J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1) : 173-85. doi : 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 8 월 21.
리우 QR1, 루비오 FJ, 보 저트 JM, 행진 뉴저지, 광기 S, 허우 X, 샤함 Y, 희망 BT.
추상
메탐페타민 및 기타 약물은 뇌의 모든 뉴런의 작은 비율을 활성화시킵니다. 우리는 이전에 신경 활동 마커 Fos를 표현하는 활성화 된 뉴런에 선택적으로 유도 된 분자 변경을 특성화하는 형광 활성화 셀 정렬 (FACS) 기반 방법을 개발했습니다. 그러나이 방법을 사용하려면 많은 쥐의 시료를 모아야합니다. 우리는 이제 다중 사전 증폭 전략을 사용하여 단일 쥐에서 Fos 표현 등쪽 선조 뉴런의 분자 변경을 특성화하기 위해 수정 된 FACS 기반 방법을 설명합니다.
Fos 및 NeuN (뉴런 마커) 면역 조직 화학은 등쪽 선조 뉴런의 5-6 %가 급성 메탐페타민 주사 (90 mg / kg, ip) 후 5 분 동안 활성화되었으며, 뉴런의 0.5 % 미만이 식염수 주사에 의해 활성화되었음을 나타낸다.
우리는 Fos 양성 및 Fos 음성 뉴런으로 NeuN 레이블 뉴런을 분리 하 고 5 Fos 양성 뉴런에서 RT-qPCR을 사용 하여 mRNA 식 평가 FACS를 사용했습니다. 메탐페타민은 즉각적인 초기 유전자 아크, 호머 -3, c-fos, fosB 및 그 이소 형의 20-2- 폴드 증가를 유도했다 (ΔfosB와 새로운 이소 형 ΔfosB-2) Fos- 양성이지만 Fos- 음성 뉴런에는 없습니다. 단일 초기 선조체 균질 물로부터 분류되지 않은 샘플에서 평가 될 때, 즉각적인 초기 유전자 mRNA 유도는 10- 배 낮거나 부재 하였다. 우리의 수정 된 방법은 복잡한 중독 모델에서 약물 또는 약물 관련 단서에 의해 활성화 된 뉴런의 독특한 분자 변경을 연구하는 것이 가능합니다.
메탐페타민 및 기타 약물은 뇌의 모든 뉴런의 작은 비율을 활성화시킵니다. 우리는 여기 신경 활동 마커 Fos를 표현하는 활성화 된 뉴런에 선택적으로 유도 된 분자 변경을 특성화하는 개선 된 방법을보고합니다. 우리는 단일 쥐 등 쪽에서 5 Fos 표현 뉴런에서 적은 수의 급성 메 암페타민 유발 유전자 발현을 평가하기 위해 표적 PCR 사전 증폭과 함께 FACS를 사용했습니다. Methamphetamine은 Fos 양성이 아닌 Fos 음성 뉴런에서 즉각적인 초기 유전자 (IEG)의 3-20- 폴드 증가를 유도했습니다. 표적화 된 PCR 사전-증폭은 복잡한 중독 모델에서 약물 또는 약물 관련 단서에 의해 활성화 된 뉴런에서의 독특한 분자 변경을 연구하는 것이 가능하다.
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