамдық ынталандыруға әсерін тигізеді, бұл ересек егеуқұйрықтардың жылдам өсуіне сәйкес келеді. Бұл зерттеуде еркек, бірақ әйел емес, егеуқұйрықтарды бағаладық. Қазіргі уақытта ерлер мен әйел егеуқұйрықтарды тағамдарды ынталандыру парадигмасында тікелей салыстыруға болатын зерттеулер бар, ал жасөспірім кезіндегі жүйелі бағалауға кепілдік беріледі. Атап өту керек, (жасөспірімдер) Гонадалық стероид емес, өсім маркері арасындағы байланыс байқалды өзі үшін. Соған қарамастан, осы жастағы топтағы гендерлік әсер тергеуді талап етеді.

Қорытындылай келе, біздің зерттеулеріміз ересектермен салыстырғанда ересек егеуқұйрықтардағы сахарозаға сүтті арттырудың ынталандыратындығын көрсетеді және бұл орташа майлы диетаға қол жеткізу арқылы жақсарады. Сиыршық ынталандыруға арналған жоғары майлы диетаның әсері медиальдық гипоталамуста жоғары AGRP белсенділігінің артуына байланысты болуы мүмкін. Бұл энергияның гомеостазын схемамен реттейтін схеманың күшті ішкі CNS функционалды байланысының тағы бір дәлелі. Орташа жоғары майлы диеталар арқылы сахароза үшін ынталандыруды жақсарту метаболикалық бұзылулардан және ашық семіздіктен бұрын пайда болады және мінез-құлық бастапқыда метаболикалық өзгерістерді емес, керісінше емес деп болжайды. Жоғары майдың және фруктозаның құрамында тәтті тағамдарды қабылдау метаболизмнің профиліне бірлесіп ықпал етеді, бұл 2 типті қант диабеті мен жүрек-қан тамырлары ауруларының жоғары қаупі. Бұл зерттеулер тек әлеуметтік-экологиялық әсерінен ғана емес, сондай-ақ жануарлар немесе адамның өтпелі кезеңдері ретінде нейрохимиялық және мінез-құлықтық түзетулер арқылы сатып алу үшін көптеген пішінді өзгерістер арқылы әсер еткенде, жыныстық қатынас кезінде тамақтану және диетаға назар аударудың маңыздылығын көрсетеді репродуктивтік құзыреттілік.

مور  

  • Орташа майлы диета ересек егеуқұйрықтардың сахарозы үшін ынталандырады.
  • Бұл зерттеуде пире-pubertal егеуқұйрықтарында семіздік мотивациясы жоғарылайды.
  • Пери-pubertal егеуқұйрықтары ересектермен салыстырғанда сахароза мотивациясын арттырды.
  • Сахарозаның мотивациясын жоғарылату гипоталамиялық AGRP арқылы туындауы мүмкін.
  • Қорытынды: Жоғары май диетасы семіздікке тәуелді тәттілерге арналған ынталандыруды қамтамасыз етеді.

Алғыс

Бұл зерттеуге NIH Grant DK40963 қолдау көрсетті. Dianne Figlewicz Lattemann - аға ғылыми қызметкер, биомедициналық зертханалық зерттеулер бағдарламасы, ардагерлермен жұмыс департаменті, Puget Sound денсаулық сақтау жүйесі, Сиетл, Вашингтон. Стивен Бенуа NIH DK066223 және Ethicon Endosurgery Inc. компаниялары тарапынан қолдау көрсетті. Авторлар Томи Волден-Хенсонға дененің құрамын өлшеуді қолдау үшін алғыс білдірді; Д-р Уильям Бэнкс және Люси Диллман триглицеридті өлшеуді қолдау үшін; және Amalie Alver және Samantha Thomas-Nadler мінез-құлықты зерттеуге көмектесу үшін.

