멤브레인 안드로겐 수용체는 안드로겐 보강을 매개 할 수 있습니다. (2010)

수술실

모든 동물에게 22g 스테인레스 스틸 가이드 캐뉼라 (Plastic One, Roanoke, VA)를 측면 심실에 이식 하였다 [rat : AP : 0.7, ML : -1.8, DV : -4.0 ∼ -5.0 (Paxinos와 Watson, 1998); 햄스터 : AP : + 1.0, ML, + 1.0, DV : -3.0 ~ -5.0 (Morin and Wood, 2001), bregma에서 mm], Na 아래⁺ 펜토 바르 비탈 마취 (rat : 50 mg / kg, 햄스터 : 100mg / kg)Wood 등, 2004). 모든 수술 절차는 다음과 같이 무균 조건에서 수행되었습니다. 실험 동물 관리의 원리 (NIH, 1985). 시험 전에 수술 후 최소 일주일 동안 동물을 회복시킬 수있었습니다.

약물

DHT, DHT- 카르복시 메틸-옥심 (CMO), DHT-CMO-BSA, DHT- 헤 미숙시 네이트 (Hemis) 및 DHT-Hemis-BSA는 Steraloids (Newport, RI)로부터 입수 하였다. DHT-CMO-BSA에서, DHT는 CMO를 링커로하여 C3 위치에서 BSA에 접합된다. 유사하게, DHT는 Hemis를 통해 C17 위치에서 BSA에 연결되어 DHT-Hemis-BSA를 형성한다. DHT-CMO-BSA (개 트슨 등, 2006) 및 DHT-Hemis-BSA (브라운과 토마스, 2003)은 이전에 원형질막에서의 안드로겐의 가능한 효과를 조사하기 위해 사용되어왔다. DHT를 13μg / μl에서 1 % β- 사이클로 덱스트린 (βCD, Sigma-Aldrich, MO, St. Louis, MO)에 용해시켰다. 햄스터에 대한 이전의 연구에서 결정된 바와 같이,이 용량은 ICV자가 관리 동안 강력한 오퍼랜드 응답을 생성합니다 (디미오와 우드, 2006b). DHT 유도체를 동일한 비히클에 DHT (DHT-CMO : 1.25 μg / μl, DHT-CMO-BSA : 8.7 μg / μl, DHT-Hemis : 1.34 μg / μl, DHT-Hemis-BSA : 8.83μg / μl). BSA (Sigma-Aldrich)를 7.45 μg / μl로 동일한 비히클에 용해시켜 DHT-CMO-BSA 및 DHT-Hemis-BSA에서와 같은 BSA의 몰 당량 농도를 달성 하였다. 분해를 피하기 위해 사용 직전에 BSA 함유 약물을 매일 제조하고, 모든 용액을 0.22 μm 필터를 통해 여과 하였다. 이전의 연구에 따르면 스테로이드의 소량 만 BSA에서 해리된다는 것이 밝혀졌습니다 (Stevis et al., 1999),이 수량은 남성 홀몬에 중대한 영향을 미치기에 충분하지 않습니다 (Lieberherr와 Grosse, 1994, 개 트슨 등, 2006). 마찬가지로 이전의 연구에 따르면 DHT는 1.0 μg / μl에서는 자체 관리되지만 0.1 μg / μl에서는 자체 관리되지 않습니다 (디미오와 우드, 2006b). 따라서, 자유 DHT (> 10 %)가 자체 관리를 지원하기에 충분한 양으로 BSA에서 분리 될 가능성은 낮습니다.

장치류

동물은 강제 통풍이있는 소음-약화 실에 동봉 된 작동 실 (메드 어소시에이츠, 세인트 알 반스, 버몬트 주 메드 어소시에이츠 (Med Associates, St. Albans, VT))에서 약물 또는 비히클 용액 4 시간 / 일, 주당 5 일 / 일을자가 투여 할 수 있었다. 각 챔버에는 하우스 라이트, 2 노즈 스포크 구멍 및 밸런스 암의 액체 스위블에 연결된 컴퓨터 제어 주사기 펌프가 장착되었습니다. 100 μl 유리 주사기의 용액을 스위블에 연결된 Tygon 튜브를 통해 동물에게 전달했습니다. 스위블과 ICV 캐뉼라를 연결하는 튜빙은 금속 스프링으로 보호되었습니다. 약물 용액 또는 비히클은 시험 직전에 가이드 캐뉼라에 삽입 된 28-ga 내부 캐뉼라를 통해 전달되었다. 각 주입은 1 μl / s에서 용액의 0.2 μl를 전달했습니다. 코 구멍은 집 조명 아래 바닥에서 6cm에 위치했습니다. 코 - 구멍 구멍 중 하나가 활성 코 - 구멍 구멍으로 지정되었습니다. 이 구멍에 대한 반응을 활성 노즈 포크 (R : 활성 강화)로 기록하고 주입을 트리거하기위한 응답 요구 사항 (FR1 ~ 5)으로 계산했습니다. 주입이 시작되면 5 주입 중에 하우스 라이트가 꺼지고 활성 구멍이 밝아 져 활성 노즈 구멍을 식별하는 데 도움이됩니다. 이 5 시간 초과 기간 동안 활성 구멍에서 코를 찌르는 것은 기록되었지만 추가 강화 (NR : 강화 비 강화)로 계산되지 않았습니다. 다른 코 - 포크 구멍에 대한 반응은 비활성 코 - 멍 (I)으로 기록되었지만 주입을 유발하지는 않았다. 챔버의 전방 또는 후방으로의 활성 노즈-포크 홀의 위치는 측면 선호도를 제어하기 위해 균형을 이루었다. 데이터는 Windows PC에서 WMPC 소프트웨어 (Med Associate)에 의해 기록되었습니다.

ICV 자기 관리

안드로겐은 보상에 급격한 핵 AR 독립 효과를 발휘합니다.

안드로겐 보상에 대한 여러 연구에서 비 게놈 또는 원형질막 효과와 일치하는 결과가 나타났습니다. CPP는 전신 T 주입 후 30 분 내에 발생합니다 (Alexander et al., 1994), T의 급성 비유 전자 효과와 일치하는 시간 경과. CPP는 또한 T 또는 그의 대사 산물의 Acb 내 주입으로 유도 될 수있다 (Packard et al., 1997, Frye et al., 2002), Acb에는 게놈 AR이 거의 없다. 또한, VTA는 ICV T- 주입에 반응하여 Fos를 발현한다 (Dimeo and Wood, 2006a), 거기에 상당한 고전적인 AR 표현의 부족에도 불구하고. 현재의 연구는 뇌의 작용 부위에 관한 정보를 제공하지 않습니다. 그럼에도 불구하고, 이는 핵 AR의 상대적 부족만으로 안드로겐 효과를 중재 할 수있는 잠재적 인 부위로부터 Acb 및 VTA와 같은 구조물을 배제하는 충분한 이유가 아니라는 것을 나타낸다.

지느러미 및 복부 줄무늬 체에서 스테로이드의 빠른 플라즈마 막 효과는 안드로겐에 국한되지 않습니다. 프로게스틴은 아마도 Acb에서 감마 - 아미노 부티르산 (GABA) 수용체를 통해 CPP를 유도하는 것으로 알려져있다 (프라이, 2007). 에스트로겐은 또한 지느러미 줄무늬에서 급속한 막 수용체 매개 효과를 발휘한다 (머멜 스테인 (Mermelstein) 등, 1996, 베커와 루딕, 1999). 프로게스틴에 대해 막 관련 수용체가 이미 분리되었습니다 (Zhu 등, 2003에스트로겐에 대한 세포 표면 수용체에 대한 증거가 축적되고있다. Vasudevan and Pfaff, 2007) 및 androgens ( 토마스 (Thomas) 등, 2006). 에스트로겐이 또한 강화되는 동안 (디미오와 우드, 2006b)에서, T의 강화 효과는 주로 남성 홀몬 인 것으로 보인다. 햄스터는 drostanolone 및 DHT와 같은 비 방향족 성 안드로겐을 자체 투여합니다 (발라드와 우드, 2005, 디미오와 우드, 2006b). 또한, 항 안드로겐 플루 타미 드는 T자가 투여를 차단할 수 있습니다 (피터와 우드, 2004). 이것이이 연구에서보고 된 막 AR의 역할과 모순되는 것처럼 보일 수 있지만, 플루타 미드는 막 AR ​​활성화를 차단하는 것으로보고되었다 (브라운과 토마스, 2003, 브라운과 토마스, 2004).