Әдебиеттер тізімі

  • Андерсен С.Л., Teicher MH. Жасөспірімдік депрессияда стресс, сезімтал кезеңдер мен икемді оқиғалар. Неврологиядағы үрдістер. 2008; 31: 183-191. [PubMed]
  • Апонте Ю, Атасой Д, Стернсон С.М. AGRP нейроны азықтандыруды тез және оқытусыз орындайды. Табиғат неврологиясы. 2011; 14: 351-355. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Барнс М Дж Арайропулос Г Брай Г.А. AgRP нокаутқа тышқандарында муфиоидті рецепторлардың активтендірілуінен кейінгі гиперфагия емес, жоғары майлы диетаның артықшылығы болды. Ми зерттеуі. 2010; 1317: 100-107. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Bolaños CA, Barrot M, Бертон О, Wallace-Black D, Nestler EJ. Алдын-ала және периадолесценция кезінде метилфенидацияны емдеу ересек адамның эмоционалдық ынталылығына әсер етеді. Биологиялық психиатрия. 2003; 54: 1317-1329. [PubMed]
  • Bolaños CA, Glatt SJ, Джексон D. Периадолес егеуқұйрықтарындағы допаминергиялық препараттарға шамадан тыс: мінез-құлық және нейрохимиялық талдау. Ми зерттеулерін дамыту ми зерттеуі. 1998; 111: 25-33. [PubMed]
  • Brandon CL, Marinelli M, Бейкер Л.К., White FJ. Жасөспірім егеуқұйрықтарында метилфенидаттарды емдеуден кейінгі кокаинге реактивтіліктің жоғарылауы және осалдығы. Нейропсихофармакология. 2001; 25: 651-61. [PubMed]
  • Brandon CL, Marinelli M, White FJ. Жасөспірімдердің метилфенидатқа әсері егеуқұйрықтың допаминдік нейрондарының белсенділігін өзгертеді. Биологиялық психиатрия. 2003; 54: 1338-1344. [PubMed]
  • Бауыржан C, Йохансен Дж, Йоханссон С, Шаллинг М, Хокфельт Т. Н / не ацетин генін байланысты ақуыз (AGRP) нейропептидті қалыпты, аноректические және моносадиялы глутаматпен өңделген тышқандардағы ми схемасы. Ұлттық ғылым академиясының еңбектері. 1998; 95: 15043-15048. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Марапат іздеу мен тәуелділіктегі орексин / гипокретиннің рөлі: семіздікке әсер ету. Физиология және мінез-құлық. 2010; 100: 419-428. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Орексин-А-нің тағамдық ынталандырудағы рөлі, марапатқа негізделген азықтандыру мінез-құлық және егеуқұйрықтардағы тағамдық нейрондық белсенділік. Неврология. 2010; 167: 11-20. [PubMed]
  • Cizza G, Brown RJ, Rother KI. Балалардағы қант диабеті ауруларының өсуі мен проблемалары. Мини шолу. Эндокринологиялық зерттеулер журналы. 2012 epub мамыр 8, 2012. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Колдвелл SE, Освальд Т.К., Рид DR. Өсу маркері қантты жоғары және төмен таңдаған жасөспірімдер арасында ерекшеленеді. Физиология және мінез-құлық. 2009; 96: 574-580. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Дэвис Дж.Ф., Чой Д.Л., Бенуа С.С. Инсулин, лептин және сыйақы. Эндокринология мен метаболизмдегі үрдістер. 2010; 21: 68-74. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Дэвис Дж.Ф., Чой Д.Л., Шурдак Дж.Д., Фицджеральд М.Ф., Клегг DJ, Липтон Дж.В., Фиглевиц Д.П., Бенуа С.С. Лептин энергетикалық тепе-теңдікті және әр түрлі нерв тізбектеріндегі әрекет арқылы мотивацияны реттейді. Биологиялық психиатрия. 2011а; 69: 668-674. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Дэвис Дж.Ф., Чой Д.Л., Шурдак Дж.Д., Краузе Э.Г., Фицджеральд М.Ф., Липтон Дж.В., Сакай Р.Р., Бенуа СК. Орталық меланокортиндер мезокортиколимбиялық белсенділікті және егеуқұйрықтағы тамақ іздеуді модуляциялайды. Физиология және мінез-құлық. 2011b; 102: 491-495. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Дэвис Дж.Ф., Трейси А.Л., Шурдк Дж.Д., Цхоп М.Х., Клегг DJ, Бенуа С.С., Липтон Дж.В. Жоғары деңгейдегі диеталық майдың әсері егеуқұйрықта психостимулярлық сыйақыны және мезолимикалық допаминнің айналымын төмендетеді. Жүретін неврология. 2008; 122: 1257-1263. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Дезор Дж.А., Бошамп Г.К. Адамдардағы тәтті талғамдардың бойлық өзгерістері. Физиология және мінез-құлық. 1987; 39: 639-641. [PubMed]
  • Desor JA, Greene LS, Maller O. 9-ден 15 жастағы және ересек адамдарға тәтті және тұзды артықшылықтары. Ғылым. 1975; 190: 686-687. [PubMed]
  • Drewnowski A. Энергетикалық тығыздық, дәмділік және қанықтыру: салмақпен күресудің салдары. Тамақтану туралы пікірлер. 1998; 56: 347-353. [PubMed]
  • Фигвувц Д.П., Беннетт Ж.Л., Әлиакбари С, Завош А, Сиполс А.Ж. Инсулин егеуқұйрықта өткір сахарозды азықтандыруды және сахарозаның өзін-өзі басқаруын азайту үшін әртүрлі CNS тораптарында әрекет етеді. Американдық физиология журналы. 2008; 295: R388-R394. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Фиглевич DP, Беннетт JL, Налеид AM, Дэвис С, Гримм JW. Қарыншаішілік инсулин мен лептин егеуқұйрықтарда сахарозаның өзін-өзі басқаруын төмендетеді. Физиология және мінез-құлық. 2006; 89: 611-616. [PubMed]
  • Фигвувц Д.П., Беннетт Джей JL, Kittleson S, Sipols AJ, Zavosh A. Сукроздың өзін-өзі басқару және егеуқұйрықтағы CNS белсенділігі. Амь Ф. 2011; 300: R876-R884. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Фиглевич Д.П., Иоанну Г., Беннетт Джей Дж, Киттсонсон С, Савард С, Рот CL. Тәттілендіргіштердің қалыпты қабылдауының егеуқұйрықтағы метаболикалық денсаулыққа әсері. Физиология және мінез-құлық. 2009; 98: 618-624. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Фигвувц Д.П., Сиполс А.Ж. Энергетикалық реттеуші сигналдар және тағамдық сыйақы. Фармакология, биохимия және мінез-құлық. 2010; 97: 15-24. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Frangioudakis G, Gyte AC, Loxham SJ, Poucher SM. Висар егеуқұйрықтарында қантқа ұшыраған глюкозаға төзімділік тесті: глюкоза-ынталандырылған инсулин секрециясын in vivo бағалау үшін сенімді әдіс. Фармакологиялық және токсикологиялық әдістер журналы. 2008; 57: 106-113. [PubMed]
  • Хаган М.М., Рушинг П.А., Притчард Л.М., Шварц М.В., Страк А.М., Ван Дер Плоег ЛТИ, Вудс С, Селли Р.Ж. AgRP- (83-132) ұзақ мерзімді орексигенді әсерлері меланокортин рецепторларының қоршауынан басқа механизмдерді қамтиды. Американдық физиология журналы. 2000; 279: R47-R52. [PubMed]
  • Hahn TM, Breininger JF, Баскин Д.Г., Schwartz MW. Ашық-белсендірілген гипоталамикалық нейрондарда Agrp және NPY-ді біріктіру. Табиғат неврологиясы. 1998; 1: 271-272. [PubMed]
  • Ходос В. Прогрессивтік коэффициент сыйақы күшінің шарасы ретінде. Ғылым. 1961; 134: 943-944. [PubMed]
  • Ikemoto S, Panksepp J. Сыйақыға қатысты ми бөлімдерінің фармакологиялық манипуляцияларымен аппетивтік және тұтыну реакциялары арасындағы дифференциация. Жүретін неврология. 1996; 110: 331-345. [PubMed]
  • Jewett DC, Cleary J, Levine AS, Schaal DW, Thompson T. Нейропептидтің Y, инсулин, 2-дезоксиглюкоза және азық-түліктен азық-түліктен бас тарту әсері. Психофармакология. 1995; 120: 267-271. [PubMed]
  • Каушик С, Родригез-Наварро Ж.А., Ариас Е, Киффин Р, Саху С, Шварц Г. Дж., Куэрво А.М., Сингх Р. Гипоталамиялық AgRP нейрондарындағы ауофагия тағамдық тұтыну мен энергия теңгерімін реттейді. Жасуша метаболизмі. 2011; 14: 173-183. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Келли А, Berridge KC. Табиғи жетістіктердің неврологиясы: есірткіге тәуелділікке қатысты. Неврология ғылымы журналы. 2002; 22: 3306-3311. [PubMed]