막 안드로겐 수용체의 특성

역사적으로, 안드로겐을 포함한 스테로이드의 효과는 핵 수용체 매개 과정에 의해 유발되는 것으로 간주되었습니다. 그러나 아마도 멤브레인 - 관련 수용체에 의해 매개되는 빠른 안드로젠 효과에 대한보고가 수십 년 동안 이용 가능 해왔다. 예를 들어, 내측 검사 전 영역에서 안드로겐은 몇 초 내에 신경 세포 발화를 변경할 수 있습니다 (야마다, 1979) ~ 분 (Pfaff and Pfaffmann, 1969). 또한 Orsini 및 동료 (오르시니, 1985, Orsini 등, 1985)은 시상 하부 (LHA)에서 안드로겐에 의한 뉴런 발사 빈도의 빠른 변형을 보여 주었다. LHA가 보상 회로에 관여하는 것으로 알려져 있기 때문에 LHA에서 안드로겐의 이러한 효과는 본 연구와 특히 관련이있을 수 있습니다.Olds와 Milner, 1954) 및 LHA 오렉신 / 하이포크 레틴은 생식선 스테로이드 (Muschamp 등, 2007).

막 AR이 가능한 세포 유형에는 신경교 (개 트슨 등, 2006), 생식선 (브라운과 토마스, 2003, 브라운과 토마스, 2004) 및 면역 세포 (벤텐 등, 1999, Guo 등, 2002), 근세포 (에스트라다 (Estrada) 등, 2003) 및 조골 세포 (Lieberherr와 Grosse, 1994). 분자 동일성이 아직 결정되지 않았지만, 막 AR에 대한 후보는 GABA-A와 같은 알려진 스테로이드 결합 부위를 갖는 막 수용체를 포함한다 ( Lambert 등, 2003) 및 N- 메틸 -D- 아스파르트 산 수용체의 NR2 서브 유닛 (Malayev 등, 2002). 대안 적으로, Thomas와 동료들 (2004)은 막 AR로서 새로운 G- 단백질 결합 수용체에 대한 증거를보고했다. 또한, 특정 수용체와 관련이없는 안드로겐의 효과는 현재 연구에서 배제 될 수 없습니다.

최근 체외에서 연구에 따르면 막 프로게스테론 수용체에 대해 제안 된대로 단일 수용체에 여러 개의 막 AR ​​또는 하나 이상의 결합 부위가 있다고 제안합니다 (라미레즈 (Ramirez) 등의 1996). 많은 세포 유형에서, 막 AR은 Gq / o에 결합 된 막 수용체 인 것으로 보인다 (Lieberherr와 Grosse, 1994, 벤텐 등, 1999, Zhu 등, 1999, Guo 등, 2002, 에스트라다 (Estrada) 등, 2003). 그러나, 추정 막 AR의 스테로이드 결합 특성 및 항 안드로겐에 대한 민감성은 세포 유형에 따라 크게 달라진다. 예를 들어, 항 안드로겐은 크로커 난소 세포에 대한 DHT의 영향을 차단할 수 있습니다 (브라운과 토마스, 2003, 브라운과 토마스, 2004), 다른 세포 유형에는 효과적이지 않습니다 (Lieberherr와 Grosse, 1994, 벤텐 등, 2004, 개 트슨 등, 2006) 또는 해마 세포에서 작용제와 유사한 효과를 발휘할 수도 있습니다 (파이크, 2001, Nguyen 외, 2007) 및 여러 암 세포주 (Peterziel et al., 1999, Zhu 등, 1999, Evangelou et al., 2000, Papakonstanti 등, 2003). 또한 어류의 다른 장기에 대해 다른 T- 결합 특성이보고되었습니다 (브라운과 토마스, 2004).

자주 사용되는 AAS에 대한 경험에 따르면 A- 링 (C2 및 / 또는 C3) 및 C17의 주요 수정 사항은 자체 관리를 방해하는 경향이 있습니다 (발라드와 우드, 2005). 예를 들어, C2 및 C3에서 주요 변형을 갖는 stanozolol과 C17에 부착 된 메틸 그룹은 자체 관리되지 않습니다. 현재 연구에서 햄스터는 C3 (DHT-CMO-BSA)와 C17 (DHT-Hemis-BSA)에 접합 된 BSA를 모두 자체 투여했습니다. 자가 투여 안드로겐의 특성을 밝히기 위해서는 추가 연구가 필요합니다.