  • Келли СП, Наннини М.А., Брэтт АМ, Ходж К.В. Невропептид-Е паравенциклдің ядросында этанолдың өзін-өзі басқаруын арттырады. Пептиды. 2001; 22: 515-522. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Кохли Р, Бойд Т, Лэйк К, Дитрих К, Николас Л, Балистрери WF, Эбак Д, Шашидкар Х, Ксантакос С.А. Балалық шақтағы НАШ-ты жылдам жетілдіру. Балалар гастроэнтерологиясы және тамақтану журналы. 2010; 50: 453-456. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Красес М Дж, Кода С, ЕП, Роган СК, Адамс А.С., Кузер Д.С., Маратос-Филер Э, Рот БЛ, Лоуэлл Б.Б. AgRP нейрондарының жедел қалпына келтірілуін белсендіру тышқандарда тамақтану әрекетін жүргізеді. Клиникалық зерттеулер журналы. 2011; 121: 1424-1428. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Mennella JA, Pepino MY, Рид ДР. Ащы қабылдау мен тәтті преференциялардың генетикалық және экологиялық детерминанттары. Педиатрия. 2005; 115: 216-222. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Майерс К.П., Склафани А. Үйреншікті дәмді жақсарту. Психобиологияның дамуы. 2006; 48: 380-388. [PubMed]
  • Ұлттық онкологиялық институттың Қолданбалы зерттеулер бағдарламасы. АҚШ халықтары арасында қант қосылған калориялардың көздері, ХNUMX-2005. 06 желтоқсан 21 жаңартылды. [Қолжетімді 2010 қыркүйек 21]; 2011 Қол жетімді: http://riskfactor.cancer.gov/diet/foodsources/added_sugars/
  • Никсон JP, Чжан М, Ванг К.Ф., Кускковский М.А., Новак С.М., Левине Дж.А., Billington CJ, Kotz CM. Кеміргіштердегі бүкіл дене құрамын талдау үшін сандық магнитті-резонансты бейнелеу жүйесін бағалау. Семіздік. 2010; 18: 1652-1659. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Ogden CL, Carroll MD. Денсаулық сақтау және азықтану сараптамасы бөлімі. Балалар мен жасөспірімдер арасында семірудің таралуы: АҚШ, 1963-1965 арқылы 2007-2008 трендтері. [Қолжетімді 21 қыркүйек 2011]; Health E-Stat. 2010 2010 қол жетімді: http://www.cdc.gov/nchs/fastats/overwt.htm.
  • Paxinos G, Watson C. Atlas стереотаксикалық координаттардағы егеуқұйрықтың миы. 5th. Сан-Диего CA: Elsevier Academic Press; 2005.
  • Ричардсон Н.Р., Робертс Д. Егеуқұйрықтардағы препараттардың өздігінен басқарылуын зерттеудегі прогрессивтік коэффициент: күшейту тиімділігін бағалау әдісі. Неврологияның әдістерінің журналы. 1996; 66: 1-11. [PubMed]
  • Ройтман М.Ф., Стюбер Г.Д., Филлипс П., Вайтман Р.М., Карелли Р.М. Допамин азық-түлік іздейтін модулятор ретінде жұмыс істейді. Неврология ғылымы журналы. 2004; 24: 1265-1271. [PubMed]
  • Роуси С., Саксон С, Смит Д, Ягалофф К, Гатии М, Блум С. Агути- байланысты протеин азықтандыруды арттырады және in vivo альфа-меланоцит ынталандыратын гормонының әсерін антагонизациялайды. Эндокринология. 1998; 139: 4428-4431. [PubMed]
  • Stanhope KL. Семіздік пен метаболикалық синдромның эпидемиясында фруктозаның құрамында қанттардың рөлі. Медицина сайынғы шолулары. 2012; 63: 329-343. [PubMed]
  • Стюрман Д.А., Мэнделл Д.Р., Могаддам Б. Жасөспірімдер ересектерден үйрену мен жоғалту кезінде мінез-құлықтың айырмашылықтарын көрсетеді. Жүретін неврология. 2010; 124: 16-25. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Трейси А.Л., Клег Дж, Джонсон Дж.Д., Дэвидсон Т.Л., Вудс СК. Меланокортиннің антагонисты AgRP (83-132) майға арналған тәбетті жауапты арттырады, бірақ көмірсулар емес, күшейтеді. Фармакология Биохимия және мінез-құлық. 2008; 89: 263-271. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]
  • Vartanian LR, Schwartz MB, Brownell KD. Алкогольсіз ішімдіктердің тамақтану мен денсаулыққа әсері: жүйелі түрде шолу және мета-анализ. Америка денсаулық сақтау журналы. 2007; 97: 667-75. [PMC тегін мақаласы] [PubMed]